Bioquímica hepática

(VII) Metabolismo hepático de xenobióticos.

Las reacciones hepáticas de detoxificación

Prof. J.V. Castell

Al ingerir alimentos, absorbemos muchos

compuestos que no tienen valor nutritivo
para nuestro organismo...

1
INGREDIENTES: Harina de trigo, Agua, Aceite
Vegetal, Levadura, Azúcar, Sal, Suero Lácteo,
Emulgentes (E-
(E-471 y E-
E-481), Conservantes (E-
(E-281
y E 202), Vinagre y Estabilizador (E-
(E- 412).

INGREDIENTES:
FLAN:AZUCAR, FECULA,
ESTABILIZANTES Y
ESPESANTES (E E-410 E-
E-407),
407
SAL, VAINILLA Y COLORANTES
ARTIFICIALES AUTORIZADOS
(E-
(E-102 E-
E-110).
CARAMELO LIQUIDO:
GLUCOSA LIQUIDA, AZUCAR Y
CONSERVANTE (E- (E-211)

2
 Algunos de los compuestos ingeridos, podrían
llegar a ser tóxicos si el organismo no los
eliminase y se acumulasen en él...

Lo mismo cabe decir de compuestos

endógenos y exógenos administrados con
fines terapéuticos...

Algunos de los compuestos ingeridos, podrían llegar a ser

tóxicos si el organismo no los eliminase y se acumulasen en él...

ENDOBIOTICOS

TOXICOS

XENOBIOTICOS ATOXICOS

TERAPEUTICOS

NUTRIENTES

3
 Biotransformación…por qué
RESPIRACIÓ
RESPIRACIÓN

Volátiles Lipo-
Lipo-soluble…
soluble…?

XENOBIOTICOS

BIOTRANSFORMACION
Hidro-soluble

ORINA

HECES

SUDOR

Cómo se biotransforman los

xenobióticos...

FASE I

XENOBIOTICOS ELIMINACIÓN

FASE II

4
 El metabolismo de xenobióticos por el hígado...
Xenobió
Xenobiótico (RH)

Fase I
Finalidad:
Finalidad: aumentar la
ROH polaridad de las
molé
moléculas,
introduciendo nuevos
grupos funcionales

Fase II Finalidad:
Finalidad: aumentar
su solubilidad en
R-O-Conj agua, inactivació
inactivación de
su actividad bioló
biológica

Eliminació
Eliminación por la sangre / bilis

Reacció
Reacción de Fase I:
I reacciones en las que se introducen nuevos grupos
funcionales en la molécula aumentando su polaridad y reactividad

Reacció
Reacción de Fase II:
II Conjugación con moléculas endógenas de la célula,
por ej. ácido glucorónico, aumentando notablemente su solubilidad

5
 Biotransformació
Biotransformación de xenobió
xenobióticos

•Hidroxilación
no
•Epoxidación
t e sti
Fase I •Desalquilación In Piel
•Desaminación
•S- y N-oxidación Hígado Pulmones
Riñón

•Glucuronidación
•Glucosidación
•Sulfatación
Fase II •Metilación
•Acetilación
•Conjug. con GSH
•Conjug. con aminoácidos
Vías de eliminación de los metabolitos

Metabolitos Retí
Retículo
endoplá
endoplásmico

Fármaco
Eliminació
Eliminación • Canalículo biliar
• Sinusoide
(detoxificación)

Por qué enzimas…?

