MANUAL DE PROTOCOLOS

ÁREA DE QUIMICA
CUERPO TECNICO DE INVESTIGACIÓN
ANÁLISIS DE OPIO Y SUS DERIVADOS FGN-AOP-PQ-02

1. OBJETIVO
Establecer los métodos de análisis para los derivados del opio, tanto cualitativos como
cuantitativos para ser empleados en los laboratorios de Química de la Fiscalía General de la
Nación.

2. ALCANCE
Aplica a las muestras incautadas que lleguen al laboratorio, enviadas por la autoridad
correspondiente. Inicia cuando se reciben las muestras para análisis y termina con la
elaboración y envío de un dictamen.

3. PROTOCOLOS RELACIONADOS
· Manual de Procedimientos de Identificación preliminar.
· Manuales de Procedimientos para el manejo de Equipos
· Manuales de Procedimiento para el tratamiento de muestra.

4. DEFINICIONES CONCEPTUALES
· Opio: El opio es un producto natural que se obtiene practicando incisiones en las cápsulas
de la amapola (adormidera) antes de madurar. El opio en bruto es una mezcla compleja
formada por azúcares, proteínas, lípidos, otras sustancias viscosas y agua, razón por la cual
la proporción del alcaloide activo representa únicamente del 10% al 20% del peso total. Se
conocen unos 40 alcaloides. Cabe considerar a cuatro o cinco de ellos como los principales
componentes y dividirlo, a su vez, en las dos categorías generales siguientes: los alcaloides
fenantrénicos, representados por la morfina, la codeína y la tebaína, y los alcaloides
isoquilinos, que comprenden la papaverina y la noscapina.

En la actualidad para la obtención industrial del opio y sus alcaloides, se utiliza toda la planta
seca y madura (tallos, flores, hojas y cápsulas), produciendo un verdadero
"extracto concentrado", un producto en forma de polvo fino de color café claro, y olor
característico.

La morfina es el principal alcaloide del opio y su concentración varía entre el 4% y el 21%,

con un valor medio comprendido entre el 8% y el 14%. Utilizado como un potente analgésico.

La codeína se encuentra en el opio en bruto en concentraciones que oscilan entre el 0,7% y

el 3%. Su presencia como impureza en la morfina en bruto utilizada para elaborar heroína da
lugar a la formación de acetilcodeína, utilizado como un potente supresor de la tos.

La tebaína es un alcaloide poco importante de la Papaver somniferum, en la que aparece con

una concentración del 0.22% al 1%.
El contenido en papaverina oscila por regla general entre el 0.5% y el 1.3%. Utilizado como
relajante muscular suave y vasodilatador cerebral.

Color: En estado húmedo, castaño oscuro y seco, de marrón a negro.

Olor: Característico a regaliz.
La heroína es un producto semisintético obtenido por acetilación a partir de la morfina.

5. NORMATIVIDAD
Código de Procedimiento Penal. Ley 906 de 2004
Código de Procedimiento Penal, Ley 600 de 2000
Ley 30 de 1986

6. FUNDAMENTO TEÒRICO

6.1. COMPOSICION QUÍMICA DEL OPIO

El opio, contiene según distintos autores, más de veinte alcaloides. Su composición es la
siguiente:

Sustancia Porcentaje
Morfina 10
Narcotina 6
Papaverina 1
Narceina 1
Codeína 0,7
Tebaína 0,15
Laudamina 5
Laudanisina 5
Cortanina trazas
Santiopina trazas
Seudomorfina trazas
Protopina trazas
Materias extractivas
(Caucho, grasas, resina, meconina) 31
Mucilago, goma 20
Agua 10

Nota: La concentración de los alcaloides puede variar dependiendo de factores como clima,
altitud, fertilidad del suelo, edad de la planta y tiempo de incisión.

