el ELISA competitivo se utiliza con mayor frecuencia cuando sólo hay un anticuerpo

disponible para detectar el antígeno de interés. Los ELISA competitivos también son útiles
para detectar un pequeño antígeno con un solo epítopo de anticuerpos que no puede
acomodar dos anticuerpos diferentes debido a la obstrucción estática.

el ensayo ELISA competitivo se utiliza para detectar antígenos solubles. Es fácil

de realizar, pero sólo es adecuado cuando el antígeno purificado está disponible
en una cantidad relativamente grande. El procedimiento general para el ensayo
ELISA competitivo es:

1. Capa de pozos con antígeno

2. Incubar y lavar
3. Muestra de prueba de pre-incubación con anticuerpos primarios conjugados
enzimáticos
4. Agregue la mezcla al pozo
5. Incubar y lavar cualquier anticuerpo primario conjugado en enzimas sin
ataduras
6. Añadir sustrato

La "competencia" en este ensayo proviene del hecho de que más antígeno en la muestra
de prueba utilizada en el paso 3 resultará en menos anticuerpos disponibles para unir se
adhieren al antígeno que recubre el pozo. Por lo tanto, la intensidad del producto
cromogénico/fluorogénico en el pozo al final del ensayo está inversamente relacionada
con la cantidad de antígeno presente en la muestra de ensayo.
Los pasos de un ELISA competitivo son diferentes de los utilizados en ELISA indirecto y
sándwich, siendo la principal diferencia el paso de unión competitivo entre el antígeno de
muestra y el antígeno "add-in". El antígeno de la muestra se incuba con el anticuerpo
primario sin etiquetar. Estos complejos de anticuerpos y antígenos se añaden a la placa
ELISA, que ha sido pre-revestida con el mismo antígeno. Después de un período de
incubación, cualquier anticuerpo no unido se lava. Existe una correlación inversa entre la
cantidad de anticuerpos libres disponibles para unir el antígeno en el pozo y la cantidad
de antígeno en la muestra original. Por ejemplo, una muestra con antígeno abundante
tendría más complejos de anticuerpos antigen primarios, dejando poco anticuerpo sin
ataduras para unirse a la placa ELISA. Luego se añade a los pozos un anticuerpo
secundario conjugado en zimdo específico para el anticuerpo primario, seguido por el
sustrato.