Documentos de Académico
Documentos de Profesional
Documentos de Cultura
Gion-TP Biofarmacia 2008 - 0 PDF
Gion-TP Biofarmacia 2008 - 0 PDF
FACULTAD DE FARMACIA
UNIVERSIDAD DE ALCALA
CUADERNO DE PRACTICAS
BIOFARMACIA
y
FARMACOCINÉTICA
Apellidos ...........................................................
Nombre ...........................
Pág.
Administración extravascular 33
Ensayo Nº 3. Simulación de datos plasmáticos 33
Ensayo Nº 4. Simulación de datos de orina 37
Introducción a la Farmacocinética 49
Curso de Biofarmacia 51
EXPERIMENTACIÓN EN ANIMALES
-1-
Protocolos de Experimentación animal: Normas Éticas
Direcciones de interés
http://www.iclas.org/ International Council for Laboratory Animal Science
http://www.felasa.org/ Federation of European Laboratory Animal Science
http://www.secal.es/ Sociedad Española para las Ciencias del Animal de Laboratorio
-2-
Estudio Farmacocinético del R.F. en la rata
OBJETIVO
Esta práctica tiene por objeto exponer la metodología utilizada en el estudio farmacocinético de un
medicamento. Como fármaco modelo se utiliza el rojo fenol, administrándose a una rata en dos condiciones
experimentales: por vía intravenosa y por vía intraperitoneal, en regimen de dosis única de 10 mg/ Kg.
En primer lugar es necesario disponer de una curva de calibración para el rojo fenol en plasma de
rata. Una vez puesto a punto el procedimiento de valoración, se realizará en otra rata una administración
intravenosa de rojo fenol y se extraerán muestras de sangre a los tiempos previamenmte establecidos. A partir
de los datos de nivel plasmático de fármaco/tiempo obtenidos y mediante el adecuado tratamiento
matemático, se podrá proponer el modelo farmacocinético que mejor se se ajusta a los resultados observados
y calcular sus constantes farmacocinéticas que caracterizan.
Por último, se realizarán estas mismas operaciones en el caso de una administración intraperitoneal.
La finalidad de la práctica consiste pues en determinar dichas constantes en el caso de una administración
intravenosa y otra intraperitoneal de rojo fenol, así como la biodisponibilidad conseguida por esta última vía.
MATERIAL Y METODOS
Animales de experimentación
Se utilizan ratas Wistar anestesiada con pentobarbital sódico a la dosis de 60 mg/Kg.
Material
* Material quirúrgico
Tijeras de punta roma Pinzas rectas
Jeringuillas de 1 y 10 mL de capacidad Tablero de operaciones
Rollo de esparadrapo y Algodón hidrófilo Guantes desechables
* Material fungible
10 tubos Ependorf de plástico 20 tubos de vidrio
Pipetas de distinta capacidad (0,2-0,5-5 mL) 3 matraces de 100 mL aforados
10 matraces aforados de 10 mL Vasos de precipitados
Soluciones precisas
* Eter etílico y solución acuosa de pentobarbital sódico (50 mg/mL) utilizadas como anestesicos.
* Heparina y solución acuosa de citrato sódico al 20% que se emplearán como anticoagulantes.
* Solución de rojo fenol de concentración 6 mg/mL (U.S.P. XX, pág. 1099), será la solución del medicamento
que se administra a razón de 10 mg/Kg.
* Solución patrón de rojo fenol de concentración 150 µg/mL que se utilizará para la recta de calibración.
* Solución de ácido tricloroacético al 10% utilizada como agente desproteinizante.
* Solución de NaOH 1N empleada en la valoración del rojo fenol.
-3-
Estudio Farmacocinético del R.F. en la rata
Método de valoración
Para poder realizar un buen tratamiento de los datos experimentales es necesario, en primer lugar,
disponer de un método analítico fiable y apropiado. Ello implica realizar una curva de calibración del rojo
fenol a partir de muestras de concentración conocida en plasma.
Recta de calibración
- Procedimiento para la obtención del plasma.
Con el fin de obtener plasma virgen para preparar la recta de calibración, se anestesiará una rata con
pentobarbital sódico a la dosis de 60 mg/Kg. Una vez anestesiado el animal (lo que se confirma al
comprobar la pérdida de reflejo parpebral), se sujeta al tablero quirúrgico con el auxilio de unas tiras
de esparadrapo. Se practica a continuación unas incisiones a nivel pectoral con el fin de poner al
descubierto los músculos pectorales y las dos venas yugulares.
Una vez puestas al descubierto las dos venas yugulares, se extraerá la mayor cantidad posible de
sangre con la ayuda de una jeringa de 10 mL de capacidad, lavada previamente con la solución
anticoagulante. La sangre, recogida en un tubo de centrífuga humedecido también con la solución
anticoagulante, se centrifuga a 3000 r.p.m. durante 15 minutos, tras lo cual se retira el plasma
obtenido.
-4-
Estudio Farmacocinético del R.F. en la rata
RESULTADOS
- Tabla 1.- Preparación de soluciones patrón para la recta de calibración. (Volumen final 10 mL)
Vol. sol. 150 µg/mL Vol. Agua Conc. Rojo fenol (µg/mL)
75
60
45
30
15
7.5
3
1.5
Explicar qué hay que hacer para conseguir desarrollar un método analítico “validado”.
-5-
Estudio Farmacocinético del R.F. en la rata
Recta de calibración
- Tabla 2.- Lecturas observadas a 558 nm.
