Cultivos y Productos 132 (2019) 327-335 industriales

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Valorización de Eucalyptus nitens corteza por organosolv tratamiento

T
previo para la producción de biocombustibles avanzados
una, segundo do,re segundo
Aloia Romaní , Antonio Larramendi , Remedios Yáñez , Ángeles Cancela ,
segundo una una
Ángel Sánchez , José A. Teixeira , Lucília Domingues
a CEB-Centro de Ingeniería Biológica, Universidad de Minho, Campus de Gualtar, Braga, Portugal
b Departamento de Ingeniería Química, IEE, Universidad de Vigo, Campus de Vigo, Vigo, España
c Departamento de Ingeniería Química, Facultad de Ciencias, Universidad de Vigo, Campus de Ourense, Ourense, España
d CITI-Tecnópole, San Ciprián de Viñas, Ourense, España

INFORMACIÓN DEL ARTÍCULO RESUMEN

palabras clave: La producción de biocombustibles a partir de materias primas alternativas y renovables es obligatorio para lograr
Eucalyptus nitens ladrar un crecimiento sostenible basado en una bioeconomía. corteza de eucalipto es un residuos generados durante la
organosolv fabricación de productos químicos de celulosa de eucalipto que se puede utilizar como una fuente alternativa de
El bioetanol
la biomasa, adecuado para la producción de biocombustibles. En este trabajo, Eucalyptus nitens corteza (ENB) se
sacarificaciónfermentación
fraccionó por organosolv tratamiento para la producción de etanol. Para ello, un diseño experimental Doehlert se
fermentación
deslignificación llevó a cabo para evaluar las variables dependientes: la temperatura (170-200 ° C), el tiempo (30-90 min) y el
porcentaje de etanol-agua (50-80%) en la deslignificación de Eucalyptus corteza. proceso Organosolv era
adecuado para el fraccionamiento de E. nitens corteza. Después del tratamiento, 74-93% de glucano se recuperó
y se logró 25-52% de deslignificación. Deslignificada ENB se sometió a proceso de fermentación simultánea sac-
charification y para la producción de bioetanol. Los resultados mostraron que las variables tem-peratura y el
tiempo de proceso organosolv tuvieron una influencia significativa en la producción de etanol. El organosolv pre-
tratamiento mejoró el rendimiento de etanol a partir 32 a 99%. Este trabajo muestra un procedimiento adecuado
para la valorización de Eucalyptus corteza en bioetanol.

1. Introducción pulpa de remolacha, aceite de palma, etc.), para alcanzar el objetivo

El aumento de la población en todo el mundo junto con el en-
industrialización y el desarrollo de las economías emergentes como
resultado el aumento de la demanda de energía (Dafnomilis et al., 2017).
Esto contribuye a nuestra fuerte dependencia de los combustibles fósiles y
aumentar gases de efecto invernadero (GEI) a la atmósfera, que conducen
la comu-nidad científica de buscar y promover el uso de fuentes de energía
alternativas, sostenibles y limpias (Küüt et al., 2017). En línea con esto,
una serie de directivas Eur-oPEo se ocupan de la utilización de
biocombustibles han surgido, a saber: la Directiva de Energía Renovable
2009/28 / CE (RED) y la calidad de los combustibles Directiva 2009/30 /
CE, modificada recientemente por la UE Directiva 2015/1513 (Küüt et al.,
2017). Los conjuntos de rojo por 2020 un 20% de fuentes de energía
renovables en el consumo final de energía, un aumento del 20% en la
energía efi-ciencia y el 10% de fuentes de energía renovables (incluidos
los biocombustibles) en sector del transporte. Además, la Directiva (UE)
2015/1513 da un paso más, la regulación de las de uso del suelo los
efectos del cambio indirectos de la producción de biocombustibles, y
limitando a 7% la contribución de los combustibles convencionales (por
ejemplo, producidos a partir de cultivos de alimentos como el maíz, el
trigo , Caña de azúcar,
del 10% introducida por RED para 2020 (Dafnomilis et al., 2017). Por
lo tanto, la presente Directiva pro-motas de los biocombustibles de
segunda generación o los biocombustibles avanzados, basados en
materias primas alternativas tales como materiales lignocelulósicos
(LCM) en-cluding cultivos energéticos (miscanthus, jatrofa, etc.),
especies de crecimiento rápido (como el eucalipto, álamo, pino,
Leucaena, Sesbania, Paulownia) y la silvicultura y subproductos
agroindustriales (Ruiz et al., 2013; Domec et al., 2017).
Por proceso de lignocelulosa a etanol adecuado, un tratamiento
previo es obligatorio (que permite la separación selectiva de los
componentes principales, que incluyen celulosa, hemicelulosa y
lignina) en el ámbito de aplicación de biorrefinería biomasa (Romaní et
al., 2011). Por lo tanto, los pasos principales para la producción de
bioetanol son: reducción del tamaño de i); ii) tratamiento previo; iii) la
sacarificación; iv) la fermentación y v) la destilación del caldo de
fermentación (Romaní et al., 2013; Yáñez-S et al., 2013; Alvira et al.,
2010; Galbe y Zacchi, 2007).
Varios tratamientos se han empleado para el fraccionamiento de
biomasa, incluyendo un tratamiento previo de-mentos biológicos
física, físico-química o (Kumar y Sharma, 2017; Galbe y Zacchi,
2007).

Autor correspondiente.
Dirección de correo electrónico: aloia@ceb.uminho.pt (A. Romaní).

