MICROBIOLOGIA Teorico 21

Biofilms Microbianos

Comunidades de microorganismos que crecen adheridos a una superficie abiótica o a un tejido,

embebidos en una matriz de sustancias poliméricas extracelulares (EPS)  Exopolisacaridos
complejos, proteínas, ADN extracelular.
Los biofilms representan la forma habitual de crecimiento de los microorganismos en la naturaleza.
Efectos beneficiosos de los Biofilms:
 Papel protector: Biofilms de Lactobacillus spp en la vagina previenen colonización por
patógenos.
 Biorremediacion de aguas residuales y suelos: Degradan sustancias organizas con
producción de materia y bacterias que oxidan petróleo.

Efectos perjudiciales de los Biofilms:

 Factores de virulencia: Infecciones asociadas al uso de productos médicos y protesis. Por
ejemplo, formación de biofilms en la luz de catéteres, donde el microorganismo puede ingresar
por una vía endógena o exógena y se depositan en la superficie del polímero, tiene nutrientes,
agua, temperatura y tiempo para que se produzcan.

Etapas de la formación del biofilm

1. Adhesión reversible (características de la superficie: hidrofobicidad, carga, rugosidad).
2. Adhesión irreversible (características del microorganismo, por fimbrias)
3. Migración en la superficie y división celular para formar pequeñas microcolonias en una matriz
de EPS (exopolisacáridos, proteínas y ADN).
4. Maduración de las microcolonias en la matriz de EPS. Arquitectura: canales que permiten el
flujo de agua, oxígeno y nutrientes.
5. Dispersión: Se desprenden o algunas adquieren las capacidades para iniciar un nuevo ciclo.

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Quorum Sensing
Mecanismo de comunicación célula – célula (intraespecies o interespecies) mediante el cual las
bacterias regulan, en forma concertada, la expresión de ciertos genes en respuesta a la densidad
celular. Los sistemas de QS regulan una amplia variedad de procesos:
• formación de biofilms
• producción de factores de virulencia
• producción de bioluminiscencia, etc.
Se basa en la producción de moléculas señal difusibles, cuya acumulación en el medio permite a las
bacterias censar la densidad poblacional (percepción de quorum) y controlar coordinadamente la
expresión de ciertos genes.
Molécula señal o autoinductor:
 Gram negativo: Homoseril lactonas.
El sistema de QS consta de LuxI, que sintetiza el AI y LuxR, el activador de la transcripción.
En estado planctónico, (baja densidad celular), se sintetizan pequeñas cantidades del AI, y la
producción de luz no es evidente. En cambio, cuando V. fischeri se encuentra en el órgano
generador de luz del calamar, la densidad celular es elevada y la concentración del AI aumenta
hasta alcanzar un umbral y se une a LuxR, y el complejo LuxR-HSL se une a la región promotora
del operón luxCDABE e induce la expresión de la enzima luciferasa que oxida el sustrato
luciferina.
P. aeruginosa posee dos sistemas de comunicación de tipo LuxI/LuxR denominados LasI/LasR y
RhlI/RhlR, los cuales funcionan en serie para controlar la expresión de diferentes factores de
patogenicidad y la formación de biofilms.

 Gram positivo: Péptidos pequeños.

El sistema regulador de 2 componentes compuesto por la histidina kinasa AgrC y la proteína
reguladora AgrA responde a la presencia del AIP. AgrA–P activa la transcripción desde los
promotores P2 y P3 de agr. RNA III, con funciones reguladoras, activa la producción de factores
de virulencia y regula negativamente la formación de biofilms promoviendo su dispersión.

Métodos de estudio de biofilms

• Evaluación de la biomasa del biofilm y del número de células viables
• Microscopía
o óptica de campo claro y de fluorescencia
o confocal láser de barrido (CLSM)
o electrónica de barrido (SEM)
• Genómica y proteómica

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Biofilms como factor de virulencia:

 Más resistencia a ATB: La sensibilidad a antimicrobianos de los mismos es hasta 1000 veces
menor que la de su contraparte planctónica. La resistencia a los antimicrobianos se asocia
generalmente con cambios genéticos (adquisición de genes de resistencia o mutaciones). Sin
embargo, la resistencia de los biofilms o recalcitrancia no depende de cambios genotípicos, se
trata de una resistencia fenotípica y por lo tanto, reversible al volver al modo planctónico.
 La matriz de EPS es una barrera física y química que previene la penetración
 Las bacterias presentes en las capas superficiales “absorben el
 daño” y protegen a las situadas en el interior
 La generación de gradientes de concentración de pH, oxígeno y nutrientes que crean
diferentes microambientes
 La menor velocidad de crecimiento
 La existencia de un fenotipo del biofilm (respuesta al estrés, aumento de actividad de
bombas de eflujo)
 La mayor proporción de microorganismos persistentes, con muy baja actividad metabólica.
 Mecanismos de defensa del huésped.

Algunos factores afectan especialmente a ciertas familias de antimicrobianos:

Aminoglucósidos
 Limitación de la penetración por interacción con la matriz
 Gradientes de concentración de oxígeno

Betalactámicos
 Gradientes de concentración de nutrientes y oxígeno, reducción de la actividad metabólica y
de la velocidad de crecimiento
No existe un fenotipo del biofilm sino un espectro de fenotipos:
El Biofilm maduro tiene diferentes microambientes con gradientes de concentración de nutrientes,
oxígeno, pH. Cuando las células se liberan recuperan el fenotipo planctónico.

Técnicas para determinar la susceptibilidad de los biofilms:

✓ Calgary Biofilm Device: (pegs) MIC-biofilm y MBEC (minimal biofilm eradication concentration)
✓ Minimal Regrowth Concentration (MRC)
✓ Recuentos de viables

Inhibidores del QS: Inactivación de autoinductores mediante lactonasas o interferencia mediante

análogos del autoinductor que bloquean el receptor.