INSTITUTO TECNOLÓGICO Y DE ESTUDIOS SUPERIORES DE MONTERREY

CAMPUS CHIHUAHUA

LABORATORIO DE MICROBIOLOGÍA

PRÁCTICA No. 6
TINCIÓN DE ENDOSPORAS POR EL MÉTODO DE SCHAEFFER Y FULTON

OBJETIVOS

● Realizar la tinción de endosporas por el método de Shaeffer y Fulton.

● Identificar la presencia de endosporas de un frotis teñido por visualización al
microscopio.

ESTRATEGIA EXPERIMENTAL

1. Prepare un frotis a partir del cultivo de Bacillus subtilis que le será proporcionado.
Deje secar y fije con la mínima cantidad de calor. Posteriormente, puede colocar
un trozo de papel filtro sobre él a fin de evitar la precipitación de colorante sobre la
bacteria.
2. Coloque el frotis sobre un soporte y cúbralo perfectamente con la solución de
verde de malaquita al 5%.
3. Caliente el portaobjetos hasta emisión de vapores (por aproximadamente 5
minutos). No permita que el colorante se evapore totalmente o que hierva durante
el proceso. Añada más colorante si éste se evapora para evitar la pérdida de
volumen; Recuerde: es importante que la muestra no se seque.
4. Espere a enfriamiento.
5. Enjuague con agua hasta eliminar el exceso de colorante.
6. Cubra la preparación con safranina y deje actuar por un periodo de 30 s a 1 minuto
y medio.
7. Enjuague el frotis con agua y seque cuidadosamente con papel absorbente.
8. Observe al microscopio, enfocando en 10X y analizando el resultado con 100X
previa adición del aceite de inmersión.

1
Figura 1. Pasos para la tinción de esporas por el método de Shaeffer y Fulton