https://doi.org/10.1016/j.indcrop.2019.02.040
Recibido el 29 de noviembre de de 2018; Recibido en el formulario 4 de febrero de 2019 revisado; Aceptado el 19 de de febrero de 2019
Disponible en Internet el 26 de febrero de 2019
0926-6690 / © 2019 Elsevier BV Todos los derechos reservados.
A. Romaní, et al. producidas (Neiva et al., 2018). Por lo tanto, la corteza de eucalipto se ha
identificado recientemente como nueva fuente de biomasa con potencial
Desafortunadamente, la mayoría de estos tratamientos previos de para la producción de bioetanol (Neiva et al., 2018; Zhu y Pan de 2010;
biomasa conducen a un rendimiento relativamente bajo de azúcar y la Lima et al., 2013; Foelkel de 2010). Sin embargo, sólo unos pocos se han
concentración del producto debido a una fracción de lignina publicado estudios sobre la valorización de la corteza de eucalipto.
significativa que permanece en la biomasa pretratada (Zhao et al., Canettieri y compañeros de trabajo (2007) optimizado el ácido sulfúrico
2017). proceso de deslignificación puede aumentar el contenido de diluido hidrólisis de Eucalyptus grandis residuos (ramas, follaje y la
celulosa de la biomasa pre-tratada, que es de gran importancia para corteza) en
obtener una mayor concentración de glucosa en los hidrolizados. En
este contexto, la deslignificación de varias LCM por organosolv
tratamientos (Domínguez et al., 2014; Kim et al., 2010; Muñoz et al.,
2007; Pan et al., 2006) Usando disolventes orgánicos (Incluyendo
etanol, metanol, acetona, glicerol, etc.), o de la mezcla de disolvente-
agua (con o sin adición de catalizadores) (Martín et al., 2011) ha sido
propuesto. Las ventajas de pretratamiento organosolv incluye: i) la
mejora considerable en las conversiones de celulosa en glucosa en
etapas posteriores de la sacarificación, ii) la recuperación fácil de
disolventes orgánicos (mediante el parpadeo de los licores de
cocción), y su posterior reutilización, iii) la solubilización hemicelulosas
parciales y, por tanto, la recuperación de oligosacáridos de
hemicelulosa, azúcares y furfural a partir de los licores y iv) el
aislamiento de la lignina libre de azufre de alta calidad, con
propiedades deseables. Este enfoque permite además la valorización
de los principales componentes de LCM para producir combustibles
renovables y productos químicos finos en un esquema de biorrefinería
(Yáñez-S et al., 2013; Zakzeski et al., 2012; Toledano et al.,
2011,2012; Muñoz et al., 2011; El Hage et al., 2011). Además, se
debe tener en cuenta que los co-productos citados generados en el
proceso organosolv, mejorarían la sostenibilidad económica y la
flexibilidad del proceso (Muñoz et al., 2011). La información más
adelante, combinada con el bajo impacto medioambiental del proceso
organosolv, sus altos rendimientos de pulpa y la limitada inversión
requiere el establecimiento de nuevas plantas (Saberikhah et al.,
2011), Por lo que es posible para que esta tecnología tiene un futuro
prometedor en el ámbito de biorrefinería de biomasa (Zhao et al.,
2017).
Por otra parte, las etapas de sacarificación y fermentación puede
llevarse a cabo secuencialmente o simultáneamente. En comparación
con la hidrólisis y la fermentación separada, la sacarificación y
fermentación simultáneas (SSF) presenta algunas ventajas tales como
la reducción de los costos operativos (asociada con la operación en
un solo reactor, la reducción de las cargas de enzima y el aumento de
la productividad), así como la disminución de la inhibición de sustrato
y los riesgos de contaminación (debido a la menor acumulación de
azúcares en el caldo de fermentación) (Chen et al., 2007; Rohowsky
et al., 2013; Yáñez-S et al., 2013; Romaní et al., 2016).
El eucalipto es un árbol de rápido crecimiento, con una gran demanda
en la industria de pulpa y papel (Li et al., 2013; Penín et al., 2018); ya que
es ex-tensively utilizado como materia prima, por ejemplo, en el proceso de
fabricación de pasta Kraft (Rodríguez-López et al., 2012). De acuerdo con
datos proporcionados porFlynn (2010), la superficie total de plantaciones
estimado para el árbol de eucalipto en el mundo es de entre 16 y 19
millones de hectáreas (40-47 millones de acres) con una producción de 15-
25 ton / ha / año (Lima et al., 2013). La especie de pre-dominante es la
madera de Eucalyptus globulus. Sin embargo, la presencia de algunas
plagas de insectos y hongos en la E. globulus ha hecho que E. nintes ha
surgido como alternativa a E. globulus (Pérez et al., 2006). Por otra parte,
E. nitens es capaz de sobrevivir a bajas temperaturas (González-García et
al., 2013) Y un estudio regional mostró el potencial energético de E. nintes
cuando se utiliza para la producción de biomasa (Pérez et al., 2006).
Durante la fabricación de productos químicos de celulosa de eucalipto,
grandes cantidades de desechos se producen, tales como hojas, ramas,
cortezas, extremos de corte transversal y fuera de la especificación de
virutas de madera, que se dejan en el campo para enriquecer el suelo o
quemado para la electricidad o la producción de calor (Lima et al., 2013;
Moshkelani et al., 2013). Entre estos residuos, corteza representa la 10-
12% (v / v) de la biomasa total cosechado (Lima et al., 2013). Esta
cantidad de residuos significa que 20 toneladas de corteza se pueden
generar en una fábrica de pulpa por cada 100 toneladas de pulpas
 Cultivos y Productos 132 (2019) 327-335 La caracterización química de ENB (incluido en tabla 1) Se determinó
industriales
después de la materia prima procedures.The fue molido a tamaños de
partícula <0,5 mm (IKA M-20 amoladora, Alemania) y se ensayó la
un reactor a escala piloto. Matsushita et al. (2010) se ensayó la influencia humedad (TAPPI método T-264 om-88), y extractos (om TAPPI T-264 -88
del pretratamiento hidrotérmico con dióxido de carbono en la sacarificación m) y ceniza (método T-211 om-93) en un horno de mufla a 525 ° C.
enzimática de Eucalyptus globulus corteza. Lima et al. (2013)informó sobre Composición química de ENB y pretratado ENB fue de-termined siguiendo
el potencial de dos clones comerciales de eucalipto (Eucalyptus grandis y el método TAPPI T 249 cm-85. Aproximadamente, se pesó y se trató con 5
E. híbrido grandis- E. urophylla) para la producción de biocombustible. Se
ml de 72% (w / w) H 0,5 g de ENB 2ASI QUE4, Agitando a 30 ° C. Después
estudiaron los efectos de los procesos de deslignificación con
de eso, la solución de ácido se diluyó a una concentración de 4% y se
concentraciones de hidróxido de sodio cada vez mayor, precedido o no por
sometió a tratamiento hidrotérmico (121 ° C durante 1 h) en autoclave para
el ácido diluido, así como la digestibilidad enzimática de los sólidos
completar la hidrólisis de los oligosacáridos. Los licores se analizaron por
pretratados. En un estudio posterior,Lima et al. (2014) en comparación el
cromatografía líquida de alto rendimiento (HPLC) para la glucosa, xilosa,
potencial de materias primas alternativas tales como varias hierbas y
arabinosa y cuantificación de ácido acético para la celulosa, xilano,
cortezas de eucalipto (de Eucalyptus grandis y E. urophylla híbrido
arabinano y grupos acetilo determinación. Las muestras se analizaron por
grandis-) en contra de bagazo de caña de azúcar como materia prima para
HPLC con un detector de índice de refracción (Jasco) y Aminex HPX-87H
la producción de bioetanol.
(BioRad, EE.UU.) la columna se eluyó con 0.005 MH 2ASI QUE4, Tasa de
Hasta donde sabemos, no hay estudios sobre el tratamiento previo
0,6 ml / min de flujo a 60 ° C. El sólido obtenido en el fil-tración después de
de corteza de eucalipto nitens se centraron en la producción de
la hidrólisis ácida (TAPPI T-249 cm-85) se horno de secado y pesado
biocombustibles han sido reportados. Por lo tanto, el objetivo de este
(TAPPI T-222 om-98) para la determinación del contenido de residuo
estudio fue la valoración de E. nitens corteza como materia prima para
insoluble ácido. El contenido de ácido lignina soluble (ASL) se cuantificó
la producción de bioetanol por organosolv pretratamiento sin
por espectrofotometría a 205 nm siguiendo el procedimiento descrito en
catalizador. Diseño experimental fue propuesto para la evaluación de
las condiciones operativas del proceso (temperatura, tiempo y tabla 1
porcentaje de etanol-agua) sobre el fraccionamiento de la corteza de Composición química de Eucalyptus nitens corteza.
