ANEXO 2

Curso: Cromatografía
Código: 401542
Nombre de la Tarea: Tarea 2 – Cromatografía líquida y de gases

Temáticas a desarrollar:
- Cromatografía de gases: generalidades, columnas, fase estacionaria y
fase móvil, instrumentación: sistema de inyección y detectores; elución
isocrática y gradiente, factor de capacidad, selectividad, resolución y
aplicaciones.
- Cromatografía líquida de alta eficiencia (HPLC): generalidades,
columnas, fase estacionaria y fase móvil, instrumentación: sistema de
inyección, de bombeo y detectores; adsorción, fase normal y fase
reversa, elución isocrática y gradiente, factor de capacidad,
selectividad, resolución y aplicaciones.

Fecha de desarrollo: 27 de septiembre al 30 de octubre de 2019

Maria Angelica Zambrano Estudiante 1

Nombre del estudiante Estudiante 2
Nombre del estudiante Estudiante 3
Nombre del estudiante Estudiante 4
Nombre del estudiante Estudiante 5

EJERCICIO 1 – CROMATOGRAMAFÍA DE GASES

Tabla 1. Ejercicio 1.1 – Fórmula y estructura de compuestos (individual)

Muestra Fórmula
Orden de
Estudiante Compuesto molecul Estructura
polaridad
ar
 Furfural C5H4O2 3

Piridina C5H5N 2

Maria
Angelica Colombia
Zambrano Ácido acético C2H4O2 1 Commented [LDCT1]: Corregir, el ácido acético es muy
polar y lo pusiste como apolar, revisar tabla

Furaneol C6H8O3 4

2-furfuriltiol
Nombre Guaiacol
estudiante Vietnam Ácido acético
2 Ácido
isovalérico
4,5-dimetil-
Nombre tiazol
estudiante Turquía Ácido acético
3 Metional
Furaneol
4-etil-
Nombre guayacol
estudiante Brasil Ácido acético
4 Pirazina
Guaiacol
Nombre 2,3-
estudiante Nepal butanediona
5 Ácido acético
 Piridina
Furaneol

Tabla 2. Ejercicio 1.1 – Análisis muestras de café (individual)

Maria Angelica Zambrano
Primer Segundo Tercer Cuarto
Café
compuesto compuesto compuesto compuesto
Colombia
(Furfural) (Piridina) (Ácido acético) (Furaneol)
Tiempo de
retención 17.5-2.1= 32.1-5.4 49.3-9.2 =40.1 56.4-7.5
corregido 15.4 min =26.7 min min =48.9min
(tR’)
Número de
16 (32.1 /
platos 16 (17.5 / 0.13)2 16 (49.3 / 0.54)2 = 16 (56.4 / 0.23)2 Commented [LDCT2]: Agregar formula general que
0.32)2 =
teóricos = 289940.82
161001.56
133360.22 = 962105.1 permita ver como la empleaste
(N)
Altura de 60 / 289940.82 60 / 161001.56 60 / 133360.22 = 60 / 289940.82
plato (H) = 0.0002 m = 0.00037 m 0.00045 m = 0.00021 m
Nombre del estudiante 2
Café Primer Segundo Tercer Cuarto
Vietnam compuesto compuesto compuesto compuesto
Tiempo de
retención
corregido
(tR’)
Número de
platos
teóricos
(N)
Altura de
plato (H)
Nombre del estudiante 3
 Café Primer Segundo Tercer Cuarto
Turquía compuesto compuesto compuesto compuesto
Tiempo de
retención
corregido
(tR’)
Número de
platos
teóricos
(N)
Altura de
plato (H)
Nombre del estudiante 4
Primer Segundo Tercer Cuarto
Café Brasil
compuesto compuesto compuesto compuesto
Tiempo de
retención
corregido
(tR’)
Número de
platos
teóricos
(N)
Altura de
plato (H)
Nombre del estudiante 5
Primer Segundo Tercer Cuarto
Café Nepal
compuesto compuesto compuesto compuesto
Tiempo de
retención
corregido
(tR’)
Número de
platos
teóricos
(N)
 Altura de
plato (H)

