PCR: herramienta

importante para el
diagnóstico de COVID-19
Estudiante: Lumiere Noriko Ueki Ravillet
 ¿Qué son los coronavirus?

El coronavirus representa una familia de virus, los cuales pueden causar

enfermedades como el resfriado común y del mismo modo poder llegar a tener
infecciones graves. Se llega a nombrar y utilizar el término coronavirus a todas
las especies que pertenecen a estos cuatro tipos de géneros, los cuales son
Alpha coronavirus, beta coronavirus, gamma coronavirus y delta coronavirus.
Este virus presenta un genoma, el cual está constituido por una cadena de ARN
que tiene una polaridad positiva, donde se aproxima 30000 pares de bases,
constituyendo una capucha metilada en el extremo 5' y una cola poliadenilada
(poli-A) en el extremo 3' y de esta forma tiene una cierta similitud al ARN
mensajero del hospedador. 1

Pero ¿cómo el virus afecta a los seres humanos? Ellos se replican empezando
con la entrada de los viriones, que al observarlo desde un microscopio
electrónico, estos suelen representarse por una diminuta “corona”, de allí parte el
nombre; es por ello que, al perder la envoltura y al depositarlo en el citoplasma
de la célula eucariota su ARN viral, estos suelen adherirse con facilidad los
ribosomas para su traducción. Al conseguir traducirse en la poliproteína para
formar el complejo de replicación-transcripción en las vesículas de doble
entrada.En algunos casos de COVID-19 siendo graves se ha podido llegar a la
conclusión que tienen niveles muy altos de Angiotensina ll, a lo que se ha
correlacionado con el SARS-CoV-2 y el daño pulmonar que está causando, pero
el desequilibrio del sistema-angiotensina-aldosterona ha sido también
observado en el 2003 por el SARS.1

¿Y por qué hay un grupo con mayor riesgo de tener este virus? Comenzaré
hablando sobre las personas mayores de 60 años, si bien es cierto esto se
desconoce por el momento, pero algunos lo atribuyen a que es por la prevalencia
de comorbilidades y a el deterioro del sistema inmune propio de su edad. En
segundo lugar, tenemos a los pacientes que tienen hipertensión arterial y
enfermedades cardiovasculares, ya que el SARS-CoV-2 de la misma manera
que el MERS-CoV puede producir daño cardiaco, algunos han llegado a
relacionarlo con la inflamatoria sistemática, la hipoxia y la disfunción pulmonar
causando de una u otra manera daño agudo en sus células miocárdicas. Luego
tenemos a los que padecen de diabetes, que según algunos indican es
provocado por la sobreexpresión del ACE2. Como último punto están las
mujeres embarazadas pueden llegar a tener un parto prematuro, la pérdida del
bienestar fetal y del mismo modo causarles problemas a los bebés recién
nacidos.2

¿Dónde se originó la epidemia y que medidas adaptaron para prevenirla? ·

El paciente 0, tuvo lugar en China, en Wuhan, capital de la provincia de Hubei,

siendo la ciudad más grande ubicada en el centro de China, y en donde
supuestamente esta persona se infectó había sido el en mercado de mariscos de
Wuhan que se encuentra en el distrito de Jianghan.

El 30 de diciembre del año 2019, la “Comisión de Salud” de Wuhan, a través de

una noticia interna, afirmó una causa desconocida de una serie de casos de
neumonía, y un día después sus estudios dijeron que había comenzado todos
esos casos en el mercado de mariscos, por lo que lo cerraron el 1 de enero del
año 2020 y realizaron una limpieza. Luego, el 26 de enero del año 2020 el
Instituto de Virología de los CDC de China anunciaron con los resultados de los
pacientes que, contenían el actual coronavirus; llegando a la conclusión que
sospechaban del mercado de Wuhan, pero algunos artículos científicos
empezaron a dudar sobre esto ya que no había una relación entre ese mercado y
el paciente cero que se había registrado el 1 de diciembre del 2019, además que
en ese lugar no se vendían los murciélagos, ni alrededor de la zona, esto es de
cierta manera extraño porque según “The Lancet”, el 29 de diciembre
establecieron que no había un contacto con el mercado de mariscos 50 personas
de las 99 registradas; y otro estudio ”New England Journal” no habían visitado
dicho mercado 45 personas antes del 1 de enero de las 425 diagnosticados,
siendo cuestionado que ellos sabían de que tercio de los casos no habían tenido
contacto, lo cual significaba que había algo más, un nuevo brote. 3

El 3 de febrero, Zhang Yongzhen y la Escuela de Salud Pública de la Universidad

de Fudan presentaron un estudio con el que comprobaron que el coronavirus
estaba estrechamente relacionado con el CoVZC45 y CoVZXC21, teniendo una
similitud del 100% en sus aminoácidos y un 89.1% de nucleótidos, siendo este
virus parecido al SARS provenientes de murciélagos, con tales resultados los
expertos dijeron que era sumamente extraño porque este virus disminuye en
aminoácidos al ser cambiado a otro ser y mantiene la sospecha de que este virus
había sido creado por algún laboratorio.3

El 29 de abril del 2020, menciona su conclusión el científico francés Montagnier4

que este virus había sido creado, ya que se explica que se habían insertado el
ADN del VIH en el coronavirus, porque según su hipótesis querían encontrar la
cura del VIH, volviendo a mencionar que se trataría de una hipótesis.