E. nitens y para mejorar la producción de etanol por sacarificación y (G / 100 g de madera
fermentación simultáneas utilizando un Saccharomyces industriales Componente seca)
cepa cerevisiae. glucano 45,27 ± 0,94
Las hemicelulosas 16.64
xilano 12,72 ± 0,82
2. Materiales y métodos arabinano 1,17 ± 0,08
Grupo acetil 2.75 ± 0,02
Acid lignina insoluble (lignina Klason) 21,96 ± 0,65
2.1. La materia prima y el análisis de composición química
Soluble Acido lignina (ASL) 6.73 ± 0,15
extractivos 4.95 ± 0,46
Eucalyptus nitens muestras (ENB) de corteza fueron amablemente despojos mortales 5,18 ± 0,98
proporcionados por una planta de celulosa local (ENCE, Pontevedra, Suma 100.73
España). Se secó al aire las muestras se molieron y tamizaron para
pasar un tamiz de 1 mm y se almacenaron en un lugar seco hasta ser
utilizado.
328
A. Romaní, et al. Dávila et al. (2017). Todos los análisis se llevaron a cabo por
triplicado.
Tabla 2
Diseño experimental se expresa en términos de las variables dimensionales
2.2. Procesamiento de corteza de eucalipto nitens: diseño
tempera-tura, el tiempo y el porcentaje de etanol-agua y variables experimental
adimensionales x1, X2 yx3.
dimensiones variables muestras de ENB se presentaron a Organosolv proceso de
Experimentar independientes Adimensional, normalizada, deslignificación con soluciones de etanol-agua. Tabla 2resume el plan
número variables independientes de Doehlert ex-perimental diseñado para evaluar los efectos de las
Temperatura (ºC) Hora Etanol- X1 X2 X3 variables independientes (temperatura, tiempo y porcentaje de etanol)
(Min) agua en la composición che-mical de los sólidos pretratados y su
(%) susceptibilidad a más de sacarificación y fermentación simultáneas
sesenta (SSF) experi-mentos para producir etanol. Los datos experimentales
1 200 60 y cinco 1 0 0 se ajustaron a las ecuaciones propuestas utilizando software
sesenta
comercial (Microsoft Excel, Redmon, Washington, EE.UU.).
2 170 60 y cinco -1 0 0
sesenta Un reactor Parr de acero inoxidable de 2 L (Parr Instruments
3 192,5 34.0 y cinco 0.5 -0.866 0 Company, Moline, Illinois, EE.UU.), se utilizó para organosolv
sesenta
4 192,5 86.0 y cinco 0.5 0,866 0 tratamientos. El reactor fue equipado con dos impulsores de turbina
5 192,5 51.3 77.2 0.5 -0.289 0,817 de cuatro palas, calentado por un manto de tela externo y se enfrió
6 192,5 68.7 52.8 0.5 0,289 -0.817 por agua fría que circula a través de un bucle de acero inoxidable
7 177,5 51.3 77.2 -0.5 -0.289 0,817 interna. La temperatura se controló utilizando un módulo PID, modelo
8 177,5 86.0 65.0 -0.5 0,866 0
9 177,5 34.0 65.0 -0.5 -0.866 0
4842 (Parr Instruments Company, Moline, Illinois, EE.UU.). La materia
10 177,5 68.7 52.8 -0.5 0,289 -0.817 prima, agua y etanol se mezclaron en el reactor para obtener una
11 185 42.7 52.8 0 -0.577 -0.817 relación de líquido a sólido de 8 g / g en condiciones experimentales
12 185 77.3 77.2 0 0,577 0,817 enumeradas enTabla 2. El reactor se calentó hasta alcanzar la
sesenta
13 185 60 y cinco 0 0 0 temperatura deseada y los medios de reacción se agitaron a 150 rpm.
sesenta El experimento se llevó a cabo durante el tiempo deseado (aparece
14 185 60 y cinco 0 0 0 enTabla 2).
sesenta
15 185 60 y cinco 0 0 0 Al final de los tratamientos, el reactor se enfrió rápidamente y los
sólidos se recuperaron por filtración y se lavó primero con etanol a solución
a temperatura ambiente (para eliminar la lignina adsorbida y otros
compuestos de superficie sólida) y después con agua destilada abundante.
Después, los sólidos se pesaron para rendimiento sólido determinación
(SY) (expresado como g pretratado 100 g de material sólido recuperado /
cruda, en base seca). Los sólidos se analizaron usando los métodos
resumidos en el apartado2.1. Alícuotas de licores se sometieron a post-
hidrólisis cuantitativa con H2ASI QUE4(4% w / w) a 121 ° C durante 20 min.
Las muestras se analizaron por HPLC para los azúcares determinación
como se ha mencionado en el apartado2.1.
2.3. preparado de microorganismos y el inóculo
Saccharomyces cerevisiae PE-2 cepa aislada de brasileño de bioetanol
destilería se utilizó en este trabajo (Pereira et al., 2014). La cepa se
mantuvo en la dextrosa de levadura de peptona (2% de glucosa, 2% de
peptona y 1% de extracto de levadura) medio de agar a 4 ° C. La levadura
se cultiva
Cultivos y Productos 132 (2019) 327-335
industriales
en matraces Erlenmeyer que contienen 20 g / L de glucosa, 20 g / L
de peptona y 10 g / L de extracto de levadura durante 15 horas a 30 °
C y 200 rpm. Las células se separaron del medio de cultivo por
centrifugación (10 min a 4 ° C y 7,500 g) y se resuspendieron en 0,9%
de NaCl. Los (SSF) experimentos sacchar-ficación y fermentación
simultáneas se inocularon con 5 g de levadura fresca / L
(concentración final).
2.4. sacarificaciónfermentación
Los sólidos deslignificadas se sometieron a experimentos de SSF
en 100 matraces Erlenmeyer con un volumen de trabajo de 40 ml en
un agitador orbital. Los nutrientes solución que contiene (20 g / l de
peptona y 10 g / L de extracto de levadura) y sólidos pretratados se
esterilizaron por separado en auto-clave a 121 ° C durante 15 min.
concentrados enzimáticos (Cellic CTec2 y Cellic Htec2) fueron
amablemente proporcionados por Novozyme (Dinamarca).
Enzimáticos ac-actividades se determinaron como se describe
porGhose (1987) y Bailey et al. (1992) y correspondía a 120 FPU
(Filtro unidades de papel) / mL y 1690 UI (unidades internacionales) /
ml, respectivamente. SSF comenzó después de mezclar los nutrientes
y 10% de sólidos pretratados y añadiendo el inóculo y las enzimas a
los medios. Todos los experimentos de la SSF se realizaron a 35 ° C y
150 rpm. Los ensayos de la SSF se realizaron con una carga
enzimática de 25 FPU / g de sustrato para Cellic CTec2 y 8 UI / FPU
para Cellic HTec2 y se inocularon con 5 g de levadura fresca / L. En
tiempos de reacción dadas, se extrajeron muestras del medio de
reacción, se centrifugaron, se filtraron y se analizaron por HPLC para
la glucosa, xilosa, ácido acético y la concentración de etanol (véase
abajo). rendimiento de etanol (Yet) Se calculó por la siguiente
ecuación:
Etanol F Etanol 0
Yet (%) = 0,51 f B 1,111 100 (1)
donde, Etanol F es la concentración de etanol producido durante la fer-
mentación (g / L), etanol0 es la concentración de etanol en el
comienzo de la fermentación (g / L) que era cero, B es la
concentración de biomasa seca al comienzo de la fermentación (g / L),
f es glucano frac-ción de deslignificada corteza de Eucalyptus nitens
( g por g de glucano corteza deslignificada, en base seca, véase Tabla
3para los valores experimentales), 0,51 es el factor de con-versión
para la glucosa a etanol a partir de estequiométrica bio-química de la
levadura. El factor estequiométrico que convierte glucano a glucosa
equivalente es 1.111.
3. Resultados y discusión
3.1. Composición química de la materia prima
La composición química de la corteza de la Eucalyptus nitens
(ENB) (ex-presiona en g por 100 g de madera sobre una base secada
al horno ± devia-ción estándar) se detalla en tabla 1. Como se ve,
ENB está compuesta principalmente por polisacáridos (cerrado al
60%) seguido de Klason lignina (21,96%). Por lo tanto, el alto
contenido de polisacárido muestra su potencial como materia prima
para la bioconversión en productos químicos y combustibles. Con el
fin de com-plete la caracterización, se determinaron también otros
componentes, tales como grupos y extractivos acetilo, que
representaron el 2,75 y 4,95%, respectivamente. El contenido de
cenizas (5,18%) presente en la corteza es en general más alta que la
ceniza de madera (Neiva et al., 2018; Penín et al., 2018). Los
resultados están de acuerdo con la composición química de
Eucalyptus globulus corteza (Neiva et al., 2018). No obstante, menor
contenido en glucano y xilano y ligeramente superior lignina Klason
(37,1%, 9,8% y 24,4%, respectivamente) fueron reportados
recientemente para Eucalyptus dunnii corteza porReina et al. (2016).
Por otro lado, Klason lignina y xilano contenido eran inferior cuando se
compara a la madera a partir de maderas duras tales como
Eucalyptus globulus madera y madera dealbata Acacia (Romaní et al.,
329
2010;Domínguez et al., 2014). Estas diferencias también fueron
reportados por Neivaet al. (2018), Que en comparación con las virutas
de madera y corteza de Eucalipto globulus madera.
A. Romaní, et al. Cultivos y Productos 132 (2019) 327-335
industriales

