INFORME DE PRÁCTICA DE LABORATORIO

1. TÍTULO PRÁCTICA DE LABORATORIO:

DETERMINACIÓN DE LA INTEGRIDAD DEL ADN POR ELECTROFORESIS EN GEL DE AGAROSA

Integrantes: Leidy Tatiana Abaunza Gomez Código: 10502012448

Blanca Sofia Ospina Marmolejo 10502015098

1. FLUJOGRAMA (valor 0,5)

2. DISCUSIÓN DE RESULTADOS (valor 3,0)
2.1. ¿Qué características físicas tienen los ácidos nucleicos para que
puedan migrar en un campo eléctrico? Indique que función tienen los
tampones para electroforesis y su relación con las características
físicas de los ácidos nucleicos.

RTA/ Los ácidos nucleicos deben tener una carga negativa por su esqueleto de
grupos fosfato, para que en el proceso de electroforesis los ácidos nucleicos puedan
migrar al polo positivo, y a su vez con un alto peso molecular también migren más
lentamente hacia el ánodo (+). El tampón TAE y TBE realizan lo siguiente:
• El Tris es la molécula responsable del taponamiento (regulación del pH).

Imagen No1. De Tris Tomado de http://biomodel.uah.es/tecnicas/elfo/reactivos/reactivos.htm

• El acetato al igual que el borato contribuye a ajustar el Ph deseado e igualmente a

mantenerlo.
• El EDTA es un quelante de cationes divalentes cuya función es secuestrar el Mg2+,
con lo que se evita que las posibles nucleasas presentes degradan los ácidos
nucleicos de la muestra (la mayoría de las nucleasas requieren Mg2+ como
cofactor).

Imagen No. 2 el EDTA. Tomado de http://biomodel.uah.es/tecnicas/elfo/reactivos/reactivos.htm

Debido a que la diferencia entre estos dos tampones es que el TAE proporcionan
que el análisis electroforético de fragmentos grandes de ADN (900 – 2000bp) ya
que corren más rápido y tiene mayor capacidad de discriminación en un gel de
agarosa a 0.8%, mientras que en TBE sirve para fragmentos pequeños de ADN (100
– 500bp) corren más rápido y tiene mayor capacidad de discriminación en gel de
agarosa al 2%.

2.2. Observe el siguiente video:

https://www.youtube.com/watch?v=wXiiTW3pflM
De acuerdo con lo observado en el video, indique la relación entre la
concentración del gel de agarosa y el tamaño de los ácidos nucleicos.
Además, indique el rango de la concentración de agarosa a la que se
pueden correr fragmentos de ADN de: 150 pb, 730 pb, 1600 pb, 7000
pb y fragmentos de más de
10.000 pb

RTA/ Relación entre concentración de gel agarosa y el tamaño de los ácidos nucleicos
la separación de los acidos nucleicos
El rango de concentración de agarosa a la que se pueden correr fragmentos
de ADN de 150 pb, 730 pb, 1600 pb, 7000 pb y fragmentos de más de 10.000
pb es de 0.6% a 3%

2.3. ¿Qué tipos de compuestos se suelen utilizar para visualizar los

ácidos nucleicos en el gel de agarosa? Indique las ventajas y
desventajas de estos tipos de compuestos.

RTA/ Los tipos de compuestos que se utilizan para la visualización de acidos

nucleicos son Sybr Green y bromuro de etidio

BROMURO DE ETIDIO Acrilamida

VENTAJAS -Es un agente intercalante (se -Una vez polimerizada
intercala entre las bases los geles ya no resultan
nitrogenadas) que se usa como tóxicos
colorante fluorescente para la - Mayor capacidad de
visualización de ácidos nucleicos resolución, y, además,
en geles de agarosa y la posibilidad de cargar
poliacrilamida. una mayor cantidad de
ADN.
-Puede descontaminarse

-El BrEt absorbe luz ultravioleta

de λ ≈ 300 nm, y emite una luz
anaranjada de 590 nm, mediante
la cual podemos observar la
posición y cantidad relativa del
ADN en el gel tras la
electroforesis. (Tomado de
https://micrositios.inecc.gob.mx/publicaciones
/libros/710/electroforesis.pdf)

DESVENTAJAS -El bromuro de etidio es tóxico -En polvo y en solución

a elevadas concentraciones es tóxica
debido a su capacidad -Tiene la capacidad de
mutagénica. Se debe evitar la penetrar a través de la
piel
inhalación del compuesto en
estado sólido (manipularlo en
campana de extracción), y se
deben manejar las soluciones
siempre con guantes. (Tomado de
https://micrositios.inecc.gob.mx/publicaciones
 /libros/710/electroforesis.pdf)

