!

Bioquímica





















TEMARIO:


Parte I: PRINCIPALES BIOMOLÉCULAS


I/ Los Aminoácidos y los Péptidos

A/ LOS AMINOÁCIDOS
1 Generalidades
2 Aminoácidos proteicos
3 Propiedades especiales de aa proteicos
4 Reactividad
5 Propiedades ácido/base de los aminoácidos
6 Solución tampón

A/ LOS PÉPTIDOS
1 Generalidades
2 El enlace peptídico
3 Propiedades de los péptidos útiles para valoración
4 Propiedades ácido/base de los péptidos
5 Oligopéptidos con actividad biológica
6 Los Neuropéptidos

!2

II/ Introducción a las Proteínas:

A/ Estructura de las proteínas
1Generalidades de las proteínas
2 Niveles estructurales
3 Principales estructuras secundarias; α−Hélice
4 Principales estructuras secundarias; β−Laminar
5 Principales estructuras secundarias; Codos

B/ Proteínas Fibrosas
1 Las Queratinas
2 El Colágeno

B/ Las Proteínas Globulares
1Generalidades
2 Plegamiento de las proteínas globulares
3 Desnaturalización de las proteínas globulares



III/ Técnicas de purificación y análisis de proteínas

A/ Preparación de muestras
1 Homogeneización
2 Técnicas de Purificación de proteínas

B/ La Centrifugación
1 Generalidades
2 La Centrifugación Diferencial
3 Centrifugación en Gradiente de Densidad
4 Ultracentrifugación analítica

C/ Precipitación, Liofilización y Dialisis
1 Precipitación isoeléctrica fraccionada
2 Precipitación fraccionada por eliminación del agua de solvatación
3 Dialisis
4 Liofilización

D/ Cromatografía
1 Generalidades
2 Cromatografía de Reparto
3 Cromatografía de Adsorción, de Intercambio Iónico
4 Cromatografía de Permeabilidad
5 Cromatografía de Afinidad

!3
D/ Electroforesis
1 Generalidades
2 Electroforesis de zona
3 Electroforesis en geles de Poliacrilamida - SDS (PAGE-SDS)

D/ Otros métodos
1 Cálculo del pI de las proteínas
2 Cálculo de resultados de purificación

IV/ Las Proteínas

A/ Clasificación de las proteínas
1Por su composición
2 Por su estructura
3 Por su función

B/ Relaciones estructura – función
1 Generalidades
2 Técnica experimental de cálculo de KD
3 Fracción de ligando unido ν (%)
4 Fracción de ligando unido teniendo en cuenta la interacción

C/ Las Apoproteínas
1 Generalidades, el grupo Hemo
2 La Mioglobina
3 La Hemoglobina

D/ La Hemoglobina
1 Cambios conformacionales
2 Influencia del pH en la conformación de la Hemoglobina
3 Otros Efectores Alostéricos; CO:
4 El 2,3-Bifosfoglicerol
5 Inhibidores No Alostéricos
6 Importancia de la presencia de Inhibidores
7 Patologías de la Hemoglobina

IV/ Las Enzimas

A/ Generalidades en Enzimología
1Introducción
2 Nomenclatura y clasificación de las Enzimas
3 Los Cimógenos
4 Las proteasas

B/ Complementaridad Enzima – Sustrato
1 Modelos de complementaridad Enzima – Sustrato

!4
2 Interacciones de complementaridad entre Enzima y Sustrato
3 Factores que afectan a las interacciones Enzima – Sustrato
4 Los Cofactores
5 Parámetros externos que afectan a las interacciones Enzima – Sustrato

C/ Cinética de las Reacciones Enzimáticos
1Generalidades de Cinética Enzimática
2 Medida de la velocidad de una reacción enzimática (V)
3 Ecuación de velocidad de Michaelis – Mentel
4 Ecuación de velocidad de Lineweaver – Burk
5 Deducción de la ecuación por el mecanismo de la reacción
6 Hipótesis de Brigs – Haldane o Estado Estacionario
7 Hipótesis del Equilibrio Rápido
8 Conceptos importantes en cinética enzimática

D/ La Inhibición Encimática
1Generalidades
2 Inhibición Irreversible
3 Inhibición Reversible Competitiva
4 Inhibición Reversible No Competitiva
5 Inhibición Reversible Acompetitiva

E/ Regulación de la Actividad Enzimática
1Actividad Enzimática del Metabolismo
2 Regulación Alostérica
3 Regulación de Equilibrios polimerización/despolimerización
4 Regulación por modificación reversible
5 Regulación por activación proteolítica

F/ Isoenzimas y Agrupaciones de Enzimas
1 Las Isoenzimas
2 Agrupaciones Multienzimáticas

V/ Nucleósidos y Nucleótidos

A/ Introducción
1 Funciones de los Nucleótidos
2 Estructura general de nucleósidos y nucleótidos
3 Nomenclatura
4 Principales tipos de Nucleótidos

B/ Nucleótidos no nucleicos:
1 Nucleótidos Difosfato (NDP) y Trifosfato (NTP)
2 El Coenzima Nicotinamida Adenina Difosfato (NAD+/NADH)
3 El Coenzima Fosfato de Riboflavina (FMN, Flavin Mono Nucleotido)
4 El Coenzima A (CoA)
5 Nucleótidos cíclicos

!5
C/ Los Ácidos Desoxirribonucleicos (DNA)
1Generalidades
2 Estructura 3D del DNA
3 Tipos estructurales del DNA
4 Desnaturalización y Renaturalización del DNA

D/ Los Ácidos Ribonucleicos (RNA)
1 Generalidades
2 Principales tipos de RNA
3 Las Nucleasas

VI/ Procesos Moleculares de la Expresión de la
Información Genética

A/ La Replicación del DNA
1 Generalidades
2 Experimento de Meselson & Stahl
3 Generalidades de Replicación del DNA en procariontes
4 Etapas de Replicación del DNA en procariontes
5 La Replicación del DNA en eucariontes
6 Mecanismos de Reparación de la Replicación del DNA

B/ La Transcripción; del DNA al mRNA
1 Generalidades
2 La Transcripción en procariontes
3 Desarrollo de la Transcripción en procariontes
4 La Transcripción en Eucariontes

C/ La Traducción; del mRNA a las Proteínas
1 Generalidades
2 Estructura del tRNA
3 La Activación de Aminoácidos
4 La Unión Anticodón – mRNA
5 La maquinaria esencial para la síntesis de proteínas; Los Ribosomas
6 Funcionalidad de los Ribososmas
7 La Síntesis de Proteínas en Procariontes
7.1La Iniciación
7.2 La Elongación
7.3 La Terminación
7.4 Balance Energético
8 La Síntesis de Proteínas en Eucariontes
9 Las Rutas de Transporte de proteínas en Eucariontes
10 El Plegamiento de las Proteínas en Eucariontes
11 Maduración de las Proteínas
11.1 Modificación de aminoácidos
11.2 Procesamiento Proteolítico

!6

Parte II: EL METABOLISMO

I/ Conceptos básicos

A/ INTRODUCCIÓN
1 Generalidades
2 Control del metabolismo

B/ TERMODINÁMICA
1 Bases de la Termodinámica
2 Clasificación Termodinámica de las Reacciones

C/ COMPUESTOS DE ELEVADA ENERGÍA DE HIDRÓLISIS
1Generalidades
2 El ATP y el GTP

D/ COMPUESTOS DE ELEVADA ENERGÍA DE PODER
REDUCTOR
1 Reacciones de Oxido-Reducción (Red-Ox)
2 La Energía en las Reacciones Red-Ox
3 Poder Reductor en el Metabolismo

I/ Metabolismo de Degradación de la Glucosa

A/ DEGRADACIÓN DE LA GLUCOSA A CO2
1 Primera fase de la Glicólisis
2 Segunda fase de la Glicólisis
3 Regulación de la Glicolisis
4 Degradación anaeróbica del Piruvato
5 Descarboxilación aerobia del Piruvato en Acetil-CoA
6 Regulación del Complejo Piruvato dh
7 Descarboxilación de Acetil-CoA en el Ciclo TCA
8 Regulación del ciclo TCA

B/ PARTICULARIDADES DEL CICLO DE LOS ÁCIDOS
TRICARBOXÍLICOS
1 Estereoisometría de la Aconitasa
2 Carácter anfibólico del ciclo TCA
3 Reacciones Anapleróticas; Carboxilación del Piruvato
4 Reacciones Anapleróticas; Ciclo del Glioxilato

C/LA CADENA DE TRANSPORTE ELECTRÓNICO DE LA
RESPIRACIÓN Y LA FOSFORILACIÓN OXIDATIVA
1 Generalidades

!7
2 Mecanismo de la cadena respiratoria
3 Los Citocromos
4 El transporte de electrones en la Cadena Respiratoria
5 La Fosforilación Oxidativa

D/ VÍAS DE REOXIDACIÓN DEL NADH CITOPLASMÁTICO
1 Generalidades
2 Lanzadera de Glicerol fosfato
3 Lanzadera de Malato

E/ BALANCE DE LA DEGRADACIÓN DE LA GLUCOSA

II/ Metabolismo de Biosíntesis de Glucosa

A/ LA GLUCONEOGÉNESIS
1 Generalidades
2 Gluconeogénesis a partir del Lactato
3 Patologías de inhibición de la Gluconeogénesis

B/ EL GLUCÓGENO Y SU METABOLISMO
1 Introducción al Glucógeno
2 Biosíntesis del Glucógeno
3 La degradación del Glucógeno
4 Generalidades sobre la regulación del metabolismo del Glucógeno
5 Regulación de Glucógeno fosforilasa
6 Control hormonal sobre la regulación de Glucógeno fosforilasa
7 Regulación de Glucógeno sintasa y su control hormonal
8 Ruta de las Pentosas, o del Fosfogluconato
9 Glutatión y Patología de la Ruta de las Pentosas en Eritrocitos

III/ Metabolismo de Lípidos

A/ LOS PRINCIPALES LÍPIDOS
1 Estructura y Nomenclatura
2 Los Ácidos Grasos de las células
3 Los Triglicéridos
4 Los Fosfolípidos
5 Los Esteroides

B/ METABOLISMO DE DEGRADACIÓN DE LÍPIDOS
1 La Digestión de los Triglicéridos en la Luz Intestinal
2 Degradación de los Triglicéridos en la mucosa intestinal
3 Lipoproteínas de la sangre
4 Recorrido de los Quilomicrones en la sangre
5 Destino de los Triglicéridos en células Adiposas y Musculares
6 Función de las Apoproteínas de alta densidad, HDL
7 Enfermedades cardíacas relacionadas

!8
8 Movilización de los Ácidos Grasos del tejido Adiposo
9 La β-Oxidación de los Ácidos Grasos (β-Ox)
10 Degradación de los Fosfolípidos

C/ METABOLISMO DE BIOSÍNTESIS DE LÍPIDOS
1 Biosíntesis de Cuerpos Cetónicos
2 Biosíntesis de Ácidos Grasos
3 Vía del Citrato
4 La Biosíntesis de Triglicéridos
5 Biosíntesis de Fosfolípidos a partir de Diglicéridos
6 Biosíntesis de Colesterol a partir de HMG-CoA
7 Regulación de HMG reductasa

IV/ Metabolismo de los Compuestos Nitrogenados

A/ METABOLISMO DE DEGRADACIÓN DE AMINOÁCIDOS
1 Generalidades sobre el metabolismo general de los Aminoácidos
2 Digestión de Proteínas de la dieta
3 Desaminación de los aminoácidos
4 Eliminación del Amoniaco en exceso consumido por los organismos
5 El Ciclo de la Urea
6 Descarboxilación de aminoácidos
7 Metabolismo del Propionil-CoA

B/ METABOLISMO DEL FRAGMENTO MONOCARBONADO

1 Generalidades sobre el metabolismo del Fragmento Monocarbonado
2 Origen del Fragmento Monocarbonado
3 La Metionina como Donador Universal de grupos Metilo
4 Biosíntesis de Aminoácidos
5 Biosíntesis de Nucleósidos Púricos
6 Biosíntesis de Nucleósidos Pirimidínicos
7 Biosíntesis de Desoxirribonucleótidos
8 Catabolismo de Nucleósido














!9




















Parte I: PRINCIPALES BIOMOLÉCULAS

I/ Los Aminoácidos y los Péptidos:

A/ LOS AMINOÁCIDOS:

1 Generalidades:
- Los aminoácidos, aislados por primera vez en el siglo XIX, forman las
proteínas al asociarse linealmente.
- Poseen un carbono central, con H, NH2 (amino), COOH (carboxilo) y una
cadena lateral R variable.
- La región cte de los aa es siempre polar: presenta un grupo ácido con
carga negativa, y uno básico con carga positiva: NH3+ – CH – COO-
- Los aminoácidos se diferencian por su cadena R.
- Sólo 20 aminoácidos conforman las proteínas recién sintetizadas y son
codificados por el ADN. Después de maduración, las proteínas pueden
presentar más de 100 aa distintos, todos derivados de los 20 iniciales (EJ;
Prolina > Hydroxiprolina).
- Los 20 aa iniciales se clasifican, entre otros, como α-aminoácidos:
Ambos grupos, amino y carboxilo, se encuentran en posición α. Reciben el
nombre de aa proteicos.
- Muchos aa no proteicos son también vitales. Por ejemplo la β-Alanina es
un importante neuroransmisor.

2 Aminoácidos proteicos:
- Por las propiedades de su radical R podemos clasificarlos en 4 grupos:
- Los aa NO POLARES son aquellos cuyo R no es polar, ni tiene carga:

!10
 • Alanina (Ala; A)
• Valina (Val; V)
• Leucina (Leu; L)
• Isoleucina (Ile; I)
• Prolina (Pro; P)
• Fenilalanina (Phe; F)
• Triptófano (Trp; W)
• Metionina (Met; M)

- Los Aa POLARES pueden ser de tres tipos en función de su carga.
- SIN CARGA, pueden ser básicos con grupos alcohol (OH) o tiol (SH):
• Glicina, Glicocola (Gly; G)
• Serina (Ser; S)
• Treonina (Thr; T)
• Cisteína (Cys; C)
• Tirosina (Tyr; Y)
• Asparagina (Asm; N)
• Glutamina (Gln; Q)
- CON CARGA NEGATIVA, son ácidos:
• Aspartato (Asp; D)
• Glutamato (Glu; E)
- CON CARGA POSITIVA, son básicos:
• Lisina (Lys; K)
• Arginina (Arg; R)
• Histidina (Hys; H)

3 Propiedades especiales de aa proteicos:
- Gly es el aa más pequeño; Su R es un átomo de H. Se duda de su
naturaleza; ¿polar, o no polar?
- Pro es el único aa que no tiene su grupo amino libre: se encuentra unido
a R por una estructura de ciclo pentagonal. Otros aa tienen ciclos aromáticos
en R.
- Solamente dos aa contienen un átomo de azufre: Met (tioeter) y Cys
(tiol).
- Todos los aminoácidos, salvo Gly, presentan en el C central del grupo
constante un centro quiral, produciendo efectos ópticos de polarización de la
luz.
- A diferencia de los glúcidos naturales todos de la serie D, los αaa
proteicos son siempre de la serie L (L-aa), polarizando la luz en un ángulo
positivo.
- Todos los aa tienen propiedades espectroscópicas: absorben luz UV. Se
puede obtener con un colorímetro su absorbancia. λMAX=220nm; para aa con
cilos aromáticos λMAX=260nm.

4 Reactividad:
Carboxilo + Alcohol > Ester
+ Amina > Amida
+ Reductor > Alcohol
+ descarboxilación > Amina

!11

Amina + Aldehído > Imina R – C = N – R’
+ Ninhidrina > Fuerte oxidación

- Esta última reacción es utilizada para confirmar la presencia de aa en
laboratorio, gracias a la aparición de un compuesto coloreado. No aparece en
el caso de Pro, puede aparecer una mancha amarillenta.
- Todos los aa presentan propiedades ácido – base. En función del pH
fisiológico, los grupos α−amino, α−carboxilo y otros grupos polares pueden
encontrarse o no ionizados. Por ello los aa se comportan como ácidos o bases,
respondiendo a las leyes de Bronsted y Lowry.

5 Propiedades ácido/base de los aminoácidos:
- Cada ácido tiene su base conjugada y viceversa. Por ello se determina
Ka, cte de disociación del ácido en el punto en el que se alcanza el equilibrio
entre acido y base.

Ka = [Base] [H+] / [Ácido]

pKa = -log Ka

pH = -log [H ] +

ECUACIÓN DE HENDERSON – HASSELBACH:

pH = pK + log ([Base] / [Ácido])
a

- Los grupos se disocian por orden decreciente de acidez. Un aminoácido
presenta siempre por lo menos dos grupos con actividad ac/base (α−amino y α
−carboxilo), con Ka propia para cada grupo.
- A pH muy bajo, todos los grupos están protonados al máximo: COOH,
NH3+.
- A medida que lo hacemos aumentar los grupos se disocian: El 50% de
un grupo se ha disociado ya cuando pH = pKa. Los estados de ionización se
prosiguen ordenadamente.
- A pH elevado todos los grupos de han disociado: COO-, NH2.
- EJEMPLO: Alanina.

COOH – CH – NH3+ COO- – CH – NH3+ COO- – CH – NH2
CH3 CH3 CH3

[ A l a + ] [Ala 0 ]
[Ala -]

pH = pKa1 pH = pKa2
50% [Ala +] 50% [Ala 0]
50% [Ala 0] 50% [Ala -]

!12
- Podemos visualizarlo en un gráfico de las concentraciones en función
del pH:
• En los puntos donde la curva es vertical, sólo se encuentra una especie
(Ala +, Ala 0 o Ala -)
• En los valles, pH = pKa, y las concentraciones entre las dos especies
son iguales (pKa1, pKa2).
- Conociendo el pH, podemos calcular en cada punto el estado de
equilibrio de las especies gracias a la ecuación de Henderson – Hasselbach.
- El punto isoeléctrico pI es la media de los pK de equilibrio de [aa 0].
• Si pH = pI, se encuentra la especie con carga neta nula.
• Si pH < pI, carga neta +.
• Si pH > pI, carga neta -.
- EJEMPLO: Alanina; pI= (pKa1 + pKa2) / 2 = 6,61
- Los aminoácidos ácidos y los básicos presentan una curva con cuatro
regiones verticales y tres mesetas, pues tienen cuatro formas y tres pKa.
- Los aa ácidos tienen dos mesetas (pK) con pH < 7. Las especies
presentes son: [aa +], [aa 0], [aa -], [aa 2-].
- Los aa basicos tienen dos mesetas (pK) con pH > 7. Las especies
presentes son: [aa 2+], [aa +], [aa 0], [aa -].
- Hys presenta una meseta central casi neutra (pH = 6).

6 Solución tampón:
- Se trata de soluciones capaces de captar H+ y OH- neutralizando
cambios de pH.
- Se forma por una alta concentración de ácido débil en sus dos formas
(acido + base conjugada), al 50%.
- Para obtener un tampón con aa debe seleccionarse el aa cuyo pKa sea
más próximo al pH dado para la solución. (Caso ideal: pKa = pH).

A/ LOS PÉPTIDOS:

1 Generalidades:
- Cortas cadenas de aminoácidos unidos linealmente. Algunos, no
codificados por el ADN, suelen derivar de la hidrólisis de proteínas y de otros
péptidos, por la acción de enzimas Proteasas.
- Los dipéptidos se forman por dos aa. Por ejemplo, la insulina es un
dipéptido no derivado de proteína.
- Los oligopéptidos se forman de menos de 20 aa.
- Los polipéptidos son los péptidos más grandes. Incluyen a las proteínas.
- Las uniones entre los aa son uniones covalentes que se producen entre
el grupo α−carboxilo del primer aa y el grupo α−amino del siguiente.
- El péptido presenta por lo tanto polaridad: El primer aa presenta solo un
grupo α−amino libre: el amino terminal a-t. El último aa tiene sin embargo un
único grupo α−carboxilo libre: el carboxilo terminal c-t.

2 El enlace peptídico:
- Se trata de un enlace covalente y rígido. Al producirse por ataque
nucleófilo, se desprende una molécula de agua.

!13
NH2 – CH – COOH + NHH – CH – COOH
R’ R’’


NH2 – CH – CO – NH – CH – COOH
R’ R’’
+ H2O

- El CO que queda del grupo COOH presenta un doble enlace. Al unirse
con el grupo amino del siguiente, el carbono reparte el doble enlace con la
siguiente proporción: 60 % C=O; 40 % C=N.
- Este enlace doble entre C y N hace del enlace una unión rígida sin
propiedad de giro, a diferencia de los otros enlaces N – C y C – C.
- Este enlace no es termodinámicamente favorable, y no suele darse
espontáneamente.

3 Propiedades de los péptidos útiles para valoración:
- Los péptidos presentan propiedades ópticas, desplazando como los aa
proteicos el angulo de la luz polarizada.
- También presentan propiedades químicas que permiten poner en
evidencia su presencia: la reacción de Binnet, exclusiva para proteínas y
peptidos. En presencia de los α−amino terminal, las sales de cobre producen
color. La intensidad del color es proporcional a la cantidad de péptidos.
- Al igual que los aa que los conforman, los péptidos se comportan como
ácidos y bases.

4 Propiedades ácido/base de los péptidos:
- Solo mantienen sus propiedades ac/base los grupo a-t, c-t, y aquellos
grupos de R ionizables.
- Ala no tiene grupos ionizables en R, por lo tanto AlaAlaAla tiene los
mismos grupos ionizables que Ala, y su curva tendrá el mismo numero de
mesetas y pKs.

Ala: NH2 – CH – COOH
R

AlaAlaAla: NH2 – CH – CO – NH – CH – CO – NH – CH - COOH
R R R

- Sin embargo, los valores de esos pK cambian: Cuantos más aa hay de
por medio, más separados se encuentran los grupos α ionizables. En el caso
de Ala, pKa1 = 2,35; para AlaAla, pKa1 = 3,12; y en el caso de AlaAlaAla, pKa1 =
3,39. La fuerza del grupo ácido carboxílico disminuye visiblemente.
- Según aparecen en R más grupos ionizables, se añaden más mesetas a
las dos básicas (a-t y c-t).

AlaAlaLysAla:

!14
NH2 – CH – CO – NH – CH – CO – NH – CH – CO – NH – CH – COOH
R R R R
NH2

- En el caso de varios aa iguales con grupos ionizables en R, todos ellos
se desprotonarían de golpe con el mismo pH. Ejemplo: LysLysLysLys tendría,
al igual que Lys, tres mesetas. Sin embargo, en la meseta correspondiente a
NH2 de R, se desprotonarían los grupos de 4 en 4, no de 1 en 1.
- Para calcular el pI de un péptido tenemos que tener en cuenta esto
último como coeficiente.





Glu Ala Lys Lys
NH2 COOH

COOH R NH2 NH2

pH BAJO

P 3+: NH3+ COOH
COOH R NH3+ NH3+

pK a1


P 2+: NH3+ COO-
COOH R NH3+ NH3+

pKa2

P +: NH3+ COO-
COO- R NH3+ NH3+

pKa3


P 0: NH2 COO-
COO- R NH3+ NH3+

!15

pK a4


P 2-: NH2 COO-
COO- R NH2 NH2

pH ALTO


- En este caso encontramos cuatro pKs y cuatro mesetas en la curva (y
no cinco), pues los dos NH2 de R de Lys se desprotonan de un mismo paso.
- Para el calculo de pI, es decir, el valor de pH para el cual hay 100% de
[P 0], debemos utilizar pKa3 y pKa4, sin olvidar que [P +] ha de ser el doble de [P
2-]:

(P +) = 2(P 2-)

pI = (pKa3 + pKa4 – (log 2)) / 2


5 Oligopéptidos con actividad biológica:
- No suelen ser de origen proteico.
- βAla libre es de por sí un neurotransmisor:

βAla: NH3+ – CH2 – CH2 – COOH (Grupo carboxilo en β).

- Carnosina: βAla_Hys.
- Anserina: βAla_N-3-metil-His. Se encuentra como tampón ac/base en el
músculo.
- Glutatión: γGlu_Cys_Gly. Muy abundante en todos los seres vivos. Unión
Glu-Cys especial, mediada por el carboxilo del R de Glu, no por el α-carboxilo.

NH3+ – CH – CH2 – CH2 – CO – NH – CH – CO – NH – CH2 – COO-
COO- R’
SH

- El grupo tiol puede reaccionar reduciendo otra proteína. En ese caso
queda oxidado y pierde su protón. Dos moléculas de glutatión oxidadas pueden
quedar unidas por un puente disulfuro. Esta forma está presente en eritrocitos:
mantiene el hierro en forma ferrosa evitando que se oxide. Evita también la
oxidación en otros tipos celulares, por ejemplo, evitando enfermedades
neurodegenerativas. R’1 – S – S – R’2
- Muchos Antibióticos son oligopéptidos o derivados de aa con uniones
particulares, como la Penicilina, Gramicidina S o Bacitracina A.

Gramicidina S:
Leu – D-Phe – Pro – Val – Orn

!16
 Orn – Val – Pro – D-Phe – Leu



Penicilina:
S CH3
R – CO – NH – CH – CH C
CH3
C O –N C
COOH
Cys Val


- Muchos importantes péptidos son Hormonas, como, por ejemplo, la
insulina y el glucagón, de efectos contrarios, secretados en el páncreas, que
controlan el metabolismo de hidratos de carbono y lípidos. También lo son
Serotonina, Dopamina, Estamina o Adrenalina.


6 Los Neuropéptidos:
- Son la mayor familia de péptidos con actividad biológica. Se forma de
más de 100 tipos de peptidos.
- Los neuropéptidos (NP) se encuentran en el sistema nervioso. Pueden
ser neurotransmisores o tener diversas funciones moduladoras como
transmisión peptidérgica.
- Los NP controlan y modulan el apetito, la agresividad, el dolor o la
memoria.
- Endorfinas y Encefalinas se oponen a la transmisión del dolor. Son los
péptidos opioïdes u opiaceos. Presentan receptores en las mbrs de neuronas,
comunes a los de la morfina, produciendo el mismo efecto. (Morfina no es un
NP). Se relacionan con la acupuntura y también con el sistema inmune.
- Las encefalinas son oligopéptidos: Tyr Gly Phe Leu; Tyr Gly Phe Met.
- Las endorfinas presentan mayores pesos moleculares.
- Muchos importantes neuropéptidos son hormonas secretadas en el eje
Hipotálamo-Hipófisis. Reciben el nombre de Factores de Liberación y controlan
toda la producción endocrina de nuestro cuerpo, como GnRH, hormona
liberadora de gonadotropinas, que controla los ciclos sexuales.













!17

















II/ Introducción a las Proteínas:

A/ Estructura de las proteínas:

1Generalidades de las proteínas:
- Son polipéptidos, algunos de muy gran tamaño, cuya existencia se debe
a su síntesis por un ribosoma, bajo control de la información genética.
- Su estudio y analisis son muy complejos. Han comenzado con las
técnicas de análisis con Rayos X.
- La configuración de una proteína es la conformación debida a sus
enlaces. Si la configuración cambia la molécula es distinta, como en el caso de
la estereoisomería (L – D).
- La conformación de una proteína cambia cuando giran sus enlaces, en
función de las interacciones entre sus aminoácidos, sin que cambie la
molécula. Una proteína puede cambiar constantemente de conformación.

EJEMPLO: Priones: Cambio Conformacional
PrPC PrPSc
Forma normal Forma agresiva

- Si por una mutación cambia o desaparece un aa, la prot puede perder
sus propiedades naturales. Algunas posiciones de aa se presentan invariables
a lo largo de la evolución.

2 Niveles estructurales:
- Las proteínas presentan distintos niveles estructurales. El tipo de
estructura depende en gran medida de su tamaño.
- Estructura primaria: Secuencia linear de aa, de n-t a c-t. Sirve para
predecir estructuras superiores.

!18
- Estructura secundaria: Ángulo y disposición de los aa respecto a los aa
colindantes. Algunas estructuras, como α−hélice o β−laminar, se repiten
frecuentemente en distintas proteínas.
- Estructura terciaria: Plegamiento total en el espacio del conjunto de aa,
generalmente de aspecto globular. No todas las proteínas presentan este tipo
de estructura, descubierta con Rayos X.
- Estructura cuaternaria: Asociación de varios polipéptidos proteicos en un
polímero. Solo en algunos casos. Por ejemplo, homodímeros o heterodímeros.
- Cada nivel estructural es determinante sobre el siguiente.
- Se habla de Proteínas Oligoméricas cuando estas forman un polímero
por enlaces de fuerza débil, como los puentes disulfuro.
- Las proteínas de estructura secundaria también son llamadas Proteínas
Fibrosas. Son estructurales de los tejidos y poco solubles en agua. Presentan
diagramas sencillos de Rayos X.
- Las proteínas de estructuras terciaria o cuaternaria también son
llamadas Proteínas Globulares. Son hidrosolubles pues al plegarse sobre sí
mismas pueden presentar en superficie sus regiones más hidrofílicas.
- Las Estructuras Supersecundarias son secuencias de estructuras
secundarias que se repiten frecuentemente en proteínas globulares formando
dominios estructurales localizados. Por ejemplo, β−laminar; α−hélice; β
−laminar…, o bien, β−laminar; codo; β−laminar; codo…

3 Principales estructuras secundarias; α−Hélice:
- α−Hélice es una de las estructuras más repetidas y muy estable. Puede
conformar proteínas fibrosas como las queratinas, o encontrarse en cierto
porcentaje en proteínas globulares.
- En vista transversal se observa como un cilindro hueco que expone
hacia el exterior las cadenas R hidrofóbicas.
- Longitudinalmente se presenta como una estructura helicoidal dextrógira
(que gira naturalmente a la derecha), pues siendo los aa de la serie L es
termodinámicamente más favorable.
- Se forman, cada cuatro aminoácidos, enlaces de hidrógeno
intracatenarios entre O y N: R’1 – O – H – N – R’2
- Estos enlaces estabilizan notablemente la estructura secundaria
limitando la libertad de giro en los enlaces covalente simples de los aa.
- Pro nunca se encuentra en α−hélice, pues su α−amino se encuentra
unido a R y no puede formar el enlace intracatenario: Rompería la cadena
cambiando su dirección, en una estructura llamada codo.
- El poder rotatorio de la hélice depende de la rotación de cada aa + el
valor de rotación de la propia hélice. Por su forma la hélice tiene actividad
óptica propia +D.
- Varios aa con grandes R no se encuentran cercanos en la hélice, pues
no cabrían.
- Varios aa con igual pH fisiológico tampoco se encuentran cercanos en
estas estructuras, pues debido a su carga habría repulsión entre ellos y la
hélice perdería su valor rotatorio.
- Por ejemplo, Lys Lys Lys o Glu Glu Glu. Cuando baja el pH, aparecen en
poli-Lys cargas que se repelen rompiendo la hélice. Ocurre lo mismo con poli-
Glu al aumentar el pH.

!19
- α−Hélice no siempre se puede deducir de la estructura primaria.
- En ciertas condiciones de temperatura y humedad se pueden estirar las
hélices cambiando su estructura, como en el caso de la seda.

4 Principales estructuras secundarias; β−Laminar:
- También llamada estructura en hoja plegada. Se observa como cadenas
de aa apiladas en un plano.
- La estructura se estabiliza por medio de enlaces de hidrógeno
intracatenarios entre c-t y a-t de las cadenas.
- Las cadenas pueden asociarse de forma paralela o antiparalela, siendo
la antiparalela la más estable pues presenta los átomos de N y C que han de
unirse más cerca uno del otro.




Paralelo: R H O R
– N – CH – C – N – CH – C – N – CH – C –
H O R H O


O R H O
R H
– C – N – CH – C – N – CH – C – N – CH – C – N –
H O R H O



Antiparalelo: R H O R
– N – CH – C – N – CH – C – N – CH – C –
H O R H O


O H R O H
– C – CH – N – C – CH – N – C – CH – N –
R O H R


- Estas estructuras pueden formar proteínas fibrosas y también se
encuentran en cierta proporción en algunos dominios de proteínas globulares,
como la inmunoglobulina.

5 Principales estructuras secundarias; Codos:
- Los Codos son estructuras secundarias formadas principalmente por Pro
y Gly.
- Estas estructuras cambian la dirección inicial de la cadena debido al
enlace especial de Pro, cuyo a-t está unido a R. Se estabiliza por la formación
de un enlace de hidrógeno intracatenario.

!20
- El giro se produce a la derecha por ser termodinámicamente más
estable.
- En el caso exclusivo del colágeno, se puede formar de Hidroxiprolina.


CH2
Pro O Gly

CH2 CH – C – N – CH2
H
CH2 – N C = O

C=O H – N

CH CH

R1 R 2

B/ Proteínas Fibrosas:

1 Las Queratinas:
- Proteína fibrosa insoluble de secuencias muy repetidas de α−hélice,
unidas en estructuras superiores.
- Tres α−hélices unidas longitudinalmente forman una protofibrilla. Varias
de estas últimas se unen en microfibrillas, varias de las cuales forman las
macrofibrillas.
- Las macrofibrillas de distintos tipos de Queratinas se encuentran sobre
todo en las uñas y en el pelo.
- Los enlaces laterales entre las hélices es mediado por puentes disulfuro
resultantes de la oxidación del tiol de Cys. Es el motivo por el que el pelo
quemado huele a sulfuro.
- Cada tipo de Queratina tiene distinta proporción de Cys.
- Cuanto más Cys presente, más puentes se forman y más rígida y
quebradiza será la fibra (%Cys (UÑAS, PEZUÑAS) >22).
- Cuanto menos Cys presente, más flexible será la fibra (%Cys (PIEL, LANA,
PELO) = 10).

2 El Colágeno:
- Proteína fibrosa insoluble de secuencias muy repetidas de Hélices de
Colágeno, unidas en estructuras superiores.

!21
- Es una estructura también muy frecuente en tegumentos, ligamentos y
tendones en todos los animales.
- Se forma principalmente de:
• 33% Gly
• 13% Pro
• 4-OH-Pro (Hidroxiprolina, Hyp)
• Lys
• 5-OH-Lys (Hyl)
- Hyp y Hyl derivan de Pro y Lys respectivamente durante la maduración
de la proteína. Requiere la acción de Peroxidasas, y de la presencia de ácido
ascórbico y vitamina C.
- Su plegamiento secundario forma una Hélice de Colágeno, levógira
(hacia la izquierda) debido al giro de Pro facilitado por Gly, y abierta dejando los
R hacia el exterior.
- Existen 12 tipos de Hélice de Colágeno conocidas. En algunos también
se encuentra Cys.
- El Tropocolágeno es la unidad fundamental de las Fibras de Colágeno.
Se trata de la unión longitudinal de tres Hélices de Colágeno, generalmente del
mismo tipo, que se retuercen una sobre las otras formando un cable firme y
resistente.
- La estabilidad del Tropocolágeno depende de las fuerzas de WW y de
los puentes de hidrógeno que se forman entra Hyp y Pro próximas.
- Algunas Hexosas e Hidratos de Carbono se unen a Hyl de
Tropocolágeno, por medio de puentes de H, estabilizando la estructura.
- Los Tropocolágenos se asocian entre sí formando estructuras
superiores. Se asocian unos con otros de manera ordenada, en estructura
cabeza – cola.
- Esta estructura se estabiliza por la formación de enlaces covalentes
entre Lys. Estos enlaces muy firmes mantienen y dan resistencia a nuestros
cuerpos.
- Con el tiempo van aumentando las uniones covalentes, haciendo el
colágeno más rígido y quebradizo, y menos elástico.
- Desaminación oxidativa: Reacción mediada por la enzima Lisina
Oxidasa del grupo amino de R de Lys:

AMINA Desaminación oxidativa ALDEHÍDO
R – CH2 – NH2 R – CH2 – CHO

- Por medio de esta reacción se forman dobles enlaces covalentes que
estabilizan la estructura general del colágeno. En concreto se une una Lys con
amino a otra oxidada y desaminada:

Lys R1 – NH – CH – CO – R2
(CH2)3
N

CH
(CH2)3

!22
 Hyl R1 – NH – CH – CO – R2

- La síntesis de las hélices es realizada por los Ribosomas.
- Después de maduración, están listas para ensamblarse de tres en tres.
Otros polipéptidos abundantes en Cys, los Pteropéptidos, colaboran en el
correcto ensamblaje, uniéndose en los extremos y luego rompiéndose y
separándose.
- Finalmente aparecen las estructuras superiores, que se forman
directamente en su lugar definitivo.
- Proteína poco nutritiva por su alta concentración en Gly e incompleta su
poca variedad de aa.
- Patología genética: Ausencia de Pteropéptidos. Animal no se puede
tener en pie.
- Otras patologías: Artritis, Cirrosis hepática.

B/ Las Proteínas Globulares:

1Generalidades:
- Solo algunas proteínas presentan estructura terciaria y/o cuaternaria. Se
denominan Proteínas Globulares.
- Estas proteínas son solubles en disolventes polares. Se pueden
encontrar en el interior Car y en la MEC.
- Muchas son de muy gran tamaño. Fueron fáciles de descubrir por ello.
- Los R hidrofóbicos suelen encontrarse escondidos en el interior de la
estructura globular de la proteína, exponiéndose las regiones hidrofílicas hacia
el exterior.
- La estructura supersecundaria es determinante en la estructura globular.
- Algunas de estas proteínas presentan hasta 80% de dominios α−hélice y
β−laminar, al igual que Codos. La Albumina, por ejemplo, se forma básicamente
de esas tres estructuras secundarias.
- Los Dominios Globulares son unidades muy señaladas de plegamiento,
como subconjuntos morfológicos dentro de la proteína globular.
- Algunos de estos dominios están relacionados con Dominios
Funcionales, cuando presentan actividad catalítica.
- Los Centros Activos son dominios estructurales y funcionales que son
activados o desactivados por medio de cambios conformacionales.
- Las proteínas que cumplen varias funciones suelen tener varios
dominios estructurales y varios centros activos. En este caso varias
conformaciones pueden se funcionales.

2 Plegamiento de las proteínas globulares:
- Pueden formarse distintos tipos de enlaces entre los aa a la hora de
estabilizar las proteínas en su estructura terciaria y cuaternaria.
- El propio H2O estabiliza y fuerza el plegamiento espontáneo de la
proteína por el efecto hidrofóbico, escondiendo los R.
- Debido al efecto hidrofóbico, los aa polares se encuentran generalmente
en la superficie, y los apolares en el interior de la proteína.