Tabla 3
Composición química de las fases sólidas y líquidas después de organosolv pretratamientos y resultados principales obtenidos de proceso de deslignificación
organosolv y sacarificación y fermentación simultáneas (SSF) de Eucalyptus deslignificada nitens corteza.
Principales resultados de la composición Principales resultados del fraccionamiento Principales Resultados del
experimentos química Organosolv proceso de SFS

la la
recuperación recuperació rendimiento
Fase sólida (%) fase líquida (g / L) SY % deslignificación gn n Xn Ethanolmax de etanol

o y1 o y2 o y3 o y4 o y5 o y6
gn Xn KL XDC GDC

1 65.31 6.39 17.99 4.58 0.00 61.70 49.45 89.01 31.01 28.25 82.61
2 52.77 14.03 21.05 3.86 1.12 77.17 26.00 89.96 85.16 9.85 35.53
3 57.99 9.27 19.84 8.45 1.20 68.42 38.18 87.66 49.87 16.70 54.89
4 64.61 7.41 18.76 8.52 1.30 56.67 51.58 80.88 33.02 32.53 98.73
5 55.90 13.54 21.94 8.33 1.18 65.21 34.83 80.53 69.42 10,59 36.06
6 65.27 6.30 19.81 4.11 1.00 53.51 51.72 77.16 26.50 23.01 67.20
7 50.34 14.02 21.22 4.26 0.84 77.67 24,93 86.38 85.65 9.02 34.13
8 60.37 10.45 19.85 8.65 1.30 69.39 37.27 92.54 57.00 17.10 53.98
9 53.85 14.53 20.18 6.78 0.93 74.32 31.69 88.40 84.89 8.91 31.53
10 56.61 8.65 21.43 9.12 1.30 59.07 42.34 73,87 40.19 15.73 52.88
11 58.37 7.90 20.44 3.62 1.11 61.41 42.82 79.18 38.16 18.55 60.53
12 54.72 9.54 21.12 4.36 0.95 64.45 38.00 77.90 48.32 11.49 39.98
13 56.83 9.06 21.19 6.61 1.03 63.92 38.32 80.25 45.54 16.73 58,62
14 57.26 10,84 20.56 7.10 1.01 63,63 40.42 80.49 54.24 17.24 54.41
15 56.51 9.78 20.13 8.76 1.32 63.29 41.99 79.01 48.65 16.50 53.63