6.2 FORMULAS Y PROPIEDADES QUIMICAS DE LOS ALCALOIDES DEL OPIO.

· Morfina

Formula: 17 19 3 C H NO
Peso molecular = 285,3
Punto de Fusión:
Morfina base 254 ºC
Morfina Clorhidrato 200 ºC con descomposición

· Codeína

Fórmula 18 21 3 C H NO
Peso molecular = 299,4
Punto de fusión:
Codeína Base 154-158 °C
Codeína Clorhidrato 200 °C (descomposición)
Codeína Sulfato 250 °C (descomposición)

· Heroína

Fórmula: C21H23NO5
Peso Molecular = 369.4
Punto de Fusión:
Heroína base 170-173 ºC
Heroína clorhidrato 229-233 ºC

· Noscapina

Fórmula: 22 23 7 C H NO
Peso molecular = 413,4
Punto de fusión:
Noscapina base 176 ºC (sublimación)
Noscapina clorhidrato 220 ºC con descomposición

· Papaverina

Fórmula: C20H21NO4
Peso molecular = 339,4
Punto de fusión:
Papaverina base 146-148 ºC (sublimación)
Papaverina clorhidrato 220-225 ºC

· Tebaina

Fórmula C19H21NO3
Peso molecular = 311,4
Punto de fusión:
Tebaina base 193 ºC

6.3. DESCRIPCIÓN
Amapola
La adormidera o amapola (Papaver Somniferum) Es una hierba anual dentro de los cultivos
comunes, mide la planta de 1.00 a 1.50 m de altura, con hojas alternas grandes
pinnatisectas, de color verde glauco. Sus flores (amapolas) son grandes, con pétalos blancos
o color púrpura. Sus frutos son cápsulas ovales o globulosas, coronadas por un disco o
coronada radial de estigmas de la flor, cada cápsula produce 25.000 a 30.000 semillas,
pertenece a la familia de las papaveráceas.

Sus orígenes se remontan a 300 a.C. en la región del Mediterráneo, Hungría, Yugoslavia,
Bulgaria, Macedonia, Oriente Medio, Egipto, Afganistán, Irán, India, China, Birmania y
México.

Adormidera (Papaver somniferum): a la derecha, flor; arriba, a la

izquierda cápsula, con cortes oblicuos para sacarle el opio.

7. MUESTRAS
Muestras de opio o sus derivados debidamente embaladas como opio bruto o sus derivados
naturales o semi sintéticos en los diferentes sistemas de camuflaje.

8. EQUIPO Y MATERIAL REQUERIDO

Molino para sólidos secos
Balanza analítica y de precisión
Centrifuga
Material de vidrio
Placa excabada de porcelanas
Frascos goteros
Microespatulas
Kit PIPH
Microscopio
Placas y camara de desarrollo
Lámpara UV para revelar placas ccd
Capilares o micropipeta
Estufa para secado
Espectrofotometro Uv – Vis Unicam
Balanza analítica Metter Toledo AB
Cromatógrafo de gases: VARIAN 3400
Balanza analitica Metter Toledo AB
Cromatógrafo de gases con detector selectivo de masas Agilent tecnology
Espectrofotómetro FTIR ITT Mattson
Pastillador manual

9. REACTIVOS
- tiocianato de cobalto II
- cloruro de Estaño II
- Reactivo de Tanred
- Reactivo de Marquis
- Reactivo de Scott
- Reactivo de Sanchez
- Glicerina (calidad farmacéutica)
- Ácido clorhídrico concentrado
- Cloroformo
- Etanol
- Ciclohexano – Tolueno – Dietilamina
- Metanol – Amoníaco
- Ácido sulfúrico
- Etanol – Tetracosano
- Cocaina Clorhidrato
- Hidróxido de Amonio

10. ANALISIS PREVIO

N.A

11. MÉTODOS Y/O TECNICAS

· Pruebas preliminares.
· Cromatografía de capa fina.
· Espectrofotometría Ultravioleta-Visible.
· Cromatografía de gases con detector de ionización de llama.
· Cromatografía de gases acoplado con espectrometría de masas.
· Espectrofotometría Infrarroja.