Tabla 3. Ejercicio 1.1 - Número de platos teóricos y altura de plato

(individual)
¿Qué relación tiene el número y la altura de platos
Estudiante
teóricos con los resultados obtenidos?
Respuesta:
El plato teórico es la longitud de una columna en la que el
soluto experimenta un equilibrio completo entre las dos fases.
Es decir que entre más platos teóricos forme una columna
mayor será su eficacia, o del mismo modo cuanto menor sea la
altura del plato mayor será la eficiencia.
De acuerdo con esto de los compuestos trabajados el más
eficiente seria furaneol, ya que en su número de platos es
Maria Angelica
mayor al de los demás compuestos y la altura de platos es
Zambrano
baja. El menos eficiente seria el ácido acético, seguido por la
pirudina y furfural.
Referencias bibliográficas:
 Lidia con la química. (05 de agosto de 2015). Resolución
de las columnas cromatograficas. Tomado el 18 de
octubre de 2019 desde:
https://lidiaconlaquimica.wordpress.com/tag/altura-de-
plato/
Respuesta:
Nombre
estudiante 2 Referencias bibliográficas:
-
Respuesta:
Nombre
estudiante 3 Referencias bibliográficas:
-
Respuesta:
Nombre
estudiante 4 Referencias bibliográficas:
-
 Respuesta:
Nombre
estudiante 5 Referencias bibliográficas:
-

Tabla 4. Ejercicio 1.2 – Compuestos que se analizan en cromatografía de

gases (individual)
¿Qué tipo de compuestos se pueden analizar en
Estudiante
cromatografía de gases?
Respuesta:
La cromatografía de gases emplea compuestos volátiles o
semivolatiles y térmicamente estables a temperatura de hasta
350-400 ℃. La cromatografía de gases presenta limitaciones en
tres casos como:
 Compuestos poco volátiles, generalmente los de peso
molecular superior a 300 u.m.a.
 Compuestos sensibles a una elevación de temperatura
Maria Angelica
incluso moderada (determinados compuestos de interés
Zambrano
biológico)
 Compuestos que se encuentran en forma iónica.
Referencias bibliográficas:
 Ozores, M. (abril de 2016). Cromatografia de gases.
Laboratorio técnicas instrumentales. Tomado el 18 de
octubre de 2019 desde:
http://laboratoriotecnicasinstrumentales.es/analisis-
qumicos/cromatografa-de-gases
Respuesta:
Nombre
estudiante 2 Referencias bibliográficas:
-
Respuesta:
Nombre
estudiante 3 Referencias bibliográficas:
-
Nombre Respuesta:
estudiante 4
 Referencias bibliográficas:
-
Respuesta:
Nombre
estudiante 5 Referencias bibliográficas:
-

Tabla 5. Ejercicio 1.2 – Tipos de inyección en cromatografía de gases

(colaborativa)
Tipo de Descripción de la Cromatograma Relación con la
inyecci inyección (ejemplo) separación de
ón picos
Respuesta: Se divide la Respuesta: Commented [LDCT3]: Falta respuestas
muestra después de la
inyección, reduciendo así
la masa total
analito/solvente que entra
Inyecció efectivamente a la
n con columna. La muestra se
división evapora instantáneamente
de flujo y se mezcla con el gas
portador, a continuación
de lo cual el flujo se divide
en dos partes, una de las
cuales va a la columna y la
otra fuera del sistema.
Respuesta: Respuesta:
Vaporiza y transfiere la
Inyecció
mayor parte de la muestra
n sin
a la columna; usa “cold
división
trapping” y efecto de
de flujo
solvente para enfocar la
banda
Referencias bibliográficas:
  UNAM. Cromatógrafo de gases. Tomado el 18 de octubre de 2019 desde:
http://depa.fquim.unam.mx/amyd/archivero/CGInstrumentacion_26635.
pdf