GN: glucano; Xn: xilano; KL: Klason lignina; XDC: xilano compuestos derivados; GDC: glucano compuestos derivados.
sólido mayor que 53,5% (valor que corresponde a experimentar 6, que
3.2. Plan experimental y la composición química de los sólidos y las se llevó a cabo a temperaturas medias y tiempos de reacción y bajas
cargas etanol). La disminución de SY se relaciona con mayor
fases líquida obtenida después del pretratamiento organosolv
solubilización de la lignina y hemicelulosa fracciones en procesos
En este estudio, organosolv tecnología fue seleccionada para el organosolv de deslignificación (Romaní et al., 2013). Los rendimientos
procesamiento de ENB basado en trabajos anteriores con madera de sólidos más altos (> 77%) se obtuvieron en los experimentos 2 y 7,
Eucalyptus globulus para la producción de bioetanol (Romaní et al., realizado a 170 ° C, 60 min, y 65% de etanol-agua y 117,5 ° C, 51,3
2011, 2013; Romaní et al., 2016) Y en la literatura sobre el tratamiento min y 77,2%, respectivamente. Como una tendencia general, un
de fraccionamiento de lignocelulósica bio-masa (Wildschut et al., aumento de temperatura tuvo una influencia negativa sobre el
2013). rendimiento sólido (Tabla 3).
Un conjunto de experimentos preliminares (Tabla S1,
complementario de mate-rial) se llevó a identificar las variables más
influyentes (tanto en las etapas de deslignificación y SSF) y su rango
de interés. Sobre la base de estos resultados y para evaluar el
potencial de ENB como materia prima para la producción de bioetanol,
se propuso un diseño experimental Doehlert de 15 experi-mentos (ver
el plan experimental enTabla 2). Las variables independientes
seleccionadas fueron la temperatura (T, ºC o x 1), El tiempo (t, min o
x2) Y el porcentaje de etanol (etanol-agua,% o x 3) Y los rangos de
variación considerados fueron: 170-200 ° C, 30-90 min y 50-80% de
etanol-agua, respectivamente. El diseño experimental fue Doehlert se-
cionado en la base de ventajas sobre otros diseños de segundo orden
como compuesto central y Box-Behnken ya que el número de experi-
mentos para completar el proceso de optimización es más bajo que
los otros diseños (Caldas et al., 2013).
La eliminación de la lignina y hemicelulosas durante organosolv
pre-tratamiento conduce a la mejora de la digestibilidad enzimática de
la celulosa y menor absorción irreversible de la enzima a la lignina, lo
que resulta también en una mayor celulosa a glucosa rendimientos
(Huijgen et al., 2011; Wildschut et al., 2013). En este sentido, el
objetivo del pretratamiento fue seleccionado a obtener biomasa
deslignificada con alto contenido de polisacáridos (que podría resultar
en altas concentraciones potenciales de azúcar) y para mejorar la
sacarificación enzimática de ENB. Tabla 3muestra los principales
resultados obtenidos después de los tratamientos: los rendimientos de
sólidos (SY) y la composición química del sólido (ENB deslignificada)
y el líquido (licor negro) fases. Como se vio enTabla 3, Todas las
condiciones experimentales ensayadas resultaron en un rendimiento

