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INTRODUCCIÓN
Parte de estos problemas puede ser atribuido a que durante la formación del grano
de polen, los factores genéticos, químicos y ambientales condicionan su fertilidad, y
afecten su calidad.
Una vez que el polen es liberado por las anteras, se vuelve un organismo frágil y
sensible a las condiciones externas, ya que la apertura de las anteras en la
maduración se acompaña de una pérdida de agua por parte del grano de polen, lo
cual reduce considerablemente su metabolismo. Sin embargo, este metabolismo
reducido favorece su dispersión y le permite sobrevivir durante el transporte hacia el
estigma femenino, en el cual se rehidrata para poder germinar. Para ello, el grano
de polen debe poseer una gran adaptabilidad morfológica para responder a estos
cambios de humedad, siendo la exina lo que permite estos cambios de volumen a
nivel de las aperturas.
Este interés por conservar el polen, surge debido a que se hace muy difícil tener la
cantidad suficiente de flores de las plantas de la línea macho, para polinizar todas
las flores de las plantas de la línea hembra durante todo el proceso de producción.
2
Incluso, no basta con que los productores logren desfasar la floración, lo que les
permitiría evitar una sobrecarga de trabajo en la polinización y además, evitar la
pérdida de flores de las plantas de la línea hembra, que no serían polinizadas por
falta de polen en el día adecuado para su polinización.
Por otro lado, la preservación de la viabilidad del polen es de gran valor para
cultivadores y genetistas al eliminar los problemas de tiempo y espacio que se
presentan al hacer polinización artificial (KHOSH-KHUI, BASSIRI y NIKNEJAD,
1976).
La calidad del polen es primordial para que la fecundación sea exitosa. De ocurrir
alteraciones en la calidad, podría afectarse principalmente la capacidad del polen de
germinar y de optimizar la suerte de obtener una buena cuaja y un buen llenado de
frutos. Es justamente en este ámbito donde se espera encontrar un método de
conservación adaptable para polen de tomate, lo cual sumado a costos y eficiencia,
refleje la calidad de éste a través de pruebas de viabilidad in vitro, y que, a su vez,
se correlacione con los resultados in vivo.
2. REVISIÓN BIBLIOGRÁFICA
ESAU (1985) señala que el desarrollo del tejido esporógeno en la antera implica
ciertos fenómenos que caracterizan la formación de la membrana. Las células que
sufren la meiosis, las células madres del polen, están muy compactas en las
primeras etapas del desarrollo, y se van separando entre sí, mientras que el
protoplasto se redondea y llega a quedar incluido en una membrana gruesa y
gelatinosa que ha sido identificada como callosa. Ésta es designada como
membrana de la célula madre del polen o membrana especial.
ESAU (1985) agrega que las células del tapete se caracterizan por su protoplasto,
que se tiñe densamente, y por tener núcleos destacados. En algunas angiospermas
el tapete permanece como capa bien definida, funcionando aparentemente como
tejido secretor, hasta que el polen madura. Sin embargo, en muchas otras, las
membranas adquieren el aspecto de masas plasmodiales, que se van
desintegrando a medida que el polen se desarrolla. El tapete interviene en la
nutrición de las células madres del polen y de las microsporas jóvenes. Estudios
ultraestructurales indican que el material de la membrana exterior del polen (exina)
es sintetizado por el tapete (HESLOP-HARRISON y HESLOP-HARRISON, 1970).
GOURRET y MISSET (1989) indican que el polen está limitado por una membrana
citoplasmática, una pared celulósica, la intina, y por la exina. La exina es una pared
ornamentada, constituida por un material resistente y flexible que es la
esporopolenina. Ésta comprende numerosas zonas más delgadas y menos
resistentes de forma alargada (colpos) o redondeadas (poros) que son las aperturas
por donde sale el tubo polínico. Por su parte, ESAU (1985) agrega que la exina está
formada principalmente por una sustancia lipoide, la esporopolenina, que es menos
soluble que la cutina o la suberina.