Prot + H2O = Aumento de la entropía

!23

- Pueden formarse puentes de hidrógeno intracatenarios, entre átomos
electronegativos: – O – H – O – u – O – H – N –. Son enlaces débiles que
estabilizan el plegamiento.
- También pueden formarse, entre dos Cys, puentes disulfuro.
- Una proteína puede plegarse de múltiples formas distintas. Influye tanto
la estructura primaria como los posibles cambios conformacionales.
- En concreto una proteína de sólo 100 aa tendría 3100 posibilidades de
plegamiento. Tarda 10-13 segundos en probar una posibilidad. Por lo tanto:

tiempo de plegamiento = 10-13 . 3100 = 1,6.1027 años

- Estos datos aclaran que una proteína no puede probar todas las
conformaciones posibles, y que debe plegarse rápida y definitivamente.
- Este plegamiento controlado y directo recibe el nombre de estructura
nativa.
- Las Chaperoninas son proteínas que intervienen en el plegamiento,
ejerciendo como molde y acelerando el proceso.
- Un pequeño cambio en el plegamiento de la proteína globular es tan
importante como un cambio en su estructura primaria. El paso de PrPC a
PrPSc, por ejemplo, depende de un pequeño cambio conformacional en un
dominio localizado.
- Se puede hacer una predicción grosera del plegamiento de una proteína
a partir de su estructura primaria, por medio de la estructura supersecundaria.
EJEMPLO:

Arg Arg Arg Arg Ala Val Lys Ala Val Ser Pro Gly Val Pro Gly Gly Ala Ala Gly
? α−h o β−l Codo α−h o β−l

- Algunas mutaciones puntuales pueden no afectar al plegamiento de la
proteína. Por ejemplo, un cambio Asp > Glu no afecta pues ambos aa son
polares con carga negativa.

3 Desnaturalización de las proteínas globulares:
- Hace referencia a un cambio en la estructura nativa de la proteína que
repercute en su actividad biológica.
- En una proteína cuaternaria, la ruptura del polímero es causa de
desnaturalización, aunque se conserve la estructura terciaria.
- En una proteína globular monomérica, un cambio conformacional que
impida la actividad biológica normal es causa de desnaturalización.
- Algunos pequeños cambios no son causa de desnaturalización, por
ejemplo, la mutación puntual Asp > Glu.
- En ocasiones es conveniente desnaturalizar las proteínas con el fin de
estudiar su estructura. Se puede lograr por diversas técnicas:
• Aumento de temperatura.
• Cambios de pH.
• Aumento de fuerza iónica (FI).
• Utilizando agentes desnaturalizantes, como lejía o detergentes.
- Algunas proteínas resisten los cambios de temperatura, pH y FI

!24
- Mediante cambios de pH o utilización de algunos agentes
desnaturalizantes, la desnaturalización de las proteínas es reversible.
- En el caso de detergentes, como SDS, la región polar se introduce en la
proteína globular, quedando las cabezas hacia el exterior. Esto modifica las
fuerzas de WW.
- La desnaturalización se puso de manifiesto gracias a la Ribonucleasa. El
plegamiento de esta proteína es estabilizado por puentes disulfuro entre Met.
Por acción de alcohol y urea los enlaces se rompen. Posteriormente, en
presencia de O2, se forman nuevos enlaces distintos a los de la estructura
nativa, quedando la proteína inactiva. Ambos cambios son reversibles.









III/ Técnicas de purificación y análisis de proteínas:

A/ Preparación de muestras:

1 Homogeneización:
- Previo al estudio de una proteína se debe localizar en el organismo que
la sintetiza. Lograremos purificarla conociendo sus propiedades biológicas,
químicas y físicas.
- Una vez localizadas las células se procede a la homogeneización. Una
vez extraídas se procede a su ruptura. Se pueden utilizar diversas técnicas
como la batidora, ultrasonidos o el choque osmótico.
- Para evitar la desnaturalización de las proteínas, se utiliza una solución
tampón, con baja temperatura y fuerza iónica.
- El tejido queda triturado, y sus componentes homogeneizados.

2 Técnicas de Purificación de proteínas:
- Las técnicas de purificación no son específicas para una proteína
exclusiva. Sirve para separar proteínas de una muestra en función de un
criterio.
- Las proteínas con valores iguales para el criterio empleado no se
separan.
- La conveniente combinación de técnicas de purificación permite purificar
una proteína deseada.

B/ La centrifugación:

1 Generalidades:

!25
- La técnica se utiliza para separar los componentes de una muestra en
función de su Coeficiente de Sedimentación S (Unidad Svedberg), el cual
depende del peso y la forma de cada partícula.
- Para ello, la Centrifugadora es una máquina que somete las muestras a
una fuerza centrífuga, que depende de la gravedad y sobre todo de las
revoluciones por minuto.
- Las Ultracentrífugas son las centrifugadoras más fuertes.
- Los tubos con las muestras se colocan en el Rotor de la centrifugadora.
Existen varios tipos de Rotor en función de su inclinación, y de si esta es o no
variable.
- El ángulo facilita y hace más efectiva la centrifugación. Si es muy
inclinado el tubo puede derramarse.
- El tiempo al que se somete la muestra a fuerzas centrífugas también es
responsable de la situación final de los componentes.

2 La Centrifugación Diferencial:
- Permite separar los componentes de la muestra, realizando una
centrifugación fraccionada y aplicando una fuerza cada vez superior.
- En función de la proteína que deseamos analizar elegimos uno u otro
precipitado.
- Si deseamos estudiar la fracción soluble de la muestra podemos
centrifugar directamente a 100 000 g.

MUESTRA HOMOGENEIZADA

Centrifugación a 100 g

Precipitado SOBRENADANTE

!26
 Células no trituradas
Centrifugado a 4 000 g

Precipitado SOBRENADANTE
Núcleos, Cloroplastos
Centrifugado a 15 000 g

Precipitado SOBRENADANTE
Mitocóndrias
Centrifugado a 30 000 g

Precipitado SOBRENADANTE
Lisosomas
Centrifugado a 100 000 g

Precipitado SOBRENADANTE
Microsomas Fracción Soluble
Sinaptosomas
Ribosomas

3 Centrifugación en Gradiente de Densidad:
- Se crea un gradiente de densidad en el tubo en el que se centrifuga la
muestra. Suele utilizarse una disolución de sacarosa en agua, más
concentrada cuanto más cerca del fondo del tubo.
- La muestra se coloca en la superficie. Después de centrifugado, cada
componente cesa su sedimentación cuando alcanza el estrato cuya densidad
coincida con la suya propia.
- Se suele utilizar para separar orgánulos. Los orgánulos seleccionados
pueden ser marcados con enzimas marcadoras para asegurar en que estrato
se encuentra.

4 Ultracentrifugación analítica:
- Se utiliza para el análisis de muestras, no su purificación. Es una técnica
muy cara de realizar, pues se precisa de una centrifugadora especial.
- Sirve para obtener datos como, por ejemplo, el peso molecular (PM) de
una proteína, o la pureza de una muestra determinada.
- Se debe trabajar con muestras de proteínas ya purificadas.
- Se emplea un haz de luz para medir la Absorbancia de rayos UV (AUV) y/
o el índice de refracción del medio (n), para deducir el PM de la proteína.

C/ Precipitación, Liofilización y Dialisis:

1 Precipitación isoeléctrica fraccionada:
- Es el tipo de precipitación fraccionada más común. Depende de la
solubilidad de las proteínas en función de su pI.
- Cuando pH = pI la solubilidad de las proteínas es mínima pues son
menos polares. Tienden entonces a formar agregados y precipitar.
- Cuando pH < pI hay repulsión entre cargas +.
- Cuando pH > pI hay repulsión entre cargas -.

!27
- Haciendo variar el pH favorecemos los distintos pI de cada tipo de
proteina por separado. Podemos hacer precipitar así las distintas proteínas a
distintos pH, en función de su pI.

2 Precipitación fraccionada por eliminación del agua de solvatación:
- Cada proteína necesita determinada cantidad de agua de solvatación. Al
eliminarse en agua de solvatación se facilita la unión entre las propias
proteínas, que precipitan.
- Añadiendo determinadas sales como Sulfato amónico (SO4(NH4)2),
hacemos disminuir el agua se solvatación. Otras sales, como NaCl o KCl,
ayudan a hacer las proteínas más solubles en el agua.
- Podemos hacerlo fraccionadamente, si aumentamos la [Sal]
progresivamente.
- Según los tipos de proteínas pierdan su agua de solvatación propia, irán
fraccionando y podremos separarlas, generalmente para desecharlas y añadir
más sales hasta que obtenemos el precipitado que deseamos.
- [Proteína]OSM disminuye a lo largo de las precipitaciones fraccionadas.

3 Dialisis:
- Esta técnica suele emplearse para separar las proteínas purificadas de
las sales que se encuentran en solución contaminando la muestra.
- Se emplea una Bolsa de Dialisis con microporos. En función de su
tamaño dejarán pasar a unas moléculas, y a otras no.
- Se introduce la muestra en una bolsa, y la bolsa en un recipiente con
mucho agua distilada. La sal sale de la bolsa y el agua entra, hasta que las
concentraciones osmolares se igualan.
- Se puede cambiar la bolsa a un nuevo recipiente con agua pura.
Repitiendo la técnica se elimina una cantidad considerable de sales.
- Se puede utilizar, con el mismo fin, la ultrafiltración, sistema de filtración
con poros y embudo.

4 Liofilización:
- En una muestra poco concentrada, elimina el agua sin dañar las
proteinas. Hay varios métodos.
- Realizar una congelación rápida de la muestra seguida de Sublimación
al vacío, o Evaporación al vacío. Obtenemos polvo proteico.
- Se puede realizar en concentración con geles, utilizando una bolsa de
Diálisis en un recipiente con gel que absorben la humedad.

D/ Cromatografía:

1 Generalidades:
- Técnica de purificación y analítica. Puede separa los componentes en
función de distintos criterios:
• De Reparto: de su solubilidad.
• De Adsorción: de su polaridad. >DE INTERCAMBIO IONICO: de su
carga.
• De Permeabilidad: de su tamaño.
• De Afinidad: de su especificidad biológica.

!28

2 Cromatografía de Reparto:
- Esta técnica suele utilizarse con aa. Se utilizan técnicas de tinción para
poder visualizar su situación durante el experimento.
- Se puede realizar en placa fina o en columna. Se utilizan dos disolventes
no miscibles:
• La fase estacionaria está inmóvil en la placa o columna.
• La fase móvil se desplaza sobre la estacionaria.
- En función de su afinidad por cada una de las fases, los componentes
de la muestra quedarán anclados en la fase estacionaria, o de desplazarán con
la fase móvil.
- La separación de los componentes depende de su afinidad por una u
otra fase, y no de su tamaño.

3 Cromatografía de Adsorción, de Intercambio Iónico:
- Esta técnica suele utilizarse para estudiar péptidos y pequeñas
proteínas.
- Se utilizan columnas con mallas de resinas cargadas eléctricamente,
llamadas Intercambiadores Iónicos. Las cargas son proporcionadas por
determinados productos que se unen fijamente a la malla de resina.
- Se diferencian dos tipos:
• Intercambiador aniónico, con cargas +. pH inicial bajo.
• Intercambiador catiónico, con carga -. pH inicial alto.
- Haciendo variar el pH, logramos que las proteínas caigan
progresivamente, en función de su pI.
- Con un pH inicial extremo, todas las proteínas cargadas quedan
retenidas. Según hacemos variar el pH, las proteínas son liberadas
ordenadamente, cuando su pI = pH del medio.
- En lugar de variar el pH, se puede hacer variar la [Sal] aumentando la
fuerza iónica de la columna.

EJERCICIO: ¿Cuál es el orden de obtención de los componentes de la
siguiente muestra, por la técnica de Cromatografía de Intercambio Aniónico?
MUESTRA: pI
Quimiotripsinógeno 9,4
Hemoglobina 7,0
Lisozima 4,1
Ovoalbumina 4,9

EJERCICIO: Realizamos un análisis de una muestra con tres proteínas
idénticas, que sólo se diferencian por un aminoácido: A (Glu), B (Val) y C (Lys).
Por la técnica de Cromatografía de Intercambio Aniónico, obtenemos tres
fracciones a: pH = 4,5; pH = 7; y pH = 7,5.
¿Cuál es el pI de cada una de las proteínas?

4 Cromatografía de Permeabilidad:
- Separa los componentes de una muestra en función de su tamaño o su
masa. Permite obtener el PM de las proteínas.

!29
- Se utilizan columnas con polímeros de resinas; algunos con textura de
gel, como los polímeros de glucosa. Se trata de partículas independientes
formadas por fibras poliméricas.
- Estas partículas se hinchan en contacto con agua o con la fase móvil, y
pueden absorber compuestos de la muestra en función de su tamaño.
- Las proteínas que pueden atravesar la resina salen de la columna por
orden de peso molecular, de mayor a menor: No es una filtración sino una
cromatografía.
- Se pueden recuperar por separado con un colector de fracciones.
- En función del tamaño del poro de la resina, aquellas proteínas que son
demasiado grandes quedan retenidas en la superficie de la columna. En este
sentido, se asemeja a una filtración.
- Debemos realizar un calibrado de la columna. Se realiza una recta de
calibrado de la siguiente relación:

log PM / V e

- Tenemos:
• V0: Volumen de exclusión, o de los intersticios entre partículas de gel.
• Vi: Volumen interno de las partículas de gel.
• Vt: Volumen total del lecho cromatográfico.

Vt = V0 + Vi

•

KD: Coeficiente de reparto; proporción de Vi que le resulta accesible a
una molécula del soluto (Para soluto de gran tamaño = 0).

KD = VACCESIBLE / Vi

•

Ve: Volumen de elución de un soluto. Viene dado por la expresión:

Ve = V0 + KD.Vi

EJERCICIO: ¿Cuál es el orden de obtención de los componentes de la
siguiente muestra, por la técnica de Cromatografía de Permeabilidad?
MUESTRA: PM
Quimiotripsinógeno 25 000
Hemoglobina 64 000
Lisozima 14 000
Ovoalbumina 44 000


EJERCICIO: Se realiza una Cromatografía de Permeabilidad de una proteína, y
después de la misma proteína en presencia de SDS. Previamente se realiza el
calibrado de la columna, y se obtiene:

PM 12 400 25 000 44 000 68 000 240 000 330 000 670 000

Ve 206 184 165 153 115 106 90

!30

Experimentando esta técnica con la proteína muestra, obtenemos los
siguientes resultados:

Ve
(mL)
- SDS
131
+ SDS
152

Realizar gráfico de calibrado.
¿Cuál es el PM de la proteína en cada caso?
¿Qué podemos deducir de la proteína por los resultados?

SOLUCIÓN:
PM(- SDS) = 140 000 g.mol-1
PM(+ SDS) = 74 000 g.mol-1
La proteína es de estructura cuaternaria: Se trata de un homodímero. SDS desnaturaliza y
rompe el polímero.

EJERCICIO: Se realiza una Cromatografía de Permeabilidad de una proteína,
después de la misma proteína en presencia de SDS, y finalmente en presencia
de SDS y β−Metanol.
Calculamos los PM de los resultados obtenidos: Un pico en el primer caso, un
pico en el segundo y dos picos en el tercero.

PM
(g.mol-1)
- SDS 200 000
- β−Metanol
+ SDS 50 000
- β−Metanol
+SDS 35 000
+β−Metanol 15 000

¿Qué podemos deducir de la proteína por los resultados?

SOLUCIÓN:
La proteína es un homotetrámero de PM = 200.000. SDS lo rompe en cuatro subunidades de
PM = 50.000. Cada subunidad es un heterodímero. β−metanol rompe las dos subunidades
básicas de PM = 35.000 y PM = 15.000.

5 Cromatografía de Afinidad:

!31
- Es una técnica muy compleja y selectiva. Permite aislar totalmente una
proteína enzima en un único paso: rendimiento muy alto.
- Separa las proteínas por su especificidad biológica, gracias a la
formación del complejo Enzima – Sustrato, responsable de la formación de un
Producto:

S + E
ES E + P

- Se realiza en una columna con una resina específica, que debe ser
fabricada para el estudio de la proteína en cuestión. La resina incluye un
sustrato por el que la proteína enzima estudiada presenta afinidad.
- Durante la cromatografía se forma el complejo ES. Los restos eluyen y la
proteína queda fijada en la columna.

D/ Electroforesis:

1 Generalidades:
- Técnica de purificación y analítica. El criterio empleado es la carga de
las partículas de la muestra.
- La movilidad de las partículas es proporcional a su carga y a la
resistencia que opone la fase estacionaria.
- Se crea sobre un gel hidratado un campo
electromagnético, gracias a dos polos: - Cátodo;
+ Ánodo.
- Las proteínas, en función de su carga, son
arrastradas hacia uno u otro polo.

2 Electroforesis de zona:
- Se utiliza para purificar proteínas. Suele
realizarse sobre un gel de Agar o Poliacrilamida
(antes se usaba papel) colocado sobre un vidrio
refrigerado. La muestra se coloca en una
pequeña zona central.
- En cada extremo del gel se coloca una cubeta con una solución tampón:
una con el ánodo y otra con el cátodo. El gel y la solución tampón se conectan
con papeles.
- En función de su carga + o -, la partícula presenta movilidad negativa
(hacia el cátodo) o positiva (hacia el ánodo) respectivamente.
- El peso y tamaño de las partículas modifica la velocidad a la que se
desplazan sobre la fase estacionaria.
- En función del valor absoluto de su carga, la proteína alcanzará
movilidad nula en el punto en el que encuentra su pI. Los cambios de pH del
gel modifican la movilidad.


3 Electroforesis en geles de Poliacrilamida - SDS (PAGE-SDS):

!32
- Esta es una técnica analítica, que al igual que la ultracentrifugación
analítica y la cromatografía de permeabilidad, nos permite obtener el PM de los
monómeros de cada proteína.
- Se realiza en presencia de agente desnaturalizante SDS, de manera que
los polímeros se separan. Además la carga de las proteínas queda solapada
por las cargas negativas de SDS.
- Las proteínas-SDS se depositan sobre el gel en la región del cátodo.
Todas tienden a desplazarse hacia el ánodo debido a la carga de SDS.
- Una vez realizada la técnica, las proteínas deben ser teñidas o sino
pasarán desapercibidas en el gel. La muestra purificada no puede recuperarse.
- Para teñir las proteínas, estas son transferidas del gel a una membrana
de Nitrocelulosa, gracias a una cubeta de transferencia. En la membrana las
proteínas son mucho más fáciles de tratar.
- A menudo se utilizan técnicas de tinción por Inmunotransferencia,
basadas en la especificidad del complejo Ac-Ag.

EJERCICIO: Trabajamos con Proteína X, PM = 140.000 g.mol-1: Realizamos
primero la técnica de Electroforesis PAGE-SDS, y posteriormente PAGE- SDS
con β− metanol. Obtenemos los resultados siguientes. ¿Qué podemos deducir?


67.000

43.000

30.000

20.000

g.mol-1

− β− metanol + β− metanol Proteína patrón

SOLUCIÓN:
Con SDS obtenemos una única banda alrededor de PM = 67.000 g.mol-1. La proteína
es un homodímero: 70.000 x 2 = 140.000 g.mol-1.
Con SDS y β− metanol obtenemos sin embargo dos bandas distintas, a 30.000 y
40.000 g.mol-1 aproximadamente. Cada monómero de la estructura cuaternaria está formado a
su vez por dos heterodímeros.

EJERCICIO: Realizamos una electroforesis PAGE, luego PAGE-SDS:
- SDS: 300.000 g.mol-1
+ SDS: 100.000 g.mol-1 y 50.000 g.mol-1
¿Qué podemos deducir?

SOLUCIÓN:
Se trata sin duda de una proteína de estructura cuaternaria; un heteropolímero. Sin
embargo hay varias opciones: Dos subunidades de 100.000 g.mol-1 y dos de 50.000 g.mol-1, ó;
Una subunidad de 100.000 g.mol-1 y cuatro de 50.000 g.mol-1.

!33
D/ Otros métodos:

1 Cálculo del pI de las proteínas:
- El cálculo del pI de un péptido se calcula teniendo en cuenta los grupos
polares presentes, no aa por aa.

EJEMPLO; Ribonucleasa:

GRUPOS CARGADOS Número pKa

α−COOH 1 4,7

α−NH2 1 7,8

Asp + Glu 10 4,7

Tyr 6 9,9

Hys 4 6,5

Lys 10 10,2

Arg 4 12,0

- Cuando la proteína R está protonada al máximo, tienen carga los grupos
α−NH2 (1), Hys (4), Lys (10) y Arg (4): 19 +.

R19+
R8+ R4+ R3+ R3- R13- R17-

pH: 4,7 6,5 7,8 9,9 10,2 12,0

- Podemos deducir el pI de la proteína, pues corresponde al pH en el que
esta presenta carga neta nula: R3+ > R0 > R3-. Por lo tanto:
Para pKa = pH = 9,9 ; 50 % [R3+], 50 % [R3-] = R0
pI = 9,9

2 Cálculo de resultados de purificación:

mg de Actividad Actividad Pasos de Rendimiento
Proteína encimática específica purificación %

Homogeneizado 91.400 40.000 0.4

14,8
100

Precipitado 3.260 21.100 6.5 523 53

4.205
DEHE 64,3 14.800 230 37

!34
 Cromatografía 6,2 11.500 1860 29

• Actividad Encimática de la muestra = UE

• Actividad específica (AE); solo de nuestra enzima, en nuestra muestra
AE = UE/Mb de proteína.
- Obtenemos una proteína purificada 4.205 veces, con un rendimiento de
29 %.

IV/ Las Proteínas:

A/ Clasificación de las proteínas:

1Por su composición:
- Proteínas simples: Sólo se forman de aminoácidos.
- Proteínas conjugadas: Se forman de aa y grupos prostéticos unidos
fuertemente a la estructura primaria de la proteína.
- Las apoproteínas son proteínas conjugadas. Por ejemplo, la Mioglobina
y la Hemoglobina.

2 Por su estructura:
- Proteínas Fibrosas: Con estructura limitada primaria o secundaria. Por
ejemplo, Queratinas y Colagenos.
- Proteínas globulares: Plegadas en estructuras terciarias o cuaternarias.

3 Por su función:
- Las funciones de las proteínas son muy diversas.
- Reserva: Almacenan sustancias. Por ejemplo, la mioglobina almacena
O2.
- Transporte: Transportan sustancias, generalmente sustancias no
miscibles con agua a través del torrente sanguíneo. Por ejemplo, la
hemoglobina transporta O2.
- Catalítica: Las proteínas que catalizan reacciones de sustancias,
algunas espontáneas acelerándolas, y otras permitiendo que se produzcan,
reciben el nombre de Enzimas. Son siempre globulares.
- Contráctil: Por ejemplo Actina, Miosina, Tubulina.
- Defensora o Inmune: Anticuerpos.
- Tóxica: Toxinas, como Votox o Glicina.
- Señales: Hormonas.
- Receptores: Proteínas transmembrana, transductoras de señales.
- Estructurales: Colágeno, Actina, Tubulina, Querantina, Agrecanes…
- Transportadora: Canales, Transportadores y Bombas iónicas
transmembrana.
- Anticongelantes, de Unión Celular, …

B/ Relaciones estructura – función:

1 Generalidades:

!35
- Todas las proteínas presentan una estrecha relación entre su estructura
y su función. Esta relación es patente por la afinidad que todas las proteínas
presentan por ciertos sustratos en un dominio de unión (secuencia concreta de
aa): Se trata de los Ligandos:

Proteína + Ligando PL

- KD: Constante de disociación. KD = [P].[L] / [PL]

2 Técnica experimental de cálculo de KD:
- Se realiza una Diálisis. Utilizamos una bolsa cuyo poro permite solo la
salida de L libre.
- Se introduce en la bolsa una solución de [P] y [L] conocidas.
- La bolsa se coloca en un recipiente con agua destilada. Sabemos que
[L]EXTINICIAL = 0. Medimos [L]EXTFINAL y calculamos la constante de disociación.

3 Fracción de ligando unido ν (%):
- Se trata de la parte de ligando que se encuentra unida a la proteína, es
decir la Saturación de la proteína.
- ν: Fracción de ligando unido.

ν = [PL] / ( [P] + [PL] )

- KA se define como constante de afinidad. Se trata del inverso de KD:

KA = [PL] / [P].[L]

- Por lo tanto, ν = KA .[P].[L] / ( [P] + KA .[P].[L] ), es decir:

ν = KA .[L] / ( 1 + K A .[L] )

- En el caso de una proteína dímero, con dos lugares de unión para
ligandos:

P + L PL + L PL2

pK1 o p K 2 pK3

- Si se trata de un homodímero, los dos dominios de unión son idénticos y
pK1 = pK2.
- A menudo la unión del primer ligando provoca un cambio conformacional
en la proteína, dificultando o facilitando la unión del segundo.
- Si el primer ligando no cambia la conformación de la proteína (pK3 = pK1
o pK2 en función de dónde se ha unido el primer L), entonces:

ν = ([PL] + 2[PL2] ) / ( [P] + [PL] + [PL2] )

!36

KA

ν / [L]
n=2 (dímero)

n: nº de corte, correspondiente al nº
de L que puede unir la proteína.
n ν

ν = n.KA.[L] / ( 1 + KA .[L] )

ν / [L] = 2.KA - ν.KA

- Generalmente la unión del primer ligando modifica la conformación de la
proteína: Se dice que hay Interacción.

3 Fracción de ligando unido teniendo en cuenta la interacción:

A C
ν = n.K .[L] / ( 1 + K .[L] ) A C

- C es el coeficiente de Hill:
• C = 1; No hay interacción.
• C > 1; Hay interacción positiva.
• C < 1; Hay interacción negativa.
•
- En caso de interacción positiva, se favorece la unión del nuevo ligando.
Es el caso más frecuente de interacción:

[L] ν / [L]
[L]

nu

ν n ν

!37

- En caso de interacción negativa, se desfavorece la unión del nuevo
ligando:

[L] ν / [L]

ν n ν

- En estos casos podemos identificar n gracias a la curva, pero no KA,
pues en caso de interacción es solo un promedio.
- Si el ligando es un gas, se utiliza la presión parcial del gas en lugar de ν
para realizar la curva.


C/ Las Apoproteínas:

1 Generalidades, el grupo Hemo:
- Hemoglobina y Mioglobina son dos proteínas conjugadas; Apoproteínas.
Su grupo prostético recibe el nombre Hemo, al encontrarse unidas a este
reciben el nombre de Holoproteínas.
- El grupo Hemo posee un átomo de hierro Fe central. Éste tiene seis
posiciones de combinación: Cuatro de ellas unen el Fe a cuatro átomos de N
del grupo.
- Cuando Hemo se encuentra unido a una de estas proteínas, una
posición de combinación del Fe se une fuertemente a una Hys de la proteína:
Hys proximal (F8), que tira de Fe hacia ella.
- Hys distal bloquea la última posición de combinación del Fe,
reservándola para el O2 y evitando la unión con otras sustancias.
- Durante la oxigenación, la proteína cambia de conformación; El átomo
de Fe se desplaza hacia el plano Hemo, arrastrando Hys proximal la cual
queda menos inclinada.

!38

O2
Desoximioglobina
Oximioglobina
Mb
MbO2

- El Hierro no se oxida formando Óxido de Hierro gracias a la protección
proteica.
- Se forma Hierro Oxigenado: El grupo Hemo sujeta el átomo de O2, pero
puede soltarlo cuando la concentración en el tejido es baja.

2 La Mioglobina:
- La Mioglobina es una proteína globular monomérica, formada por una
cadena con 8 tramos α−hélice. No hay interacción.
- Su función es retener y reservar el O2 del cuerpo. Tiene un lugar de
unión en su único grupo Hemo.

ν = [MbO2] / ( [Mb] + [MbO2] )

ν = KA.[O2] / ( 1 + KA .[O2] )

- La proteína se satura rápidamente en un medio con alta p(O2). Siempre

tiende a absorver y acumular el gas.
- Se define p50 como la presión p(O2) a la que la proteína se satura al 50
%, es decir, a la que [Mb] = [MbO2]. Para la Mioglobina, p50 = 1 Torr (Gráfico
fotocopia).
- Cuanto menor es p50, mayor es la afinidad de la proteína por su ligando.
Al ser inverso a KA, utilizamos KD para realizar el cálculo;

ν = (1/KD ).pO2 / ( 1 + pO2/KD ), es decir:

ν = pO2 / ( KD + pO2 )

- Para pO2 = p50; ν = 0,5 = p50 / ( KD + p50 ), es decir:

p50 = 0,5 KD + 0,5 p50

KD = p50

ν = pO2 / ( p50 + pO2 )

3 La Hemoglobina:
- Se trata de una proteína globular de estructura cuaternaria. En concreto
se trata de un homotetrámero (n = 4).
- Cada monómero que lo forma es similar a una proteína de Mioglobina, y
posee un grupo Hemo. Por lo tanto en total hay 4 grupos Hemo, y cuatro
lugares de unión al O2, uno por subunidad.

!39
- Las subunidades presentan interacción positiva, es decir, C > 1 (C =
2,8).
- Para el caso de la Hb, p50 = 26 Torr. Es mucho mayor que en el caso de
la Mioglobina, por lo que presenta una afinidad mucho menor.
- Gracias a estas propiedades, la Hb se caracteriza por liberar O2 cuando
hay poca presencia en el medio, y absorberlo en tejidos donde hay una alta
concentración, generalmente los pulmones.
- Existen varios tipos de Hb, en función de los tipos de Subunidades.
Estas subunidades presentan ligeras diferencias, pero guardando siempre
similitud a la Mb. Hb se encuentra en los Eritrocitos.
• Hb A: 2α + 2β (Normal)
• Hb F: 2α + 2γ (Sangre materna – Fetal)
• Hb A2: 2α + 2δ (Patológica en altas concentraciones)
- La diferencia entre los tipos de subunidades depende de cambios de aa
en posiciones no críticas. No implican grandes cambios. Hay 9 posiciones
invariables entre todos los seres vivos con Mb y Hb.
- Al separar las subunidades, su afinidad por el sustrato aumenta,
igualando la de la Mb. Pierde sin embargo la capacidad transportadora.
- La Hb es sintetizada en los reticulocitos del tejido hematopoyético, y es
liberada a la sangre en los Eritrocitos.
- Es una proteína imprescindible en organismos de gran tamaño, pues es
capaz de absorber el O2 de los pulmones, pero también de liberarlo en los
tejidos alejados que necesitan respirar, como músculos o SN.
- Tenemos, en este caso:

ν = KA.pO2C / ( 1 + KA.pO2C )

ν + ν. KA.pO2C = KA.pO2C ; ν = KA.pO2C.(1-ν)

log (ν / (1-ν)) = log K
A + C.log pO2


Log (ν / (1-ν))
C = 2,8 C = 1
[L]

nu
C = 1 log pO2

- La pendiente cambia. Tanto el primer como el último oxígeno tienen una
única posibilidad de unión, por ello la pendiente es C = 1.

!40
 - La pendiente cambia para los oxígenos segundo y tercero, cuya unión
es favorecida y acelerada por la interacción positiva.
- Debido a los cambios conformacionales, según se unen más O2, KA se
hace cada vez mayor, de tal manera:
• KA1 = 0,133.
• KA4 = 40.
- Cuanto menor es p50, mayor es la afinidad de la proteína por su ligando.
Al ser inverso a KA, utilizamos KD para realizar el cálculo;

C C
ν = pO2 / ( KD + pO2 )

- Para pO2 = p50; ν = 0,5 = p50C / ( KD + p50C ), es decir:

KD = p50C

ν = pO2C / ( p50C + pO2C )

EJERCICIO: Calcular ν de Mioglobina en los pulmones y en los tejidos.
Calcular ν de Hemoglobina en los pulmones y en los tejidos sin tener en
cuenta C. Calcular ν de Hemoglobina en los pulmones y en los tejidos
teniendo en cuenta la cooperatividad. ¿Qué podemos deducir?
pO2(PULMÓN) = 100; pO2(TEJIDOS) = 20 ; p50(Mb) = 1; p50(Hb) = 26 ; C(Hb) = 2,8

SOLUCIÓN:
Para Mb: νPULMON = 99 % νTEJIDOS = 95 %
Para Hb sin C: νPULMON = 79 % νTEJIDOS = 40 %
Para Hb con C: νPULMON = 98 % νTEJIDOS = 36 %
Mb tiene mayor afinidad pues reserva oxígeno mientras Hb lo transporta hasta lugares donde
escasea. C de Hb aumenta su capacidad de absorber en pulmón y liberar en tejidos.

D/ La Hemoglobina:

1 Cambios conformacionales:
- Como vimos, la Mb sufría un cambio conformacional entre sus estados
MbO2 y Mb. Ocurre algo similar en el caso de Hb.
- Lógicamente, los cambios conformacionales que se producen en Hb al
recibir los primeros átomos de oxígeno modifican la proteína facilitando la
entrada de los siguientes.
- En concreto, el desplazamiento de la Hys proximal del Hemo que ha
recibido el oxígeno se desplaza y tira de la cadena de aa, modificando la
estructura cuaternaria por la rotura de enlaces secundarios.
- La rotura de 8 enlaces iónicos es responsable del paso de la forma
tensa T a la relajada R, los dos únicos estados posibles.

FORMA T:
ENLACES
que intervienen en el
cambio conformacional
α1 α 2

!41


+ +

β 1 β 2

+ +


+

+

O 2
O2

FORMA R:

at c t
α1 α2
- +

+ -

+ ct at +

c t c t



β 2
+
β 1
+

+
+

+
+
- -
+ +



- En conformación R, el agua podría llegar hasta el Fe II y transformarlo
en Fe III y dejando el grupo Hemo inutilizable. Otras moléculas, como CO,
pueden dañar el grupo. Por ello la posición de Hys distal protectora es
fundamental.
- Se considera la Hb Proteína Alostérica, pues posee dominios de unión
para otras partículas.
- En el caso de la Hb Fetal, las pequeñas diferencias entre las
subunidades β y γ la hacen menos estable en su forma R, ante todo debido al
cabio Hys 143 (β) > Ser. Se dificulta además la unión de 2,3-BPG.
- Una mutación en Leu 143 (α) es responsable de la disociación de
subunidades.

2 Influencia del pH en la conformación de la Hemoglobina:
- El pH modifica la afinidad de la Hb por el oxígeno. En concreto, al
aumentar el pH del medio, la afinidad aumenta.
- Los protones se unen a la proteína disminuyendo su afinidad, pero sin
anularla. Se deben unir por lo tanto a un dominio distinto que el oxígeno.
- H+ son considerados Inhibidores Alostéricos de la proteína. Se acumulan
primero los enlaces Hys – Asp internos de la subunidades β (en dibujo,

!42
enlaces en forma de asa), cuando se sobrepasa el pI de Hys y queda
protonada. Reforzando estos enlaces refuerzan la forma T.
- Si sigue disminuyendo el pH, H+ se acumula en los enlaces at – ct,
protonando los grupos amino y reforzando los enlaces. Esto estabiliza aún
más la forma T, dificultando la entrada de oxígeno.

3 Otros Efectores Alostéricos:
- H+ no es el único efector alostérico de la Hb. Entre ellos se ecuentran
también el CO2, o el 2,3-BPG.
- El CO2 es un inhibidor, con un sitio de unión en Hb distinto al del
oxígeno, pero es menos frecuente (10-20 %) que H+.
- El dióxido de carbono se unen en los extremos at de β, estabilizando la
forma T:

R – NH – COO-

4 El 2,3-Bifosfoglicerol:
- 2,3-BPG es sintetizado a partir de precursores en el interior de
eritrocitos.
- Es un inhibidor alostérico de Hb, que actúa como intermediario durante
la Glicólisis, o degradación de la glucosa.

G L U C O S A 1 , 3 - B P G
GLICOLISIS


MUTASA
(Retrocontrol)
2,3-BPG

- El paso de 1,3-BPG a 2,3-BPG es controlado por la enzima Mutasa.
- Al producirse una disminución de la presión en el medio, disminuye
también pO2, produciendose el denominado mal de alturas.
- Tras un periodo de adaptación, este mal es superado sin problemas, al
regularse correctamente la síntesis de Mutasa, haciendio disminuir la
concentración de 2,3-BPG.
- La sangre almacenada no libera el O2 tan fácilmente, y parece presentar
mayor afinidad. Esto se debe a la degradación del 2,3-BPG.

5 Inhibidores No Alostérico:
- El Monóxido de Carbono es un inhibidor no alostérico de la Hb, pues se
une al mismo dominio de unión que el oxígeno, bloqueándolo. Se une al Fe
con 200 veces más afinidad que O2.
- Cuando CO se une a Fe lo hace definitivamente, pero aumenta también
la afinidad de los otros grupos Hemo, como lo haría el propio O2.
- Cuando se el primer CO, estabiliza la forma R de la proteína. Cuando
hay 4 grupos CO unidos, la proteína queda inutilizable.
- En condiciones normales, una persona no fumadora presenta 0,3 % de
Hb con CO.

!43
- El Óxido Nítrico NO es otro inhibidor no alostérico de Hb se une a Fe,
como el oxígeno, pero en la forma T.
- Cuando se une NO, unido a su vez a Glutatión, actúa como
vasodilatador, facilitando la entrada del oxígeno a los tejidos, y la salida del
dióxido de carbono.

6 Importancia de la presencia de Inhibidores:
- La presencia de unos u otros efectores de la Hb en los tejidos o en los
pulmones facilitan su función en cada órgano.
- En los tejidos, se encuentran grandes cantidades de 2,3-BPG, H+ y CO2,
que se unen a Hb facilitando la liberación del oxígeno. También se une NO-
Glutatión, activando la vasodilatación.
- H+ y CO2 son transportados hasta los pulmones y liberados allí, donde
Hb se carga de nuevo de oxígeno.

7 Patologías de la Hemoglobina:
- Suelen derivar de la síntesis anómala de los monómeros.
- Anemia Falciforme: Se produce en la subunidad β una mutación puntual
Glu > Val de una posición externa en forma T. Este cambio facilita la unión de
Hb en fibras. Los eritrocitos se deforman debido a estas fibras tornando
falciformes y perdiendo elasticidad, y se atascan en los capilares. Evitan la
proliferación del parásito de la Malaria.
- Talasemia: α−talasemia o β−talasemia, malformaciones en cadena α o β
respectivamente, impiden la correcta acción de Hb.

EJERCICIO:
1/ Enumerar las principales diferencias entre Hemoglobina y Mioglobina.
2/ ¿Cual es el efecto de los siguientes acontecimientos en la afinidad
Hemoglobina – O2?
1. Disociación de Hemoglobina en subunidades.
2. Aumento de [CO].
3. Aumento de [CO2].
4. Disminución del pH.
5. Cambio de Hys 143 (β) por Ser.
6. Mutación en Leu 143 (α).
3/ ¿Qué Hys son fundamentales en la funcionalidad de la Hemoglobina, y por
qué?

SOLUCIÓN:
1/ Función: Hb transporta, menos afinidad, Mb acumula. Subunidades: Hb 4, Mb 1. Hb
con cooperación. Hb proteína alostérica
2/
1. Aumenta.
2. Aumenta.
3. Disminuye.
4. Disminuye.
5. Disminuye.
6. Aumenta.
3/ Hys proximal sujeta Hemo. Hys distal impide otras uniones en Fe como H2O. Otras
Hys median uniones e interacciones entre subunidades y con los inhibidores.