Conc. RF(µg/ml) Absorbancia 1 Absorbancia 2 Absorbancia 3 AbsorbanciaMEDIA
75 0.832 0.833 0.806
60 0.659 0.647 0.641
45 0,493 0.507 0.489
30 0.334 0.329 0.328
15 0.163 0.164 0.165
7.5 0.059 0.072 0.084
3 0.034 0.025 0.033
1.5 0.012 0.012 0.013
-6-
Estudio Farmacocinético del Rojo Fenol en la rata. Administración I.V.
MATERIAL Y METODOS
Procedimiento
Método analítico
Las muestras de sangre, rotuladas con sus tiempos de toma correspondientes se procesarán como se
indicó en el apartado correspondiente de material y métodos de la página 4.
RESULTADOS
-7-
Estudio Farmacocinético del Rojo Fenol en la rata. Administración I.V.
Figura 3.- Representación gráfica del logaritmo del nivel plasmáticos/tiempo de RF por vía I.V.
-8-
Estudio Farmacocinético del Rojo Fenol en la rata. Administración I.V.
CÁLCULOS
- Tabla 4.- Tratamiento de los datos.
Conc (Cp) Log C(extrap) Cp-C(extrap)
Tiempo(h) Log. Cp C(extrap) Log.Residuales
(µg/mL) extrapolada Residuales
-9-
Estudio Farmacocinético del Rojo Fenol en la rata. Administración I.V.
-10-
Estudio Farmacocinético del Rojo Fenol en la rata. Administración I.V.
-11-
Estudio Farmacocinético del Rojo Fenol en la rata. Administración I.V.
Explica por qué tienen esa forma las gráficas cantidad de fármaco en C.C. y C.P /tiempo.
(Ten en cuenta el valor del volumen de distribución y la relación entre las microconstantes).
-12-
Administración I.P. de Rofo Fenol. Cálculo de la constante de absorción
MATERIAL Y METODOS
El material y métodos utilizados para la realización de esta práctica son los mismos que los
empleados en el estudio farmacocinético del rojo fenol tras su administración intravenosa por lo que no se
reseña en este protocolo.
La administración del rojo fenol se realizará por via intraperitoneal para lo que se utilizará una
jeringuilla desechable de 1 ml de capacidad provista de aguja 16/5. Se utilizará una solución de rojo fenol de
concentración 6 mg/ml y se administrará a la dosis de 10 mg/Kg.
Las tomas de muestra se realizarán a los siguientes tiempos prefijados: 2, 5, 10, 15, 30, 45, 60, 90,
120 y 150 minutos.
RESULTADOS
-13-
Administración I.P. de Rofo Fenol. Cálculo de la constante de absorción
Figura 7.- Representación gráfica de las curvas de nivel plasmático de RF/tiempo por vía I.P.
Figura 8.- Representación gráfica del logaritmo de la concentración de RF/tiempo por vía I.P.
-14-
Administración I.P. de Rofo Fenol. Cálculo de la constante de absorción
CÁLCULOS
Tabla 7.- Tratamiento de los datos plasmáticos del RF administrado por vía intraperitoneal.
-15-
Administración I.P. de Rofo Fenol. Cálculo de la constante de absorción
-16-
Aplicación del método de Doluisio: Absorción de Sulfonamidas
OBJETIVO
Una vez que ha sido liberado el fármaco de su correspondiente forma farmacéutica, el siguiente paso
que se produce en su tránsito por el organismo es el de la absorción.
En esta práctica se expone la aplicación del método de Doluisio en rata al estudio de la absorción por vía oral
de dos sulfonamidas: la sulfadiacina y la sulfametoxidiacina. Comprende la técnica quirúrgica, la disposición
de montaje, así como el procedimiento de valoración de estos fármacos. A partir de los resultados
experimentales obtenidos se determinará la cinética de desaparición del fármaco del líquido introducido en el
intestino y la constante de velocidad que rige dicho proceso.
Doluisio J.T. et al. Pharmaceutical Sciences 58, 1196, (1969)
MATERIAL Y METODOS
Animal de experimentación
Ratas Wistar a las que 24 h antes del ensayo se les retira el alimento y mantiene con agua "ad libitum"
Material
* Material quirúrgico
Tijeras Pinzas rectas Tablero de operaciones Cánula
Agujas e hilo de sutura Esparadrapo Algodón hidrófilo
Guantes desechables
Soluciones y reactivos
* Líquido de lavado compuesto de PO4H2Na, ClNa, ClK y Cl2Ca.
* Solución reguladora de pH 6,23 de PO4H2Na/PO4HNa2 0,067M.
* Solución medicamentosa de sulfonamida en medio isotónico de pH regulado.
* Solución de nitrito sódico al 0,1%.
* Cloruro sódico 0,9%.
* Acido clorhídrico 3N.
* Solución de sulfamato amónico 0,5%.
* Solución acuosa de N-1 naftiletilendiamida 0,1%.
-17-
Aplicación del método de Doluisio: Absorción de Sulfonamidas
Método de valoración
El procedimiento empleado se basa en el propuesto por Bratton y Marshall y consiste en la formación
de un azoderivado que presenta un máximo de absorción a 540 nm.
PARTE EXPERIMENTAL
Fase quirúrgica
Una vez anestesiada la rata, primeramente con eter etílico y a continuación con pentobarbital sódico
administrado intraperitonealmente a razón de 60 mg/Kg de peso, se procede a fijarla sobre el tablero
quirúrgico en posición de decúbito supino. Seguidamente se hace una incisión en la piel del abdomen a la
altura de la pelvis. Con ayuda de una cánula se corta ésta, así como los músculos abdominales, hasta el
esternón. En los extremos de la abertura se practican cuatro incisiones laterales que permiten poner al
descubierto toda la cavidad abdominal.
