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PCR-Ltex

Protena C-Reactiva. Ensayo de aglutinacin en porta.


Sin dilucin previa de la muestra.
Slo para uso "in vitro".
Conservar de 2 a 8 C.
INTRODUCCIN
La Protena C-Reactiva (PCR) es una protena de fase aguda, presente
en el suero de pacientes sanos, la cual puede incrementarse
significativamente en la mayora de los procesos infecciosos bacterianos
y virales, tejidos daados, inflamacin y neoplasias malignas.
El incremento de la concentracin de esta protena se produce despes
de unas horas de desarrollarse la enfermedad pudiendo alcanzar niveles
de 300 mg/L de 12 a 24 horas.
APLICACIN PROPUESTA
El mtodo es vlido para la determinacin de PCR en suero humano.
MATERIAL NECESARIO
Micropipetas de 50 L y 100 L.
FUNDAMENTO DEL MTODO
El mtodo se fundamenta en una reaccin de aglutinacin de una
suspensin de partculas de ltex poliestireno sensibilizadas con
anticuerpos altamente purificados de anti-proteina C-reactiva. La
aglutinacin es visible a una concentracin de PCR en suero igual o
superior a 6 mg/L.
CONTENIDO
R1 Ltex
Tapa blanca

Partculas de ltex recubiertas con IgG de


cabra en tampn borato 50 mmol/L
Contiene azida sdica 0,95 g/L
Cd. 1200301: 2,5 mL
Cd. 1200302: 5 mL
R2 Control Positivo Concentracin de PCR 40 mg/L. Suero
Tapa roja
humano en tampn glicina 150 mmol/L .
Contiene azida sdica 0,95 g/L
R3 Control Negativo Concentracin de PCR 0 mg/L. Suero
Tapa azul
de conejo en tampn glicina 150 mmol/L
Contiene azida sdica 0,95 g/L
Portas para ltex
Cd. 1200301: 8 x 6 portas
Cd. 1200302: 16 x 6 portas
Palillos
Cd. 1200301: 1 paquete x 25
Cd. 1200302: 2 paquete x 25

CALIBRACIN
La sensibilidad del reactivo de ltex est estandarizada frente al Patrn
Internacional de Protenas CRM 470 de BCR.
PREPARACIN Y ESTABILIDAD
El R1 es una suspensin de partculas de ltex. Debe homogeneizarse,
con una suave agitacin, antes de ser utilizado.
Los goteadores dispensan una gota de volumen aproximado de 50 L
que es el idneo para una buena sensibilidad.
Los reactivos se deben conservar de 2 a 8 C, no deben congelarse. En
estas condiciones los componentes mantendrn su funcionalidad hasta
la fecha de vencimiento indicada en la etiqueta .
MUESTRA
Utilizar suero. Los sueros, conservados de 2 a 8 C, mantienen su
actividad durante 2 das.
No utilizar sueros hemolizados ni contaminados. No utilizar sueros
altamente lipmicos pues podran dar una aglutinacin no especfica.
Las muestras con resto de fibrina deben ser centrifugadas antes de la
prueba.
TCNICA
Mtodo cualitativo
1.-Atemperar el reactivo y los controles a temperatura ambiente. La
sensibilidad del ensayo disminuye a temperaturas bajas.
2.-Homogeneizar el R1 Ltex, con agitacin suave.
3.-Comprobar la funcionalidad del reactivo mediante los controles
positivo y negativo (ver procedimiento a continuacin).
4.-Dosificar 50 L (1 gota) de suero muestra a analizar en un crculo

del porta, SIN DILUIR (Ver Nota1).


5.-Aadir, al lado de la anterior, una gota de R1 Ltex.
6.- Mezclar las dos gotas con un palillo y extenderlas por todo el crculo.
Emplear palillos distintos para cada muestra y usarlos por ambos
extremos.
7.-Colocar el porta en el agitador rotatorio (80-100 RPM) y observar
la aparicin o ausencia de aglutinacin exactamente al cabo de 2
minutos. El exceso del tiempo de reaccin podra dar lugar a resultados
falsos positivos. En caso de no tener el agitador rotatorio la agitacin
se puede hacer manual en forma rotatoria y lentamente.
INTERPRETACIN
-La presencia de aglutinacin indica un nivel de PCR igual o superior a
6 mg/L en la muestra.
-La ausencia de aglutinacin indica un nivel de PCR inferior a 6 mg/L
en la muestra.
En el mtodo semicuantitativo se define el ttulo como la dilucin mayor
que da resultado positivo.
Mtodo semicuantitativo
1. Realizar diluciones sucesivas 1/2 de la muestra con solucin salina
(NaCL 9 g/L).
2. Proceder para cada dilucin como en la prueba cualitativa.
CLCULOS
La concentracin aproximada de PCR en la muestra del paciente se
obtiene aplicando la siguiente frmula:
6 x n dilucin
mg/L

6x2
12

6x4
24

6x8
48

6 x 16
96

VALORES DE REFERENCIA
Hasta 6 mg/L
CARACTERSTICAS FUNCIONALES
-Lmite de deteccin: 6 mg/L.
-Valor de prozona: Negativo hasta 1600 mg/L.
-Sensibilidad diagnstica: > 95 %.
-Especificidad diagnstica: > 96 %
-Interferencias:
Interfiere el factor reumatoideo a partir de 100 UI/mL.
No interfieren: Bilirrubina 342 mol/L.
Hemoglobina 10 g/L.
Lpidos 10 g/L.
PRECAUCIONES
El control positivo es un suero humano. Aunque no se ha detectado
la presencia de antgeno HBs, HCV, ni anticuerpos anti-HIV, debe ser
manipulado con la misma precaucin que un suero muestra.
Contiene pequeas cantidades de azida sdica. Evtese el contacto con
la piel daada y las mucosas.
NOTAS
1. Una concentracin muy elevada de PCR en la muestra puede dar lugar
a resultados falsos negativos. Se reecomienda re-ensayar la muestra con
un volumen de 20 L.
2. El diagnstico clnico no debe realizarse con los resultados de un nico
ensayo, sino que deben considerarse al mismo tiempo los datos clnicos
del paciente.
BIBLIOGRAFA
1. Lars-Olof Hanson et al. Current Opinion in infeccion diseases,
1997; 10: 196-201
2. MM. Pepys. The Lancet, 1981; March 21: 653-656.
3. Yoshitsugy Hokama et al. Journal of Clinical Laboratory Status,
1987; 1: 15-27.
4. Yuong DS. Effects of drugs on clinical laboratory test; 4th ed.AACC
Press; 1995.
PRESENTACIN
Cd.: 1200301
Cd.: 1200302

48 Determ.
96 Determ.

Emisin 04, Enero/2004

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