COLESTEROL HDL
: 13
Instrucciones de Uso
Finalidad . Sistema para determinación del colesterol HDL a través de
la precipitación selectiva de las lipoproteínas de baja densidad (LDL y
VLDL) por reacción de punto final.
[Solamente para uso diagnóstico in Vitro.]
Principio . Las lipoproteínas de muy baja densidad (VLDL) y las
lipoproteínas de baja densidad (LDL) son cuantitativamente precipitadas
y después de centrifugación, el colesterol ligado a las lipoproteínas de alta
densidad (Colesterol HDL) es determinado en el sobrenadante.
Caracteristicas del sistema . En la selección de un sistema para
dosificar el Colesterol HDL, Labtest optó por el ácido fosfotúngstico y el
cloruro de magnesio, que precipitando selectiva y cuantitativamente las
VLDL y LDL, permiten la obtención de resultados comparables al del
método de referencia.
Después de la centrifugación, el Colesterol HDL se determina en el
sobrenadante utilizando el sistema enzimático Colesterol Liquiform -
Labtest (Ref. 76).
El sistema de medida colorimétrica es fácilmente adaptable a la mayoría
de los analizadores automáticos capaces de medir una reacción de punto
final en 500 nm.
Metodologia . Labtest
Reactivos
1. 1 - Precipitante - Almacenar entre 2 - 8 ºC.
Contiene ácido fosfotúngstico 1,5 mmol/L y cloruro de magnesio
54 mmol/L.
2. - Estándar 20 mg/dL - Almacenar entre 2 - 30 ºC.
Contiene colesterol 0,52 mmol/L y azida sódica 14,6 mmol/L. Almacenar
bien cerrado para evitar evaporación.
Los reactivos no abiertos, conservados en las condiciones
especificadas, son estables hasta la fecha de expiración impresa en su
rótulo. Durante el manipuleo, los reactivos están sujetos a
contaminaciones de naturaleza química y microbiana que pueden
provocar disminución de la estabilidad.
Precauciones y cuidados especiales
No utilizar el Reactivo 1 - Colesterol Liquiform - Labtest (Ref. 76) cuando
su absorbancia, medida contra agua a 500 nm, fuera igual o mayor que
0,300 o cuando se muestre turbio o con señales de contaminación.
El Estándar contiene azida sódica que es tóxica. Se debe tener cuidado
para evitar la ingestión y en caso de contacto con los ojos lavar
inmediatamente con gran cantidad de agua y procurar auxilio médico.
01 Español - Ref.: 13
Ref.
La azida puede formar compuestos altamente explosivos con las cañerías
de plomo y de cobre. Por lo tanto, utilizar grandes volúmenes de agua para
descartar los reactivos.
Se deben de aplicar los cuidados habituales de seguridad en la
manipulación del reactivo.
Material necesario y no suministrado
1. Baño María o incubador para mantener temperatura constante de
37 ºC.
2. Fotómetro capaz de medir, con exactitud, la absorbancia entre 490 y
540 nm.
3. Pipetas para dispensar muestras y reactivo.
4. Cronómetro.
5. Centrífuga con capacidad superior a 3500 rpm.
6. Reactivo para la determinación de Colesterol.
Influencias preanaliticas . Las concentraciones del colesterol
HDL medidas en un mismo individuo y en distintas ocasiones pueden
fluctuar considerablemente debido a las variaciones biológicas y también
a las variaciones del método analítico. Las concentraciones en la sangre
son fuertemente influenciadas por factores tales como dieta reciente,
ingestión de alcohol, variaciones del peso corporal, actividades físicas y
hábito tabaquista. Las hormonas y otras medicaciones también producen
variaciones en la concentración del colesterol HDL.
Se considera que la variación biológica sea alrededor del 7,5%. Por lo
cual, en una serie de repeticiones de la dosificación en un mismo
individuo, dos tercios de los resultados estarán entre ± 7,5% del valor
medio. Siendo así, la variación biológica supone el factor más importante
de la variación total del colesterol HDL. Los efectos de la variación
biológica pueden ser controlados hasta cierto punto através de la
estandarización de las condiciones de preparación del paciente y de la
toma de la muestra, pero el colesterol HDL no puede ser estimado con
confianza a través de un ensayo de una única muestra. Se deben obtener
varias muestras y el promedio de los resultados puede ser considerado
como la concentración usual del colesterol HDL o, más exactamente,
puede ser considerada el rango usual para el individuo.
Muestra
Se debe de crear un Procedimiento Operacional Estándar (POE) que
establezca procedimientos adecuados para toma, preparación y
almacenamiento de las muestras. Destacamos que los errores debidos a
un mal POE pueden ser mayores que los errores ocurridos durante el
procedimiento analítico.
Usa suero o plasma (heparina-litio y EDTA). Las muestras con citrato u
oxalato no deben ser usadas porque dan resultados falsamente
disminuidos.
Las muestras de suero o plasma no deben permanecer entre 15 - 30 ºC
por más de 14 horas. Cuando las determinaciones no serán realizadas
dentro de las 14 horas, las muestras deben ser almacenadas entre 2 - 8 ºC
por 7 días y por 30 días a 20 ºC negativos. Se deben almacenar a
temperaturas £70 ºC negativos cuando hubiera necesidad de
preservación por períodos mayores de tiempo. Evitar congelamientos y
descongelamientos repetidos. Las muestras descongeladas deben ser
bien homogeneizadas antes de su utilización. No usar vórtex o similar. No
usar muestras con señales de contaminación microbiana.
Suero: 0,25 mL
Precipitante: 0,25 mL
Agitar vigorosamente durante 30 segundos. La agitación sugerida es
fundamental para la obtención de resultados consistentes. Centrifugar a
3.500 rpm por lo menos durante 15 minutos para obtener un
sobrenadante límpido. Pipetear el sobrenadante límpido inmediatamente
después de la centrifugación, tomando el cuidado de no resuspender el
precipitado al objeto de evitar resultados falsamente elevados.

