UNIVERSIDAD NACIONAL PEDRO RUIZ GALLO

Facultad de Ciencias Biologías

ESCUELA PROFESIONAL DE CIENCIAS BIOLOGICAS
Departamento Académico de Microbiología y Parasitología

Programa de Estudios: Ciencias Biológicas.

Escuela Profesional: Ciencias Biológicas

Asignatura: Virología

Alumno:

Bances Vergara Luis Manuel 162136F

Sánchez Martínez Jesús Giovani 170332E

Víctor Luis Miranda Tiznado 151550K

Gonzales Casiano Ernesto 163503B

Luis Rogger Baños Alarcón 025009B

Chaname Fernández José Luis 162127G

Ciclo:2020.-I

Docente: Graciela Olga Albino Cornejo

 Cultivo de Virus en huevos embrionados
Virus de Newcastle

Introducción
El virus de la enfermedad de Newcastle pertenece al grupo de los paramixovirus aviares y es
capaz de infectar a más de 200 especies de aves, con diferentes grados de afectación según el
hospedador y la cepa del virus. Si bien el virus de Newcastle se ha aislado desde varias especies
silvestres y domésticas en todo el mundo.
El virus de la enfermedad de Newcastle (NDV) (Newcastle Disease Virus) se encuentra en el
listado de la OIE pertenece a los paramixovirus aviares de tipo I (APMV-1) con cepas que son
enzoóticas y causan grandes pérdidas en la economía del sector avícola.

Se han utilizado huevos fecundados para cultivar virus durante más de 15 años. El cultivo de
virus gripal en huevo embrionado fue empleado por primera vez por Burnet en 1935,
demostrando que el embrión de pollo es un medio muy sensible para el aislamiento de estos
virus, siendo además un medio estéril y poco costoso. Ha sido posible cultivar virus de diversos
grupos en varias cavidades del huevo fecundado, o en el propio embrión en desarrollo.
Al embrión de pollo se le conoce como “tubo de cultivo de tejido natural”. Para comprender
mejor por qué su empleo es tan ventajoso en virología, será conveniente repasar las etapas de su
desarrollo inicial y algunos de sus procesos fisiológicos. Como toda vida embrionaria. el
embrión de pollo exige cuatro requisitos principales: 1) Protección de los peligros exteriores, 2)
nutrición, 3) respiración, y 4) eliminación de los residuos metabólicos

Objetivo:
Conocer y aplicar correctamente los métodos adecuados para realizar una inoculación del virus
de Newcastle en huevo embrionado de pollo

Materiales:
Material Biológico:
o Virus de New Castle

o Huevos embrionados de gallina de 9 a 11

Material de Laboratorio:
Ovoscopio.
Tijera Quirúrgica.
Agua Destilada.
Azul de Metileno.
Agujas Hipodérmicas.
Placas Petri amplias.

Procedimiento de Inoculación:

o Observar en el ovoscopio si el huevo es fértil o infértil.

o Determinar la edad del embrión.

o Localizar la cámara de aire y marcarla.

o Marcar el embrión.

o Colocar los huevos fértiles en un porta huevos

o Limpiar la cáscara (con una torunda de alcohol yodado, todo, sobre todo, la
parte donde se va a inocular y luego, limpiar con alcohol).
o Agujerear el cascarón con un taladro (dependiendo de donde se vaya a
inocular).
o Inoculamos el virus.

o Tapamos el agujero con parafina (o cera de vela).

o Luego llevamos a estufa (controlar temperatura y humedad adecuada)

o Controlar, observar dos veces al día, para percatarse si están vivos o muertos.

