Aplicaciones de microscopia

electronica criogenica para el

entendimiento de estructuras
complejas

Saskia Bakker
 Microscopia electronica
Disminución del tamaño de la particula

RT

Cryo

SEM secciones Particula simple

Incremento de la resolucion
Requerimientos especiales para
los materiales biologicos en EM
Las muestras interacciones con los
electrons y son destruidas por estos
Deben estar hidratadas para que sus
estructuras no sean perturbadas
Sus estructuras son muy sensibles a los
ambientes quimicos
 Microscopia electronica
Disminución del tamaño de particula

RT

Cryo

SEM secciones Particula sencilla

 TEM vs. SEM
Microscopia electronica de Microscopia electronica de
Transmisión Barrido
Haz de electrones

Muestra

Detector

Detección de electrons detras Detección de electrons disperses

de la muestra (primaries) y generados (secundarios)

Slide courtesy of Uli Göhlke

Dos tipos principals de
microscopia electronica
TEM – Microscopia electronica de
transmission
- Electrones atraviesan la muestra
– Vista en proyeccion
– Información de la estructura interna

SEM – Microscopia electronica de barrido

– Electrones son reflejados por la muestra
– Vista exterior solo
 Microscopia electronica de
barrido

Northern Arizona University •Freeze-fracture, deep-etch rotary shadowed

Electron Microscope Facility electron micrograph showing formation of clathrin-
•http://jan.ucc.nau.edu/%7esellers/bug/99/99.html coated vesicles. Courtesy of John Heuser
EM de transmission
Usos de TEM en biología
Bueno para
Cosas “grandes" (0.1-1 um)
– Bacterias/virus
Homogeneidad de muestra
Estructura celular
detallada
Biologia estructural
• La estructura molecular de
macromoléculas biológicas
Pobre para
Qué tengo en mi muestra?
A veces complicada
Cuantitativa
– Tamaño de muestra pequeño
– No todo en la muestra es
visible
Eventos raros
Campo de vista pequeño
Técnicas de biología estructural
Cristalografía de rayos X
Necesita cristales!
Se necesita mucho prueba error para
obtener condiciones optimas para cristales
Produce resolución atómica
Conformación simple visible
Resonancia Magnetica nuclear
Produce resolución casi atómica
Se pueden ver procesos dinámicos
La proteína no puede ser muy grande
Se require etiquetado
Ventajas de la microscopia
electrónica
Rango amplio de condiciones bioquimicas
Adecuado para muestras grandes y
complejas
Puede trabajar con menos de 1 mg de
proteina
Cristales y alta solubilidad no son