PRÁCTICA 5.

PREPARACION DE SOLUCIONES BUFFER, TAMPON O

AMORTIGUADORAS

1. OBJETIVOS

 Preparar soluciones amortiguadoras de carbonatos, acetatos, y amonio.

 Determinar el pH de estas soluciones antes y después de la adición de
ácidos y bases fuertes
 Comparar el efecto del pH de una solución Buffer cuando se le adiciona un
ácido o base fuerte, con el que se presenta cuando se adiciona un ácido o
una base fuerte al agua.

2. INTRODUCCIÓN

Como se indicó en laboratorios anteriores la medida del pH es una de las

determinaciones más utilizadas en Bioquímica. Este parámetro influye en las
características estructurales y funcionales de proteínas y ácidos nucleicos, por la
presencia de grupos ionizables en dichas macromoléculas.

La comprensión de los mecanismos homeostáticos utilizados por los organismos

vivos para conservar un entorno intracelular relativamente constante debe
considerar el pH, el amortiguamiento del mismo a nivel de los líquidos corporales
y compartimientos subcelulares.

Una sustancia amortiguadora o buffer contiene sustancias que tienen la

capacidad de resistir cambios de pH. El efecto buffer es de extrema importancia
en células y tejidos porque asi sean cambios mínimos en el pH pueden
perjudicar o ser fatal para un organismo vegetal ó animal

Así, una solución amortiguadora o buffer se opone o resiste a los cambios de pH

cuando se les adiciona una base o un ácido, su acción se basa principalmente en
la absorción de hidrogeniones, H+ o iones hidroxilo OH-. Están formadas por una
mezcla binaria de un ácido débil y su sal o de una base y su sal. Aquella mezcla
que tenga una proporción equimolar de sal y ácido poseerá un óptimo poder
amortiguador ya que su pH=pKa.

Recordando, la ecuación fundamental para determinar teóricamente el pH de un

tampón, es la ecuación de Henderson-Hasselbalch:

pH = pK + log [Base conjugada]/[Ácido] para un Buffer ácido ó

pH = pK + log [Acido conjugado]/[Base] para un buffer básico.

3. PRELABORATORIO

1. ¿Cómo se define una solución buffer, dé ejemplos de soluciones

amortiguadoras que se utilizan en bioquímica?
2. Indique sistemas de amortiguación importantes en los seres vivos.
Explique brevemente cada uno de ellos.
3. ¿Cuáles son los criterios que se deben tener en cuenta para preparar un
buen amortiguador para una reacción bioquímica?

4. PROCEDIMIENTO

4.1 Solución amortiguadora de acetatos

 Preparar 25 mL de solución buffer de concentración 0,30M de ácido acético
y con un pH=5.0, usando ácido acético (CH 3COOH) y acetato de sodio
(CH3COONa). El valor de pka= 4.74.
 Determinar la cantidad de reactivo y pesar en la balanza. Determinar el
volumen del ácido. Disolver la sal en un vaso de precipitado, llevar las dos
soluciones a un balón aforado de 25 mL, completar a volumen con agua
destilada y homogenizar. Marcar el balón, para ácido acético: densidad,
d=1,05 g/mL.
 Completar el siguiente cuadro.

Medidas de pH y poder tamponante del acetato

Numerar 2 series de 3 tubos como 1A-3A y 1B-3B.

Tubos 1A 2A 3A 1B 2B 3B

Reactivos mL mL mL mL mL mL

Agua destilada 10 10 10 - - -
tampón acetato - - - 10 10 10
HCl 0,1N (gotas) - 5 - - 5 -
NaOH 0,1N (gotas) - - 5 - - 5

No utilizar la misma pipeta para el HCl y el NaOH, o lavar muy bien antes.
Medir el pH en todos los tubos, calcular las variaciones producidas en el agua y
el tampón acetato y comparar. 
 TABLA DE RESULTADOS:

Tubos 1A 2A 3A 1B 2B 3B

Reactivos mL mL mL mL mL mL

Agua destilada 10 10 10 - - -
tampón acetato - - - 10 10 10
HCl 0,1N (gotas) - 5 - - 5 -
NaOH 0,1N (gotas) - - 5 - - 5
pH 6.9 5.5 7.9 5.0 4.9 5.2

OBSERVACIONES:
__________________________________________________________________
__________________________________________________________________
__________________________________________________________________

4.2 Solución amortiguadora de carbonatos

 Preparar 25 mL de solución buffer de concentración 0,50M de bicarbonato
de sodio y con un pH=10.0, usando carbonato de sodio (Na 2CO3) y
bicarbonato de sodio (NaHCO3). El valor de pka= 10.26.
 Determinar la cantidad de reactivo y pesar en la balanza. Determinar el
volumen del ácido. Disolver la sal en un vaso de precipitado, llevar las dos
soluciones a un balón aforado de 25 mL, completar a volumen con agua
destilada y homogenizar. Marcar el balón. Tomar un volumen de solución y
hallar el pH.
 Completar el siguiente cuadro.