!44


































IV/ Las Enzimas:

A/ Generalidades en Encimología:

1Introducción:
- Todos los pasos de todos los procesos metabólicos están catalizados
por enzimas, y la capacidad catalítica se considera, junto con la capacidad de
autorreplicación, una de las características fundamentales de la vida.
- Existen dos métodos generales mediante los cuales puede acelerarse la
velocidad de una reacción química. Uno de ellos es la elevación de la
temperatura; el otro consiste en utilizar un catalizador.
- El catalizador se combina con los reactantes de modo transitorio
activándolos, produciendo un estado de transición de menor energía que en la

!45
reacción no catalizada. Una vez formados los productos el catalizador queda
libre, y puede ser de nuevo utilizado.
- La especificidad de las enzimas es muy importante para los seres vivos.
Cada célula contiene varios cientos de miles de compuestos diferentes, y
existen muchas combinaciones posibles entre las reacciones químicas que
estos compuestos pueden experimentar.
- Las enzimas cuidan de que tengan lugar, de manera específica, aquellas
reacciones que son esenciales e indispensables para que la célula viva.
- Todas las enzimas (salvo Ribosomas) son Proteínas Globulares.
Presentan un dominio de unión 3D de aminoácidos llamado Centro Activo, de
conformación especial para unión y catálisis de un sustrato.
- El centro activo es responsable de la alta especificidad biológica de las
enzimas.

2 Nomenclatura y clasificación de las Enzimas:
- Muchas enzimas han sido designadas añadiendo el sufijo -asa al
nombre del sustrato, es decir, la molécula sobre la cuál ejerce su actividad
catalítica. Por ejemplo, la ureasa cataliza la hidrólisis de la urea, y la arginasa
cataliza la hidrólisis de la arginina a urea y ornitina.
- Otras enzimas han recibido su nombre en función del tipo de reacción
que catalizan; así la Gliceraldehído-3P-deshidrogenasa cataliza la oxidación
del la Gliceraldehído-3P.
- Incluso, algunas se conocen de hace mucho tiempo y mantienen su
nombre, sin dar información alguna del sustrato o la reacción que catalizan,
como por ejemplo, tripsina.
- Estos son los seis principales grupos de enzimas conocidos en la
actualidad:
1. Oxido-reductasas (reacciones de oxido-reducción).
2. Transferasas (transfieren grupos funcionales).
3. Hidrolasas (reacciones de hidrólisis).
4. Liasas (reacciones de adición a los dobles enlaces).
5. Isomerasas (reacciones de isomerización).
6. Ligasas (formación de enlaces con consumo de ATP).

3 Los Cimógenos:
- Un Cimógeno es un tipo de enzima que se activa al separarse una parte
de la molécula, bien por acción de otra enzima o por un cambio en el medio en
que se encuentra, por ejemplo, un aumento de la acidez.
- Muchos cimógenos son enzimas proteolíticas o Proteasas, que se
sintetizan, almacenan y liberan en una forma molecular inerte (sin actividad).
Así se evita la digestión de la propia enzima y de proteínas circundantes.
- En el páncreas, además de la secreción de insulina por los islotes de
Langerhans, se producen varias secreciones digestivas, que suelen ser
cimógenos.
- Las enzimas pancreáticas incluyen: α-amilasa, Tripsina, Quimotripsina,
Elastasa, Carboxipeptidasas, Aminopeptidasas, Lipasas y Nucleasas.
- Las enzimas pancreáticas son cimógenos que requieren pH alcalino al
ser sintetizadas. Por ello el páncreas secreta líquido acuoso bicarbonatado de
elevado pH.

!46
- La presencia de ácidos grasos y péptidos en el quimo intestinal estimula
la secreción pancreática de enzimas.
- Al llegar al duodeno, el alto pH del medio activa estos cimógenos que
comienzan a romper péptidos, ácidos nucleicos y lípidos, de forma que puedan
ser absorbidos por el tejido.
- Tripsina es un cimógeno que se activa al llegar al duodeno, debido a su
bajo pH, cambiando su conformación. La presencia de Tripsina permite la
transformación de los otros cimógenos del duodeno.


Tripsinógeno Tripsina


Proelastasa Elastasa
Quimotripsinógeno
Quimotripsina
Procarboxipeptidasa
Carboxipeptidasa



4 Las proteasas:
- Las proteasas catalizan la ruptura de proteínas en péptidos.
- Se dividen en cuatro grupos: Serinproteasas, Cisteínproteasas,
Aspartilproteasas y metaloproteasas. Sus centros activos incluyen,
respectivamente, Ser, Cys, Asp y átomo metálico.
- Las Serinproteasas son una gran familia de enzimas, generalmente
cimógenos.
- Incluyen, entre otras, Tripsina, Quimotripsina y Elastasa, del duodeno,
Pepsina del estómago, y otras proteasas del torrente sanguíneo, responsables
de la coagulación sanguínea, como la Trombina.

B/ Complementaridad Enzima – Sustrato:

1 Modelos de complementaridad Enzima – Sustrato:
- El Modelo de Llave – Cerradura de Fisher es el modelo elemental.
Según este modelo, el centro activo presenta una estructura rígida que encaja
perfectamente con el sustrato.
- Tiene estereoespecificidad, pues la enzima solo reconoce un
estereoisómero.
- Este modelo, sin embargo, no contempla los efectos del Alosterismo.
- El Modelo de Acoplamiento, o Ajuste Inducido, de Koshland, saca punta
al modelo de Fisher y se adapta mejor a la realidad.
- Según este modelo el centro activo es una estructura flexible que sólo
que definida rígidamente cuando se produce la unión E – S.
- Al aproximarse S a E, E sufre cambios conformacionales determinantes
para la orientación de los grupos del centro activo. Sólo al producirse estos
cambios, E y S son perfectamente complementarios.

!47
2 Interacciones de complementaridad entre Enzima y Sustrato:
- Intervienen varias fuerzas en la unión entre la E y su S. La mayoría de
los enlaces que se forman se deben a las fuerzas iónicas.
- Los puentes de H son las uniones más comunes. Son uniones
direccionales: En función del ángulo α formado entre las uniones Dador–H y
Aceptor–H, la unión será más o menos fuerte.


D A D O R
H
ángulo α

ACEPTOR


- En concreto, cuanto mayor es el ángulo α, más débil será la fuerza de
unión.
- Las f WW son muy débiles. Adquieren importancia cuando E y S son
estrictamente complementarias como propone el modelo Llave – Cerradura, y
se aproximan un gran número de átomos.
- Algunas E sufren fuertes modificaciones al unir el sustrato. Por ejemplo
Carboxipeptidasa, cuyo ct se rompe durante la unión.

EJEMPLO:

Ser –
OH RIBONUCLEASA SUSTRATO
PANCREÁTICA
Thr –
OH


- En casos raros, se forman algunos enlaces covalentes E – S.

3 Factores que afectan a las interacciones Enzima – Sustrato:
- El disolvente H2O es una molécula polar, que establece puentes de
hidrógeno intracatenarios. De este modo debilita las interacciones E – S, y
acentúa las interacciones entre grupos apolares.
- Cuando tiene lugar la unión E – S, se excluye el agua de la región del
centro activo.
- Efecto de Proximidad: Al aproximarse a la E, el S se orienta
adecuadamente de manera a unirse correctamente al centro activo, debido a
fuerzas electromagnéticas.
- Los aa del centro activo de la enzima participan en la unión y catálisis de
S a través de mecanismos ácido/base, por ataques nucleófilos - electrófilos
- El efecto de proximidad y la participación directa de los aa del centro
activo son los principales responsables de la eficacia catalítica de una enzima.

!48
- En algunos casos el ataque nucleófilo al S conlleva formación de
enlaces covalentes E – S.

4 Los Cofactores:
- Se trata de factores que afectan a las interacciones ApoE – S.
- Son, en concreto, grupos cuya unión a la proteína es necesaria para su
activación catalítica, provocando cambios conformacionales. Pueden ser iones
metálicos, o moléculas orgánicas no proteicas.
- Las Apoenzimas son la parte proteica de algunas enzimas que necesitan
estar unidas a un cofactor para configurar correctamente su centro activo.

Apoenzima + Cofactor Holoenzima

- La Holoenzima presenta actividad catalítica.
- Las Metaloenzimas precisan la unión coordinada covalente de iones
metálicos a su cadena de aa para ser activas catalíticamente. Por ejemplo, en
el caso del grupo Hemo, el ión Fe se encuentra unido a un grupo prostético
(cofactor que se une covalentemente).
- Los Coenzimas son aquellos cofactores que son moléculas orgánicas.
Aportan grupos esenciales para la catálisis, no presentes en la Apoenzima. A
menudo tienen una parte vitamínica.
- Las coenzimas suelen ser modificadas durante la reacción, pero
recuperan su estado inicial al terminar esta.

3 Parámetros externos que afectan a las interacciones Enzima –
Sustrato:
- La temperatura afecta a la actividad catalítica en forma de cmpana de
Gauss:
• TOPTIMA Suele hallase alrededor de 40 ºC.
• TELEVADA: Las proteínas se desnaturalizan.
• TBAJA: El movimiento de las partículas se reduce.
- El pH puede afectar también a la actividad de las proteínas, en función
de su pI. Cada E tiene un pH óptimo distinto (Ejemplo: Pepsina del estómago
pHOPTIMO = 2 ; Arginasa pHOPTIMO = 10).

C/ Cinética de las Reacciones Encimáticas:

1Generalidades de Cinética Encimática:
- La cinética encimática es el estudio de la velocidad de las reacciones
catalizadas por enzimas.
- El estudio de la cinética encimática se utiliza para el estudio de la
especificidad de las encimas, su mecanismo de acción y el estudio de las rutas
metabólicas.
- En análisis clínicos, se utilizan para la detección de patologías
relacionadas con alteraciones de velocidad enzimática, como en el caso de las
Transaminasas.
- Reacción Reversible: Mientras progresa la reacción, lo hace también la
reacción inversa, haciendo decaer la velocidad.

!49
 S + E ES
E + P


- Al agotarse el S, la velocidad de la reacción decae.
- Si la E es inestable, o se encuentra en medios inapropiados, se vuelve
inactiva y la velocidad decae.
- En algunos casos el P inhibe la reacción, y según aumenta su
concentración la velocidad decae.

2 Medida de la velocidad de una reacción encimática (V):
- Puede medirse tanto como la desaparición progresiva del Sustrato, o la
aparición progresiva del Producto.
- Para medir sus concentraciones, utilizamos las diversas propiedades
químicas y físicas del S, o el P, como por ejemplo, la absorbancia.
- Se selecciona la longitud de onda más absorbida por la sustancia
estudiada, y se calibra el colorímetro. Finalmente se mide la absorbancia en el
tiempo durante el transcurso de la reacción.
- Dado que V decae por diversos motivos, en cinética encimática se
trabaja con V0.

V
(Abs S)
V0





t

- V0 varía cuando lo hace la concentración de S inicial:
• Si [S] inicial es bajo, V0 es bajo.
• Cuanto mayor sea [S] mayor será también V0.
• En función de la cantidad de E, se alcanza el estado de saturación
cuando [S] es muy elevado: Se alcanza entonces V0 MAX.

!50

V0 MAX SATURACIÓN

V0






[S]INICIAL

3 Ecuación de velocidad de Michaelis – Mentel:
- Se define KM (mol-1; M), constante de Michaelis – Mentel, como la [S]
para la cual V0 = VMAX/2.
- KM depende del pH y la temperatura del medio, pero no de [E]. VMAX
depende de los tres factores.
- KM nos da una idea inversa de la afinidad de la E por su S, es decir, a
mayor KM menor afinidad.

V0
VMAX = a

VMAX
2



KM = b [S]

!51



- La evolución de V0 en función de [S]INICIAL forma, como hemos visto, una
hipérbole. Por lo tanto:
y = a.x / (x + b)

- De aquí, substituyendo (a) por VMAX, (b) por KM, y (x) por [S], obtenemos
la ecuación de Michaelis – Mentel:

V0 = VMAX.[S] / ([S] + KM)

- KM y VMAX se determinan experimentalmente. Se puede hacer con la
hipérbole V0/[S] de Michaelis – Mentel, pero suele utilizarse la expresión de
Lineweaver – Burk.

4 Ecuación de velocidad de Lineweaver – Burk:
- Esta ecuación es la inversa de la ecuación Michaelis – Mentel. Se utiliza
para obtener KM y VMAX con más facilidad. Con la hipérbole se necesitan altas
[S], y resulta más difícil de trabajar.

1/V0 = ([S] + KM) / VMAX.[S]

- El modelo se ajusta al de una función lineal, tal que: y = a.x + b:

1/V0 = (KM/VMAX).(1/[S]) + (1/VMAX)

1 / V0


KM / VMAX



1 / VMAX
1 / [S]

!52


5 Deducción de la ecuación por el mecanismo de la reacción:
- El mecanismo simple del modo de acción de una enzima presenta tres
reacciones parciales, cada una con su constante cinética:

K1 K2
S + E ES
E + P
K-1

KM = K-1 + K2 / K1

- Suponemos que el equilibrio K1 se establece rápidamente, siendo
entonces K2 el paso limitante de la velocidad de la reacción. Entonces
tenemos:

V0 = K2.[ES]

- Por lo tanto, en condiciones de saturación: V0 = VMAX y [ES] = [E]INICIAL.
De ahí:

VMAX = K2.[E]INICIAL

- La ecuación de velocidad se deduce por medio de dos hipótesis: La
hipótesis de Brigs – Haldane o Estado Estacionario, o la hipótesis del
Equilibrio Rápido.

6 Hipótesis de Brigs – Haldane o Estado Estacionario:

!53
- [ES] alcanza un equilibrio constante, es decir, es constante y por lo tanto
la velocidad de formación es igual a la velocidad de desaparición.
VFORMACIÓN = K1.[ES].[S]
VDESAPARICIÓN = K-1.[ES] + K2.[ES]

KEQ = [E].[S] / [ES]

- Teniendo en cuenta que [E] = [E]INICIAL – [ES]:

KEQ = ([E]INICIAL – [ES]).[S] / [ES]

KEQ = ( [E]
INICIAL.[S] / [ES] ) – [S]

KEQ + [S] = [E] .[S] / [ES]
INICIAL

- Teniendo en cuenta que [ES] = V0 / K2:

KEQ + [S] = K2.[E]INICIAL.[S] / V0

KEQ + [S] = K .[E]
2 INICIAL.[S] / V 0

- Recordando que, en condiciones de saturación, VMAX = K2.[E]INICIAL:

KEQ + [S] = VMAX.[S] / V0

- Obtenemos la ecuación de Michaelis – Mentel:

V0 = VMAX.[S] / ([S] + KEQ)

6 Hipótesis del Equilibrio Rápido:
- La transformación de ES en P es mucho más lenta que la disociación de
ES en S, es decir, K2 es mucho menor que K-1. Se trata en realidad de un caso
particular de la primera hipótesis, donde se considera K2 despreciable.
- Se define en este caso KS como constante de disociación.

KS = K-1 / K1

KS = [E].[S] / [ES]

- Por el mismo proceso de Brigs – Haldane, obtenemos también la
ecuación de Michaelis – Mentel:

V0 = VMAX.[S] / ([S] + KS)

7 Conceptos importantes en cinética encimática:
- La Unidad de Actividad Encimática es la [E] que cataliza la
transformación de un µmol de sustrato, en un minuto, a 25 ºC y en condiciones
óptimas de actividad.

!54
- La Actividad Específica de una enzima coincide con las unidades de
actividad encimática por mg de proteína.
- El Número de Recambio es el número de µmol de sustrato transformado
en P por unidad de tiempo y de mg de enzima, cuando esta se encuentra
saturada por el sustrato, es decir, VMAX / [E]INICIAL. Coincide aproximadamente
con K2, y se llama también Constante Catalítica.
- La Eficacia Catalítica es K2 / KM. No nos da una idea de la eficacia de la
enzima.
- La Fracción de Moléculas de Enzima Unidas a Sustrato se obtiene
dividiendo V0 y VMAX, y es por lo tanto igual a [S] / (KM + [S]).

D/ La Inhibición Encimática:

1Generalidades:
- La actividad enzimática suele verse inhibida por diversas sustancias, por
procesos específicos.
- Estos procesos pueden ayudarnos a obtener información sobre el
mecanismo de las reacciones catalizadas, los grupos funcionales del centro
activo de la enzima, o los mecanismos de acción de las drogas.
- Ante un inhibidor, se produce la reducción de la actividad enzimática.
- Las inhibiciones pueden ser de varios tipos, los principales son:

• Inhibición Irreversible: E + I EI
•I n h i b i c i ó n
R e v e r s i b l e : E + I EI

- Si sometemos EI a Diálisis, desaparece el fenómeno de la inhibición solo
en caso de ser reversible. En este caso se produce un equilibrio rápido entre E
y EI. El grado de inhibición está relacionado con [I] y KEQ.
- A su vez, dentro de las inhibiciones reversibles se encuentran tres tipos
de inhibidores: Inhibidores Competitivos, Inhibidores No Competitivos e
Inhibidores Acompetitivos.

2 Inhibición Irreversible:
- E e I se unen covalentemente, o de modo muy fuerte, de tal manera que
no existe disociación.
- Estos inhibidores se utilizan como arma química, o en insecticidas para
los cultivos.
- Por ejemplo, Acetilcolinesterasa hidroliza Acetilcolina en uniones neuro-
musculares después de la sinapsis. Sin su inhibición, la excitación muscular
permanecería constante.


3 Inhibición Reversible Competitiva:
- En este caso S e I, estructuralmente similares, compiten por el centro
activo de la enzima, por lo que la inhibición desaparece ante exceso de
sustrato.

!55
 E + S ES E + P
+
I

Ki: Constante de inhibición (de disociación de EI)
EI

Ki = [E].[I] / [EI]

- Al aumentar Ki, disminuye la afinidad de E por I.
- Basándonos en la recta de Lineweaver – Burk, al aumentar [I], aumenta
la pendiente de la recta KM / VMAX, pero VMAX se mantiene constante:

SIN I
CON I


1 / VMAX

- 1 / K M
- 1 / KM’


- Se define KM’ como KM aparente en presencia de un inhibidor
competitivo. Se puede deducir experimentalmente con la recta de Lineweaver
– Burk, sirviendo para el calculo de Ki.

KM’ = KM.(1+ [I]/Ki)

- Ajustándolo a la ecuación de Lineweaver – Burk:

1/V0 = (1/VMAX) + (KM/VMAX).(1 + [I]/Ki).(1/[S])

!56
4 Inhibición Reversible No Competitiva:
- No hay similitud entre S e I, y sus dominios de unión en E son distintos.

E + S
E S E + P
+ +
I I
Ki Ki

E I + S ESI


- En este caso KM se mantiene constante, pero VMAX cambia, cambiando
también la pendiente de la curva KM / VMAX.

SIN I
CON I

1 / VMAX’
1 / VMAX

- 1 / KM

- Se define VMAX’ como VMAX aparente en presencia de un inhibidor no
competitivo. Se puede deducir experimentalmente con la recta de Lineweaver
– Burk, sirviendo para el cálculo de Ki.

!57

VMAX’ = VMAX / (1+ [I]/Ki)

- Ajustándolo a la ecuación de Lineweaver – Burk:

1/V0 = (1/VMAX).(1 + [I]/Ki) + (KM/VMAX).(1 + [I]/Ki).(1/[S])

- Este tipo de inhibición no desaparece ante exceso de S, ni se revierte.

4 Inhibición Reversible No Competitiva:
- Es un caso muy raro, en el que I sólo se une al complejo ES ya formado.

E + S
E S E + P
+
I
Ki

ESI

- En este caso cambian tanto KM como VMAX, pero la pendiente de la recta

se mantiene constante, es decir: KM‘ / VMAX‘ = KM / VMAX.

SIN I
CON I



!58





VMAX’ = VMAX / (1+ [I]/Ki) y KM’ = KM.(1+ [I]/Ki)

- Ajustándolo a la ecuación de Lineweaver – Burk:

1/V0 = (1/VMAX).(1 + [I]/Ki) + (KM/VMAX).(1/[S])

- Al aparecer un exceso de sustrato la reacción no se revierte ni
desparece.

E/ Regulación de la Actividad Enzimática:

1Actividad Enzimática del Metabolismo:
- En la célula viva, se encuentra una compleja red de reacciones
metabólicas catalizadas encimáticamente, que reciben el nombre de
Metabolismo.
- Se distinguen dos tipos de rutas metabólicas:
• Rutas Metabólicas de Biosíntesis (anabolismo).
• Rutas Metabólicas Degradativas (catabolismo).
- La vida de una célula depende de su metabolismo. La coordinación y
regulación precisa y perfecta de esta red de reacciones es vital para ella.
- Existen rigurosos sistemas de control del conjunto de reacciones, que
comprueban que se lleven a cabo las necesidades de las células vivas.
- Las enzimas, responsables del correcto funcionamiento metabólico,
deben por lo tanto tener:
• Localización subcelular específica: Permite la separación física de las
distintas rutas metabólicas.
- Por ejemplo, para los ácidos grasos, las rutas de biosíntesis suelen tener
lugar en el citosol, mientras que las degradativas suceden en la matriz
mitocondrial.
- Las Rutas Indirectas sirven para salvar la barrera física impuesta a los
metabolitos por los sistemas membranosos. Los sistemas lanzadera
transforman el metabolito de forma que pueda atravesar la membrana, y luego
recuperar su conformación nativa.
• Regulación de su concentración: Se controla rigurosamente tanto la
síntesis como la degradación de las encimas. Tiene lugar en el caso de
enzimas inducibles: En el caso de E constitutivas [E] es constante.
- Las enzimas inducibles sólo aparecen cuando son necesarias para la
célula. Después se degradan.
- En procariontes los operones (conjuntos de proteínas) ven inducida su
síntesis de forma conjunta.
• Regulación de su actividad encimática: Es el modo más rápido de
control sobre las rutas metabólicas. Se puede producir por medio de
distintos mecanismos:
!59
 1. Alosterismo.
2. Equilibrios polimerización/despolimerización.
3. Modificación covalente reversible.
4. Activación proteolítica, o modificación covalente irreversible
(caracteristica de proteasas; E digestivas y de coagulación sanguínea).

2 Regulación Alostérica:
- Se produce por medio de la unión de un efector alostérico a una enzima
que afecta al metabolismo, provocando un cambio conformacional.
- El efector puede ser un activador, en cuyo caso aumenta la afinidad de E
por su S. También puede ser un inhibidor, haciendo disminuir la afinidad de E
por su S.
- Mientras la cinética ecimática normal tiene forma hiperbólica de
Michaelis – Mentel, en el caso de una encima con cinética alostérica tiene
forma sinusoidal:

V 0
[L]

nu
[S]

- Las enzimas alostéricas son proteínas globulares con varias
subunidades, y múltiples dominios de unión y centros activos.
- Los pequeños cambios en [S] suponen grandes cambios en la velocidad
de la reacción. Son muy sensibles a S.
- Los pequeños cambios en [A] (C del efector alostérico) suponen grandes
cambios en la velocidad de reacción.
- Si se trata de un activador, desplaza la curva sinusoidal hacia la
izquierda. Si es un inhibidor, la desplaza a la derecha. De modo que, para una
[S] constante, en presencia de activadores VMAX, y en presencia de
inhibidores, VMIN. Se obtienen actividades encimáticas muy distintas.
- La Retroinhibición, o Inhibición Feed-Back, es muy frecuente en rutas
metabólicas complejas. El último producto de la ruta inhibe alostéricamente a
las enzimas que catalizan las primeras etapas.
- Por ejemplo, Aspartato Transcarbamilasa tiene subunidades catalíticas
con centros activos, y subunidades reguladoras con dominios de unión para
efectores alostéricos, separadas. ATP es un activador, que favorece la forma
relajada del centro activo. CTP es, sin embargo, un inhibidor que favorece el
estado tenso.

3 Regulación de Equilibrios polimerización/despolimerización:

!60
- Tiene lugar en el caso de proteínas oligoméricas que sólo presentan su
actividad íntegra en su forma polimérica. Por ejemplo, Acetil Coenzima
Carboxilasa, responsable de la síntesis de ácidos grasos.
- En algunos casos hay estados intermedios de actividad parcial:

ACTIVO PARCIALMENTE INACTIVO
ACTIVO

2
2 +2


4 Regulación por modificación reversible:
- Se basa en el cambio conformacional provocado por la inserción
covalente de un pequeño grupo en la cadena R de un aa de la enzima. Esto
puede provocar la activación o la desactivación de la enzima.
- Generalmente se trata de la inserción de un grupo P (fosfato) o
fosforilación en un aa Ser, Thr o Tyr. Suele proceder de una molécula de ATP.
- Las proteínas Kinasa suelen catalizar la inserción de P. Suelen activar la
enzima. Se distinguen dos grupos de kinasas:
• Serina-treonina kinasas.
• Tirosina kinasas.
- Las proteínas Fosfatasas catalizan la liberación del grupo P, por
hidrólisis. Suelen desactivar la enzima.
- La Adenilación es otro grupo frecuentemente insertado para activar
enzimas. Se inserta un AMP

5 Regulación por activación proteolítica:
- Las enzimas, pasad un tiempo de actividad, comienzan a destruirse por
autodigestión.
- Se producen rupturas proteolíticas irreversibles que además conllevan
cambios conformacionales.
- Se trata principalmente de las Serinproteasas de coagulación y
digestión. Los cimógenos del duodeno son activados encimáticamente por un
activador común: la Tripsina.

F/ Isoenzimas y Agrupaciones de Enzimas:

1 Las Isoenzimas:
- Se trata de las distintas formas que puede presentar una misma forma
encimática.
- Presentan distinta cinética y afinidad, distintos genes que las codifican,
distinta expresión genética en cada tejido, y disitnta presencia en los orgánulos
subcelulares.
- Por ejemplo, Lactato Deshidrogenasa cataliza las transformaciones
entre Piruvato y Lactato, acoplándose la reacción a la hidrólisis de NADHs.
Presenta 5 isoenzimas, de tipos M y H:
• LDH M4 (músculos, hígado): En el músculo cataliza el paso P > L.
El Lactato es el producto final de la degradación de la glucosa en el

!61
 músculo. En el hígado cataliza L > P. Se debe a su sensibilidad a la
relación NADH/NAD+, baja en el hígado y alta en el músculo.
• LDH M3H (otros)
• LDH M2H2 (cerebro, riñón)
• LDH MH3 (otros)
• LDH H4 (corazón): Calatiza el paso L > P, evitando que el Lactato
se acumule.
- Una misma isoenzima puede catalizar su propia reacción en un sentido
u otro, influida por las condiciones del medio, como por ejemplo, la relación
NADH/NAD+.
- Se puede encontrar en un mismo tejido distintas isoenzimas separadas
en distintos compartimentos. Por ejemplo, las enzimas que catalizan los
cambios de conformación de proteínas y metabolitos para que puedan hacer
rutas indirectas atravesando membranas físicas.

2 Agrupaciones Multienzimáticas:
- Sistemas formados por varias enzimas asociadas, de manera a obtener
el mayor rendimiento energético posible. Hay tres tipos de complejos:
- Los Agregados Multienzimáticos, son varias enzimas asociadas en un
único complejo. Varios intermediarios de secuencias de reacciones cercanas
en rutas metabólicas pueden así permanecer unidas covalentemente.
- Las Enzimas Asociadas a la Membrana celular, si están implicadas en la
misma ruta metabólica suelen encontrarse ordenadas en función de su
participación en la ruta en la membrana.
- Las Enzimas Multifuncionales son enzimas con distintas actividades
enzimáticas en una misma proteína.
- Las agrupaciones multienzimáticas confieren una serie de ventajas:
• La unión de un efector puede modificar la actividad catalítica de todo el
complejo.
• La agrupación disminuye la difusión de los metabolitos, y el tiempo de
transición, haciendo disminuir el gasto energético de una ruta.








V/ Nucleósidos y Nucleótidos:

A/ Introducción:

1 Funciones de los Nucleótidos:
- Presentan vario tipos de funciones en biología:
• Genética: Componentes fundamentales de Ácidos Nucleicos.
• Energética: Moléculas portadoras de Energía; la acumulan y
transportan.

!62
 • Metabólica: Algunos son Coenzimas o Intermediarios Activados para
rutas de biosíntesis, como por ejemplo UPD-Glucosa > Glucógeno, o
CDP-Diacilglicerol > Fosfoglicéridos.
• Transmisión de señales celulares: Mensajeros intracelulares, o
segundos mensajeros.

2 Estructura general de nucleósidos y nucleótido:
- Los nucleósidos y nucleótido resultan de la unión de determinados
componentes fundamentales:
- Un Azúcar Pentosa:
• β-D-Ribosa, en el caso de los ribonucleótidos.
• β-2-desoxi-D-Ribosa, en el caso de los desoxirribonucleótidos.
- Una Base Nitrogenada (BN):
• Purina: Dos ciclos. (A, G...).
• Pirimidina: Un ciclo (C, T, U…)
- Recibe el nombre de Nucleósido la unión Pentosa + BN.
- La unión de estos dos compuestos se produce mediante un enlace N-
glucosínico entre el C1 del azúcar y N1 (Pirimidina) o N9 (Purina).
- Recibe el nombre de Nucleótido la unión Nucleósido + grupo fosfato.
- Esta última unión se suele producir entre el C5 (también C2 y C3) y un
OH del grupo P. Se desprende una molécula de agua.

3 Nomenclatura:
- Nucleósidos:
• Utilizamos el prefijo Desoxi- si el azúcar es β-2-desoxi-D-Ribosa.
• Seguido, el nombre de la BN: -Guan-, -Aden-, -Cit-, -Tim-.
• Finalmente, utilizamos el sufijo –osina en purinas, e –idina en
pirimidinas.
EJEMPLOS: Guanosina, Desoxiadenosina, Citidina, Desoxitimidina.
- Nucleótidos:
• Partimos del nombre del nucleósido.
• A continuación se pone el número del Carbono del azúcar que media la
unión (5’, 3’…).
• Finalmente se indica el número de grupos fosfato unidos: monofosfato,
Difosfato, Trifosfato.
- Suele emplearse un tipo de nomenclatura por iniciales.
EJEMPLOS:
Adenosina-5’-Monofosfato (AMP)
Adenosina-5’-Trifosfato (ATP)
Desoxiguanosina-5’-Monofosfato (dGMP)

4 Principales tipos de Nucleótidos:
- Los nucleótidos nucleicos son aquellos que se encuentran en los ácidos
nucleicos como componentes básicos. Encontramos dos tipos:
• Desoxirribonucleótidos-5’-monofosfato, componentes básicos del DNA
(dAMP, dGMP, dCMP, dTMP).
• Ribonucleótidos-5’-monofosfato, componentes básicos del RNA (AMP,
GMP, CMP, UMP).

!63
- Se pueden encontrar en ácidos nucleicos, o libres con su grupo P
ionizado a pH fisiológico.
- Los ciclos de la BN y la pentosa forman un ángulo casi recto.
- Sus espectros UV característicos son (λ = 250-280nm). Pueden
separarse y analizarse fácilmente por cromatografía de intercambio iónico,
pues OH de P se hidroliza a O-.
- El grupo P terminal en posición β o γ se puede separar por acción
encimática o por calefacción en clorhídrico. El grupo P en α no se puede
separar.
- Muchos otros nucleótidos no nucleicos tienen una importancia en las
células vivas:
• Energía biológica (ATP, GTP).
• Intermediarios activados metabólicos (ADP, GDP).
• Coenzimas (NADH/NAD+).
• Segundos mensajeros (AMPc, GMPc).

B/ Nucleótidos no nucleicos:

1 Nucleótidos Difosfato (NDP) y Trifosfato (NTP):
- A menudo, los NDP actuan como intermediarios activados en rutas de
biosíntesis, como la síntesis del gucógeno o de fosfatidil colina.
- Los NTP son los transportadores universales de energía gracias al
enlace del tercer grupo P. Durante su hidrólisis se libera una gran cantidad de
energía.

ATP + H2O ADP + Pi

ATP + H2O AMP + PPi
(pirofosfato)

- Para ambas reacciones: ΔG0 = -7,3 kCal/mol. Por ello, otras reacciones
metabólicas no espontáneas pueden acoplarse a esta hidrólisis, y utilizarla
como fuente de energía de activación.

2 El Coenzima Nicotinamida Adenina Difosfato (NAD+/NADH):
- Se trata de un dinucleótido, con dos ribosas y dos grupos P que median
la unión. Una ribosa está unida a Adenina mientras la otra se une al grupo
Nicotinamida.
- Nicotinamida es la parte vitamínica del coenzima.
- Es un coenzima común a Oxidoreductasas, como por ejemplo, Lactato
Deshydrogenasa (LDH) o Malato Deshydrogenasa (MDH).
- El grupo Nicotinamida puede captar 2e- y 1H+ del Sustrato en su C4,
diferenciándose las formas oxidada y reducida. Es un coenzima fundamental
en rutas de metabolismo Redox:

Reducción
NAD+ + 2H+ + 2e- + S NADH + H+ + P
OX RED

!64
- En su forma reducida, NADH presenta dos picos de absorbancia en
lugar de uno: A λ = 260 nm y λ = 340 nm. Esta particularidad es empleada para
el estudio de cinética encimática.
- Patología: Peladra; deficiencia de nicotinamida. Es necesario un aporte
exógeno de triptófano en los alimentos para su síntesis:

Hidrólisis de aa

Trp Nicotinamida

- El NADP+/NADPH sólo se diferencia del NAD+/NADH por poseer un
grupo P unido en C2 de la Ribosa de Adenina.
- Durante la respiración, NADH se oxida cediendo sus electrones.
- NADPH al oxidarse ejerce de Poder Reductor en numerosas reacciones
de biosíntesis, como la de ácidos grasos y esteroides.

3 El Coenzima Fosfato de Riboflavina (FMN, Flavin Mono Nucleotido):
- No se trata de un auténtico nucleósido, pues carece de Ribosa. En su
lugar se encuentra Ribitol.
- Isoaloxacina (tres ciclos) se unen por medio de N al ribitol, formando la
Riboflavina (vit B 2), parte vitamínica. El grupo P se une en el extremo libre del
ribitol.
- El grupo Riboflavina puede captar 2e- y 2H+ del Sustrato en sus dos N,
diferenciándose las formas oxidada y reducida. Es un coenzima fundamental
en rutas de metabolismo Redox:

Reducción
FMN + 2H+ + 2e- FMNH2

OX RED

- Es un coenzima propia de Deshidrogenasas Dependientes de Flavina,

de las cadenas respiratorias.

4 El Coenzima A (CoA):
- Es un coenzima que actúa como transportador de grupos Acilo, gracias
al átomo de azufre del extremo Tiol.
- Su estructura es similar al nucleótido ADP, pero formado por Ribosa-3’-
fosfato (en total, 3 grupos P). Unido al P en β se encuentra un ácido
pantoténico, y finalmente el grupo β-mercaptoetilamina con SH extremo.
- El ácido pantoténico es su parte vitamínica. Este coenzima adquiere un
papel fundamental en el metabolismo.

R – COO- + HS – CoA R – CO – S – CoA

ACILO TIOL TIOESTER

- La Acetil CoA es un punto común de la degradación de moléculas por el

Ciclo de Krebs, en plantas y microorganismos:

CH3 – CO – S – CoA

!65
5 Nucleótidos cíclicos:
- Al elevarse su concentración en el citosol celular, AMP cíclico (cAMP) y
GMP cíclico (cGMP) ejercen el papel de segundos mensajeros en la
transducción de señales celulares, implicando cambios metabólicos.
- cAMP y cGMP provienen de ATP y GTP por la acción de las enzimas
Adenilato Ciclasa y Guanilato Ciclasa respectivamente. Se desprende
pirofosfato. La reacción se produce ante la llegada de una señal externa.

ADENILATO CICLASA
ATP cAMP + PPi

GUANILATO CICLASA
GTP cGMP + PPi

- cAMP está relacionado con la transducción de señales por receptores
transmembrana asociados a proteínas G.
- Una hormona activa el receptor, el cual activa la proteína G separando la
subunidad α.
- La subunidad α activa la Adenilato Ciclasa anclada a la membrana, y
[cAMP] aumenta.
- La unión de dos cAMP en la subunidad reguladora de proteínas kinasas
puede activarlas o desactivarlas, regulando así la transcripción de ciertos
genes, y con ello el metabolismo.

C/ Los Ácidos Desoxirribonucleicos (DNA):

1Generalidades:
- En 1869 Miesher aisla por primera vez en la historia Ácidos Nucleicos:
cromosomas (DNA) de leucocitos. Logra aislarlos rompiendo las células con
Clorhídrico, rompiendo los núcleos con tratamiento alcalino, y extrayendo el
precipitado: lo llamó Nucleína.
- El Cromosoma es una larga macromolécula filamentosa formada por un
alto número de ácidos desoxirribonucleicos, unidos por enlaces fosfodiester
entre Desoxirribosas (en C5 y C3) y Fosfatos:

5’-Desoxirribosa-3’ – P – 5’-Desoxirribosa-3’ – P – 5’-Desoxirribosa-3’

5’ libre BN BN BN 3’ libre

- Presenta una parte constante o esqueleto, formada por desoxirribosas y

fosfatos, y una parte variable, formada por las cuatro BN, púricas o
pirimidínicas. La secuencia de BN contiene la información genética.
- Los DNA están polarizados por su esqueleto de Ribosa-Fosfato. Por
convenio, la primera desoxirribosa tiene su grupo 5’ libre, mientras la última
tiene el 3’ libre.

2 Estructura 3D del DNA:
- Watson y Crick ganaron el Premio Nobel en 1962 al descubrir la
estructura 3D del B-DNA, gracias a estudios mediante Rayos X.

!66
- En su estructura 3D, el DNA está formado por dos cadenas acopladas
antiparalelamente. Las uniones entre las dos cadenas están mediadas por las
BN.
- Sus secuencias de BN son complementarias, de forma que siempre se
une una purina con una pirimidina, más concretamente A-T y C-G.

5’ 3’

3’ 5’

- Las cadenas se enrollan espontáneamente dextrógira y helicoidalmente.
Las BN se encuentran apiladas en el interior de la hélice.
- Los puentes de H entre las BN mantienen la estructura helicoidal del
DNA. La unión purina-pirimidina se descubrió al calcular la distancia de
separación entre las cadenas (10,85 A), donde no caben dos purinas, pero
sobra espacio para dos pirimidinas. Hay elevada especificidad en los enlaces
A-T (2 puentes de H) y C-G (tres puentes de H, unión más fuerte).
- La Tautomerización es el desplazamiento del H+ que refuerza los
puentes de H. Estos puentes se establecen entre un grupo dador de H y un
grupo aceptor.

