Capitulo 20 = TRANSPORTE ELECTRONICO Y FOSFORILACION OXIDATIVA 1. La mitocondria ‘A. Anatomia de la mitocondria B. Sistemas de transporte de la mitocondria 2. Transporte electrénico A, Termodinmica del transporte electronico B. La secuencia del transporte electrénico ©. Componentes de la cadena del transporte electrénico 3. Fosforilacién oxidativa A. Hipétesis del acoplamiento energético B. Generacién del gradiente de protones ©. Mecanismo de la sintesis de ATP . Desacoplamiento de la fosforilacién oxidativa 4. Control de la produccién de ATP A. Control de la fosforilacion oxidativa B. Control coordinado de la producci6n de ATP C. Implicaciones fisiol6gicas del metabolismo aerdbico frente al anaerébico En 1789, Armand Séguin y Antoine Lavoisier (el padre de la quimica moderna) escribieron: en general, Ia respiracion no es mas que una combustién lenta de carbono e hidrOgeno, que es enteramente similar a 1a que ocurre en una lam- para o una vela encendida y, desde este punto de vista, los animales que respiran son verdaderos cuerpos combustibles que se queman y se consu- men a si mismos. Lavoisier ya habia demostrado que los animales vivos consumen oxigeno y generan didxido de carbono. Sin embargo, no fue hasta principios del siglo xx, después del desarrollo de la enzimologia, que se establecid, en su mayor parte gracias al trabajo de Otto Warburg, que las oxidaciones biolégicas se catalizan mediante enzimas intracelulares. Como hemos visto, la glucosa se oxida a CO,, mediante las reacciones enzimaticas de la glucélisis y del ciclo del Acido citrico. En este capitulo, veremos el destino de los electrones que se eliminan de la glucosa en este proceso de oxidacién. La oxidacién completa de la glucosa por el oxigeno molecular se describe con la siguiente ecuacién redox: CeHi20, + 6 0, —* 6CO, + 6H,O AG" = — 2823 kj-mol-? Para ver més claramente la transferencia de electro- nes, esta ecuacién puede separarse en dos semirreac- ciones. En la primera reaccién los atomos de carbono de la glucosa se oxidan: CHO, + 6H,0 —> 6CO, + 24H* + 24e~Glucslsis Glucose t Glucosa fstato Y 1 2 Giiceraldehido-3tostato ieee . esto sas sesncogeasa 2NADHE 2 1,3.Bistostogicerato Y —— 2NAD* Pea senacgeas haan 2 het con NADH 2 One ona = Peet da, cece sr 2FADH, AY succano ana xe 2FAD~ 2 Succinate bolas ese Seem coca 2 sasnicon 2NAD* NADH Figura 20-1 Puntos de transferencia de electrones que forman NADH y FADH, en la glucdlisis y ol ciclo del acido citrico. y en la segunda, se reduce el oxigeno molecular: 60; + 24H* + 24e- —> 12H,O. En los sistemas vivos, los procesos de transferencia de electrones que conectan estas semirreacciones tienen lu- gar a través de una via con multiples etapas que aprove- cha la energia libre producida para formar ATP. Los 12 pares de electrones envueltos en la oxida- cin de la glucosa no se transfieren directamente al ©. En su lugar, como hemos visto, se transfieren a los coenzimas NAD* y FAD, formandose 10NADH + 2FADH, (Fig. 20-1) mediante las reacciones catalizadas por los enzimas glucoliticos gliceraldehido-3-fosfato deshidrogenasa (Seccién 16-2F), piruvato deshidroge- nasa (Seccién 19-2A) y los enzimas del ciclo del acido Capitulo 20. Trinsporte electronic y fosorilacion oxidativa 569 citrico isocitrato deshidrogenasa, a-cetoglutarato des- hidrogenasa, succinato deshidrogenasa (la tnica re- duccién de FAD) y malato deshidrogenasa (Seccién 19-3). Los electrones pasan entonces a la cadena de transporte electrénico donde, a través de la reoxidacion del NADH y del FADH, participan en Ia oxidacién- reduccién secuencial de mas de 10 centros redox antes de reducir el O, a H,0. En este proceso, los protones se expelen de la mitocondria. La energia libre almacenada en el gradiente de pH resultante impulsa la sintesis de ATP a partir de ADP y P,, a través de la fosforilacion oxidativa. La reoxidacion de cada NADH da lugar a la sintesis de 3ATPs, y la reoxidacion del FADH; rinde 2ATPs, con un total de 38 ATPs/glucosa com- pletamente oxidada a CO, y H,0. En este capitulo, exploramos los mecanismos y la regulacion del transporte electrénico y la fosforilacién oxidativa. Empezamos con una discusion de la estruc- tura y los sistemas de transporte de la mitocondria. 1. LA MITOCONDRIA La mitocondria (Seccién 1-2A) es el lugar del metabo- lismo oxidativo eucariético, Contiene, como Albert Lehninger y Eugene Kennedy demostraron en 1948, Jos enzimas que median este proceso, incluyendo la piruvato deshidrogenasa, los enzimas del ciclo del Acido citrico, los enzimas que catalizan la oxidacion de los acidos grasos (Seccién 23-2C) y los enzimas y proteinas redox implicados en el transporte electréni- co y la fosforilacion oxidativa. Es pues con raz6n que se describe a la mitocondria como la “central produc- tora de energia” de la célula A. Anatomia de la mitocondria Las mitocondrias varian de manera considerable en tamafio y forma, dependiendo de su origen y de su estado metabélico. Tipicamente, son elipsoides de ~ 0,5 um de diametro y 1 um de longitud (alrededor del tamaito de una bacteria; Fig. 20-2). La mitocon- dria esta limitada por una membrana externa lisa y contiene una membrana interna extensamente invagi- nada. El numero de invaginaciones, denominadas crestas, varia con Ja actividad respiratoria del tipo particular de célula. Ello es debido a que las proteinas que median el transporte electr6nico y la fosforilacion oxidativa estan unidas a la membrana mitocondrial interna, de modo que la tasa de respiracién varia con el Area de la superficie de la membrana. El higado, por ejemplo, que tiene una tasa de respiracion mas 0 menos baja, contiene mitocondrias con telativamente pocas crestas, mientras que las células del musculo cardiaco contienen muchas. No obstante, el rea total de las membranas mitocondriales internas en una célula hepatica es ~ 15 veces mayor que la de su membrana plasmética. El compartimento mitocon- drial interno consiste en una sustancia de aparienciaaSony Of + NAY centred) ca (sala) Matiz Figura 20-4 ‘Los dos sistemas mitocondriales de transporte de Ca**. El Sistema 1 media la entrada de Ca®* a la matriz como respuesta al potencial de membrana (negativo en el interior). El Sistema 2 media la salida de Ca** a cambio de Hr (Na* en el misculo cardiaco). y el P, los sustratos de la fosforilacién oxidativa, eben entrar en la mitocondria. Hemos estudiado ya el translocador de ADP-ATP (eccién 18-4C). La exportacién de oxalacetato y de acetil-CoA de la mitocondria se discuten, respectiva- mente, en las Secciones 21-1A y 23-4D. En el resto de esta seccién, examinamos los sistemas de transporte mitocondrial del P, y del Ca** y los sistemas de lanza- dera del NADH. Transporte de P, El ATP se genera a partir de ADP + P, en la mitocondria, pero se utiliza en el citosol. El P, produ- cido regresa a la mitocondria a través de un simporte electroneutro P,-H’, que es impulsado por el ApH. El gradiente de potencial electroquimico, generado me- diante las bombas de proton del transporte electroni- co impulsadas por procesos redox (Seccién 20-3B), es por tanto el responsable de mantener las concentra- ciones mitocondriales de ADP y de P, elevadas, ade- mas de proporcionar la energia libre para la sintesis de ATP. Transporte de Ca* Puesto que el Ca*, al igual que el AMPe, funciona como segundo mensajero (Seccidn 18-3B), su concen- tracién citosélica debe controlarse con precisin. La mitocondria, el reticulo endoplasmatico y los espacios extracelulares acttian como depésitos de almacena- miento de Ca’. Ya estudiamos las Ca?*-ATPasas de la Capitulo 20. Transporte electronico y fosforilacion oxidativa S71 membrana plasmatica y del reticulo endoplasmatico en la Seccién 18-3B. Aqui, consideramos los sistemas de transporte mitocondrial de Ca® Los sistemas de la membrana mitocondrial interna median separadamente la entrada y la salida de Ca** (Fig. 20-4). La entrada de Ca** la impulsa el potencial de membrana de la membrana mitocondrial interna (negativo en el interior), que atrae los iones cargados positivamente. La velocidad de entrada varia con la [Ca*] externa porque la Ky del transporte de Ca’ para este sistema es mayor que la concentracion de Ca® citosblica. La salida de Ca** es impulsada inde- pendientemente por el gradiente de H", generado por el transporte electrénico a través de la membrana mitocondrial interna 0, en mitocondrias de corazén, por el gradiente de Na’. El Ca* sale s6lo de la matriz debido a intercambio con H’ (0 Na*), de modo que este sistema es un antiporte. Este proceso de inter- cambio opera normalmente a su maxima velocidad. Las mitocondrias por tanto actian como un “tampén” para el Ca* citosélico (Fig. 20-5): si la (Ca**] citosblica aumenta, la velocidad de entrada del Ca** en la mito- condria aumenta, mientras que la de la salida de Ca** permanece constante, haciendo que la {Ca**] mitocon- drial aumente, mientras que la [Ca*] citosdlica dismi- nuya a su nivel original. Por el contrario, una dismi- nuci6n en la [Ca*'] citosdlica reduce su velocidad de entrada, causando una salida neta de (Ca®] y un aumento de la [Ca**] citosélica que vuelve a su nivel original. Ruta de saida| pe \ Punto de equiibrio Actividad de la ruta de incorporacion 0 salida (nmol Ca + min! mg) 10 CConcentracén extramitocondrial de Ca? * (HM) 05 20 Figura 20-5 Regulacion de la [Ca*] citosdlica. La ruta de salida opera a velocidad constante independiente de la [Ca®], mientras {ue la actividad de la ruta de entrada varia con la [Ca**} En el punto de equilibro, las actividades de las dos rutas ‘son iguales y no hay flujo neto de Ca". Un aumento en la [Ca] citosdlica da lugar a una entrada neta, mientras que tuna disminuci6n en la [Ca**] citosdlica da lugar a una Salida neta. Ambos efectos conducen al restablecimiento de la [Ca citosdlica. [Seguin Nicholls, D., Trends Biochem. Sci. 6, 37 (1981).]mh, &: a samt Ee S TS nod wor Nengeon 7 00 oerotstto, Los cones ol NAOH ‘Scareneo moos ens pases (gentoo {emo os hrs @) Ouaactn stolen ge NAOH Dor ‘SGnioxtsonon loft ctstculs pore Sesesoes| etronean Suc coving mare FADN,.