Proyecto de Unidad 8:

Separación de componentes por cromatografía e identificación de grupos funcionales por

FTIR presentes en Amaranto (Amaranthus cruentus)
Arriola Benítez, F.; Cervantes Chávez, I.; Espín Acevedo, E.; Hernández Bustos, K.Y., Salgado
Paniagua, M.
Instituto Tecnológico de Zacatepec. Ingeniería Bioquímica. Asignatura: Análisis Instrumental. Catedrático
Dra. Areli Marlen Salgado Delgado. Grupo WB. Calzada Tecnológico No. 27, C.P. 62780, Zacatepec de
Hidalgo, Morelos. Email: kyaherbus@gmail.com, elmetrico72@gmail.com, buho6417@gmail.com,
esteban.espin95@gmail.com, melyspa.itz@gmail.com

1. Introducción
El amaranto (amaranthus cruentus) es un cereal
de origen americano, representa una fuente
importante de proteína, calcio, hierro y otros
compuestos que son necesarios para la
alimentación.
La forma más común en la que los mexicanos
consumimos amaranto es a través del dulce
típico denominado Alegría, donde la semilla se
aglomera con miel o azúcar y suele
acompañarse de frutos secos moldeándose en
barritas, a pesar de la cotidianeidad de su
consumo no son muy difundidas las
propiedades y beneficios alimenticios que
obtenemos con su ingesta.
En los últimos años han incrementado el
número de estudios que se le han realizado a
ésta semilla americana. Hoy en día es de suma
importancia ofrecer a la población productos
que tengan una aportación nutrimental real y
que tengan alta disponibilidad.
1.1 Origen de la semilla de amaranto
Todas las especies del género Amaranthus
tienen su origen en América, pues las
evidencias arqueológicas confirman esto. Las
excavaciones realizadas por Mac Neish en 1964
indican que los indígenas ya cultivaban estas
plantas en el periodo 5 200 a 3 400 a. C., por lo
que su domesticación se llevó a cabo en la
misma época que la del maíz (Barros y
Buenrostro, 1997). Amaranthus cruentus, es
originaria de América Central, probablemente
de Guatemala y el suroeste de México, tiene una
antigüedad de 4 000 años.
Los amarantos fueron nombrados huautli por
los aztecas, probablemente proveniente de
huactlli que significa “cosa que se pone a secar
al exterior”.
El amaranto en la Mesa Central de México fue
uno de los granos mayormente cultivados como
alimento en los tiempos anteriores a la
conquista.
1.2 Composición de la semilla de amaranto
El valor nutritivo de los granos de amaranto
implica además de su contenido proteico, un
excelente espectro de aminoácidos y los niveles
de vitaminas y minerales. Se ha reportado
contenidos de proteína en amaranto que van de
15 a 17%. Pero no es relevante sólo la cantidad
sino la calidad de la proteína, la cual presenta un
excelente balance de aminoácidos. Por su
composición la proteína de amaranto se asemeja
a la de la leche, acercándose mucho a la
proteína ideal propuesta por la FAO para la
alimentación humana. Tiene un contenido
importante de lisina, aminoácido esencial en la
alimentación humana y que es limitado en otros
cereales. “Además el amaranto puede aportar
cantidades importantes de fibra dietética y
vitaminas E y B, puede ser una fuente
importante de niacina (para la producción de
hormonas sexuales, del crecimiento y del
metabolismo), y lisina (para la producción de
anticuerpos, hormonas y enzimas), así como de
fósforo (para la formación de hueso y la función
renal) y de magnesio (para el metabolismo del
azúcar en sangre y relajante del músculo liso”
(Mapes, 2015).
 Separación de componentes por cromatografía e identificación de grupos funcionales por FTIR
presentes en Amaranto (Amaranthus cruentus)
Los análisis de la composición proximal de las
harinas de la semilla del amaranto muestran que
el contenido de proteína varía entre 13 y 18%, la
grasa va de 6.3 a 8.1 %, la fibra es de entre 2.2 y
5.8% el contenido de cenizas es de 2.8% a
4.4% (Huerta y Barba de la Rosa, 2012).
1.3 Propiedades y usos de la semilla de
amaranto
El principal uso de la semilla de amaranto es
fungir como alimento, Fray Bernardino de
Sahagún reporta en la Historia General de las
Cosas de la Nueva España que sus informantes
decían comer el amaranto cociéndolo y
sazonándolo con sal, se hacían tamales de ésta
planta llamados quiltamalli, y las tortillas que se
hacían mezclando maíz y amaranto recibían el
nombre de quilxcalli.
Actualmente el amaranto es utilizado para la
elaboración de dulces típicos mexicanos
conocidos como alegrías, que pueden hacerse
con miel como aglomerante y también
Figura 1. Molécula de Escualeno. Tomada de Carey, F.A. (2006) Química Orgánica (6ª Edición). McGraw-Hill/
Interamericana Editores, S.A. DE C.V.: México
1.3 Cromatografía de capa fina
La técnica utilizada en ésta práctica es la
cromatografía de capa fina, dentro de ésta la
fase estacionaria consiste en una capa delgada
de un absorbente (por ejemplo gel de silica,
alúmina o celulosa) depositada sobre un soporte
plano, como una placa de vidrio, o una lámina
que puede ser de aluminio o plástico.
“La cromatografía es un método físico de
separación; en el cual los componentes que se
van a separar se distribuyen entre dos fases; una
de éstas fases constituye una capa estacionaria
de gran área superficial, la otra es un fluido que
chocolate, también pueden agregarse las
semillas a licuados y a cocteles de fruta.
El almidón es el principal componente de la
semilla de amaranto, representa entre 50 y 60%
de su peso seco.
Las semillas de amaranto son bajas en
contenido de lípidos (de 7 a 8%), además de que
su precio es muy alto en el mercado para poder
competir con los aceites comerciales existentes.
Aunque el aceite de amaranto no presenta
ninguna característica particular resaltable,
estudios han reportado la presencia de un
contenido relativamente alto de escualeno,
aproximando el 7 a 8% del aceite de la semilla.
El escualeno es un triterpeno cuya estructura
consta de 30 carbonos. Además es una sustancia
muy utilizada en la industria cosmética, como
lubricante de máquinas, y precursor de
esteroides. Se obtiene comúnmente de animales
marinos como la ballena y el tiburón, Japón y
Noruega son los principales países productores
de escualeno. [ CITATION Map15 \l 2058 ]
eluye a través o a lo largo de la estacionaria.”