CETO: IMINO:
R

C O R C N H

R

GRUPOS ACEPTORES:



G R U P O S DADORES:




ENOL: AMINO:
R H

C OH R C N

R H

!67
GRUPOS DADORES:







- Los restos hidrofóbicos de las BN crean en el medio celular Efectos
Hidrofóbicos, por lo que tienden a colocarse espontáneamente en el interior de
la estructura, afectando a la estabilidad del DNA.
- Entre la BN se establecen fuerzas de WW. Al haber un grandísimo
número de BN, estas fuerzas también afectan a la estabilidad del DNA.
- Algunos casos son motivos de inestabilidad, como la repulsión entre
grupos Fosfodiester a pH = 7 (Cargas -). Se encuentran neutralizadas por iones
Mg2+ unidas al esqueleto del DNA.

3 Tipos estructurales del DNA:
- B-DNA es el la estructura del DNA en condiciones fisiológicas normales,
descrita por Watson y Crick.
- En este tipo estructural, los enlaces N-glicosílicos entre las BN no son
diametralmente opuestos, por lo que se distinguen dos surco de distintos
tamaños: El surco mayor (12 A) y el surco menor (6 A).
- Es una estructura flexible, plegable, y resistente a ataques mecánicos.
- Origina los DNA circulares de bacterias, virus y plastos.
- Puede Superenrrollarse: proporciona mayor empaquetamiento. El
desenroscado facilita la Transcripción.
- En eucariontes se enrolla describiendo una Superhélice levógira
alrededor de complejos proteicos formados por Histonas: Los Nucleosomas.
Varios Nucleosomas forman un Collar de Perlas, que se compacta en
Cromatina. La acción de un Armazón Cromosómico proteico estructura
finalmente los Cromosomas.
- A-DNA fue descubierto por análisis con Rayos X. Es más grueso y más
corto. Son fibras deshidratadas. Presentan un surco mayor más profundo y
estrecho, y uno menor superficial y ancho. 1 vuelta de hélice = 11 BN. Caso de
RNA de doble hélice, o híbridos DNA-RNA.
- Z-DNA presenta grupos P en Zig-Zag. Hélice levógira
termodinámicamente no favorable. Surco mayor convexo, surco menor
profundo. 1vuelta de hélice = 12 BN. Se descubrió gracias a un Hexanucleótido
formado por C y G:

CGCGCG
GCGCGC

- En Z-DNA, G se dispone SIN (BN y pentosa del mismo lado del enlace),
y C se dispone ANTI (Viceversa).

4 Desnaturalización y Renaturalización del DNA:

!68
- La doble hélice de DNA se disocia localmente con frecuencia,
permitiendo así la transcripción. La Desnaturalización del DNA es la disociación
completa de ambas hebras, o transición hélice – cadena. Se rompen los
puentes de H.
- Desnaturalización térmica o fusión del DNA: se logra por aumento de la
temperatura. TFUSION o TM es la T a la que se disocia la mitad de la hélice.
- Se utiliza la colorimetría, pues al desnaturalizarse, la absorbancia del
DNA aumenta considerablemente, a una longitud de onda concreta. La λ
óptima para estas medidas en el ADN es λ = 260 nm. Este fenómeno se llama
Efecto Hipercrómico. En concreto, las BN desapareadas absorben 37% más
que apareadas.
- Se realiza una Curva de Fusión (Abs260 en función de T) para obtener la
TM. Se ha observado que TM depende de la [CG] de las hebras. Cuanto mayor
es [CG], más estable es la hélice, lo cual es lógico al establecerse tres puentes
de H entre C y G, y solo dos entre A y T.
- Se puede lograr la renaturalización del ADN haciendo descender
lentamente la temperatura, hasta descender a una T fisiológica normal. Las
hebras se reasocian correctamente. Este proceso se llama Templado.

D/ Los Ácidos Ribonucleicos (RNA):

1 Generalidades:
- Los RNA fueron descubiertos y aislados pr primera vez posteriormente al
descubrimiento de los DNA, por Hoppe – Seyler. Fueron extraídos de
levaduras. Posteriormente de plantas y bacterias.
- En 1914 Feulger utiliza colorantes específicos para RNA y DNA,
comprobando la coexistencia de ambos tipos de moléculas en la mayoría de
las células.
- Se trata de una larga molécula de Ribonucleótidos unidos por enlaces
Fosfodiester en 3’ y 5’. Presenta un esqueleto constante de Ribosas – Fosfato,
y una región variable con BN. La estructura de una hebra es similar a la del
DNA.
- Las principales diferencias RNA/DNA son:
• Ribosas (Impiden la formación de B-RNA) / Desoxirribosas.
• Monocatenarias (bicatenarios, Híbridos DNA-RNA) / Doble Hélice.
• A-RNA (en caso de bicatenarias e híbridos) / B-DNA, A-DNA, Z-DNA.
• Urácilo (U) / Timina (T).
• Reactivo / Estable.
- El grupo OH en 2’ de la Ribosa impide la formación de B-RNA: El tipo
estructural B es el más estable. Estos OH promueven la reactividad química del
RNA y permiten interacciones entre zonas alejadas de la molécula.
- Por ello RNA es más inestable, y no adquiere las proporciones del DNA,
ni sus funciones de estabilidad y conservadurismo genético.
- En las cadenas monocatenarias de RNA suelen producirse
emparejamiento de bases dando lugar e estructuras llamadas Orquilla y Bucle.

2 Principales tipos de RNA:

!69
- RNA mensajero (mRNA) transporta la información genética transcrita del
DNA del núcleo, al citosol. Sirve como plantilla para la traducción por el
ribosoma. Participa por lo tanto en la expresión de la información genética.
- RNA ribosómico (rRNA) es la parte constitutiva del Ribosoma: Constituye
el 75% del cuerpo del Ribosoma.
- RNA transferente (tRNA) transporta los aa y los incorpora a las proteínas
durante su síntesis, interaccionando con el molde de mRNA.
- RNA heterogéneo nuclear (hnRNA) es en eucariontes el precursor de
mRNA maduro. Es llamado también RNA transcrito primario.
- RNA pequeño nuclear (snRNA) es en eucariontes un pequeño ácido
ribonucleico que se incorpora a una proteína que desempeña un importante
papel el la maduración del hnRNA al mRNA maduro.

3 Las Nucleasas:
- Se trata de un grupo de enzimas, dentro de las Serinproteasas, capaces
de hidrolizar los enlaces fosfodiester del RNA, y de las hebras de DNA.
- Están presentes en los lisosomas de la mayoría de las células en todos
los organismos vivos.
- Son liberadas por el páncreas al tubo digestivo, donde catalizan la
digestión de los ácidos nucleicos.
- Se distinguen Ribonucleasas y Desoxirribonucleasas en función del tipo
de ácidos nucleicos que hidroliza.
- Se distinguen, en función de la región del ácido nucleico en la que llevan
a cabo su acción:
• Endonucleasas: En posiciones externas.
• Exonucleasas 5’: En los extremos 5’.
• Exonucleasas 3’: En los extremos 3’.
- Se distinguen también por el tipo de nucleótido que originan:
• Tipo a: Rompen antes del P originando un 5’-Monofosfato Nucleósido.
• Tipo b: Rompen después del P originando un 3’-Monofosfato
Nucleósido.
- Las Endonucleasas de Restricción tienen alta especificidad, pues
reconocen una corta secuencia de BN antes de realizar el corte. Sólo hidrolizan
dichas secuencias.
- Fueron descubiertas en bacterias, durante la década de 1970. Se
nombran, por este orden, en función del género, especie y cepa de la bacteria
que los sintetiza. Se asignan números romanos para diferenciarlas.

EJEMPLO: Eco R I (E. coli, cepa R)











!70


VI/ Procesos Moleculares de la Expresión de la
Información Genética:

A/ La Replicación del DNA:

1 Generalidades:
- La replicación de la información genética es fundamental, previamente a
la Mitosis y la Meiosis. Permite el paso de cromosomas de una a dos
cromátidas.
- La replicación exacta del DNA permite su transferencia fiel a siguientes
generaciones de células, e incluso organismos.
- El proceso se basa en la especificidad en el emparejamiento de BN (A-T;
C-G): Conociendo la secuencia de una de las cadenas, se puede deducir la
cadena complementaria.
- Watson y Crick descubrieron que, durante la replicación, cada una de las
cadenas actúa como molde para la síntesis de su cadena complementaria.
- Las DNA – Polimerasas son el grupo de enzimas que catalizan la
síntesis de DNA, dirigidas por una cadena molde. Necesitan detectar la
presencia de un Fragmento Cebador con OH en 3’ de la cadena molde para
iniciar la síntesis.
- La síntesis tiene lugar de 5’ hacia 3’. Se utilizan como precursores
desoxirribonucleótidos trifosfato (dATP, dGTP, dCTP y dTTP).

2 Experimento de Meselson & Stahl:
- La propuesta de Watson y Crick suponía que se trata de un Proceso
Semiconservativo: Se conserva una cadena parental, que se utiliza para la
síntesis de la complementaria.
- El experimento de Meselson y Stahl demuestra la naturaleza
Semiconservativa del proceso. Trabajaron con E. coli.
- Cultivaron la generación parental en un medio cuya fuente de N era
15NH4+. Las bacterias incorporaron entonces átomos de N radiactivos en sus

ácidos nucleicos. Los ácidos nucleicos radiactivos podían detectarse por su

elevada ρ.
- Durante los siguientes ciclos celulares, cultivaron las generaciones hijas
en medios cuya fuente de N era 14NH4+, no radiactivo.
- Observaron después del primer ciclo celular, se observaba un único pico
de ρ media. Después del segundo ciclo observaron dos picos de ρ, uno
intermedio y otro de moléculas no radiactivas.
- Este experimento, que pudo realizarse gracia a las distintas densidades
de N y 15N, confirmó que el proceso de replicación es semiconservativo.
14

3 Generalidades de Replicación del DNA en procariontes:
- DNA – Polimerasa I se encarga de la replicación y procesos de
reparación. Su cinética es de 16-20 Nucleótidos/segundo.
- DNA – Polimerasa II se encarga exclusivamente de reparaciones
durante la replicación del DNA. SU cinética es 2-5 N/s.

!71
- DNA – Polimerasa III se encarga de la replicación durante la elongación
de la nueva cadena. Su cinética es 250 – 1000 N/s. Se trata de un polímero
asimétrico, con un núcleo central con tres subunidades: α (elongación), ε
(exonucleasa 3’) y θ. Tiene otras subunidades, como β (abrazaderas).
- Las tres DNA – Pol presentan actividad exonucleasa 3’, lo que les
concede la propiedad de reparar sus propios errores durante la replicación.
- DNA – Pol I tiene además actividad exonucleasa 5’ fundamental para
eliminar los Fragmentos Cebadores.
- La replicación se inicia en el punto Origen (Ori C) de origen, en el DNA
circular. Es un proceso Bidireccional: se forman dos Orquillas de Replicación
que se desplazan desde O en sentidos contrarios.
- En cada Orquilla de Replicación, hay replicación continua en una de las
hebras, la Cadena Conductora (de 5’ a 3’), y discontínua en la complementaria,
o Cadena Retardada (de 3’ a 5’); en esta última los fragmentos discontinuos
reciben el nombre de Fragmentos de Okazaki.
- La formación de estos fragmentos de Okazaki en la Cadena Retardada
es lógica teniendo en cuenta que DNA – Pol sintetizan siempre de 5’ a 3’, y
dado que ambas cadenas son antiparalelas: En la hebra complementaria
(Retardada), DNA – Pol actúa en sentido contrario al sentido de abertura de la
Orquilla.
- Tanto en el fragmento continuo como en cada fragmento de Okazaki, la
síntesis comienza por un fragmento cebador de RNA, sintetizado por una
Primasa (DNA – Pol especializada).
- Las dos Orquillas de Replicación se encuentran en el polo opuesto a Ori
C terminando la replicación del plásmido.

4 Etapas de Replicación del DNA en procariontes:
1. El DNA circular se encuentra inicialmente superenrollado. Se produce el
desenrollamiento de 245 pares de BN en Ori C.
1. DNA-A (tetrámero ATPasa) reconoce y desenrolla en Ori C 13
pares de BN.
2. DNA-B y DNA-C reconocen el complejo DNA – DNA-A. DNA-B
helicasa, con ayuda de 6 enzimas DNA-C desenrollan la hélice.
2. DNA-A se disocia del complejo, DNA-B prosigue el desenrollamiento. El
desenrollamiento se produce por superenrollamiento negativo, inducido
por DNA-Girasa (Tropoisomerasa II) que elimina las tensiones que
estabilizan el superenrollamiento positivo.
3. La proteína SSB (Single Strand Binding) mantiene estabilizadas las
cadenas desenrolladas, uniéndose a ellas.
4. La enzima Primasa lee la cadena molde, reconociendo y sintetizando los
fragmentos cebadores de RNA: Forma el complejo Primosoma.
5. DNA Pol III se une a 3’ libre del cebador e inicia la síntesis de DNA o
elongación (contínuo, o fragmentos de Okazaki).
1. Las subunidades abrazaderas se unen a la hebra molde de DNA.
2. La subunidad exonucleasa 3’ detecta y corrige los errores recién
producidos en la nueva hebra.
3. Una misma DNA Pol III en cada orquilla de replicación cataliza las
síntesis de las cadenas Conductora y Retardada. (Hipótesis
Bucle).

!72
 4. La polimerización tiene lugar por el ataque Nucleófilo del OH
unido en 3’ terminal, al trifosfato de 5’ del NTP, que al polimerizar
pasa a NMP.
6. DNA Pol I entra en acción. Tiene tres subunidades con actividad
enzimática:
1. Exonucleasa 5’: Elimina los fragmentos cebadores en 5’ del DNA.
2. Polimerasa 5’ > 3’ Rellena los huecos de los fragmentos
cebadores con DNA. Desplaza las muescas.
3. Exonucleasa 3’: Corrige los errores recién cometidos en la
síntesis.
7. La enzima DNA – Ligasa une los fragmentos de DNA de las hebras
fragmentadas, devolviendolas a la normalidad.
- HIPÓTESIS: Se forma un Bucle en la Cadena Retardada (ver fotocopia)
permitiéndose la lectura y síntesis simultánea de ambas cadenas, de 5’ a 3’.
Por ello DNA – Pol III es un polímero asimétrico. Al terminar una fragmento de
Okazaki se suelta un bucle y se forma uno nuevo en el siguiente fragmento
cebador.

5 La Replicación del DNA en eucariontes:
- Es un proceso similar al de la replicación del DNA en procariontes, pero
más complejo. En eucariontes se presenta un DNA más largo y más
compactado.
- Presenta, al igual que en procariontes, una síntesis contínua y una
discontinua sincronizadas.
- Se encuentran varios puntos de origen de replicación a lo largo de un
cromosoma, que coinciden presuntamente con sus puntos de unión al
citoesqueleto.
- Durante la Replicación activa hay numerosas Orquillas de Replicación,
pero estas avanza más lentamente que en procariontes.
- Los fragmentos de Okazaki son más cortos. El proceso de síntesis,
eliminación y relleno de fragmentos cebadores es similar al caso de
procariontes.
- Se conocen cinco tipos de DNA Pol:
• α DNA Polimerasa: Replica y repara la hebra retardada.
• β DNA Polimerasa: Subordinada a α, repara errores en la hebra
retardada.
• γ DNA Polimerasa: Mitocondrial.
• δ DNA Polimerasa: Replica y repara la hebra conductora.
• ξ DNA Polimerasa ha sido descubierta recientemente.



6 Mecanismos de Reparación de la Replicación del DNA:
- Existen distintos tipos de lesiones del DNA que suceden con frecuencia
durante la replicación, pues al separarse las hebras pierden estabilidad.
- Las Enzimas Reparadoras rastrean la hebra de DNA en busca de
errores continuamente.
- La Fotodimerización de dos TMP adyacentes es una de las lesiones más
frecuentes. Se produce ante rayos UV, que pueden dar lugar cáncer.

!73
- La incorporación de un dímero de Timina unido por dos puentes de H
impide la correcta replicación del DNA. Se inicia todo un mecanismo de
detección y reparación en procariontes:
1. La Escinucleasa (con actividad endonucleasa) corta el fragmento que
incluye el dímero en la hebra replicada.
2. DNA Pol I sintetiza el DNA correspondiente al hueco, y DNA ligasa
incorpora el fragmento reparado en la hebra replicada.
- En procariontes y algunos eucariontes se encuentra DNA fotoliasa, que
absorbe los rayos UV. Con la energía de un fotón rompe un dímero de Timina
en BN originales.
- La Desaminación Hidrolítica es otra lesión frecuente del DNA. Se trata
de la substitución de grupos Amino por grupos Ceto. Transforma los NMP, por
ejemplo, transforma A en Hipoxantina, G en Xantina, y C en U.
- La DNA Glicosilasa rompe los enlaces N-Glicosílicos de la BN
modificada. Las endonucleasas cortan el fragmento que contiene la BN
modificada. Finalmente entran en acción DNA Pol I y DNA ligasa.
- Existen muchos factores del medio que influen en la modificación de BN,
como las radiaciones ionizantes, el oxígeno radiactivo, las reacciones
oxidantes, o pérdidas espontáneas de BN.

B/ La Transcripción; del DNA al mRNA:

1 Generalidades:
- La Transcripción es un proceso fundamental de la expresión de la
información genética. La información contenida en un fragmento del DNA
cromosómico, que recibe el nombre de Gen, es capaz de atravesar la
membrana nuclear en forma de mRNA, en busca de un Ribosoma que realice
la Traducción.
- RNA Polimerasa es la enzima responsable de llevar a cabo el proceso
de Transcripción de los genes. Sintetiza los RNA siempre de 5’ a 3’.
- Para su acción, requiere de la presencia de precursores activados NTP
(ATP, GTP, CTP y UTP), la presencia de Mg2+, y un molde de DNA,
generalmente dicatenario.

2 La Transcripción en procariontes:
- RNA Pol es la principal enzima relacionada con la Transcripción en
procariontes. Coactua con proteínas moduladoras de su actividad. Lee la hebra
de 3’ a 5’ (sintetizando mRNA de 5’ a 3’).
- La cadena leída recibe el nombre de Hebra Antisentido, pues es
complementaria a la secuencia de RNA, y complementaria a la otra hebra que
recibe el nombre de Hebra Molde (no leída).
- Las funciones de RNA Pol son numerosas:
1. Localiza los Centro de Iniciación o Promotores.
2. Separa localmente las hebras de DNA en el punto +1, donde se inicia la
Transcripción de la hebra antisentido.
3. Selecciona el NTP adecuado.
4. Cataliza la formación de enlaces fosfodiester por ataques nucleófilos.
5. Localiza las Señales de Terminación de la transcripción.
- RNA Pol se forma de seis subunidades:

!74
 1. α (2 subunidades) reguladoras y responsables de la Iniciación de
la Transcripción. Forman parte del núcleo central de la proteína.
2. β se encarga de llevar a cabo la iniciación y elongación. Forma
parte del núcleo central.
3. β’ es la subunidad abrazadera que se une al molde de DNA.
Forma parte del núcleo central.
4. γ localiza el Promotor, lugar en que se inicia la elongación.
5. ω de funciones desconocidas.
- El proceso de Transcripción transcurre en tres etapas: Iniciación,
Elongación y Terminación.

3 Desarrollo de la Transcripción en procariontes:
- La primera etapa del proceso es la Iniciación. El inicio del gen es
reconocido y RNA Pol se une al molde de DNA.
1. Reconocimiento del Promotor o secuencia de iniciación. Una de las más
conocidas es TATA box. Es reconocido por la subunidad γ de RNA Pol.
Se encuentran en el extremo 5’ de cada gen, pudiendo abarcar unos 40
pares de BN.

EJEMPLO: TATA box:

-35 -10 +1
TTGACA-------------------TATTAT-----(A o G)

2. Una vez localizado el punto +1 donde se inicia la Transcripción del gen,
se forma el complejo llamado Burbuja de Transcripción.
- Para la formación de este complejo, en el que interviene RNA Pol y
DNA, el DNA es parcialmente desnaturalizado en 18 pares de BN, o 1,6 vueltas
de hélice. La burbuja se une inicialmente desde el punto -10, y sobrepasa el
+1.
3. Se forma el primer corto fragmento de RNA que forma un híbrido DNA-
RNA. Este híbrido cuenta unas 10 BN.
4. Al terminar de formarse el fragmento iniciador de RNA, se produce un
cambio conformacional en RNA Pol, y la subunidad γ se disocia,
permitiendo el desplazamiento de la enzima por el molde.
- La segunda etapa recibe el nombre de Elongación. Durante esta etapa,
RNA Pol recorre la hebra Antisentido transcribiendo la información del gen.
- La Burbuja de Transcripción se desplaza a lo largo de la hebra de DNA,
pero tanto su longitud como la del híbrido DNA-RNA que se forma tras su paso
son constantes
- La subunidad β de RNA pol cataliza la formación de los enlaces
fosfodiester de los nucleótidos incorporados, de forma similar a la replicación
del DNA, cambiando T por U.
- Cuando RNA Pol se desplaza, el DNA rota en su interior, y se crean
tensiones que ralentizan la velocidad de la burbuja de Transcripción. Las
Tropoisomerasas rebajan dichas tensiones.
- La última etapa es la Terminación. Tiene lugar de un modo muy
selectivo, al igual que la Iniciación.

!75
- En el DNA, el final de los genes está marcado por determinados
Fragmentos Pausa, donde disminuye notablemente la velocidad de
Transcripción.
- En estos fragmentos pausa hay numerosas señales de terminación:
Secuencias Palindrómicas de A y T, que al ser transcritas forman en el RNA
estructuras en Orquilla o Bucle, con fuertes uniones C-G.
- NUS A permanece durante la elongación unido a RNA Pol, evitando la
asociación de la subunidad γ. Facilita el reconocimiento de las señales de
terminación.

EJEMPLO: Secuencia Palindrómica de terminación:

-------CGGCG---------CGCCGUUUUUUUUUUUU

Al girar 180º la hebra, las secuencias en verde son complementarias y quedan
unidas por numerosos puentes de H.

- Producidas estas estructuras en Orquilla, el híbrido DNA-RNA queda
desestabilizado, y la Burbuja de Transcripción se disocia.
- Una ristra de U al final de las señales de liberación facilita la liberación
del RNA desestabilizando más el híbrido, siendo la unión U-A más débil.
- La proteína ρ detecta las señales de terminación que no son
reconocidas por RNA Pol.
- También interviene el factor τ pero su función es aún desconocida.

4 La Transcripción en Eucariontes:
- Es, de nuevo, un proceso similar pero algo más complejo. Intervienen
tres tipos de RNA Polimerasas:
• RNA Pol I: En genes de rRNA (18S, 5,8S, 28S).
• RNA Pol II: En genes de mRNA para traducción a proteínas.
• RNA Pol III: Genes para snRNA, tRNA y rRNA (5S).
- Además de estas, existen otras en mitocondrias y cloroplastos.
- Todos los RNA transcritos primarios de eucariontes necesitan sufrir un
Proceso de Maduración antes de poder ser considerados activos y alcanzar su
conformación definitiva.
- Se distinguen tres tipos de maduración de RNA transcrito primario:
1. Eliminación de Secuencias: Pueden ser secuencias externas de 5’ o 3’
necesarias para iniciación y terminación. También pueden ser Intrones;
secuencias internas que no contienen información necesaria para
prteínas.
2. Adición de Secuencias No Codificadas: Por ejemplo, la adición en tRNA
de CCA.
3. Modificaciones Covalentes: La más frecuente es la metilación de las BN.
En ocasiones también metilación de las ribosas en 2’.

Casos de Metilaciones:

Ribosa 2’-O-Metilribosa

!76
 A 6-Dimetiladenina

U T
Dihidrouridina
Ribotiuridina
Pseudouridina

- La maduración aumenta la estabilidad del RNA y le permite adquirir su
estructura activa.
- En tRNA se eliminan la secuencia guía en 5’ y la secuencia poli-U en 3’.
También es eliminado un intrón de 14 BN. Se añade la secuencia CCA,
indispensable para la unión de los aa que serán incorporados a proteínas.
- En la baceria E. coli si tiene lugar la maduración del RNA transcrito
primario. Una misma molécula de RNA, cargada de intrones, dará lugar
después de maduración a tRNA, rRNA 16S, rRNA 23S y rRNA 5S.
- En algunos casos, como E. coli, los propios intrones catalizan su
eliminación.

LA MADURACIÓN EN E. COLI
Exón
Intrón

MADURACIÓN

rRNA 16S tRNA rRNA 23S

rRNA 5S

- Posteriormente a la eliminación de intrones, los exones suelen ser

empalmados. Este proceso de Splicing es catalizado por encimas específicas. -
Finalmente se forma una caperuza CAP en el extremo 5’ del RNA, que
protege ante ataques de exonucleasas, y puede ser reconocido por los
Ribosomas en el citosol.
- El primer nucleótido en 5’ del RNA es un NTP. Por acción de una
Fosfatasa pierde su P en γ. Después se produce una Guanilización a costa de
GTP. G queda unido por medio de tres grupos P al extremos 5’ del mRNA,
antes de que éste pueda abandonar el núcleo celular.

B/ La Traducción; del mRNA a las Proteínas:

1 Generalidades:
- Se trata del proceso de Biosíntesis de Proteínas, y es por lo tanto
también un proceso fundamental para toda célula viva.
- Se utiliza el molde de mRNA que transporta la información de un gen. En
concreto, la secuencia de BN (4 elementos) determina el orden de la secuencia
de α-L-aa proteicos (20 elementos).

!77
- Debido a la diferencia en el número de elementos, 1 codón = 3 BN = 1
aa. Varios codones distintos pueden codificar un mismo aa.
- La traducción de un lenguaje al otro se realiza respetando el Código
Genético Universal, que es idéntico en, prácticamente, todos los seres vivos.
- tRNA transporta los aa que van a ser incorporados al péptido (aminoacil-
tRNA). Tiene un papel de intermediario en la Traducción.
- rRNA entra en juego formando una parte constitutiva de los Ribosomas;
maquinaria necesaria para la Traducción.

2 Estructura del tRNA:
- tRNA juega como intermediario entre Molde y Proteína. Presenta una
estructura en Hoja de Trébol. Muchas regiones de la molécula son
complementarias y se unen facilitando y estabilizando el plegamiento (50%).
- Se trata de una única cadena de RNA, de unas 73-93 BN.
- Presenta una Cola con los extremos 5’ y 3’ donde se produce la unión
del aminoácido. Presenta además tres Lazos no apareados en estructuras de
orquilla y también un pequeño Brazo Adicional Variable no apareado.
- En el extremo 5’ se encuentra una caperuza CAP de guanina. En el
extremo 3’ se produce siempre la unión de la secuencia CCA, que permite la
unión del aa en OH de 3’ de A (raramente en 2’ de C)
- En algunas BN puntuales se produce Metilación (modificación
covalente). Por ejemplo, la transformación U > T impide el apareamiento
quedando libre para otra interacción.
- La metilación concede carácter hidrofóbico en ciertos fragmentos que
pueden interaccionar con proteínas o Ribosomas.
- Las regiones apareadas suelen determinar la estructura de la molécula.
Las regiones no apareadas adquieren papeles funcionales; son las siguientes:
• Extremo 3’ terminal unido a Secuencia CCA donde se une el aa.
• Lazo TϕC: Las BN T y ϕ proceden de la Metilación de U.
• Lazo Anticodón, Formado por 7 BN, posee en situación central las 3 BN
complementarias al codón cuyo aa es transportado en 3’-CCA.
• Brazo Adicional Variable (l variable)
• Lazo DHU (DiHidroUridina; UH2): Varias BN U son metiladas
transdormándose en D (UH2).
- Las modificaciones covalentes que tienen lugar en determinadas BN
está relacionado con el desapareamiento de BN de las regiones que las
incluyen.

EJEMPLO: Lazo Anticodón: (A’: Purina Modificada)

-C-U-X-Y-Z-A’-A-

ANTICODÓN

- El lazo anticodón, y concretamente las 3 BN del anticodón, interaccionan

con el molde de mRNA al que son complementarias, concretamente con el
codón.
- La estructura 3D del tRNA es distinta. Las regiones de BN apareadas
giran en doble hélice desplazando los lazos.

!78
- El resultado final es una molécula en forma de L, con el lazo anticodón
en un extremo, y 3’-CCA en el otro. La cola del tRNA que incluye el extremo 3’
terminal no interacciona con otras regiones, y presenta bastante flexibilidad.
- Rich y Klug descubrieron que algunas BN no apareadas presentan
interacciones tipo terciario, forzando la aparición de la estructura L. También
está implicado en estas interacciones el esqueleto de Ribosa-P.

3 La Activación de Aminoácidos:
- Se da este nombre a la formación del enlace 3’-CCA – aa. Esta unión es
imprescindible para la biosíntesis de proteínas, pues los aa son incapaces de
reconocer el molde de mRNA.

NH3+ – CH – CO – P-A-P-C-P-C – tRNA
R O

- La formación de los enlaces peptídicos es, como vimos anteriormente,
desfavorable termodinámicamente. La situación se revierte cuando el aa es
activado por el tRNA.
- En 1957, Zamecnik y Hoagland descubrieron que el proceso de
activación de los aa es catalizado por enzimas Aminoacil-tRNA-Sintetasas
(Sintasas, sin ATP). El proceso tiene lugar en dos etapas:
1. Se produce la unión del aa con el fosfato en α de ATP. Se forma aa-
AMP. Se consume además del ATP, la energía de PPi a 2Pi.
2. Se forma la unión aa-tRNA catalizada por las Aminoacil-tRNA-
Sintetasas. Se desprende el AMP.
- Las Aminoacil-tRNA-Sintetasas son altamente específicas a la hora de
relacionar cada aa con su tRNA. Existe al menos una para cada aa. Son
capaces de corregir errores.

4 La Unión Anticodón – mRNA:
- A pesar del cambio de T por U, mRNA es una réplica exacta de la
información genética del DNA, que viaja hasta los Ribosomas donde podrá ser
traducida a proteína.
- Como hemos visto, esta traducción es realizada por los tRNA
respetando un código genético universal en todos los organismos, excepto
mitocondrias, cloroplastos y algunos protozoos.
- Gamow descubrió en 1955 que los tripletes de BN o Codones
corresponden a uno de los 20 aa concreto.
- Hay 64 posibles tripletes, por lo cual cada triplete corresponde a un aa,
pero un aa puede ser codificado por distintos tripletes: el código está
Degenerado.

EJEMPLOS:
• Ser: 6 codones sinónimos.
• Gly: 4 codones sinónimos.
• Lys: 2 codones sinónimos.

- Tres de los tripletes, UAA, UGA y UAG, son codones STOP, o señales
de terminación.

!79
- El codón iniciador AUG es reconocido por un tRNA iniciador (tRNAi)
especial que transporta siempre formil-Met.
- Además de servir como triplete iniciador, AUG marca la Pauta de
Lectura, pues define en toda la secuencia de aa donde comienza cada codón.
Cualquier desplazamiento en un número no divisible por 3 cambiaría todos los
codones y, radicalmente, la proteína.
- Las interacciones Codón – Anticodón se producen por emparejamiento
de las BN según las normas de Watson y Crick, pues en codón y anticodon las
BN se disponen de forma antiparalela.
- Posición Flexible o de Balanceo: Se trata de la posición 3’ del codón (5’
de anticodon), que recibe este nombre debido a que las BN no siempre
coinciden en esta posición.
- Por ello algunos tRNA pueden unirse a varios codones, cuando la
posición de balanceo no coincide, mientras las dos primera BN lo hacen. Estos
codones son los Codones Sinónimos.

EJEMPLO:
GCA Ala – tRNA
GCC Anticodón: CGI (I =
Inosina)
GCU


Posición Flexible 5’ Nº Codones Posición 3’ Codón que
Anticodón sinónimos puenen unirse
I (Inosina) 3 A, C, U

U, G 2 U,G

A, C 1 C o A respectivamente


- En algunos casos los codones sinónimos no comparten sus 2 primeras
BN, por ejemplo AGA y CGU que codifican Arg.
- En estos casos, los aa son transportados por distintas moléculas de
tRNA, con distintos anticodones, que reciben el nombre de Isoaceptores.


5 La maquinaria esencial para la síntesis de proteínas; Los Ribosomas:
- Los Ribosomas, además de una serie de proteínas son, junto con tRNA,
esenciales para que la Traducción pueda tener lugar.
- Entre las proteínas encontramos:
• Factores de Iniciación (IF).
• Factores de Elongación (EF).
• Factores de Terminación (RF).
- Los Ribosomas son moléculas derivadas de la combinación de rRNA y
Proteínas Ribosómicas. En Eucariontes se encuentran al 50%, mientras en
Procariontes se forman de 2/3 de rRNA y 1/3 de proteínas.

!80
- Los Ribosomas se forman de dos Subunidades, una grande y una
pequeña.
- Las hebras de rRNA presentan numerosas regiones helicoidales por
apareamiento de BN. También presentan numerosos repliegues y lazos. Son
proteínas flexibles y deformables que constituyen el armazón donde se
enzamblan las distintas Proteínas Ribosómicas.
- El Ribosoma de Procariontes tiene un coeficiente de sedimentación de
70S, un diámetro de 200 Amstrongs y una masa de 2700 kDaltons. Sus
subunidades son de 30S y 50S:
• 30S se forma de rRNA 16S y Proteínas (21).
• 50S se forma de rRNA 23S, rRNA 5S y Proteínas (34).

6 Funcionalidad de los Ribososmas:
- El Ribosoma es, en conjunto, un complejo catalítico que desempeña
numerosas reacciones durante la Biosíntesis de Proteínas:
• Aproxima los Reactivos y los orienta correctamente.
• Alinea el molde de mRNA.
• Participa en la selección del codón iniciador AUG.
• Controla la fidelidad de la Traducción.
• Interviene en la Terminación y la liberación del material.
- Siempre lee el molde de mRNA de 5’ a 3’, realizando la síntesis proteica
de a-t (NH3+) a c-t (COOH).
- Para descubrir el orden de síntesis de los péptidos se utilizaron
reticulocitos de conejo, que sintetizan activamente hemoglobina:
1. Se añaden aa marcados radiactivamente.
2. Detención: Se eliminan los aa marcados antes del tiempo de síntesis de
una cadena completa de Hg.
3. Aislamiento de las proteínas.
- Las cadenas que pudieron terminar su síntesis durante el corto pulso de
aa marcados presentaban radiactividad en su extremo c-t.
- Pudieron demostrarlo también utilizando Péptidos Sintéticos.
Conociendo los aa codificados se pudo identificar cual de ellos presenta su
grupo α amino (o carboxilo) libre:

AAA = Lys
AAC = Asn


DESPLAZAMIENTO DEL RIBOSOMA
5’ AAA (AAA)n AAC
3’

NH3+ -Lys – (Lys) – Asn-COOH

n

7 La Síntesis de Proteínas en Procariontes:
- Un molde puede dar lugar a varia proteínas, y tener varios lugares de
Iniciación precedidos por secuencias ricas en Purinas.

!81
- Dado que el mRNA se Transcribe de 5’ a 3’, mismo sentido de lectura
que el Ribosoma, en procariontes el molde mRNA puede comenzar a ser leído
según es sintetizado.
- Hay de hecho un estrecho acoplamiento en el tiempo y en el espacio de
la Transcripción y la Traducción, que debido a la membrana nuclear no podría
tener lugar en Eucariontes, lo cual permite la maduración del mRNA.
- Un mismo mRNA puede ser Traducido por varios Ribosomas a la vez.
Este conjunto de Ribosomas se llama Polisoma.

7.1La Iniciación:
- Participan IF1, IF2 e IF3.
- tRNA iniciador (tRNAi) es siempre el primer tRNA que se une, que
corresponde al codón iniciador AUG, marcando la Pauta de Lectura.
- Siempre lleva unido formil-metionina (f-Met) (radical formilo en α NH3+).
No es el mismo que transporta normalmente Met.
- En algunos casos el codón iniciador puede ser GUG (Val)
1. Disociación de las dos subunidades del Ribosoma.
2. IF3 se une a 30S evitando la reasociación con 50S. Facilita la colocación
del molde y colabora en la colocación del tRNAi.
3. IF2 unido a GTP se une a 30S y reconoce tRNAi, situándolo en el lugar
que le corresponde.
4. IF1 se une a 30S colaborando con IF3 e IF2.
5. Se produce la colocación del molde de mRNA en 30S. Una secuencia
rica en Purinas del rRNA 16S se aparea con la hebra molde de mRNA.
6. IF2 reconoce AUG y lo coloca en el lugar del Ribosoma en el que debe
interaccionar con el Anticodón de tRNAi.
- El resultado de este proceso recibe el nombre Complejo de Iniciación
30S. Se forma de rRNA 30S, molde de mRNA, tRNAi con f-Met y Factores de
Iniciación.
7. Se desprende IF3 pudiendo asociarse la subunidad 50S.
8. Se produce la hidrólisis de GTP de IF2, desprendiéndose entonces IF2 e
IF3.
- El resultado final del proceso es el Complejo de Iniciación 70S. Se forma
de rRNA 30S, rRNA 50S, molde de mRNA, y tRNAi con f-Met. La Pauta de
Lectura queda marcada.

7.2 La Elongación:
- Participan EF Tu, EF Ts y EF G (o Translocasa).
- Los lugares A (aminoacil) y P (peptidil) de 50S del Ribosoma juega un
papel fundamental en la biosíntesis de proteínas. En ellas se unen
respectivamente, el aminoacil-tRNA nuevo y el peptidil-tRNA.
- El lugar E (vacío) ha sido descrito recientemente. Presuntamente
alberga los tRNA que acaban de ceder su aa al péptido.
1. EF Tu Selecciona el siguiente aminoacil-tRNA y lo coloca en el lugar A
en función del codón expuesto. Hidroliza GTP.
2. EF Ts cataliza el intercambio GDP > GTP en EF Tu para dejarlo activado
ante la llegada del nuevo codón. En un primer paso EF Tu pierde su
GDP. A continuación EF Tu y EF Ts con GTP forman un dímero.
Finalmente EF Tu es liberado activo, con GTP.

!82
 3. Peptidil Transferasa cataliza la unión de c-t de f-Met con a-t del nuevo
aa. Esta enzima forma parte de 50S, y cataliza el ataque nucleófilo de
NH3+ a COO- sin gasto energético.

EJEMPLO: Peptidil-tRNA:

NH3+ – f-Met – CO – NH – Arg – COO – ACC - tRNA

a-t 3’ 5’

4. Se produce la Translocación del molde, que avanza un codón. Interviene

EF G o Translocasa, que hidroliza GTP:
1. Peptidil-tRNA libera el péptido y es arrastrado al lugar E.
2. Aminoácil-tRNA recibe la unión del péptido con el aa que
transportaba, siendo arrastrado al lugar P.
3. El lugar A queda vacío y expone un nuevo codón. Se repite el
proceso desde el paso 1.
- La síntesis de toda la Estructura Primaria de una Proteína tiene lugar por
la repetición de este proceso, codón tras codón.