A continuación se procede a aislar de la continuidad digestiva todo el intestino delgado; desde unos
2-3 cm del estómago hasta la porción final del íleon en las proximidades del tracto inicial del intestino grueso.
Se hace un pequeño corte a estos dos niveles, por donde se introducen, las cánulas de cristal (1 cm), que se
fijan por medio de sendas ligaduras con hilo de sutura.
Fase de lavado
El siguiente paso consiste en el lavado de la porción intestinal aislada. A la cánula duodenal se acopla
un tubo de polietileno que se conecta por el otro extremo con una jeringa de plástico. Con el líquido de lavado
se arrastra la suciedad que sale por la cánula ileal, repitiéndose la operación hasta que el líquido sale limpio de
restos de la digestión. Finalmente se expulsa todo el líquido introducido en el intestino.
-18-
Aplicación del método de Doluisio: Absorción de Sulfonamidas
Fase de valoración
La valoración de las muestras se lleva a cabo siguiendo el procedimiento analítico expuesto
anteriormente en el apartado de materiales y métodos.
Jeringa Jeringa
duodenal ileal
Ileon
Duodeno
Intestino grueso
Estomago
Intestino delgado
CENTRADA CSALIDA
(CENTRADA - CSALIDA)
CENTRADA - CSALIDA = Concentración de fármaco que se considera que se ha absorbido en el
intestino delgado
-19-
Aplicación del método de Doluisio: Absorción de Sulfonamidas
RESULTADOS
- Preparación de soluciones patrón de sulfonamida para la recta de calibración:
Se prepara una bateria de soluciones patrón para cada una de las sulfonamidas objeto de estudio.
Seguidamente se sigue el método de valoración indicado y se lee la absorbancia a 540 nm.
-20-
Aplicación del método de Doluisio: Absorción de Sulfonamidas
Figura 11.- Representación gráfica de las cinéticas de desaparición de las dos SULFAMIDAS
a).- Concentración remanente/tiempo
-21-
Aplicación del método de Doluisio: Absorción de Sulfonamidas
-22-
Simulación “in vitro” del modelo farmacocinético Monocompartimental
donde C es la concentración y Vd el volumen del compartimento que puede ser un valor real o ficticio.
Los modelos son sistemas abiertos, existiendo transferencia de fármaco entre dicho compartimento y
el exterior. Si bien con estas premisas el numero de compartimientos necesarios para representar el organismo
puede parecer elevado en principio, se ha comprobado que una inmensa mayoría de los fármacos se pueden
ajustar adecuadamente a modelos con uno o dos compartimentos. Incluso cuando se administran dosis
múltiples y se alcanza el equilibrio dinámico, salvo contadas excepciones se utiliza el tratamiento
monocompartimental.
PARTE EXPERIMENTAL
En esta practica el organismo está representado por un dispositivo hidráulico que permite regular la
renovación del fluido, y en cual existe una buena agitación interior, lo que permite simular un modelo
farmacocinético de un compartimento único.
El dispositivo consta de: un matraz kitasato de 500 c.c., un recipiente de plástico de 1L de capacidad,
una bomba peristática, un soporte metálico y una pinza, un tubo de goma de silicona, un agitador magnético
y una barrita magnética.
-23-
Simulación “in vitro” del modelo farmacocinético Monocompartimental
Método analítico
Como princicpio activo se utiliza una sustancia coloreada de fácil valorarión: la carboxifluoresceina
sódica (CF). El método de análsis es espectrofotométrico, midiendose directamente la absorbancia de las
soluciones en un espectrofotómetro a 493,5 nm. de longitud de onda. Previamente se ha puesto a punto el
método de valoración, con el que se han obtenido los datos siguientes para la curva de calibración:
Tabla 11.- Recta de calibración de la carboxifluoresceina sódica.
Conc. CF Na
0,495 0,99 1,98 3 3,96 5,04 6
(µg /mL)
Absorbancia 0,052 0,106 0,212 0,427 0,463 0,652 0,738
2
Ecuación de la recta Y(Abs)= 0,1269 X(conc) - 0,0093 (R = 0,9895)
-24-
Simulación “in vitro”: Administración I.V. Ensayo 1, Niveles plasmáticos
Este ensayo tiene por objeto simular una administración intravenosa rápida y el procedimiento de
recogida de muestras “sanguíneas” y “urinarias” mediante el dispositivo hidráulico expuesto en las páginas
anteriores, en el que el organismo está representado por un único compartimento.
La solución de CF se inyecta con una jeringa en el líquido del interior del kitasato que simula la
circulación sanguínea. A los tiempos preestablecidos se extraen 3 mL del interior del matraz (equivale a la
muestra de sangre/plasma) y todo el volumen que ha fluido por la salida lateral desde la anterior toma de
muestra (equivale a lo excretado en orina).Por ello en la misma práctica se realizan los Ensayos 1 y 2.
Una vez montado el dispositivo anterior y comprobado que la "orina " fluye de forma contínua y a
ritmo constante (utilizar una probeta), se administra una dosis "endovenosa" rápida (“bolus”) del fármaco, la
carboxifluoresceina sódica (CF). Se administran 0.5 mL de una solución acuosa de CF de 6 mg/mL de
concentración. El deposito debe efectuarse rápidamente y en este momento se pone en marcha el cronómetro.