Tabla 6. Ejercicio 1.2 – Tipos de columna en cromatografía de gases

(colaborativa)
Tipos Flujo Flujo de la Lon Material Características
de de la inyección gitu
colum fase d
na móvil
El gas La muestra 10- Acero Respuesta:
inerte es 100 inoxidable, Es una columna tubular que
transpor inyectada m vidrio, está formada por un tubo
ta la en el cobre, (normalmente de vidrio
muestra interior de aluminio, osílice fundida) de un
volatiliz la cámara plástico diámetro comprendido
ada en donde es entre 0,2 y 0,8 mm, en
el vaporizada cuya pared interna se
Capilar
inyector de forma disponela fase estacionaria.
o
a través instantáne, Según sea la forma en que
tubular
de la mezclándos se dispone la fase
columna e con el gas estacionaria sobre la pared
cromato portador y del tubo, se distinguen
grafica. allí es básicamente dos tipos de
arrastrada columnas: Columnas WCOT
en dirección y Columnas PLOT.
a la
columna.
De Respuesta: Commented [LDCT4]: Falta respuestas
relleno
o
empaq
uetada
s
Referencias bibliográficas:
  Cuellar, M. (30 de marzo de 2013). Instrumentacion cromatografía de
gases. Slideshare. Tomado el 18 de octubre de 2019 desde:
https://es.slideshare.net/malenacuellar/instrumentacin-cromatografa-de-
gases-2012ii
 MNCN. Cromatografia de gases. Tomado el 18 de octubre de 2019 desde:
http://www.mncn.csic.es/docs/repositorio/es_ES/investigacion/cromatogra
fia/cromatografia_de_gases.pdf

Tabla 7. Ejercicio 1.2 – Elución isotérmica (colaborativa)

Casos Elución isotérmica Cromatograma
Caso 1. Respuesta: Respuesta:
Componentes
de una mezcla
con puntos de
ebullición
similares
Respuesta: Respuesta:
Para muestras en las que
los puntos de ebullición de
los componentes se
presenten en un amplio
Caos 2. intervalo, los picos
Componentes correspondientes a los
de una mezcla solutos más volátiles
con puntos de estarán muy próximos y los
ebullición correspondientes a los
diferentes menos volátiles estarán
muy espaciados. La
resolución no es igual para
todos los picos, siendo
deficiente al principio y
excesiva al final.
Referencias bibliográficas:
 Universidad de Salamanca. Cromatografía de gases. Tomado el 18 de
octubre de 2019 desde: http://ocw.usal.es/ciencias-
 experimentales/analisis-aplicado-a-la-ingenieria-
quimica/contenidos/course_files/Tema_11.pdf

Tabla 8. Ejercicio 1.2 – Detectores (individual)

Tipo de
Detector
Características muestra para
es
analizar
Respuesta: Respuesta:
Identifica de manera casi
inequívoca cualquier sustancia Compuestos
pura, pero normalmente no es volátiles.
capaz de identificar los
componentes individuales de una
mezcla sin separar previamente
sus componentes. Este proceso
actúa como detector
Maria cromatográfico al registrar la
Angelica Masas corriente iónica total generada
Zambrano en la fuente iónica, cuya
representación gráfica
constituye el cromatograma o
“TIC” (total ion current). En
efecto, la corriente iónica
generada por todos los iones da
lugar a un pico gaussiano de
área proporcional a la
concentración del compuesto
detectado
Referencias bibliográficas:
 Gutiérrez, M. Cromatografía de gases. Identificación de compuestos.
Tomado el 18 de octubre de 2019 desde:
https://core.ac.uk/download/pdf/41780740.pdf