(@) Reoudacon del FADHa con el paso ae ie ‘heeds in nora Ge tanepor seni an sistemas de lanzaera stoplasmticon ransportan” NADH a traves dela membrana saitcondeal interna Aunque la mayor pate del NADH generado porta exidacbn de In cna se forma en fe mati io Sondra save dl clo de gost gue se genera por sluts se forma ene ina A pra todo afa membrana mitecond tema ts an Protcina de wanoporte de NADH. Del NADH clad. {aumento ectroneseHrenpoian hcl ne= rior dea mitcondria mediante ao de os aro ine Mos sistemas “onsaders” Em la lanzadera del Biceofotato (Fig 20-6) el misculo que permite Suelo de os insects (ltl con la esayor potenca de sllds sosenda que ve conoce ~can la misma acon ene poten y peso que el totor den Pequeto automOvly Ia 3-sfogcerol deshidrogena: {tala la oidain del NADH chs for a hcerl relate se taneicen ala avoprteina fleshidrogenasa prs formar FADH,. Este enim, je esa stuado en la superfice extetioe dela mem: Brana mtocondral interna, proporcona elcrones 3 In adena de anspor eectanice de modo mise 3 1a socenato dshidrogeasa (Sees 20-2C) Lala aden de lcersosfto da lugar por tanto ae sintesis {te 247s or cada NADH tioplsstice esndada 1a lanzadera del malato-aspartato (Fig, 20-7) de os mamifros es mis comple, aunque mis eae tenergetcamente que la lansadera del giceroosfat, ETNAD: mitocondil es redcido por el NADH st folio a aves de Ta reduc intermedia subst fulene regencracion del snaacstato. Este proeso lene lar en dos fases de tes reocclones cada una. Fase A (vansport de electzones hacia el interior dela rat) 1. ELNADHt se roxida mediante el oxalacetat cto siico a través dela acs de le alto deshio fenasa tose, 2 taneporadormalato-@ctgharto anaporta tl malato forma en ls Resen Tal interior dea ‘rai moon a cambio de «stops 2 En la mattia miocondial, se regenera NADH 3 port JoINAD? a raves de anaconda otlscete, medante in alto deshuropenana intocondal (Seon 1938) Fase B rogeneracin del onlacetato stolen: 44 Una tansaminasa (Secon 24-14) coavierte el ualacetato mitocondal a asparato con la cons fuiente conversion de glutamate ao-etogluarate 5 Blaspartate se transporta desde la mate al tose! mediante el Wansportador de glatamato-agparta- {a cambio de glutamato stosolic. 6 EL aspanato citostlio se conviert en oxalacetato por accom de una tansaminta unto con la con. esion de ocetoglutarato a glamato, Los elecuones del NADH atosslico son por tanto ‘eansferdon st NADH mitocondal, que es objeto de Teoxdacon a avis dea cadena de tansporte eae leonio. La ltaadees de malato-aspatto inde es AIDS por cada NADH coin nd mis a fas tea del geerofsaa, 2. TRANSPORTE ELECTRONICO el proceso de ranapat electric nner ibe den transerncndeelectranes del NADH y del FADE, 11 Oy a trots de centr redo unos proteinase Scopada la sites de ATP. Emperamos nett ‘tdlo.de este proceso cansiderand ws trmodins ‘mica, Eeaminamos luego Ta ruta de los eectrones tras de Tos centos redox del items y dicts Tos experiments empleados para stablecer ext 42: Finalmente, estamos lor caso compe oe ‘Somprenden Ia cadena de tanepore lectin, En Ta'prouma secon dicuimos como se aopla al sinfesis de ATP Ta energla le lerada mediante el proceso de tansporte eletnio,Capitulo 20. Transporte electronico y fosforilacion oxidativa 73 NAD* é 2 Malato deshidrogenasa 4 feng, MOMMA cians 3 Mato destogeasa t+ NADH oor he » NADH +H cca eli) GD kad eae ‘¢00- R Q aa Aah Se O ii i ce are! Bee ne iin e007) 0) 007 Gh 00 % Q 00- goo Q G00" ¢ 5 My Aspartate wooele DB Be en amnotransterasa it & QO Hl ea war Swine . coor) Q bi a Nae aon ca D 8 test Mentrae Mate recon re Figura 20-7, anzadera de mal 0, Los electrones del NADH citosdlico se transportan al NADH mitocondral (indicados en rojo como iones hidruro) fen los Pasos 1 a 3. Los Pasos 4 a6 sirven para regenerar después el oxalacetato citosédlico. A, Termodinamica del transporte electrénico Podemos estimar la eficacia termodinamica del transporte electronico a través del conocimiento de los potenciales de reduccién estandar. Como hemos visto en nuestras consideraciones termodindmicas de las reacciones de oxidacién-reduccién (Seccién 15-5), la afinidad electronica de un sustrato oxidado aumen- ta cof su potencial de reduccién estandar, 2“ [volta- je generado por la reaccién de la semipila en condi- ciones bioquimicas estindar (1M de reactivos y pro- ductos con [H*] definida como 1 a pH 7) relativo al electrodo estandar de hidrogeno; la Tabla 15-4 detalla los potenciales de reduccién estandar de varias semi- rreacciones de interés bioquimico}. La diferencia de potencial de reduccién estandar, A, para una reac- cién redox compuesta por un determinado par de semirreacciones, se expresa por lo tanto: F llator deo La oxidacién del NADH es una reaccién muy exergonica Las semirreacciones para la oxidacién del NADH por el O, son (Tabla 15-4): NAD* + H* + 2e- == NADH y B= —0,315 V 40, +2H*+2e°==H,O #7 = 0,815 V Puesto que la semirreaccién O,/H,O tiene un poten- cial de reduccion estandar mayor y por lo tanto una superior afinidad electronica, la semirreaccién del NADH se invierte, de modo que el NADH es el dador de electrones en este acoplamiento y el O, el aceptor de electrones. La reaccién global es: 40, + NADH + Ht == H,0 + NAD* de modo que AS" = 0,815 — (0,315) = 1,130 V574 Seccién 20-2. Transporte electrénico El cambio de energia libre estandar para la reaccion puede pues calcularse a partir de la Ec. (15.7: ap donde # la constante de Faraday, es 96 494 C - mol~! de electrones y n es el nimero de electrones transferi- do por mol de reactivos. Asi, para la oxidacién del NADH: —nF A" fmol es X13. AG’ 96,494 mol Teactive mol e~ = 218 KJ - mol ya que 1 V = 1J--C-, En otras palabras, la oxidacion de 1 mol de NADH por el O, (la transferencia de 2 ¢-) en condiciones bioquimicas estandar esta asociada a la liberacion de 218 kj de energia libre. El transporte electrénico es termodinamicamente eficaz La energia libre estandar necesaria para sintetizar 1 mol de ATP a partir de ADP + P, es 30,5 kJ - mol", La energia libre estandar de oxidacion del NADH por O,, si se acopla a la sintesis de ATP, es por lo tanto suficiente para impulsar la formacién de varios moles de ATP. Este acoplamiento, como veremos, se alcan- za mediante una cadena de transporte electrénico en la cual los electrones pasan a través de tres complejos proteicos, que contienen centros redox con afinidad electronica progresivamente mayor (potenciales de reduccion estdndar crecientes), en lugar de pasarlos directamente al O;. Ello permite fraccionar el elevado cambio de energia libre total en tres pequerios paguetes, cada uno de los cuales se acopla a Ia sintesis de ATP en un proceso llamado fosforilacion oxidativa. La oxida- cién de un NADH da lugar por lo tanto a Ia sintesis de tres ATPs, (La oxidacién de FADH,, cuya entrada en la cadena de transporte electrOnico la regula un cuarto complejo proteico, se acopla de modo similar a la sintesis de dos ATPs.) La eficacia termodinamica de la fosforilacion oxidativa es por tanto 3 x 30,5 kJ - mol"? x 100/218 kJ- mol! = 42 % en las condiciones bio- quimicas estandar. Sin embargo, en condiciones fisi ogicas en mitocondrias activas (donde las concentra- ciones de reactive y producto, asi como el pH, se desvian de las condiciones estindar), esta eficacia termodinamica se cree que es ~ 70 %. En compara- cién, la eficacia energética de un motor de automévil tipico es < 30 %. B. La secuencia del transporte electrénico La energia libre necesaria para generar ATP se extrae de la oxidacién del NADH y del FADH, mediante la cadena de transporte electronico, una sucesiOn de cuatro complejos proteicos a través de los cuales pasan los electrones desde potenciales estandar de reduccién bajos a elevados (Fig. 20-8). Los electrones se transportan desde los Complejos I y Il al Complejo III mediante el coenzima Q (CoQ o ubiquinona; denominada asi debido a su ubicuidad en los organismos que respi- ran), y desde el Complejo IIT al Complejo IV median- te la proteina periférica de membrana citocromo c (Gecciones 6-3B y 8-3A). El Complejo I cataliza la oxidacién del NADH me- diante el CoQ: NADH + CoQ (oxidado) —> NAD* + CoQ (reducido) AE" = 0,360 VAG" = ~69,5 kJ - mol“? El Complejo III cataliza Ia oxidaci6n del CoQ (reduci- do) mediante citocromo c. CoQ (reducido) + citocromo c (oxidado) + CoQ (oxidado) + citocromo c (reducido) = 0,190 VAG’ = -36,7 kj - mol EI Complejo IV ca.aliza Ia oxidacién del citocromo (reducido) mediante el O, el aceptor final de electrones del proceso de transporte electrénico. ag’ Citocromo ¢ (reducido) + +O, -» citocromo ¢ (oxidado) + H,O Ag’ = 0,580 VAG’ = -112 kJ mol"? Los cambios en Jos potenciales estandar de reduccién de un par electronico, mientras atraviesa sucesiva- mente los Complejos I, Ill, y IV equivalen, en cada paso, a suficiente energia libre para propulsar la sinte- sis de una molécula de ATP. El Complejo IT cataliza la oxidacién del FADH, me- diante CoQ: FADH, + CoQ (oxidado) —> FAD + CoQ (reducido) AE =0,015V AG =—2,9 kJ - mol! Esta reaccién redox no libera suficiente energia libre para sintetizar ATP; funciona s6lo para introducir los electrones del FADH, en la cadena de transporte electré- nico. EI funcionamiento de la cadena de transporte electrénico se ha elucidado a través del uso de inhibidores Nuestra comprensi6n de la secuencia de sucesos en el transporte electrénico se basa en su mayor parte en el uso de inhibidores especificos. Esta secuencia se ha corroborado con las medidas de potenciales estandar de reduccién de los componentes redox de cada uno de los complejos, asf como determinando la estequio- metria del transporte electronico y la sintesis acoplada de ATP, La velocidad con la que una suspension de mito- condrias consume O, es una medida indicativa del funcionamiento de la cadena de transporte electroni- co. Es conveniente medirla con un electrodo de oxi- geno (Fig. 20-9). Los compuestos que inhiben el transporte electronico, a juzgar por sus efectos sobre la desaparicion de O, en dichos sistemas experimen-Covi 20. Traore lection endo 575 gue 208 Cena ranspote eer ‘toconaa Se ca spores SP ae eects a ws ‘She sro ite prt svete * Sauciesacns exe am tee a tales, han constiuido sondas experiments ines tmabies para trazarla ruta de los electrones a eaves de Ie'cadena de transporte electrnicoy determina los puntos de entrada de los elecrones procedents de fo) ens mpneco (Beau Whey smn llerentossustatos. Ente las mas des de ests sus- tancias, se encuensan la rotenona (una foxna de ‘organ vegetal usa por ls indiosamazonicos para fevenenar pecesy que tambien se usa come ine acre rons scenes” ca semen ote fle hoe out entre Screspenderes cart en fs) co nner Sefer sa acing! wit [Segin Nena, 6 ‘Bloonergencs 0, Academic Press 188))576 Seccién 20-2. Transporte electrénico da), el amital (un barbitarico), la antimicina A (un antibitico) y el cianuro. Rotenona ° (CHly—CHiy—CH(CHy)2 aN” “AcH,—ctis 0 it Amitat Cianaro NH. ine :—CHy~CH(CH) 2 NH—CHO 0 ‘Cline Antimicina A El siguiente experimento ilustra el uso de estos inhibi- dores: . Una solucién tamponada que contiene un exceso de ADP y de P, se equilibra en el recipiente de reac- cién de un electrodo de oxigeno. Se afiaden entonces {os reactivos en la camara y se mide el consumo de O (Fig. 20-10): 1. Se afaden mitocondrias y B-hidroxibutirato den- tro de la camara. Las mitocondrias median la oxi- dacién, acoplada a NAD*, del B-hidroxibutirato (Seccién 23-3). on CHC —Coy plidroxibatirato NAD'~) pg iidroxibutirato NADH» Hit-<-] deshldrogenase g orb ‘Acetoacetato ‘A medida que el NADH resultante se oxida a través de la cadena de transporte electronico, con O, como aceptor electrénico final, la concentracion de O, en la mezcla de reaccién disminuye. 