12. METODOLOGIA

12.1 PRUEBAS PRELIMINARES

Ensayo de Marquis
Colocar en la placa de análisis cromático una pequeña cantidad del material. La cantidad de
sustancia analizada no deber ser más que la necesaria para cubrir la punta de una
microespátula. Adicionar 3 gotas de reactivo de Marquis y observar la coloración obtenida.

Resultados

Heroína Color violeta púrpura

Morfina Color violeta púrpura
Codeína Color violeta púrpura
O6-monoacetilmorfina Color violeta púrpura
Papaverina No produce color
Noscapina Color amarillo brillante

Ensayo de Tiocionato de Cobalto (Mather's)

Adicionar sobre una placa de pruebas a la gota dos o tres gotas del reactivo cobalto II
tiocianato y unos miligramos de muestra, observar si aparece inmediatamente una coloración
azul. Si al agregar la misma cantidad de gotas de estaño II cloruro, la coloración azul
permanece, el resultado puede ser prueba preliminar positiva para heroína, noscapina y
papaverina. La morfina no presenta reacción
 Ensayo Heroína Morfina Codeína Papaverin Noscapina
a
Tiocianato de Cobalto (Mather Azul nd Nd Azul Azul
´s)
Marquis Violeta Violeta Violeta Amarillo

12.2. CROMATOGRAFÍA EN CAPA FINA

Preparación de la muestra
Preparar una solución de las sustancias de referencia y de la muestra de la droga incautada
en concentración de 1mg/ml en etanol.

Sistema cromatográfico 1:
Sistema de desarrollo: Acetato etilo- Metanol- Amoniaco (85:10:5)
Fase estacionaria: Silica gel 60F254 estas se deben activar por 20-30 minutos a 110 ºC
Revelador: Solución Dragendorff
Solución de yodoplatinato acidificado
Luz ultravioleta a 254 nm

Sistema cromatográfico 2:
Sistema de desarrollo: CicloHexano-Tolueno-Dietilamina (75:15:10)
Fase estacionaria: Silica gel 60F254 estas se deben activar por 20-30 minutos a 110 ºC
Revelador: Solución Dragendorff
Solución de yodoplatinato acidificado
Luz Ultravioleta a 254 nm

Aplicación de las Muestras

Con una micropipeta o un capilar, aplicar alrededor de 5ul de la muestra sin que el tamaño
del punto de siembra exceda a 2 mm; se puede aplicar en porciones dejando secar entre una
aplicación y otra. El punto inicial de siembra debe estar a una distancia de 1cm desde la base
de la placa; entre una muestra y otra se debe dejar 1cm de distancia.

Desarrollo de las Manchas

Colocar las placas en la cámara de desarrollo, la cual debe contener una altura del sistema
de solventes de alrededor de 0.5 cm y debe estar saturado con el sistema de solventes a
utilizar. Permitir un recorrido de 10 cm.

Observación de las placas

Determinar cuáles manchas se visualizan con cada revelador · Con luz ultravioleta a 254 nm
determinar cuales se visualizan. · Pulverizar los reveladores sobre la placa.

12.3. CÁLCULOS Y PROCESAMIENTO DE DATOS.

Determinar los Rf para cada sis tema de desarrollo midiendo la distancia recorrida por la
mancha desde el punto de siembra hasta el centro de esta y dividirla por la distancia
recorrida por el frente del solvente y registrarlos en el formato respectivo.