Nombre Ionización Respuesta: Respuesta:

estudiante 2 de llama
Referencias bibliográficas:
-
Conductivi Respuesta: Respuesta:
Nombre
dad
estudiante 3
térmica
Referencias bibliográficas:
-
Nombre Termoióni Respuesta: Respuesta:
estudiante 4 co
Referencias bibliográficas:
-
Captura Respuesta: Respuesta:
Nombre
de
estudiante 5
electrones
Referencias bibliográficas:
-

EJERCICIO 2 – CROMATOGRAFÍA LÍQUIDA

Tabla 9. Ejercicio 2.1 - Concentraciones y áreas del analito y del patrón

interno (colaborativo)
Áreas y Patrón
concentraciones 1 2 3 4 5 Muestra
200 250 300 350 400
𝑐𝑜𝑛𝑐𝑒𝑛𝑡𝑟𝑎𝑐𝑖ó𝑛 𝑎𝑛𝑎𝑙𝑖𝑡𝑜 = = = = =
250 300 350 400 450
𝑐𝑜𝑛𝑐𝑒𝑛𝑡𝑟𝑎𝑐𝑖ó𝑛 𝑙𝑎𝑐𝑡𝑜𝑠𝑎 ¿?
0.8 0.83 0.86 0.87 0.88
390 763 1069 1399 1640 1101
á𝑟𝑒𝑎 𝑎𝑛𝑎𝑙𝑖𝑡𝑜 = = = = = =
839 889 878 872 868 893
á𝑟𝑒𝑎 𝑙𝑎𝑐𝑡𝑜𝑠𝑎
0.46 0.86 1.22 1.6 1.89 1.23

Tabla 10. Ejercicio 2.1 - Curva de calibración (colaborativo) Commented [LDCT5]: Muy bien la gráfica
 Curva de calibración
2.5
Area analito/area lactosa

1.5

1 y = 0.36x + 0.126
R² = 0.9973

0.5

0
0.8 0.83 0.86 0.87 0.88
Concentracion analito/concentracion lactosa

Ecuación de la recta: Y=0.36x+0.126

Coeficiente de correlación (R2): R2=0.9973

Tabla 11. Ejercicio 2.1 – Concentración de extracto y del analito

(colaborativo)
Respuesta:

En la ecuación de la recta de calibrado se sustituye “y” por el

área de analito/área de p.i. obtenida en el cromatograma de la
muestra
0.36
Concentración = 0.0004
893
del extracto
Se despeja “x” que es la concentración de analito/concentración
de p.i. en el extracto de la muestra

0.0004 − 0.126
𝑥= = −0.35
0.36
 Respuesta:

La concentración de analito se obtiene multiplicando el valor

calculado para “x” por la concentración de p.i.
Concentración
analito 0.35 ∗ 350 = 122.5 𝑚𝑔/𝐿

La concentración del analito en el extracto de la muestra es de

122.5 mg/L

Tabla 12. Ejercicio 2.1 - Resultados y coeficiente de correlación (R2)

(individual)
¿Qué relación tienen el valor del coeficiente de
Estudiante
corrección (R2) con los resultados obtenidos?
Respuesta:
El R2 hace referencia al coeficiente de determinación, este se
define como la proporción de la varianza total de la variable
explicada por la regresión, refleja la bondad del ajuste de un
modelo a la variable que pretender explicar.
Podemos decir entonces que el R2 nos representa un buen
ajuste lineal reflejado en la curva de calibración ya que el
resultado que obtuvimos fue de 0.9973.

