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HDL Colesterol

C Reactivo Precipitante
Para la separacin de las lipoprotenas de alta densi-
dad (HDL) en suero o plasma

SIGNIFICACION CLINICA de trabajo en el laboratorio de qumica clnica.


Las lipoprotenas plasmticas son partculas esfricas que Todos los reactivos y las muestras deben descartarse de
contienen cantidades variables de colesterol, triglicridos, acuerdo a la normativa local vigente.
fosfolpidos y protenas. Estas partculas solubilizan y trans-
portan el colesterol en el torrente sanguneo. ESTABILIDAD E INSTRUCCIONES DE
La proporcin relativa de protena y lpido determina la ALMACENAMIENTO
densidad de estas lipoprotenas. Reactivos Provistos: son estables a temperatura ambiente
La funcin principal de las lipoprotenas de alta densidad hasta la fecha de vencimiento indicada en la caja.
o HDL (high density lipoprotein) en el metabolismo lipdico Reactivo Precipitante: es estable 6 meses a temperatura
es la captacin y transporte de colesterol desde los tejidos ambiente o 1 ao en refrigerador (2-10oC) a partir de la fecha
perifricos al hgado en un proceso conocido como transporte de preparacin.
reverso de colesterol (mecanismo cardioprotectivo).
El HDL colesterol bajo, est asociado con un alto riesgo de INDICIOS DE INESTABILIDAD O DETERIORO DE LOS
enfermedad cardaca. Por este motivo la determinacin de REACTIVOS
HDL colesterol es una herramienta til en la identificacin Cualquier indicio de contaminacin bacteriana puede ser
de individuos de alto riesgo. signo de deterioro de los reactivos.

FUNDAMENTOS DEL METODO MUESTRA


Las lipoprotenas de alta densidad (HDL) se separan preci- Suero o plasma
pitando selectivamente las lipoprotenas de baja y muy baja a) Recoleccin: obtener la muestra de la manera habitual.
densidad (LDL y VLDL) mediante el agregado de sulfato de b) Aditivos: en caso de utilizar plasma, recogerlo nica-
dextrn de PM 50.000 en presencia de iones Mg++. mente con heparina.
En el sobrenadante separado por centrifugacin, quedan c) Sustancias interferentes conocidas: anticoagulantes
las HDL y se realiza la determinacin del colesterol ligado distintos de la heparina y bilirrubinemia mayor de 50 mg/l
a las mismas, empleando el sistema enzimtico Colesterol son causas de interferencia.
oxidasa/Peroxidasa con colorimetra segn Trinder (Fenol/4- Referirse a la bibliografa de Young para los efectos de las
Ami-nofenazona). drogas en el presente mtodo.
d) Estabilidad e instrucciones de almacenamiento: se-
REACTIVOS PROVISTOS parar el suero dentro de la hora de la extraccin. Las Lipid
A. Reactivo A: solucin de sulfato de dextrn (PM 50.000) Research Clinics recomiendan refrigerar la muestra hasta la
0,032mmol/l. realizacin del ensayo. El almacenamiento o conservacin
B. Reactivo B: solucin de cloruro de magnesio 1,5 M. de las muestras a temperatura ambiente altera la composi-
cin lipoproteica de las muestras an antes de las 24 horas.
REACTIVOS NO PROVISTOS Algunos autores mencionan estabilidad de 3 das a 4oC que
Colestat enzimtico, Colestat enzimtico AA o Colestat se prolongan al congelar, pero existe mucha variabilidad en-
enzimtico AA lquida de Wienerlab. tre muestras diferentes, por lo que se recomienda mantener
la muestra refrigerada y procesar dentro de las 24 horas.
INSTRUCCIONES PARA SU USO
Reactivo Precipitante (A+B); preparacin: en el frasco MATERIAL REQUERIDO (no provisto)
provisto, medir 2,5ml de Reactivo A y 2,5 ml de Reactivo - Espectrofotmetro o fotocolormetro.
B. Mezclar por inversin y colocar fecha de preparacin. - Micropipetas y pipetas.
Pueden prepararse cantidades menores de acuerdo a las - Tubos de Kahn.
necesidades, respetando la proporcin 1+1 para ambos - Tubos o cubetas espectrofotomtricas.
reactivos. - Bao de agua a 37oC.
- Reloj o timer.
PRECAUCIONES
Los reactivos son para uso diagnstico "in vitro". CONDICIONES DE REACCION
Utilizar los reactivos guardando las precauciones habituales - Longitud de onda: 505 nm en espectrofotmetro o en