La mayoría de los granos de polen tienen surcos o colpos, lugares donde la exina es
muy delgada y la intina se encuentra bien desarrollada. El número de colpos puede
variar de uno a muchos. El tubo polínico emerge a través del orificio en el momento
de la germinación del grano de polen empujando hacia un lado la intina. Los colpos
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BREWBAKER (1959) añade que los granos con tres surcos (tricolpatos), se definen
como binucleados debido a dos divisiones seguidas: separación de microsporas y
antesis respectivamente.
Según BAKKER (1989), dependiendo de las condiciones de luz, las anteras abren
dos a ocho horas después que el sol ha salido para permitir que el polen se
disemine y caiga al estigma.
Una vez maduro, y cuando logra tener contacto con un estigma hembra compatible,
el grano de polen se rehidrata rápidamente y emite un tubo polínico que va a
conducir sus células espermáticas y su núcleo vegetativo a través de los tejidos del
estilo, hasta un óvulo. Esta rehidratación consecutiva es indispensable en la
germinación del grano de polen, y por ende para una buena fecundación o
polinización (NEGRE, 2000). Esta importancia de la humedad la apoya un estudio
realizado por VAN HOOT y VAN RAVESTIJIN (1963) en tomate (Lycopersicon
esculentum Mill.), donde confirman que la alta humedad, aún cuando puede tender
a mantener el polen dentro de las anteras, también promueve la germinación del
polen y mejora la adhesión de éste a la superficie estigmática de la flor.
Dentro de los factores que afectan la viabilidad del polen, se ha estudiado que las
bajas temperaturas causan infertilidad en muchas especies, como por ejemplo,
berenjena, cebolla, sorgo y pimentón. En flores de pimentón, bajas temperaturas
(18º C día/15º C noche) producen estambres carpeloides y polen no viable
(POLOWICK y SAWHNEY, 1985).
pimentón (Capsicum annuum L.), temperaturas bajo los 23,8º C retardan todo el
mecanismo de antesis y dehiscencia.
Para determinar la viabilidad del polen a nivel de laboratorio, existen varias pruebas,
entre éstas: germinación, actividad enzimática y tinción del citoplasma de granos de
polen (HESLOP-HARRISON, HESLOP-HARRISON y SHIVANNA, 1984).
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-Prueba de germinación
Esta prueba simula el crecimiento del tubo polínico en los tejidos estilares. En
efecto, el medio utilizado se asemeja a la composición del mucílago del estigma
(BREWBAKER y KWACK, 1963). Los protocolos cambian según el vegetal y los
autores, pero la mayoría utiliza el medio elaborado en 1963, medio Brewbaker y
Kwack o medio BK (RIHOVA, HRABETOVA y TUPY, 1996; LANSAC et al., 1994;
MERCADO, FERNÁNDEZ-MUÑOZ y QUESADA, 1994; DEMEKE y HUGUES,
1991; LEDUC, MONNIER y DOUGLAS, 1990; ALEXANDER y GANESHAN, 1989;
HICKS, STEPHENS y WEIGLE, 1987; JAMES, ARIYANAYAGAM y DUNCAN,
1987; PFAHLER y LISKENS, 1973).
Para ello, STANLEY y LISKENS (1974), sugieren que un tamaño de muestra de 200
granos de polen por placa puede ser satisfactorio.
(JOHRI y VASIL, 1961). Más aún, los mismos autores concluyen que el boro juega
un rol estratégico en la germinación del polen.
Según JOHRI y VASIL (1961) el rol del boro en la germinación y crecimiento del
tubo polínico sería triple: (a) promueve la absorción y el metabolismo del azúcar
formando complejos azúcar-boro, (b) incrementa la captación de oxígeno, y (c) está
envuelto en la síntesis de materiales pécticos de la pared del tubo polínico que está
en activa elongación.
Los mismos autores indican que la adición de agar a los medios de germinación no
incrementa la germinación, sin embargo, permite en algunos tipos de polen,
aumentar el largo del tubo.
pruebas permiten (a) teñir los constituyentes específicos de los granos de polen
maduros: almidón y callosa en particular gracias al azul de anilina o al yoduro de
potasio (DUMAS et al., 1984), (b) teñir simultáneamente la pared y el protoplasma
(ALEXANDER, 1969), e (c) indicar la presencia de enzimas funcionales como
peroxidasa, esterasa y deshidrogenasa (IBORRA et al., 1992).