A los 2.5, 5, 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40 y 50 minutos de comenzado el ensayo se toman muestras de la
parte media del kitasato, que coresponderían a "plasma". Para ello se utilizan pipetas de 5 mL, recogiéndose
un volumen de 3 mL. Si no se pudiese recoger alguna muestra al tiempo establecido, se deberá anotar el
nuevo tiempo de recogida con la mayor exactitud y coincidiendo con el inicio de la toma.
Las muestras se depositan en tubos de ensayo adecuadamente numerados y se mide su absorbancia
directamente en un espectrofotómetro a una longitud de onda de 493,5 nm. La concentración se obtiene a
partir de la recta de calibración.
Representar gráficamente el logaritmo de los niveles plasmáticos frente al tiempo en la página siguiente.
-25-
Simulación “in vitro”: Administración I.V. Ensayo 1, Niveles plasmáticos
-26-
Simulación “in vitro”: Administración I.V. Ensayo 1, Niveles plasmáticos
4- CALCULOS:
Fase de eliminación
-27-
Simulación “in vitro”: Administración I.V. Ensayo 1, Niveles plasmáticos
-28-
Simulación “in vitro”: Administración I.V. Ensayo 2, Niveles en orina
La velocidad media de flujo de orina se calcula al dividir el volumen total de liquido recogido entre
los 2,5 y los 50 minutos entre 50 (minutos en los que se recoge este volumen).
-29-
Simulación “in vitro”: Administración I.V. Ensayo 2, Niveles en orina
3.-TRATAMIENTO DE DATOS:
Cuando se trabaja con muestras de orina se pueden hacer dos tipos de tratamientos de los datos:
1.-Acumulativo: se calculan las cantidades totales de CF excretadas (Ut) hasta cada uno de los
tiempos de muestreo (Ti) y
2.- Distributivo: se calculan las velocidades de excreción (∆U/∆t) en el tiempo medio de cada uno de
los intervalos de recogida de orina (∆t).
Para ello es necesario realizar los siguientes cálculos :
∆t =intervalo de recogida, corresponde al tiempo que duró la toma de muestra (tn - tn-1 ).
∆U = cantidad de soluto eliminado en el intervalo considerado. Se calcula: ∆U = C orina · V orina
∆U/∆t = velocidad de eliminación. Corresponde al cociente entre la 2ª y 4º columnas.
log (∆U/∆t) = logaritmo de la velocidad de eliminación.
Tmedio = tiempo medio del intervalo de recogida considerado. Se calcula t i = (tn + tn-1 )/2
Se realizará la representación gráfica de los logaritmos de las "velocidades de eliminación" en función de los
tiempos medios de intervalo, y se calculara la recta de regresión por mínimos cuadrados:
y=m•x+b
La constante de velocidad de eliminación se obtiene a partir de la pendiente: Kel = m • 2,303.
La semivida plasmatica se cálcula por la expresión: t1/2 = 0,693/ Kel
La ordenada en el origen es el logaritmo de la velocidad de eliminación a tiempo cero, es decir el logaritmo
del
producto de la dosis por la Ku. Calcula Ku y comparalacon Kel.
Calcula la cantidad máxima eliminada.
Calcula la cantidad que falta por eliminarse en el kitasato por diferencia entre la dosis administrada y la
cantidad máxima eliminada. Compara ésta última con la determinada experimentalmente a partir de la
concentración en el kitasato.
Extrapolar el AUC desde “t” hasta infinito (∞) utilizando la siguiente expresión:
AUC∞ t final = (∆U/∆t) t final / Kel dU/dt = Ku· D·e-Ke·t
Razonar por qué es otra forma de calcular el soluto que queda por eliminar.
-30-
Simulación “in vitro”: Administración I.V. Ensayo 2, Niveles en orina
-31-
Simulación “in vitro”: Administración I.V. Ensayo 2, Niveles en orina
Figura 17.- Gráfica del “Logaritmo deVelocidad de excrección urinaria” de CF. Simulación I.V.
Log Velocidades de excreción (∆U/∆t) en el tiempo medio del intervalo de recogida.
-32-
Simulación “in vitro”: Administración E.V. Ensayo 3, Niveles plasmáticos
En esta práctica el organismo esta representado por el mismo dispositivo que el utilizado en la
práctica anterior: un sistema hidráulico con renovación controlada del fluido y una buena agitación interior,
por lo que simula un modelo de un solo compartimento.
Se realiza el montaje del dispositivo como se indicó anteriormente y se regula la velocidad de la
bomba peristáltica para el flujo se mantenga constante entre 10 y 15 ml/min.
El ENSAYO Nº 3 tiene por objeto simular datos de concentración plasmática y el ENSAYO Nº 4 de
datos urinarios. Ambos ensayos se realizan simultáneamente en el mismo experimento.
-33-
Simulación “in vitro”: Administración E.V. Ensayo 3, Niveles plasmáticos
Tabla 16.- Recogida de datos de ”niveles plasmáticos”. Simulación E.V. (Ensayo 3).
Nº Ti.previsto Ti.real Abs (problema) Dilución C(plasmática) Log. C(plasmática)
1 2,5
2 5
3 10
4 15
5 20
6 25
7 30
8 35
9 40
10 50
-34-
Simulación “in vitro”: Administración E.V. Ensayo 3, Niveles plasmáticos
CÁLCULOS
Fase de eliminación: y =................ - ............ t r =.................
log C = log Co – ke/ 2,303 t log Co =................. Co =...................
pendiente =............... ke =...................
