PRÁCTICA Nº3

DETERMINACIÓN ESPECTROFOTOMETRICA DE HIERRO TOTAL EN VINOS

Fundamento

El hierro (II) forma un complejo de color rojo con 1,10-fenantrolina según la

reacción:

Para asegurarnos de que todo el hierro presente en la muestra se encuentra

en forma de Fe2+ añadimos, antes de la formación del complejo, un agente reductor
como es el clorhidrato de hidroxilamina, el cual reduce el Fe 3+ a Fe2+ según la
reacción:

4 Fe 3+ + 2 NH2OH 4 Fe 2+
+ N 2 O + 4 H 3O + + H 2 O

La formación del complejo hierro (II) con fenantrolina se da en un intervalo de

pH comprendido entre 2 y 9, aunque éste es suficientemente amplio, para asegurar
la formación cuantitativa del complejo se adiciona al medio acetato sódico que
neutraliza el ácido formado durante la reducción del hierro (III) y ajusta el pH a un
valor al que se puede efectuar la formación del complejo.
Este método puede aplicarse a vinos blancos o poco coloreados y permite
determinar el contenido total de hierro (Fe 2+ + Fe3+) en el vino.

Disoluciones necesarias
- Disolución patrón de hierro (II)
Preparar una diolución de hierro pesando 1.404 g de sulfato ferroso amónico
hexahidratado. Transferir cuantitativamente la muestra pesada a un matraz aforado
de un litro y añadir suficiente agua para disolver la sal. Añadir 2.5 ml de H 2SO4
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concentrado, enrasar con agua desionizada y homogeneizar. Guardar la disolución
resultante en una botella de polietileno preparada para tal fin.

- Disolución 2.10-3M de 1,10-Fenantrolina

Disolver 100 mg de monohidrato de 1,10-fenantrolina en 100 ml de agua
desionizada.

- Disolución de clorhidrato de hidroxilamina al 10%

Disolver 10 g de clorohidrato de hidroxilamina en 100 ml de agua desionizada.
- Disolución 0'1M de acetato sódico
Disolver 8.20 g de acetato de sodio en 1000 ml de agua desionizada.

Material e instrumentación necesarios

- Matraces aforados de 50 mL
- Pipetas de 1, 2, 5 y 10 mL
- Espectrofotómetro

Procedimiento Operatorio

A. Obtención de la función de calibrado

Construir una recta de calibrado, adicionando en matraces de 50 ml, 0, 0.5,
1.0, 2.0 y 4.0 mL de disolución patrón de sulfato ferroso amónico hexahidratado, 2
mL de clorhidrato de hidroxilamina (pipeta de 2 ml), 10 ml de acetato sódico (pipeta
de 10 mL), 5 mL de 1,10-Fenantrolina (pipeta de 5 ml) y enrasar con agua
destilada. Esperar 10 minutos y medir la absorbancia a 510 nm de longitud de
onda.

B. Preparación de la muestra a analizar

Para el análisis de la muestra, pipetear 5 ml de vino a un matraz aforado de
50 ml y añadir las mismas cantidades de los reactivos anteriormente citados.
Esperar al menos 10 minutos para que se desarrolle el color completamente y por
último, medir la absorbancia en el espectrofotómetro a 510 nm de longitud de onda.

C. Método de adición de patrón

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 Se prepara una serie de cuatro patrones en matraces aforados de 50 ml
añadiendo a todos ellos en el orden indicado 2.5 ml de muestra de vino y a
continuación 0, 1.0, 2.0 y 3.0 ml respectivamente de la disolución patrón de Fe (II)
de 20 ppm, 2 ml de clorohidrato de hidroxilamina al 10 %, 10 ml de acetato sódico
0.1 M y 5 ml de 1, 10 fenantrolina, enrasando finalmente con agua destilada. Se
mide la absorbancia a 510 nm de las disoluciones preparadas frente al blanco
correspondiente, transcurridos diez minutos de su preparación.

Resultados

1. Obtención de la Recta de calibrado

Matraz nº mL de Fe(II) g/mL de Fe(II) A (510 nm)

1
2
3
4
5

2. Medida de la Muestra

Réplicas A (510 nm)

1
2
12
 3

3. Método de adición de patrón

Matraz nº mL de muestra mL de Fe (II) g/mL de Fe (II) A (510 nm)

(añadidos)
1 2.5 0
2 2.5 1.0
3 2.5 2.0
4 2.5 3.0

Representaciones gráficas

1.- Función de calibrado.

13
2.- Método de adición de patrón.

Tratamiento de datos

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Expresión de resultados

Expresar en ppm el contenido en hierro de las muestras analizadas:

A. Encontrado mediante la función de calibrado:

- Resultado individual:.......................... CV (%)...........

- Resultado de grupo:............................CV (%)...........

B. Encontrado con el método de adición de patrón:

- Resultado individual:..............
- Resultado de grupo:.................CV (%)...........
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Vº Bº Profesor

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