Los mismos autores mencionan que el nitro azul tetrazolio podría ser útil en
determinar si un factor ambiental determinado (temperatura, pH, humedad) afecta la
capacidad del polen para llevar a cabo el metabolismo oxidativo.
Existe una temperatura óptima para toda reacción enzimática, aunque no siempre
es un punto fijo, sino que puede depender de la cantidad de enzima presente en el
medio reaccionante (VISSER, 1955). La reacción a 20º C no solamente es lenta,
sino que también es poco intensa. El polen positivo aparece primero de color rosado
que gradualmente se va haciendo más intenso para finalizar con la coloración roja
(VIEITEZ, 1952).
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La prueba FCR tiene la ventaja de ser muy rápida y fácil de interpretar, aún cuando
requiera invertir en un microscopio de epifluorescencia. Sin embargo, no es segura
en un 100%, ya que se pueden contar como vivos ciertos granos de polen
inmaduros (incapaces de germinar), o incluso como muertos ciertos granos donde la
membrana se desestructuró debido a la deshidratación y que fecundarían un óvulo
normalmente después de la rehidratación. En efecto, la deshidratación del polen
encadena una desestructuración de la membrana plasmática (debido a la
inestabilidad de la bicapa lipídica) (SHIVANNA, LINSKENS y CRESTI, 1991;
SHIVANNA y HESLOP-HARRISON, 1981).
Una aproximación de las pruebas in vivo implica ubicar el polen en el estigma de las
flores emasculadas y determinar el número de tubos polínicos en el estilo
(DEMPSEY, 1970; ABDALLA y VERKERK, 1968; VAN HOOT y VAN RAVESTIJIN,
1963) o bien determinar el número de semillas a la maduración de los frutos
(MAISONNEUVE y PHILOUSE, 1982; EL AHMADI y STEVENS, 1979; MCGUIRE,
1952). Sin embargo, estas metodologías requieren tiempo y son impracticables para
probar un número elevado de muestras.
- Marchitez de la flor: Se observa una marchitez de los pétalos con el cierre de la flor
al cabo de 48 horas si es que ocurrió la fecundación. El problema es que este
método no es cuantitativo (VAN INGHELANDT, 1999).
Polen de pecana (Carya illinoinensis) al secarlo a 35º C por una hora pierde 4% de
su peso fresco, preservando la viabilidad, pero al aumentar el tiempo de secado la
viabilidad decrece. Polen no secado y almacenado a –12º C por dos años tiene
viabilidad nula pese a haber sido bien conservado en bolsas herméticas. El grano de
polen pierde más rápidamente su viabilidad si no está seco (YATES et al., 1991).
Por otra parte, KING (1961) plantea que la baja temperatura incrementa la viabilidad
del polen almacenado. Además, tratar la muestra con un prefrío de 15-30 segundos
aparentemente no tendría ventajas. Sí sería necesario combinar este almacenaje a
baja temperatura con un proceso preliminar de desgasificado de la muestra.
VISSER (1955) aclara que los granos de polen que han sido almacenados resisten
bien la deshidratación y germinan mejor en soluciones con bajo contenido de
azúcares.
Polen de algunos cultivos hortícolas pueden sobrevivir por algunos meses con
viabilidad decreciente, a temperaturas justo por debajo de la congelación y con una
humedad relativa del ambiente controlada, si el polen no es disturbado (KING,
1961).
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LISKENS (1964) agrega que la viabilidad del polen durante el almacenaje depende
del grado en que su actividad vital es reducida, sin disminuir el poder de
germinación. El autor también menciona que la longevidad generalmente se
incrementa con la reducción de la humedad relativa durante el almacenaje, pero en
casos especiales, el contenido de agua no puede ser llevado bajo un nivel crítico.
En esos casos, un alto contenido de agua es indispensable para la longevidad.
Las condiciones de almacenaje son específicas para cada especie vegetal; por
ejemplo, el polen de algunas gramíneas necesita baja temperatura y alta humedad
(KHOSH-KHUI, BASSIRI y NIKNEJAD, 1976).