Sustancia Rf (Sistema 1) Rf (Sistema 2)

 Codeína 47 9
Tebaína 73 41
Papaverina 88 13
Morfina 24 0.7
Noscapina 91 36
Diacetilmorfina 68 29

12.4. ESPECTROFOTOMETRIA ULTRAVIOLETA-VISIBLE

Preparación de la muestra
Preparar una solución 1:1 de morfina, heroína en ácido sulfúrico 0.1N y a partir de esta se
prepara una de aproximadamente 200 ppm y se corre el espectro haciendo el barrido en el
rango de 200-350 nm y corroborar la longitud de onda de máxima absorción de la respectiva
sustancia. En el ultravioleta la heroína presenta un máximo de absorción en 279 nm en
medio ácido y la morfina 285 nm en medio ácido. Una vez identificada la muestra se procede
a cuantificar.

Preparar de una solución 1:1 de Morfina o Heroína Clorhidrato en ácido sulfúrico 0.1N o la
solución stock correspondiente para obtener soluciones de cinco (5) niveles de concentración
de 20 ppm, 40 ppm, 80 ppm, 120ppm y 200 ppm; con las cuales se construye una curva de
calibración

Para preparar la solución de la muestra a analizar se debe hacer una extracción y/o limpieza
de esta ya con esta técnica se tiene la limitante de la interferencia espectral de otros
compuestos presentes en la muestra, por lo que debe ser utilizada conjuntamente con otras
técnicas químicas e instrumentales para tener seguridad en la identificación y cuantificación
final del compuesto.

Para la determinación cuantitativa se prepara una solución de la muestra a analizar previa

extracción o purificación y de toma la absorbancia para determinar la concentración de la
muestra empleando los datos de la curva de calibración y el peso de la muestra en la
solución preparada.

Sustancia Solución ácida lmáx,( nm)

Heroína 279
Morfina 285
Codeína 285
Papaverina 250
Noscapina 290, 312

12.5. CROMATOGRAFÍA DE GASES CON DETECTOR DE IONIZACIÓN DE LLAMA

12.5.1 Equipo
- Cromatógrafo de gases: VARIAN 3400
- Detector de Ionización de Llama.
Columna capilar Tipo: 100% Dimetilpolisiloxano
Longitud: 30 metros
Espesor de la película: 3.00 m m
Diámetro interno: 0.32 mm
Fase estacionaria: CP-Sil 5CB
12.5.2 Preparación de la Muestra
Preparación de soluciones para la determinación cualitativa
· Tome la gradilla con el tubo de ensayo donde va a introducir la muestra · Coloque los
anteriores elementos en la balanza analítica Mettler Toledo AB204-S y tárela
· Pese entre 1 y 3 mg de la muestra
· Adicione 6 mls de etanol
· Centrifugue ó deje decantar
· Transvase la anterior solución al vial
· Realice el análisis de la muestra en el método NARCO 1

Preparación de soluciones para la determinación cuantitativa

· Tome la gradilla con el tubo de ensayo donde va a introducir la muestra
· Coloque los anteriores elementos en la balanza analítica Mettler Toledo AB204-S y tárela.
· Pese entre 1 y 2 mg de la muestra.
· Adicione entre 6 ml de etanol + tetracosano (solución 150 ppm)
· Centrifugue
· Tome un balón de 10 ml con su tapa (perfectamente seco)
· Transvase la solución preparada anteriormente al balón de 10 ml
· Afore el balón con etanol + tetracosano
· Transvase la anterior solución al vial
· Realice el análisis de la muestra por el método NARCOTIC.

12.5.3 Metodología
Condiciones del equipo:
Temperatura del Inyector: 300°C
Temperatura del Detector: 300°C

Programa de Temperatura del Horno:

Rampa (ºC/min.) Temperatura (ºC) Tiempo (min.)

200 1
30 280 1
30 300

Estándar interno tetracosano (400ppm)

Split 20:1
Volumen de inyección 1ul

12.5.4 Tiempos de Retención

Los tiempos de retención de las muestras deben coincidir con los tiempos de retención del
patrón o estándar primario correspondiente.