Co =
tmax =
Cmax =
Clp=
-35-
Simulación “in vitro”: Administración E.V. Ensayo 4, Niveles en orina
-36-
Simulación “in vitro”: Administración E.V. Ensayo 4, Niveles en orina
3.-TRATAMIENTO DE DATOS:
Se calculan las cantidades acumuladas de CF (Ut) en cada uno de los tiempos de muestreo (Ti) y las
velocidades de excreción (∆U/∆t) en el tiempo medio del intervalo de recogida (∆t). (Ver Ensayo 2).
-37-
Simulación “in vitro”: Administración E.V. Ensayo 4, Niveles en orina
Figura 20.- Gráfica del “logaritmo Velocidad excrección urinaria” de CF. Simulacion E.V.
-38-
Simulación “in vitro”: Administración E.V. Ensayo 4, Niveles en orina
-39-
Simulación “in vitro”: Administración E.V. Ensayo 4, Niveles en orina
-40-
Simulación “in vitro”: Administración Perfusión I.V. Ensayo 5, Niveles plasmáticos
Este ensayo tiene por objeto simular una administración intravenosa en forma de infusión o perfusión
y el procedimiento de recogida de muestras “sanguíneas”, utilizando el dispositivo hidráulico expuesto en las
páginas anteriores, en el que el organismo está representado por un único compartimento.
La solución de CF se coloca en una jeringa a la que se acopla un tubo de goma, el cual se introduce
directamente el el matraz kitasato que simula el compartimento del organismo. Mediante un regulador de
flujo la solución de CF perfunde continuamente en el líquido del interior del kitasato que simula la circulación
sanguínea. A los tiempos preestablecidos se extraen 3 mL del interior del matraz (equivale a la muestra de
sangre/plasma).
-41-
Simulación “in vitro”: Administración Perfusión I.V. Ensayo 5, Niveles plasmáticos
4.- Montar el dispositivo de las prácticas anteriores (recipiente de plástico, bomba peristáltica, kitasato con
agitador magnético y vaso colector) sin acoplar todavía la jeringa de perfusión.
5.- Poner en marcah la bomba peristáltica y comprobar que el flújo de líquido que sale por el kitasato es
contínuo y a ritmo constante de unos 15 ml/min (comprobar con una probeta).
6.- Colocal el soporte que sujeta la jeringa de perfusión, todavía vacía, de tal forma que ésta se sitúe en la
vertical del matraz kitasato. A continuación introducir el tubo de goma, acoplado la jeringa, en el interior del
kitasato de manera que casi llegue hasta el fondo del matraz.
7.- Sin modificar el regulador de flujo del tubo de goma, llenar la jeringa con la solución de CF de
concentración 250 µg/ml hasta el nivel de 60 cc. La solución de CF descenderá por el tubo de goma.
8.-. Cuando la solucion de CF esté a punto de llegar al extremo del tubo de goma situado en el interior del
kitasato, completar el nivel de la jeringa de perfusión a 60 cc.
9.- El ensayo comienza en el momento en que la solución de CF empiece a perfundir en líquido del kitasato,
que simula la sangre. En ese momento poner en marcha el cronómetro y empezar a contar el tiempo.
10.- A los tiempos indicados en la tabla, 5, 10, 20, 30, 40 y 50 minutos, se extraen con una jeringa 3 ml de
líquido del interior del kitasato y se colocan en tubos de ensayo rotulados.
11.- Para mantener constante la presión hidrostática , reponer con solución de CF de 250 µg/ml el nivel de
la jeringa de perfusión a 60 cc, en cada uno de los tiempos de recogidade muestra.
12.- La simulación de la perfusión finaliza a los 50 min. Para ello, sin deterner la bomba peristaltica, cerrar
completamente el regulador de flujo, extraer el tubo de goma del interior del kitasato y continuar con el
experimento.
13.- Se continúan recogiendo muestras de 3ml del interior del kitasato a los 60, 70, 80 y 90 minutos. Perido
post-perfusión.
14.- A los 90 min detener la bomba peristáltica y valorar la concentración de CF en los tubos.
Si no se pudiese recoger alguna muestra al tiempo establecido, se deberá anotar el nuevo tiempo de recogida
con la mayor exactitud y coincidiendo con el inicio de la toma.
La absorbancia de las muestras se mide directamente en un espectrofotómetro a una longitud de onda de
493,5 nm. La concentración se obtiene a partir de la recta de calibración.
Representar gráficamente el logaritmo de los niveles plasmáticos frente al tiempo en la página siguiente.
-42-
Simulación “in vitro”: Administración Perfusión I.V. Ensayo 5, Niveles plasmáticos
-43-
Simulación “in vitro”: Administración Perfusión I.V. Ensayo 5, Niveles plasmáticos
4- CALCULOS:
-44-
Simulación “in vitro”: Administración Perfusión I.V. Ensayo 5, Niveles plasmáticos
Figura 23.- Representación gráfica de log niveles plasmáticos de CF/tiempo. Perfusión I.V.
Fase de disposición
- ke · t ′
C t ′ = C f . e y =................ - ............ t’ r =.................
Fase de incorporación
-45-
Simulación “in vitro”: Administración Perfusión I.V. Ensayo 5, Niveles plasmáticos
ko ke .C f Κo
Ct = . ( 1 - e - ke. t ) ko = ko = C∞ .ke =
ke 1 - e - k e .T Vd
-46-
Estudio comparativo de cesión “in vitro”
OBJETO
Este ensayo tiene por objeto evaluar "in vitro" la influencia que tiene la viscosidad de una
formulación sobre la liberación del principio activo incorporado en ella. En esta práctica se compara la cesión
de una substancia trazadora, fluoresceina disódica, a un medio receptor acuoso, que se halla separado de la
formulación por una membrana semipermeable.