(Day, 1989)
La cromatografía de capa fina tiene como
objetivo el análisis de una mezcla de
componentes.
“El proceso es similar a la cromatografía de
papel con la ventaja de que se desarrolla más
rápidamente, proporciona mejores separaciones
y se puede elegir entre diferentes adsorbentes.
La CCF (TLC en inglés) es una técnica estándar
en el laboratorio de química orgánica. Debido a
su simplicidad y velocidad, la CCF se utiliza a
menudo para monitorizar las reacciones
químicas y también para el análisis cualitativo
2
 Separación de componentes por cromatografía e identificación de grupos funcionales por FTIR
de los productos de una reacción, puesto que
permite conocer de manera rápida y sencilla
cuántos componentes hay en una mezcla.”
(Angurel et al. 2017)
1. 4 Cromatografía en columna
Es una técnica de purificación, puesto que
permite aislar los compuestos deseados de una
mezcla. La cromatografía en columna utiliza
una columna de vidrio vertical que se llena con
un soporte sólido adsorbente.
1.5 FTIR (Espectroscopia de Infrarrojos con
Transformada de Furier)
El espectro se descompone en las longitudes de
onda que lo componen, cada una de éstas se
dirige a un detector elemental. En la región de
infrarrojos, el método más adecuado para
observar todo el espectro a la vez es mediante la
espectroscopia con transformada de Fourier.
Dicho análisis es un procedimiento mediante el
cual la curva se descompone en una suma en
términos con senos y cosenos llamada serie de
Fourier.
La espectroscopía FTIR ofrece una amplia
variedad de posibilidades de análisis en los
laboratorios académicos, de análisis, de
aseguramiento y control de la calidad, y
forenses. Estrechamente relacionada con
infinidad de áreas, desde la identificación de
compuestos sencillos hasta el control de los
procesos y la conformidad con la normativa, la
técnica FTIR es aplicable a una amplia variedad
de aplicaciones químicas, como es el caso
concreto de los polímeros y los compuestos
orgánicos.
2. Objetivos
3.1 Objetivo general.
 Extraer el aceite de la semilla de
amaranto y refinarlo.
 Aplicar técnicas de análisis para la
identificación de compuestos en aceite
de amaranto.
3.2 Objetivos específicos
presentes en Amaranto (Amaranthus cruentus)
 Aplicar cromatografía en capa fina para
la identificación de grupos funcionales
y compuestos nitrogenados en el aceite
de amaranto.
 Analizar resultados obtenidos en FTIR
de la muestra de aceite de amaranto.
3. Desarrollo experimental
Se compró semilla en el mercado municipal de
Taxco y se molió a mano en un mortero con
pistilo.
3.1 Maceración
Se realizó la extracción del aceite de la semilla
de amaranto a través de un proceso de
maceración con solvente hexano, dejándose un
tiempo de 8 días.
Posteriormente se filtró para eliminar las
semillas y dejar sólo la parte líquida.
3.2 Desgomado
Se realizó un desgomado según el método de
Ariza-Ortega et al., a través de hidratación
agregando un 2% de agua al aceite extraído.
3.3 Neutralización
Siguiendo el método de Ariza-Ortega et al., se
separó el aceite desgomado en 4 tubos de
ensaye y se calentaron a 60° C. Posteriormente
se agregó una solución de Na2CO3 a una
concentración de 7 N en un 35% (v/v),
enseguida una solución de NaOH a 10 N al 10%
(v/v) y NaCl al 10% (w/v). Se agregó agua
caliente al 50% (v/v). Tras éste proceso se
obtuvo 56 mL de una mezcla bifásica.
No se sometió el aceite a centrifugado como el
método indicaba.
3.4 Drenado
Se utilizó un matraz de decantación para hacer
una separación de fases.
3.5 Cromatografía en capa fina
Se cortaron 3 placas de silica, en 2 placas se
colocaron muestras de la primera fase y la
segunda fase. La fase móvil fue acetato de etilo
para la primera placa marcando con el número 1
3
 Separación de componentes por cromatografía e identificación de grupos funcionales por FTIR
la fase 2 y con el número 2 la fase 1
(correspondiente al aceite), hexano para la
segunda placa marcando con el número 1 la fase
2 y con el número 2 la fase 1 (correspondiente
al aceite), y una mezcla 1:1 de acetato de etilo
con hexano, la última sólo marcando en la placa
la fase 1.
Las 3 placas fueron expuestas a luz UV,
posteriormente yodo sublimado y ácido
sulfúrico con cloruro de cobalto como
revelador.
3.6 Cromatografía en columna
La muestra de fase 1 (correspondiente al aceite)
se colocó en una columna para cromatografía, la
fase móvil utilizada fue acetato de etilo y
hexano 1:1, se rellenó en 4 ocasiones hasta
llenar 18 tubos de ensaye de 15x100.
Posteriormente se realizó en una placa de silica
la colocación de las 18 muestras obtenidas a
través del desplazamiento del solvente-extracto
en la columna.
4. Resultados y discusión
Las placas cromatográficas que se hicieron con
hexano y acetato de etilo (figura 2 y 3) no
mostraron ningún compuesto con grupos
presentes en Amaranto (Amaranthus cruentus)
funcionales para la fase 2, marcada con el
número 1 en la placa, por lo que la separación y
neutralización fue exitosa y dicho resultado
indica que ésta fase es agua.
En la placa cromatográfica con hexano como
fase móvil (figura 2) se observó un arrastre de
menor velocidad, esto se debe a que el hexano
es un solvente de baja polaridad por lo que tiene
baja fuerza eluyente. Mientras que la placa
cromatográfica con acetato de etilo como fase
móvil (figura 3) presentó una velocidad muy
alta, ya que se observa que la separación está
hasta arriba de la placa, esto se debe a que la
fuerza eluyente del acetato de etilo es mayor y
su polaridad más alta, esto último nos indica
que no hay compuestos que sean demasiado
polares en la muestra de aceite.
Tras obtener éstos resultados se procedió a
realizar la placa con una mezcla de ambos
solventes, hexano y acetato de etilo a una
relación 1:1, esto para obtener una velocidad
promedio con un comportamiento uniforme que
permitiera una mayor separación entre los
posibles compuestos y ver el arrastre del
extracto a lo largo de la placa (figura 4), el
resultado fue muy parecido al obtenido con el
acetato de etilo.
4
 Separación de componentes por cromatografía e identificación de grupos funcionales por FTIR
presentes en Amaranto (Amaranthus cruentus)