Sustancias
Sustancia
Codeína
Morfina
Tebaína
Heroína
Papaverina
Noscapina
Tetracosano
12.5 CROMATOGRAFÍA DE GASES ACOPLADA A ESPECTROMETRÍA DE MASAS
Preparación de la muestra
Solución patrón de Cocaína Clorhidrato: Pesar 10 mg de Cocaína Clorhidrato y llevar a
10 ml en balón aforado con etanol R.A.

Preparación de soluciones para la determinaciòn cualitativa

· Tome la gradilla con el tubo de ensayo donde va a introducir la muestra
· Coloque los anteriores elementos en la balanza analítica Mettler Toledo AB204-S y tárela
· Pese entre 1 y 3 mg de la muestra
· Adicione 6 ml de etanol
· Centrifugue ó deje decantar
· Transvase la anterior solución al vial
· Realice el análisis de la muestra en el método NARCO 1

Preparación de soluciones para la determinación cuantitativa

· Tome la gradilla con el tubo de ensayo donde va a introducir la muestra
· Coloque los anteriores elementos en la balanza analítica Mettler Toledo AB204-S y tárela.
· Pese entre 1 y 2 mg de la muestra.
· Adicione entre 6 ml de etanol + tetracosano (solución 150 ppm)
· Centrifugue
· Tome un balón de 10 ml con su tapa (perfectamente seco)
· Transvase la solución preparada anteriormente al balón de 10 ml
· Afore el balón con etanol + tetracosano
· Transvase la anterior solución al vial
· Realice el análisis de la muestra por el método NARCOTIC.

Condiciones del cromatógrafo de gases

Todas las condiciones cromatográficas están ajustadas para una columna HP-5MS , 5% fenil
metil polisiloxano con una longitud nominal de 30 metros , diámetro de 250 micrones y un
espesor de película de 0,25 micrones Se utiliza en la cuantificación, como estandar interno
tetracosano.

Puerto de Inyección.
Presión (psi): 21.2
Flujo columna (ml/min.): 1. 5
Velocidad lineal (cm/seg): 47
Modo: Split: 50:1
Volumen de inyección (mL) 0.2

Programa temperaturas del horno

Rampa (ºC/min.) Temperatura (ºC) Tiempo (min.)

8 180 0.00
15 250 0.00
280 2.00

Condiciones del espectrómetro de masas

Retardo del solvente( min) 2
Modo de adquisición: scan
Rango de masas (uma): 20-600
Temperatura del cuadrupolo (ºC): 150
Temperatura fuente de iones (ºC): 230
Los principales iones se encuentran en:

Sustancia tr Principales Picos m/z

Heroína 21.232 327,43,369,268, 310,42,215,204
Morfina 18.441 285,162,42,215, 286,124,44,284
Codeína 17.462 299,42,162,124, 229,59,300,69, 339,324,338,325,
Papaverina 24.011 340,308,154,292
Tebaína 19.559 311,296,255,42,44
Tetracosano

12.6. ESPECTROSCOPIA INFRARROJA

Se realiza una extracción directa con etanol a la muestra a analizar. Se recomienda utilizar
esta técnica cuando se trata de una muestra de derivados del opio tales como heroìna,
Morfina y Papaverina.

Preparación de la muestra
Una vez realizada la calibración del espectrofótometro se procederá a tomar el espectro de
las muestras utilizando el método del disco de haluro.

Se tomará el espectro de las sustancias patrón, de las muestras forenses a analizar para lo
cual se macera en un mortero de ágata hasta pulverizar finamente una mezcla de 1.5-
2.0:150-200 miligramos de la sustancia a analizar y KBr previamente seco a 105 °C por una
hora. Elaborar la pastilla aplicando la presión indicada y se toman espectros, obteniendo
como resultado además el grado de concordancia del espectro de la muestra con el de la
librería.

Se debe tener cuidado de cuando se tenga la sustancia como clorhidrato se debe preparar la
pastilla con KCl y no con KBr El espectrofotómetro compara el espectro obtenido con el de la
librería y establece el porcentaje de concordancia.