PARTE EXPERIMENTAL
El dispositivo empleado en éste estudio consta de un tubo de vidrio de 22 mm de diámetro interno (26
mm φ externo) y 98 mm de altura (compartimento donor), en uno de cuyos extremos se fija una membrana
semipermeable (Visking 2-18/32``, Medicell Int. Ltd.) y de un vaso de precipitados de 5 cm de diámetro y 10
cm de altura (compartimento receptor), que contiene 75 mL de agua destilada (líquido receptor) sometida a
una agitación magnética suave. En el compartimento donor se deposita la formulación objeto de estudio: la
solución con el marcador o el gel; seguidamente se pone en contacto el tubo con el líquido receptor evitando
la formación de burbujas sobre la superficie de la membrana. Se pone en marcha el cronómetro y a los
tiempos preestablecidos se retiran 3 mL del medio receptor para su valoración, reponiendo el volumen con
tampón fosfato a la misma temperatura.
Compartimento
donor
Formulación Membrana
Compartimento
receptor
Agitador magnético
Gel de gelatina
Se prepara un gel a la concentración del 10% (p/v), para lo cual la cantidad necesaria de gelatina se
dejó en reposo en 10 mL de agua destilada a 37° C durante 24 horas, hasta completa disolución. La dispersión
obtenida presenta un aspecto transparente, coloración amarillenta y consistencia viscosa a temperatura
ambiente (25° C). Para realizar el estudio de liberación se añade 1 mL de solución de fluoresceina disódica (6
mg/mL) a 1 mL del gel de gelatina.
-47-
Estudio comparativo de cesión “in vitro”
Determinar la cinética del proceso de cesión que más se ajusta en cada caso, analizando la correlación entre la
Concentración y el tiempo o el log Concentración y el tiempo, mediante mínimos cuadrados
-48-
Enseñanza Asistidad por Ordenador.- Introdución a la Farmacocinética
Al hacer CLIC en una de estas opciones y comenzar la aplicación se muestra una primera página
donde se indica el CONTENIDO de esa actividad y los CONOCIMIENTOS PREVIOS que se necesitan. A la
derecha, abajo, se indican las páginas que contiene; haciendo CLIC en ellas se pasa a esa página. En la parte
inferior izquierda aparece “Return to Menu”, que te lleva al Menu Principal. En todas las páginas aparece en
la parte superior una barra de tareas con las palabras: File, Edit, Tools, Help. Para salir del programa:
Desplegar File y seguidamente Exit Package.
-49-
Enseñanza Asistidad por Ordenador.- Introdución a la Farmacocinética
RESULTADOS Y COMENTARIOS
-50-
Enseñanza Asistidad por Ordenador.- Curso de Biofarmacia
CURSO DE BIOFARMACIA
*Sistemas de Administración Oral: donde se describen los tipos de excipientes usados para la
elaboración de comprimidos y cápsulas de liberación inmediata y los ensayos de uniformidad,
disgregación y disolución. A continuación se exponen los diferentes tipos de formas de cesión
controlada, sus mecanismos y cinéticas de liberacion. Por último se comentan los estudios de
biodisponibilidad y bioequivalencia de las formas de administración oral.
*Predicción de Fa: capítulo que analiza los parámetros que resultan críticos para la absorción de los
fármacos y muestra cómo estimar la permeabilidad, la magnitud de la absorción, la biodisponibilidad
y la fracción de dosis absorbida. En él se exponen también los conceptos de la correlación in vitro/in
vivo y del Sistema de Calsificación Biofarmacéutica BCS.
Fundamentos
• Introducción
• Biodisponibilidad
• Farmacocinética
• Aclaramiento
• Metabolismo
• Bioequivalencia
• Transporte
• Administración
Sigue los distintos apartados del programa anotando en tu cuaderno los conceptos más importantes
que van apareciendo y al final realiza los ejercicios de test que te propone el propio programa.
RESULTADOS Y COMENTARIOS
-51-
Enseñanza Asistidad por Ordenador.- Curso de Biofarmacia
-52-
Enseñanza Asistidad por Ordenador.- Curso de Biofarmacia
-53-
Enseñanza Asistidad por Ordenador.- Simulación Farmacocinética
∗ Simulation Examples
1.- Single Oral Dose: ¿Qué ocurre cuando se producen cambios en la ..
a)Dosis
b)Biodisponibilidad
c)Constante de eliminación
d)Constante de absorción
b)Constante de eliminación
-54-
Enseñanza Asistidad por Ordenador.- Simulación Farmacocinética
c)Dosis de carga
b)Constante α
c)Constante β
∗ Simulations:
1.- Introduction to Pharmacokinetic Parameters: Simular curvas Cp/t con los siguientes datos
a)Constante de eliminación: Ke= 0.1 - 0.5 – 1 – 2 (escala de Y= 100 unidades)
-55-
Enseñanza Asistidad por Ordenador.- Simulación Farmacocinética
d.2.-Ke = 0,5 y Vd = 10 y 25
-56-
Enseñanza Asistidad por Ordenador.- Simulación Farmacocinética
-57-
Ajuste de datos farmacocinéticos mediante regresión no lineal. Programa JANA
0.- Si es necesario cambiar configuración regional a Ingles de E.U., en configuración, panel de control
1.- Para comenzar el programa: con el raton posicionarse sobre "Inicio" y pulsar el botón izquierdo del ratón,
con lo que se delplegará una ventana. Sin dejar de apretar el botón izquierdo, arrastrar el ratón a
"Programas" y al desplegarse, colocarse sobre "Jana para Windows" y luego sobre "Jana para
Windows" otra vez
2.- Aparecerá una ventana en rojo con el nombre de la firma editora del programa SCI. Esperar unos instantes
y, al final, se muestra en pantalla una nueva ventana con el titulo Jana en la parte superior izquierda, sobre
fondo rojo, debajo aprecen unas palabras, iconos y una tabla X Y.