Como ningún test conocido puede asegurar que muestras de sangre no
transmiten infecciones, todas se deben considerar como potencialmente
infectantes. Así siendo, al manejarlas, se debe seguir las normativas
establecidas para bioseguridad.
Para descartar los reactivos y el material biológico, deberán aplicarse las
normativas locales, regionales o nacionales de protección ambiental.
Interferencias
Concentraciones de bilirrubina de hasta 5 mg/dL, hemoglobina hasta
180 mg/dL y triglicéridos hasta 750 mg/dL no producen interferencias
significativas.
Concentraciones de bilirrubina por encima de 5 mg/dL producen
resultados falsamente disminuidos.
Concentraciones de triglicéridos por encima de 750 mg/dL producen
resultados falsamente elevados.
Para evaluar la concentración aproximada de la hemoglobina en una
muestra hemolisada se puede proceder a lo siguiente: diluir 0,05 mL de la
muestra en 2,0 mL de NaCl 150 mmol/L (0,85%) y medir la absorbancia a
405 o 415 nm, ajustando el cero con agua desionizada o destilada:
Hemoglobina(mg/dL) @ Absorbancia405 x 601
Hemoglobina(mg/dL) @ Absorbancia415 x 467
Limitaciones del método . Mantener siempre la relación
Muestra/Precipitante igual a 1:1.
Colorimetria . Ver observaciones 1,2 y 3.
Utilizar con el Reactivo 1 - Colesterol Liquiform - Labtest (Ref. 76).
Disponer de tres tubos de ensayo y proceder como se expone a
continuación:
Blanco Test Estándar
Sobrenadante 0,1 mL
Estándar (nº2) 0,1 mL
Reactivo 1 1,0 mL 1,0 mL 1,0 mL
Mezclar e incubar a 37 ºC, durante 10 minutos. El nivel del agua en el baño
debe ser superior al nivel del reactivo en los tubos de ensayo. Determinar
las absorbancias del Test y del Estándar a 500 nm (490 a 540 nm),
ajustando el cero con el Blanco. El color es estable por 60 minutos.
El procedimiento sugerido para la medición es adecuado para fotómetros
cuyo volumen mínimo de solución para lectura es igual o menor que
1,0 mL. Se debe hacer una verificación de la necesidad de ajuste del
volumen para el fotómetro utilizado. Los volúmenes de muestra y reactivo
pueden ser modificados proporcionalmente, sin perjuicio para el
desempeño de la prueba manténiendose los cálculos inalterados.
Volúmenes de muestra menores a 0,01 mL son críticos en aplicaciones
manuales y se deben ser utilizados con cuidado porque aumentan la
imprecisión de la medición.
Calculos