Medidas de pH y poder tamponante del carbonato

Numerar 2 series de 3 tubos como 1A-3A y 1B-3B.

Tubos 1A 2A 3A 1B 2B 3B

Reactivos mL mL mL mL mL mL

Agua destilada 10 10 10 - - -
tampón amonio - - - 10 10 10
HCl 0,1N (gotas) - 5 - - 5 -
NaOH 0,1N (gotas) - - 5 - - 5

No utilizar la misma pipeta para el HCl y el NaOH, o lavar muy bien antes.
Medir el pH en todos los tubos, calcular las variaciones producidas en el agua y
el tampón carbonato y comparar. 
TABLA DE RESULTADOS:

1A 2A 3A 1B 2B 3B
Tubos
mL mL mL mL mL mL
Reactivos

Agua destilada 10 10 10 - - -
tampón amonio - - - 10 10 10
HCl 0,1N (gotas) - 5 - - 5 -
NaOH 0,1N (gotas) - - 5 - - 5
pH 6.9 5.5 7.9 10 9.8 10.3

OBSERVACIONES:_________________________________________________
_______________________________________________________________
_______________________________________________________________
_______________________________________________________________

5. Solución amortiguadora de amonio

 Preparar 25 mL de solución buffer de concentración 0,2 M de hidróxido de
amonio y con un pH=10, usando hidróxido de amonio (NH 4OH) y cloruro de
amonio (NH4Cl). El valor de pka= 4.74
 Determinar la cantidad de reactivo y pesar en la balanza. Determinar el
volumen del ácido. Disolver la sal en un vaso de precipitado, llevar las dos
soluciones a un balón aforado de 25 mL, completar a volumen con agua
destilada y homogenizar. Marcar el balón. Tomar un volumen de solución y
hallar el pH.
 Completar el siguiente cuadro.

Medidas de pH y poder tamponante del amonio

Numerar 2 series de 3 tubos como 1A-3A y 1B-3B.

Tubos 1A 2A 3A 1B 2B 3B

Reactivos mL mL mL mL mL mL

Agua destilada 10 10 10 - - -
tampón amonio - - - 10 10 10
HCl 0,1N (gotas) - 5 - - 5 -
NaOH 0,1N (gotas) - - 5 - - 5
 No utilizar la misma pipeta para el HCl y el NaOH, o lavar muy bien antes.
Medir el pH en todos los tubos, calcular las variaciones producidas en el agua y
el tampón amonio y comparar. 

TABLA DE RESULTADOS:

Tubos 1A 2A 3A 1B 2B 3B

Reactivos mL mL mL mL mL mL

Agua destilada 10 10 10 - - -
tampón amonio - - - 10 10 10
HCl 0,1N (gotas) - 5 - - 5 -
NaOH 0,1N (gotas) - - 5 - - 5
pH 6.9 5.5 7.9 10 9,7 10.2

OBSERVACIONES:_________________________________________________
__________________________________________________________________
__________________________________________________________________
__________________________________________________________________

CUESTIONARIO:

a. Indique los cálculos que realizo para preparar cada una de las la soluciones
buffer

c. ¿En qué rango de pH considera efectivos los sistemas tamponante en

relación con el pK de las parejas ácido/base conjugada?
______________________________________________________________
______________________________________________________________
 ______________________________________________________________
______________________________________________________________
______________________________________________________________

CONCLUSIONES:______________________________________________
_____________________________________________________________
_____________________________________________________________
_____________________________________________________________
_____________________________________________________________
_____________________________________________________________
____________________________________________________________

BIBLIOGRAFIA CONSULTADA

Grupo de trabajo N°. _______________________________________________

Integrantes_______________________________________________________
________________________________________________________________
Fecha de la práctica________________________________________________
Fecha de entrega de informe_________________________________________