3. Enzimas microsomales extrahepá

extrahepáticos
(P450, FMN monooxigenasas

1. Enzimas hepá
hepáticos microsomales
(P450, FMN monooxigenasas)

2. Enzimas hepá
hepáticos no-
no-microsomales:
¾Alcohol/ aldehí
aldehído deshidrogenasa hidrolasas,
reductasas (Fase
(Fase I)
I)
¾Acetil transferasas, sulfato transferasas, GSH
transferasas, glucoronil transferasas (Fase
(Fase II)
II)

6
 Reacciones de biotransformación de Fase I

Peroxidasas
Deshidrogenasas
NADPH reductasas
P450
Esterasas
monooxigenasas

FMN oxigenasas

Tipos de reacciones catalizadas por el citocromo P450

Hidroxilación
aromática

Hidroxilación
alifática

N-Dealquilación

O-Dealquilación

Deaminación

N-Oxidación

Sulfoxidación

7
 El citocromo P450
” Hemoproteína. Absorbancia a 450 nm (forma Fe++)
” Una cadena de 35-45 KDa y grupo prostético heme
” Asociado a otros componentes en la membrana del
retículo endoplásmico
” Actividad “monooxigenasa”
” Baja especificidad de substrato

Hemoproteínas implicadas en reacciones de oxidación

” Oxigenasas
 R + O2 → RO
O2 Dioxigenasas
 RH + O2 +DH2 → R-O
OH + H2 O + D Monooxigenasas

” Oxidasas
 RH2 + O2 → R + H2O2 (2 θ )
 2 RH2 + O2 → 2 R + H2O (4 θ )

” Peroxidasas
 ROOH +2DH2 → R-OH + 2 DH + H2O

8
 Estequiometría de la actividad
“monooxigenasa” del Citocromo P450

RH + NADPH + H+ + O2 → R-OH + NADP+ + H2O

Origen de los electrones en la reacciones

de oxidación catalizadas por P450
dadores de θ O2
NAD(P)H Xenobiótico
(reducido)
P450 Reductasa P450
FADH Xenobiótico
FMNH (oxidado)
oxidado)

Redoxina Fe/S H2O

9
Reacciones catalizadas por el citocromo P450

dadores de θ O2
NAD(P)H Xenobiótico
(reducido)
P450 Reductasa P450
FADH Xenobiótico
FMNH (oxididado)
oxididado)

Redoxina Fe/S H2O

RH + NADPH + H+ + O2 → R-OH + NADP+ + H2O

OH Producto Substrato H

Fe3+
s P450
n Substrato H
OH Substrato Fe3+ Fe3+

P450 P450
e-

r Mecanismo de la CitP450
Reductasa
catálisis
H Substrato (Fe3+O)
(FeO) Fe2+ Substrato H
por el citocromo P450 o
P450
P450 P450
H2O

H Substrato Substrato H O2
q
Fe2+OOH H+ e- Fe2+ O2
H+
P450 P450 p
Cit-b5

10
 Componentes del sistema P450
Citoplasma

NADPH O2 H2O
Citocromo
e- P450
reductasa
FMN Fe2+/Fe3+ e-
FAD Citocromo b5
P450

R R-OH
Retículo endoplásmico

Citoplasma

Nomenclatura del P450

” Superfamilia de genes constituida por familias y
subfamilias
FAMILIA:
FAMILIA: homologí
homología del
40% aa

CYP 1 A 2 NUMERO del gen

SUBFAMILIA:
SUBFAMILIA: homologí
homología
del 55-
55-60 % aa

11
 Isoenzimas del Citocromo P450

Familias
1 2 3 4 5 7 8 11 17 19 21 24 27

3A3 21A2
Subfamilias 3A4
1A1 1B1 3A5 4A9 4B1 4F2 11A1 11B1
1A2 3A7 4A11 4F3 11B2

2A6 2B6 2C8 2D6 2E1 2F1

2A7 2C9
2C10
2C18
2C19

Abundancia relativa y variabilidad de los CYPs implicados

en el metabolismo humanos de fármacos y xenobióticos

CYP Abundancia Grado de variabilidad

(% total)
1A2 ~ 13 ~40-x
1B1 <1
2A6 ~4 ~30 - 100-x
2B6 <1 ~50-x
2C ~18 25-100-x
2D6 Hasta 2.5 >1000-x
2E1 Hasta 7 ~20-x
2E
3A4 Hasta 28 ~20-x

