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1CROMATOGRAFIA
1CROMATOGRAFIA
Cromatografía
Índice de técnicas
Definición:
Otras definiciones (en la web): cromatograma, cromatografiar, cromatógrafo, fase ligada, fase
inmovilizada, eluir, efluente, muestra, componentes de la muestra, soluto, disolvente, zona.
Se realiza sobre papel u otro material sólido. Suele llamarse “en capa fina” o “en capa delgada”
porque la fase estacionaria recubre un soporte plano y rígido.
Componente 1: Rf = a / D
Componente 2: Rf = b / D
Componente 3: Rf = c / D
1: aplicación de la muestra
F.M. gas, F.E. líquida: columnas “capilares”, con menor diámetro y 30-100 m (incluso más) de
longitud.
Puede verse una animación del avance de las moléculas por la columna.
fase móvil
líquida gaseosa
“cromatografía
líquida”“cromatografía
de gases”
fase
líquido-sólido Cromatografía
gas-sólido
líquida Cromatografía
líquido-líquido Cromatografía
gas-líquido
Cromatografía gas-líquido
Cromatografía gas-sólido
Cromatografía líquido-líquido
Cromatografía líquido-sólido
2.2.1 HPLC
Cromatografía líquida de alta presión o de alta eficacia (cuando se emplean particulas de fase
estacionaria muy pequeñas y una presión de entrada relativamente alta).
Nota: Ésta es una clasificación conceptual; en la práctica, el mecanismo que rige la separación
puede ser mixto; p.ej., adsorción+reparto.
La F.E. es siempre sólida. Ejemplos: alúmina, gel de sílice, carbón activo, fosfato cálcico,
hidroxiapatito...
Diferente afinidad de los componentes de la muestra para el intercambio de iones. ¿Qué significa
intercambio de iones? La F.E. posee carga eléctrica y por ello interacciona con los componentes de
la muestra que tienen carga opuesta.
Intercambio aniónico: F.E. con carga positiva, une aniones, bien los del disolvente (F.M.) o bien los
de la muestra (de ahí la palabra intercambio).
Intercambio catiónico: F.E. con carga negativa, une cationes, bien los del disolvente (F.M.) o bien
los de la muestra.
carboxilato
sulfonato
fosforilo
carboximetilo (CM)
dietil-(2-hidroxipropil)aminoetilo
polietilenimina
Las biomoléculas poseen frecuentemente varios grupos ionizables, de modo que su carga eléctrica
neta depende del pH del medio en el que se encuentran (es decir, la F.M.).
Las moléculas más pequeñas pueden penetrar en los poros de las partículas que forman el gel
(fase estacionaria, relleno de la columna), por lo que tienen mayor recorrido y se retarda su
avance por la columna. Las moléculas de tamaño superior al de los poros sólo circulan por el
exterior de las partículas (se dice que son excluidas), por lo que avanzan más rápido y eluyen
antes.
BIBLIOGRAFÍA
http://biomodel.uah.es/tecnicas/crom/inicio.htm