En cualquier caso, ¿qué hizo China ante esto? Quisiera rescatar lo que dijo
Gordon3, fue muy perturbadora la respuesta de China ante el virus, permitieron
que se propagara durante 6 semanas y de esta manera otros países no pudieron
protegerse, siendo una respuesta no responsable de su parte porque no solo
puso en peligro a China sino también a todo el mundo.

¿De qué forma se puede adquirir la infección?

El coronavirus se transmite de persona a persona mediante las secreciones de la

persona infectada, y por el contacto que tienen con las gotas respiratorias siendo
de más de unas 5 micras, es por ello que se recomienda tener una distancia de 2
metros de persona a persona por otro lado no se hallado muestras de
SARS-CoV-2 en el aire pero si han encontrado muestras en los baños de los
pacientes, por ello se aconseja lavarse las manos con agua y jabón, evitar
tocarse las partes del rostro como son la nariz, boca y ojos con nuestras manos,
del mismo modo cubrirnos la nariz y boca, pero sobre todo en los hospitales, que
haya una mejor limpieza y desinfección de los lugares en donde se encuentran
los pacientes con COVID-19.2

¿Cómo se realiza la técnica de PCR?

Antes de hacer la técnica de PCR, se debe de realizar una extracción del ADN
para que de esta manera se le coloque en un tubo junto con los nucleótidos, la
solución amortiguadora, los iniciadores, cloruro de magnesio, agua y el ADN
polimerasa, luego se mezcla con un vórtex o también se puede invertir el tubo
unas cuantas veces, después se centrifuga durante poco tiempo y de esta
manera se junta la mezcla que está abajo del tubo, posteriormente esta la
amplificación, el cual consiste en programar el termociclador y poner la muestra5,
y desarrollar los 3 ciclos las cuales son: desnaturalización, alineamiento y
extensión; en la primera etapa con una temperatura de 95°C, las cadenas de
ADN se separan, esto sucede en un tiempo de entre 20 a 30 segundos, pero
también depende de la potencia del termociclador6. En el siguiente ciclo
disminuye la temperatura de entre unos 45 a 65ºC, aquí los iniciadores se unen
al ADN; en el ciclo de extensión o también llamado amplificación, elongación o
polimerizado, se pone a una temperatura de 72ºC porque de esta manera
desarrolla su máxima actividad la polimerasa. En algunos casos, con la misma
temperatura del último ciclo durante unos 5 minutos dejan que se desarrolle una
última extensión por si se han quedado algunas partes incompletas y la
polimerasa haga acción 5.

Para observar el resultado se requiere de una electroforesis. Para separar los

ácidos nucleicos se necesita de un buffer o tampón los cuales podrían ser un
TAE o TBE; como estamos hablando de los ácidos nucleicos, nos indica el grupo
fosfato que presenta una carga negativa y es atraído por una positiva durante la
electroforesis, es por esta razón que es necesario de la preparación de un gel, el
cual se consigue al disolver la agarosa en el buffer, se hierve y se deja un
recipiente hasta que llegue a estar sólido. En el gel los amplicones son corridos
entonces éstos tienen que cargarse con un marcador molecular para que sea de
fácil reconocimiento los amplicones y de esta manera al gel de agarosa al ser
expuesto a la luz UV se verá los amplicones mediante una foto digital para que
finalmente se analicen las bandas observadas a través de un procesador de
imágenes6.

¿En qué instituciones del Perú se realiza el PCR?

En el Perú el Minsa es la institución responsable para la distribución de las

pruebas rápidas a los hospitales regionales de los departamentos, siendo así
que el 25 de marzo del 2020 esta institución complementó las pruebas
moleculares con las pruebas rápidas dando uso de un millón 400 mil pruebas
rápidas 7.
¿El PCR en enfermedades ayuda a su diagnóstico?

Esta técnica es una de las más importantes en el ámbito de biología molecular,

ya que con ella se han podido investigar ramas de la ciencia como la
biotecnología, patología, ecología, medicina forense, ect.

Es el caso del actual covid19 el cual se realiza esta técnica como referencia para
su diagnóstico y estas se llevan a cabo en laboratorios de Microbiología clínica y
dan un resultado tanto positivo como negativo, pero ya se han visto casos en los
que suelen ser falsos positivos y falsos negativos; en el primer caso se debe a
que la muestra pudo haberse contaminado durante el proceso o un error en el
etiquetado y en el segundo caso puede que haya sido porque no se tomó una
muestra adecuada, hay un retraso o al igual que el primero es por un etiquetado
incorrecto 8.