3.- Situarse en la parte superior derecha de esta ventana Jana; hacer clic sobre la figura de en medio " " para
que ocupen toda la pantalla las ventanas del programa.
4.- Para introducir los datos en la tabla X(tiempo) Y(concentración), es preciso previamente crear en una
tabla con el número de casillas apropiado: Situarse en la palabra "Edit", hacer CLIC y seleccionar "Add
rows"; aparecerá una nueva ventana donde se deberán indicar cuantas filas se quieren añadir a la ya existente
en la tabla de datos tiempo/concentración. El número de filas a añadir es igual al número de observaciones
menos una, aceptar con OK ó ┘.
5.- Introducir los datos tiempo/concentración en su correspondiente casilla. Separar los decimales con
punto y pulsar ┘ para que se acepte el dato. Para moverse de una casilla a otra hacerlo con el ratón
o con las flechas ↑→↓ ←.
6.- Nuevamente hacer CLIC sobre "File" y situarse sobre "Save data as" para archivar los datos.
Aparece una ventana, en cuya parte superior se escribe el nombre de archivo elegido con la extension
".DAT" (Ej.: ENSAYO-1.DAT). A continuación Aceptar.
7.- Situarse sobre el icono hacer CLIC para que represente gráficamente los datos.
8.- Situarse sobre la palabra "Window" de la ventana del programa Jana y desplegarla con 1 CLIC,
elegir "Tile" haciendo también CLIC para que las ventanas se coloquen de forma que se puedan ver la
tabla de datos y la gráfica.
9.- Situarse sobre el icono hacer CLIC, aparecerá una ventana con las siguientes instrucciones, que
permiten establecer las condiciones del estudio.
-58-
Ajuste de datos farmacocinéticos mediante regresión no lineal. Programa JANA
10.- Situarse sobre el icono que representa "una calculadora" y hacer CLIC para que el ordenador
realice el ajuste de datos según las condiciones establecidas en el punto anterior (condiciones del estudio).
11.- Para que las ventanas se coloquen de forma que se puedan ver la tabla de datos, la gráfica y los
resultados hacer lo siguiente: Situarse sobre la palabra "Window" y desplegarla con 1 CLIC, elegir
"Tile" haciendo también CLIC.
-59-
Ajuste de datos farmacocinéticos mediante regresión no lineal. Programa JANA
12.- Cuando en las condiciones del estudio se ha establecido en la casilla de "Maximun exponents" un
número superior a 1, hay hacer CLICK en el icono de "calculadora" tantas veces como indique dicho
núemro, para que el programa continúe realizando las operaciones de ajuste como se hizo en el apartado
10.
13.- Para IMPRIMIR los resultados situarse sobre el icono que representa "una impresora" y hacer
CLIC.
14.- Para ARCHIVAR el resultado del ajuste realizado situarse en la barra superior, elegir "File" hacer
CLIC, elegir "Save Output" y, en la parte superior izquierda de la ventana que se despliega, dar nombre
al archivo: el mismo que se dio a la tabla de datos, PERO AHORA CON LA EXTENSION "JAN" (Ej.:
ENSAYO-1.JAN). A continuación "Aceptar".
15.- Para realizar un NUEVO AJUSTE situarse nuevamente en la barra superior, elegir "File" hacer
CLIC, elegir "New" y aparece una nueca tabla de datos con dos casillas vacías. Realizar las mismas
operaciones que anteriormente desde el apartado 4.
16.- Para salir del programa hacer CLIC sobre el icono "EXIT".
En las paginas siguientes se proponen ejemplos con la finalidad de que el alumno analice cómo se modifica el
perfil de las curvas de niveles plasmáticos/tiempo al cambiar el valor de las constantes farmacocinéticas.
1.- Siguiendo las instrucciones de las páginas anteriores, utilizar el programa de regresión no lineal
JANA para establecer el modelo farmacocinética compartimental y la ecuación que mejor se ajusta a
los datos de cada uno de los ejemplos.
2.- Completar la tabla, que acompaña a cada grupo de jemplos, con los parámetros farmacocinéticas
obtenidos en el ajuste, indicando en cada caso el modelo compartimental y calculando las constantes
de velocidad de transferencia, el AUC, Cmax y tmax.
3.- Representa en papel milimetrado y en una misma gráfica los ejemplos propuesto en cada uno de
los grupos de simulaciones.
4.- Indica las ecuaciones Cp=f(t) para cada ejemplo y explica como influye el valor de las constantes
farmacocinéticas en la forma de las curvas.