S. Rendic & F.J. DiCarlo, Drug Metab Rev 29:413-80, 1997

12
Los CYPs también se expresan en tejido extrahepático…

CYP Tejido
1A1 Pulmón, riñón, intestino, piel, placenta…
1B1 Piel, riñón, próstata, glándula mamaria…
2A6 Pulmón, epitelio nasal
2B6 Intestino, pulmón
2C Intestino delgado, laringe, pulmón
2D6 Intestino
2E1 Pulmón, placenta…
3A Intestino, pulmón, placenta, feto, utero, riñón

S. Rendic & F.J. DiCarlo, Drug Metab Rev 29:413-80, 1997

Enzimas de Conjugación
• Glucoronidación (UDP-GT)
– 1-naphtol
– morphine

• Conjugación con GSH (GSH-T)

– GSH-Tα (subunidades 1 and 2)
– GSH-Tμ (subunidades 3 and 4)
– GSH-Tπ (subunidad 7)

• Sulfotransferasas
– Phenol ST (ST1A1)
– N-hydroxy acetaminofluorene (ST1C1), estrogen sulfotransferase (ST1E2)
– hydroxyesteroid sulfotransferases (ST 20-21, ST 40-41, ST 60)

13
 Reacciones de formació
formación y conjugació
conjugación del ácido glucoró
glucorónico

G1P + UTP → UDP-G

UDP-G → UDP-GA
COOH

Enzima: UGT 1A1

COOH COOH

R-OH
OH + UDP-GA →R-O
O-GA
-R -CO-
CO-R
R-COOH
COOH + UDP-GA →R-CO-OO-GA

Conjugació
Conjugación con GSH y formació
formación de derivados del ácido mercaptú
mercaptúrico

1. Glutation S-transferasa

2. γ-glutamiltranspeptidasa

3. cisteinil glicinase:

4. N-acetil transferasa

14
 Conjugación con sulfato

Fosfoadenosil fosfosulfato
(PAPS)

Diferencias en la expresión de genes CYP no polimórficos

CYP1A2 CYP2B6
(pmol/mg x min)
MROD ACTIVITY

BROD ACTIVITY
(pmol/mg x min)

70
25
60
50
20
40 15
30 10
20
5
10
0 0
22 20 18 19 21 16 11 7 17 1 5 12 8 3 4 13 6 10 9 2 14 4 3 1 17 7 12 16 14 2 11 8 6 9 19 13 18 5 10 22 20 21

Patient Nº Liver Nº

CYP2E1 CYP3A4
TEST ACTIVITY
(pmol/mg x min)
(pmol/mg x min)

5000
CLZX ACTIVITY

40000
4000
30000
3000
20000 2000
10000 1000
0 0
4 10 11 9 2 13 3 14 1 8 17 7 6 16 5 19 20 18 21 22 1 17 8 7 11 5 10 6 4 9 2 12 16 21 22 19 18 3 20 14

Liver Nº Liver Nº

La variabilidad es mas bien la norma, antes que la excepció

excepción...!

15
 Variabilidad del Citocromo P450

GENOTIPO + Factores ambientales = FENOTIPO

Polimorfismos gené
genéticos • Edad  Variabilidad en
• Sexo los niveles de
enzimas
• Raza
• Dieta, estado  Diferencias en el
nutricional metabolismo

• Estados  Diferencias en la
patológicos farmacociné
farmacocinética
• Inductores
enzimáticos

Un ejemplo: el polimorfismo del CYP2D6

Metabolismo de la debrisoquina

- El 7% de la población muestra una metabolización deficiente

- Herencia autosomal recesiva
- Afecta al metabolismo de 25 fármacos de uso común

CYP2D6
Debrisoquina 4-Hydroxydebrisoquina

Metabolizadores
Rápidos
% Población

Significantes diferencias en
Metabolizadores el metabolismo del fármaco
Lentos

Debrisoquina 4-hidroxylasa

16
 Polimorfismos del P450
Causa del polimorfismo Consecuencia
”No se expresa el gen Ausencia de metabolización
”Defecto parcial Descenso de la metabolización
”Alteración funcional Alteración de la especificidad
”Varias copias del gen Aumento de la metabolización