2, La adicion de rotenona o amital detiene completa- mente la oxidacién del B-hidroxibutirato, 3. La adicién de succinato, que experimenta una oxi- dacién acoplada a FAD, hace que continiie la dis- minucién de la [O,]. Los electrones del FADH; son capaces por lo tanto de reducir al O, en presencia de rotenona; es decir, los electrones del FADH,; en- tran en la cadena de transporte electrénico después del paso bloqueado por la rotenona, 4, La adicion de antimicina A inhibe el transporte electrénico a partir del FADH,. 5. Aunque el NADH y el FADH, son dos dadores electrénicos fisiolégicos de la cadena de transporte electronico, pueden utilizarse también otros agen- tes reductores no fisiolégicos para investigar el flujo de los electrones. La tetrametil-p-fenilen- diamina (TMPD) es un transportador redox redu- cible por ascorbato que transfiere electrones direc- tamente al citocromo HAC oH, HO—CHy \ / 10 “NI NT + HO—C: ‘O ? \ ( . )= HO OH ‘Tetrametil-p-fenilendiamina Acldo asesrbico (CIMPD), forma oxidada Hyg cH, —CHy se ji HO—CHy 4 : NHt + HOC: Z \ pry ° HA cH H co SO TIMPD, forma reducida _Acido deshidroaseérbico La adicion de TMPD y ascorbato a la mezcla de reaccién inhibida por antimicina A da lugar a la reanudacion del consumo de oxigeno; evidente- mente, hay un tercer punto de entrada de los electro- nes en Ia cadena de transporte electrOnico. 6. La adicion de CN” inhibe completamente la oxida- jon de los tres dadores de electrones, indicando que bloquea la cadena de transporte electronico después del tercer punto de entrada de los electro- nes. Experimentos como éstos establecieron el orden del flujo de los electrones a través de los complejos de la cadena de transporte electronico y 1as posiciones blo- queadas por varios inhibidores del transporte electr6- nico (Fig. 20-8). Este orden se confirm6 y se extendié mediante observaciones de que los potenciales estan-dar de reduccién de los transportadores redox, que forman los complejos de la cadena de transporte elec- trénico, estan muy cerca de los potenciales estandar de reduccién de sus sustratos dadores de electrones (Tabla 20-1). Los tres saltos en los potenciales de reduc- cién entre NADH, CoQ, citocromo c y O, son cada uno de suficiente magnitud como para impulsar Ia sintesis de ATP. Ademés, estos saltos de potencial redox corres- ponden a los puntos de inhibicién de rotenona (0 amital), antimicina.A y CN". La fosforilacion y 1a oxidacién estan estrechamente acopladas Los estudios termodinémicos anteriores sugieren que la oxidacién de NADH, FADH, y ascorbato me- diante O, esté asociada a la sintesis de tres, dos y un ATPs, respectivamente. Esta estequiometria, Ila- mada relacién P/O, se ha confirmado experimental mente a través de medidas de la incorporacion de O; en mitocondrias en reposo y activas. En un experi- mento tipico, una suspension mitocondrial (aislada por centrifugacién diferencial después de romper cé- lulas; Seccion 5-1B) que contenia un exceso de P,, pero no de ADP, se incubé en la camara de reaccién de un electrodo de oxigeno. La oridacién y Ia fosforila- cién estén fuertemente acopladas en mitocondrias fun- cionalmente intactas, de modo que el transporte electré- nico puede ocurrir s6lo si el ADP esta siendo fosforilado (eccién 20-3). Ademés, el metabolismo mitocondrial estd regulado tan fuertemente que incluso la aparien- cia de las mitocondrias, las que respiran activamente y las que estén en reposo, es completamente distinta (Fig. 20-11), Puesto que el ADP no estaba presente en. la mezcla de reaccién, las mitocondrias estaban en reposo y la velocidad de consumo de O, era minima (Fig. 20-12, Region 1). El ’sistema se trat6 entonces como sigue: (@ Se afadieron 90 umol de ADP y un exceso de B-hidroxibutirato (un sustrato acoplado a NAD"). Las mitocondrias entran en el estado activo y la velocidad de consumo de oxigeno aumenta (Fig. 20-12, Region 2) y mantiene este nivel elevado hasta que todo el ADP se fosforila. Las mitocon- drias vuelven luego al estado de reposo (Fig. 20- 12, RegiGn 3). La fosforilacin de 90 pmol de ADP en estas condiciones consume 15 pmol de O,. Puesto que la oxidacién del NADH mediante O, consume el doble de moles de NADH que de O,, la relacion P/O para la reoxidacion de NADH en. la Region 2 es de 90 pmol de ADP/(2 x 15 umol de O;) = 3; es decir, se fosforilan 3 moles de ADP por mol de NADH oxidado. (b) Se continué el experimento inhibiendo la transfe- rencia de electrones del NADH mediante roteno- na y afladiendo 90 mol adicionales de ADP (Fig. 20-12, Regién 4), al mismo tiempo que un exceso de succinato, sustrato acoplado a FAD. El consu- mo de oxigeno continué de nuevo hasta que todo el ADP se fosforil6, y el sistema volvid de nuevo Capitulo 20. Transporte electrénico y fosforilacién oxidativa 57 Tabla 20-1 Potenciales estandar de reduccién de los componentes de la cadena de transporte electronico en mitocondrias en reposo Componente enw) NADH 0,315 ‘Complejo I (NADH-CoQ reductasa; 850 kD, 26 subunidades): FMN 2 (Fe-S)N-la 0,380 (Fe-S)N-1b 0,250 (Fe-S)N-2b 0,030 (Fe-SN34 0,245 (Fe-S)N-5.6 -0,270 Succinato 0,030 Complejo Il (succinato-CoQ reductasa; 127 KD, 5 subunidades): FAD 0,040 (Fe-S)S-1 0,030 (Fe-S)S-2 0,245 (Fe-8)S-3 0,060 Citocromo bgp 0,080 Coenzima Q 0,085 Complejo III (CoQ-citocromo ¢ reductasa; 280 kD, 10 subunidades): Citocromo by 0.030 Citocromo by -0,030 (Fe-S) 0,280 Citocromo ¢ 0,215 Citocromo ¢ 0,235 ‘Complejo IV (citocromo ¢ oxidasa; 160-170 kD, 7-8 subunidades): Citocromo a 0,210 Cay 0,245 Cus 0,340 Citocromo a, 0,385 oO, 0815 Fuente: Wilson, DF, Erecifska, M., y Dutton P.L,, Antu Reo. Biophys. Bioeng. 3, 205 y 208 (1974) y Wilson, D.E, en Bitar, EE., ‘Membrane Structure and Function, Vol. 1, p. 160, Wiley (1980). al estado de reposo (Fig. 20-12, Region 5). El célculo de la relacién P/O para la oxidacion det FADH, fue igual a 2; es decir, se fosforilan 2 moles de ADP por mol de FADH, oxidado. (©) Asi mismo, la oxidacién del ascorbato/TMPD pro- dujo una relacion P/O de 1 (Fig. 20-12; Regiones 6 y?.578 Seccién 20-2. Transporte electrénico (a) Figura 20-11 Microgratias electrénicas de mitocondrias de higado de raton en (a) estado de respiracion activa y (0) estado de reposo. Las crestas en las mitocondrias que respiran activamente estan mucho mas condensadas que las de las ‘mitocondrias que estan en reposo. [Por cortesia de Charles Hackenbrock, University of North Carolina Medical School,] Estas conclusiones estén de acuerdo con los estudios de inhibidores, indicando que hay tres puntos de entrada para los electrones en la cadena de transporte electrénico y las medidas de potencial estandar de reduccién muestran tres saltos de potencial, cada uno suficiente para proporcionar la energia libre necesaria para la sintesis de ATP (Fig. 20-8). En la Seccion 20-3, se discute como se acopla la energia libre del trans- porte electronico a la sintesis de ATP, Examinamos primero las estructuras de los cuatro complejos respi- ratorios, para entender cémo estan relacionados con la funcién de la cadena de transporte electronico, Téngase presente, sin embargo, que este campo esta bajo intensa investigacion y que buena parte de la informacion que se precisa para la comprensién de estas relaciones atin no se ha descubierto. C. Componentes de Ia cadena del transporte electrénico Muchas de las protefnas embebidas en la membra- ‘na mitocondrial interna estan organizadas én los cua- tro complejos respiratorios de la cadena de transporte electrénico. Cada complejo consiste en varios compo- nentes proteicos que estin asociados con diferentes grupos prostéticos, con actividad redox, y con poten- ciales de reduccion sucesivamente crecientes (Tabla 20-1), Estos complejos pueden moverse lateralmente (e) ADP + PHidroxbtiato wt 40,(°/0=3) 0). ADP + Succinate + rotenone any ‘4 ]40,(0/0=2) (©) ADP + TMPO/Ascorbato [0,) + antimicina A ~ }A0,(P/0 = 4) a > Tiempo Figura 20-12 Estequiometria de la oxidacién y fosforilacién acopladas (la relacion P/O) con diferentes dadores de electrones. Las mitocondrias se incuban en exceso de tampén fosfato en una cémara de la muestra de un electrodo de oxigeno. (a) Se afaden 90 mol de ADP y un exceso de Brhidroxibutirato. La respiracién continua hasta que todo el ADP se fosforila. El AO, de la Region 2 es de 15 umol, Correspondiendo a 30 jimol de NADH oxidado; P/O = 90/30 = 3. (b) Se afiaden 90 mol de ADP y un exceso de ssuccinato, junto con rotenona, para inhibir la transterencia electronica a partir del NADH. El AO, de la Region 4 es de 22,5 mol, correspondiendo a 45 mol de FADH, oxidado; P/O = 90/45 = 2. (c) Se afiaden 90 umol de ADP y un exceso de TMPD/ascorbato, junto con antimicina A, para inhibir la transferencia electronica a partir de FADH,. El ‘AO, de la Region 6 es de 45 mol, correspondiendo a 90 jumol de ascorbato oxidado; P/O = 90/90 = 1.eno dea membrana moon itera: pat ‘Sn fomar ninguna enna ese de orden Spe for, Ademas, no est presents en proporciones ‘nolo Ahora exantoatemos Ss tras y iSbageoes que maalerenclecrones ent lle Sut ‘Nackner so reumen ena hig 2013, 1. Complejo I (VADH-Coenzima Q Reductass) Eteamplee | palo eectronee de NADH elo CoQ. Este componente protic, probablemente ef mayor ela membrana mitocondil interna (850 KD) om fine ‘ena molécula de. flavinamononucectido {GMI un grupo prosteico con actividad redox que Sire Sev FAD aloe a suse dl gue AMP) y seis‘ site aprapaciones de hlerro-asu ‘ge parcpan en el tarsporte elec (Tabla 20-1), ‘Las agrupaciones de hiero-azute