Figura 2. Placa cromatográfica con Figura 3. Placa cromatográfica con Figura 4. Placa expuesta a luz
hexano como fase móvil. acetato de etilo como fase móvil. UV, usando acetato de etilo y
hexano como fase móvil.

La placa tratada con el revelador preparado con

Figura 5. Placa cromatográfica revelada con
nihidrina y acetona para identificación de
compuestos nitrogenados.
nihidrina y acetona a relación 1:1, que tiene como
objetivo la identificación de compuestos nitrogenados
(grupos amino) confirmó la presencia de éstos, cosa que
se esperaba pues en la literatura se reporta que el
amaranto contiene proteínas y aminoácidos de buenas
características y cantidades, la línea al centro marcada
con el número 1 corresponde a la muestra obtenida al
principio después de la primera maceración y refinación,
y la línea marcada con el número 2 es la re-extraída del
roto evaporador. Adicionalmente se puso en la misma
placa una muestra de maceración en agua de la semilla
de amaranto marcada con la letra S, presentando un
resultado de velocidad de arrastre parecido a la re-
extraída con el roto evaporador. Dichos resultados
demuestran que las propiedades nutritivas del amaranto
respecto a aminoácidos no se pierden durante el proceso
de extracción y refinación de aceite.
Con respecto al aspecto inclinado de la placa de la figura
4, se atribuye a un error de manejo.

