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Absorcion y Elusion de Anticuerpos PDF
Absorcion y Elusion de Anticuerpos PDF
I.-ABSORCIÓN:
Esta técnica busca separar mezclas de anticuerpos del plasma de un paciente que este
sensibilizado con varios aloanticuerpos o que posea una combinación de aloanticuerpos
más autoanticuerpos. El mecanismo para hacer esto es mediante el uso de células con
antígenos conocidos que puedan atraer alguno de los anticuerpos presentes en la mezcla y
dejar otros libres para posteriormente poder identificar cada uno de ellos.
Uso de la absorción
Procedimiento general:
Elegir g rojos que expresen el antígeno sobre el cual sospechamos está dirigido el
anticuerpo. Lavar 3 a 4 veces con PBS. (verificar que estas células no estén
sensibilizadas previo a la absorción haciendo un C directo)
En el último lavado extraer el sobrenadante con una pipeta para no perder células
por inversión, además a este sobrenadante se le debe enfrentar con células testigos A
y B para comprobar que no tenga anticuerpos anti A o B, seguir con los lavados
hasta que este paso dé negativo.
Agregar la muestra del paciente (plasma con mezcla de Ac) en igual volumen a las
células que tenemos lavadas, mezclar suavemente por inversión. (Ej: 1ml GR
lavados + 1ml Plasma problema).
Trabajar con el plasma haciendo un Coombs indirecto para probar que el anticuerpo
que se sospechaba se pegó a las células.
II.- ELUCION
De forma habitual, las técnicas de elución y absorción son utilizadas en conjunto para
resolver problemas en laboratorio de inmunohematología. El objetivo de toda elución es
interferir con las fuerzas no covalentes que mantienen unido el complejo Ag-Ac. Estas
interferencias pueden ser físicas (calor, ultrasonido, congelamiento, descongelamiento,
detergentes, etc.), o una acción química directa sobre las fuerzas de unión del complejo Ag-
Ac, usando, por ejemplo, alteración de Ph o concentraciones de sal.
USO
CONSIDERACIONES
El tipo de anticuerpo que se desea eluir nos dirá que tipo de elución utilizar al momento de
intentar trabajar con una muestra en particular.
Elución ácida
Se usa en estudios similares a la elución por cloroformo, es decir, para separar anticuerpos
de tipo IgG que estén pegados a glóbulos rojos.