tienen scividad redox Se conocen tes tpos de agrupacioes de hiero- nate como grupos postcode proteimas de hle= ‘Mo-anutre (ferroproteinas sin grupo hemo om west aptle 20, Traepre lice» fsoraconexdaton S72 1s dos Spor més comune, designadosagrupa nes de [Fe25] y de [aect6} conan de pu ter da ones Ra slay estan condnade 3 ‘Sto grupos slid de Cys prteies, Un met do ds Henican de tas agupcines we echo de qe sue tones slr st Tales con cdo eiberanfomo HS un pH cecano a Ls agrpas ‘lon de [fe gue we ha ballad slo en beter, ont em um Gc stone Fe lgado 2 cat fenton de Cyn, Obsevese gu, en late tipo de Srapaconey, lon somos de Feetan cada tno de ‘Towesordinador por cuauo stones de 3, que ein Slspueton miso menos ftcatdacanete reser ‘lle. (Une agrapaion de [3Fea9]. gue we hae ‘ontado slo en tna expe bait, se parece 5 na grpucn de [eT gu le aa un tm e'Fe) Los stad ondadoe y ecto eta lt Sgrpacones de Nese dfieren enue wide de ge oral, fdepndenteent el nme de Hors {te Fe! lox hid «i, en cada apropacsn, oe “tomes de Fe forman stem comedy pusden por tanto toner estado de oxscon tte on lores ponbles dey 3 de lon somos de Fe por cpanel, Tar potinas de heo-azfe pueden ambién en contae en las cadenat de trnapote leona forint de plantas ybacense Cac 223) ‘Nerds, sce que as cadens de wanoport ect ‘co Tetras son la pecs coos de [ne cadens de tanaprte elctonico oatvs (See ‘Sin 1-40) La extotrn de aye de ena prota eho arate a feredoxina, que cotene dos Stropacones de [se-45| reves como se unen eat Pein poppies 2-10) ‘Las coenzimas del complejo 1 Te EMI rel CoQ, lon coenzimas del complejo 1 ‘pueden ambos adopar tes estados de oxidacion (Fg 20-15). A pesar de que el NADH puede partcpar Selo en la wansferens de dos eletroney tanto It EMN como el CoQ son eapaces de acepir 9 dat, 2 Sa uno 0 dos eletones, debido a que sus formas Semiuinona son tables, AI contra, Ios cre tos del Complejo It (ver mas adelante), al cual pase Sus electrones el CoQ reduido son capes slo dela redacein de un elect. La FAN ye CoO propre tan por fo tate at conduct elecrvico entre el dador {ees cletroes NADH los aceptres de wn eect, Ta cola hidrofoblea del CoQ hace que sea soluble ‘en Ta beapa lipdies de Is membrana mitocondial interna. En fos mares, esta cla contene 10 une dade lsoprenoies C, por lo tant, el coenzina Q ‘se denomina Qy En otter ergansmos, el CoQ puede tener s6io 6 (Q3 u 8 (Q)unidades isoprencies, 22 Complejo I (sucinato-coenzima Q reducasa) Er comploj Il que conten elenine dimerco del el del did cvcosucinato deshidragense (ein 19-30) y otras tes subundades hidrobcus pepe580 Seccién 20-2. Transporte electrénico Complejo I Espacio intermembrane Membrana mitocondrial interna Matee Figura 20-13 Diagrama de la cadena de transporte electrénico, indicando la ruta de transferencia electrénica (negro) y e! bombeo de protones (rojo). Los electrones se transfieren entre los pasa los electrones del succinato al CoQ. Hace esto con la participacién de un FAD unido covalentemente, una agrupacién de [4Fe-4S], dos agrupaciones de [2Fe-25}, y un citocromo bsg (Tabla 20-1). Discutimos las estructuras de los citocromos, en conexién con la del Complejo Ill, mas adelante. [Una de las agrupa- ciones de hierro-azufre del Complejo II tiene un po- tencial estdndar de reduccion que es demasiado nega- tivo (-0,245 V) para aceptar electrones del succinato; su funcion es desconocida.} El potencial estindar rédox para la transferencia electronica del succinato al CoQ (Fig. 20-8) es insufi- ciente para proporcionar la energia libre necesaria para impulsar la sintesis de ATP. El complejo es, no obstante, importante porque permite a estos electro- nes con potencial relativamente elevado que entren en la cadena de transporte electronico. 3. Complejo III (coenzima Q-citocromo c reductasa) El complejo III pasa los electrones del CoQ reducido al citocromo c. Contiene dos citocromos-b, un citocro- ‘mo ¢, y una agrupacion de [2Fe-25] (Tabla 20-1). Citocrom. electrénico Los citocromos, cuya funcién fue elucidada en 1925 por David Keilin, son proteinas con actividad redox que se presentan en todos los organismos excepto un reducido grupo de anaerobios obligados. Estas protei- nas contienen grupos hemo, que alternan reversible- mente entre sus estados de oxidacién Fe(II) y Fe(III) durante el transporte electronico. Los grupos hemo de los citocromos reducidos [Fe(I))] tienen espectros destacables de absorcion visi- ble, que constan de tres picos: las bandas a, B y y (Goret) (Fig. 20-162). La longitud de onda del pico «, que varia deforma caracteristica con la especie parti- cular de citocromo reducido (est ausente en los cito- cromos oxidados), es util para diferenciar los distintos citocromos. Igualmente, el espectro de las membranas hemoproteinas de transporte Complejo IIL H,0 Compiejos | y Ill mediante el CoQ, soldble en memoranass, y entre los Complejos Ill y IV mediante la proteina periférica de membrana citocromo ¢. El Complejo Il (no mostrado) transfiere electrones del succinato a la CoQ. 402 + 2H mitocondriales (Fig. 20-16b) indica que contienen tres especies de citocromos, los citocromos a, by En cada grupo de citocromos, pueden caracterizarse diferentes entomos del grupo hemo a partir de ligeras diferencias en las longitudes de onda del pico a. Por ejemplo, el Complejo Ill tiene dos hemos de citocro- mos del tipo b: el que absorbe maximo a 562 nm se denomina by 0 bsg, mientras que el que absor- be con un maximo a 566 nm se denomina by-0 by. (El segundo tipo de nomenclatura es una adopcién re- Ferredoxina Figura 20-14 Estructura de la ferredoxina de Peptococcus aerogenes, tuna proteina de 54 restos que contiene dos agrupaciones de [4Fe-45] (rojo). [Segun un dibujo procedente de Jane Richardson, Duke University. Estructura de rayos-X determinada por Elinor Adman, Larry Sieker y Lyle Jensen.)@ m rr H,C Al 7 3 ee R i rrr 3 NOP N ‘H H, H, 1 FMNH - (forma radical o semiquinona) fm “OCLY sf 0 FMNH, (forma redueida 0 hidroquinona) Figura 20-15 Capitulo 20. Transporte electronico y fosforilacién oxidativa 561 oe ; 100 5 em fn 00H tenmenmb a q Unidades soprenoides Coenzima Q (CoQ) 0 ubiquinona (forma oxidada 0 quinona) Jen oO HCO. Cis #00 R oH Coenzima QH + 0 ubisemiquinona (forma radical o se if on HCO. CHy HCO R on Coenzima QH; 0 ubi (forma redueida o hidroquinona) Estados de oxidacién de (a) FMN y (b) CoQ. Ambos coenzimas forman estados de radicales libres con semiquinonas estables. ciente que identifica un citocromo con la longitud de onda a la cual la absorcién de su banda a es maxima. Previamente, los citocromos se identificaban no des- criptivamente, con niimeros o letras.) El Complejo Il, ya se ha mencionado anteriormente, contiene el cito- cromo Bs Cada grupo de citocromos contiene un anillo porfi- rina sustituido de modo distinto (Fig. 20-172), coordi- nado con el atomo de hierro con actividad redox. Los citocromos del tipo b contienen protoporfirina IX, que también se encuentra en la hemoglobina (Seccion 9-1A). El grupo hemo de los citocromos del tipo ¢ difiere de ld protoporfirina IX en que sus grupos vinilo han aftadido sulfhidrilos de Cys a través de sus dobles enlaces para formar uniones tioéter con la proteina, El hemo a contiene una larga cola hidrofobi- ca de unidades isopreno unidas a la porfirina, asi como un grupo formilo en el lugar de un sustituyente metilo. Los ligandos axiales del hierro del hemo va- rian también con el tipo de citocromo. En los citocro- mos @ y b, ambos ligandos son restos de His, mientras que en el citocromo c, uno es de His y el otro de Met (Fig. 20-176). EI Complejo Ill se organiza asimétricamente en la membrana mitocondrial interna, como se desprende de varios estudios de marcaje quimico. Tanto el cito- cromo ¢, como la ferroproteina sin grupo hemo (lla- mada a menudo la proteina de hierro-azufre de Rieske, en honor de su descubridor, John Rieske) se localizan en la superficie externa de la membrana, mientras que el citocromo b es una proteina trans- membrana. El citocromo b es una proteina particular-ce a Hl i i u “ i af i Ca@) CHy+CH,—CH HOCH CH 2 2 HC: Ht CH cH, CH, CH, Gt, coo coo” Hemo a c= cH CHy l Hye. CH=CH, HAC CH Gia GH CH cH, coo” coo” Hemob (ferro-protoporfirina IX) i Hye —CH=CHy HC CH; Capitulo 20. Transporte electrénico y fosforilacién oxidativa 583 o 1 I HAC CH, om ux \ mn His: His Hemos a yb Met His Hemo ¢ Figura 20-17 (a) Estructuras quimicas y (b) las uniones axiales de los Grupos hemo contenidos en los citocromos a, By c. oxidasa. Evidentemente, ambas proteinas tienen sitios cargados negativamente que son complementarios al anillo de restos de Lys cargados positivamente del citocromo c (ver mas adelante). EI mecanismo de la transferencia de electrones en- tre proteinas y el papel de la proteina en este proceso son Areas de investigacién activa. Thomas Poulos y Joseph Kraut han propuesto un curioso modelo es- tructural para el proceso de transferencia electronica, basado en la estructura cristalina del citocromo c y de la citocromo c peroxidasa (CCP) de levadura. La CCP, una proteina que contiene hemo, cataliza la reduccién de hidroperoxidos organicos (ROOH) en tun ciclo de reaccién de tres pasos que da lugar a la oxidacién de dos moléculas de citocromo ¢: CCP + ROOH + 2H* —> CCP() + ROH + HO CPA) + cit ¢ (Fe**) —+ CPA) + cit ¢ (Fe) CCP(I) + cit ¢ (Fe**) — CCP + cit ¢ (Fe?) Aqui, la CCP(I) representa un estado oxidado de 2 & y la CCP(I}) representa un estado oxidado de 1 ¢~ de la CCP. Los modelos atémicos de la CCP y del citocromo ¢ de levadura (que se parece mucho al altamente ho- mélogo citocromo ¢ de atin; Seccién 8-3A) encajan tautuamente con una precision remarcable. Una ca- racteristica en favor de este complejo hipotético es que la CCP contiene un anillo de restos de Asp carga- dos negativamente que, como hemos hipotetizado anteriormente, esti en asociacién complementaria con el anillo de restos de Lys cargados positivamente los cuales rodean el borde expuesto del hemo del citocromo c. Resulta de especial interés mecanistico que los grupos hemo, cuya aproximacién mutua mas cercana es ~ 18 A (tan cerca como es posible sin que se produzcan cambios conformacionales importantes en las proteinas), son paralelos entre si, ademas deeeres a TERE armen mci nary een comme ieee qinas, La difcultad de dicho mecanimo para a {Bsforlcion oxidative, que ha obligado al final & bundonalo, es que a par dels inensos este os en mimerown Laborato durante muchos {hos no se han ienlfcad lo eactivos interme” ios esperados ites dl acoplamiento conformacional a hipotess del acoplamiento conformacional, ‘que formule Paul Boyer en 1968, propone gee el Transport electrnico hace que ls protelnas de [a tmembrana mitocondalintema den lugar 3 esta" ‘los conformacionaes"actvados” 9 “mas enerpe or Estar proteinas estun asocadas de algun ‘modo con Ia ATP sintass, puesto que su reljacion Ademsevo ala cntormacion desactivadaimpulsa a ints de ATP. AT ial que In hipteis de aco- plamiento qulmico, Ia hipotess del acoplamiento Eonformacional ha encontado poca contimacon ‘experimental Sin embargo, probablemente un po ‘into de acoplarlentoconformaconal es In plleado en lasintsis de ATP (Secion 2030). Hipotesis quimiosmotica Ls hipoesisquimiosmetica,propuesta en 1961 por Peer Michel general considerable con vei at como nmerosssinvestigaiones scunlmente parece ber el modelo mas coherene Con los datorexpermentales,Postla gue Ia eer- re del trator elecrnico coseea Por omen de H desde a mats tocondia a expats Intermemraa, de odo qu cream gradiente ee: trounce de Ha trot fe i membrana moon Ar inter El penal eleciroginico de et re. “let se aprovecha pas sittinar ATP (i. 20-2 ‘Mchas bservcones clave ae expan median te In hipotess quimioométice (a) La osforacon enidatvarequere una mem ‘bana milocondal nterm itat, Capit 20. Trnspre lectin 9 fforacon xitive 567 ‘Sseconave samt ol ronepone lense (eenas Ea yc ropeno svegonc potencies Go Ae ithas ras (©) La membrana mitocondrial itera es imper meable a iones como HY, OH, Key Cl aye Tre difusion descargar el radiete efecto suinico (© El transporte eleténico da gar a ranspore {de H hacia el exer de a mitoondei nae 1h, creando por To tanto un gradient let ‘quimico medibie através de fa membrana mi ‘Seconda itera (a) Los compseston que aumentan la permestil- dad dela membrana mitocondil interna a los dsipen el gradiente permiten. que el fanspare ‘econo (desde NADH ¥ la oxdacon de Ssccnato) contin per ibe a sitesi de ATP; es dei, “desacoplan el anspor elec trinico de a fosoractn oxdativa Por el con trai, aumentando la aides en ol exterior de [imenabrana milocendial intern, se estinula In tes de ATP, En el resto de esta secion examinamos los mec lama traves de los cuales el anspor electenico [puede dar lugares wanslocacion de potonesy com lin gradinteelectroquimico puede interacuar con Ia [AT sinata pars conduct la sntesis de ATP. [B, Generacién del gradiente de protones Longport electric, como veremas,provoot gue {os Complejo, ify IV ransporten protest de le membrana mtoondvial ntrae dese fa mal nt region de je HP] 9 poten elecrico nega. al ‘spate inteenbrana (que stem contacto co el les, ama region de eeoada [Hy poencal etree ost Py. 20-19 La enegia ibe secuestrada po [prions clectoguimicoresultate [que por anaogia A termine fuerza elecromoriz (fem), se denomina fuerza proton-motels Up impale la sitesi de at?588. Seccién 20-3. Fosforilacin oxidativa El bombeo de protones es un proceso endergénico El cambio de energia libre del transporte de un proton fuera de la mitocondria contra un gradiente electroquimico se expresa mediante la Ec. [18.3], que en términos de pH, es AG = 2,3RT [pH (dentro) — pH (fuera) + ZFAY [20.1] donde Z es la carga del proton (incluyendo el signo), Fes la constante de Faraday y AW es el potencial de membrana. La convencién de signos para AY es que cuando un ion se transporta de negativo a positivo, AY es positivo. Puesto que el pH (fuera) es menor que el pH (dentro), la exportacién de protones desde la matriz mitocondrial (contra el gradiente de protones) es un proceso endergénico. Ademés, el transporte de protones fuera de la matriz hace que la superficie interna de la membrana interna sea mas negatioa que su superfi- cie externa. El transporte hacia el exterior de un ion positivo esta por tanto asociado con un AY positivo y tun aumento en la energia libre (proceso enderg6nico), mientras que el transporte hacia el exterior de un ion, negativo produce el resultado opuesto. Es claro que siempre es necesario describir la polaridad de la membrana cuando se especifica un potencial de membrana. El potencial de membrana medido a través de la membrana interna de una mitocondria de higado, por ejemplo, es 0,168 V (que corresponde a un campo eléctrico de ~ 210 000 V - cm, a través de su espesor de ~ 80A). El pH de su matriz es 0,75 unidades mayor que el de su espacio intermembrana. EI AG para el transporte de proton fuera de esta ‘matriz mitocondrial es por lo tanto 21,5 kJ - mol, Para sintetizar un ATP se requiere el paso de dos a tres protones La energia libre fisiologica estimada de la sintesis de una molécula de ATP, alrededor de +40 a +50 (a) Buce redox KJ- mol", es demasiado grande para ser impulsada mediante el paso de un tnico proton de regreso al interior de la matriz mitocondrial; por lo menos se requieren dos protones. Este numero es dificil de medir de modo preciso, en parte porque los protones transportados tienden a salir de nuevo a través de la membrana mitocondrial. Las estimaciones varian des- de alrededor de dos a tres protones que cruzan por ATP sintetizado. Se han propuesto dos mecanismos para transporte de protones Tres de los cuatro complejos del transporte electr- nico, los Complejos 1, III y IV, participan en la trans ocacién de proton. Se han considerado dos mecani ‘mos que acoplarian la energia libre del transporte electrénico con el transporte activo de protones -el mecanismo del bucle redox y el mecanismo del bombeo de protones. 1. Mecanismo del bucle redox Este mecanismo, propuesto por Mitchell, requiere que los centros redox de la cadena respiratoria (FMN, CoQ, citocromos y agrupaciones de hierro-azufre) es- tén dispuestos de tal modo en la membrana que la reduccién supondria un centro redox que aceptase simultineamente ¢ y H* en la membrana desde el lado de la matriz. La reoxidaci6n de este centro redox mediante el siguiente centro de la cadena implicaria una liberacién de H’ en el lado citosdlico de la mem- brana, junto con la transferencia de electrones de nuevo al lado de la matriz (Fig: 20-23a). El flujo electronico desde un centro al siguiente rendiria por lo tanto una translocaci6n neta de H* y la creacién de un gradiente electroquimico (A y ApH). EI mecanismo del bucle redox requiere que el primer transportador redox contenga més atomos de hidrégeno en su estado reducido que en su estado oxidado, mientras (®) Mecanismo del buce redox Figura 20-23 rod Mecanismo det bucle redox.:(a}'Un solo bucle redox para la, translocacion de H’ ligada al transporte electronico. (8) El mecanismo del bucie redox propuesto para la translocacion de protones ligada al transporte electronico en la mitocondria. La FMN y el CoQ funcionan como transportadores de (H* +e"), mientras que las ‘agrupaciones de hierro-azutre y los citocromos funcionan ‘como transportadores puros de e~. Estos componentes. estan organizados de modo que el transporte electronico debe estar acompafiado de la translocacion de H°. Obsérvese que se incluye un misterioso transportador de (H® +e, X, para justificar un tercer centro de translocacion de H*.7 BE Tieo oe reeere menor Peeve cumrememe renee, imeraterere seen tc 1S Gte'medatte ot Compo [ono aaa deta mats de ieeaseas nieces Sema Seer ‘emgunon reac e cate can elace oss, esc manera sea i Stemdnote mace chor By cana ‘oneiglente absorcion ge Hi ae mati. Eco on su Sisaenniaeatar ret. See es ees TU, on Sega Bae aay gue ef segundo transport ex no tenga diferencia {nel contenido de ts de rien en ous extados redwood, Se camplen estos reqwerentos (ls cadena de tansporte electro? Agunos de {ts tanspotadores rene EMN y CoQ de hecho, ‘Sritenot mas Hoon de hdsigeno en ss extad ‘evo gue en mead esas y por lo tanto pueden calfcrse come Wansportadores de protones [Como tanspmadores de ectronen St ston con ‘ou eatsinenalenadoneapacaimente com tae Tonadores poor de siectrone (ctowomes yar ones de heo-arufe el presente mecirisme po die sstare thon lo reablad ig 30250) Ta feted principal que presenta ol mecanismo el bale redox Compras deicenda de anspor ores (+) auc pordsn alemarse con tanapor thdares putes de /Aunge evsten hasta 15 tans ores puns dee” (haba # procinae de Ne cuniie, Pciacomos 2 atomes de Cx). 00 se ‘Snacen dos tansponadsres (Hr 4 ¢) El hecho de Sc haya tres sion para laine de ATP auger ‘Sse de al menos tes cotton de taneprte de jotone: Ene problema se lust en la ig 0.255, Eniaque Xesun tansporador de (H+ ©} descono. Sue! Tn un intent de solcionar este problema, Michell tna dasafo una mane ena Sel coenzims apt 20 Tronpre elec 9 fron elon 589 oda parclpr dos veces en a anlocscion de Broome en ef Comps i (CoQ-storomo © radu Sey En ol denominads ello Q se propone qu el {CoG sf ana redcson de os paso ge inca It ‘Scmiquinna como un incrmedi esabie Bg 2028) ‘Ete dees scunca ene Compl i sera traayore de dos protoes por cea letran tranfeio {festeel Compl loco No obstante ela to punde opera en et Compo 1 (clocome and debigo » que dicho complejo 90 content ftansporadores G1" e?), aunque poeds bombear proones deed In mati lord darane el ane Pome secronica, 2, Mecanismo del bombeo de protones El mecanismo de bombeo de potones no requere gue los centro redox sean asimisma taneportadores de hidrogeno. En este modelo, Ia Wansferencla de ‘elecrones da lugar a cami conformaconales el com Deja La tonloacion de. proves iene lugar come resultado dela intucncia ieee cambios conormaco. alse el pK dels cadena laterals dele amin dos y en sv exposicin alternada hata a car ner y ‘exter de la membrana Fig 20-29. Hemon visto ya {que Ia conformacion puede inf en ol pk El efecto Soke en fa hemoglobins, por ejemplo, exe resultado de cambior conformacionales inucidor por Ia fia ‘on de Oy que induce cambios de pk en los grupos ‘Sdotbase’de la protina (Seen 9-26). $0 ditha proteinase localizara ena rembrana ys, adem de [Es mbls depo nbn contrac {evar el lado de la membrana en el cal se exponen Jas cadenaslatorles de los aminodcidos el estado feria el transporte de Hye stra sera una bomb oe protnes, ‘Una bomba de protones bien conocda esl potel- ra intnacen de ‘membrana bateriorrodopsina de Heaobacer halobium, Esta protena, que pose site ‘segments helloidaies que cuzan la membrana for ‘gure 20.25 Maca dea bomb oe potnes para ranean de protons guts svanspreeactonso en canoe ‘Sterac ceo amos one ago ea mat o0 ‘marr La race cage un eam corermacon {Sus dumnvye tos pr