Referencias:

1
Farmacéuticos-Consejo General de Colegios Farmacéuticos [Internet]. España;
[actualizado marzo 2020; citado 29 abril 2020]. Disponible en:
https://www.google.com/url?sa=t&rct=j&q=&esrc=s&source=web&cd=3&ved=2a
hUKEwjcz56JiY7pAhXmhOAKHX3HDZwQFjACegQIBBAB&url=https%3A%2F
%2Fwww.portalfarma.com%2FProfesionales%2Fcampanaspf%2FAsesoramient
o-salud-publica%2Finfeccion-coronavirus-2019-nCoV%2FDocuments%2FInfor
me-tecnico-Coronavirus.pdf&usg=AOvVaw0kMbVCvMxxCCOzNAzL22yo

Centro de Coordinación de Alertas y Emergencias Sanitarias - Ministerio de

2

Sanidad [Internet]. España; [actualizado 4 de abril 2020; citado 29 abril 2020].

Disponible en:
https://www.google.com/url?sa=t&rct=j&q=&esrc=s&source=web&cd=1&ved=2a
hUKEwjcz56JiY7pAhXmhOAKHX3HDZwQFjAAegQIARAB&url=https%3A%2F
%2Fwww.mscbs.gob.es%2Fprofesionales%2FsaludPublica%2Fccayes%2Faler
tasActual%2FnCov-China%2Fdocumentos%2F20200404_ITCoronavirus.pdf&u
sg=AOvVaw34-8zufkcZ6Ia4ak4rXEzB
3
Wenceslao Cruz - DOCUMENTAL: Rastreando el Origen del Coronavirus de
Wuhan, de Joshua Philipp [Video File]. 2020 abril 12. [Consultado 2020 abril 28]
[55:39 min.]. disponible en https://www.youtube.com/watch?v=va9HnnvRYs0

4
Coronavirus: Luc Montagnier, el ganador del premio nobel por descubrir el VIH
afirma que el COVID-19 se creó en un laboratorio [Internet]. [actualizado 29 de
abril 2020; citado 29 abril 2020]. Disponible en:
https://elbocon.pe/trends/coronavirus-luc-montagnier-el-ganador-del-premio-no
bel-por-descubrir-el-vih-afirma-que-el-covid-19-se-creo-en-un-laboratorio-video-
noticia/?ref=ebr

Serrato A., Flores Ll., Aportela J., Sierra E., [Internet]. [citado 30 abril 2020].
5

Disponible en:
https://www.google.com/url?sa=t&rct=j&q=&esrc=s&source=web&cd=1&cad=rja
&uact=8&ved=2ahUKEwj95bmliJHpAhXnnuAKHZmKBRQQFjAAegQIAhAB&url
=http%3A%2F%2Fwww2.inecc.gob.mx%2Fpublicaciones2%2Flibros%2F710%
2Fpcr.pdf&usg=AOvVaw2BVrxCC5jQsgGYsyKqRSog

6
Investigación en discapacidad [Internet]. [actualizado 2 de agosto 2013; citado
30 abril 2020]. Disponible en:
https://www.google.com/url?sa=t&rct=j&q=&esrc=s&source=web&cd=2&cad=rja
&uact=8&ved=2ahUKEwj95bmliJHpAhXnnuAKHZmKBRQQFjABegQIAxAB&url
=https%3A%2F%2Fwww.medigraphic.com%2Fpdfs%2Finvdis%2Fir-2013%2Fir
132d.pdf&usg=AOvVaw1qdHpmqylV8VyNo26vHfxY

7
Gobierno del Perú [Internet]. Perú; 2020 [actualizado 25 de marzo 2020; citado
30 abril 2020]. Disponible en:
https://www.gob.pe/institucion/minsa/noticias/110448-minsa-ratifica-uso-de-un-
millon-400-mil-pruebas-rapidas-para-deteccion-de-covid-19

8
Grupo Patología Infecciosa, AEPap: Asociación Española de Pediatría de
Atención Primaria [Internet]. [citado 30 abril 2020]. Disponible en:
https://www.google.com/url?sa=t&rct=j&q=&esrc=s&source=web&cd=2&cad=rja
&uact=8&ved=2ahUKEwiR7_PEjJHpAhXwUN8KHaLOCs8QFjABegQIARAB&u
rl=https%3A%2F%2Fwww.aepap.org%2Fsites%2Fdefault%2Ffiles%2Fdocume
nto%2Farchivos-adjuntos%2Fpruebas_diagnosticas_de_laboratorio_de_covid_
vfinal.pdf&usg=AOvVaw1CHfMwC4QUeAHeHzkATF6c