Isoenzima P450 Frecuencia de la mutació

mutación
CYP2A6 5%
CYP2C9 20%
Otros CYP2C19 10%
CYP2D6 23%
polimorfismos CYP2E1 2% (*)
frecuentes Enzimas de Fase II
NAT-1/2 35%
GST(M1/T1/M3/P1/A2) 5-50%
UDP-GT ?

Factores ambientales que influencian la actividad de los CYPs

Nutrición 1A1;1A2;2E1; 3A3; 3A4,5

Tabaco 1A1;1A2

Alcohol 2E1
1A1,1A2; 2A6; 2B6; 2C;
Fármacos
2D6; 3A3, 3A4,5
1A1,1A2; 2A6; 1B; 2E1;
Medioambientales
3A3, 3A4,5

Rojo enzimas relevantes en el metabolismo de fármacos

S. Rendic & F. J. Di Carlo Drug Metab Rev 29: 413-580, 1997

17
 Las diferencias en el fenotipo de los enzimas
metabolizantes de fármacos y sus consecuencias
Toxicidad debida a Eficacia Ineficacia
una dosis excesiva terapé
terapéutica terapé
terapéutica

CYP CYP CYP

Metabolizador lento Normal Metabolizador rá

rápido

Consecuencias del polimorfismo del CYP

1. Diferencias en la farmacocinética: biodisponibilidad,
vida media
2. Farmacodinámicas: respuesta exagerada, ineficacia
terapéutica
3. Interacciones medicamentosas
4. Producción anormal de metabolitos tóxicos

18
 Interacción fármaco-fármaco

?+
A A1 + A2 B B1 + B2

Fármaco A Fármaco B
B B1 + B2

A A1 + A2
El metabolismo de uno de
los fá
fármacos puede verse
sensiblemente afectado
por la presencia de otro
que comparta el mimo
enzima o grupo de enzimas B B1 + B2

para su metabolizació
metabolización
A A1 + A2

Interacción fármaco-fármaco

A+B
CONCENTRACIÓN de “A”

Toxicidad

Ventana terapé
terapéutica
A

Ineficacia

TIEMPO
La concentración plasmática del fármaco A puede elevarse en presencia del fármaco B
causando efectos tóxicos

19
 Efecto de flavonoides presentes en el zumo de pomelo sobre
el metabolismo de fármacos

5mg + zumo

control

Cl
Cl

Cl
H Cl
CH 3 O 2 C CO 2 CH 3 3A4
CH 3 O 2 C CO 2 CH 3

CH 3 N CH 3
CH 3 N CH 3
H

D.G. Bailey, et al.; Br J Clin Pharmacol 1998, 46:101-110

Inhibidores de CYP3A4

H H
N N
HN S
N N Cim etidine
N
N Cl
N Clotrim azole

O
Cl
O O N N Ketoconazole
Cl
O
H
N
N

20
 El fenómeno de la inducción enzimática

¿Qué es...?
¿Qué trascendencia tiene...?

Induction of MC, Pb, Rif

Times Induction over control

20
18 M C 2uM
16
P b 2m M
14
R if 5 0 u M
12
10
8
6
4
2
0
1
ol

19
2

5
E
2C

2D
1A

2A

3A

3A
tr

2C
on

2
C

(Human hepatocytes; incubation 48h)

21
 A (Cyp 2B) B (Cyp 4A) C (Cyp 3A) D (Cyp 1A)

x x x x

- x x

Hsp90
AhR
PPAR

AhR
CAR

CAR

PXR
-

Hsp90
x x

RXR
PPAR

PXR
PPAR
RXR
x x

AhR
Arnt
CAR

RXR

Sp1 C/EBPα
Cytosol
HNF-1

TATAA
HNF-3 C/EBPβ
C/EBPβ (LAP)