osu cadnas ina 7 lsHanne ny Tal pig (ey ahdCapitulo 20. Transporte electronico y fosforitacion oxidativa 591 Mitocondria Membcana Matez Membrana interna Figura 20-27 Micrografias electronicas y sus dibujos aciaratorios (abajo) de la membrana mitocondrial en distintos grados de diseccion: (a) Crestas de mitocondrias intactas que muestran los “pirulis” de F, proyectandose hacia el interior de la matriz. [Segin Parsons, D.F., Science 140, 985 (1963). Copyright © 1963 de American Association for the ‘Advancement of Science. Reproduccion autorizada.] aspectos de la fosforilacién oxidativa, este mecanismo no esta atin bien establecido y se esta investigando. La ATP sintasa translocadora de protones es una proteina transmembrana con miltiples subunidades La ATP sintasa translocadora de protones es la estructura mas compleja de la membrana mitocon- drial interna, Contiene dos subestructuras principales y varias subunidades diferentes (Tabla 20-2). Las mi- ‘crografias electronicas de las mitocondrias presentan estructuras en forma de piruli, que adornan como con clavos la superficie de la matriz de la membrana Particula ‘submitocondria Vesiculas tT membranosas Partculs de F Reconsttuein Prtcuas de Fy Lneas de rtura or sonicacén (b) Particulas submitocondriales que muestran los “pirulis” de F, proyectindose hacia el exterior. Las particulas ‘submitocondriales se preparan mediante sonicacion (rotura Por ultrasonidos) de las membranas mitocondriales internas. [Por cortesia de Efraim Racker, Cornell University.] (c) Particulas submitocondriales despues del tratamiento con urea. [Por cortesia de Efraim Racker, Cornell University.] mitocondrial interna (Fig. 20-272). Se ha observado eue entidades similares se alinean en la superficie interna de la membrana plasmatica bacteriana, La sonicacion de la membrana mitocondrial interna pro- duce vesiculas cerradas, particulas submitocondria- les, de las cuales se proyectan los “pirulis” (Fig. 20- 276) y que pueden realizar la sintesis de ATP. Efraim Racker descubrié que la ATP sintasa trans- locadora de protones de las particulas submitocon- driales comprende dos unidades funcionales, Fy y Fy. F, es una proteina transmembrana, insoluble en agua, compuesta por cuatro o cinco tipos de subunidades, que contiene un canal para la translocacién de proto~592. Seccién 20-3. Fosforitacion oxidativa o Superice de ia matin Supericie externa nes. F, es una proteina periférica de membrana, solu- ble en agua, compuesta por cinco tipos de subunida- des, que se disocia facilmente de F, por tratamiento con urea. Las particulas submitocondriales, a partir de Jas cuales se ha extraido F, por tratamiento con urea, no presentan los pirulis en las micrografias electroni- cas (Fig, 20-27c) 0 la capacidad de sintetizar ATP. No obstante, si se aftade de nuevo F, a estas particulas submitocondriales que contienen Fy, se recupera su capacidad para sintetizar ATP y las micrografias elec- tronicas muestran de nuevo los pirulis. Asi pues, [os pirulis son particulas F,. Las micrografias electronicas de las particulas FyF, reconstituidas muestran sus es- tructuras en forma de pesas, en las cuales F, y F, estan conectadas por un tallo de 50 A de longitud (Fig 20-28), Este tallo esta compuesto por dos proteinas, la proteina que confiere sensibilidad a oligomicina (OSCP) y el factor 6 de acoplamiento (F,) EI sitio catalitico de F, para la sintesis de ATP es- ta en la subunidad B de este multimero a,B,yée. Se requiere la subunidad 6 para la union de F, a Fy La oligomicina, un antibidtico producido por Strepto- H.C HyC HOCH; CHs Oligomicina B 1 F, 0A) 220 A + Figura 20-28 (a) Micrografia electronica de la ATP sintasa transiocadora de protones mitocondrial (FoF,-ATPasa) reconstituida, junto ‘con (b) un dibujo aclaratorio que indica las posiciones para las subunidades que la componer ia electronica, por cortesia de Peter Pedersen, ‘The Johns Hopkins University Schoo! of Medicine.) myces, inhibe la ATP sintasa por union a una subuni- dad de F, (no la OSCP), de modo que interfiere con el transporte de H” a través de F, La diciclohexilcarbodiimida (DCCD), pre) Diciclohexilearbodiimida @ecn) un reactivo de grupo carboxilo soluble en lipidos, inhibe tambien el transporte de protones a través de F,, reaccionando (analogamente al EDAC; Tabla 6-3) con un tinico resto de Glu en una de las subunidades de F) de mamiferos (Asp en E. coli). La reaccién con DCCD implica normalmente que se localice un grupo Acido carboxilico en un entomo lipidico; es decir, “enterrado” en la membrana. La F, de mamiferos contiene seis copias de esta proteina de union a DCCD (también conocida como proteolipido de unién a DCD), que se cree que se asocia como las duelas de un barril, formando el canal polar de trans- porte de H’ que contiene los restos de Glu enterrados, (Fig. 20-28), La ATP sintasa translocadora de protones esta impulsada por cambios conformacionales El mecanismo de sintesis del ATP mediante la ATP sintasa translocadora de protones puede dividirse conceptualmente en tres fases: 1. Translocacion de protones llevada a cabo por la F,.a Ens receet Saran e aacemaame eee Sone ames Ra ements ean Seah temas 2 Cats de formacion del fosfoanhirio snido al ATP, levada a cabo mediante a F, 5 Acoplamieno de Ia disipacion del gradiente de protones con la snteste Ge ATP, que require Ta Inversion de fy Fe ‘Los datos dsponiles apoyan un mecanismo pars Ja formacion de ATP propucsto por Boyer, que se parece ale hipotsis del acoplamento conformaco falde la fsfonlason oxdativa (Secon 20°38). No ‘bsant, lo cambios conformacionales ena ATP ‘Sntusa gue impute a formacion de ATP estén gene ‘radon pa ranslocaion de protons, masque por Trancteenca directs de eletones como se propuso ‘nla formulacon origina dela hipotests dl copia Imento conformaconal. Se propor que F ene Wes Subunidades cali gue inferscconan, cada una ‘run estado conformacinal diferente una que one ‘Sciimentesustats y producos (estado L dl ingles "Toes" ore que los une foertemente(esiado del ingles “aight olra que no los une en absluto (Grado abierto we O, del inglés “open. La reacion ‘Smpeende tres pasos (Fig. 20-29) 1. Union del ADP y del Pa sii de unin “ae” Gs 2. Un cambio conformaconal dependiente de energia fueconvene cago Len ede unin forte” 5 ue ct ta formacin de ATP. La traslo- {ation evergnica de prtones tiene liga probe ‘ementeemente pas para aorta a ene ibe nec, pando gente Seti {0 generado por el tansporte elecronico Este fuse tumbn comlevscatbosconfrmacionsls Be has ras dos rubunidades, que convieren el She, que contene ATP, ene si “aber” (O)y CSnviein el aito © en nso Ls | ELATP se sineia en sito T de una subunida, ‘mati queef ATP se soca desde el sitio Ode (a subuniad. 1 ere acoplaiento” entre el transporte eletni- coy Insite e ATP en la mitocondia depend de La opt 2 Tropes» fori nde 595 Go. ; if + 7 ataitcamente ata, La setae oe ATP ne pa en ‘Se pasar’) Union de ADP y Far eo Uf Can ‘igri, saperiete de eerg gua core EiSuo'y werent ce AvP so 88 enna eh venadd rl depute ge dou panos Sa ‘Secuan Gereacioes, (Sein Coss, RL, Aa Re. Bocram 8,6 800) Impermesbilded de La weribrana mitoconil inter Esta impermenbilidad permite que se esablzce un fradienteclecroguimico 2 raves de esta membrana ‘dorane Ia translocacon de 1 ssocada con el ane pote elena, La Gna forma que enen los de Fogresar aa matris esa taves de Ia porn Fy dels [ATP sintasa tanslocadoa de protones. El gradiente flecoguimico aumenta por lo tanto hasta loge gue la enegia bre requerida para transportar Hse el libra con la eneygla libre del Wansporte elena ET teansporte electonico debe entonces. deenere {a sins de ATP, al dispar el gradient elect unico, parm uc et ranpont deci cn D. Desacoplamiento de la fosforilacion oxidativa El transporteelectnico (la oxidacin de NADH y ADH, mediante 0.) ya fosfonaciin oda (lt sintesis de ATP) estn por Io general fuertemente ‘copladon. En estado de repos, cuando ls fesona ‘on ondatva es minima, ef gradient electroqumico Staves de la membrana mifocondrllIntema cece hasta el punto que impide un ulterior bombeo de protones por lo tanto iahibe el transporte electron fo. Alo lago de Yaon aos, no obtant, st han encontrado muchos compuesto, incuyendo el 2 Sinitofenol (DNP)y lo carbonilelanuro-p-tifluo- rometosifeilnidrazona (FCCP), que “detacoplan” crs rect, ape units pea = una base Logica pea comaprender el ectosmna por el cial actian estos denacoplantes Ta presencia en te membrana milocondil interes de sun agente que umente le pemeabdad de los hace fuel fosforacon onan se deseople el rasporte ‘ecronic”proporconando wea va pra a dsipacin {el gradient eecruiico de poten gue no require fe Snesis de ATP El desacoplamiento por 10 tanto ‘Pemile que el tanaporte eletrnico contnde Hbve- [mente ncuso cuando se inhib a sntess de ATP. EL NP y la FCCP son didoe dates polices que por to tanto patan a aves de las enemas. Enon594 Seccién 20-3. Fosforilacion oxidativa Maris C ae pietevado oun o On (hy On Oo + NOz NOr OO bitsén NOs NOs Hs —_= edit as ont = — — wo, fo, Xo, Xo, @ 244Dinttrofenal (ONE) Ng, .eN N. on @ Ne, eNO en Sc we So oF e Ro_ oF So oe © © © © i i I tl 7 ¥ ¥ ¥ Nn” N-H N-H N” Dd . ov Ht => ——— Oo = Oo +nt os : : « ’ i cr, cr, cr, or, D Carbonitcianurop-trftuoro: metoxifenilhidrazona (FCCP) Membrana mitocondrial Figura 20-30 Los ionéforos transportadores de protones, DNP y FCCP, 6CO, + 44H,O + 38ATP @ATPs por cada uno de los 1ONADHs generados por cada glucosa oxidada, 2ATPs por cada uno de los 2FADH,s generados, 2ATPs producidos en la glucdli- sis y 2GTP = 2ATP producidos en el ciclo del acido citrico). Asi pues, ef metabolismo aerdbico es 19 veces mds eficaz que Ia glucdlisis anaerébica, en cuanto a la produccién de ATP. El cambio al metabolismo aerobi- co aumenta por tanto répidamente la relacion de accion de masas de ATP. A medida que la relacion de accion de masas de ATP aumenta, la velocidad del transporte electronico disminuye, lo cual tiene el efec- to de aumentar la relacién [NADH]/[NAD*]. Los au- mentos en las [ATP] y [NADH] inhiben sus enzimas diana de las vias del ciclo del acido citrico y la glucdli- sis. La actividad de la PPK, el enzima que controla la velocidad de la glucdlisis regulado por citrato y por nucleotidos de adenina, disminuye muchas veces al cam- biar del metabolismo anaerbbico al aerdbico. Ello explica Ia notable disminucién de la glucélisis. La glucélisis anaerdbica tiene ventajas pero también