Después de la centrifugación, remover el sobrenadante limpio dentro de Debido a la dilución 1:2 aplicada a las muestras durante el procedimiento
15 minutos, para evitar resultados falsamente elevados. de precipitación de las VLDL y LDL, el valor del Estándar, para cálculo de
los resultados, debe ser corregido para 40 mg/dL.
Muestras lipémicas y ocasionalmente muestras no lipémicas pueden
presentar el sobrenadante turbio. En este caso, diluir la muestra 1:2 con Absorbancia del Test
Colesterol HDL (mg/dL) = x 40
NaCI 150 mmol/L y repetir la precipitación. Multiplicar el resultado final
Absorbancia del Estándar
por 2. En caso de que el sobrenadante permanezca todavía turbio, la
muestra no puede ser utilizada para determinar el colesterol HDL.
Ejemplo
Algunas muestras, principalmente lipémicas, pueden presentar el
Absorbancia del Test = 0,290
sobrenadante limpio con una camada en su superficie que no debe ser
Absorbancia del Estándar = 0,320
pipeteado, para evitar resultados falsamente elevados.
0,290
Procedimiento Colesterol HDL (mg/dL) = x 40 = 36
0,320
Ver limitaciones del metodo.
Debido a la gran reproducibilidad que puede ser obtenida con la
Precipitación de las VLDL y LDL metodología, se puede utilizar el método del factor.
En un tubo 12 x 75 colocar:

02 Español - Ref.: 13
 40 Colesterol LDL (mg/dL)
Factor de Calibración = Edad: 2 a 19 años
Absorbancia del Estándar Deseable <110
Limítrofe 110 - 129
Colesterol HDL(mg/dL) = Absorbancia del Test x Factor Elevado ³130

Ejemplo
Colesterol HDL (mg/dL)
40 <10 años Deseable ³40
Factor = =125 10 a 19 años Deseable ³35
0,320

Colesterol HDL (mg/dL) = 0,290 x 125 = 36

10
Unidades Convencionales: mg/dL Adultos
Unidades SI (mmol/L) = Unidades Convencionales x 0,026
Colesterol Total (mg/dL)
Deseable <200
Trazabilidad del sistema . La calibración del sistema es trazable
Limiar elevado 200 - 239
al Standard Reference Material (SRM) 911 del National Instituite of
Elevado ³240
Standards and Technology (NIST).

Linealidad Colesterol LDL (mg/dL)

Óptimo <100
El resultado de la medición es lineal hasta 200 mg/dL. Para valores más
Limiar óptimo 100 - 129
altos, diluir la muestra 1:2 con solución fisiológica, realizar una nueva
Limiar elevado 130 - 159
medición y multiplicar el resultado obtenido por 2.
Elevado 160 - 189
Mucho Elevado ³190
Control interno de la calidad . El laboratorio debe mantener un
programa de control interno de calidad que defina con claridad las
normas aplicables, objetivos, procedimientos, criterios para Colesterol HDL (mg/dL)
especificaciones de calidad y límites de tolerancia, acciones correctivas y Bajo <40
registro de actividades. Elevado (deseable) ³60
Deben ser utilizados materiales de control para monitorear la imprecisión
de la medición y los desvíos de la calibración. Se sugiere buscar atender
como límites máximos de control las especificaciones propuestas por
11
10
National Cholesterol Education Program (NCEP) para el coeficiente de Caracteristicas del desempeño
variación ≤4,00%, error sistemático (bias) £5,00% y error total £12,8%.
Exactitud . En dos muestras con concentraciones de colesterol HDL
Valores deseables o recomendados . Estos valores se deben iguales a 28 y 54 mg/dL se añadieron cantidades diferentes de analitos,
usar únicamente como orientación. Se recomienda que cada laboratorio obteniéndose recuperaciones de entre el 95 y el 100%. El error
establezca, en la población atendida, su propia franja de valores de sistemático proporcional medio, obtenido en un valor de 60 mg/dL fue
referencia. igual a 1,2 mg/dL ó 2,0%.