7.3 La Terminación:
- Participan RF1, RF2 y RF3. Forman dímeros pudiendo reconocer
distintas Señales de Terminación:

Dímero Señal de Terminación que
reconoce
RF1 – RF3 UAA ; UAG

RF2 – RF3 UAA ; UGA

- Al reconocer una Señal de Terminación, estos dímeros modifican Peptidil
Transferasa, de forma que cambia su actividad y cataliza la liberación del
péptido, hidrolizando GTP.
- Terminada la síntesis, los componentes son liberados, y las subunidades
se disocian de nuevo. IF3 se une directamente a 30S, manteniéndola lista para
una nueva Traducción.


7.4 Balance Energético:

Procesos que consumen Energía Enlaces ricos en energía
Celular consumidos durante la Traducción
Activación de los aa 1 ATP por aa

Activación de los aa 1 PPi por aa

Iniciación: IF2 1 GTP por proteína

!83
 Elongación: EF Tu 1GTP por codón (o aa)

Elongación: EF G 1 GTP por codón (o aa)

Terminación: RF3 1 GTP por proteína

8 La Síntesis de Proteínas en Eucariontes:
- En este caso, un molde de mRNA da lugar a una única proteína. Hay
una única señal de iniciación no precedida por secuencia rica en purinas.
- Los Ribosomas son de mayor tamaño, 80S. Las subunidades son:
• 40S: rRNA 18S y Proteínas.
• 60S: rRNA 28S, rRNA 5,8S, rRNA 5S y Proteínas.
- Existen numerosos Factores que intervienen en la Traducción:
• 9 Factores de Iniciación (Incluído IF3).
• 3 Factores de Elongación (EF 1α EF 1 β, γ y EF 2, corresponden
respectivamente a EF Tu, EF Ts y EF G).
• Un único factor de terminación (RF).
- tRNAi no lleva unido f-Met sino Met, pero es igualmente distinto a los
otros tRNA que unen Met normalmente.
- El péptido recién sintetizado incluye Secuencias Señal que determinan
su destino final en las células y los tejidos. Después de ser reconocidas, estas
secuencias son eliminadas durante la Maduración.

9 Las Rutas de Transporte de proteínas en Eucariontes:
- Veremos el caso de las proteínas lisosómicas, de membrana celular, y
de secreción a la matriz extracelular.
- Contienen una secuencia de 20 aa en a-t que determina su destino final,
y que no aparece en su estructura madura.
- La señal, una vez sintetizada, es reconocida por las SRP (partículas
receptoras de señales).
- SRP tiene Receptores en la membrana del RE, y arrastra a la proteína
con el Ribosoma y el molde de mRNA, formándose el REr.
- Estos receptores se encuentran cercanos a Riboporinas integrales de
membrana del REr, por donde las proteínas pueden penetrar al orgánulo según
son sintetizadas por el Ribosoma.
- Una vez finalizada la síntesis, Peptidasa Señal rompe la Secuencia
Señal en el interior del RE.
- La proteína pasa al Aparato de Golgi donde es modificada, clasificada, y
enviada a su destino final en el tejido a través de:
• Gránulo de Secreción.
• Pre-Lisosoma.
• Membrana celular.

10 El Plegamiento de las Proteínas en Eucariontes:
- La proteína necesita sufrir un Proceso de Maduración donde los aa son
modificados, de manera a poder obtener el correcto plegamiento.
- Este proceso se inicia durante la Traducción y se completa al liberarse la
cadena.

!84
- A menudo este plegamiento es retardado por las Proteínas Tutoras
(Chaperonas (ATPasas lentas) y Chaperoninas), que evitan contactos erroneos
y deshacen enlaces inadecuados entre los aa de la propia proteína u otros
compuestos del medio.
- Hsp, Proteína de Choque Térmico, acompaña a las proteínas durante su
plegamiento.
- Hps 70 participa además en el envío de proteínas del citosol a la matriz
endocondrial (interior mitocondrial).
- Tiene receptores en la membrana de la mitocóndria, cercanos a canales
que permiten el paso controlado de péptidos.
- Finalmente se produce el plegamiento en la Matriz Endocondrial.

11 Maduración de las Proteínas:
- Existen varios tipos de maduración de proteínas. Algunos pasos de la
maduración son constantes:
- Siempre tiene lugar la eliminación de Met (f-Met en procariontes) poco
después del comienzo de la síntesis.
- Siempre tiene lugar la eliminación de Secuencias Señal cuando ha sido
completado el proceso de transporte de la Proteína a su destino.
- Las modificaciones que afectan al plegamiento y la conformación de las
proteínas se clasifican en dos grandes grupos:

11.1 Modificación de aminoácidos:
- Unión de substituyentes en los aa:
• Acetilación (en a-t o R de Lys) (En histonas).
• Carboxilación (en R de Asp o Glu) (Glu en Protrombina).
• Fosforilación (en R de Ser, Tyr o Thr) (Regulador de la actividad
proteica).
• Hidroxilación (en R de Pro o Lys) (En colágeno: Hyp, Hyl).
• Metilación (en R de Lys y Glu).
- Glucosilación o unión de glúcidos formándose un polisacárido, frecuente
en proteínas de membrana (Glucocalix) y de secreción (Agrecanes):
• Unión a través de O (en R de Ser y Thr).
• Unión a través de N, enlaces N-Glicosílicos (en Asp).
- Modificación por lípidos: Aumenta la hidrofobicidad de la proteína y por
lo tanto su anclaje a la membrana lipídica (en a-t, Ser, Thr y Cys):
• Acilación: Por ácidos grasos.
• Prenilación: Por Terpenos.
- Formación de puentes disulfuro entre dos Cys.
- Unión de Grupos Prostéticos, como por ejemplo, Hemo.
- Adenilación.
- ADP-Ribosilación.
- Sulfatación.

11.2 Procesamiento Proteolítico:
- Cambios en la actividad de la proteína por su conformación.
- Puede tener lugar por activación de proenzimas proteolíticas, como el
caso de la Tripsina y cimógenos digestivos.
- También se da el caso de activación de precursores de hormonas
peptídicas por Proteólisis Irreversible, como por ejemplo, el caso de la Insulina:
!85
- Se sintetiza Preproinsulina. Al llegar al RE, es eliminado el primer
péptido señal de secreción por proteólisis, quedando Proinsulina.
- Alcanza el AG donde tiene lugar la segunda proteólisis y se obtiene la
proteína Madura: Insulina. Es secretada al torrente sanguíneo.






























Parte II: EL METABOLISMO

I/ Conceptos básicos:

A/ INTRODUCCIÓN:

1 Generalidades:
- Recibe el nombre de Metabolismo el conjunto de todas las reacciones
químicas que se producen en un organismo. El mantenimiento del organismo
depende de todas y cada una de ellas.
• El Catabolismo es el conjunto de reacciones de Degradación por
oxidación. Produce energía. Suele suceder en mitocondrias.

!86
 • El Anabolismo es el conjunto de reacciones de Biosíntesis por reducción.
Gasta energía. Suele suceder en el citoplasma.
- Las Rutas Anfibólicas son rutas de degradación que crean precursores
para la biosíntesis.
- Cada reacción metabólica está integrada en una compleja red de
reacciones, controladas a su vez por distintos sistemas, a distintos niveles.

2 Control del metabolismo:
- La regulación del metabolismo tiene lugar por medio de distintos
mecanismos:
- Por regulación de la actividad de cada enzima:
• Halosterismo.
• Polimerización/Despolimerización.
• Modificaciones covalentes reversibles.
- Por regulación de los niveles de concentración de enzima, por medio de
la síntesis y degradación de la enzima.
- Por la separación de Anabolismo y Catabolismo en distintas rutas.
- Por los sistemas de endomembranas o compartimentación celular que
permiten la separación física de las rutas en orgánulos.
- Por la compartimentación tisular en tejidos y órganos con distintas
funciones metabólicas.
- Por la existencia de Isoenzimas: Distintas formas enzimáticas con la
misma actividad, pero distintas cinética y localización celular y tisular. (Por
ejemplo, Lactato dh (deshidrogenasa).
- Por mecanismos de comunicación celular, que mediante hormonas y
neuropéptidos permiten el correcto funcionamiento, íntegro y coordinado, de
cada tejido y órgano, en un organismo.
- Por el Estado Energético Celular, o niveles de ATP (y GTP), necesario
para numerosas reacciones. Es responsable de la carga energética o Potencial
de Fosforilación.




B/ TERMODINÁMICA:

1 Bases de la Termodinámica:
- Las variaciones energéticas acompañan a todas las reacciones
químicas, y también a las metabólicas.
- Las variables de la termodinámica son las propiedades experimentales
observables de un Sistema. Se trata de P, T, V, U (E interna), H (entalpía), S
(entropía), G (E libre de Gibbs).
- Cuando un sistema bioquímico sufre una modificación, utilizamos estas
variables para caracterizar físicamente la reacción. Las principales variables
implicadas son ΔG y ΔH.
- Para calcular estas variables sólo se tienen en cuenta los estados inicial
y final. Cuando el sistema capta del entorno son positivas, mientras que si cede
tienen signo negativo.

!87
- Para los estudios experimentales se han establecido las Condiciones
Standard como: P = 1atm, T = 25ªC, y COSM = 1M. Se emplea el superíndice 0
para señalar que se han respetado dichas condiciones (ΔGº, ΔHº)
- Para los sistemas biológicos, se definen como Condiciones Biológicas
Standard las mismas condiciones anteriores con un medio acuoso a pH = 7, es
decir, [H+] = 1M. En estos casos el superíndice empleado es 0’ (ΔG0’, ΔH0’).

2 Clasificación Termodinámica de las Reacciones:
- Las reacciones se clasifican en termodinámica en función de si el
sistema capta o cede al entorno.
- En función de la entalpía, el sistema cede o capta calor Q del medio:
• Exotérmicas: Cede Q; ΔH<0.
• Endotérmicas: Capta Q; ΔH>0.
- Para valorar la espontaneidad de la reacción utilizamos la Energía libre
de Gibbs.
• Exergónicas: Espontáneas; ΔG<0.
• Endergónicas: No espontáneas; ΔG>0.
• Cuando ΔG = 0, la reacción está en equilibrio.

ΔG = ΔH – T. ΔS

- En esta reacción, ΔH representa el contenido calórico del sistema y T.ΔH
representa la energía perdida durante la reacción por movimientos
moleculares.

ΔGº = -R . T . ln Keq

- Donde, para la reacción aA + bB cC + dD:

Keq = [C]C.[D]D/ [A]A.[B]B

- Las reacciones espontáneas liberan cierta energía. Otras reacciones no
espontáneas suelen acoplarse a estas en el metabolismo, captando su energía
liberada y pudiendo producirse.

ΔGT = ΔG1 + ΔG2

- Por ejemplo, si las dos reacciones tienen un intermediario común,
pueden acoplarse del siguiente modo:

A + B C C + D E
-1
ΔG1 = 0,8 kCal . mol -1
ΔG2 = -3 kCal . mol

A + B + D E
-1
ΔGT = -2,2 kCal . mol ; Espontánea.

C/ COMPUESTOS DE ELEVADA ENERGÍA DE HIDRÓLISIS:

!88
1Generalidades:
- Existen sustratos, como los Nucleótidos Trifosfato, o el PPi, cuya
hidrólisis es utilizada para impulsar muchas reacciones metabólicas
endergónicas. Reciben el nombre de Compuestos de Elevada Energía de
Hidrólisis.
- Su hidrólisis libera una importante cantidad de energía, y
frecuentemente conlleva la liberación de un grupo fosfato P. A menudo estos P
son transferidos a otros sustratos por enzimas. (Por ejemplo; Exoquinasa).
- Este tipo de Compuestos se clasifica a su vez en 5 tipos:
• Anhídridos: ATP, GTP, 1,3-BPG.
• Enolatos: Fosfoenolpiruvato (PEP).
• Fosfoguanidios: Arg-P, Creatina-P.
• Bioesteres: Acetil CoA.
• Compuestos sulfonados: S-Adenosilmetionina.
- La gran cantidad de energía liberada por estas hidrólisis puede deberse
a distintas causas:
• Disminución de la repulsión electrostática entre cargas (en P se debe a
las cargas negativas del oxígeno).
• Disminución de las posibles formas resonantes.
• Estabilización de los productos por tautomería cetoenólica (por ejemplo,
en el caso del paso de PEP a Piruvato).
• Los productos presentan mayor solvatación que los sustratos.

2 El ATP y el GTP:
- Los Nucleótidos Trifosfato llevan una importante carga energética debida
a la unión del último fosfato en γ.
- Son, ante todo el ATP, las principales fuentes de energía en Biosíntesis,
Trabajos Mecánicos y Transporte Activo transmembrana.
- Las reacciones endergónicas se acoplan a la fosfatación del ATP en
ADP + Pi, ejerciendo así como moneda de cambio energética en el
metabolismo. Posteriormente el ADP se fosforila gracias al P de un sustrato.
- La fosforilación puede ser:
• Fotosforilación Oxidativa: En Respiración o Fotosíntesis.
• Fosforilación a Nivel de Sustrato: Directamente en el transcurso de las
rutas de degradación.
- La Carga Energética (CE, entre 0 y 1), y el Potencial de Fosforilación
(Pot P) son los principales parámetros calculados del ATP en un tejido:

CE = ([ATP] + ½[ADP]) / ([ATP] + [ADP] + [AMP])

Pot P = [ATP] / ([ATP] + [Pi])

D/ COMPUESTOS DE ELEVADA ENERGÍA DE PODER
REDUCTOR:

1 Reacciones de Oxido-Reducción (Red-Ox):
- Se trata de un grupo especial de reacciones acopladas que
proporcionan gran parte de la energía de los organismos.

!89
- Se define como Reductor a aquel compuesto capaz de oxidarse
cediendo sus electrones al entorno. La oxidación suele acompañarse por
Deshidrogenación.
- Se define como Oxidante a aquel compuesto capaz de reducirse
captando electrones del entorno. La reducción suele acompañarse por
Hidrogenación.
- Dado que durante la oxidación, el Reductor pasa a ser Oxidante, y
viceversa, se puede definir la pareja Red/Ox para una especie química dada.
- Hablamos de una Reacción Red-Ox cuando se acopla la reducción y
oxidación respectivas de dos parejas Red/Ox; una sola pareja no cedería o
captaría electrones si otra pareja no los captase o cediese.
- Durante una reacción Red-Ox, una especie química se oxida mientras la
otra se reduce.

2 La Energía en las Reacciones Red-Ox:
- La Energía de este tipo de reacciones recibe también el nombre de
Potencial de Reducción o Poder Reductor, y se mide en Voltios.
- Se conoce el Poder Reductor (E, ver tabla) de cada especie en
condiciones biológicas estándar. Los E están basados en el estándar de
Hidrógeno: E’0 = 0 V.
- Calculando ΔE’0 a partir de los E’0 de ambas parejas Red/Ox podemos
determinar si la reacción transcurre en sentido directo o inverso:

ΔE’0 = E’0Ox + E’0Red

ΔE’0 >0: Reacción espontánea
ΔE’0 <0: Reacción inversa espontánea
ΔE’0 =0: Hay Equilibrio

- ΔE’0 es inversamente proporcional a ΔG’0; en concreto:

ΔG’0 = -n . F . ΔE’0

- En condiciones no Standard:

ΔE = ΔE’0 – R.T / n.F . ln ([Productos] / [Reactivos])

3 Poder Reductor en el Metabolismo:
- El Poder Reductor de un organismo se debe principalmente a las
Coenzimas NADH, NADPH y FADH2.
- Estas Coenzimas adquieren un importante papel en el metabolismo por
varios motivos:
• Por su capacidad de acoplarse y facilitar la reducción de precursores
metabólicos en rutas de Biosíntesis.
• A su vez, las formas oxidantes pueden acoplarse a Oxidaciones en rutas
de Degradación.
• Por último, por su capacidad de ceder electrones a las Cadenas de
Transporte Electrónico Mitocondriales de la Respiración, permitiendo la
síntesis de varios ATP, moneda de cambio energética.

!90




























I/ Metabolismo de Degradación de la Glucosa:

A/ DEGRADACIÓN DE LA GLUCOSA A CO : 2

1 Primera fase de la Glicólisis:
- La Glucosa (α-D-Glucopiranosa) es degradada por nuestro organismo
cada vez que ingerimos comida. Su degradación es útil tanto para producir
energía, como precursores para otras rutas de Biosíntesis.

!91









- Las Enzimas Hexoquinasa (no específica) y Glucoquinasa catalizan su
transformación en α-D-Glucopiranosa-6-P, gastando un átomo de ATP para
fosforilar el sustrato.
- A continuación, Fosfoglucoisomerasa cataliza la isomerización del
sustrato, mediante la apertura del anillo y su posterior reciclación. La Aldosa se
transforma así en Cetosa. La reacción es reversible.
- De este modo se forma α-D-Fructofuranosa-6-P (Fructosa-6-P). A su
vez, esta va a ser Fosforilada de nuevo por medio de la Fosfofructoquinasa,
que va a fosforilar el sustrato a expensas de un ATP, formando α-D-

Fructofuranosa-1,6-di-P (Fructosa-1,6-di-P)








- La ruptura aldólica de esta molécula, catalizada por Aldolasa, da lugar a
dos moléculas distintas; Dihidroxiacetona-P y D-Gliceraldehído-3-P. A su vez,
Triosafosfato Isomerasa cataliza la isomerización de Dihidroxiacetona-P a D-
Gliceraldehído-3-P. Estas reacciones son reversibles.
DHA-PG-3-P

!92






2 Segunda fase de la Glicólisis:
- Una vez que toda la glucosa se ha transformado a G-3-P, gastando la
energía de 2 ATP/glucosa (se forman dos G-3-P), comienza la segunda fase de
la Glucólisis, el la que hay una producción neta de energía.
- Para comenzar tiene lugar la oxidación del Carbono 1’ de G-3-P y su
consecutiva fosforilación de G-3-P en 1,3-di-Fosfoglicerato, por la
Gliceraldehído-3-P-dh. Esta reacción fuertemente exergónica libera energía
química, permitiendo la reducción de un NAD+ en NADH. Se trata de nuevo de
una reacción reversible.

- 1,3-di-P-G pierde entonces su grupo P, que sirve para fosforilar un ADP
a nivel de sustrato, formándose 1 ATP, Gracias a la Fosfoglicerato Quinasa.
- Fosfoglicerato Mutasa cambia entonces la posición del P de 3’ a 2’,
formándose 2-Fosfoglicerato.

- La enzima Fosfoenolpiruvasa, a continuación, deshidrata el 2-PG
transformándolo en Fosfoenolpiruvato (PEP), compuesto de muy elevado
contenido energético.

!93







- La acción de Piruvato Kinasa, fuertemente Exergónica, Transforma el
PEP en Piruvato, producto final de esta ruta. Tiene entonces lugar una
segunda Fosforilación de ADP a nivel de sustrato, formándose 1 ATP. Sin
embargo, PEP tiene más energía que aún contiene el Piruvato.






- La tendencia espontánea de la energía a
disiparse hace que PEP tenga una alta tendencia a
disociarse: Se trata de un Enol (alcohol secundario con doble enlace. El
equilibrio entre las formas Enol y Ceto está muy desplazada hacia la forma
Ceto.

Enol Ceto

- Cuando PEP está fosforilado, P bloquea el grupo Enol, evitando que se
transforme en Ceto. Por ello la acción de piruvato kinasa desencadena el
desplazamiento brutal a Ceto, y la consiguiente liberación de energía.
- El producto final que deriva de la Glucólisis es una molécula de
Piruvato.

3 Regulación de la Glicolisis:
- En el proceso de Glicolisis se distinguen tres reacciones irreversibles
intracelulares: Hexoquinasa, Fosfofructoquinasa y Piruvato quinasa. Las tres
son además marcadamente exergónicas, tanto es así que para la biosíntesis
de Glucosa desde Piruvato, deben ser rodeadas por rutas alternativas.
- Fosfofructoquinasa es una enzima alostérica que regula la velocidad
general de la glicolisis: ATP es su sustrato (centro activo) y también su
inhibidor (centro regulador). KM<<<KI, por lo que el centro activo presenta
mucha mayor afinidad que el regulador; ATP sólo llega a este último cuando se
encuentra en alta concentración. De hecho, las relaciones ATP/ADP y ATP/

!94
AMP regulan a esta enzima: ATP (al igual que NADH) la inhibe mientras ADP y
AMP la excitan. Por ello se puede decir que el estado energético de la célula
controla muy sensiblemente la glicólisis.
- También es inhibida alostéricamente por Citrato, producto intermedio del
ciclo TCA, y por AG (ácidos grasos), combustibles celulares energéticamente
muy cargados.
- Otras enzimas reguladas son Gliceraldehído-3-P dh (excitada por NAD+)
y Piruvato kinasa (inhibida por ATP).

4 Degradación anaeróbica del Piruvato:
- Este tipo de degradación recibe el nombre de Fermentación: se trata de
la reducción (de Ceto a Alcohol) anaeróbica del Piruvato. En función del tipo de
organismo, los productos de la Fermentación pueden ser distintos,
distinguiéndose principalmente las Fermentaciones láctica y la alcohólica.
- Tiene lugar en microorganismos, como las levaduras y bacterias
homolácticas; Bacillus y Lactobacillus. También sucede en el músculo
esquelético de vertebrados superiores, tanto más cuanto mayor es la
deficiencia en aporte de oxígeno libre, como los instantes de elevada demanda
energética.
FERMENTACIÓN ALCOHÓLICA:
CO2 NADH NAD+

CH3-CO-COO-
CH3-CHO CH3-CH2OH
Piruvato Acetaldehído Etanol
Piruvato descarboxilasa Alcohol dh

- Las Isoenzimas Lactato dh catalizan la fermentación láctica, y se
encuentran en los tejidos de animales superiores. Existen 5 formas
isoenzimáticas, formadas por dos tipos de subunidades, M y H: M4, M3H, M2H2,
MH3, H4.
- El coenzima NADH porta los e- necesarios para la reducción del
piruvato. Generalmente este NADH proviene de la reacción de la enzima
Gliceraldehído-3-P-dh, acoplándose ambas reacciones. La fermentación se
caracteriza de hecho por reoxidar este NADH. En presencia de oxígeno, este
NADH cede su e- a la cadena Respiratoria.
FERMENTACIÓN LÁCTICA:
Piruvato M4 Lactato
CH3-CO-COO- + NADH + H+ CH3-CHOH-COO- +
NAD+
M3H, M2H2, MH3, H4

- Lactato dh M4 es exclusiva del músculo esquelético. Es la única forma
enzimática que cataliza la formación de Lactato a partir de Piruvato
(fermentación). Las otras formas, sin embargo, transforman el Lactato en
Piruvato, ya que el primero resulta tóxico. Catalizan la misma reacción, pero en
sentidos opuestos.
- Los productos finales de la Glicólisis en el músculo esquelético es por lo
tanto Lactato, salvo en el músculo Cardíaco, donde es Piruvato.

!95
5 Descarboxilación aerobia del Piruvato en Acetil-CoA:
- En presencia de oxígeno libre, el Piruvato va a penetrar en el interior
mitocondrial para transformarse en H2O y CO2, produciéndose la oxidación
más importante de la ruta de degradación de la Glucosa, y en la que más
energía se va a producir: Ciclo de Krebs o de los Ácidos Tricarboxílicos (TCA).
- La primera descarboxilación, previa al TCA, tiene lugar al igual que este
en el interior mitocondrial. Es una descarboxilación oxidativa, pues además de
perder un CO2, se oxida el grupo Ceto del Piruvato.
- Esta descarboxilación oxidativa libera gran cantidad de energía. Para
que esta no se disipe en forma de calor, queda contenida en un nuevo enlace
(ester tiólico) que se forma entre el Acetato y la Coenzima A, formándose
Acetil-CoA; una molécula de posición central en el metabolismo. El balance
general de la reacción es:

CH3-CO-COO- + CoA-SH + NAD+

CH3-CO-S-CoA + CO2 + NADH + H+

- Para la compleja labor de evitar la disipación de la energía de esta
reacción, entra en acción un Complejo Multienzimático: Piruvato dh. PM =
7.000.000 Da. Geometría definida: Dodecahedro. Las enzimas están unidas en
estructuras superiores por enlaces no covalentes, lo que supone un avance
evolutivo aumentando la eficacia de las enzimas: Evita que el sustrato difunda,
aumentando [S] en las cercanías del complejo. Además, la regulación del
complejo por modificación de un solo componente es más precisa y eficaz.
- Este complejo se compone de tres tipos enzimáticos, que utilizan
distintos Coenzimas o Cofactores.
• Piruvato dh (PDH) + coenzima Pirofosfato de Tiamina (TPP).
• Dihidrolipoil Transacetilasa (DLT) + coenzima Ácido Lipoico.
• Dihidrolipoil dh (DLDH) + coenzima FAD.

!96





















- PDH-TPP descarboxila el Piruvato (1), en Acetaldehído (CH3-CHOH),
quedando unido a él formando Pirofosfato de 2-Hidroxietiltiamina. Recibe el
nombre de aldehído activado, al estar unido a PDH-TPP.
- El aldehído activado es transferido al coenzima Ácido Lipoico, que se
encuentra a su vez unido a DLT por una amida transacetilasa (Lys). Entonces
tiene lugar la oxidación del aldehído a ácido carboxílico, formándose Acetato, y
quedando unido al Ácido Lipoico (2). Este último queda a su vez reducido a
Ácido Dihidrolipoico, forman
- Posteriormente entra en juego la CoA, y va a tener lugar la
Transesterificación (3). El resto acetato es transferido a CoA, formándose
finalmente Acetil-CoA.
- El ácido dihidrolipoico debe ser reoxidado; sólo entonces entra en juego
la tercera enzima del complejo. Los e- del ácido dihidrolipoico pasan al FAD de
esta tercera enzima (4) formando FADH2 (reducido), y quedando oxidado de
nuevo en Ácido Lipoico.
- Por último, la reoxidación de FADH2 es mediada por un NAD+ libre que
va a ser reducido a NADH (5). El complejo multienzimático queda así intacto
de nuevo.

6 Regulación del Complejo Piruvato dh:
- La regulación de este complejo multienzimático se vuelve necesario, por
la importancia de sus productos en la Respiración Celular.
- Este regulación tiene lugar por fosforilación/desfosforilación, y cada
proceso es mediado por una enzima reguladora, respectivamente; Piruvato dh
Kinasa y Piruvato dh Fosfatasa.

ATP Pdh Kinasa ADP

!97
 Pdh activo Pdh-P inactivo
Pi Pdh Fosfatasa H2O

- Acetil-CoA y NADH (productos del complejo) excitan a la enzima Pdh
Kinasa (inactivando Pdh), mientras piruvato, NAD+ y CoA-SH (sustratos del
complejo) lo inhiben.
- Por otro lado, Ca2+ activa Pdh Fosfatasa, activando por lo tanto al
complejo Pdh. Este ión es liberado previa contracción muscular, indicando la
inmediata necesidad de gran cantidad de energía metabólica.
- Como vimos anteriormente, esta regulación se hacía más efectiva, pues
sólo se regulaba la actividad de una de las enzimas del complejo: Se trata en
concreto de la enzima Piruvato dh: Cuando se fosforilan 3 residuos Ser de esta
enzima, todo el complejo queda inactivado, y al ser hidrolizados se reactiva.
- Los Arsenitos orgánicos e inorgánicos son fuertes inhibidores del
complejo PDH. Tienen gran afinidad por los grupos SH, por lo que se unen al
Ácido Dihidrolipoico impidiendo su reoxidación.
- El envenenamiento por arsénico provoca altas concentraciones de
piruvato en sangre. Su abundancia en los residuos Cys-SH de α-Queratina de
la piel y las uñas perduran como signo de envenenamiento después de la
muerte. Napoleón pudo enfermar debido a la volatilización del arsénico el
papel de forrar paredes debido a la humedad y los hongos. Darwin pudo morir
a causa del Tónico de Hawler, que por su riqueza en arsénicos tenía efectos
bactericidas, pero causa eccemas, vómitos, artritis y nauseas. Podemos decir
que se auto-envenenó.
- El Mercurio tiene un efecto similar sobre el complejo PDH, y también se
une a Cys. Aunque actualmente está prohibido, se utilizó como pesticida. Los
fabricantes de sombreros de fieltro utilizaban sales de Mercurio para suavizar
el pelo de las pieles de liebre, por la ruptura de los puentes disulfuro. Estas
sales podían volatilizarse provocando enfermedades neuronales (de ahí el
Sombrerero Loco de Alicia).

7 Descarboxilación de Acetil-CoA en el Ciclo TCA:
- En este paso final de la degradación de la Glucosa en condiciones
aerobias, se genera la mayor cantidad de energía neta.
- Si de 1 Glucosa habíamos obtenido 2 Piruvato, y por lo tanto 2 acetil-
CoA y 2 CO2, a continuación tenemos el balance de la reacción para una
Acetil-CoA:


CH -CO-S-CoA + 3 NAD
3 + + GDP + Pi + FAD + H2O

CoA-SH + 2 CO2 + 3 NADH + GTP + FADH2

!98















CICLO TCA



!99











Enzimas Implicadas:

(1) Citrato Sintasa (2) Aconitasa

(3) Isocitrato dh (4) α-Cetoglutarato dh

(5) Succinil-CoA Sintetasa (6) Succinato dh

(7) Fumarasa (8) Malato dh

- El ciclo TCA está catalizado por enzimas solubles del la matriz
mitocondrial. Una de ellas, Succinato dh, es integral de la membrana interna
mitocondrial.
- (1) Condensación aldólica. Se forma el primer Ácido Tricarboxílico del
ciclo: El Citrato. La fuente de energía del enlace covalente que se forma entre
los sustratos, Acetato y Oxalacetato, es el propio enlace de Acetil-CoA, y aún
sobra energía de esta reacción fuertemente exergónica.
- (2) La Aconitasa cataliza en realidad dos reacciones distintas, para
cambiar la posición del grupo Hydroxi de posición 3’. En primer lugar facilita la
perdida de una molécula de agua, formándose un doble enlace y Cis-
Aconitato. En segundo lugar adiciona una molécula de agua, formandose
finalmente el Isocitrato. Se trata de hecho de una enzima estereoespecífica:
tanto la eliminación como la adición de moléculas de agua tiene lugar de forma
trans. Este paso es esencial: Citrato es un alcohol terciario, y no se puede
oxidar a Ceto. El cambio de posición del grupo Hydroxi a alcohol secundario en
Isocitrato, permite su posterior oxidación a ceto.
- Fluoracetato (F-CH2-COO-) es de hecho un veneno utilizado como
pesticida contra coyotes en USA. Inhibe la acción de la Aconitasa. Este
compuesto se une con CoA-SH formándose Fluoracetil-CoA (F-CH2-CO-S-
CoA). Este es reconocido por la enzima, formándo Fluorcitrato, que bloquea el
ciclo (fortísimo inhibidor irreversible). Al alimentarse de los cadáveres, los
consumidores de los ecosistemas también resultaron afectados.
- (3) Descarboxilación oxidativa. Tiene lugar en dos pasos. En el primero
se oxida el alcohol secundario a Ceto, formándose 1 NADH. Posteriormente
tiene lugar la descarboxilación, liberándose 1 CO2 y formándose α-
Cetoglutarato.
- (4) Descarboxilación oxidativa. En primer lugar se produce la pérdida del
CO2 de α-carboxilo. A continuación se produce la oxidación fuertemente
!100
exergónica de grupo Ceto a Carboxilo formándose NADH. Toda la energía
queda contenida en el enlace del producto con CoA-SH, formando Succinil-
CoA.
- La enzima α-Cetoglutarato dh es un complejo multienzimático análogo a
Piruvato dh. Se forma de tres tipos de enzima:
• α-Cetoglutarato dh + coenzima TPP.
• Dihidrolipoil-trans-succinasa + coenzima Ácido Lipoico.
• Dihidrolipoil dh + coenzima FAD.
- (5) Succinil-CoA Sintetasa (o Kinasa) cataliza la formación de GTP por
fosforilación a nivel de sustrato. La alta energía del P en posición γ proviene de
la hidrólisis (ruptura de la unión Ester tiólico) de CoA-SH y la consiguiente
formación de Succinato. Por lo tanto proviene indirectamente de la reacción
(4).
- (6) Succinato dh es la única enzima fuertemente unida a la membrana
interna mitocondrial. Transforma el enlace sencillo entre los carbonos 3’ y 4’ en
doble enlace. Se forma FADH2, con los dos H despendidos del Succinato. Se
forma Fumarato.
- Las enzimas deshidrogenasa (dh) suelen reducir coenzimas para oxidar
el sustrato. En función de la energía desprendida en la reacción, pueden
reducir NAD+ en reacciones altamente energéticas (de alcohol o aldehído a
ceto, de aldehído a ácido) o FAD+ en reacciones no suficientemente
exergónicas para formar NADH (de enlace sencillo a doble enlace).
- (7) La enzima Fumarasa cataliza la hidratación del Fumarato en los
carbonos 2’ y 3’, y la consecuente formación de Malato.
- (8) Malato dh oxida el Malato en Oxalacetato (OA-), formando un NADH.
- Así queda cerrado finalemente el ciclo. Ahora una nueva molécula de
Acetil-CoA llega a la mitocondria, y se une con el OA- en la reacción (1).
- Como balance, podemos apreciar que en una vuelta de ciclo se oxidan
los dos carbonos correspondientes a Acetil-CoA, en dos descarboxilaciones
sucesivas, catalizadas por Isocitrato dh y α-Cetoglutarato dh.
- Cabe destacar que los carbonos que son incorporados al ciclo TCA no
son descarboxilados hasta la segunda vuelta de ciclo; en la primera pasan a
formar una parte constitutiva del OA-, durante la cual son descarboxilados los
C del acetato incorporado anteriormente.
- También podemos apreciar que la combustión completa de una
molécula de glucosa es mucho más reentable energéticamente en condiciones
aerobias (1 glucosa = 38 ATP).

8 Regulación del ciclo TCA:
- Este ciclo, vital para la absoluta totalidad de células aerobias, está
controlado por una fuerte regulación, que se divide en dos tipos
fundamentales: General y Particular.
- La Regulación General o Global afecta a la totalidad del ciclo, y se
relaciona con su alta sensibilidad a la proporción NADH/NAD+, dado que NAD+
es un sustrato del ciclo en tres pasos distintos. Cuando la concentración de
NADH es alta, la célula dispone de energía suficiente y el ciclo se ralentiza.
- La Regulación Particular se limita a tres pasos concretos, catalizados de
hecho por las enzimas Citrato Sintasa, Isocitrato dh, y α-Cetoglutarato dh.
Estas enzimas están sometidas a regulación independiente.

!101
- Citrato Sintasa es inhibida por NADH y Succinil-CoA. La KM de la
enzima por OA-, su propio sustrato, es del orden de la concentración fisiológica
del mismo. Por lo tanto cuando OA- desciende por debajo de su nivel
fisiológico normal Citrato Sintasa deja de funcionar y todo el ciclo es
bloqueado.
- Isocitrato dh es una enzima alostérica, inhibida por NADH y excitada por
el ADP.
- Por último, α-Cetoglutarato dh es inhibida por NADH y por Succinil-CoA
en alta concentración.

B/ PARTICULARIDADES DEL CICLO DE LOS ÁCIDOS
TRICARBOXÍLICOS:

1 Estereoisometría de la Aconitasa:
- Como vimos al final del ciclo TCA, los dos C de acetato no son
descarboxilados hasta la segunda vuelta de ciclo. Se descubrió al marcar el
Acetato de Acetil-CoA con 14C, y observar que durnate la primera vuelta de
ciclo no se obtuvo ningún CO2 marcado en su C, pero sí desde la segunda
vuelta del ciclo.
- El Citrato (sustrato de Aconitasa) es una molécula simétrica, pero sin
propiedades ópticas. Para su deshidratación, en el ciclo TCA, se comporta
como molécula asimétrica. Recibe el nombre de molécula Pro-quiral.
- La Aconitasa reconoce y solamente une determinados carbonos,
selectivamente, en sus tres centros de anclaje. De esta manera, el H2O
perdido se encuentra siempre entre el OH y H del C opuesto al que
corresponde a la Acetil-CoA que acaba de reaccionar para formar el Citrato, y
por lo tanto, al final del ciclo, los C de dicha Acetil-CoA se encuentran
formando Oxalacetato.

2 Carácter anfibólico del ciclo TCA:
- Se trata e un doble carácter metabólico: Catabólico (producción de
energía) y Biosintético (formación de precursores para otras rutas).
- Las rutas biosintéticas acopladas al ciclo TCA (TCA inverso) tiene
múltiples finalidades; precursores:
• OA-: Aspartato.
• α-Cetoglutarato: Glutamato.
• Malato: Glucosa.
• Succinil-CoA: Grupo prostético Hemo.
• Citrato: Lípidos citoplasmáticos (colesterol).
- La biosíntesis tiene lugar mayoritariamente en el citoplasma. De esta
forma aparece una barrera física que separa los ciclos TCA y TCA inverso,
facilitando y organizando biosíntesis/catabolismo.

!102
- La Acetil-CoA que llega al citosol suele proceder de las mitocondrias.
Sin embargo, la membrana interna mitocondrial es impermeable a este
compuesto, que debe ser transportado por un mecanismo indirecto. Interviene
la enzima Citrato Liasa.

Acetil-CoA OA- Acetil-CoA


OA-
Citrato
Liasa

TCA Citrato Citrato






M
E
M

B
R
A

N
A



- Citrato Liasa escinde el Citrato produciendo los mismos componentes
que se han utilisado en el interior mitocondrial para formarlo. Para ello hidroliza
una molécula de ATP. De hecho Acetil-CoA sirve en el Citosol para la
biosíntesis de ácidos grasos y esteroles, de alta energía (reservas), cuya
síntesis precisa la alta energía del enlace Ester Tiólico de CoA.
- De este modo se drenan intermediarios del ciclo TCA al exterior
mitocondrial, para formar precursores de biosíntesis. No hay que olvidar que la
mitocondria no puede carecer de intermediarios del ciclo TCA, pues dicho ciclo
es exclusivo para crear energía para la célula. Por ello existen también las
reacciones Anapleróticas.

3 Reacciones Anapleróticas; Carboxilación del Piruvato:
- Se trata de todo el conjunto de reacciones previstas para reponer
intermediarios en el ciclo TCA, en caso de carencia. Describiremos a

!103
continuación las dos principales reacciones anapleróticas: Carboxilación del
Piruvato para la reposición del OA-; Ciclo del Glioxilato.
- La Carboxilación del Piruvato está catalizada por la enzima Piruvato
Carboxilasa + coenzima Biotina. Necesita hidrolizar un ATP. Tiene lugar en el
interior mitocondrial.

CH3-CO-COO- + CO2 -OOC-CH2-CO-COO-

- La Biotina es un coenzima característico de enzimas carboxilasas. Se
une a una Lys de la enzima por un enlace covalente en el grupo ácido de su
cadena lateral.