limitaciones Los animales pueden sostener la glucélisis anaeré- bica sdlo durante cortos periodos de tiempo. Esto es debido a que la PFK, que no puede funcionar muy eficazmente por debajo de pH 7, se inhibe debido ala acidificacion creciente por la produccién de Acido léc- tico. A pesar de esta limitacion y de la baja eficiencia de la glucélisis en la produccién de ATP, los enzimas de Ia glucélisis se presentan en tan altas concentraciones que cuando no se inhiben, el ATP puede producirse mucho mas rapidamente que a través de la fosforilacién oridativa, - Las diferentes caracteristicas del metabolismo aer6- bico y anaerdbico nos permiten comprender ciertos aspectos del metabolismo de las células cancerosas y de las enfermedades cardiovasculares. Metabolismo de las células cancerosas ‘Como ya observé por primera vez Warburg en 1926, algunas células cancerosas producen més acido lactico en condiciones aerdbicas que las células nor- males. Ello es debido a que, en estas células, Ia via glucolitica produce piruvato més rapidamente de lo que el ciclo del acido citrico puede aceptar. Como puede suceder esto existiendo controles tan finos en el sistema? Una posible explicacién es que estos con- troles se han estropeado en las células cancerosas. Otra es que la utilizacion de ATP tiene lugar a veloci- dades demasiado répidas para que pueda ser repuesto por la fosforilacién oxidativa. Esto alteraria las rela- ciones de los nucledtidos de adenina, suprimiéndose la inhibicion de la PFK. Los intentos para comprender las diferencias metabélicas entre las células cancero- sas y las células normales puede que algun dia pro-porcionen indicios para el tratamiento de ciertas for- mas de esta devastadora enfermedad. Enfermedades cardiovasculares En ciertos tejidos, la privacion de oxigeno que re- sulta en enfermedades cariliovasculares es de gran interés médico. Por ejemplo, dos de las causas mas comunes de muerte entre el hombre, el infarto de miocardio (ataque de coraz6n) y la apoplejia, son causadas por la interrupcion del aporte de sangre (O,) a una porcién del corazén o del cerebro, respectiva- mente. Parece obvio el porqué se produce un cese de la actividad celular, pero por qué se produce la muerte de la célula? En ausencia de O,, una célula, que debe pues con- fiar s6lo en la glucdlisis para la produccién de ATP, reduce rapidamente sus reservas de fosfocreatina (una fuente de produccién rapida de ATP; Seccién 15-4C) y de glucogeno. Dado que la velocidad de produccion de ATP cae por debajo del nivel requerido por las bombas de iones de la membrana, para el Resumen del capitulo La fosforilacion oxidativa es un proceso a través del cual el NADH y el FADH,, producidos por la oxidacion de nutrientes, se oxidan con la consiguiente formacién de ATP. El proceso tiene lugar en la mitocondria, un orgénulo elip- soidal que estd rodeado por una membrana externa permea- ble y contiene una membrana interna impermeable y muy invaginada que encierra la matriz. Los enzimas de la fosfo- rilacién oxidativa estan embebidos en la membrana mito- condrial interna. El P; es importado hacia el interior de la mitocondria mediante un transportador proteico especifico, mientras que las proteinas de importacion de Ca®* y de exportacién de Ca!* operan para mantener una [Ca] cito- sélica constante. Los electrones del NADH se importan hacia la mitocondria mediante uno de los varios sistemas lanzadera, como la lanzadera del glicerofosfato o la lanza- dera de malato-aspartato. El cambio de energia libre estandar para la oxidacién del NAD* mediante el O, es AG” = -218 kJ mol”, mientras que la de la sintesis del ATP a partir de ADP y P, es AG” = 30,5 kJ- mol-?. Por consiguiente, la energia libre molar de la oxidacion del NADH mediante el O, es suficiente para impulsar la sintesis de varios moles de ATP en condiciones estandar. Los electrones generados por oxidacion del NADH y del FADH, pasan a través de cuatro complejos pproteicos, la cadena de transporte electrénico, con la sintesis, acoplada de ATP. Los Complejos I, III y IV participan en la ‘oxidacion de NADH, produciendo tres ATPs por cada NADH, mientras que la oxidacién del FADH,, en la que participan los Complejos Il, Ill y IV, produce s6lo dos ATPs por cada FADH,. Asi, la relacién de moles de ATP produci- dos por mol de coenzima oxidado por el O,, la relacion P/O, es igual a tres para la oxidacion del NADH e igual a dos para la oxidacién del FADH,. La ruta seguida por los electrones a través de la cadena de transporte electronico se elucidé, en parte, a través del uso de inhibidores del trans- Capitulo 20. Transporte electronico y fosforilacién oxidativa 599 ‘mantenimiento de las concentraciones iénicas intrace- lulares apropiadas, el equilibrio osmotico del sistema se rompe, de modo que la’ célula y sus orgénulos encerrados por membranas empiezan a hincharse. Por consiguiente, las membranas se dilatan excesiva- mente y se vuelven permeables, derramando por tan- to los componentes que contenian. [De hecho, un criterio diagnéstico util para el infarto de miocardio es la presencia en la sangre de enzimas especificos de corazén, como el isoenzima del tipo H de la lactato deshidrogenasa (Seccién 7-5C), que se libera del teji- do cardiaco necr6tico (muerto).] Ademés, la disminu- ion del pH intracelular que acompaiia a la glucélisis anaerdbica (debido a la produccién de Acido lactico) permite la liberacion de enzimas lisosomales (que son s6lo activos a pH Acido), degradandose los compo- nentes celulares. Asi pues, el cese de la actividad metabélica da lugar a un dafto celular irreversible. Los tejidos que respiran rapidamente, como los del corazon y cerebro, son particularmente susceptibles a este tipo de lesion. porte electronico. La rotenona y el amital inhiben el Com- plejo 1, 1a antimicina A inhibe el Complejo Il y el CN~ inhibe el Complejo IV. También se realiz potencial de reduc dores de electrones, contenidos en los complejos de trans- porte electrénico. El Complejo I contiene FMN y de seis a siete agrupaciones de hierro-azufre en un complejo proteico de membrana con 26 subunidades. Este complejo pasa electrones desde el NADH al CoQ, una pequeita molécula no polar que se difunde libremente a través de la membra- na, El Complejo II contiene el enzima succinato deshidroge- nasa del ciclo del acido citrico y también pasa electrones al CoQ, en este caso a partir del succinato a través del FAD y ‘una agrupacion de hierro-azufre. El CoQ pasa electrones al Complejo IIL, que contiene dos citocromos del tipo b, una agrupaciGn de hierro-azufre y citocromo ¢. Los electrones del citocromo c, del Complejo Ill pasan al citocromo a del ‘Complejo IV (citocromo ¢ oxidasa) a través de la proteina periférica de membrana citocromo c. Esta proteina se asocia alternativamente con los Complejos III y IV, de modo que los electrones se transfieran entre los dos grupos hemo del complejo especifico resultante, a través de un conducto postulado que estaria formado por anillos conjugados para- Ielos y enlaces de hidrogeno. El Complejo IV pasa los electrones a través del citocromo a, dos atomos de Cu y el citocromo a al O; que, en un proceso en el que intervienen cuatro electrones, se reduce a H;O. EI mecanismo por el cual la energia libre liberada por la cadena de transporte electronico se almacena y se utiliza en la sintesis de ATP se explica adecuadamente mediante la hipotesis quimiosmética. Esta hipétesis afirma que la ener- sia libre producida mediante transporte electrénico se con- serva generando un gradiente electroquimico de protones a través de la membrana mitocondrial interna (Acido en el exterior), que se aprovecha para sintetizar ATP. El gradiente600 Bibliografia de protones se crea y se mantiene mediante la translocacion obligada hacia fuera de H’, a través de la membrana mito- condrial intema, mientras que los electrones viajan a través de los Complejos 1, IT y IV. El transporte de 2 e~ a través de uno de estos complejos crea un gradiente de protones sufi- ciente para la sintesis de un ATP. El mecanismo de esta translocacion de H* es un tema actual de investigacion. La energia almacenada en el gradiente electroquimico de pro- tones se utiliza por la ATP sintasa translocadora de proto- nes (ATPasa bombeadora de protones, F,F,-ATPasa) en la sintesis de ATP, por acoplamiento de este proceso al trans- porte exergonico de H” de vuelta hacia el interior de la ‘matriz mitocondrial. La ATPasa translocadora de protones contiene dos componentes oligoméricos: F;, una proteina periférica de membrana que, en las micrografias electroni- cas de la membrana mitocondrial intema parece un “piruli’, y Fo, una proteina integral de membrana que contiene un Bibliografia Panorama histérico Emster, L. y Schatz, G., Mitochondria: a historical review, J Cell Biol. 91, 2275-255s (1981) Fruton, J. S., Molecules and Life, pp. 262-396, Wiley- Interscience (1972). Racker, E,, A New Look At Mechanisms in Bioenergetics, Academic Press (1976). [Informe personal fascinante reali- zado por uno de los contribuyentes més relevantes del cam- po.) General Boyer, P. D., Chance, B., Emster, L., Mitchell, P., Racker, E., y Slater, E. C., Oxidative phosphorylation and photophos- phorylation, Annu, Rev. Biochem. 46, 955-1026 (197). [Co- leccién de articulos escritos por muchos de los estudiosos del campo.] Emster, L. (Ed), Bioenergetics, Elsevier (1984). Harold, F. M,, The Vital Force: A Study of Bioenergetics, Capitulo 7, Freeman (1986). Hatefi, Y., The mitochondrial electron transport chain and oxidative phosphorylation system, Annu. Rev. Biochem. 