-60-
Aplicación del programa JANA. Ajuste de datos simulados Grupo I
Realizar el ajuste de los datos de la práctica “Estudio farmacocinético del Rojo Fenol”
- Resultados :
- Resultados
-61-
Aplicación del programa JANA. Ajuste de datos simulados Grupo I
3.- Comentarios
-62-
Aplicación del programa JANA. Ajuste de datos simulados Grupo I
SIMULACIÓN GRUPO I
Tabla 25.- Concentraciones plasmáticas µg/mL
TIEMPO EJ-1 EJ-2 EJ-3 EJ-4
0,1 48,77 47,56 46,39 45,24
0,2 47,56 45,24 43,04 40,94
0,3 46,39 43,04 39,93 37,04
0,5 44,12 38,94 34,36 30,33
0,75 41,45 34,36 28,49 23,62
1 38,94 30,33 23,62 18,39
1,5 34,36 23,62 16,23 11,16
2 30,33 18,39 11,16 6,77
3 23,62 11,16 5,27 2,49
4 18,39 6,77 2,49 0,92
5 14,33 4,10 1,18 0,34
7 8,69 1,51 0,26 0,05
-63-
Aplicación del programa JANA. Ajuste de datos simulados Grupo I
Figura 25.- Representación gráfica de los datos de los ejemplo del GUPO I.
-64-
Aplicación del programa JANA. Ajuste de datos simulados Grupo II
SIMULACIÓN GRUPO II
Tabla 27.- Concentraciones plasmáticas µg/mL
Ti (h) EJ-5 EJ-6 EJ-7
0,1 37,70 42,87 46,65
0,2 30,06 37,22 43,59
0,3 25,25 32,73 40,78
0,5 20,11 26,25 35,85
0,7 17,70 22,00 31,69
0,9 16,30 19,13 28,17
1 15,78 18,04 26,61
1,4 14,12 15,00 21,49
2 12,13 12,33 16,19
3 9,45 9,46 10,94
4 7,36 7,36 7,91
5 5,73 5,73 5,93
-65-
Aplicación del programa JANA. Ajuste de datos simulados Grupo II
Figura 26.- Representación gráfica de los datos de los ejemplo del GUPO II
-66-
Aplicación del programa JANA. Ajuste de datos simulados Grupo III
-67-
Aplicación del programa JANA. Ajuste de datos simulados Grupo III
Figura 27.- Representación gráfica de los datos de los ejemplo del GUPO III.
-68-
Aplicación del programa JANA. Ajuste de datos simulados Grupo IV
SIMULACIÓN GRUPO IV
Tabla 31.- Concentraciones plasmáticas µg/mL
Tiempo EJ-11 EJ-12 EJ-13 EJ-14
0,1 4,6066 8,7702 19,0066 46,9002
0,2 8,4893 15,4069 29,3563 43,9927
0,3 11,7345 20,3305 34,5285 41,2653
0,5 16,6137 26,3434 36,9303 36,3075
0,75 20,3357 29,0921 34,1322 30,9392
1 22,1407 28,8204 29,8483 26,3646
1,5 22,1893 24,4931 21,9232 19,1446
2 19,8197 19,0972 15,9399 13,9019
3 13,4472 10,5977 8,4063 7,3303
4 8,1929 5,6595 4,4326 3,8652
5 4,7256 2,9939 2,3373 2,0381
7 1,4474 0,8333 0,6499 0,5667
-69-
Aplicación del programa JANA. Ajuste de datos simulados Grupo IV
Figura 28.- Representación gráfica de los datos de los ejemplo del GUPO IV.
-70-
Aplicación del programa JANA. Ajuste de datos simulados Grupo V
SIMULACIÓN GRUPO V
Tabla 33.- Concentraciones plasmáticas µg/mL
Tiempo EJ-15 EJ-16 EJ-17
0,1 8,9244 8,7702 8,6107
0,2 15,9673 15,4069 14,8411
0,3 21,4776 20,3305 19,2007
0,5 28,9899 26,3434 23,8651
0,75 33,8462 29,0921 24,9236
1 35,6166 28,8204 23,2544
1,5 34,5789 24,4931 17,3343
2 31,2056 19,0972 11,7020
3 23,7701 10,5977 4,7308
4 17,6976 5,6595 1,7980
5 13,1226 2,9939 0,6693
7 7,2033 0,8333 0,0911
-71-
Aplicación del programa JANA. Ajuste de datos simulados Grupo V
Figura 29.- Representación gráfica de los datos de los ejemplo del GUPO V.
-72-
Aplicación del programa JANA. Ajuste de datos simulados Grupo VI
SIMULACIÓN GRUPO VI
Tabla 35.- Concentraciones plasmáticas µg/mL
Ti (h) EJ-18 EJ-19 EJ-20 EJ-21
0,1 59,20 34,309 24,586 16,227
0,2 53,20 46,087 36,885 26,520
0,3 48,36 48,449 42,240 32,755
0,4 44,41 47,133 43,780 36,245
0,5 41,17 44,598 43,319 37,908
0,6 38,49 41,853 41,887 38,378
0,7 36,24 39,282 40,058 38,093
0,8 34,33 36,999 38,140 37,347
0,9 32,70 35,010 36,286 36,338
1 31,28 33,285 34,565 35,197
1,4 26,99 28,242 29,173 30,569
2 22,66 23,479 24,041 25,163
2,4 20,40 21,089 21,542 22,452
3 17,51 18,083 18,449 19,157
5 10,61 10,954 11,170 11,577
-73-
Aplicación del programa JANA. Ajuste de datos simulados Grupo VI
Figura 30.- Representación gráfica de los datos de los ejemplo del GUPO VI.
-74-
Aplicación del programa JANA. Ajuste de datos simulados Grupo VII
-75-
Aplicación del programa JANA. Ajuste de datos simulados Grupo VII
Figura 31.- Representación gráfica de los datos de los ejemplo del GUPO VII.
-76-