MICROSCOPIOS ÓPTICOS

ESPECIALES
MG. CINTHYA LOVON LUQUE
 MICROSCOPIOS ÓPTICOS ESPECIALES

• 1. Microscopio de fase o contraste de fase

• 2. Microscopio de interferencia
• 3. Microscopio de luz polarizada
• 4. Microscopio de campo oscuro
• 5. Microscopio de luz ultravioleta
• 6. Microscopio de fluorescencia
 CONTRASTE DE FASE

• FUNDAMENTO: Las diferencias de fase o retraso que se produce en las

ondas de luz al atravesar estructuras de diferente composición química y
densidad, son AMPLIFICADAS y convertidas en diferencias de intensidad
luminosa por ello se aprecia zonas con diferentes grados de brillo y
oscuridad sin usar colorantes

• USO: Células vivas y tejidos vivos

• Condensador (anillo de fase) y objetivo (placa de difracción fase)
• cualitativo
 MICROSCOPIO DE INTERFERENCIA

Fundamento: Parecida al M. de fases y puede dar resultados cuantificados. Se

logra la separación de la luz en dos haces. Se puede medir los rayos que sufren
diferentes retardos
USO: Determinar peso seco de las sustancias integrantes en células y tejidos.
Observar tejidos vivos. Muestras de mayor grosor como cultivos celulares
 MICROSCOPIO DE LUZ POLARIZADA
Materiales celulares:

• Fundamento: usa luz polarizada (luz

que vibra en un solo plano) para Se ven
brillantes
iluminar la muestra. debido a que
Presenta: son
birrefringentes
- Un prisma polarizador de la luz (nicol) que
solo deja pasar la luz polarizada a la muestra
- Un analizador sobre la muestra
• USO: Componentes celulares con
ordenamiento molecular
• Fibras colágenas, musculares, nerviosas Se ven
oscuros
Microfotografía de la corona de un
diente visto con microscopio de luz
polarizada:
E = Esmalte.
D = Dentina
1 = Laminilla del
esmalte.
2 = Límite
amelodentinal.
3 = Canalículos
dentinales

• Se usa para ver detalles finos de fibras

musculares y tejido conectivo, cilios flagelos
• Presenta 2 filtros analizador (registra las
variaciones de la polarización) y polarizador
(transforma la luz en polarizada)
 MICROSCOPIO DE CAMPO OSCURO

Fundamento: con
condensador especial
que dirige los rayos
luminosos. Los lentes
reciben solo la luz
dispersada por los
componentes celulares
Uso: Bacteriología, y
para ver
espermatozoides

• Treponema pallidum
 MICROSCOPIO DE LUZ ULTRAVIOLETA

FUNDAMENTO: Utiliza luz ultravioleta que oscila entre 400 a

200 nm. Lentes de cuarzo. Impresión en placas fotográficas
para visualización.

USO: ácidos nucleicos en células vivas, para cuantificar se usa

espectrofotómetro
 MICROSCOPIO DE FLUORESCENCIA

• Fundamento: Usa luz ultravioleta 400

nm
• Algunas absorben la energía de la luz
UV y emiten fluorescencia
• USOS:
• Identificar ácidos nucleicos
• En técnica de inmunofluorescencia
• citogenética
 MICROSCOPIO
CONFOCAL
• Microscopio de fluorescencia
modificado que utiliza un fino
láser que barre la muestra
• Se analiza las diversas
profundidades focales para
formar imágenes
tridimensionales de la muestra
 FACULTAD DE MEDICINA

MICROSCOPÍA ELECTRÓNICA

MG. CINTHYA JEYMI LOVON LUQUE

 MICROSCOPÍA ELECTRÓNICA

Microscopio de barrido
https://www.unsa.edu.pe/unsa-es-la-primera-en-latinoamerica-en-contar-con-microscopicos-electronicos-de-ultima-generacion-de-nivel-
atomico/
Del microscopio óptico al microscopio electrónico (1931)
 CARACTERÍSTICAS DE RAYOS
CATODICOS
• Son Corrientes o haces de electrones que se
propagan en el vacío siguiendo un trayecto
ondulatorio.
• Se puede disminuir a voluntad la longitud de estas
ondas, hasta conseguir ondas miles de veces más
pequeñas que las de luz (esto se consigue
aumentando la diferencia de potencial entre el cátodo
y el ánodo).
• Estos electrones atraviesan láminas finísimas de
materia.
• Son deflexionados por campos electromagnéticos
• Producen efectos térmicos y mecánicos
• Son invisibles.
• Producen fluorescencia al incidir sobre planos de
material fluorescente.
• Impresiona las placas fotográficas.
 MICROSCOPIO ELECTRÓNICO