En cuanto a la composición de la fase sólida después de la
deslignificación con pre-tratamiento (Tabla 3), El porcentaje de
glucano variada 50,3-65,3 g glucano / 100 g de pretratada ENB. El
más alto contenido de glucano (corre-pondiente a experimentar 1)
también resultó en el contenido mínimo Klason lignina obtenido
(17,99%). Este incremento de glucano permitió un en-richment de
1,44 veces mayor respecto glucano a la materia prima. El aumento de
la temperatura produjo un ENB pretratada compuesta con mayor
glucano e inferior de xilano y lignina Klason, operando a tiempo
intermedio (60 min) y el porcentaje de etanol (65%). Este
comportamiento fue más pronunciado a altas temperaturas (el
experimento 1, 2 y 13-15). Por otra parte, el aumento del tiempo de
deslignificación también contribuyó al aumento del contenido de
glucano en la biomasa pretratada, como se ve cuando la comparación
de los experimentos 3 y 4 (temperatura de 192,5 ° C y 65% de etanol-
agua) y los experimentos 8 y 9 (temperatura de 177.
fracción de hemicelulosa de ENB (tabla 1) Está compuesto
principalmente por xilano, que representó el 76,4% de los compuestos
identificados. Xylan después del tratamiento organosolv varió en el
intervalo de 6,30 a 14,53 g de xilano / 100 g de deslignificada ENB. La
solubilización de xilano fue influenciado por la temperatura y el
porcentaje de etanol. Como una tendencia general, xilano con-tienda
era inferior al 10% a temperaturas> 192.5 ° C y porcentajes de etanol-
330
A. Romaní, et al.
lignina. El efecto de aumento de la temperatura en la disminución del
rendimiento de la pasta, debido principalmente a xilano y la solubilización
de lignina, se informó también deWildschut y compañeros de trabajo
(2013) usando el proceso fractiona-ción etanol organosolv para la
deslignificación de la paja de trigo. La temperatura también tuvo un efecto
positivo en la recuperación de lignina de catalítica deslignificación
organosolv etanol-agua de hojas de palma (Cybulska et al., 2017).
Después del tratamiento organosolv, el licor negro se analizó para
la cuantificación de compuestos de hemicelulosa derivados,
principalmente azúcares (glucosa y xilosa). Tabla 3también
proporciona los datos relativos a la composición química de la fase
líquida (lejías negras). Las concentraciones bajas de glucosa (<1,30
g / L) se cuantificaron en fases líquidas, que muestra una baja
degradación de glucano por tratamiento organosolv. Sin embargo, la
presencia de compuestos de xilano-derivado (que incluiría tanto
xilooligosacáridos y xilosa) en los medios de reacción fue mayor,
como se demuestra por las concentraciones de xilosa (también
cuantificados después de la hidrólisis ácida de los licores negros). La
concentración de xilosa en los licores organosolv variaron en el
intervalo de 3.8 a 9.1 g / L (ver los experimentos 2 y 10), CORRE-
pondientes a la recuperación de xilano en la fase sólida de 40-86%.
3.3. sacarificaciónfermentación de deslignificada ENB
Deslignificada ENB obtenida de tratamiento organosolv se utilizó
como sustrato para la producción de etanol por fermentación (SSF) la
sacarificación simultánea y. concentración de etanol varió en el
intervalo de 8,91 a 32,5 g / L (correspondiente a experimentar 9 y 4,
respectivamente). En experimentos SSF, la concentración de xilosa
(hasta 4 g / L) también se cuantificó (datos no mostrados) que
correspondió a 24% de rendimiento de xilosa a partir de xilano de la
pulpa deslignificada. No se observaron diferencias claras en la pro-
ducción de etanol entre los experimentos que muestran la influencia
de las condiciones organosolv. ensayo SSF adicional con Eucalyptus
nitens no tratados corteza se llevó a cabo (datos no mostrados). En
este experimento, no se detectó etanol, lo que demuestra la
importancia de la pre-tratamiento para la mejora de la sacarificación
enzimática (Alvira et al., 2010).
Evolución temporal de rendimiento de etanol a partir de ensayos de la
SSF (calculado siguiendo la Eq. (1)) Se muestra en Figura 1. Los
rendimientos de etanol, oscilaron desde 31,5 hasta 98,7%, se obtuvieron
para ENB tratados en 65% de etanol-agua y 177,5 ° C durante 34 min y
192,5 ° C durante 86 min, (denotado como experimento 9 y 4 enTabla 3).
Estos resultados mostraron una enorme mejora de la producción de etanol
a partir de la corteza de eucalipto deslignificada, que fue influenciado por
agua <77% (Tabla 3). Este hecho podría estar relacionado con el
comportamiento típico de tratamiento hidrotérmico, influenciado por
alto contenido de agua (Novo et al., 2011; Garrote et al., 1999).
Por otro lado, Klason contenido de lignina de pretratada ENB re-
mained en un intervalo de 17,99 a 21,94 g de Klason lignina / 100 g
de-de lignificada ENB en todas las condiciones experimentales
ensayadas en el diseño propuesto. Con el fin de evaluar el efecto del
proceso organosolv en la deslignificación de la corteza de Eucalyptus
nitens, el porcentaje de deslignificación se calculó como sigue:
KL rm KLre S SY
100
% Deslignificación (D) =
100 KLrm (2)
donde KLrm y KLDS son los porcentajes de lignina Klason presentes en
la materia prima y en los sólidos deslignificadas, respectivamente, y
SY es el rendimiento sólido de pretratamiento.
Los resultados de deslignificación se incluyeron en Tabla 3. Los
porcentajes más altos de deslignificación (> 50%) se lograron a una
temperatura de 192,5 ° C, tiempo de> 68 min y el porcentaje de
etanol-agua de 52% (correspondiente a experimentar 4 y 6). Por otra
parte, se obtuvieron los porcentajes de deslignificación más bajas
(<26%) a 177,5 ° C, que muestra un claro efecto de la temperatura
sobre la solubilización de xilano y
un aumento de la temperatura y el tiempo (Figura 1 y los resultados
enumerados en Tabla 3). Además, en todo las condiciones experimentales
evaluados, los rendimientos de etanol más altas (> 80%) se obtuvieron a
partir de sólidos pre-tratados en porcentajes intermedios de etanol e
intermedios a altas temperaturas y los tiempos (200 ° C durante 60 min y
192,5 ° C 86 min, ver los experimentos 1 y 4 en Figura 1una). Además,
organosolv pretratamientos realizaron a bajos porcentajes de etanol,
temperaturas intermedias y bajas a medianas tiempos de reacción, como
por ejemplo los experimentos 6 y 11, también permitió alcanzar
rendimientos de etanol interesantes (cerca de 60%). Por otra parte, los
rendimientos de etanol <36% se consigue cuando organosolv proceso se
llevó a cabo a temperaturas entre 170 a 192,5 ° C durante 34 y 60 min y
65% de etanol-agua.
Como tendencia general, se alcanzaron las concentraciones
máximas de etanol dentro de 9 h de los ensayos de SSF. Estos
resultados se pueden comparar positivamente a la literatura, en la que
el tiempo de reacción óptimo para el SSF de hojas pretratadas de
Antigonum leptopus fue de 24 h (Krishna y Chowdary, 2000). Por lo
tanto, se calculó la productividad etanol (Qp) en 9 h de fermentación y
variada en el rango de 0,89 a 2,83 g / Lh. proceso de deslignificación
Orga-nosolv permitió la mejora de la pulpa de sus-susceptibi- a la
hidrólisis enzimática y la fermentación adicional de la glucosa en
etanol, como se observa para las productividades elevadas de etanol
obtenidos en este trabajo. Estos resultados pueden compararse
positivamente con los re-portado en la literatura, en la que / Lh de
productividad volumétrica se logró 1,9 g después de un pre-
sacarificación y fermentación de abedul pretratado usando tratamiento
una explosión de vapor organosolv (Matsakas et al., 2018).
 Cultivos y Productos 132 (2019) 327-335
industriales
Finalmente, a partir de los resultados experimentales, hay que
señalar que la SSF del sólido obtenido en el Experimento 4 (65% de
etanol-agua y 192,5 ° C durante 86 min) dio como resultado la
concentración de etanol y etanol rendimiento más alto después de 30
h, y la más alta Qp en 9 h (32,5 g / l, 98,7% y 2,83 g / L h,
respectivamente).
En comparación con la literatura, pocos trabajos han estudiado el
efecto de pretratamiento en la mejora de la sacarificación enzimática
de la corteza de la UE-Calyptus (Matsushita et al., 2010; Lima et al.,
2013). En estos trabajos, 80%, 7,4% y 98,6% de los rendimientos de
glucosa se obtuvieron utilizando tratamiento hidrotérmico con CO 2,
Agua caliente líquido y pre-tratamientos alcalinos, respectivamente.
Lima y colaboradores (2013)compararon el agua caliente líquido,
ácido y pretratamientos alcalinos de E. grandis y E. grandis x
urophylla cortezas para la producción de glucosa, que muestra la
mayor digestibilidad de la celulosa por el proceso de deslignificación
usando 4% de NaOH a 120 ° C durante 60 min. tratamientos de
deslignificación (tales como álcali y orga-nosolv) lignina y
hemicelulosas significativa eliminado aumentando el acceso a la zona,
lo que mejoró la sacarificación enzimática de la celulosa (superficie
deRabindran y Jaismal, 2016). Además, los procesos de
deslignificación aumentan el contenido de celulosa en la biomasa
lignocelulósica pretratada, que es determinante para obtener una alta
concentración de producto final (Zhao et al., 2017). Recientemente, la
sacarificación enzimática de E. nitens se evaluó la madera tratada
previamente por consecutivos autohidrólisis y las etapas de
fabricación de pasta para la producción de glucosa logro de celulosa a
glucosa conversiones> 88% en 60 h de sacarificación (Penin et al.,
2018).
Por otra parte, trabajos recientes mostraron que la optimización de
la producción de bioetanol a partir deslignificada madera Eucalyptus
globulus pretratada por organosolv el uso de etanol y glicerol como
disolventes (Muñoz et al., 2011; Romaní et al., 2016). Los resultados
obtenidos en este trabajo puede ser positivamente en comparación
con los reportados en la literatura usando SO2vapor catalizada
pretratada corteza de abeto, en el que 87% de rendimiento de etanol
fue-CONTENIDAS ob por hidrólisis separada y la fermentación (SHF)
(Franko et al., 2015). El conjunto Eucalyptus grandis árbol (incluyendo
331
cortezas, ramas y hojas) se trató previamente por la explosión de
vapor y se utiliza como sustrato para la producción de etanol, logrando
un rendimiento de etanol de 90%, utilizando 20% de sólidos y 60
FPU / g (McIntosh et al., 2017). Por lo que sabemos, no hay estudios
para la producción de bioetanol a partir de la corteza de E. nitens
utilizando un proceso organosolv. Este es el primer trabajo que
muestra un proceso adecuado para la producción de bioetanol
eficiente de Eucalyptus corteza (rendimiento de etanol de 98,7%).
3.4. evaluación de la metodología de superficie de respuesta del
fraccionamiento organosolv y SSF del ENB
Se propuso la metodología de superficie de respuesta (RSM) para
una interpretación más fácil de los resultados obtenidos a partir de
ensayos de fraccionamiento y SSF organosolv. Las variables
dependientes (enumerados en elTabla 3, Desde y1 ay6) Se
correlacionaron con las variables independientes (temperatura, tiempo
y porcentuales de etanol-agua) por los modelos empíricos, como
sigue:
2 2 2
y=
j
segundo + segun
0j
doij X
+
i =1 yo i =1 k yo segundoikj X yo Xk (3)
donde yj(J = 1 a 6) es la variable dependiente; X yo oxk (I o k: 1 a 3, k≥i)
son las variables independientes, normalizados (definido en Tabla 2),
y B0j…segundoikjson los coeficientes de regresión calculados a partir
de datos experimentales por regresión múltiple utilizando el método de
mínimos cuadrados. Los datos ex-perimental se ajustaron a los
modelos propuestos utilizando software comercial (Microsoft Excel,
Microsoft, EE.UU.).
Los parámetros de adaptación se enumeran en Tabla 4, Mostrando la
buena FITT-ingness de los modelos empíricos. Los coeficientes de
regresión, la significación estadística (basado en el test t de Student) y la
significación estadística de modelo (parámetro de Fischer F) también se
2
incluyeron enTabla 4. El coeficiente de correlación (R ) De los modelos
variarse 0,88-0,99 que indica las relaciones apropiadas entre las variables
seleccionadas.
Los valores predichos para las variables (Y SY1), Porcentaje de
A. Romaní, et al. Cultivos y Productos 132 (2019) 327-335
industriales