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fotocolormetro con filtro verde (490-530 nm). 0,40 - 0,60 g/l
- Temperatura de reaccin: 37oC Es recomendable que cada laboratorio establezca sus
- Tiempo de reaccin: 45 minutos propios valores de referencia. No obstante, valores mayo-
- Volumen de muestra: 500 ul res de 0,40 g/l se consideran recomendables y los que se
- Volumen de Reactivo Precipitante: 50 ul encuentren por encima de 0,60 g/l se han considerado como
- Volumen de Sobrenadante: 100 ul protectivos. Por el contrario, valores de HDL colesterol por
- Volumen de Reactivo de Trabajo de Colestat enzimtico debajo de 0,40 g/l se consideran como ndice significativo
o Colestat enzimtico AA/lquida: 2 ml de riesgo de enfermedad cardaca coronaria.
- Volumen final de reaccin: 2,1ml
LIMITACIONES DEL PROCEDIMIENTO
Ver Sustancias interferentes conocidas en MUESTRA
PROCEDIMIENTO La exactitud y precisin de la determinacin dependen
En un tubo de Kahn medir 0,5ml (500ul) de muestra, y fundamentalmente de la observacin de las condiciones
agregar 50 ul de Reactivo Precipitante. Homogeneizar de precipitacin, por lo que los tiempos y temperaturas es-
agitando (sin invertir) durante 20 segundos y dejar 30- tablecidos, si bien no requieren un control riguroso, deben
40 minutos en refrigerador (2-10oC) o 15 minutos en ser respetados.
bao de agua a la misma temperatura. No colocar en Cuando el HDL colesterol no puede separarse por com-
congelador. Centrifugar 15 minutos a 3000r.p.m. Usar pleto en una centrfuga comn debido a niveles elevados
el sobrenadante lmpido como muestra. de triglicridos puede efectuarse la determinacin de la
En 3 tubos marcados B, S y D colocar: siguiente manera: seguir las instrucciones indicadas en
B S D PROCEDIMIENTO hasta la incubacin a 4-10oC y luego de
la misma, colocar la mezcla de reaccin en tubos capilares
Sobrenadante - - 100 ul y centrifugar en centrfugas de microhematocrito a 10.000
Standard - 20 ul - r.p.m. durante 5 minutos. Cortar el capilar desechando el
precipitado y utilizar el sobrenadante lmpido para la prueba.
Reactivo de Trabajo 2 ml 2 ml 2 ml
Mezclar e incubar 5 minutos a 37oC si se usa el Reactivo PERFORMANCE
de Trabajo de Colestat enzimtico AA/lquida o 15 mi- a) Reproducibilidad: procesando replicados de una misma
nutos a 37oC cuando se usa el de Colestat enzimtico. muestra en el da se obtienen los siguientes valores:
Retirar del bao y enfriar. Leer a 505nm en espectrofo- Nivel D.S. C.V.
tmetro o en colormetro con filtro verde (490-530 nm), 0,29 g/l 0,011 g/l 3,8 %
llevando a cero con el Blanco. 0,63 g/l 0,023 g/l 3,7 %
b) Linealidad: la reaccin es lineal hasta 5 g/l.
ESTABILIDAD DE LA MEZCLA DE REACCION FINAL c) Lmite de deteccin: en espectrofotmetro, para una
El color de reaccin es estable 2 horas por lo que la absor- variacin de absorbancia de 0,001 D.O., el cambio mnimo
bancia debe ser leda dentro de ese lapso. de concentracin detectable ser de 0,0063 g/l de colesterol.

CALCULO DE LOS RESULTADOS PRESENTACION


0,457 Equipo para procesar 100 muestras (Cd. 1220103).
HDL Colesterol (g/l) = D x f f=
S BIBLIOGRAFIA
VFE VRE VS - Castelli, W. P.; Levitas I. M. - Current Prescribing 6/77:39
0,457 = 2 (g/l) x x x donde: (1977).
VM VRS VE - Cooper, C. et al. - National Heart and Lung Institute, (USA)
VFE = volumen final de extracto = 0,55 ml (1974).
VM = volumen de muestra procesada = 0,5 ml - Gordon, T. - Am. J. Med. 62:707 (1977).
VRE = volumen de reaccin con extracto = 2,1 ml - Kostner, G.M.et al. - Clin. Chem. 25/6:939 (1979).
VRS = volumen de reaccin con Standard = 2,02 ml - Stanbury, J. B.; Wyngaarden, J. B.; Fredrickson, D. S. - The
VS = volumen de Standard en la reaccin = 0,020 ml Metabolic Basis of Inherited Disease, Mc Graw - Hill Book
VE = volumen de extracto en la reaccin = 0,1 ml Co., 2 ed., 1966.
Si se emplean volmenes de Reactivo diferentes de 2 ml - Coniglio, R. I.- Acta Bioq. Clin. Latinoam. XXIII/2:201, 1989.
el factor 0,457 vara y debe ser calculado nuevamente, - Expert Panel of National Cholesterol Education Program -
reemplazando en la frmula VRE y VRS. JAMA 285/19:2486 (2001).
- Young, D.S. - "Effects of Drugs on Clinical Laboratory Tests",
VALORES DE REFERENCIA AACC Press, 4th ed., 2001.
El panel de expertos del National Cholesterol Education
Program (NCEP) provee los siguientes valores de HDL
colesterol:
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Smbolos
Los siguientes smbolos se utilizan en todos los kits de reactivos para diagnstico de Wiener lab.

C
Este producto cumple con los requerimientos
previstos por la Directiva Europea 98/79 CE de
productos sanitarios para el diagnstico "in vitro"
M Elaborado por:

P
Xn

Representante autorizado en la Comunidad


Europea Nocivo

V Uso diagnstico "in vitro"


Corrosivo / Castico

X Contenido suficiente para <n> ensayos


Xi

Irritante

H Fecha de caducidad

i Consultar instrucciones de uso

l Lmite de temperatura (conservar a)

No congelar
Calibr. Calibrador

b Control

F Riesgo biolgico

Volumen despus de la reconstitucin


b Control Positivo

Cont. Contenido c Control Negativo

g Nmero de lote h Nmero de catlogo

M Wiener Laboratorios S.A.I.C.


Riobamba 2944
2000 - Rosario - Argentina

Wiener lab.
http://www.wiener-lab.com.ar
Dir. Tc.: Viviana E. Ctola
Bioqumica
Producto Autorizado A.N.M.A.T.
Disp. N: 5984/83-319/00 2000 Rosario - Argentina
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