Referencias bibliográficas:
Maria Angelica
 Dosal, M. (2008). Curvas de calibración en los métodos
Zambrano
analíticos. Tomado el 24 de octubre de 2019 desde:
http://depa.fquim.unam.mx/amyd/archivero/CURVASDE
CALIBRACION_23498.pdf
 Fernandez, I; Garcia, E. Cuantificación de compuestos
por cromatografía: Método del Patrón Interno.
Universidad Politecnica. Tomado el 24 de octubre de
2019 desde:
https://riunet.upv.es/bitstream/handle/10251/16356/M
%C3%A9todo%20Patr%C3%B3n%20Interno.pdf?sequen
ce=2
 Respuesta:
Nombre
estudiante 2 Referencias bibliográficas:
-
Respuesta:
Nombre
estudiante 3 Referencias bibliográficas:
-
Respuesta:
Nombre
estudiante 4 Referencias bibliográficas:
-
Respuesta:
Nombre
estudiante 5 Referencias bibliográficas:
-

Tabla 13. Ejercicio 2.1 - Análisis cromatogramas (individual)

Indique la relación que existe entre las muestras
Estudiante
analizadas con la intensidad de señal de los picos.
Respuesta:
La intensidad de la señal generada, medida como área de pico,
es un parámetro fundamental pues en condiciones adecuadas
de trabajo varia linealmente con la concentración de la especie
que origino dicho pico. Se deduce por lo tanto que tr puede
usarse como variable cualitativa mientras que el área o altura
del pico es la variable cuantitativa.
Maria Angelica La medida del área del pico para una serie de disoluciones
Zambrano patrón de concentración conocida permite la obtención de
funciones señal-concentración a partir de las cuales se puede
estimar la concentración del analito en una muestra problema.
La adición a patrones y muestra de un patrón interno permite
mejorar la precisión, utilizándose en el caso como señal
analítica la relación de áreas entre el analito y el patrón
interno.
 Referencias bibliográficas:
 Ausejo, A; Llobat, E; Herraez, R. (2010). Laboratorio de
analisis instrumental. Universidad de valencia. Tomado el
24 de octubre de 2019 desde: https://bit.ly/2BFwJ6S
Respuesta:
Nombre
estudiante 2 Referencias bibliográficas:
-
Respuesta:
Nombre
estudiante 3 Referencias bibliográficas:
-
Respuesta:
Nombre
estudiante 4 Referencias bibliográficas:
-
Respuesta:
Nombre
estudiante 5 Referencias bibliográficas:
-

Tabla 14. Ejercicio 2.2 – Compuestos que se analizan en HPLC (individual)

Estudiante ¿Qué tipo de compuestos se pueden analizar en HPLC?
Respuesta:
Utilizado comúnmente para el análisis de compuestos que no
absorben la radiación UV tales como los azúcares, antivirales,
antibióticos, lípidos, fosfolípidos, terpenoides y alcoholes, en el
que se puede usar una amplia gama de columnas
Maria Angelica cromatográficas de diversos tipos como son: filtración en gel,
Zambrano interacción hidrofóbica e intercambio iónico.

Referencias bibliográficas:
 Zaldivar, V. Identificación y cuantificación de sustancias
por HPLC. Universidad Nacional Autonoma de Mexico.
Tomado el 24 de octubre de 2019 desde:
 https://quimica.unam.mx/investigacion/servicios-para-
la-investigacion/usaii/identificacion-y-cuantificacion-de-
sustancias-por-hplc/
Respuesta:
Nombre
estudiante 2 Referencias bibliográficas:
-
Respuesta:
Nombre
estudiante 3 Referencias bibliográficas:
-
Respuesta:
Nombre
estudiante 4 Referencias bibliográficas:
-
Respuesta:
Nombre
estudiante 5 Referencias bibliográficas:
-

Tabla 15. Ejercicio 2.2 – Elución isocrática y gradiente (colaborativa)