Por último se realizó una muestra una placa con las muestras sacadas de cromatografía en columna,
sin embargo los resultados obtenidos son analizables, pues sólo es posible ver una curva, éste
resultado fue compartido con otros equipos en el laboratorio. Se atribuye esto a una posible
contaminación de las placas para cromatografía.

Figura 6. Cromatografía de capa fina con muestras sometidas a

purificación en columna

En los resultados obtenidos por el análisis FTIR,

llevado a cabo en un equipo Perkin Elmer Spectrum
Two se observan varias señales que indican la posible
presencia de escualeno, molécula de interés en este
proyecto.

5
 Separación de componentes por cromatografía e identificación de grupos funcionales por FTIR
presentes en Amaranto (Amaranthus cruentus)

FTIR de Muestra de Extracto de Aceite de Amaranto

100

80
% Transmitancia

60

40

20

0
4000 3500 3000 2500 2000 1500 1000 500
cm-1

Figura 7. Gráfica resultante de análisis de la muestra de aceite en FTIR.

FTIR de Muestra de Extracto de Aceite de Amaranto CC

100

80
Transmitancia

60

40

20

0
4000 3500 3000 2500 2000 1500 1000 500
cm-1

Figura 8. Gráfica resultante de análisis de la muestra de aceite en FTIR tras cromatografía en columna.

En la zona de 3000 a 2800 cm -1, vemos un En la zona de 1800 cm-1, hay un grupo carbonilo
estiramiento asimétrico y simétrico de CH 3 y que presenta estiramiento C=O, estiramiento del
CH2. doble enlace carbono oxígeno.

6
 Separación de componentes por cromatografía e identificación de grupos funcionales por FTIR
presentes en Amaranto (Amaranthus cruentus)
En 1500 cm-1 tenemos una las flexiones de la que alguna otra molécula dentro del aceite
zona alifática (balanceo del CH 3, tijereteo del presente esta composición.
CH2 y sombrilla del CH3).
A continuación se presenta un espectro de la
En 1000 cm-1 señal que indica oxígeno, la molécula de escualeno (figura 8) obtenido por
molécula de escualeno no tiene oxígeno en ella, Obregón Blandón, 2011., para hacer una
pero pude existir alguna molécula que si tenga comparación y encontrar similitudes entre
carbonilo en su estructura. FTIR:

En 650 cm-1 tenemos la señal “rocking”, la cual Como se esperaba y se mencionaba

nos dice que hay cuatro CH2 en fila, y de forma anteriormente, existen estiramientos de la
similar al oxígeno, aunque la molécula buscada región alifática, estiramientos de C=C, y
no tiene esta cadena de cuatro CH 2, puede ser flexiones en la región alifática.

5. Conclusiones
Los resultados obtenidos a través de la técnica interpretar debido a que suponemos que
de cromatografía de capa fina demuestran que el presenta una contaminación la placa usada.
aceite de amaranto tiene presentes compuestos
El FTIR obtenido a partir de una muestra de
orgánicos con grupos funcionales y grupo
aceite mostró distintos grupos funcionales que
amino. Por lo que se concluye que el proceso de
muestran la posible presencia de la molécula de
extracción y refinación del aceite no afecta los
Figura 9. FTIR reportado por Ortiz-Acosta, 2011.
nutrientes de los cuales goza la semilla.
interés para éste proyecto, el escualeno, a falta
La placa hecha a partir de la separación por de un RMN u otra técnica complementaria, se
cromatografía de columna no se puede concluye que el aceite contiene dicha molécula
como se menciona en la literatura.

6. Referencias
Angurel, I. et al. (2017) Operaciones en el laboratorio de química: Cromatografía. Recuperado de
Universidad de Barcelona el 26 de febrero del 2018 en http://www.ub.edu/oblq/oblq
%20castellano/cromatografia_tipus.html
Ariza-Ortega, J.A. et al. (2004) Desgomado y Neutralizado del Aceite de Amaranto. Puebla: CIBA-
IPN
Carey, F.A. (2006) Química Orgánica. (6ª Edición). México: McGraw-Hill/ Interamericana
Editores, S.A. DE C.V.

7
 Separación de componentes por cromatografía e identificación de grupos funcionales por FTIR
presentes en Amaranto (Amaranthus cruentus)
Day, R.A., Underwood, A.L., (1989) Química Analítica Cuantitativa (5ta ed). México: Prentice-
Hall
Mapes S., E.C. (2015). El Amaranto. Ciencia. Revista de la Academia Mexicana de Ciencias., vol.
66, pág. 8-15.
Obregón Blandón, E. A. (2011). Síntesis de polímeros a partir de materias primas naturales como
el escualeno utilizando la técnica de foto polimerización TIOL-ENE. Nicaragua:
Universidad Nacional de Ingeniería.