3. MATERIALES Y MÉTODOS
Los bloques de ocho plantas hembras se subdividieron en dos plantas para realizar
la polinización con el polen de los siguientes cuatro tratamientos:
La recolección fue realizada en tres ocasiones, con el fin de hacer coincidir las
fechas de polinización con los tres tiempos de almacenaje de los otros tres
tratamientos.
Una vez obtenido el stock total de polen de cada variedad, se procedió a dividir cada
una de ellas en tres cantidades por igual, correspondiendo a los tres tipos de
almacenaje. A su vez, cada una de estas 18 muestras fue divida en tres cantidades
por igual, correspondiendo a cada tiempo de almacenaje. Este stock (54 muestras)
fue el que se utilizó posteriormente para la polinización manual a cada tiempo de
almacenaje.
Las tres muestras de polen por variedad para el T2 fueron almacenadas en tubos
eppendorf de 1,5 ml, en un refrigerador casero a -18º C, durante una semana, dos
semanas y tres semanas respectivamente.
Las tres muestras de polen por variedad para el T3 fueron almacenadas en tubos
eppendorf de 1,5 ml, durante 24 horas a -18º C, y luego en viales criogénicos de 2
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ml, en nitrógeno líquido a -196º C, durante una semana, dos semanas y tres
semanas respectivamente.
Las tres muestras de polen por variedad para el T4 fueron almacenadas en viales
criogénicos de 2 ml, en nitrógeno líquido a -196º C, durante una semana, dos
semanas y tres semanas respectivamente.
Cada una de las muestras de polen fresco y polen almacenado fue utilizada en la
polinización, sobre un grupo de cinco flores, sobre cada una de las dos plantas
hembras que le correspondía, es decir, se polinizaron 10 flores por tratamiento para
cada tiempo. Por su parte, la polinización del polen fresco se hizo junto a cada fecha
de polinización de los tratamientos, para hacer la comparación correspondiente.
Cada tratamiento se evaluó in vitro e in vivo por las metodologías que se señalan a
continuación.
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Para evaluar la viabilidad in vitro del polen se tomaron pequeñas muestras (la punta
de un alfiler) de polen fresco y seco, del stock total recolectado para ser
almacenado, considerada ésta como la primera prueba de viabilidad realizada para
todas las variedades. Luego se evaluó la viabilidad de las muestras en el día de la
polinización, de acuerdo a su tipo de conservación y tiempo de almacenaje, junto
con el polen fresco cosechado 48 horas antes al día de la polinización. De esta
manera se permitió evaluar el efecto del almacenaje sobre la calidad del polen.
La metodología elegida para evaluar la calidad del polen fue la prueba de reacción
fluorocromática (FCR), por su facilidad, fiabilidad y rapidez en entregar los
resultados. Esta prueba ha sido ampliamente investigada y utilizada por HESLOP-
HARRISON, HESLOP-HARRISON y SHIVANNA (1984), quienes sugirieron que
el medio contenga lo siguiente:
esto puede distorsionar el conteo. Los granos considerados viables fueron sólo
aquellos que emitieron una marcada fluorescencia (Figura 3). Como mínimo se
contaron 200 granos en total por repetición (granos viables + granos no viables) y se
calculó el porcentaje de viabilidad. El conteo se realizó con la ayuda de un contador
manual.
3.3. Evaluaciones:
La cosecha se pudo relacionar con la viabilidad del polen, ya que los frutos tenían la
marca que identificaba el día de la polinización y el tratamiento aplicado.
