ELISA

(Enzyme-Linked
ImmunoSorbent Assay)
Prueba
Inmunoabsorbente
Ligado a Enzimas

ELISA
HISTORIA
1959 Yalowy Berson, precursor de los ensayos
inmunoenzimticos que fueron descritos originalmente en
1971 por Engvall y Perlmann, y Van Wemeny y Schuurs.

El uso de material radiactivo ha limitado el uso del

radioinmunoensayo, y a la vez a popularizado el empleo

del inmunoensayo enzimtico (EIA), del que hay dos
tcnicas principales:

El ensayo inmunoabsorbente ligado a enzimas.

El ensayo inmunolgico multiplicado por enzimas.

ELISA
La prueba de ELISA

se basa en la reaccin
antgeno-anticuerpo,
uno de los cuales
debe ser de
reactividad conocida.
El color se genera por
la interaccin de un
sustrato cromognico
y una enzima que ha
sido acoplada al
anticuerpo detector.

ELISA
Los mtodos de ELISA dependiendo de
la actividad enzimtica se dividen en
dos tipos:

Competitivos
No competitivos

ELISA
ELISA COMPETITIVO:
En este mtodo, el anticuerpo de la
muestra va a competir con el conjugado
por un nmero limitado de sitios de unin
del antgeno. Habr ausencia de color en
una muestra positiva debido a que el
sustrato no encontrar a la enzima porque
el conjugado ha sido desplazado por el
anticuerpo presente en la muestra.

ELISA
ELISA NO COMPETITIVO:
Consiste en enfrentar la muestra con el
antgeno o anticuerpo que est en la
fase slida. Si una muestra es positiva
se formar el complejo antgenoanticuerpo y al agregar el conjugado
reaccionar con el respectivo sustrato
desarrollando color.

ELISA
Dentro de los no competitivos tenemos:
Los directos que detectan antgenos
Los indirectos que detectan
anticuerpos.

ELISA

1.
2.

Pasos generales de un ELISA

Tapizado del pocillo con el antgeno o anticuerpo
Adicin de la muestra problema con la mezcla de antgenos o
anticuerpos
3. Unin del antgeno o anticuerpo especfico al anticuerpo o
antgeno tapizado en el posillo.
4. Lavado del pocillo para eliminar el exceso de anticuerpo o
antgeno no unido
5. Adicin del anticuerpo secundario marcado con la enzima
6. Unin del anticuerpo secundario al antgeno o anticuerpo
7. Lavado del pocillo para eliminar el exceso de enzima no unida
8. Adicin del sustrato
9. Unin del sustrato a la enzima
10. Desarrollo del color

 Se recomienda realizar
unELISAen todas las
situaciones en las que
se quieran
detectarantgenoscuy
a existencia pueda ser
determinante para un
diagnstico o para
establecer conclusiones
en un estudio cientfico.
Algunas de las
situaciones ms
frecuentes donde se usa
el ELISA son:

Preparacin para un
ELISA

Duracin
Ingreso
Compaa
Medicamentos
Comida
Ropa
Documentos
Embarazo y lactancia
Contraindicaciones

Complicaciones del ELISA

El nico riesgo es aceptar resultados
falsos como positivos o negativos, y
tomar medidas equivocadas al respecto.