Nucleus CYP-promoter

SXR=PXR=PAR=PRR

El fenómeno de la inducción
enzimática: ¿por qué es relevante?
 Si un compuesto actúa como inductor enzimático, la
expresión de ciertos enzimas de biotransformación
aumentará tras la administración repetida del compuesto.
 Cambios en la expresión de enzimas de biotransformación
influyen la farmacocinética de los fármacos
 Un fármaco cuya farmacocinética cambia el el curso de su
administración a un paciente es un fármaco de más dificil
manejo clínico

22
 Inducción del P450 - Importancia
Fármacos que inducen su propio metabolismo ó la
biotransformación de otros fármacos en el hombre
Grupo farmacoló
farmacológico Ejemplos

Analgésicos, antipiréticos y Antipirina

antiinflamatorios Fenilbutazona
Antibióticos Rifampicina
Anticonvulsivantes Carbamazepina, Fenitoina
Antifúngicos Griseofulvina
Antilipidémicos Halofenato
Antimaláricos Quinina
Diuréticos Espironolactona
Psicotropos Clorimipramina
Sedantes e hipnóticos Barbitúricos
Esteroides Testosterona
Vitaminas Vitamina C

Biotransformación =

Detoxificación?

23
 Toxicidad como consecuencia del metabolismo...
Xenobió
Xenobiótico (RH)

Radicales & ROS Phase I

ROH Metabolitos tó
tóxicos
Metabolitos
electrofí
electrofílicos
Cell toxicity

Phase II
Conjugados R-O-Conj Metabolitos tó
tóxicos
reactivos

Toxicidad para las cé

células proximales

Xenobiótico

Detoxificación Bioactivación
Biotransformació
Biotransformación

Metabolito Conjugació
Conjugación Metabolito
no-
no-reactivo, reactivo
menos tó
tóxico

Lípidos Proteí
Proteínas DNA

Eliminació
Eliminación
Peroxidació
Peroxidación Desnaturalizació
Desnaturalización Genotoxicidad
de lí
lípidos Unió
Unión covalente Mutaciones

24
 Paracetamol NHCOCH3

NHCOCH3 2. Conjugació
Conjugación NHCOCH3
1. Conjugació
Conjugación Glucoró
Glucorónico
sulfato
OH

3. Citocromo P450

OSO3H OC6H9O6
NCOCH3
NHCOCH3
GSH Unió
Unión Covalente a
proteí
proteínas hepá
hepáticas
NHCOCH3 δ+
SCH2 CHCOOH
O
OH Necrosis
Acido Mercaptú
Mercaptúrico N-Acetil-p-benzoquinona imina

Toxicidad hepá
hepática del paracetamol

• El paracetamol (acetaminofeno) es una analgésico muy bien tolerado, y de

toxicidad baja, que sin embargo puede ser fatal tras una sobredosis
• El metabolismo del paracetamol es primariamente a través de su conjugación con
sulfato (1), pero dado que la capacidad del organismo es limitada, si se aumenta la
dosis de fármaco (1-2 g) se formarán también conjugados glucurónicos (2)
• Si hay una sobredosis (>6g), cabe la posibilidad de que el fármaco de oxide (3) por
el CYP2E1, formándose el intermedio reactivo N-Acetil-p-benzoquinona imina
• Este intermedio, más reactivo y tóxico es conjugado con GSH y posteriormente
eliminado como un derivado del ácido mercaptúrico
• En el caso de una sobredosis mayor (>10g), y dado que la capacidad de producción
y conjugación con GSH es limitada, el intermedio reactivo puede reaccionar con
grupos SH de proteínas críticas, modificándolas (inactivándolas) y formando
aductos covalentes
• Ello lleva a una necrosis del hepatocito que se manifiesta como una insuficiencia
hepática fatal
• La administración de precursores de GSH (N-acetilcisteína) previene la toxicidad

25