Tiempos de Almacenaje
Conservación 1 Semana 2 Semanas 3 Semanas
Fresco (sin almacenaje) 6,1 c 6,1 c 5,9 c
Congelado a -18ºC. 5,2 a 4,9 a 4,8 a
Cong. 24 hr a -18ºC. y N. Líquido 5,4 b 5,8 bc 4,6 a
Nitrógeno Líquido 6,0 c 6,0 c 5,8 bc
Tiempos de Almacenaje
Conservación 1 Semana 2 Semanas 3 Semanas
Fresco (sin almacenaje) 9,3 c 8,5 bc 7,8 b
Congelado a -18ºC. 7,5 b 5,0 a 5,4 a
Cong. 24 hr a -18ºC. y N. Líquido 5,6 a 4,6 a 4,9 a
Nitrógeno Líquido 8,8 c 8,2 b 8,1 b
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Tiempos de Almacenaje
Conservación 1 Semana 2 Semanas 3 Semanas
Fresco (sin almacenaje) 7,6 c 7,4 c 7,3 c
Congelado a -18ºC. 7,3 b 5,1 a 5,5 a
Cong. 24 hr a -18ºC. y N. Líquido 5,2 a 4,9 a 5,0 a
Nitrógeno Líquido 7,0 b 6,5 b 6,2 b
Tiempos de Almacenaje
Conservación 1 Semana 2 Semanas 3 Semanas
Fresco (sin almacenaje) 6,6 c 6,6 c 6,5 c
Congelado a -18ºC. 6,0 b 5,1 a 4,5 a
Cong. 24 hr a -18ºC. y N. Líquido 5,3 a 5,6 a b 5,4 a
Nitrógeno Líquido 6,3 c 5,7 b 6,1 bc
Tiempos de Almacenaje
Conservación 1 Semana 2 Semanas 3 Semanas
Fresco (sin almacenaje) 6,4 b 6,2 b 6,8 c
Congelado a -18ºC. 5,1 a 4,9 a 4,5 a
Cong. 24 hr a -18ºC. y N. Líquido 5,6 a b 5,4 a 4,3 a
Nitrógeno Líquido 5,9 b 6,1 b 6,2 b
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Tiempos de Almacenaje
Conservación 1 Semana 2 Semanas 3 Semanas
Fresco (sin almacenaje) 7,7 c 7,3 c 6,6 bc
Congelado a -18ºC. 6,3 b 5,8 a b 5,0 a
Cong. 24 hr a -18ºC. y N. Líquido 4,8 a 5,1 a 5,0 a
Nitrógeno Líquido 6,6 bc 6,0 b 6,4 b
Los resultados muestran que el tratamiento de polinización con polen fresco siempre
demuestra ser la metodología más conveniente, al lograr un promedio de frutos
mayor para los distintos tiempos de almacenaje. Por su parte, el tratamiento con
nitrógeno líquido resultó tener el promedio de frutos más alto comparado con los
otros dos tratamientos de conservación. Entre los tres tipos de almacenaje, se
esperaba que el nitrógeno líquido presentara los promedios de frutos más altos a
medida que aumentaba el tiempo de almacenaje, al inhibir el metabolismo a -196º C
y favorecer con esto la reducción en la pérdida de la viabilidad. Sin embargo,
referente a esto último, los resultados no son concluyentes y no fueron los
esperados.
Uno de los factores que pudieron alterar los resultados es la situación estresante de
cambios de temperatura y humedad relativa a la cual se vieron afectadas las
muestras de polen. JACQUET (1990) menciona que previo a la conservación es
necesaria una deshidratación del polen con el fin de reducir la tasa de humedad de
éste. Esta reducción debe realizarse a tal punto de evitar la formación de cristales
de agua al alcanzar los -196º C. En el protocolo de esta investigación, la
deshidratación no fue estudiada y se realizó solamente un secado del polen según
la metodología descrita anteriormente, de 20-25º C durante 24 horas.
A su vez, JACQUET (1990) sostiene que para hacer uso del polen congelado en
nitrógeno líquido es necesaria una descongelación previa. Ésta se efectúa pasando
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los tubos cerrados por baño maría durante uno a dos minutos a 37º C. Es
importante supervisar que el agua no penetre al interior de los tubos, logrando una
descongelación homogénea. De lo contrario, si el polen no se descongela, al tener
contacto con el aire se deshidrata y muere. En el protocolo de esta investigación, la
descongelación consistió en pasar las muestras a 5º C durante 24 horas en un
refrigerador casero, probablemente reduciendo la viabilidad del grano.