Tipo de Descripción Ejemplo
elución
Los compuestos eluyen usando una
fase móvil de composición constante
durante toda la cromatografía. Todos
los compuestos acaban migrando a
través de la columna hasta el final. Sin
embargo, cada uno migra con una
Elución
velocidad diferente, resultando en una
isocrática
relación de elución más rápida o más
lenta. Este tipo de elución es bastante
simple y barato, pero la resolución de
algunos compuestos es cuestionable y
el eluido puede no ser obtenido en un
plazo de tiempo adecuado.
 Los diferentes compuestos son eluidos
modificando gradualmente la
composición de la fase móvil durante
el transcurso de la cromatografía
(aumentando la fuerza iónica,
modificando la polaridad, etc.). El
resultado sobre la elución es un
Elución
acortamiento de los tiempos de
gradiente
retención, el factor de retención
disminuye conforme aumenta la
variación de flujo del gradiente y el
compuesto eluye. Este gradiente
puede llevarse a cabo de forma lineal
o escalonada o linealmente
escalonada.
Referencias bibliográficas:
 Paredes, D. (2016). Cromatografía HPLC. Slideshare. Tomado el 24 de
octubre de 2019 desde:
https://es.slideshare.net/DavidParedesRobledo/cromatografa-hplc

Tabla 16. Ejercicio 2.2 – Modo de separación (colaborativo)

¿Qué es fase Ejemplo ¿Qué es fase Ejemplo
normal? reversa?
Respuesta: Muestra: Respuesta: Muestra:
Se basa en la Compuesto
interacción de orgánico Fase estacionaria:
los analitos con Es apolar,
grupos Fase estacionaria: generalmente un
funcionales De elevada hidrocarburo
polares de la polaridad como el
superficie de la agua y el Fase móvil: Es
fase trietilenglico polar, como el
estacionaria, soportada sobre agua, metanol o
que alcanza su partículas de sílice acetonitrilo
potencia o alumina
máxima cuando
se utilizan Fase móvil:
eluyentes no Disolvente
polares como relativamente
fase móvil. apolar como el
hexano o
isopropileter
Referencias bibliográficas:
 Waters. Modos de Separación. Tomado el 24 de octubre de 2019 desde:
https://www.waters.com/waters/es_ES/Separation-
Modes/nav.htm?locale=es_ES&cid=10009385
 Echeverria, S. (2015). Cromatografía y componentes de un sistema
cromatográfico. Slideplayer. Tomado el 24 de octubre de 2019 desde:
https://slideplayer.es/slide/5656438/

Tabla 17. Ejercicio 2.2 – Detectores (individual)

Detector Tipo de muestra
Características
es para analizar
Respuesta: Respuesta:
La Espectrometría de Masas es azúcares,
una potente técnica instrumental antivirales,
de análisis, de alta sensibilidad, antibióticos,
basada en la ionización de las lípidos,
moléculas y en la separación y fosfolípidos,
registro de los iones producidos terpenoides y
Maria Espectro según su relación masa/carga alcoholes
Angelica metría de (m/z) en un sistema a vacío. Los
Zambrano masas iones que llegan al detector
producen una señal eléctrica que
es ampliada, procesada y
registrada en un ordenador,
dando lugar al correspondiente
espectro de masas que no es
más que una representación
gráfica de la abundancia de los
 iones detectados en función de
su relación m/z.

Referencias bibliográficas:
 Universidad de Burgos. (3 de julio de 2019). Cromatografía de
Gases/Líquidos acoplado a espectrometría de masas de Alta Resolución
(MS-AR). Tomado el 24 de octubre de 2019 desde:
https://www.ubu.es/parque-cientifico-tecnologico/servicios-cientifico-
tecnicos/espectrometria/cromatografia-de-gasesliquidos-acoplado-
espectrometria-de-masas-de-alta-resolucion-ms-ar
Absorció Respuesta: Respuesta:
Nombre
n visible-
estudiante 2
UV
Referencias bibliográficas:
-
Nombre Fluoresce Respuesta: Respuesta:
estudiante 3 ncia
Referencias bibliográficas:
-
Índice de Respuesta: Respuesta:
Nombre
refracció
estudiante 4
n
Referencias bibliográficas:
-
Nombre Respuesta: Respuesta:
FTIR
estudiante 5
Referencias bibliográficas:
-