- En concreto, Piruvato Carboxilasa es un Homotetrámero, con un
coenzima Biotina en cada monómero (4 en total). Presenta regulación
alostérica, siendo fuertemente excitada por Acetil-CoA.

!104
- De hecho presenta un requerimiento absoluto de Acetil-CoA
intramitocondrial, y solo es activada cuando los niveles de este son superiores
a los fisiológicos normales.
- La carboxilación en el seno de la enzima es mediada por la Biotina:
coenzima capaz de transportar el CO2 hasta el Piruvato (en forma
Carboxibiotina), y la energía necesaria para el nuevo enlace, que proviene de
la propia unión Botina-CO2.

CO2 + ATP + E-Biotina E-Biotina-COO- + ADP + Pi

E-Biotina-COO- + CH3-CO-COO- -OOC-CH2-CO-COO- + E-
Biotina

4 Reacciones Anapleróticas; Ciclo del Glioxilato:
- Estas reacciones son exclusivas de los Glioxisomas; corpúsculos
subcelulares, presentes exclusivamente en Microorganismos y Vegetales. Se
trata de un ciclo que presenta reacciones acopladas a las del ciclo TCA, pero
carece de la descarboxilación propia de dicho ciclo.
- Este ciclo puede ser considerado Anaplerótico, pues se forma
Succinato, intermediario del ciclo TCA, que también es precursor de la glucosa.
- Sin embargo, su principal función es la síntesis de Glucosa a partir de
metabolitos de dos carbonos. Durante el ciclo se incorporan dos Acetil-CoA,
generando ½ Glucosa. Las Acetil-CoA suelen provenir de la degradación de los
ácidos grasos (AG).
- En primer lugar, Isocitrato abandona la Mitocondria, y penetra en el
Glioxisoma. Ahí tiene lugar la reacción (1), catalizada por Isocitrato Liasa. Esta
enzima escinde el Isocitrato en una molécula de Succinato y una de Glioxilato.
- El succinato puede abandonar el Glioxisoma para ser transformado en
Malato en la mitocondria por el ciclo TCA. El Malato abandona la mitocondria
para servir de precursor a la Glucosa en el Citoplasma. La Glucosa, a su vez,
sirve de precursor para casi todos los componentes celulares.
- La enzima Malato Sintasa cataliza la formación de Malato a partir de
Glioxilato, incorporando Acetil-CoA, en el interior del Glioxisoma.
- El resto de reacciones (de Malato a Isocitrato) son catalizadas por
enzimas comunes al ciclo TCA (Malato dh, Citrato Sintasa y Aconitasa) en el
Glioxisoma.
- Este ciclo es muy útil para microorganismos cuya única fuente de
carbono son metabolitos de 2C.
- En vegetales son imprescindibles para la transformación de las reservas
energéticas de triglicéridos que se degradan durante la germinación. Los
Triglicéridos se descomponen en 3 AG y una molécula de Glicerol. Los AG
pueden transformarse en Acetil-CoA por β-oxidación, de forma que su energía
se puede incorporar al ciclo del Glioxilato.
- A menudo este ciclo es considerado como un by-pass del ciclo TCA.
- Fosfoenolpiruvato (PEP), intermediario de la síntesis de Glucosa, inhibe
de hecho a la enzima Isocitrato Liasa.
- Los Animales somos incapaces de sintetizar Glucosa a partir de
metabolitos de menos de 3C. Además, podemos transformar Hidratos de
Carbono en Grasas, pero nunca Grasas en Hidratos de Carbono.

!105





C/LA CADENA DE TRANSPORTE ELECTRÓNICO DE LA
RESPIRACIÓN Y LA FOSFORILACIÓN OXIDATIVA:

1 Generalidades:
- Estas cadenas transportan los electrones desde los coenzimas (NADH,
FADH2) que han sido reducidos por enzimas deshidrogenasas, hasta el
oxígeno molecular O2 (o H2O2) que pasa a formar agua.
- Se trata de un proceso muy complejo bioquímicamente, y en el que
intervienen multitud de proteínas asociadas a la membrana y cofactores
asociados. Su finalidad es crear ATP, energía celular. Esta síntesis de ATP
recibe el nombre de Fosforilación Oxidativa.
- En procariontes, esta cadena de transporte electrónico tiene lugar en la
membrana plasmática. En eucariontes esta cadena se encuentra asociada a la
membrana interna mitocondrial. Al ser permeable esta membrana, sucede en
concreto tanto en la matriz como en el espacio intermembranoso
mitocondriales.

Coenzima

Ox e- 2 e-
2e-
H+
Respiración

Ox e-
2H+ ATP
H+ Coenzima 2e-

½ O2 H2O

!106






- Durante las oxidaciones inorgánicas, los sustratos reaccionan
directamente con el oxígeno. Sin embargo, durante la oxidación orgánica o
metabolica de la Respiración, primero se produce la deshidrogenación del
Sustrato en el catabolismo, y posteriormente los electrones son transportados
por la cadena respiratoria hasta el oxígeno. Los átomos de la molécula que se
oxida no se incorporan directamente a la molécula que se oxida.
- Además de crear energía, la cadena respiratoria facilita la reoxidación
de los coenzimas necesarios para el Catabolismo.

2 Mecanismo de la cadena respiratoria:
- NADH cede sus electrones a nivel del Complejo I, NADH dh. Este
complejo multienzimático es muy complejo. Los electrones son cedidos
entonces a Ubiquinol (CoQ) (Q / QH2). Se genera así un primer ATP.
- FADH2 cede sin embargo sus electrones al Complejo II, FADH2 dh, y
este a su vez se los cede a CoQ, sin síntesis de ATP.
- Por ello, a la oxidación de un NADH se acopla la síntesis de 3 ATP,
mientras que a la oxidación de un FADH2 se acopla la síntesis de 2 ATP
(nuevos estudios apuntan a 2,5 ATP y 1,5 ATP respectivamente).



NADH
ATP

FADH2

ATP






ATP

CADENA DE TRANSPORTE

!107
ELECTRÓNICO

COMPLEJO I


UBIQUINOL


COMPLEJO III

CITOCROMO C



COMPLEJO IV

!108









- En ambos casos, los dos electrones terminan reduciendo una molécula
de Ubiquinol. CoQH2 va a ceder los electrones al siguiente complejo
multienzimático, formandose una molécula de ATP; se trata del Complejo III,
Ubiquinol dh.
- Este complejo termina reduciendo una molécula de Citocromo C. Esta
va a ceder los dos electrones al último complejo multienzimático, formándose
de nuevo un ATP; se trata del Complejo IV, Citocromo C dh.

3 Los Citocromos:
- En el proceso intervienen tres Apoproteínas; los Citocromos: Cit a
(Complejo IV), Cit b (Complejo III y II) y Cit C (Complejo III y libre). Tienen la
capacidad de absorber luz, y se distinguen por la longitud de onda a la que
presentan la mayor adsorción.
- Cit b presenta un grupo Hemo igual al de Hemoglobina (Fe unido a
Protoporfirina IX, grupo unido por enlaces no covalentes de Vinilo).
- Cit c presenta un grupo prostético de Protoporfirina IX Fe modificado.
Está unido por enlaces covalentes Tioeter con Cys de la proteína.
- Cit a presenta una Protoporfirina IX Fe modificada con dos
substituyentes: Un grupo formilo y uno propileno.
- Existen, a su vez, subclasificaciones dentro de un grupo de Citocromos,
por ejemplo, Cit a1, Cit a2… Estos se diferencian por la proteína a la que se
unen y no de su grupo prostético.
- Es muy importante destacar que en este caso los grupos Hemo no unen
O2 reversiblemente, quedando el Fe Oxigenado y no Oxidado, como ocurre en
la Hemoglobina. Los Citocromos son transportadores de electrones, y por lo
tanto su átomo Fe debe experimentar oxidaciones y reducciones reversibles.
No depende del grupo Hemo sino del tipo de proteína a la que se une.
Características, Grupo Hemo:

Hemoglobina Fe II Fe-O2

e-
Citocromo Fe II Fe III
e-

- De hecho, la función biológica de los Citocromos es la de reducirse
captando reversiblemente electrones, para transportarlos y luego oxidarse al
cederlos.

!109
- El Cit c es el más estudiado. Presenta su grupo Hemo encerrado en una
cavidad de la proteína. Los enlaces de combinación 5º y 6º del Fe están
bloqueados por Hys (= Hb) y Met de la proteína, respectivamente.

4 El transporte de electrones en la Cadena Respiratoria:
- El Complejo I, NADH dh: Este complejo multienzimático, también
llamado NADH CoQ reductasa, está constituido por un total de 24 proteínas
distintas. Presenta entre 16 y 18 átomos de S, y entre 4 y 6 enrejados S-Fe,
unidos por enlaces covalentes Tioeter a sus proteínas. Cada enrejado es
capaz de transportar un electrón. Contiene también una molécula de
Mononucleótido de Flavina (FMN).

Ejemplo; Enrejado Fe4S4









- Este complejo capta los electrones de NADH y los cede a la Coenzima
ubiquinol (CoQ).

Espacio intramembranoso mitocondrial

2 H+

Complejo I

FMN Fe4S4
!110




CoQ
NADH +
H +

ATP
N A D + e-

- La CoQ se encuentra libre en el interior de la membrana interna
mitocondrial. Se trata de una Quinona con n cadenas de Isopreno
(hidrofóbicas). Por ejemplo, en mamíferos, Q10 tiene 10 unidades de Isopreno.
- El Complejo III; Ubiquinol dh: También llamado CoQ Cit c Reductasa,
este complejo multienzimático se compone de 8 cadenas polipeptídicas
distintas, que unidas en Octámeros forman Homodímeros. Contiene Cit b, Cit
c1 y enrejados Fe-S.

Espacio intermembranoso mitocondrial

2 H+

Cit c

Complejo III

Cit b FeS Cit c1

Cit c


CoQ


ATP
FADH2

- El Complejo IV; Citocromo c dh: También llamado Citocromo c Oxidasa,
está constituido por 7 cadenas polipeptídicas distintas, que de nuevo forman
un homodímero de dos heptámeros. Contiene Cit a, Cit a3 y una apoproteína
con Cobre (Cu II), que juega el papel del Fe. Este complejo no es tan
estudiado y el orden de transferencia de e- es supuesto.

Espacio intermembranoso mitocondrial

2 H+
!111


Cit c
Complejo IV

Cit a Cu II Cit a3

H2O

½ O2 + 2 H+ ATP

- Al igual que los electrones, los H+ procedentes del sustrato terminan
siendo captados por el O2, para formar agua, aunque el oxígeno no reacciona
directamente con el sustrato que se oxida.

5 La Fosforilación Oxidativa:
- La cadena de transporte electrónico libera la energía suficiente energía
como para acoplarse a la síntesis de ATP: Esta síntesis es conocida como
Fosforilación Oxidativa.
- La energía proviene en concreto del estado de alta energía que se
forma a nivel de la membrana mitocondrial. Esta energía es empleada para la
fosforilación oxidativa.
- En un principio se pensaba que el estado de alta energía estaba
relacionado con cambios conformacionales en las proteínas. Mitchell desarrolló
la Hipótesis quimiosmótica, y ganó por ello un premio Nobel.
- Hipótesis Quimiosmótica: El estado de alta energía radica en un
gradiente de protones H+ que se crea a ambos lados de la membrana
mitocondrial. La cadena de transporte electrónico fuerza la salida de H+ en
contra del gradiente de concentración, de forma que [H+] es mayor en el
espacio intermemebranoso mitocondrial que en la matriz mitocondrial y en el
citosol.
- Este transporte en contra de gradiente precisa un aporte de energía; se
trata de hecho de la energía liberada en la cadena de transporte electrónico:

Transporte de H+ en Cadena Respiratoria:
Sustrato-H2 + NAD+
Sustrato dh
Sustrato + NADH + H+

!112
NADH + H+ + FMN

NAD+ + FMNH2
FMNH2 + Fe (III)S
Complejo I
FMN+ 2 H+ + Fe(II)S
Fe(II)S + 2 H+ + Q

Fe(III)S + QH 2

QH2 + Cit c (ox)
Complejo II
Q + Cit c (red) + 2 H+
Cit c (red) + 2 H+ + ½ O2
Complejo III
Cit c (ox) + H2O


- Dado que la membrana es impermeable a los protones, estos iones
deben ser transportados activamente. La distribución vectorial (asimétrica) de
los distintos complejos constituyentes de la cadena respiratoria a lo largo de la
membrana mitocondrial interna, les hace capaces de captar los protones
siempre del lado de la matriz, y cederlos en el espacio intermembrana.
- Debido al fuerte gradiente de concentración, los protones van a tender a
entrar espontáneamente en la matriz mitocondrial. Las proteínas capaces de
permitir su entrada son bombas transportadoras tipo F, que acoplan este
transporte cargado de energéticamente por la respiración a la síntesis de ATP.
Por ello esta proteína transportadora recibe el nombre de ATP-Sintetasa.

!113

















- ATP-Sintetasa es un heterodímero formado por las subunidades F0 y
F1. Ambas se encuentran unidas por un tallo. Se trata del Motor Molecular de
las células, pues transforma la energía iónica en química.
• F0 se encuentra en la membrana mitocondrial interna. Se forma de 4-5
cadenas distintas, altamente hidrofóbicas, que atraviesan la membrana
y facilitan el paso de protones. Reciben el nombre de Proteolípidos.
• F1 es un dominio globular de la matriz mitocondrial. Se forma de cinco
tipos cadenas distintas (α, β, γ, δ y ε), e incluye el centro activo de
actividad ATP-sintetasa, donde se transluce la energía liberada por el
transporte de protones. Fórmula molecular: α3β3γδε.
- Paul Boyer propuso que, al pasar el gradiente de protones a través de
F0, induce un giro en el tallo (similar al de un motor de 3 cilindros), facilitando
un cambio conformacional en la región globular F1 que permite la síntesis de
ATP. Recibió también un premio Nobel.
- Sin la presencia de F1, F0 presenta potente actividad ATPasa, por lo
que fue considerada como tal durante mucho tiempo.

D/ VÍAS DE REOXIDACIÓN DEL NADH CITOPLASMÁTICO:

1 Generalidades:
- El NADH es fundamental en el citoplasma celular, pues se acopla a la
oxidación del Gliceraldehído-difosfato en la glicólisis. Su reoxidación es por lo
tanto fundamental para el metabolismo de la glucosa.
- Esta reacción suele suceder por Respiración celular, Fermentación
Láctica y Fermentción Alcohólica.
- Dado que la membrana es impermeable al NADH, su poder reductor
(sus electrones) debe ser bombeado o transportado hasta la matriz
mitocondrial. Llega hasta allí por medio de un Mecanismo Indirecto Lanzadera.
Se distinguen dos tipos: Lanzadera de Malato - Aspartato y Lanzadera de
Glicerol 3-fosfato.


!114

















2 Lanzadera de Glicerol fosfato:
- DHAP, intermediario de la Glucolisis, puede ser reducido a Glicerol
Fosfato en el citoplasma, por la enzima Glicerol dh, oxidando un NADH para
recuperar un NAD+. Glicerol Fosfato es una molécula capaz de difundir a través
de la membrana y penetrar en el interior mitocondrial con los electrones de
NADH.
- En el interior mitocondrial, la reducción de un FAD a FADH2 se acopla a
la reoxidación de Glicerol fosfato en DHAP. Esta última molécula también
puede difundir a través de la membrana, para salir de nuevo al citosol, donde
podrá oxidar otro NADH. No existe consumo neto de DHAP.
- El FADH2 de la matriz mitocondrial cede a su vez los electrones a CoQ
de la cadena de transporte electrónico, acopládose la síntesis de 2 ATP por
cada molécula de NADH oxidada en el citoplasma.
- Esta vía está presente en musculatura blanca y músculos de insectos.

!115
3 Lanzadera de Malato:

- Malato dh cataliza la síntesis de Malato por reducción de OA-, oxidando
un NADH.
- Malato puede atravesar la membrana, y en la matriz mitocondrial va a
reoxidar a OA-, reduciendo un NAD+ a NADH, que cederá los electrones a la
cadena de transporte electrónico.
- Dado que OA- no puede atravesar la membrana, deberá regresar al
citosol combinándose con Glutamato para originar Asp y a-Cetoglutarato, que
sí la pueden atravesar. Esta reacción, y su reacción inversa que ocurre en el
citosol, son mediadas por la enzima Transaminasa (aminotransferasa).
- No hay consumo neto de OA-.

E/ BALANCE DE LA DEGRADACIÓN DE LA GLUCOSA:

- A nivel evolutivo, el paso de vida anaerobia a vida aerobia es un gran
paso en cuanto a la energía que se puede obtener de la glucosa. En

!116
condiciones aerobias el balance energético es de 38 ATP/glucosa, mientras en
condiciones anaerobias, es de 2 ATP/glucosa (propios de la glicólisis).
- Infarto de Miocardio y Embolia dañan irreversiblemente el corazón y el
sistema nervioso respectivamente. Esto se debe al alto consumo de ATP
necesario para el mantenimiento de bomba transportadora ATPasa de Na+/K+,
responsable del equilibrio quimiosmótico de la célula y el mantenimiento del
volumen celular. La interrupción del paso de la sangre en una arteria impide el
paso de O2 suficiente, por lo que se ralentiza considerablemente la producción
de ATP.
- Cuando el ATP de una célula es insuficiente para mantener su equilibrio
quimiosmíotico, esta se hincha, su membrana se permeabiliza y los
componentes celulares pueden salir al exterior. La alta concentración de
Lactato dh en el exterior celular suele ser responsable directo de la muerte por
infarto.
- Por otro lado, en ausencia de O2 suficiente, se produce mucho ácido
láctico por la vía glucolítica anaerobia. Este producto es tóxico para el
organismo: Cuando se acumula, hace descender el pH celular, y como
consecuencia se inicia la actividad de proteínas lisosomales que degradan
macromoléculas y dañan irreversiblemente las estructuras celulares, causando
su muerte.
- La glucosa es un componente fundamental de la dieta, pero existen sin
embargo otros monosacáridos y disacáridos que pueden resultar nutritivos.
Entre ellos encontramos los disacáridos Sacarosa (Glucosa + Fructosa), y
Lactosa (Glucosa + Galactosa). Estos son fosforilados por acción de kinasas, y
son introducidos como intermediarios en la Glucolisis.
- Una patología destacable es la ausencia de Lactasa. Recibe el nombre
de Intolerancia a la Lactosa. Solamente la raza caucasiana resiste la Lactosa.
En ausencia de esta enzima, la lactosa no puede ser digerida y resulta
indigesta. Su acumulación en el tracto digestivo facilita la proliferación en
exceso de determinadas bacterias que forman parte de la flora normal, y que
generan gases irritantes. Existe la leche sin lactosa. Otra patología destacable,
la Galactosemia, se debe a la ausencia de Uridil transferasa. Ambas patologías
son, lógicamente, genéticas y hereditarias.


II/ Metabolismo de Biosíntesis de Glucosa:

A/ LA GLUCONEOGÉNESIS:

1 Generalidades:
- Se trata de la biosíntesis de glucosa a partir de precursores de menos
átomos de carbono. Por ejemplo, los seres Autótrofos son capaces de formar
glucosa a partir de carbono mineral (CO2). Los Quimiótrofos necesitan para ello
metabolitos orgánicos de al menos dos carbonos.
- En seres quimiótrofos, el ciclo del Glioxilato es una ruta importante de
síntesis de Glucosa (visto en II/B/4).
- En animales superiores, el ciclo del Glioxilato permite la síntesis de
glucosa a partir de metabolitos de al menos tres carbonos. Es fundamental,

!117
pues existen varios tejidos, como el Nervioso o el Sanguíneo, que sólo pueden
aceptar como nutriente la glucosa.
- Tanto es así que, por ejemplo, en ayuno, el 80% de la glucosa de
nuestro cuerpo es consumida por el cerebro. En las reservas celulares de
glucosa, en forma de Glucógeno, disponemos de energía para un día. Después
del ayuno, tiene lugar la Gluconeogénesis especialmente en el Hígado pero
también en el Riñon.
- Entre todos los posibles precursores, podemos destacar por su especial
importancia:
• Lactato (formado en músculo esqueletico por la Glicólisis anaeróbia).
• Alanina ( este aa abunda en el Músculo, debido al ciclo Piruvato-Ala).
• Otros aminoácidos (aa glucogénicos).
• Glicerol (procede del metabolismo de degradación de Triglicéridos).
- De tal manera que, en ausencia de glucosa durante un ayuno corto,
nuestras células activan mecanismos de degradación de proteínas musculares
en aminoácidos y degradación de las reservas de grasas (TG) para gormar
Glicerol, para crear precursores de la Gluconeogénesis.
- En caso de un ayuno prolongado, el cerebro puede llegar a adaptarse a
utilizar como combustible cuerpos cetónicos que derivan de la degradación de
las grasas. Las reservas de grasas de nuestro cuerpo pueden servir para un
mes de ayuno. A partir de ese momento pueden comenzar a degradarse
proteínas de órganos tan importantes como el Corazón.

2 Gluconeogénesis a partir del Lactato:
- La contracción muscular precisa de un gran aporte energético, y produce
para ello una importante cantidad de Lactato a partir de la Glucosa.
- Por ello es frecuente la Gluconeogénesis a partir de Lactato. Este
proceso tiene lugar en el Hígado, principal Órgano Gluconeogénico.
- El Lactato del Músculo es cedido a la sangre, y va a ser así captado por
el Hígado. Este forma de nuevo Glucosa y la cede a la circulación sanguínea,
de forma que pueda ser captada por cualquier tejido que la requiera.
- Todo este ciclo recibe el nombre de Ciclo de Cori, pues fue descubierto
por el Matrimonio Cori.
- Por lo general, La Gluconeogénesis utiliza las mismas reacciones que
utiliza la Glucólisis, pero en sentido contrario. Sin embargo, como ya hemos
visto, existen tres reacciones irreversibles en la Glucólisis, que deberán ser
rodeadas por otras enzimas en el sentido de la Gluconeogénesis. Se trata de
las reacciones catalizadas por:
• Hexoquinasa.
• Fosfofructoquinasa.
• Piruvato kinasa.

REACCIONES
REACCIONES REACCIONES GLUCONEOGÉNICAS
GLICOLITICAS REVERSIBLES QUE RODEAN A LAS
IRREVERSIBLES COMUNES GLICOLÍTICAS
IRREVERSIBLES

!118
 ATP Glucosa Pi
Hexoquinasa Glucosa-6-P fosfatasa
ADP + Pi H2O
Glucosa-6-P


ATP Fructosa-6-P Pi
Fosfofructoquinasa Fructosa-1,6-dP
ADP + Pi fosfatasa
Fructosa-1,6-dP H2O


Triosa-P


ADP + Pi PEP GDP + Pi
Piruvato kinasa PEP carboxiquinasa
GTP
-
OA ADP + Pi
ATP Piruvato Carboxilasa
Piruvato ATP


Lactato

- La síntesis de Glucosa comienza con la transformación de Lactato en
Piruvato, por acción Lactato dh.
- A continuación tienen lugar dos reacciones típicamente
Gluconeogénicas, catalizadas por Piruvato carboxilasa y PEP carboxiquinasa.
La primera ocurre en la Matriz mitocondrial, mientras la segunda lo hace en el
Citosol.
- La reacción de Piruvato carboxilasa + coenzima Biotina es la reacción
anaplerótica más importante del ciclo TCA (vista en II/B/3). Hidroliza un ATP.
- La reacción que transforma OA- en PEP, catalizada por PEP
carboxiquinasa, hidroliza también un P de alta energía de GTP.
- En conjunto, la transformación de Piruvato en PEP requiere un alto gasto
energético.

CH3-CO-COO- + CO2 + ATP

-OOC-CH2-CO- COO- + ADP + Pi

-

OOC-CH -CO-
2 COO- + GTP

-OOC-C-OPO32-

+ GDP + CO2

CH2

!119
- El fosfato de mayor energía del metabolismo es el de PEP. Se trata de
un compuesto de alta energía química, superior a la del ATP o el GTP.
- Durante la primera reacción, la energía que corresponde a la hidrólisis
del ATP queda contenida en la formación del nuevo enlace con el CO2. En la
segunda reacción, la hidrólisis del mismo enlace combinada con la hidrólisis de
un GTP, proporcionan la energía suficiente para la formación del PEP.
- Las reacciones entre PEP y Fructosa-1,6-dP son todas ellas reversibles.
Utilizan ATP y NADH tanto como son producidos en sentido Glicolítico. Como
es sabido, las rupturas de enlaces energéticos del catabolismo crean energía,
tanto como su formación en la biosíntesis la gasta.
- La reacción típicamente gluconeogénica catalizada por Fructosa-1,6-dP
fosfatasa hidroliza el ester fosfórico del C 1’ de la Fructosa. Su producto,
Fructosa-6-P, se isomeriza reversiblemente a Glucosa-6-P.
- Glucosa-6-P fosfatasa hidrolíza el último ester fosfórico, formando
finalmente Glucosa libre, que puede salir a la circulación sanguínea. Esta
enzima es también típicamente gluconeogénica, y por lo tanto los tejidos que
no realizan gluconeogénesis carecen totalmente de ella.

3 Patologías de inhibición de la Gluconeogénesis:
- Patología genética y hereditaria de carencia o malformación de alguna
enzima típicamente Gluconeogénica.
- La ingestión de alcohol inhibe la Gluconeogénesis a partir de Lactato.
Por ello los bebedores tienen altos niveles de Ácido Láctico, y además no
queman grasa, de manera que tienden a engordar. Todo ello se debe a la
Acidosis Láctica
- La Acidosis láctica es un proceso que facilita la reducción del NAD+ a
partir de la oxidación del Etanol ingerido a Acetato. Este proceso facilitado por
Alcohol dh elimina NAD+ que podrían ser utilizados por Lactato dh para formar
Piruvato a partir del Lactato, inhibiendo este paso de la Gluconeogénesis.


B/ EL GLUCÓGENO Y SU METABOLISMO:

1 Introducción al Glucógeno:
- El Glucógeno es un polisacárido que constituye la mayor fuente de
Glucosa de reserva en animales vertebrados.
- Su acumulación en la célula tiene lugar en forma de partículas discretas,
de PM de al menos 2.107 g.mol-1. Es conocido también como el Almidón
Animal.
- Está contituido por múltiples cadenas de Amilosa y Amilopeptina:
• Amilosa: Polímero lineal de β-Glucosa, con enlaces glicosílicos α(1-4).
• Amilopeptina: Ramificaciones del glucógeno. Se unen a las cadenas de
Amilosa por enlaces glicosílicos α(1-6).
•

!120















- El Glucógeno tiende a almacenarse especialmente en el Músculo y en el
Hígado.
- El Glucógeno Hepático tiene una densidad de 65 g/kg de tejido.
Responde directamente a los niveles de Glucosa en la dieta.
- El Glucógeno Muscular, unos 14 g/kg de tejido, depende
fundamentalmente del nivel de ejercicio físico, siendo más escaso después de
un ejercicio prolongado. Se explica por los requerimientos energéticos de la
contracción muscular.

2 Biosíntesis del Glucógeno:
- El precursor es la Glucosa-6-P, que va a ser transformada por la acción
de una Mutasa en Glucosa-1-P.
- A continuación, Glucosa-1-P es activada mediante su unión con un UTP.
En esta reacción, catalizada por UDP-Glucosa pirofosforilasa, se transfiere a la
Glucosa-1-P (en P) la porción UMP, liberando PPi.
- Finalmente, la Glucosa es transferida por Glucógeno sintasa al C 4’ de
un pequeño polisacárido de Glucógeno en crecimiento, por un enlace
Glicosílico α(1-4), liberándose la molécula de UDP. La naturaleza de la cadena
no cambia con su extensión, pudiendo repetirse indefinidamente el proceso.

!121














!122





















- En la formación de las ramificaciones de Amilopeptina interviene la
enzima Glicosil-4,6 transferasa, que escinde una cadena de amilosa de al
menos 11 residuos, captando bloques de 7 residuos, y cataliza su unión en el
grupo Hidroxilo C 6’ de una cadena vecina, en un punto que dista de al menos
4 residuos de la anterior ramificación.
- La captación de Glucosa para la biosíntesis de Glucógeno se encuentra
estrictamente controlada: Todo el exceso de glucosa consumida se acumula
indefinidamente en forma de grasas (TG).

3 La degradación del Glucógeno:
- Las unidades de Glucosa se pierden una a una por la acción de la
enzima Glucógeno Fosforilasa, formando nuevamente Glucosa-1-P. El balande
de la reacción es:
(Glucógeno)n + PO4H2- (Glucógeno)n-1 +
Glucosa-1-P

!123
















- La ruptura del enlace glucosílico es inducida por el Fosfato, y por ello la
reacción recibe el nombre de Fosforólisis (similar a hidrólisis cuando la
molécula responsable es el agua). El grupo fosfato va a ser adicionado a los
productos.
- Esta enzima sólo ataca las uniones α(1-4). El resultado de su acción son
oligómeros (pequeños polímeros) de glucógeno, altamente ramificados. Estos
reciben el nombre de Dextrinas límite. Son atacadas por enzimas capaces de
reconocer los enlaces α(1-6).

4 Generalidades sobre la regulación del metabolismo del Glucógeno:
- La síntesis y degradación del Glucógeno se encuentran reguladas
conjuntamente. En caso contrario nos encontraríamos con un ciclo absurdo
que conduciría a la disipación ineficaz de la energía. Las situaciones o
estímulos que favorecen su síntesis inhiben su degradación y viceversa.
- Las enzimas objetivo de este sistema de regulación son Glucógeno
sintasa y Glucógeno fosforilasa.

5 Regulación de Glucógeno fosforilasa:
- Glucógeno fosforilasa es un homodímero constituído por unos 842 aa, y
sometida a dos tipos de regulación: Alostérica y por Modificación Covalente.
- La regulación alostérica es una regulación puntual, y se produce como
respuesta a una baja carga energética.
- La regulación por modificación covalente de la estructura proteica de la
enzima es inducida por hormonas, y responde a una necesidad general del
organismo.
- Existen, al igual que en el caso de la Hb, en equilibrio dos
conformaciones; tensa (T) e inactiva, y relajada (R) y activa. En ausencia de
regulación alostérica, la enzima se encuentra simpre en conformación tensa.

!124
- Cuando la célula muscular precisa energía, se elevan los niveles
intracelulares de AMP. AMP es un regulador alostérico activador de esta
enzima, y la estabiliza en su forma R.

!125










- Cuando sin embargo, la carga energética de la célula muscular es alta, y
en esta abundan ATP y Glucosa-6-P, estos se unen a la Fosforilasa para inducir
alostéricamente un cambio conformacional, y estabilizando la forma T.
- En cuanto a la regulación hormonal por modificación covalente,
Glucógeno fosforilasa puede ser fosforilada por Fosforilasa kinasa, en la Ser 14
de cada subunidad. Esta fosforilación a expensas de un ATP induce un cambio
conformacional (de forma b a forma a) que la transforma en activa (forma R).
Solamente en el hígado, la propia glucosa puede ejercer como inactivador
alostérico de la enzima, devolviendola a su forma a-T.
- Ambas formas activas (a y b), a pesar de no ser idénticas, son muy
similares, y el Glucógeno es accesible al sitio activo.

6 Control hormonal sobre la regulación de Glucógeno fosforilasa:
- Es determinante sobre la conformación a o b de la enzima, es decir,
sobre su modificación covalente por fosforilación.
- Las hormonas Glucogenolíticas inducen la fosforilación de esta enzima,
y por lo tanto la degradación del Glucógeno (Glucogenolisis). Entre ellas
encontramos el grupo de las Catecolaminas (Noradrenalina, Adrenalina,
Epinefrina…). Son producidas por la Médula Adrenal, y liberadas en respuesta
a situaciones de emergencia, como sensación de riesgo o sustos, puesto que
hace falta gran cantidad de energía para la huída. Tienen receptores
específicos en Músculos e Hígado.

!126















- Está implicada toda una cascada enzimática de fosforilación en la
regulación de Glucógeno Fosforilasa. Para comenzar la Adrenalina se una a
receptores unidos a proteína G, específicos de la membrana de sus células
diana; las células musculares. Así queda activada la enzima Adenil ciclasa:
cicla el ATP en cAMP, que actúa como segundo mensajero en el interior celular.
- cAMP activa una proteína kinasa fosforilandola, y esta a su vez va a
fosforilar a expensas de un ATP a la segunda enzima de la cadena: Fosforilasa
kinasa. Esta última, finalmente, activa por fosforilación a expensas de ATP a la
enzima Glucógeno fosforilasa, estabilizándola en la forma a, y estimulándo la
degradación del Glucógeno.
- Una vez ejercida la acción de una hormona,
para que el sistema endocrino sea eficaz como
conjunto, esta debe ser eliminada: para ello actúan las
Fosfoproteinas fosfatasa, que desfosforilan a las
enzimas kinasas. Esto sucede finalmente cuando
cAMP se destruye en AMP, por acción de la enzima
Fosfodiesterasa (ataca el enlace diester fosfórico
intramolecular de cAMP).
- Cafeína y Teofilina, presentes en el té y el café,
inhiben la acción de la Fosfodiesterasa. Al dificultar la degradación del cAMP
estimulan la Glucogenolisis, y se produce energía metabólica necesaria para el
nerviosismo, característico de su ingestión.







CAFEÍNA
TEOFILINA
- La transducción de señales hormonales al
interior celular es un mecanismo fundamental para la regulación de las
funciones metabólicas vitales. Suele suceder por fosforilación/desfosforilación
del dominio globular de proteínas receptoras transmembrana.
!127
- El efecto fundamental de la cascada enzimática de kinasas es la
amplificación de la señal hormonal en el interior celular. Cuando una kinasa es
activada, permanece así durante algunos segundos: tiempo suficiente para
activar por fosforilación muchas kinasas del siguiente eslabón de la cadena. De
esta manera, en este caso, para una Adrenalina se forforilan cientos de
enzimas Fosforilasa kinasa, y para una de estas, cientos de Glucógeno
fosforilasa.
- La activación de la proteína kinasa por acción de cAMP depende de un
cambio conformacional: La proteína inactiva se forma de cuatro subunidades:
dos R (reguladoras) y dos C (catalíticas). Dos moléculas de cAMP se unen a
las subunidades R, provocamdo un cambio conformacional que impide su
unión con las subunidades C. Las dos subunidades C libres, están activas y
presentan actividad kinasa (pudiendo fosforilar a Fosforilasa kinasa) hasta el
momento de la ruptura de cAMP.
- Fosforilasa kinasa se forma de 4 subunidades distintas organizadas en
un Homotetrámero: (αβγδ)4. γ es la subunidad catalítica, y el resto son
reguladoras. La subunidad δ es conocida como Calmodulina; al unir iones de
calcio (liberados siempre previa contracción muscular), y solo entonces,
permite la activación de Fosforilasa kinasa. Las otras dos subunidades deben
quedar fosforiladas para permitir la total activación de la kinasa (estudios
recientes apuntan solo a β).
- Glucagón es una hormona polipeptídica (de unos 29 aa) secretada por el
Páncreas en respuesta a muy bajos niveles de azúcar en sangre, mucho
después de la última ingestión de alimentos. Responde entre otras cosas al
requerimiento del Sistema Nervioso. Es también una hormona Glucogenolítica,
y presenta receptores específicos solamente en el Hígado.

7 Regulación de Glucógeno sintasa y su control hormonal:
- Esta enzima es también un Homotertrámero, de PM = 350 kD. Al igual
que la anterior, presenta sistemas de regulación Alostérico y Covalente
acoplados, pero a diferencia de esta, la fosforilación de la enzima
(conformación a) estabiliza su forma T (inactiva). La conformación b es activa
de por sí.
- Glucógeno fosfatasa pasa de conformación a, a conformación b por
acción de la Fosfatasa kinasa, regulada también por fosforilación
desfosforilación.
- La fosforilación tiene lugar en residuos Ser de cada subunidad, a
expensas del γ P de ATP. Puede ser catalizada por las mismas enzimas: Kinasa
dependiente de cAMP, Fosforilasa kinasa, pero también por otras kinasas
(mecanismo no específico). Por ello, la Adrenalina no solo tiene poder
Glucogenolítico en Músculo e Hígado, sino que además inhibe la síntesis del
Glucógeno.
- La Insulina, secretada también por el Páncreas, pero en respuesta a
muy altos niveles de Glucosa en sangre, estimula la forma activa de Fosfatasa
kinasa, y por lo tanto la síntesis de Glucógeno. Se trata de otra hormona
polipeptídica, que al igual que el Glucagón, es secretada por los Islotes β, o
Células de Langerhans. Después de cada comida, estimulan tanto la síntesis
de Glucógeno como la de las Grasas.

!128
- La Diabetes (ausencia o patología de la Insulina) puede ser infantil
(hereditaria) o adquirida. Esta última suele desarrollarse en adultos como
consecuencia del sobrepeso. Es una enfermedad muy abundante en paises
desarrollados, especialmente en los Estados Unidos debido a su mala
alimentación.
- Glucosa-6-P es un activador Alostérico de Glucógeno sintasa. En altos
niveles intracelulares, se une a esta enzima en su conformación a,
estabilizando forma R, y por consiguiente la síntesis de glucógeno.
- Podemos concluir que el metabolismo del Glucógeno está regulado por
procesos importantes de Fosforilación (movilización de las reservas) /
Desfosforilación (Procesos biosintéticos).

8 Ruta de las Pentosas, o del Fosfogluconato:
- Esta última ruta de Hidratos de Carbono es una Vía Multifuncional:
1. Biosíntesis activa de lípidos: Producción de NADPH citoplasmático, cuyo
poder reductor es esencial en la síntesis de ácidos grasos, colesterol y
fosfolípidos, en el Tejido Adiposo, las Glándulas Mamarias, el Hígado y
la Médula Adrenal. NADP+ es un derivado fosforilado de NAD+ que no
cede electrones a la cadena respiratoria. En el Citosol, la reducción de
este coenzima permite el transporte de electrones hasta las rutas de
biosíntesis.
2. Producción de Ribosa-5-P, precursor fundamental en la Biosíntesis de
Ácidos nucleicos.
3. Producción de energía metabólica. Se creean precursores para la
Glicólisis, hay producción indirecta de ATP.
4. En vegetales y microorganismos, es indispensable para la síntesis de
Glucosa a partir de CO2, durante la fase oscura de la fotosíntesis.
- Esta Ruta está dividida en dos fases fundamentales:
1.Fase Oxidativa: Glucosa
Ribulosa-5-P
2. Fase No Oxidativa: Ribulosa-5- P
intermediarios de la Glucólisis.
- Se pueden obtener pentosas partiendo de Fructosa-6-P y 3-
Gliceraldehído.
- La Fase Oxidativa tiene como principal objetivo la síntesis de NADPH.
- La enzima Glucosa-6-P dh oxida la Glucosa-6-P, reduciendo un NADP+,
en Glucano Lactona. Lactonasa lo transforma en 6-P-Gluconato.
- Posteriormente, 6-P-Gluconato sufre la descarboxilación oxidativa
(Alcohol > Ceto), transformandose en Ribulosa-5-P. Esta oxidación, catalizada
por 6-P-Gluconato dh, reduce un segundo NADP+.
- Ribulosa-5-P es el primer intermediario de la Fase No Oxidativa, cuyo
conjunto de reacciones es reversible, y cuyos objetivos principales son la
síntesis de precursores.