Nota:
Se utilizaron huevos embrionados entre 9 y 10 días de edad que no eran spf, y provenían de
gallinas criollas, libres de vacuna contra la enfermedad de Newcastle. Los huevos embrionados
fueron inoculados con 0.25 mililitros de muestra, se inocularon tres huevos por muestra, y se
incubaron a 38 °C, se realizó dos observaciones diarias con la ayuda de un ovoscopio y se
registró la mortalidad embrionaria después de las primeras 24 horas de incubación, al cuarto día
todos los huevos fueron puesto en refrigeración para la posterior cosecha de líquido alantoideo
Ovoscopeo. El ovoscopeo consiste en revisar los huevos embrionados contra una fuente de luz
intensa en un ovoscopio, de esta manera mostrara el embrión, las membranas asociadas y las
cavidades del embrión se observan fácilmente.
1.- En un cuarto obscuro, colocar el huevo embrionado al ovoscopio y observar el movimiento,
las condiciones de las venas de sangre y el estado del embrión. Notar las diferencias con los
embriones de diferentes edades.
2.-Con un lápiz, marcar la posición del embrión y la cámara de aire (esta área es mantenida
arriba en el ovoscopio).
3.- Comparar los embriones fértiles y los embriones muertos de varias edades, descartar los
embriones infértiles y muertos.
Estructura del huevo embrionado.
Justo bajo el cascarón se encuentra una membrana fibrosa que se disemina a través de la
superficie interna del embrión y forma la cámara de aire en el extremo ancho del huevo. Esta
membrana en conjunto con el cascarón ayuda al intercambio de gases en el huevo. Esta
distribución de gases se facilita por la membrana corioalantoidea altamente vascularizada que
sirve como órgano respiratorio del embrión. Esta membrana se forma de manera adyacente a la
membrana del cascarón y forma una cavidad conocida como saco alantoideo que contiene entre
5 a 10 ml de fluido alantoideo. El embrión se encuentra envuelto por la membrana amniótica
formando el saco amniótico que contiene entre 1 y 2 ml de fluido amniótico. El embrión se
encuentra unido al saco vitelino que es su fuente de nutrientes y se encuentra localizado
aproximadamente al centro del huevo.
Cavidad alantoidea.
La inoculación de embriones en saco alantoideo es utilizada para el aislamiento y propagación
de los Paramyxovirus, Myxovirus y Coronavirus. Los embriones inoculados por esta vía, son
generalmente incubados de 4 a 7 días postinoculación. Las lesiones que se presentan en los
embriones por los Paramyxovirus y los Myxovirus es que pueden llegar a causar la muerte de
los embriones, siempre y cuando se trate de cepas altamente patógenas, pero tanto los
Paramyxovirus como los Myxovirus normalmente se evalua a través de fluido alantoideo de los
embriones y no tanto por las lesiones. En el fluido alantoideo lo que se tiene que hacer es una
prueba de hemoaglutinación con glóbulos rojos de ave al 5 % para determinar la presencia de
hemoaglutininas en dicho fluido, que no es otra cosa más que la formación de grumos de color
rojo rodeados por espacios transparentes fácilmente visible. Las lesiones que normalmente se
presentan en los embriones por los Coronavirus son enanismo, encorvamiento, desarrollo
anormal de la pluma y depósitos de uratos en riñones
Referencias
Dufour L, Swayne D, Glisson J, et.al (2008). A laboratory manual for the isolation,
identification and characterization of avian pathogens. American Association of Avian
pathologistys. Fifth edition. P:139.
Kang Y, Li Y, Yuan R, Li X, Sun M, Wang Z, Feng M, Jiao P1, Ren T. Phylogenetic
relationships and pathogenicity variation of two Newcastle disease viruses isolated
from domestic ducks in Southern China. Virol J.2014
Office International des Epizooties/World Organization for animal Health OIE. (2012). Manual
de la OIE sobre animales terrestres.
Recuperado el 15 de septiembre de 2014 de
http://www.oie.int/es/normasinternacionales/manual-terrestre/accesoen-linea/
Organización de las Naciones Unidas para la Agricultura y la Alimentación (2014). El Manual
de Preparación para la Influenza Aviar de Alta Patogenicidad fue elaborado por la
División de Producción y Salud Animal de la FAO.
Recuperado el 15 de septiembre de 2014 de ftp://ftp.fao.org/docrep/fao/010/a0632s/a0632s.pdf.
Romero, M. Narváez, S, Sánchez J. (2009). Enfermedad de Newcastle en aves de traspatio del
Eje Cafetero Colombiano. Universidad de Caldas.
Recuperado el 14 de septiembre de 2014 de http://www.scielo. unal.edu.co/scielo.