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Las pruebas para la determinación de los carbohidratos pueden ser generales como la
reacción de Molisch, la cual no discrimina el tipo de carbohidrato analizado, o específicas si el
resultado final logra la identificación de un carbohidrato en particular.
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Prácticas de Bioquímica Práctica: Estudio de los Carbohidratos
MATERIALES Y EQUIPOS
- Tubos de ensayo.
- Gradillas.
- Pipetas graduadas.
- Baño de María a 100°C.
- Goteros.
- Pinzas para tubos de ensayo.
- -naftol al 0,5% en etanol.
- Ácido sulfúrico concentrado.
- Soluciones de glucosa, fructosa, almidón, sacarosa, maltosa al 3%.
- Muestra problema
- Plasma de bovino
- Reactivo de Benedict: preparar combinando las siguientes soluciones:
Solución A: 173 g de citrato de sodio y 100 g de carbonato de sodio se disuelven en 800 mL de
agua destilada
Solución B: disolver 17,3 g de CuSO4: 5 H2O en 100 mL de agua destilada.
Mezclar ambas soluciones y aforar a 1 L con agua.
- Reactivo de Seliwanoff: disolver 0,05 g de resorcinol en 33 mL de HCl concentrado. Aforar a
100 mL con agua destilada.
- Solución diluida de yodo-yoduro de potasio en agua.
- Reactivo de Antrona: 0,2 g de antrona en 100 mL de H2SO4 al 95%. No es estable y debe ser
preparado diariamente.
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Prácticas de Bioquímica Práctica: Estudio de los Carbohidratos
furfural
O
H2COH CHO
+
H
Hexosas (C6H12O6)
5-hidroximetilfurfural
O
H3C CHO
+
H
6-Desoxihexosas (C6H12O5)
5-metilfurfural
Estos derivados furfúricos reaccionan con compuestos fenólicos como el α-naftol, el
orcinol, el resorcinol o la antrona, para formar cromógenos que evidencian la positividad de las
reacciones. El tipo de compuesto fenólico utilizado dependerá del tipo de carbohidrato a
determinar y por lo tanto, de la reacción que se esté realizando.
Reacción de Molisch
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Prácticas de Bioquímica Práctica: Estudio de los Carbohidratos
OH O
alfa-naftol
OH
+
2 H O C R
HC R
+
RCHO
OH OH
Cromógeno violeta
intermediario
Reacción de Seliwanoff
HO O
OH
O
HOH2C CHO H+
+ 2
OH
O
5-hidroximetilfurfural resorcinol
CH2OH
Cromógeno rojo
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Prácticas de Bioquímica Práctica: Estudio de los Carbohidratos
Reacción de Benedict
Esta reacción nos indica si un azúcar es o no reductor. Para tal fin el carbohidrato se hace
reaccionar con el ión cúprico (Cu++) en medio alcalino a una temperatura de 100°C. El
carbohidrato, a través de su hemiacetal libre en el carbono 1, se oxida favoreciendo la reducción
del cobre a oxido cuproso (Cu2O) el cual se presenta como un precipitado rojo ladrillo en el fondo
del tubo.
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Prácticas de Bioquímica Práctica: Estudio de los Carbohidratos
precipitado rojo
Experimento Nº 3: Prueba de Benedict:
- Rotule dos tubos de ensayo (1 y 2)
- Añada 8 gotas del carbohidrato (tubo 1) y 8 gotas del compuesto desconocido (tubo 2).
- Agregue 5 mL de reactivo de Benedict en ambos tubos.
- Caliente en agua hirviente durante 5 minutos.
La reacción es positiva al aparecer un precipitado rojo ladrillo, indicando esto la presencia
de sustancias reductoras.
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Prácticas de Bioquímica Práctica: Estudio de los Carbohidratos
Glucosa 5-hidroximetilfurfural
OH
O
H2COH CHO
H+
+ Compuestos de color
verde-azul
5-hidroximetilfurfural Antrona
Reactivo de Antrona 2 mL 2 mL 2 mL
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Prácticas de Bioquímica Práctica: Estudio de los Carbohidratos
TUBO ABSORBANCIA
Estándar
Muestra
CSt
Cm = x Am
ASt
Donde:
Cm: concentración de la muestra expresada en mg/dl
Am: absorbancia de la muestra
CSt: concentración del estándar
ASt: absorbancia del estándar
AUTOEVALUACIÓN
2. Existen reacciones que permiten identificar polisacáridos. Mencione una de ellas e indique su
fundamento bioquímico.
3. Al calentar el tubo donde se realizó la prueba del yodo y se obtuvo un resultado positivo
desaparece el color azul que se forma durante la misma. ¿Por qué ocurre dicho fenómeno?
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Prácticas de Bioquímica Práctica: Estudio de los Carbohidratos
7. Revisa las rutas metabólicas de carbohidratos activas durante el ayuno y post alimentación.
Relaciona las mismas con la liberación de las hormonas insulina y glucagón.
BIBLIOGRAFÍA
Pavia, Donald; Lampman, Gary; Kriz George. Introduction to organic laboratory techniques.
Saunders editores. 1976.