!129




















(1) Glucosa-6-P dh (y Lactonasa).
(2) 6-P-Gluconato dh

!130
















Ribulosa-5-P





(3) Isomerasa (4) Epimerasa

(5) Transcetolasa + coenzima TTP (6) Transaldolasa

!131
(7) Transacetolasa
- En primer lugar sucede la Isomerización de la Ribulosa-5-P en Ribosa-5-
P y Xilulosa-5-P por dos enzimas distintas; dos pentosas.
- Transacetolasa – TTP transfiere un Glicoahdehido (2C) de la Xilulosa a
la Ribosa, formándose respectivamente una triosa: 3-P-Gliceraldehído, y una
heptosa: Pseudoheptulosa.
- La transferencia de este grupo es facilitada por el coenzima TTP, en un
proceso análogo a los catalizados por Piruvato dh y α-Cetoglutarato dh.
Durante la transferencia se forma Pirofosfato de dihidroxietiltiamina:
E-TTP-CHOH-CH2OH.
- A continuación, Transaldolasa transfiere un fragmento de 3D de la
heptosa a la triosa, formándose respectivamente una tetrosa: Eritrosa-4-P, y
una hexosa: Fructosa-6-P.
- Finalmente, Transacetolasa cataliza la transferencia de un nuevo grupo
Glicoaldehído (2C) de una Xilulosa-5-P (una pentosa) a la Eritrosa-4-P,
formándose así finalmente Gliceraldehído-3-P, y otra Fructosa-6-P.
- Además de formar precursores, esta fase facilita el intercambio entre
triosas, tetrosas, pentosas, hexosas e incluso heptosas.
- Ambas fases funcionan en dependencia de las necesidades metabólicas
de las células:
• Funcionan como respuesta a la necesidad de NADPH en fase oxidativa,
y también de ATP pues se crean precursores para la Glucólisis y el ciclo
TCA en la fase no oxidativa.
• Responde también a necesidad de síntesis activa de ácidos nucleicos.
En este caso la Ribosa-5-P es obtenida a partir de los precursores de la
Glicólisis, gracias a la fase oxidativa en sentido opuesto (ascendente):
es decir, a partir de Fructosa-6-P y 3-P-Gliceraldehído.

9 Glutatión y Patología de la Ruta de las Pentosas en Eritrocitos:
- La ausencia o malformación genética y hereditaria (debida a la
malformación de un solo gen) de la enzima Glucosa-6-P dh en Eritrocitos
puede conducir a Anemias hemolíticas agudas, especialmente después de la
ingestión de determinados medicamentos. Se trata de una malformación
patológica grave.
- Esta patología afecta al 11% de la población negra de los Estados
Unidos, y más de 200 millones de personas en Africa central.
- El tripéptido Glutatión es responsable de la conservación de grupos
tiólicos libres en proteínas (SH), indispensables para su funcionalidad. También
evita la destrucción de la membrana celular por peroxidación lipídica (la
oxidación ligada al envejecimiento). Durante la respiración aerobia se producen
múltiples oxidaciones, originándose peróxidos como H2O2, y también peróxidos
orgánicos. Estas moléculas son altamente lesivas para las células, pues son
responsables de la oxidación y destrucción de múltiples compuestos.
- En concreto, entre otras cosas, el Glutatión se encarga de eliminar los
peróxidos dañinos para la célula, con la ayuda de Glutatión peroxidasa. Por
ejemplo, reduce el Peróxido de Hidrógeno a agua, quedando oxidado: La
oxidación se traduce en la unión de dos moléculas de Glutatión, por puentes
disulfuro.

!132
- Finalmente, la enzima Glutatión reductasa se encarga de reducir de
nuevo las moléculas de Glutatión, utilizando un NADPH como donador de
electrones.
- Por ello, la enzima Glucosa-6-P dh es fundamental para proporcionar
NADPH al eritrocito, no solo reduciéndolo a nivel del sustrato, sino permitiendo
la acción posterior de 6-P-Gluconato dh.
- El gen responsable de la Anemia Hemolítica aguda está ligado al
cromosoma X. Por lo tanto los machos que heredan el gen X defectuoso no
producen nada de enzima normal, y siempre están afectados letalmente. Las
hembras, sin embargo, pueden ser homozigotas o heterozigotas. Sólo las
heterozigotas pueden producir Glucosa-6-P dh suficiente para cumplir sus
funciones vitales, pero producen el 50% de lo que produce una persona normal
sana.
- Curiosamente, este gen recesivo prevalece entre la población negra de
África central. Se debe a la enorme ventaja que este gen proporciona a las
mujeres heterozigotas frente al Paludismo o Malaria, mayor causa mundial de
mortalidad. Esto se debe a que la bacteria causante, Plasmodium falciparium,
necesita para su desarrollo altos niveles de NADPH. Al infectar a personas con
niveles inferiores a los normales (concretamente ½), los parásitos no logran
proliferar. Si estas mujeres toman Pamaquinina, un fármaco que actúa contra la
Malaria reduciéndose para oxidar el NADPH en NADP+ (atacando así a la
bacteria), pueden morir.



















III/ Metabolismo de Lípidos:

A/ LOS PRINCIPALES LÍPIDOS:

1 Estructura y Nomenclatura:
- Se trata de compuestos altamente hidrofóbicos, debido a la hidrofobicia
de sus cadenas Acilo contituyentes, los Ácidos Grasos (AG). De hecho, los
ácidos grasos son los componentes fundamentales de todos los lípidos.
!133
- Los AG derivan de Hidrocarburos de cadena larga, de tal manera que en
su extremo presentan un grupo Carboxilo. Su fórmula general es:

CH3-(CH2)n-COO-

- Su nomenclatura se basa en la raíz del hidrocarburo que le corresponde,
terminado en –oico (por ejemplo, con 16 C y saturado: Hexadecanoico, 16:0).
- En el caso de que presente insaturaciones, se emplea la misma
terminología, sin olvidar la terminación –eno del hidrocarburo (por ejemplo, con
16 C y un doble enlace: Hexadecenoico, 16:1). Se emplea una Δ para indicar
con un superíndice la posición de los dobles enlaces contando desde C
1’ (carboxilo) (por ejemplo, Octadecano trienoico (18:3) Δ6,9,12).
- Se puede emplear una ω para indicar la posición de las insaturaciones,
partiendo desde el carbono ω, es decir, el más alejado del grupo carboxilo (por
ejemplo, el mismo AG: ω6,9,12). A pesar de este ejemplo, esta nomenclatura es
habitual en AG ω3 y ω6. Estos AG son característicos de vegetales, y los
animales no pueden introducir insaturaciones en esas posiciones; sin embargo
son esenciales para la membrana celular, por ello son fundamentales en la
alimentación.

2 Los Ácidos Grasos de las células:
- Además de un nombre sistemático, los ácidos grasos biológicos más
frecuentes en las células suelen tener un nombre propio habitual.
- Por lo general en las células, tienen un número par de átomos de C,
comprendido entre 16 y 20.
- Las insaturaciones se encuentran en posición cis, y esto es fundamental
para la membrana celular. Hidrogenando los AG cis con aceite de oliva (fritura)
pueden eliminarse los dobles enlaces u obtener la configuración trans. Este
tipo de dieta, característica de los estadounidenses, es perjudicial para las
membranas. La dieta Mediterránea, rica en ácido oleico crudo, es beneficiosa y
evita enfermedades cardiovasculares.
- Los lípidos deben ser transformados por el metabolismo, para ejercer su
función biológica. Existen tres principales tipos de Macromoléculas orgánicas
que contienen lípidos como componentes fundamentales:
• Fosfolípidos (de membrana).
• Triglicéridos (reservas energéticas).
• Esteroles

!134

















!135
















3 Los Triglicéridos:
- Los TG, importantes reservas energéticas, Constituyen las Grasas del
tejido adiposo.
- Derivan de tres AG y una moléculas de Glicerol (Glicerina Tri-alcohol).
Cada grupo Ácido de los AG se une a un grupo Alcohol del Glicerol, por una
unión Ester.

- Cuando de los tres grupos Alcohol del Glicerol, solo dos posiciones
están esterificadas, recibe el nombre de Diglicérido (DG). Para conocer las
posiciones de los AG se numeran los C de Glicerol (por ejemplo, 1,2-
Diglicérido).
- Cuando hay una única posición esterificada recibe el nombre de
Monoglicérido (MG). Entonces se indica específicamente el C esterificado.

4 Los Fosfolípidos:
- Los PL intervienen como componentes básicos de las membranas
plasmáticas celulares.

!136










- Derivan de 1,2-DG. El grupo alcohol 3’ está esterificado por un Ácido
Fosfórico, que a su vez esterifica una base nitrogenado (normalmente distinta
de las de ADN y ARN), ente las cuales destacan Etanolamina, Serina, Colina…
- Su nomenclatura se limita a incluír un Fosfatidil- delante del nombre de
la BN (por ejemplo, Fosfatidiletanolamina, PE).
- Algunos PL tienen esterificada una sola posición alcohol con un ácido
graso. Estos reciben el nombre de Lisofosfolípidos (por ejemplo
Lisofosfatidiletanolamina, LPE).
- Los Esfingolípidos son PL especiales, muy importantes para el SN.

5 Los Esteroides:
- Todos los Esteroides tienen en común un grupo fundamental: se trata del
Ciclopentanoperhidrofenantreno:

!137











- Contiene dos grupos Metilo (18’ y 19’) y un sustituyente particular en 17’
que permite diferenciar a los distintos esteroides biológicos entre ellos.
- Existen distintos Esteroles en el organismo, y pueden tener distintas
funciones. Entre ellos encontramos la Cortisona, el Colesterol (constituyente de
la membrana plasmática indispensable para su fluidez), las Sales Biliares
(necesarias para la digestión de las grasas), Vitaminas y varias Hormonas
Sexuales.
- Cortisona y sus derivados son hormonas secretadas por las cápsulas
suprarrenales en bajísima concentración. Se trata de un fármaco
antiinflamatorio insustituible para múltiples enfermedades. Es junto con los
Antibióticos el principal fármaco del siglo XX. Se utiliza contra Cancer, Alergias,
Inflamaciones…
- La Cortisona fue descubierta en la cápsula suprarrenal de buey. Su baja
producción la hacía incomercializable. Su síntesis química a partir de
Esteroides vegetales es muy compleja: se debe introducir un grupo Hidroxilo
justo en posición 11’. Son necesarias 11 reacciones y tiene un rendimiento del
0,015 %. El microbiólogo Peterson descubrió microorganismos con
Hidroxilasas específicas que catalizaban esta reacción con un rendimiento del
100 %.

B/ METABOLISMO DE DEGRADACIÓN DE LÍPIDOS:

1 La Digestión de los Triglicéridos en la Luz Intestinal:
- Los TG son un principal componente energético de la dieta humana. Son
muy insolubles en agua, lo cual es un problema para su digestión y adsorción.
- Los movimientos peristáticos del tubo digestivo facilitan la emulsión de
las grasas, transformándolas en pequeñas gotitas. Estas gotitas se hacen aún
más solubles gracias a la acción de las Sales Biliares, producidas por la
vesícula biliar del hígado. Las sales recubren las gotitas de TG en forma de
película. Estos compuestos esteroílicos biliares, con acción detergente,
presentan una cabeza hidrofílica y una cola hidrofóbica.
- A continuación, los TG son hidrolizados por una potente Lipasa, que es
liberada a la luz intestinal por el páncreas. Hidroliza en concreto los enlaces de
las posiciones distintas des TG, es decir, 1’ y 3’.

TG DG + AG 2-MG + 2 AG

!138
- Esta Lipasa es en sí misma inactiva, y su activación depende de una
pequeña proteína; Colipasa. Se une a la enzima induciendo un cambio
conformacional en ella, pudiendo quedar en contacto su centro activo con los
TG. Colipasa es producida por el Páncreas en forma de Procolipasa. Su
activación por proteólisis es a su vez inducida por un pH muy bajo,
característico del tracto digestivo.
- 2-MG, AG y Sales Biliares forman micelas mixtas que finalmente pueden
ser absorbidas por las células de la mucosa intestinal.


2 Degradación de los Triglicéridos en la mucosa intestinal:
- En el interior celular, los ácidos grasos y el MG se transforman de nuevo
en TG. Los AG, en el interior celular, nunca se encuentran libres sino unidos a
CoA:

R-COO- + CoASH R- CO-SCoA

- Esto no solo facilita la solubilización del AG, sino que además Activa su
grupo Carboxilo, haciéndolo más reactivo.
- Los TG, reconstruidos en las células de la mucosa intestinal, deben
pasar a la sangre. En este proceso su solubilidad es de nuevo un problema, y
demasiados TG en la dieta pueden causar patologías circulatorias.
- En el Retículo Endoplasmático de las células, los TG se unen con
proteínas, fosfolípidos y colesterol formando unas partículas llamadas
Quilomicrones (QM), capaces de salir de la mucosa intestinal al drenaje
linfático, y de ahí al torrente sanguíneo a través del conducto torácico.
- Estos complejos son también llamados Lipoproteínas, transportan los TG
en la sangre, facilitando su solubilización en medios acuosos.

3 Lipoproteínas de la sangre:

!139











LIPOPROTEÍNA



- Las lipoproteínas presentan una monocapa de fosfolípidos, algo de
colesterol y Apoproteínas en su superficie, haciendo de la partícula en conjunto
un compuesto hidrosoluble. En el interior hidrofóbico, se mezclan esteres de
colesterol y TG homogeneizados.
- Las Lipoproteínas de la sangre, además de los QM, se clasifican en
función de su densidad. De tal manera que, a mayor relación Lípido/Proteína,
menor será su densidad:
• VLDL (Lipoproteína de muy baja densidad).
• LDL (Lipoproteína de baja densidad).
• HDL (Lipoproteína de alta densidad).
- Los QM, de muy baja densidad, se corresponden a los lípidos de la
dieta, y se distingue de las otras Lipoproteínas por su composición. Además, su
tiempo de permanencia en sangre es especialmente corto (5 min), mucho más
que el de VLDL (2-3 horas).
- VLDL transporta los TG endógenos, producidos por el propio organismo
en el hígado.
- LDL transportan el colesterol malo.
- HDL transportan los excesos de colesterol (denominado bueno), que
deben ser eliminados. Deben en concreto ser llevados hasta el hígado para su
metabolismo.

4 Recorrido de los Quilomicrones en la sangre:
- Una vez que llega al torrente sanguíneo, el QM no permanecerá en él
durante más de 5 minutos. De hecho, las células musculares, esqueléticas y
cardíacas, y las células adiposas captarán rápidamente estas partículas.
- Dichas células van a hidrolizar los QM por acción de Lipoproteína
Lipasa. Esta enzima se encuentra en la superficie de las células endoteliales
de los capilares sanguíneos de estos tejidos, de tal manera que su reacción
será catalizada a nivel del plasma sanguíneo y sólo sus productos serán
adsobidos por los tejidos.
- Primero, la Lipoproteína lipasa debe ser activada por la Apoproteína C II
del QM. Entonces la enzima esterasa comienza a hidrolizar los TG de los QM:
Primero en AG + DG, y después DG en AG + MG, de forma que los AG son
adsorbidos por el tejido.

!140
- La estructura QM MG es muy inestable, de forma que se produce una
disociación espontánea de la partícula. Los MG entran al interior celular donde
son transformados en AG y Glicerol. Las Lipoproteínas remanentes se dirigen a
través de la sangre directamente al hígado.

5 Destino de los Triglicéridos en células Adiposas y Musculares:
- En el interior celular, los AG provenientes de los TG de la dieta pueden
tener dos destinos: Biosíntesis de lípidos (especialmente en Adipositos) u
obtención de energía metabólica o ATP por β-oxidación (en células
musculares).
- Ocurre exactamente lo mismo con las VLDL que con los QM. El Hígado,
principal órgano de metabolismo de Lípidos, exporta el colesterol y los TG
endógenos en este tipo de Lipoproteínas, de gran tamaño, pudiendo se útiles
como fuente de lípidos para tejidos muscular y adiposo.
- En estos tejidos, de nuevo, son hidrolizados a expensas de Lipoproteína
lipasa. La Lipoproteína latente es en este caso una partícula LDL, de menor
tamaño ya que ha perdido casi todo su contenido.
- ½ de las LDL retorna al hígado donde puede cargarse de nuevo en
VLDL, mientras la otra ½ de LDL puede dirigirse a los tejidos extrahepáticos
(periféricos del hígado), donde sirve como fuente de Colesterol y Apoproteínas.
- En estos últimos tejidos, LDL se une a receptores específicos de las
membranas celulares, y se introducen en la célula por un proceso de
endocitosis. Una pequeña vesícula con los receptores abandona el Endosoma,
y es reciclada en la membrana. El resto del Endosoma se fusiona con un
Lisosoma formándose un Lisosoma secundario, donde las LDL son digeridas y
degradadas.
- El Colesterol libre en exceso se acumula en la membrana, en forma de
Esteres de Colesterol. La esterificación de este compuesto con un AG (Acil-
CoA) es catalizada por la enzima Acil-CoA-Colesterol acil-transferasa.

Colesterol + Acil-CoA Ester de Colesterol + CoASH

- Las Apoproteínas son descompuestas en sus aminoácidos
constituyentes.

6 Función de las Apoproteínas de alta densidad, HDL:
- HDL son sintetizadas en el Hígado, y liberadas al plasma sanguíneo. Se
encargan de recoger los excesos de Colesterol de la superficie de las células.
- Cuando aparecen el la circulación, son partículas de muy pequeño
tamaño, exentas de Colesterol. A medida que pasa el tiempo, van cargándose
de este compuesto, y transformándolo inmediatamente en Esteres de
Colesterol. En este caso, la esterificación corre a cargo de la enzima del
plasma Lecitina Colesterol acil-transferasa (LCAT).
- El fosfolípido Lecitina (Fosfatidil Colina) es tranformada en Lisolecitina
(Lisofosfatidil Colina), cediendo su AG en 2’ al Colesterol.

!141


COLESTEROL



Colina

- Una vez que HDL se carga de Esteres de Colesterol periférico (en
exceso), una parte de ellos van a ser transferidos a VLTL, y otra va a regresar
al Hígado para su metabolismo, entre otras cosas para la síntesis de las Sales
Biliares, que se acumulan en la Vesícula Biliar.

7 Enfermedades cardíacas relacionadas:
- Una anomalía hereditaria se debe a la defectuosidad de un gen, que se
traduce en la ausencia de receptores de LDL en las células del tejido
extrahepático.
- La Homozigosis es muy rara (1 entre 1.000.000 de habitantes), y
produce en los afectados una concentración de colesterol en sangre cinco
veces superior a la de una persona normal. Los enfermos no suelen superar la
edad de 20 años.
- La Heterozigosis es sin embargo muy abundante (1 entre 500
habitantes). Presentan la ½ de receptores que una persona normal, y sus
niveles de colesterol en sangre son sensiblemente elevados. Estos enfermos
pueden padecer enfermedades cardíacas a los 40 o 50 años.
- Las Estatinas son Fármacos que ayudan a regular los niveles de
colesterol en sangre. Inhiben la síntesis de Colesterol Endógeno.
- Por otro lado, ante pequeñas lesiones arteriales, se depositan
paulatinamente los lípidos formando Ateromas. Estos constituyen un
engrosamiento de la pared arterial, pudiendo obstruir la luz arterial.
- En estos casos, la disminución del flujo sanguíneo, que puede llegar a
bloquearse, puede producir Infarto de Miocardio (si se produce en la arteria
Coronaria), o Embolia Cerebral (en la arteria Cerebral), causas de muerte de
las más abundantes en países desarrollados.
- Con el tiempo, los Ateromas se Calcifican y endurecen, dificultando aún
más la circulación. Esta enfermedad es conocida bioquímicamente como
Aterosclerosis (Arteriosclerosis).
- Los altos niveles de LDL en sangre pueden crear enfermedades
coronarias, sin embargo, los altos niveles de HDL las evitan.
- Las hembras, gracias a la producción de estrógenos, estimulan los
elevados niveles de HDL, siendo menos afectadas. El bajo peso, ejercicio físico
violento, y el consumo moderado de alcohol también elevan los niveles de
HDL. El consumo de tabaco, sin embargo, aumenta el riesgo.

8 Movilización de los Ácidos Grasos del tejido Adiposo:
- El tejido Adiposo es un importante reservorio donde se acumulan los
ácidos grasos, importante fuente de energía a nivel cuantitativo (más aún que
la glucosa). Estos AG se encuentran en forma de TG, y son suficientes para
abastecernos durante un mes.

!142
- La movilización de los TG tiene lugar como respuesta a una demanda de
energía general del organismo, por un intenso ejercicio físico, o carencia de
nutrientes.
- Triglicérido lipasa, Diglicérido lipasa y Monoglicérido lipasa catalizan
respectiva y ordenadamente la pérdida de los tres AG del TG, que van
difundiendo del adiposito y siendo cedidos a Albúmina, proteína que puede
transportar estas hidrofóficas moléculas a través de la sangre. Serán tomados
por tejidos requirentes de energía. Se piensa que TG lipasa y MG lipasa
podrían ser la misma enzima.
- El Glicerol restante pasa al torrente sanguíneo, que va a transportarle
hasta el hígado donde va a ser metabolizado. A expensas de la hidrólisis de un
ATP en ADP, Glicerol kinasa cataliza la fosforilación del Glicerol en su C 3’,
dando Glicerofosfato. La célula adiposa carece de esta enzima.

CH2OH-CHOH-CH2OH CH2OH-CHOH-
CH2OPO32-

- Este producto va a ser transformado, reduciendo un NAD+, en
Dihidroxiacetona fosfato (DHAP) metabolito de la ruta intermediaria Glicolítica.
Podrá ser isomerizado en G-3-P para producción de energía, o podrá ser
utilizado en la vía Gluconeogénica.

CH2OH-CO-CH2OPO32-
- A l b ú m i n a e s u n a pequeña proteína monomérica del plasma
sanguíneo (PM = 66.000 kD). Está estabilizada por numerosos puentes
disulfuro, y 10 puntos de anclaje para AG, con distintas afinidades: entre ellos
destacan dos o tres sitios primarios, de gran afinidad.
- Al igual que la degradación del Glucógeno (Glucógeno fosforilasa) la
movilización de esta segunda importante reserva energética orgánica está
sometida a una fuerte regulación y control hormonal.

Hormonas:
ADIPOSITO
- Adrenalina
+ Movilización de AG
- Glucagón
+
AMPc
SANGRE
ATP




Receptor


Adenil
!143





- AMPc, segundo mensajero, activa una cascada enzimática de
fosforilación de proteínas kinasas, que desemboca en la fosforilación de
Triglicérido lipasa, quedando esta en forma activada. La acción de una
fosfatasa la devuelve a su estado inicial.
- La hormona Insulina estimula la desfosforilación de la TG lipasa del
tejido adiposo, y estimula además procesos de Biosíntesis. Es secretada
después de alimentarse.

9 La β-Oxidación de los Ácidos Grasos (β-Ox):
- Los AG son el principal combustible para gran número de células,
especialmente para el músculo. Aparecen en las células de todos los tejidos,
procedentes de la sangre donde son transportados por la proteína Albúmina
desde el tejido Adiposo. También pueden aparecer como producto de la
hidrólisis de TG endógenos en determinadas células.
- Primero, los AG se acilan directamente con CoASH en toda célula. Esta
reacción catalizada por Acil-CoA sintetasa hidroliza una molécula de ATP en
AMP + PPi. El ester tiólico que se forma es de muy elevado contenido
energético, y precisa la fosfatación de dos P del ATP. Además, de la energía de
separación del pirofosfato (PPi) en 2 Pi.
- La enzima Acil CoA sintetasa es una enzima asociada a membrana, con
doble localización en las células: Tanto en la membrana del Retículo
Endoplasmático (para Biosíntesis de Lípidos), como en la membrana externa
de la mitocondria (para la β-Ox).
- Esta última localización es esencial, pues la β-Ox es un proceso que
tiene lugar en el interior mitocondrial. En concreto, esta enzima cataliza de un
mismo paso la acilación con CoASH del AG, y facilita su transporte al espacio
Intermembrana Mitocondrial.
- De hecho, ambas membranas son impermeables a Acil-CoA, y su
transporte tiene lugar mediante la acción de Carnitina, una pequeña molécula
orgánica. Carnitina puede acilar el AG a través de su grupo Hidroxilo de C 3’.

!144


!145










- La enzima I cataliza la transferencia del grupo Acilo de la CoA a la
Carnitina. Resulta CoASH libre, y Acil-Carnitina, capaz de atravesar la
membrana interna mitocondrial. (esta E se encuentra en el lado externo de la
membrana interna?)
- En el interior mitocondrial, la enzima II transfiere el grupo Acilo de la
Carnitina al CoASH libre del interior mitocondrial.
- Acil-CoA en el interior mitocondrial se integra en el ciclo de la β-Ox de
los AG.

β α
CICLO TCA

!146






- La primera reacción, catalizada por Acil-CoA dh, oxida el AG por
deshidrogenación del enlace sencillo entre los C α y β a doble enlace. Al igual
que en el ciclo TCA, estas reacciones están siempre catalizadas por
deshidrogenasas FAD-dep. A diferencia del resto de las enzimas de la β-Ox
(libres en la matriz mitocondrial) esta enzima se encuentra anclada a la cara
interna de la membrana mitocondrial interna, de forma que recibe directamente
los Acil-CoA que penetran gracias a Carnitina.
- La segunda reacción, catalizada por Hidratasa, adiciona al doble enlace
los elementos del agua, oxidando el C b del AG, y formando el consecuente D
β-OH-Acil-CoA (de ahí el nombre β-Ox). Es, al igual que Aconitasa, una enzima
muy estereoespecífica, pues adiciona siempre el agua al isómero trans,
obteniéndose siempre el isómero óptico D.
- El grupo β-Alcohol es transformado, por la enzima β-OH-Acil-CoA
(deshidrogenasa NAD-dep) en grupo Ceto, de forma que el producto es el β-
Ceto-Acil-CoA correspondiente. NADH y FADH2 formados ceden electrones a
la cadena de transporte de electrones de la respiración.
- Tiolasa produce un ataque nucleófilo del grupo SH de un nuevo CoASH
libre, al grupo Ceto deficiente de electrones, con la consiguiente escisión del
AG en este punto, y la unión de CoASH en el nuevo AG formado por dos C
menos. Obtenemos así un Acetil-CoA del extremo cortado de Acil-CoA inicial.
- El Acil-CoA resultante sufre a su vez una nueva ronda de β-Ox,
perdiendo de nuevo dos carbonos, y así sucesivamente. Por otro lado, todos
los Acetil-CoA formados pueden integrarse en el ciclo TCA.
- Esta oxidación es fuertemente reentable; por ejemplo, una molécula de
Ácido Palmítico (16 C) produce en la mitocondria 129 ATP, mientras una
glucosa produce 38 ATP.

10 Degradación de los Fosfolípidos:
- Las encimas implicadas son, de nuevo, Esterasas, que hidrolizan los
enlaces Ester. Se trata de las Fosfolipasas. En un fosfolípido encontramos
cuatro enlaces ester, y existe una fosfolipasa específica para cada uno.
- La enzima Fosfolipasa A1 hidroliza el ester AG en posición 1’ formándose
un 1-Lisofosfolipido.
- La enzima Fosfolipasa A2 hidroliza el ester AG en posición 2’ formándose
un 2-Lisofosfolípido.
- La enzima Fosfolipasa C hidroliza el ester Fosfato en posición 3’
formándose un Diglicérido.
- La enzima Fosfolipasa D hidroliza el ester Fosfato – Base Nitrogenada
fosmandose un Ácido Fosfatidílico (Fosfatidato).
- La acción conjunta de las cuatro enzimas produce Glicerol, 2 AG, un Pi y
una Base Nitrogenada.
- El veneno de Cobra y otros ofidios es similar a Fosfolipasa A2. Sus altos
niveles en sangre producen ataques a Fosfolípidos de membrana de los

!147
Eritrocitos, originando 2-Lisofosfolípidos, con efecto detergente: se produce
micelarización de los Fosfolípidos y de las membranas, y consecuentemente
Hemolisis Aguda. Al ingerir el veneno, su efecto no llega a afectar a las células
pues es digerido previamente, pudiendo incluso servir como alimento.

C/ METABOLISMO DE BIOSÍNTESIS DE LÍPIDOS:
1 Biosíntesis de Cuerpos Cetónicos:
- Esta síntesis sucede en mitocondrias hepáticas, y sus productos, los
Cuerpos Cetónicos, son Acetoacetato y β-Hidroxibutirato.
- Una vez biosintetizados, los Cuerpos Cetónicos son cedidos de por el
hígado a la circulación sanguínea, y pueden así ser tomados por numerosos
tejidos como fuente de energía.
- Podríamos resumir el proceso con el siguiente esquema:

HÍGADO (Mitocondria)
Acetil-CoA Acetoacetil-CoA

β-OH-Butirato Acetoacetato





β-OH-Butirato Acetoacetato

Acetil-CoA Acetoacetil-CoA

SANGRE

TCA

!148










!149

(HMG-CoA)

Síntesis de
Fosfolípidos
























- En un primer paso, tiene lugar la condensación de dos moléculas de
Acetil-CoA en una reacción reversible catalizada por Tiolasa. Son, de hecho,
las mismas enzima y reacción del último paso de la β-oxidación, pero sucede
en sentido contrario.
- A continuación se une una tercera molécula de Acetil-CoA, en una
reacción catalizada por β-Hidroxi-β-metil-Glutaril-CoA sintasa. Se produce β-
Hidroxi-β-metil-Glutaril-CoA, o HMG-CoA. Se trata de un ácido dicarboxílico de
5 C, derivado de HMG, y similar al Ácido Glutámico, α-Ceto-Glutarato.
- Hasta este punto, las reacciones son exactamente iguales a las que
ocurren durante la biosíntesis del Colesterol, y los productos son los mismos.
La diferencia radica en que la síntesis de Colesterol termina en el Citosol.
- Una β-Hidroxi-β-metil-Glutaril-CoA liasa escinde del HMG-CoA una
molécula de Acetil-CoA, dando lugar al primer Cuerpo Cetónico: el
Acetoacetato.
- La enzima β-Hidroxi-Butiril-CoA dh, reduce reversiblemente el
Acetoacetato a β-Hidroxibutirato, el segundo Cuerpo Cetónico. Esta enzima es
exclusiva de las mitocondrias hepáticas, pero también se encuentra en el
Citosol de casi todas las células, catalizando el paso contrario.

!150
- La proporción total de uno y otro cuerpo cetónico dependerá
fundamentalmente de la proporción de NAD+/NADH que exista en la
mitocondria, de forma que a más NAD+ se cederá más Acetoacetato a la
sangre, y viceversa.
- Los dos tejidos que utilizan la mayor parte de estos compuestos como
energía, captándolo de la sangre, son los músculos y el sistema nervioso. Para
poder ser utilizado, el Acetoacetato debe ser transformado en Acetoacetil-CoA.
Este proceso se acopla al paso de Succinil-CoA a Succinato, de forma que la
CoA es transferida por β-Cetoácido transferasa.
- Finalmente, Tiolasa cataliza su reacción, en el mismo sentido de la β-
oxidación, formándose dos Acetil-CoA que pueden incorporarse al ciclo TCA.
- La utilización de Cuerpos Cetónicos por el organismo como fuente de
energía depende de las fluctuaciones de los niveles de Glucosa en la sangre.
Asimismo, después de una comida siempre se utiliza la Glucosa, pero cuando
esta escasea comienza a ser exclusiva para el tejido nervioso por sus
especiales requerimientos. El tejido adiposo comienza entonces a liberar AG,
de los cuales una buena parte es utilizada por el hígado para la síntesis de
cuerpos cetónicos, de tal manera que estos pueden constituir una importante
fuente de energía para los músculos.
- Tanto durante un ayuno prolongado como para las personas con
Diabetes, la Glucosa es muy escasa en la sangre, y el cerebro puede
adaptarse a utilizar cuerpos cetónicos como fuente de energía, aunque este
órgano es incapaz de utilizar AG pues no pueden atravesar la barrera
hematoencefálica.
- De hecho en ayunos prolongados, diabéticos y bebés (leche materna),
se produce la descarboxilación espontánea en la sangre de Acetato a Acetona
(relacionada con el olor del aliento). La acidez producida puede conducir a una
disminución del pH sanguíneo, y por lo tanto a diversas enfermedades
patológicas, como la disminución de la afinidad de Hb por O2.

CH3-CO-CH2-COO- CH3-CO-CH3

2 Biosíntesis de Ácidos Grasos:
- La biosíntesis en Vertebrados sucede en el hígado, de tal manera que
todo AG de un animal procede del hígado o de la dieta. Más concretamente,
sucede en el Citosol de todas las células que los sintetizan.
- Como rutina diaria, después de las comidas se produce la oxidación de
la Glucosa para producción de energía, la reposición de las reservas de
Glucógeno, y la transformación del exceso de glucosa en ácidos grasos, que
son acumulados en forma de Triglicéridos en las Grasas del tejido Adiposo.
- Las reservas de Glucógeno sirven aproximadamente para un día de
vida. Al escasear la Glucosa, los Ácidos grasos se transforman en la principal
fuente de energía del organismo, pudiendo servir durante todo un mes. De
hecho, durante la noche, la mayor parte del oxígeno que respiramos es
utilizado para quemar ácidos grasos procedentes del tejido Adiposo.
- Los AG como reserva masiva de energía tiene de hecho sus beneficios.
El principal es tal vez su inferior densidad y por lo tanto peso, que el del
Glucógeno: tanto es así que si acumulásemos en Glucógeno lo que
acumulamos en Lípidos, pesaríamos toneladas. También por la gran cantidad

!151
de energía que puede contener una sola molécula (balance de la degradación
de AG).
- Esta biosíntesis sucede en el Citoplasma celular, y utiliza como precurso
la Acetil-CoA resultante de la degradación de la Glucosa. Ocurre a expensas de
dos enzimas fundamentales:
• Acetil-CoA carboxilasa + Coenzima Biotina
• Ácido Graso sintasa
- La primera, Acetil-CoA carboxilasa, cataliza la transformación de Acetil-
CoA en Malonil-CoA. Es una enzima Carboxilasa típica, que utiliza Biotina
como coenzima. El ácido Malónico es un ácido dicarboxílico de tres carbonos.
Este paso supone la activación de Acetil-CoA para que entre en esta vía
biosintética.

CH3-CO-SCoA + CO2 + ATP -OOC-CH2-CO-SCoA + ADP +
Pi

- Se forma un enlace donde queda retenida gran parte de la energía de
hidrólisis del ATP, de forma que esa energía puede ser utilizada para la
biosíntesis durante la ruptura del enlace.
- En Procariontes, esta enzima está constituída por tres proteínas
distintas: una pequeña une la Biotina, la segunda cataliza la formación de
Carboxibiotina, y la tercera, una Transcarboxilasa, transfiere el carboxilo de
Biotina a Acetil-CoA.
- En Eucariontes, se trata de un Homodímero, con PM = 230.000 Da en
cada subunidad. Es inactiva en su forma dimérica, sin embargo, en presencia
de Citrato, polimeriza volviéndose activa. El Polímero puede alcanzar unos PM
= 6.000.000 Da.
- El regulador primario de esta enzima es sin embargo la propia Acetil-
CoA: cuando está presente en altos niveles intracelulares induce su
despolimerización en inhibición.
- A continuación actua la enzima AG sintasa: se trata de un importante
complejo multienzimático típico, que cumple siete funciones distintas. En
procariontes está constituída por siete proteínas distintas, mientras en los
Animales se trata de nuevo de un Homodímero, con PM = 240.000 Da en cada
subunidad. De hecho, cada subunidad contiene las siete actividades
enzimáticas necesarias para la síntesis.
- Su mecanismo de acción para la síntesis de AG es un complejo proceso
mediado exclusivamente por este complejo multienzimático. Presenta dos
grupos tiólicos de especial importancia:
• Cys-SH. Para Acetil-CoA.
• Ser-(Resto de Fosfopanteteina). Para Malonil-CoA.

!152



Fosfopanteteína Cisteamina

- El Resto de Fosfopanteteína incluye el ácido Pantotenoico, y tiene una
estructura similar a la de la CoA. Esta unido a un residuo Ser de una proteína
ACP (Acil Carried Protein), transportadora de Acilos. Es esencial para la
biosíntesis de Ácidos Grasos tanto Eucariontes como procarionates. Además,
cada subunidad contiene una molécula de ATP.
- Para comenzar, AG sintasa Transtioesterifica el Acetilo de una Acetil-
CoA al extremo de su grupo Fosfopanteteína, liberando una molécula de
CoASH, y lo transfiere a su grupo Cys-SH.
- A continuación, AG sintasa esterifica el Malonilo de una Malonil-CoA en
el extremo de su grupo Fosfopanteteína, liberando de nuevo CoASH.

AG sintasa



Cys

CoASH
S-CO-CH2-COO-

CoASH
S-CO-CH3

β-Cetoácido
CO-CH2-CO-CH3

- A continuación se produce la condensación de Acetilo y Malonilo, y
consecuentemente la pérdida el CO2 que había sido incorporado por Acetil-CoA
carboxilasa, creciendo la cadena en 2C. El producto restante es una molécula
de β-Ceto-ácido, que queda unida al SH del resto de Fosfopanteteína. La
descarboxilación del Malonilo proporciona la energía necesaria para la
formación del nuevo enlace covalente (que a su vez proviene de un ATP).
- Entonces se produce la reducción del grupo Ceto del β-Ceto-ácido. En
primer lugar es reducido a CHOH a expensas de dos NADPH que va a ser
oxidado. A continuación se forma un doble enlace liberádose una molécula de
agua, y finalmente el doble enlace se reduce a enlace sencillo a expensas de

!153
otros dos NADPH. Todo ello sucede estando el grupo unido al resto de
Fosfopanteteína.
- Finalmente, este grupo va a ser transferido a Cys-SH de la enzima.