Las hipótesis anteriores también las plantean LUZA y POLITO (1988), quienes
trabajaron con polen de pistacho y concluyeron que algunas muestras de polen
podían responder en forma diferenciada a las condiciones dadas, ya sea por su
edad o por estar sujetas a condiciones de estrés durante el almacenaje. Esto
significa que las diferencias observadas exclusivamente en el polen fresco, pueden
deberse a la edad de éste o bien a las condiciones ambientales existentes el día de
la cosecha de las flores.
Por otro lado, la investigación se realizó en un invernadero frío, en una época (fines
septiembre - octubre) en la cual aún pueden haber cambios importantes en las
temperaturas noche/día. MAISONNEUVE (1978) postula que bajas temperaturas
pueden afectar de manera importante la cuaja. Si éstas intervienen durante los 10
días después de la polinización, el resultado puede ser bueno, pero si las plantas se
ven expuestas a 10º C dos semanas antes de la polinización (durante la formación
del polen), el resultado puede ser detrimental. Además, las bajas temperaturas
afectarán la cantidad y calidad de polen producido y su posterior germinación se
retrasará.
Tiempos de Almacenaje
Conservación 1 Semana 2 Semanas 3 Semanas
Fresco (sin almacenaje) 158,3 c 140,9 bc 128,7 b
Congelado a -18ºC. 119,5 a 117,4 a 93,0 a
Cong. 24 hr a -18ºC. y N. Líquido 150,0 c 125,1 b 111,7 a
Nitrógeno Líquido 149,1 c 125,8 b 123,3 b
Tiempos de Almacenaje
Conservación 1 Semana 2 Semanas 3 Semanas
Fresco (sin almacenaje) 270,1 c 239,3 bc 117,6 a
Congelado a -18ºC. 264,0 c 237,0 bc 136,9 a
Cong. 24 hr a -18ºC. y N. Líquido 278,4 c 148,3 b 100,5 a
Nitrógeno Líquido 241,0 bc 177,5 b 145,3 b
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Tiempos de Almacenaje
Conservación 1 Semana 2 Semanas 3 Semanas
Fresco (sin almacenaje) 220,8 c 167,9 b 128,2 a
Congelado a -18ºC. 158,4 b 125,3 a 127,2 a
Cong. 24 hr a -18ºC. y N. Líquido 199,2 bc 136,7 a 131,5 a
Nitrógeno Líquido 215,2 c 130,8 a 124,2 a
Tiempos de Almacenaje
Conservación 1 Semana 2 Semanas 3 Semanas
Fresco (sin almacenaje) 154,0 c 133,8 a b 141,3 b
Congelado a -18ºC. 133,0 b 124,2 a 117,9 a
Cong. 24 hr a -18ºC. y N. Líquido 160,4 c 126,9 a 121,2 a
Nitrógeno Líquido 155,2 bc 131,1 b 128,4 a
Tiempos de Almacenaje
Conservación 1 Semana 2 Semanas 3 Semanas
Fresco (sin almacenaje) 136,8 c 136,4 c 117,0 b
Congelado a -18ºC. 102,5 a b 98,5 a 74,6 a
Cong. 24 hr a -18ºC. y N. Líquido 125,4 bc 112,6 b 87,8 a
Nitrógeno Líquido 134,3 c 118,5 b 111,6 b
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Tiempos de Almacenaje
Conservación 1 Semana 2 Semanas 3 Semanas
Fresco (sin almacenaje) 185,6 d 127,3 a 134,8 a b
Congelado a -18ºC. 144,2 b 121,9 a 124,8 a
Cong. 24 hr a -18ºC. y N. Líquido 166,8 bc 133,5 a b 117,7 a
Nitrógeno Líquido 170,5 c 174,2 c 134,6 a b
Los resultados muestran que el rendimiento en frutos y semillas son cada vez
menores a medida que aumentaba el tiempo de conservación. Esto resulta más
inquietante en el tratamiento con nitrógeno líquido, ya que según PARFITT y
ALMEHDI (1983) a -196º C (nitrógeno líquido) las actividades metabólicas están
casi ausentes, incluyendo procesos químicos y bioquímicos que, aún cuando
pueden reducir la viabilidad de semillas y otros tejidos vegetales, al almacenar
tejidos en nitrógeno líquido no hay cambios significativos en sus niveles de
viabilidad por largo tiempo. LISKENS (1964) también señala que en teoría la
actividad fisiológica del polen puede ausentarse a -190º C, y por lo tanto,
almacenajes a esta temperatura puede ser ilimitado sin una disminución en el
porcentaje de germinación.