Figura 1. Evolución temporal de rendimiento de etanol (todavía) de sacarificación y fermentación simultáneas ensayos de cortezas de eucalipto nitens deslignificadas.

deslignificación (y2) Y las recuperaciones de glucano y xilano (y 3 ey4)
A 50, 65 y 80% de etanol-agua se muestra en Figura 2. Como se
observa enFigura 2a, SY aumentó con el porcentaje de etanol-agua y
con el disminución de la temperatura. Por otro lado, se consiguió la
SY más bajo (52,71%) a la temperatura más alta y el tiempo evaluado.
Estos resultados están inversamente relacionados con el porcentaje
de deslignificación, se muestra en laFigura 2b, en la que se predijo la
más alta deslignificación de 62,2% (200 ° C, 90 min y 50% de etanol-
agua). Como se observa enTabla 4, Los coeficientes lineales para y1
ey2fueron significativas a p ≤ 0,05 para tem-peratura, el tiempo y el
porcentaje de etanol-agua. El etanol con-centración superior al 70%
disminuye la solubilidad de lignina en mezclas de agua-etanol (Asadi y
Zilouei, 2017).
Por otra parte, Figura 2c muestra una recuperación glucano superior a
86% a los 30 min de tratamiento organosolv en el intervalo de temperatura
eval-uated (170-200 ° C). Por otro lado, la pérdida de alta celulosa
(glucano
Tabla 4
recuperación <79%) se predijo a temperatura> 185 ° C y el tiempo>
50 min utilizando 80% de etanol-agua. se informó de recuperaciones
de glucano similar para el proceso de deslignificación catalizada de
cordgrass pradera usando un disolvente orgánico acuoso mezcla
contenía metil isobutil cetona, etanol y agua (Brudecki et al., 2012). La
recuperación de xilano más alta obtenida en este trabajo se predijo en
el momento más bajo (30 min) y la temperatura (170 ° C) utilizando
50% de etanol-agua como disolvente (Figura 2re). La recuperación de
xilano disminuyó en gran medida con el aumento de tem-peratura. El
efecto de la alta temperatura, nivel de catalizador de alta o una com-
binación de dos en la recuperación de xilano más bajo se informó
también para la deslignificación de cordgrass pradera (Brudecki et al.,
2012).
En cuanto a la producción de etanol a partir de proceso
saccharifica-ción simultánea de deslignificada ENB, concentración de
etanol máxima y rendimiento de etanol también se enumeran en Tabla
3. Fig. 3 muestra el gráfico re-presentación de efecto de la
temperatura y el tiempo de la concentración de etanol