2.4. Observe el siguiente video: https://www.youtube.com/watch?v=U2-

5ukpKg_Q
De acuerdo con lo observado en el video, indique al menos 5 cosas que se deben
evitar al realizar una electroforesis y porque se deben evitar.
• RTA/ Evita apretar la parte superior del contenedor al momento de calentarlo
ya que puede haber una acumulación peligrosa de presión que puede hacer
que el contenedor se rompa.
• Al momento de realizar la ge de agarosa evite dejar desatendida la solución
mientras se calienta ya que esta se puede quemar la mezcla de gel.
• Evite retirar el peine de gel antes de que este se endurezca ya que provocaría
que las paredes de los pozos se destruyen y el gel quede inutilizable.
• Evite dañar los pozos al cargar las muestras ya que si lo hace puede causar que
la mezcla se escape y los otros pozos se contaminen, también puede causar
que fragmentos de ácidos nucleicos migren de manera desigual.
• Evite cargar aire en los pozos junto con la muestra ya que el aire puede hacer
que las muestras se pierdan.
• Evite cargar las muestras demasiado rápido ya que puede causar que estas se
salgan del pozo
• Una vez cargadas las muestras evite mover la broma, si lo hace, el movimiento
puede causar pérdida de muestra y contaminación de esta.

2.5. ¿Para qué sirve el tampón de carga? ¿Qué reactivos suelen tener los
tampones de carga?

RTA/ El tampón de carga sirve para facilitar la carga de muestras en los pocillos de
geles de agarosa y poliacrilamida ya que indica el frente del gel de modo que podamos
ver cuándo.El tampón de carga de gel 10X está compuesto de azul de bromofenol,
xileno cianol FF, y glicerol. El tampón de carga de gel 6X está compuesto bromofenol
azul, xileno cianol FF, EDTA y glicerol.

2.6. ¿Qué es un marcador de peso molecular? ¿Para qué sirve?

RTA/ El marcador de peso molecular es cualquier gen que permite cuantificable

y observable y estan diseñados para visualizar la migración del DNA en geles de
agarosa y poliacrilamida.

2.7. ¿Qué tipo de protección debe usar cuando se expone a la luz ultravioleta?

RTA/ Gafas que puedan cubrir sus ojos completamente, también ropa adecuada que le
permita cubrir la mayor parte de su piel.

2.8. Seleccione uno de los pozos de la siguiente figura e indique el

 tamaño que tienen las bandas de dicho pozo.

RTA/ Pozo H el tamaño de la banda es de 2000pb

3. CONCLUSIONES (valor 1,0)

Redacte una conclusión en la que establezca que utilidad tiene la
electroforesis en gel en la práctica médica.

RTA/ La electroforesis es útil en la medicina debido a que con esta técnica es posible
analizar el ADN, ARN, moléculas o proteínas en base a su tamaño y carga eléctrica de
manera más exacta dividiéndolo en biomoléculas en pequeños fragmentos para hallar su
contenido así mismo la concentración, la entereza y otros factores, también esos
fragmentos se pueden utilizar para otras aplicaciones.
4. BIBLIOGRAFÍA (valor 0,5)
Ingrese la lista de referencias utilizadas para la resolución del informe. Cite de
acuerdo con la norma Vancuover.
1. Francisco Fierro Fierro. Electoforesis de ADN. [Internet].[Revisado el 15 de
noviembre de 2020]. Tomado de
https://micrositios.inecc.gob.mx/publicaciones/libros/710/electroforesis.p
df
2. Vwr part of avantor. [Internet].[Revisado el 15 noviembre 2020].Tomado de
https://es.vwr.com/store/product/8084797/tampon-de-carga-de-gel-de-
adn
3. Virtual expo group. Medical expo [Internet]. [Revisado el 15 noviembre de
2020]. Tomado de https://www.medicalexpo.es/prod/ampliqon-s/product-
128207-
942053.html#:~:text=Los%20tampones%20de%20carga%20de,y%20un%
20agente%20de%20densidad.
4. Velaquin. [Internet]. [Revisado el 15 de noviembre de 2020]. Tomado de
https://www.velaquin.com.mx/products/marcadores-de-peso-
molecular#:~:text=Los%20marcadores%20de%20peso%20molecular,inhib
ir%20la%20actividad%20de%20nucleasas.
5. . Electroforesis en gel de agarosa: exposición a bromuro de etidio. (2013) |
Situaciones de trabajo Peligrosas [Internet]. Stp.insht.es. 2020 [cited 16
November 2020]. Available from: http://stp.insht.es/stp/basequim/012-
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deetidio2013#:~:text=El%20trabajador%20se%20proteger%C3%A1%20co
n,tipo%20FFP3%20para%20part%C 3%ADculas%20s%C3%B3lidas.