Los valores deseables o recomendados sustituyen los valores de
referencia y son determinados a partir de dados epidemiológicos,
calculados estadísticamente que relacionan los niveles del colesterol con
predomonio de la Enfermedad Coronaria Isquémica (ECI), tambiém
llamada Dollencia Arterial Coronaria (DAC).
Classificación ATP III de Colesterol Total, LDL y HDL
(mg/dL):
Especificidad . El método propuesto fue comparado con un método
similar, utilizando 80 muestras con valores situados entre 7 y 86 mg/dL.
La comparación resultó en la ecuación de regresión: y = 1,337 + 0,932x
y un coeficiente de correlación (r) igual a 0,993. El error sistemático total
(constante y proporcional) verificado en el nivel de decisión (60 mg/dL),
fue igual a 2,74 mg/dL ó 4,5%. Como las muestras fueron seleccionadas
aleatoriamente se puede inferir que el método tiene especificidad
metodológica adecuada.

Niños y adolescentes
9 Repetitividad - Imprecisión intra-ensayo
N Media DE CV (%)
Colesterol Total (mg/dL)
Muestra 1 20 40 0,60 1,5
Edad: 2 a 19 años
Muestra 2 20 59 0,49 0,8
Deseable <170
Limítrofe 170 - 199
Elevado ³200