Los principales picos se registran en los siguientes números de onda, registrados en orden
de magnitud de absorbancia.

Sustancias Bandas cm-1

Heroína 1245,1764,1178, 1215,911
Morfina 805,1243,1118, 945,1086,833
Codeína 1052,1268,1500, 1111,793,934
Papaverina 1279,1508,1263,
1026,1292,1238
Noscapina 1745,1276,1038,
1010,1498,1080

Sistemas de Extracción Rápida y Limpieza

Cuando se detecte la presencia de adulterantes se recomienda hacer una extracción rápida
empleando el siguiente sistema de extracción .

Muestra Sistemas de extracción

Heroína Hidróxido de Amonio al 1%
Morfina Eter - Cloroformo 1:1, NH4OH
1%

13. PROCESAMIENTO DE DATOS

Para la validez de los resultados de análisis, en todos los métodos cromatograficos, es
necesario que en cada lote de muestras de una misma clase analizadas se corran mínimo un
control positivo con un patrón o muestra plenamente identificada de la sustancia que se
analiza y un control negativo en la misma matriz. Durante el proceso de validación de las
técnicas se establecen los parámetros de control.

A las cromatoplacas en las que se debe identificar claramente cual o cuales son los patrones
y cuales son muestras se registrara con fotografía o fotocopia, procediéndose a archivar en
la carpeta correspondiente.

14. VALIDACION
Para la validez de los resultados de análisis es necesario que en cada lote de muestras de
una misma clase analizadas se corran mínimo un control positivo con un patrón o muestra
plenamente identificada de la sustancia que se analiza y un control negativo en la misma
matriz.

Para la validación el perito, se soporta con un cromatograma control, el cual se archiva en

una de las carpetas del equipo. De cada muestra se tiene el registro en la unidad documental
de la Misión de Trabajo.

15. MANEJO DE ELEMENTOS MATERIA DE PRUEBA Y EVIDENCIAS

Se realiza sobre los elementos Físicos de Prueba, de acuerdo a los lineamientos de cadena
de custodia plasmada en la resolución 01890 de noviembre 05 y del Procedimiento de
Identificación Pericial Homologada debidamente embalados y manteniendo el rotulo
interinstitucional.

· El laboratorio abrirá el sobre de Cadena de Custodia externa, por la parte inferior

cuidando proteger la Cadena de Custodia de Policía Judicial quedando constancia de
quien lo hizo, fecha y hora.
· El sello autoadhesivo de Cadena de Custodia interna que contiene los E.F.P para
análisis, se abrirá por la parte inferior protegiendo la numeración del sello quedando
constancia de quién lo hizo, fecha y hora.
· Realizando lo anterior y el análisis, los E.M.P remanentes volverán a las bolsas/sellos(s)
autoadhesivo (s) y sobres originales con elementos de seguridad que garanticen la
seguridad y autenticidad para ser guerdado en custodia en caja fuerte cumpliendo con
los requisitos de registros para tal fin.

Ver Instructivo para Cadena de Custodia P.I.P.H

16. DISPOSICIÒN FINAL DE LOS REMANENTES

Los remanentes o sobrantes de la muestra plenamente identificadas, son almacenados
dentro del laboratorio de química bajo llave, a disposición de la autoridad pertinente durante
el tiempo determinado por la ley; finalizado este son destruidas previa autorización de la
Dirección Nacional de Estupefacientes, en presencia de Ministerio Publico. Durante todo el
tiempo se mantiene la cadena de custodia.

BIBLIOGRAFIA
• Clarke`s isolation and identification of drugs. 1986. 349p , 763p.
• Métodos Recomendados para el Ensayo de Cannabis: Manual de Uso de los
Laboratorios Nacionales. New York: Naciones Unidas, , 1987. p 17-18
• COLOMBIA. Instituto Nacional de Medicina Legal y Ciencias Forenses de la Regional
Bogotá. Guía del Laboratorio de Estupefacientes.