Nº Semillas 0,0459 1
(0,31) n.s.
% Viabilidad 0,3511 0,6597 1
(3,16) * (5,95) *
* Indica diferencias significativas al 5%
() Estadístico de prueba distribución t-student, valor tabla t0.975(46)=2.015
Nº Semillas 0,3119 1
(2,23) *
% Viabilidad 0,3289 0,3419 1
(3,06 * (2,96) *
* Indica diferencias significativas al 5%
() Estadístico de prueba distribución t-student, valor tabla t0.975(46)=2.015
39
Se determinó que existe una asociación directamente proporcional entre todos los
factores.
Nº Semillas 0,4285 1
(3,46) *
% Viabilidad -0,008 0,4752 1
(0,05) n.s. (3,66) *
* Indica diferencias significativas al 5%
() Estadístico de prueba distribución t-student, valor tabla t0.975(46)=2.015
Nº Semillas -0,183 1
(1,26) n.s.
% Viabilidad -0,076 0,6213 1
(0,52) n.s. (5,38) *
* Indica diferencias significativas al 5%
() Estadístico de prueba distribución t-student, valor tabla t0.975(46)=2.015
Nº Semillas 0,4294 1
(4,25) *
% Viabilidad 0,3949 0,5342 1
(2,95) * (4,29) *
* Indica diferencias significativas al 5%
() Estadístico de prueba distribución t-student, valor tabla t0.975(46)=2.015
Se determinó que existe una asociación directamente proporcional entre todos los
factores.
Nº Semillas 0,1937 1
(1,34) n.s.
% Viabilidad 0,298 0,6255 1
(3,67) * (5,44) *
* Indica diferencias significativas al 5%
() Estadístico de prueba distribución t-student, valor tabla t0.975(46)=2.015
5. CONCLUSIONES
6. RESUMEN
Así, se hace necesario encontrar una metodología que permita testear la viabilidad
del polen de tomate (Lycopersicon esculentum Mill.).
En este estudio, se describió una metodología para testear la viabilidad del polen de
tomate, a través de la prueba de reacción fluorocromática (FCR) usando diacetato
de fluoresceína. La viablidad del polen puede ser evaluada en cinco minutos
determinando el porcentaje de granos de polen normales (redondos, lisos)
fluorescentes de una muestra. Este porcentaje obtenido tuvo una alta correlación
con el número de frutos y semillas evaluadas, lo que sugiere que esta prueba es
una buena metodología para estimar la viabilidad del polen de tomate.
Estos resultados podrían ser útiles para construir un banco de polen y esta
investigación sugiere que la crioconservación puede ser usada satisfactoriamente
para los investigadores de tomate.
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7. ABSTRACT
The influence of the effect of pollen storage on fruit yields and seed production in
tomato was also studied. Six varieties were assessed after three storage treatments:
1, 2 and 3 weeks. Flowers were pollinated with pollen samples stored for three
weeks at -196º C. They had similar fruit set and number of seeds per fruit as those
pollinated with fresh pollen, suggesting that this treatment is the best storage of
tomato pollen. When cryogenically stored pollen of ‘Dylan’, ‘Fla7775’, ‘Xavier’,
‘Nicolas’, ‘Torindo’ and ‘98NC111’ was used to pollinate ‘Nikon’, the number of fruits
and seeds formed per fruit differed significantly. Generally, pollen quality decreased
by the second and third week of storage, so continued research will be necessary to
find the best storage methodology.
These results could be useful in the construction of a pollen data bank and this study
suggests that pollen cryopreservation can be used successfully for tomato breeding.
45
8. LITERATURA CITADA
________. 1987. A method for staining pollen tubes in pistil. Stain technology
62(2):107-110.
BAKKER, J. C. 1989. The effects of temperature on flowering, fruit set and fruit
development of glasshouse sweet pepper (Capsicum annuum L.). J.
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