03 Español - Ref.: 13
Reproducibilidad - Imprecisión total
N Media DE CV (%)
Muestra 1 20 40 0,83 2,0
Muestra 2 20 58 0,99 1,7
Sensibilidad metodológica . Una muestra proteica que no
contenía Colesterol HDL fue utilizada para calcular el límite de detección
del ensayo, habiendo sido encontrado un valor igual a 0,40 mg/dL,
equivalente a la media de 20 ensayos más dos desviaciones estándar.
Utilizándose la absorbancia del Estándar como parámetro, se verificó que
el límite de detección fotométrica es 0,12 mg/dL, correspondiendo a una
absorbancia igual a 0,001.
Efectos de la dilución de la matriz . Una muestra con valor
igual a 92 mg/dL fueron utilizadas para evaluar la respuesta del sistema en
las diluciones de la matriz con solución fisiológica. Usando factores de
dilución que variaron de 1,2 a 2,0, se encontraron recuperaciones entre el
93 y 103%.
Como calcular la concentración del colesterol VLDL Y
LDL . Las concentraciones del Colesterol VLDL y LDL pueden ser
calculadas utilizando la ecuación de Friedewald, que es exacta para
muestras cuyas concentraciones de triglicéridos no ultrapasen
400 mg/dL y no pertenezcan a pacientes portadores de lipoproteinemia
do Tipo III.
Ecuácion de Friedewald
Colesterol VLDL = Trigliceridos / 5
Colesterol LDL = Colesterol Total - (HDL + VLDL)
Significado clínico . No hay dudas que el colesterol es un factor de
riesgo para ECI (Enfermedad Coronaria Isquémica) y que él marcha -
junto con el tabaco, hipertensión e intolerancia a la glucosa - como uno de
los cuatro grandes factores de ECI. Estudios prospectivos y
retrospectivos no dejan dudas acerca de la existencia de una interrelación
curvilínea entre los niveles de colesterol sérico, más específicamente LDL
y VLDL y la incidencia de ECI.
En 1977 quedó demostrado que el colesterol HDL tiene un efecto
protector contra la ECI. Los estudios de Framinghan revelaron que los
niveles del colesterol HDL son inversamente proporcionales a la
prevalencia de ECI.
Está bien establecido que niveles elevados de colesterol LDL están
asociados al riesgo aumentado de ECI. También no hay dudas de que no
sólo el colesterol total, sino que también las fracciones LDL y VLDL
pueden ser disminuidas con dieta y medicación. La reducción del 1 % del
valor del colesterol total disminuye el predominio de ECI en
aproximadamente en un 2%.
Las concentraciones del colesterol total y del HDL dependen de
metabolismos distintos y no se debe hacer ningún intento por buscar una
correlación entre sus niveles de concentración.
04 Español - Ref.: 13
Observaciones
1. La limpieza y secado adecuados del material utilizado son factores
fundamentales para la estabilidad de los reactivos y obtención de
resultados correctos.
2. El laboratorio clínico tiene como objetivo fornecer resultados exactos
y precisos. La utilización de agua de calidad inadecuada es una causa
potencial de errores analíticos. El agua deionizada o destilada utilizada en
el laboratorio debe tener la calidad adecuada para cada aplicación. Así,
para preparar reactivos y usar en las mediciones y para su uso en
enjuague final de la vidrería, debe tener resistividad ³1 megaohm.cm o
conductividad £1 microsiemens/cm y concentración de silicatos
<0,1 mg/L. Cuando la columna desionizadora está con su capacidad
saturada, se produce agua alcalina con liberación de varios iones,
silicatos y sustancias con gran poder de oxidación o reducción que
deterioran los reactivos en pocos días o incluso horas, alterando los
resultados de modo imprevisible. Por lo cual es fundamental establecer
un programa de control de la calidad del agua.
3. Para una revisión de las fuentes fisiopatológicas y medicamentosas
de interferencia en los resultados y en la metodología, se sugiere
consultar <www.fxol.org/>.
Referencias
1. III Diretrizes Brasileiras sobre Dislipidemias e Diretriz de Prevenção da
Aterosclerose. Sociedade Brasileira de Cardiologia. Arq Bras Cardiol
2001;77(suppl III):1-48.
2. Tonks DB. Quality Control in Clinical Laboratories, Warner-Chilcott
Laboratories, Diagnostic Reagents Division, Scarborough, Canada,
1972.
3. Virella MFL, Stone P, Ellis S, Colwell G. Clin Chem 1977; 23:882-884.
4. Warnick RG, Naguyent T, Albers AA. Clin Chem 1985; 2:217-222.
5. Warnick RJ. Handbook of lipoprotein testing. Washington: AACC
Press, 1997.
6. Warnick RG, Wood PD. Clin Chem 1995; 41: 1427-33.
7. NCEP - Detection, evaluation and treatment of high blood cholesterol in
adults (Adult Treatment Panel III). NIH Publication 02-5215, Bethesda,
MD, 2002.
8. Westgard JO, Barry PL, Hunt MR, Growth T.1981;27:493-501.
9. Leite PF, Martinez TLR, Halpern A, Cendoroglo MS, Novazzi JP, Fonseca
FAH, Dias JCA. Risco cardiovascular: fatores metabólicos e
nutricionais: diagnóstico e tratamento. São Paulo: Loyola, 1994. p.56.
10. Executive Summary of the Third report of the National Cholesterol
Education Program (NCEP) Expert Panel on Detection, Evaluation,
and Treatment of High Blood Cholesterol in Adults (Adult Treatment
Panel III). JAMA 2001;285:2486-97.
11. Labtest. Datos de Archivo.
Presentación Labtest Diagnóstica S.A.
CNPJ: 16.516.296 / 0001 - 38
Producto Referencia Contenido
Av. Paulo Ferreira da Costa, 600 - Vista Alegre - CEP 33400-000
1 1 X 25 mL Lagoa Santa . Minas Gerais Brasil - www.labtest.com.br
13-25
1 X 5 mL
Colesterol HDL Servicio de Apoyo al Consumidor e-mail: sac@labtest.com.br
1 1 X 50 mL
13-50
1 X 5 mL
Revisión: Marzo, 2014 Copyright by Labtest Diagnóstica S.A.
Ref.: 201114 Reproducción bajo previa autorización

Informaciones al consumidor

[Términos y Condiciones de Garantía]

Labtest Diagnóstica garantiza el desempeño de este producto, dentro de

las especificaciones, hasta la fecha de expiración indicada en los rótulos,
siempre que los cuidados de utilización y almacenamiento indicados en
los rótulos y en estas instrucciones, sean seguidos correctamente.

05 Español - Ref.: 13
06 Español - Ref.: 13