54, 1015-1069 (1985). Hinkle, P. C. y McCarty, R. E,, How cells make ATP, Sci. ‘Am, 238(3); 104-123 (1978), Martonosi, A. N. (Ed.), The Enzymes of Biological Membranes (2 ed.), Vol. 4, Bioenergetics of Electron and Proton Trans- port, Plenum Press (1985). Newsholme, E. y Leech, T., The Runner, Fitness Books (1983). [Precioso libro sobre la fisiologia y la bioquimica de la carrera] Nicholls, D. G., Bioenergetics, Academic Press (1982). [Mo- nografia autorizada enteramente dedicada al mecanismo de la fosforilacion oxidativa y a las téenicas usadas para eluci- darla] canal de protones. Los compuestos como el 2,4-dinitrofenol son desacoplantes de la fosforilacién oxidativa porque transportan H’ a través de la membrana mitocondrial inter- 1a, disipando por lo tanto el gradiente de protones y permi- tiendo que continde el transporte electrénico sin la sintesis, concomitante de ATP. Las mitocondrias del tejido adiposo marén contienen un sistema regulador desacoplante que, bajo control hormonal, genera calor en lugar de ATP. En condiciones aerobicas, la velocidad de sintesis de ATP mediante 1a fosforilacién oxidativa esta regulada, en un fenémeno conocido como control por aceptor, mediante la relacion de accidn de masas de ATP. La sintesis de ATP esta fuertemente acoplada a la oxidacion de NADH y de FADH, ‘mediante la cadena de transporte electronico. La glucdlisis y el ciclo del acido citrico estan controlados coordinadamente de modo que pioducen NADH y FADH, sélo a la velocidad requerida para satisfacer las demandas de ATP del sistema, Estructura de la mitocondria Lindén, M., Gellerfors, P., y Nelson, B. D., Purification of a protein having pore forming activity from the rat liver mitochondrial outer membtane, Biochem. J. 208, 77-82 (1982), Mannella, C. A., Structure of the outer mitochondrial mem- brane: ordered arrays of porelike subunits in outer-mem- brane fractions from Neurospora crassa mitochondria, J. Cell Biol. 94, 680-687 (1982). Transporte electronico Barber, J. Further evidence for the common ancestry of cytochrome b-c complexes, Trends Biochem, Sci. 9, 209-211 (1984). Beinert, H. y Albracht, S. P. J,, New insights and unanswe- red questions concerning iron-sulfur clusters in mitochon- dria, Biochim. Biophys, Acta 683, 245-277 (1982). Brunori, M. y Wilson, M. T., Cytochrome oxidase, Trends Biochem. Sci, 7, 295-299 (1982). Capaldi, R. A., Arrangement of proteins in the mitochon- drial inner membrane, Biochim. Biophys. Acta 695, 291-306 (1982), Capaldi, R. A., Structure and function of cytochrome ¢ oxidase, Ann. Rev. Biochem. 59, 569-596 (1990), Capaldi, R. A., Malatesta, F., y Darley-Usmar, V. M., Struc- ture of cytochrome ¢ oxydase, Biochim. Biophys. Acta 726, 135-148 (1983). Chan, S. 1 y Li, P. M., Cytochrome c oxydase: Understan- ding nature's design of a proton pump, Biochemistry 29, 1-12 (1990). von Jagow, G,, b-Type cytochromes, Annu, Rev. Biochem. 49, 281-314 (1980). . Lee, C. P. (Ed), Curr. Top. Bioenerg. 15 (1987). [Contiene articulos sobre las estructuras de los componentes de la cadena de transporte electrénico.]Mathews, F. S., The structure, function and evolution of cytochromes, Prog. Biophys. Mol. Biol. 45, 1-56 (1985), Miller, M. A., Hazzard, J. T., Mauro, M., Edwards, 8. L., Simons, P. C., Tollin G. y Kraut, J, Site directed mutagene- sis of yeast cytochrome c peroxidase shows histidine 181 is not required for oxidation of ferrocytochrome c, Bioche- mistry 27, 9081-9088 (1988). Palmer, G., Cytochrome oxidase: a perspective, Pure Appl. Chem. 59, 749-758 (1987). Poulos, T. L. y Kraut, J, A hypothetical model of the cytochrome ¢ peroxidase » cytochrome ¢ electron transfer complex, J. Biol. Chem. 258, 10322-10330 (1980). Rieder, R. y Bosshard, H. R., Comparison of the binding, sites on cytochrome c for cytochrome c oxidase, cytochrome bey and cytochrome cy, J. Biol. Chem. 255, 4732-4739 (1980). Sareste, M., Structural features of cytochrome oxidase, Quart. Rev. Biophys. 23, 331-366 (1990). Scott, R. A., X-ray absorption spectroscopic investigations of cytochrome c oxydase structure and function, Annu. Reo. Biophys. Biophys. Chem. 18, 137-158 (1989). Smith, H. T., Ahmed, A. J, y Millett, F,, Electrostatic inte- action of cytochrome ¢ with cytochrome c, and cytochrome ‘oxidase, J. Biol. Chem. 256, 4984-4990 (1981). Sweeney, W. V. y Rabinowitz, J. C,, Proteins containing, 4Fe-4S clusters: an overview, Aninu. Rev. Biochem. 49, 139- 161 (1980) ‘Trumpower, B. L,, The protonmotive Q eyele, J. Biol. Chem. 265, 11409-11412 (1990). . Valpuesta, J. M., Henderson, R., y Frey, T. G., Electron- cryo-microscopic analysis of crystalline cytochrome oxida- se, J. Mol. Biol. 214, 237-251 (1991), Fosforilacion oxidativa Alexandre, A., Reynafarje, B., y Lehninger, A. L., Stoichio- metry of vectorial H* movements coupled to electron trans- port and to ATP synthesis in mitochondria, Proc. Natl. Acad. Sei. 75, 5296-5300 (1978). Amzel, L. M. y Pedersen, P. L., Proton ATPase: structure and function, Annu. Rev. Biochem, 52, 801-824 (1983). Cross, R. L., The mechanism and regulation of ATP synthe- sis by F, ATPases, Annu. Rev. Biochem. 50, 681-714 (1981). Engelbrecht, S. y Junge, W., Subunit 8 of H*-ATPases: at the interface between proton flow and ATP synthesis, Bio- chim. Biophys. Acta 1015, 379-390 (1990). Ferguson, S. J. y Sorgato, M. C., Proton electrochemical dients_and energy transduction processes, Annu. Rev. Biochem, 51, 185-217 (1982). Fillingame, R. H., The proton-translocating pump of oxida. tive phosphorylation, Anu, Rev. Biochem. 49, 1079-1113 (1980). Futai, M. y Kanazawa, H., Role of subunits in proton- translocating ATPase (Fy-F,), Curr. Top. Bioenerg. 10, 181- 215 (1980) Capitulo 20. Transporte electrénico y fosforilacion oxidativa 601 Lardy, H. y Shrago, E., Biochemical aspects of obesity, Ann. Rev. Biochem. 59, 689-710 (1990). Lehninger, A. L,, Reynafarje, B., Alexandre, A., y Villalobo, A, Respiration-coupled H’ ejection by mitochondria, Ann. N.Y, Acad, Sci, 341, 585-592 (1980). Mitchell, P., Vectorial chemistry and the molecular mecha- nics of chemiosmotic coupling: power transmission by pro- ticity, Biochem. Soc. Trans. 4, 398-430 (1976). Nelson, N. y Taiz, L., The evolution of H'-ATPases, Trends Biochem, Sci. 14, 113-116 (1988). Nicholls, D. G. y Rial, E., Brown fat mitochondria, Trends Biochem. Sci. 9, 489-491 (1984) Ovchinnikov, Yu, A., Abdulaev, N. G., y Modyanov, N. N., Structural basis of proton-translocating function, Annu. Rev. Biophys, Bioeng, 11, 445-463 (1982). Penefsky, H. S. y Cross, R. L., Structure and mechanism of FoFy-type ATP synthases and ATPases, Adv. Enzymol. 64, 173-215 (1991), Senior, A. E., Secondary and tertiary structure of membrane proteins involved in proton translocation, Biochim. Biophys. ‘Acta 726, 81-95 (1983), Slater, E. C., The Q cycle, an ubiquitous mechanism of electron transfer, Trends Biochem. Sci. 8, 239-242 (1983). Stoeckenius, W. y Bogomolni, R. A., Bacteriorhodopsin and related pigments of halobacteria, Annu. Rev. Biochem. 51, 587-616 (1982). Tanford, C., Mechanism of free energy coupling in active transport, Annu, Rev. Biochem. 52, 379-409 (1983). Wang, J. H., Coupling of proton flux to the hydrolysis and synthesis of ATP, Annu. Rev. Biophys. Bioeng. 12, 21-34 (1983), Wikstrom, M,, Identification of the electron transfers in cytochrome oxidase that are coupled to proton pumping, Nature 338, 776-778 (1989). Wikstrém, M., Krab, K., y Saraste, M.,-Proton-translocating cytochrome complexes, Annu. Rev. Biochem. 80, 623-655 (1981), Wilson, D. F,, Energy transduction in biological membra- tes, en Bittat, E. E, (Ed.), Membrane Structure and Function, Vol. 1, pp. 153-195, Wiley-Interscience (1980). Control de la produccion de ATP Ereciiska, M. y Wilson, D. F,, Regulation of cellular energy ‘metabolism, |: Membr. Biol. 7, 1-14 (1982). Klingenberg, M., The ADP, ATP shuttle of the mitochon- rion, Trends Biochem. Sci. 4, 249-252 (1979), Williamson, J. R., Mitochondrial metabolism and cell regu- lation, en Packer, L. y Gomez-Puyou, A. (Eds.). Mito- chondria, pp. 79-107, Academic Press (1976). Williamson, J. R,, Mitochondrial function in the heart, Annu. Rev. Physiol, 41, 485-506 (1979)602 Problemas Problemas 1. Ordenar los siguientes coenzimas y grupos prostéticos, 2 con actividad redox, de la cadena de transporte electro nico en orden de afinidad electronica creciente: citocro- mo a, CoQ, FAD, citocromo ¢, NADY. @or qué la oxidacion de succinato a fumarato esti asociada a la produccién de slo dos ATPs durante la fosforilacion oxidativa, mientras que la oxidacién de malato a oxalacetato esta asociada a la produccién de tres ATPs? 3. zCual es la eficacia termodinémica de la oxidacién del FADH, al sintetizar dos ATPs en condiciones bioquimi- ‘cas estandar? J. El envenenamiento subletal con cianuro puede revertir- se mediante la administracion de nitritos. Estas sustan- cias oxidan la hemoglobina, que tiene una afinidad relativamente baja por el CN, a metahemoglobina, que la tiene relativamente alta por el CN~. {Por qué es efectivo este tratamiento? 5. Relacionar los compuestos con sus comportamientos: *6. (2) rotenona, (2) dinitrofenol_y (3) antimicina A. (@) Inhibe la fosforilacion oxidativa cuando el sustrato es piruvato pero no cuando el sustrato es succinato, (b) Imhibe la fosforilacién oxidativa cuando el sustrato es piruvato o succinato. (c) Permite que el piruvato se oxide en las mitocondrias, incluso en ausencia de ADP. La nigericina es un ion6foro (Seccién 18-2C) que inter- cambia K* por H' a través de la membrana. Explicar cémo el tratamiento de mitocondrias funcionales con nigericina desacopla el transporte electronico de la fos- forilacion oxidativa, ;Tiene el mismo efecto la valinomi- cina, un ionéforo que transporta K* pero no H'? 7 10. n. 2 La diferencia de pH entre las superficies interna y exter- na de la membrana mitocondrial interna es de 1,4 uni- dades (lado exterior acido). Si el potencial de membrana se supone que vale 0,06 V (negativo en el interior), qual es la energia libre producida al transportar 1 mol de protones de regreso a través de la membrana? {Cuantos protones deben transportarse para proporcio- nar suficiente energia libre para la sintesis de 1 mol de ATP (suponer condiciones bioquimicas estandar)? Explicar por qué: (a) Las particulas submitocondriales de las cuales se ha extraido la F, son permeables a los, protones. (b) La adicién de oligomicina a particulas submitocondriales exentas de F, disminuye varias veces esta permeabilidad, Tanto la oligomicina como el cianuro inhiben la fosfori- lacién oxidativa, cuando el sustrato es 0 piruvato 0 succinato. El dinitrofenol puede usarse para distinguir entre estos inhibidores. Explicario. ara la oxidacion de una determinada cantidad de glu- cosa, zqué produce mas calor, la termogénesis sin tem- lor del tejido adiposo marrén o la termogénesis con temblor del misculo? Como afecta el atractilésido a la respiracién mitocon- drial? (Indicacion: ver Seccion 18-4C). Algunos negociantes sin escripulos offecen, a cambio de una cantidad respetable de dinero, congelar indivi- duos recientemente fallecidos en nitrogeno liquido has- ta que la ciencia médica pueda curar la enfermedad de la que murieron. {Cul es el engaiio bioquimico de este procedimiento?