• Necesita sistema de vacío

• El haz de electrones tiene bajo poder de penetración por eso el grosor de la
muestra debe ser 20 a 100 nm
• Imágenes en blanco y negro Los electrones son
• Longitud de onda de electrones 0.05 A° capaces de
moverse en el vacío
• Aumentos mayores a 500 000 (de 10 a 5 A°)
• A menor longitud de onda mayor poder de resolución
• ELEMENTOS
 PARTES PRINCIPALES DE UN MICROSCOPIO ELECTRONICO

• 1) TUBO O COLUMNA:
• -El filamento o cátodo, produce electrones
• -Ánodo, permite el paso de electrones)
• -Bobina electromagnética, lente
condensadora
• -Lentes electromagnéticas
• -Lente del proyector
• -Pie de la columna con una pantalla
• 2) LA CONSOLA:
• -Circuitos eléctricos, bombas de vacío, y el
transformador de alta tensión
 TIPOS DE MICROSCOPIOS ELECTRÓNICOS

•1. Microscopio de transmisión: MET

•2. Microscopio de barrido: MEB
 MICROSCOPIA ELECTRÓNICA
DE TRANSMISIÓN: MET
• Cañón de electrones: Filamento o
cátodo incandescente de Tungsteno
• Haz de electrones viajan a la columna
con condiciones de vacío y atraviesan la
muestra
• Las partes de la muestra que han
sido atravesadas por los
electrones aparecen claras; las
partes que han absorbido y
dispersado los electrones a causa
de su densidad inherente o la
adición de metales pesados
durante su preparación aparecen
oscuras.
Microscopia electrónica de transmisión: MET
 MICROSCOPIA ELECTRÓNICA
DE BARRIDO: MEB
• Proporciona una imagen tridimensional del
especímen o muestra.
• A medida que el haz de electrones explora
la superficie del objeto se refleja algunas
electrones electrodiversos y se expulsan
otros electrones secundarios.
• Los detectores de electrones capturas a esos
electrones y se procesan, comparan y
muestran en un monitor como una imagen
tridimensional
 O SEM

IMÁGENES
TRIDIMENSIONALES

Haz de electrones no es fijo y rastrea la superficie de la muestra, y la imagen se forman por los
electrones retrodispersados y secundarios-
sirve para observar
superficies en relieve

• Epitelio traqueal de mamífero

• Diagrama comparativo de la formación de imágenes en diferentes tipos de microscopios Fuente: Ross, 2006
 Microscopio Optico Caracteristicas Microscopio Electronico

De interferencia de rayos luminosos Imagen dada por el M Rayos catodicos, deflexionados por campos
elecromagneticos

Simple con aire Tubo Al vacio con gran diferencia de potencial

Luz (fotones) Fuente Filamento de Tungsteno (electrones)

Ocular, objetivos y condensador Lentes Bobinas: Campos electromagneticos o

condensador, objetivo y proyectos

Celulas vivas o muertas Estudian Celulas muertas

Coloreada o no Observacion de imágen Diferentes tonos de gris, sombreados

electronicamente

0.1 µm Poder de resolucion 1 nm o 10 A

5 500 A Longitud de onda λ 0.05 A (puede disminuir a voluntad por difenerencia

de potencial entre ánodo y cátodo)

500 a 2000 de veces Aumento 200 000 a 300 000 aumentos directos
 Microscopio Optico Caracteristicas Microscopio Electronico

Formol, Carnoy, etc Fijacion Bicromato dde K., tetraoxido de osmio,

formaldehido
Parafina o celoidina Inclusión Acrilicos o resina epoxi

Con el microtomo Cortes Con el ultramicrotomo

De acero Cuchilla para corte De diamante o vidrio

De 4 a 10 µm Grosor de cortes 20 a 100 nm

De vidrio Portaobjeto De colodion, aluminio o berilio

Estructura Nivel de observacion Ultraestructura

Visual, micrografias y placas fotgraficas Observacion Impresionan placas fotograficas 1 000

000 de aumentos

De campo claro, de contraste de fase, de Tipos De transmision, de barrido (scanning)

Interferencia, de luz polarizada, de acmpo
oscuro, de LUV, de fluorecencia

Mecanica y optica Partes Tubo o columna y consola

MICROSCOPIO DE FUERZA ATÓMICA
https://esp.brainpop.com/ciencia/la_naturaleza_de_la_ciencia/metodo_cientifico/cuestionario/