PSEUDOMONAS AERUGINOSA 55857

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MEDIO SELECTIVO PARA EL AISLAMIENTO DE PSEUDOMONAS AERUGINOSA

2012/04

1- USO PREVISTO
El agar Pseudomonas aeruginosa es un medio selectivo para el aislamiento y la identificación de presunción de especies de
Pseudomonas, de muestras patológicas o muestras higiénicas (superficies, instrumentos quirúrgicos o soluciones antisépticas).

2- PRINCIPIO
La selectividad de este medio se basa en la presencia de un amonio cuaternario (cetrimida) que inhibe el crecimiento de
bacterias que no sean Pseudomonas aeruginosa.
Pseudomonas aeruginosa se caracteriza por la producción de dos pigmentos: pioverdina (pigmento fluorescente) y piocianina.
La producción de piocianina se promueve mediante la presencia de cloruro potásico y sulfato potásico.

3- CÓMO SE SUMINISTRA
• Medio listo para usar:
- caja de 20 palcas de Petri (90 mm) (PYO) código 63914
• Medio listo para usar (para dispensar)
- 6 frascos de 200 ml (PYO) código 55857
• Medio deshidratado
- frasco de 500 g código 64804

4- COMPOSICIÓN TEÓRICA (g/l de agua destilada)

Peptona 20
Sulfato potásico 10
Cloruro potásico 3
Fosfato dipotásico 0.3
Cetrimida 0.2
Ácido nalidíxico 0.015
Agar 13
pH final 7.1 ± 0.2

Preparación del medio:

Homogeneice el polvo contenido en el frasco.
Añada 47 gramos de medio deshidratado a un litro de agua recién destilada, y caliente suavemente hasta hervir y que se
consiga la disolución completa. Esterilice en el autoclave a 115°C durante 20 minutos.
Dispense en placas de Petri o frascos.

5- CONSERVACIÓN
• Medio listo para usar: a +2-8°C.
• Medio listo para usar (para dispensar): a +2-25°C.
• Medio deshidratado: frasco cerrado herméticamente en un lugar seco a +15-25°C.
La fecha de caducidad y el número de lote están indicados en el envasado.

6- INSTRUCCIONES
Material:
• Material suministrado: Medio Pseudomonas aeruginosa

Inoculación:
Inocule la superficie del agar con un asa, una torunda o mediante aplicación de una membrana de filtración, dependiendo del
campo de uso.

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Incubación:
Incube durante 24 a 48 horas a 37°C.

Lectura:
Las colonias de P. aeruginosa cultivadas en agar tienen un color amarillo-verdoso y puede demostrarse su fluorescencia en
luz ultravioleta. Se cosechan para una identificación más detallada de la cepa. Debe determinarse el serotipo mediante
aglutinación por deslizamiento usando sueros inmunes específicos para estudios epidemiológicos.

7- RENDIMIENTO / CONTROL DE CALIDAD DE LA PRUEBA

• Aspecto del medio listo para usar: agar ligeramente opalescente.
• Aspecto del medio deshidratado: polvo beige.
• Los rendimientos de crecimiento del medio Pseudomonas aeruginosa se verifican con las siguientes cepas:

CEPAS RESULTADO DEL CULTIVO DESPUÉS DE 24 a 48

horas a 37 °C
Pseudomonas aeruginosa ATCC 27853 Colonias fluorescentes verdes y amarillas
Pseudomonas aeruginosa ATCC 17934 Colonias fluorescentes verdes y amarillas
Pseudomonas aeruginosa ATCC 10145 Colonias fluorescentes verdes y amarillas
Escherichia coli ATCC 25922 Sin crecimiento
Enterococcus faecalis CCM 2541 Sin crecimiento

8- CONTROL DE CALIDAD DEL FABRICANTE

Todos los reactivos fabricados se elaboran según nuestro sistema de calidad, que va desde la recepción de las materias
primas hasta la comercialización final del producto. Cada lote se somete a valoraciones de control de calidad y sale al mercado
sólo cuando está de acuerdo con los criterios de aceptación predefinidos. Los registros relativos a la producción y al control de
cada lote se conservan en Bio-Rad.

9- LÍMITES DE USO
• La formación de colonias no pigmentadas no descarta formalmente el diagnóstico de Pseudomonas aeruginosa.
• Deben distinguirse las colonias de Pseudomonas que producen piocianina y pioverdina de otras cepas de Pseudomonas
que sólo producen pioverdina. La temperatura puede ser un factor decisivo, puesto que la mayoría de las cepas que
producen pioverdina sólo crecen a 25-30°C y no crec en a una temperatura superior a 35°C (4).
• Debido a los requisitos nutricionales, algunas cepas pueden no crecer en este medio.
• Algunas cepas pueden no verse inhibidas.
• El efecto inhibidor disminuye en presencia de una cantidad excesiva de inóculo.
• Deben realizarse pruebas complementarias para identificar la especie de la cepa aislada.

10- BIBLIOGRAFÍA
1. BROWN V.I. et LOWBURY E.J.L., J. Clin. Path., 1965, 18 p. 752-756.
2. GOTTOS S. et ENAMOTOS. S., Jap. J. Microbiol., 1970, 14 p. 65-72.
3. LOWBURY E.J. et COLLINS. A.B., J. Clin., Path., 1955, 8 p. 47-48.
4. MACFADDIN J.F. Media for isolation-cultivation-identification-maintenance medical bacteria, vol. 1. Williams & Wilkins, MD,
1985, Baltimore.

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