S-CO-CH2-CO-CH3
2 NADPH
2 NADP+

S-CO-CH2-CHOH-CH3

H2O

S-CO-CH CH-CH3
2 NADPH
2 NADP+

Cys-S-CO-CH2-CH2-CH3
Butiril-Enzima

- Este proceso biosintético necesita la captación de electrones, que son
cedidos por NADPH. Aquí la ruta de las Pentosas fosfato adquiere una gran
importancia, pues es capaz de proporcionar este NADPH. Por ello podemos
considerar como los dos precursores de AG a Acetato (Acetil-CoA) y NADPH.
- En esta primera ronda hemos obtenido una molécula de ácido Butírico
(AG de 4C) unido a la enzima. Sin embargo, esta cadena puede seguir
creciendo por consecutivas repeticiones del conjunto de reacciones, que
comenzaría por la unión de un nuevo resto de Malonil-CoA en el resto de
Fosfopanteteína libre. Tras su condensación y reducción se obtendrá un AG de
6C, y así sucesivamente. El AG crece de 2C en 2C, lo que explica que los AG
tengan número par de carbonos.
- El producto final de la síntesis de AG en Animales es Ácido Palmitito, y
sin embargo, en Procariontes es Palmitoil-CoA. En la superficie de la enzima, el
AG puede alargarse como máximo en 16C, y finalmente es liberado de ella por
hidrólisis, por accíon de una actividad enzimática especial.
- Existen, sin embargo, en las células abundantes AG distintos, como por
ejemplo Esteárico (18:0) u Oleico (18:1,Δ9). Este último destaca entre los
mono-insaturados.

!154
- Van a existir en las células mecanismos de modificación de los AG
endógenos (Palmítico), tanto de elongación como de desaturación.
- En el caso de la elongación, sucede en Mitocóndrias y Retículo
Endoplásmico. El AG va a ser prolongado mediante sucesivas adiciones de
Malonil-CoA (recordemos que es la forma activa de Acetil-CoA en síntesis de
AG), y su consiguiente descarboxilación por un proceso muy similar al de AG
sintasa.
- Para la desaturación entran en acción las enzimas Acil-CoA
desaturasas, asociadas a la membrana del Retículo Endoplásmico, que median
una reacción de oxidación. Necesita un mecanismo de transporte de electrones
que se encuentra de hecho asociado también a la membrana del Retículo
Endoplásmico.
- Los animales somos incapaces de introducir desaturaciones por debajo
del carbono 9’ desde el 16’, y carecemos de AG endógenos ω3 y ω6,
importantes como vitaminas y para la membrana celular, y exclusivos de
vegetales.
- La biosíntesis de AG, a pesar de poder acumular toda la Glucosa en
exceso, esta sin embargo sometido a una regulación especial, centrada
específicamente en la enzima Acetil-CoA carboxilasa, formadora del esencial
Malonil-CoA.
- Esta enzima es activada por Citrato, y cuando sus niveles son bajos no
hay síntesis de AG. En niveles altos, indica una fortísima actividad del ciclo
TCA y de la Gluconeogénesis, por lo tanto altos niveles de Glucosa, de aporte
de Acetil-CoA y de OA-, activándose la síntesis de AG.
- Es en cambio Inhibida por Acil-CoA, producto final de esta Biosíntesis:
se trata de un sistema de Retroinhibición.

3 Vía del Citrato:
- Como vimos los precursores necesarios para esta Biosíntesis son Acetil-
CoA, que cede átomos de carbono, y NADPH, que cede los electrones
necesarios para la reducción. Sin embargo, la membrana interna mitocondrial
es impermeable al Acetil-CoA formado a partir del Piruvato en el interior
mitocondrial, y la síntesis ocurre en el Citosol.
- Para la biosíntesis de AG, Acetil-CoA debe salir de la mitocondria por
una vía indirecta: la Vía del Citrato.
- Se trata de un sistema de transporte específico para Ácidos
Tricarboxílicos que permite el transporte de Acetil-CoA sin gasto neto de
Citrato.



Int. Mitocondria Citosol

Oxalacetato Acetil-CoA Piruvato Acetil-CoA

Mbr. CO2
Int. Malato
Mito-
con- Oxalacetato
drial !155
Citrato Citrato












- La primera reacción, que sucede en el interior mitocondrial, es propia del
ciclo TCA. Condensa en Citrato Acetil-CoA + OA-. El Citrato puede atravesar la
membrana mitocondrial y salir al citosol.
- En el Citosol tiene lugar la reacción catalizada por Citrato liasa, que
escinde de nuevo el Citrato en OA- y Acetil-CoA, de tal manera que esta última
puede incorporarse a las rutas de síntesis de AG. Esta reacción debe hidrolizar
una molécula de ATP en ADP + Pi, para formar el enlace de elevado contenido
energético entre CoA-SH y Acetato.
- El Oxalacetato restante va a transformarse primero en Malato, y
finalmente en Piruvato por acción respectiva de las enzimas Malato dh, que
oxida un NADH para reducir OA-, y Malato dh NADP+ dep, que reduce un
NADP+ para descarboxilación oxidativa de Malato.
- En NADPH procede generalmente de la Ruta de las Pentosas, pero
puede de hecho proceder también de la Enzima Málica (Malato dh NADP+ dep)
gracias a esta vía. De hecho, los NADPH con electrones cedidos a la síntesis
de AG suelen provenir de la oxidación del Malato a Piruvato, que provienen a
su vez de un NADH:
-OOC-CO-CH2-COO-

OA- NADH + H+

NAD+
-OOC-CHOH-CH2-COO-

Malato NADP+
CO2
NADPH + H+
-OOC-CO-CH3

Piruvato

- A su vez, el NADH del Citosol proviene de la Glicólisis, es decir, que
dichos electrones provienen de la Glucosa de la dieta. Podemos deducir
!156
entonces que, aunque indirectamente, los dos precursores para la síntesis de
AG provienen en realidad de la Glucosa Vía Glucólisis. Encontramos aquí una
estrecha relación entre Metabolismo de Hidratos de Carbono y Metabolismo de
Lípidos.

4 La Biosíntesis de Triglicéridos:
- Los precursores, AG y Glicerol, provienen de la Glucosa como
acabamos de ver (Glicerol proviene de DHAP). Esta biosíntesis sucede
también en el Citosol de las células.
- Algunas enzimas implicadas están asociadas a la Membrana del
Retículo Endoplásmico.
- Glicerol va a sufrir tres acilaciones sucesivas (en cada grupo OH por una
unión ester) formándose el Triglicérido.
- En un primer paso, DHAP es transformado por reducción en Glicerol-3-P,
en una reacción reversible, y a expensas de un NADH, por acción de
Glicerol-3-P dh.
- A continuación Glicerol-3-P sufre la primera acilación en su C 1’, a
expensas de un Acil-CoA, gracias a Glicerofosfato acil-transferasa, liberándose
CoASH. El producto es un Lisofosfatidato. Acto seguido, Lisofosfatidato acil-
transferasa introduce en 2’ un segundo AG transportado en forma de Acil-CoA,
formándose Fosfatidato.
- Antes de la tercera acilación, debe tener lugar la hidrólisis del P de
posición 3’, catalizada por Fosfatidato fosfohidrolasa. El resultado es un
Diglicérido, precursor tanto de TG como de Fosfolípidos (PL).
- De esta manera, por último, Diglicerido acil-transferasa cataliza la
esterificación del tercer AG de Acil-CoA, formándose así finalemente el TG.


CH2OH-CO-CH2OPO32-
NADH + H+ NAD+
CH2OH-CHOH-CH2OPO32-

Acil-CoA CoASH
R1-COO-CH2-CHOH-CH2OPO32-
Acil-CoA CoASH

!157
 R1-COO-CH2-CH2-CH2OPO32-
COO
R2
H2O Pi
R1-COO-CH2-CH2-CH2OH
COO
R2
Acil-CoA CoASH
R1-COO-CH2-CH2-CH2-OOC-R3
COO
R2

- Las dos primeras enzimas Acil-transferasas introducen específicamente
los AG en la posición que les corresponde. Glicerofosfato at selecciona además
específicamente AG saturados, especialmente ácido Palmítico. Lisofosfatidato
at suele introducir AG insaturados.
- De tal manera que prácticamente todos los TG y PL endógenos de las
células animalespresentan sus posiciones 1’ y 2’ esterificadas respectivamente
con un AG saturado y un AG insaturado. Sin embargo se encuentran
excepciones como los PL de las glándulas mamarias, o los Fosfatidil Colina del
material de recubrimiento alveolar, fundamental para los intercambios
gaseosos: presenta Ácido Palmítico tanto en 1’ como en 2’.

5 Biosíntesis de Fosfolípidos a partir de Diglicéridos:
- Además de DG, esta síntesis (cuyos procesos son poco conocidos)
necesita utilizar Bases Nitrogenadas como precursores.
- En primer lugar, la base es fosforilada a expensas de ATP. A contiuación
tiene lugar la activación de la Base por CTP, de forma que su fosfato puede
esterificarse en el carbono 4’ del DG, formándose finalmente el PL.
- Cabe destacar las similitudes entre Fosfatidil Colina, Serina, y
Etanolamina, tanto que de hecho PC y PE sólo se distinguen en tres grupos
metilo, y PS y PE por un grupo carboxilo. Existen multitud de interrelaciones
metabólicas entre estos tres PL mayoritarios.
- PE puede transformarse en PC por metilación directa. S-adenosil-
metionina (Metionina activada) es el donador universal de grupos metilo.
- PE puede transformarse también en PS, por un intercambio de la Base
completa, mientras PS puede pasar a PE por simple descarboxilación.

6 Biosíntesis de Colesterol a partir de HMG-CoA:
- Esta síntesis tiene también lugar en el Citosol celular. Sus precursores
son Acetil-CoA y electrones provenientes del NADPH.
- De hecho, en las primeras etapas de su formación, las reacciones que
tienen lugar y enzimas implicadas son idénticas a las de la síntesis de Cuerpos
Cetónicos: esto es así hasta la formación de HMG-CoA (β-Hidroxi-β-metil-
Glutaril-CoA).
- En este caso, HMG-CoA va a ser reducido por HMG reductasa,
formandose Mevalonato, a expensas de NADPH y liberandose CoASH. Este
encima es de las más importantes de esta ruta, y está sometida a una fuerte
regulación.

!158

HMG-CoA

CoAS-CO-CH2-COH-CH2-COO-
CH3
NADPH + H+ CoASH + NADP+

HOH2C-CH2-COH-CH2-COO-
CH3

Mevalonato


- A continuación, el ácido Mevalónico va a ser fosforilado a la forma de
PPi, a expensas de 2 ATP. Finalmente va a ser descarboxilado dando lugar al
Isoprenil PP, precursor directo de todos los esteroides.


Mevalonato
HOH2C-CH2-COH-CH2-COO-

CH3
2 ATP 2 ADP
Mevalonil PP
O63-P2-O-CH2-CH2-COH-CH2-COO-
CH3
CO2
Isoprenil PP
O63-P2-O-CH2-CH2-C CH2
CH3


- A continuación tiene lugar la condensación de varias unidades de
Isoprenil PP, y toda una serie de reacciones Metabólicas que desembocan en
la formación del primer y fundamental esteroide: Lanosterol. A partir de este se
pueden obtener todos los otros esteroides. Por ejemplo, para la formación de
Colesterol deben sucederse otras 20 reacciones más.

!159


Principales pasos de
Biosíntesis del Colesterol y
otros Esteroides










!160




















7 Regulación de HMG reductasa:
- La regulación de esta enzima tiene de Nuevo lugar a dos niveles
distintos. Para empezar es regulada por su cantidad en sangre. De hecho,
cuando la dieta es rica en colesterol, la síntesis de esta enzima queda
bloqueada.
- Por otro lado la enzima presente en células en un momento dado puede
regular su actividad por dos vías distintas:
• Niveles intracelulares de Mevalonato, compuesto que inhibe a la enzima.
• Regulación por modificación covalente de HMG reductasa inducida por
hormonas.
- En este último caso, la regulación es análoga a la de muchas otras
encimas, y se produce por fosforilación/desfosforilación. HMG reductasa kinasa
puede fosforilar la enzima a expensas de ATP, volviéndola inactiva. Las
Fosfoproteínas fosfatasas desfosforilan por hidrólisis (con consumo de H2O) a
la enzima devolviéndola a su forma activa.
- HMG reductasa kinasa es a su vez fosforilada por otras kinasas; entre
ellas encontramos las kinasas cAMP dependientes. Además las Fosfoproteínas
fosfatasas son también las mismas que actuan en el metabolismo del
Glucógeno: La fosforilación de enzimas suele inhibir los procesos Biosintéticos
y favorecer los Degradativos.










!161






















IV/ Metabolismo de los Compuestos Nitrogenados:

A/ METABOLISMO DE DEGRADACIÓN DE AMINOÁCIDOS:

1 Generalidades sobre el metabolismo general de los Aminoácidos:
- El conjunto de aminoácidos del organismo reciben el nombre de aa pool,
y pueden tener dos procedencias distintas: de la dieta, o endógenos (de
proteínas endógenas).

ESQUEMA GENERAL
Tubo Aparato
digestivo excretor

Proteinas


Aminoácidos

Proteínas
!162

aa pool

Urea

Esqueleto NH4+

Purinas
Pirimidinas ADN
Acetil-CoA; Acetoacetato;
Porfirinas
Piruvato; α-Cetoglutarato;
Succinil-CoA; Fumarato; OA-


Propionil-CoA



- La principal misión de los aa en nuestro organismo es la de servir como
precursores para la biosíntesis de Proteínas. Además, son la principal fuente
de Nitrógeno de la mayoría de organismos.
- Sin embargo, a diferencia de las grasas, la concentración de proteína
permanece constante en el organismo, por lo que la mayor parte de los aa de
la dieta deben ser metabolizados y utilizados como precursores para otras
síntesis, o excretados. Como rutina diaria, una persona adulta suele recambiar
(tanto degradar como sintetizar) unos 400 g de proteína.
- De tal manera, los aminoácidos de la dieta sirven tanto como
precursores para compuestos nitrogenados (Naranja) gracias a los grupos
amino, cómo como intermediarios del metabolismo central (azul) gracias al
esqueleto carbonado.
- El nitrógeno en exceso tiende a formar amoníaco (NH4+); un compuesto
altamente tóxico para las células que será excretado.

2 Digestión de Proteínas de la dieta:
- La primera etapa tiene lugar en el estómago. Determinadas células
liberan Pepsinógeno; una proteasa en forma inactiva o Zimógeno. Esta es
activada en el estómago por una modificación covalente facilitada por hidrólisis,
formándose Pepsina, su forma activa.
- La pepsina ataca a las proteínas ingeridas en la dieta, rompiendo ciertos
enlaces peptídicos (hidrólisis parcial), transformándola en peptidos de tamaños
variados y algunos aa libres.
- La segunda etapa comienza cuando el alimento alcanza el intestino
delgado. Ahí se produce la hidrólisis completa de los resto de proteína en sus
aminoácidos constituyentes.
- Esta hidrólisis es mediada por una Batería de proteasas producidas por
el Páncreas; Tripsinógeno/Tripsina, Quimiotripsinógeno/Quimiotripsina,
Proteoelastasa/Elastasa y Procarboxipeptidasa/Carboxipeptidasa, además de
otras proteínas dedicadas a la digestión de otros compuestos.

!163
- Estas proteínas son secretadas en forma de Zimógenos (Ver Parte I; IV/
A/3), pues de nos ser así digerirían las células del tejido pancreático. Cuando
sucede, se puede producir panceatitis aguda, acompañada de hemorragias y
fuertes dolores. En sólo 12 horas el páncreas es digerido a líquido. Además las
proteínas hidrolizadas pueden pasar a la sangre y extenderse por múltiples
tejidos.

3 Desaminación de los aminoácidos:
- Como hemos visto, la mayor parte de estos aa van a ser catabolizados
en rutas oxidativas. La degradación tiene lugar en dos etapas fundamentales:
1. aa es desaminado, produciendo Amoniaco y Esqueleto Carbonado. La
mayor parte del Amoniaco, tóxico, será excretado. Una parte será
utilizada en rutas de Biosíntesis de Compuestos nitrogenados.
2. El Esqueleto Carbonado es metabolizado de tal manera que puede
incorporarse a las rutas centrales del metabolismo intermediario, siendo
finalmente transformado en CO2, H2O y energía celular, o sirviendo
como precursor para formar Glucosa …

FORMAS MÁS ESTABLES DEL AMONIACO

Gaseoso NH3

Acuoso NH3 + H2O NH4+ + OH-

- Existen varias reacciones de desaminación. Entre ellas, la primera en
todos los aa, salvo Lys, Arg, y Tre, es una Transaminación facilitada por una
enzima transaminasa (aminotransferasa) que utiliza como coenzima Piridoxal-
P. Se produce, en concreto, la transferencia del grupo amino del aa a un α-
cetoácido resultando el α-cetoácido del aa y el aa del α-cetoácido. Se trata de
una reacción perfectamente reversible (K = 1).

- Piridoxal-fosfato es un
compuesto fundamental en
transaminasas, y tiene un
importante papel como coenzima
en el metabolismo, destacable en
!164
el de aminoácidos. Además,
forma junto con Piridoxina y
Piridoxamina la Vitamina B6.
- Las transaminasas presentan un centro activo con dos localidades
claramente diferenciadas para el aa y el α-cetoácido. La mayor parte de este
tipo de enzimas son de hecho específicas para el par α-Cetoglutarato/
Glutamato.
- De hecho, la mayor parte de lo aa se transaminan con α-Cetoglutarato,
de manera que la mayor parte de los grupos amino de los aa en exceso van a
aparecer como constituyente grupo amino de Glu.
-OOC-CH-NH3+ + -OOC-CH2-CH2-CO-COO-
R 1 α-Cetoglutarato

COO-
-OOC-CO-R1 + -OOC-CH2-CH2- CH-NH3+
Ácido Glutámico

- La consecuencia de esto es que todo el exceso de aa de la dieta se van
a traducir en la aparición de esa misma cantidad de α-cetoácidos (esqueletos
carbonados de los aa) y de Glutamato. Este aa posee una importante función
aparte de ser parte constitutiva de proteínas: Recoge el exceso de Nitrógeno
Amínico de los aminoácidos, transportándolo hasta una segunda reacción de
desaminación de manera a introducirlo en el Ciclo de la Urea.
- La segunda reacción de desaminación es, de hecho, la desaminación
oxidativa del Glutamato. Esta reacción, catalizada por Glutamato dh, es
perfectamente reversible (K = 1). Reduce NAD(P)+. El sentido de la reacción
depende fundamentalmente de las concentraciones de reactivos y productos.
Sus productos son Amoniaco y α-Cetoglutarato. En Eucariontes, esta enzima
está presente en Mitocondrias y en el Citoplasma.

COO-
-OOC-CH2-CH2-CH-NH3+

N A D ( P ) + NAD(P)H
+
+H
H2O

PAPEL CENTRAL DEL GLUTAMATO EN EL METABOLISMO DE

COMPUESTOS NITROGENADOS:

aa α-Cetoglutarato

Transaminasa
NH4+
Glutamato dh

α-Cetoácido Gln CICLO DE LA UREA
!165
 -OOC-CH2-CH2-CO-COO- + NH4+









Glu

- Entre otras funciones, Glu sirve como precursor en la síntesis de
Glutamina (Glu), por unión de Amoniaco cuyo enlace de alta energía requiere
la hidólisis de un ATP, gracias a la enzima Glutamina sintetasa. La reacción
inversa es catalizada por otra enzima, la Glutaminasa, que cataliza la hidrólisis
del enlace amida.

COO- H2O + ATP ADP + Pi COO-
-OOC-CH2-CH2-CH-NH3+ + NH4+ NH2-CO-CH2-CH2-CH-NH3+
H2O

- En los análisis de sangre, los niveles de transaminasas suelen ser
tenidos en cuenta. En altos niveles puede provocar degeneración e inflamación
hepáticas. Se miden en concreto las dos transaminasas más abundantes, GPT
(Glutamato-Piruvato transaminasa) y GOT (Glutamato-OA- transaminasa), que
transaminan, con el par α-Cetoglutarato/Glutamato, la Ala formando Piruvato y
el Asp formando OA- respectivamente.
- Cada aminoácido, después de desaminarse, tiene una ruta degradativa
particular de forma que su esqueleto carbonado es transformado en un
compuesto que puede incorporarse al metabolismo intermediario central, para
formar energía o como precursor.

4 Eliminación del Amoniaco en exceso consumido por los organismos:
- En función de los organismos, existen tres sistemas de eliminación de
este tóxico compuesto. Los más complejos están relacionados con
adaptaciones a ambientes terrestres, donde la pérdida de agua debe ser
minimizada.
• Seres Amoniotélicos: Se trata fundamentalmente del sistema utilizado
por los microorganismos (seres constituídos por una o pocas células) y
por aquellos seres que habitan en entorno acuoso. Eliminan el
amoniaco como directamente al medio.

!166
 • Seres Ureotélicos: Muchos vertebrados. El amoniaco se transforma en
Urea.
• Seres Uricotélicos: Aves y algunos Reptiles. El amoniaco se transforma
en ácido Úrico.
- El mecanismo mejor estudiado es el que se corresponde con el
humano: Urotélico, por lo que nos centraremos en la biosíntesis de Urea.
- La síntesis de Urea tiene lugar en el hígado. De ahí, es cedida a la
sangre de manera que finalmente es recogida por los riñones y eliminada en la
orina. Por lo tanto, todo el exceso de N amínico que debe ser eliminado debe
para comenzar llegar hasta el hígado.
- Salvo el músculo, la mayor parte de nuestros tejidos transaminan el
exceso de los aa a Glu, y este va a ser transformado en Gln a expensas de
otra molécula de amoniaco gracias a Glutamina sintetasa. La Glutamina es el
aa con capacidad de transporte del NH4+ desde la mayor parte de los tejidos
hasta el hígado, a través de la sangre.
- Una vez en el hígado, la acción sucesiva de Glutaminasa y Glutamato
dh origina 2 NH4+ y α-Cetoglutarato.
- En el caso del músculo, existe una gran cantidad de Piruvato producido
por la oxidación de glucosa en la Glicólisis. En este tejido, los aa suelen
transaminarse con el par Piruvato/Ala. Al igual que Gln, Ala es un aminoácido
neutro capaz de transportar hasta el hígado el N amínico.

- Una vez el el hígado, Ala se transamina con el α-Cetoglutarato
formándose de nuevo Glu y piruvato. Finalmente, por acción de Glutamato dh,
el amoniaco termina encontrándose también libre en el hígado, donde va a ser
metabolizado para que pueda ser excretado posteriormente.
- El NH4+ libre del hígado será metabolizado en el Ciclo de la Urea: este
ciclo fue también descubierto por Krebs, antes que el ciclo TCA.

5 El Ciclo de la Urea:
!167
- Este ciclo comienza en la mitocondria hepática, y termina en el Citosol.
La Urea formada puede ser transportada hasta los riñones a través de la
sangre.
- En primer lugar actúa bicarbonato (CO2 + OH- HCO3-), que va a
quedar fosforilado a expensas del Pi de un ATP y aminado a
expensas del Amoniaco libre del Hígado. Se hidroliza otro ATP que aporta la
energía necesaria para estos energéticos enlaces. La enzima intramitocondrial
implicada en esta relación es Carbamoil-fosfato sintetasa I.
- A continuación, Ornitina transcarbamilasa transfiere el resto Carbamoil-
P al α-aa no proteico Ornitina (muy similas a Lys), formándose así L-Citrulina.
Citrulina es transportada, con el Amoniaco que antes se encontraba libre,
hasta el citosol de la célula hepática.
- En el Citosol, Citrulinava a condensarse con un Asp a traves de su
grupo α-amino, por acción de Arginosuccinato sintetasa, produciéndose el
Arginosuccinato, a expensas de un ATP el cual se hidroliza en AMP + PPi, y
luego PPi en 2 Pi.
- Arginosuccinato es hidrolizado por acción de Arginosuccinasa,
produciendo Fumarato (esqueleto carbonado de Asp) por un lado, y Arginina
(Arg). Este último aa proteico contiene de hecho 4 grupos Amina: uno es su
grupo α-amino, un segundo facilita la unión del Grupo Guanidio (CN3H5+) con
el esqueleto carbonado, otro proviene del amoniaco libre, y el tercero
procedente de Asp; estos dos últimos van a ser excretados.
- El Fumarato formado va a ser transformado por las reacciones propias
del TCA en OA-, de forma que este se transamina con Glu para dar Asp de
nuevo. Por lo tanto, esta segunda amina procede en realidad también del
Glutamato, aunque no por la desaminación de Glutamato dh.
- La Urea aparece en la última reacción de Hidrólisis del Carbono Arg
catalizada por Arginasa. Se produce la hidrólisis del grupo Guanidio entre el
nitrógeno integrado en el esqueleto carbonado y el Carbono constituyente. El
resultado son Urea y Ornitina. La Urea pasa al torrente sanguíneo. La Ornitina
va a ser transportada al interior de la mitocondria hepática, quedando así el
ciclo cerrado.

6 Descarboxilación de aminoácidos:
- Las reacciones de Descarboxilación de aminoácidos son muy
importantes para su utilización como precursores en rutas de Biosíntesis de
Aminas de destacable importancia Fisiológica.
- Cada descarboxilación
está catalizada por una enzima
descarboxilasa específica, que
utiliza como coenzima
Piridoxal-P, dando lugar a las
correspondientes aminas de
potentísimo efecto fisiológico.
- Hys es transformado en
Histamina, potente
vasodilatador relacionado con
los procesos de Alergia.
- Tr p e s t r a n s f o r m a d o e n

!168
Serotonina, importantísimo neurotransmisor relacionado con las sensaciones
de Tristeza, Ansiedad y Bienestar. En un primer paso, es Hidroxilada por
Hidrolasa, y a continuación descarboxilada. Prozac es un fármaco que actúa
inhibiendo la unión de Serotonina en sus receptores.









- Tyr es transformado, por carboxilación previa hidroxilación, en una serie
de aminas muy importantes como son Noradrenalina y Adrenalina, y
neurotransmisores como Dopamina (neurotransmisión adrenérgica). Dopamina
es un NT relacionado con sensaciones de Placer y Júbilo. Se piensa que está
relacionada con la adicción a las drogas, y que en bajos niveles puede estar
relacionada con el Parkinson.

H2O CO2

!169



-
G l u s e t r a n s f o r m a e n γ-
Aminobutírico (GABA).

Tanto Glu de por sí como GABA

son importantes NT: Glu es un
NT excitante, mientras GABA
inhibe la transmisión de ciertos
impulsos nerviosos.

!170
- El Glutamato monosódico, sintetizado a nivel industrial vía fermentación
por microorganismos, potencia de forma sinérgica el sabor de los alimentos.
Se utiliza como componente de Sopas preparadas, Avecrem, salsa de Soja…
- En oriente este compuesto es muy utilizado. Ajinomoto es una sal que
es muy común en países orientales, como china, desde que fue fabricada
industrialmente por primera vez, por una empresa japonesa. Recibe el nombre
de síndrome del Restaurante chino a toda una serie de alteraciones
metabólicas que afectan al sistema nervioso central. El exceso de Glu, por su
acción como NT, excita las neuronas produciendo nerviosismo y en algunos
casos dolor de cabeza.

7 Metabolismo del Propionil-CoA:
- Propionil-CoA es un metabolito de tres átomos de carbono, que puede
resultar tanto de la degradación del esqueleto carbonado de los aminoácidos,
como de la β-oxidación de AG. En este último caso es un producto minoritario
ya que en la mayoría de AG el metabolismo trabaja con números pares de
átomos de carbono y el producto es Acetil-CoA.
- Una serie de dos reacciones va a permitir la entrada de estos
compuestos carbonados en el metabolismo intermediario central, gracias en
concreto a su transformación en Succinil-CoA.

2


1

!171


Esqueleto
carbonado
de aa








1 2

- En primer lugar, Propionil-CoA sufre una carboxilación a expensas de un
ATP, catalizada por Propionil-CoA carboxilasa + coenzima Biotina.
- El resultado, Acetil-Malonil-CoA (Metilmalonil-CoA) es sometido a una
isomerización catalizada por una enzima Mutasa, que utiliza como coenzima
Vitamina B12 (covitamina de estructura muy compleja). Sorprendentemente, es
capaz de cambiar de lugar, selectivamente, un átomo de C y uno de H.
- La carencia de Vitamina B12 es una patología frecuente conocida como
Anemia perniciosa. El motivo de esta carencia es la ausencia de
Glicoproteínas que transportan esta vitamina a través de las células
intestinales: las Transcobalaminas. Esta vitamina es un compuesto bioquímico
de alta importancia metabólica. Por lo común una persona presenta 1,8 µg en
su cuerpo. Para tratar la anemia, se debe alimentar frecuentemente el hígado
con fuertes dosis de Vitamina B12.

B/ METABOLISMO DEL FRAGMENTO MONOCARBONADO:

1 Generalidades sobre el metabolismo del Fragmento Monocarbonado:
- El Fragmento Monocarbonado (FMC) es el metabolito de un solo átomo
de Carbono de menor estado de oxidación que CO2. Tiene una gran
importancia en el metabolismo de Compuestos Nitrogenados, pues sirve como
precursor en mútiples vías de Biosíntesis (síntesis de Aminoácidos, síntesis de
Bases Nitrogenadas).

!172
 Grupo Fórmula

Principales Metilo -CH3

F r a g m e n t o s
Monocarbonados Metileno -CH2-
(de menor a mayor
estado de oxidación) Metilideno -CH-

Aldehído -CHO

Cetónico -CO-

Máximo estado de Dióxido de Carbono

oxidación del (inorgánico) CO2
Carbono.

- No se trata de una carboxilación común, a expensas de dióxido de
carbono, sino que se trata de la adición de un carbono de un metabolito
orgánico de menor estado de oxidación que el primero.
- Gran parte de las reacciones de este conjunto están catalizadas por
enzimas que utilizan como coenzima la forma reducida del ácido Fólico, Ácido
Tetrahidrofólico (FH4 / N5N10 Metilen FH4), y sus derivados: Los Folatos.
- Estos compuestos se encuentran en especial abundancia en verduras
de color verde, como las acelgas y espinacas.
- Su deficiencia conduce a Anemias con debilidad. Es especialmente
peligroso en mujeres encinta, pues puede conducir en deficiencias en el hijo.
- La forma Reducida FH4 es la más importante por su función de
Coenzima, capaz de transportar los FMC. Los dobles enlaces entre los
carbonos 5’ y 6’ y los carbonos 7’ y 8’ quedan reducidos por la unión de cuatro
átomos de H.
- La parte más importante en la transferencia de FMC son los elementos
N 5’, C 9’, y N 10’.

!173











N5N10 Metilen
Tetrahidrofólico

2 Origen del Fragmento Monocarbonado:
- FMC encuentra su origen en el aa Ser, en forma Metileno, gracias a la
reacción más importante del metabolismo del FMC. Está catalizada por Serina
hidroximetil transferasa + coenzima Piridoxal P. Se transfiere el grupo Metileno
de Ser (carbono β) quedando Glicocola, al FH4 en sus N5 y N10 formando N5N10
Metilen Tetrahidrofólico, en una reacción perfectamente reversible que puede
suceder tanto en uno como en otro sentido.
- El Metileno puede reducirse a Metilo gracias a expensas de NADH,
quedando solamente unido a N5, formando N5 Metil Tetrahidrofólico. De tal
manera el Metilo puede ser empleado como precursor para Metionina. Este
aminoácido activado se transforma en Donador Universal de Grupos Metilo.
- Por otro lado, el Metileno de FH4 puede servir como precursor de
Timina, fundamental en el metabolismo del ADN.
- Además puede oxidarse por una dh NAD+ dep transformándose en
Metilideno (de máximo estado de oxidación, igual que aldehído y Ceto), y
formándose así N5N10 Metiliden Tetrahidrofólico. Los FMC más oxidados
suelen servir como precursores para Bases Nitrogenadas Púricas.

3 La Metionina como Donador Universal de grupos Metilo:
- Durante la activación de la Metionina, se une a su S (formando un grupo
Sulfonio S+) el Nucleósido Adenosina, proveniente de un ATP. PPP se hidroliza
a PPi + Pi, y a continuación a 3 Pi. Dicha energía es empleada para la
formación de este inestable compuesto, gracias también a la acción
enzimática.
- Se forma así S-Adenosil Metionina: Una molécula extraordinariamente
inestable, con altísima tendencia a ceder el grupo Metilo que se encuentra
unido al S de Met.

!174
 Adenina
S-Adenosil Metionina






Metionina

Ribosa

- A partir de este compuesto se producen las reacciones de Metilación del
metabolismo. La metilación de un aceptor produce S-Adenosil Homocisteína y
Aceptor-CH3.
- La posterior escisión espontánea de Adenosina forma el aminoácido
Homocys: el grupo metilo extremo de Met ha sido transferido de manera que
se forma este aa, similar a Cys pero con un carbono más.
- Altos niveles de Homocys son perjudiciales para el organismo, ademas
Met debe ser recuperado. Aquí entra en acción N5 Metil Tetrahidrofólico, que
cede por metilación el FMC para esta reacción, recuperándose Met, en la
reacción catalizada por Homocys-FH4 metil transferasa + coenzima Vit B12.
- La acumulación de Homocys puede desencadenar potentes
enfermedades cardiovasculares, y su relación con el Alzeimer está casi
demostrada (lesión de vasos sanguíneos cerebrales). Deben administrarse
Folatos y Vit B12.

4 Biosíntesis de Aminoácidos:
- Los microorganismos procariontes son capaces de biosintetizar todos
los aminoácidos proteicos a partir de sales Amoniacales o Amoniaco. Los
animales no podemos sintetizar todos.
- Los Aminoácidos Esenciales son aquellos que deben ser recibidos en la
dieta, y son distintos en cada especie. La variedad de la dieta es muy
importante por los aa esenciales.
- Cada aa tiene su vía de síntesis particular. Las Familias Biosintéticas de
aa son grupos de aa que son sintetizados a partir de un mismo precursor,
como OA-, PEP, o 3-Fosfoglicerato (la mayoría de ellos son hidratos de
carbono del metabolismo intermediario central).
- Los piensos para animales deben ser preparados por ello con el
conjunto de los 20 aa proteicos. Los Piensos Compuestos se forman con
varias materias primas todas ellas distintas. Por ejemplo, un pienso 100 % trigo
carece de Lys.

5 Biosíntesis de Nucleósidos Púricos:
- Los principales precursores de los Nucleósidos es la Ribosa-5-P y las
Bases Nitrogenadas, obtenida en la vía de las Pentosas, y las Bases
Nitrogenadas.
- La Ribosa debe ser primero activada, para poder unirse a continuación
a su Base Nitrogenada. Para ello se produce la reacción catalizada por
Ribosa-5-P pirofosfokinasa, durante la cual se produce la unión en C 1’ del PPi
!175
(liberandose AMP). El producto es la Ribosa activada, 5-Fosforribosil-1-PP
(PRPP).
- A partir de aquí se construye, elemento por elemento, el anillo de la
Base Púrica. Varios precursores reaccionan uno detrás de otro, contruyendo el
anillo:

Amina de Asp CO2 Gly

N 10 Formil F H 4 N10
Formil FH4

Amidas de Gln

!176




- El producto final de
la síntesis de una Purina
sobre la ribosa es IMP;
Inopina Mono Fosfato
(unida por su N9). Este
producto será
transformado por otra
serie de reacciones en
AMP y GMP, Nucleósidos
esenciales para ARN y
ADN.
- N 1 procede en
concreto de Asp por una
reacción idéntica a la que
sucede en el Ciclo de la
Urea.



6 Biosíntesis de
N u c l e ó s i d o s
Pirimidínicos:
- A diferencia del caso anterior, aquí se síntetiza la Base Pirimidínica de
manera independiente a la Ribosa activada, y finalmente las dos moléculas
son unidas. Los precursores son CO2, Gln y Asp.

!177


!178















































Para comenzar se produce la síntesis de Carbamoil-P por acción de la enzima
citoplasmática Carbamoil-fosfato sintetasa II, análoga a Carbamoil-fosfato

!179
sintetasa I intramitocondrial del Ciclo de la Urea. Utiliza en lugar de Amoniaco
libre el grupo amino de Gln, y un CO2, formando Carbamoil-P.
- A continuación, Aspartato-Carbamoil transferasa une en forma de anillo
ambas moléculas, formando finalmente la Pirimidina y un Pi libre: el ácido
Orótico. Su correcto procesamiento metabólico da lugar a Uracilo UMP, que va
a ser fosforilado por dos ATP en UTP, pudiendo entonces ser transformado, a
expensas de la amina de Gln y un ATP, en CTP.

7 Biosíntesis de Desoxirribonucleótidos:
- Su síntesis utiliza un Ribonucleótido difosfato o trifosfato como
precursor. Este va a ser transformado en su desoxirribonucleótido por acción
de Ribonucleótido reductasa.
- La síntesis de Timina se inicia en desoxi-UMP, que va ser transformada
en dTMP por Metilación a expensas de N5N10 Metilen FH4, donador universal
de FMC, gracias a la enzima Timidilato sintasa.

!180
 N5N10 Metilen FH4 FH4 FH2

Gly Ser NADP+ NADPH

Serina hidroximetil reductasa Dihidrofolato reductasa


- El conjunto absoluto de estas reacciones es imprescindible para la
síntesis y el metabolismo de ADN y ARN, siendo la única vía de formación de
algunos nucleótidos como Timina.
- El descubrimiento de esta última vía ha sido fundamental para el
desarrollo de Quimioterápidos Anticancerígenos. Los blancos de estos
fármacos son Inhibilato sintasa y Dihidrofolato reductasa. Inhibiendo la síntesis
de Timina se puede refrenar el crecimiento tumoral y eliminar a las células
cancerígenas.
- Para el tratamiento de leucemias infantiles pueden suelen ser tratadas
con la presencia de Metotexato en dosis letales durante varias horas. Este
compuesto es un análogo de los Folatos, que inhibe la acción de Dihidrofolato
reductasa. Para la recuperación del paciente se debe introducir altísimas dosis
de Timina y/o derivados del ácido Fólico.

8 Catabolismo de Nucleósidos:
- El catabolismo de Nucleósidos es un proceso común para todos los
compuestos de esta naturaleza. Tiene lugar en tres principales pasos:
1. Desaminación de la BN.
2. Eliminación del resto Ribosa-P.
3. Degradación de los productos carbonados.
- En humanos, el producto final de N de Purinas forma ácido úrico, y va a
ser excretado en la orina. Los altos niveles de ácido úrico por una alteración
metaboólica pueden acumularse en las articulaciones siendo responsable de
patologías como Artritis o Gota.
- Las pirimidinas son metabolizadas de forma que se integran en el
metabolismo intermediario central.
- La ausencia del gen que codifica Adenosina desaminasa conduce a la
Inmunodeficiencia severa. Esta patología responsable de la formación de gran
cantidad de dATP a partir de desoxiadenosina, que por retroinhibición inhibe a
las otras Nucleótido reductasa impidiendo la síntesis de los otros Nucleótidos
Trifosfato. Se traduce en el bloqueo de la síntesis de DNA en Linfocitos, y la
muerte de dichas células.

!181