Los coeficientes de regresión y parámetros estadísticos que miden la correlación y la importancia de los modelos.

segundo segundo segund segundo3 segundo1 segundo1 segundo23

Coeficiente 0j segundo1j segundo2j segundo3j 11j o22j 3j 2j 3j j R2 F Nivel significativo(%)
- -
seg
3.51 3.94segund 5.62segund
y1 62.94una -8.45una -5.36una 6.80una 6.49una undo
-1.59
o o
-0.27 0,990 53.1 99,98
y2 40.24una 10,87una 5.89una -7.98una -2.52 0.10 -1.10 4.52do 1.92 1.84 0,987 41.5 96.78
9.57segun 6.75seg
y3 79.92una -2.11 -1.90 2.98do do undo
-5.19do -6.30 -7.82 -0.33 0,909 5.6 96.32
y4 49.00una -24.65una -14.60una 20.09una 9.08 6.56 -0.36 6.37 0.70 -16.35 0.96 13.69 99.49
-
y5 16.82una 8.61una 5.56segundo 5.34segundo 2.23 1.91 -4.16 4.41 -1.94 0,72 0,924 6.8 98.77
y6 55.55una 22.32una 14.99segun - 3.52 4.47 -12.61 12.35 -3.22 3.47 0,883 4.2 93.56
do 14.36segund
 o

a Coeficientes significativos en el nivel de confianza del 99%.

b Coeficientes significativos al nivel de confianza del 95%.
c Coeficientes significativos en el nivel de confianza del 90%.

332
A. Romaní, et al.
industriales
Figura 2. Superficie de Respuesta a) rendimiento sólido (g de E. deslignificada nitens corteza / 100 g de materia prima) a 50, 65 y 80% de etanol-agua; b) porcentaje
de deslignificación a los 50, 65 y 80% de etanol-agua; c) la recuperación de glucano (g de etanol-agua fijo glucano en 80% y d) de xilano de recuperación, fijo de
etanol-agua al 50%.
y el rendimiento de etanol con 50, 65 y 80% de etanol-agua. Como se
observa, el aumento de la temperatura y el tiempo influenciado
positivamente sobre la concentración de etanol. Este efecto fue más
prominente en etanol-agua de 50 y 65%. El porcentaje de etanol-agua tuvo
un efecto negativo en la concentración de etanol y el rendimiento. Un
comportamiento similar en el rendimiento de la glucosa también se
observó en la deslignificación de madera Eucalyptus globulus por
tratamiento con glicerol-agua (Romaní et al., 2013). El coeficiente lineal fue
significativo a p <0,05 para la temperatura, el tiempo y el porcentaje de
etanol-agua (Tabla 4). Mayor concentración de etanol de 40 g / L fue
predicho por los modelos en el 50-60% de etanol-agua, temperatura> 197
° C y el tiempo> 86 min. Esta concentración es deseable desde el 4% de
etanol fue identificado como crítico para los costos de destilación mejora
de la economía de proceso para concentraciones por encima de este
umbral (Zacchi y Axelsson, 1989). Por otro lado, se consiguió el
rendimiento de etanol> 80% a temperatura> 175 ° C y 90 min utilizando
50% de etanol-agua. A los 65 y 80% de etanol-agua, la temperatura
necesaria para lograr 80% de rendimiento de etanol fue de 175 y 194 ° C
durante 90 min, respectivamente.
4. Conclusiones
En este trabajo, una pérdida de la pulpa y la industria de papel
(Eucalyptus nitens corteza) se caracterizó y se procesa por el proceso de
de-lignificación organosolv alternativa. El porcentaje de etanol-agua de
50% permitió que un 62% de la deslignificación. Las variables más
importantes para el proceso de deligni-ficación fueron la temperatura y el
tiempo. Además, en una amplia gama de condiciones, más alto que el 90%
de glucano se recuperó en el sólido
Cultivos y Productos 132 (2019) 327-335
fase. Este tratamiento previo mejora de forma significativa la
simultánea sac-charification y procedimiento de fermentación para la
producción de etanol (de 32 a 96% de rendimiento de etanol).
Además, el tiempo de reacción para la SSF se redujo
significativamente, lograr productividades alta etanol (2,83 g / Lh).
Bajo condiciones seleccionadas, la pasta celulósica de la corteza de
Eucalyptus nitens fue convertida en etanol para producir 252 L de
etanol / tonelada de biomasa secada en horno (correspondiente a
77,45% de rendimiento de etanol teórico) y 113 kg de lignina / ton y 72
kg de xilosa / tonelada también fueron recuperados en corrientes
separadas. Por lo que sabemos, por primera vez, corteza de eucalipto
nitens se utiliza para la producción eficiente de etanol.
Adicionalmente,
Expresiones de gratitud
Este estudio fue apoyado por la Fundación para la Ciencia y la
Tecnología (FCT) en el ámbito de la financiación estratégica de UID / BIO /
04469/2019 unidad, la operación BioTecNorte (NORTE-01-0145-FEDER-
000004), financiado por la Regional Europea Fondo para el desarrollo en el
ámbito de Norte2020 - Programa Operacional regional del Norte, el
proyecto MultiBiorefinery (POCI-01-0145-FEDER-016403) y el proyecto
EcoTech (POCI-01-0145-FEDER-032206). Antonio Larramendi gracias al
programa de Iacobus para la beca de movilidad.
 333
A. Romaní, et al. Dávila, I., Gullón, P., Andrés, MA, Labidi, J., 2017. La coproducción de la lignina y la
glucosa de los sarmientos de las estrategias ecológicas: hacia el desarrollo de una
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Fig. 3. de superficie de respuesta a) la concentración de etanol (g / l) a 50, 65 y

80% de etanol-agua; y b) el rendimiento de etanol (%) a 50, 65 y 80% de etanol-

agua.

Apéndice A. Los datos complementarios

Los datos complementarios asociados a este artículo se pueden

encontrar, en la versión en línea, en
https://doi.org/10.1016/j.indcrop.2019.02.040.
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