Columna de winogradsky

Presentado por:
Juan Carlos Romero
Sebastián Monroy
(estudiantes de ingeniería ambiental)

Docente:
Fabio Alberto Vásquez

Universidad central
28/05/2019
Bogotá D.C.
 OBJETIVOS:

1. Generar un ecosistema en el laboratorio donde aparezcan distintos tipos de

bacterias interrelacionadas metabólicamente y que se encuentran presentes en
ambientes acuáticos y sedimentos.
2. Identificar las diferentes etapas que ocurren durante el ciclo del azufre

INTRODUCCIÓN

la columna de winogradsky es un instrumento útil para estudiar y demostrar las

relaciones entre diferentes tipos de microorganismos en comunidades mixtas, y
constituye una forma de observar cómo los microorganismos ocupan “microespacios”
altamente específicos, de acuerdo con sus tolerancias medioambientales y sus necesidades
vitales, como los requerimientos de carbono y energía (altamente
específico). además, constituye una estupenda práctica para comprobar cómo see
stablece un ecosistema microbiano, ya que se puede reproducir un ecosistema natural
en el laboratorio, correspondiente a un sedimento con contenido orgánico de diferente origen
(restos de raíces de plantas, hojarasca etc.). es, en síntesis, un sistema completo y
autónomo de reciclaje, mantenido sólo por la energía lumínica.

MARCO TEÓRICO.

Fue desarrollada por el microbiólogo ruso Sergey Winogradsky (1853-1956), Es una

representación sencilla y a escala de cómo se encuentra formado un ecosistema
acuático natural, también permite conocer cómo se constituyen los tapetes
microbianos formados principalmente por diferentes clases de microorganismos, la
manera en que se desarrollan sus ciclos, y la interacción entre ellos que les permite
coexistir entre ellos. La columna representa un sistema completo y autónomo. En la
columna se pueden diferenciar claramente tres zonas que son: a. Zona aerobia o
superficial. Como su nombre lo indica se encuentra ubicada en la parte superior de
la columna y se caracteriza por contener una alta concentración de oxígeno y una
muy baja de azufre, en ella se puede encontrar abundantes poblaciones de
bacterias de diferentes clases, que generalmente se desarrollan en regiones
acuáticas ricas en materia orgánica como arroyos poco profundos y estanques. A
pesar de ser una zona muy baja en concentración de azufre, pueden llegar
pequeñas cantidades de H2S que permite el desarrollo de bacterias que se
especializan en oxidar el azufre como Beggiatoa y Thiobacillus, que además
sintetizan el CO2. La formación del tapete microbiológico se puede observar en las
zonas superiores formada principalmente por cianobacterias dándole una
coloración verde y su principal característica es que realizan el proceso de la
fotosíntesis. b. zona microaerofilia. Se caracteriza por presentar una concentración
parcial de oxígeno y de azufre, en ella se desarrollan principalmente los organismos
facultativos y donde podemos encontrar COLUMNA DE WINOGRADSKY.
LABORATORIO DE QUÍMICA AMBIENTAL algunas bacterias sulfatos reductores y
bacterias fotoheterótrofos como el Rhodospirillum y rhodospseudomonas que no se
desarrollan bien en concentraciones altas de H2S, en la columna se identifican por
su coloración naranja. c. Zona anaerobia o inferior En esta zona se encuentra una
muy baja concentración de oxígeno y en ella se desarrollan diferentes tipos de
microorganismos que crecen en condiciones anaerobias: los que presentan
respiración anaerobia y fermentan la materia orgánica degradándola de manera
incompleta. En la parte inferior de la columna se desarrollan bacterias que necesitan
de una alta concentración de H2S formando una capa rosada o purpura como el
caso de la Amoebobacter, y luego de unas semanas bajo las mismas condiciones
del género Clostridium. La coloración negra denota la presencia de
microorganismos sulfatos reductores como por ejemplo el Desulfovibrio,
Desulfotomaculum o Desulfomonas. La coloración es debida a la precipitación de
sulfuro de metales pesados (hierro, manganeso), como se explica en la siguiente
reacción:
MATERIALES Y REACTIVOS
 2 Botellas plásticas de 500 mL
 2 hojas de papel periódico
 2 Probeta de vidrio
 Beaker de 400 ml
 Sulfato de calcio
 Carbonato de calcio
 Muestra de sedimento de un charco o río
 Arena (color claro)
 Agua destilada
 Agua de charco de donde tomo la muestra
 2 Platos desechable
 Restos de hojas, plantas, ramas, secas etc.
 Espátula
 Papel vinipel
 Papel aluminio
 Balanza analítica

3. PROCEDIMIENTO

Realizar el experimento en dos botellas, una de las cuales servirá como testigo o
control.
1. Para realizar la columna se utiliza una probeta de 100 ml o una botella plástica
de agua o gaseosa.
2. Añadir una fuente de carbono y energía para la cadena trófica microbiana, en
este caso es celulosa, que puede administrarse en forma de tiras de papel de filtro
o de periódico, hierba, serrín, etc. Es importante que la celulosa permanezca en el
fondo o en la zona intermedia, pero no en la zona superficial, ya que las bacterias
que degradan la celulosa son anaeróbicas. Deben evitarse los sustratos fácilmente
fermentables, que puedan producir una formación excesiva de gas.
3. Se llena la columna con lodo, de una charca o del fondo de un río, ricos en materia
orgánica, hasta 1/3 de su volumen. COLUMNA DE WINOGRADSKY.
LABORATORIO DE QUÍMICA AMBIENTAL
4. Se añade a la mezcla una fuente de sulfato (sulfato de calcio, CaSO4 o yeso) y
un agente tempanador del pH (carbonato de calcio, CaCO3).
5. El lodo también puede mezclarse con el contenido de un huevo, como fuente de
azufre. Se añade también bicarbonato sódico (NaHCO3), cloruro de amonio
(NH4Cl) y tampón fosfato pH 7,3. La mezcla se compacta para forzar la salida de
las burbujas de aire, hasta obtener una capa de unos 10 cm.
6. Se añade agua, de la propia charca o río donde se haya recogido el fango, hasta
rellenar casi completamente la columna (hay que dejar con aire unos 5 cm de la
misma). Si no se dispone de suficiente agua de río, se puede terminar de llenar la
columna con agua corriente.
7. Se coloca la tapa del envase, para evitar la evaporación. Se coloca cerca de una
ventana donde reciba luz solar atenuada, y se deja durante varias semanas.
8. Realizar el mismo procedimiento desde el punto 1 al 7 con una segunda probeta
de 500 mL, columna que se envolverá en papel aluminio para incubarla bajo
condiciones de oscuridad.
9. Haga observaciones de su columna diariamente durante 1 semana y cada tercer
día durante las siguientes tres semanas. Registre los cambios macroscópicos que
se presenten.
10. Mantenga el volumen de agua adicionando agua destilada en caso de observar
evaporación.
11. Se examinará la columna periódicamente, anotando los cambios de color y
grosor de las diferentes capas. Se tomarán muestras de las capas para estudiar los
diferentes tipos de microorganismos

CUESTIONARIO

Realice los dibujos correspondientes a cada una de las observaciones realizadas.

En las siguientes imágenes se pude apreciar en el transcurrir de los días, como

cambia de color levemente en su interior formándose las bacterias esperadas.
Posteriormente se realizó el procedimiento en el laboratorio de la universidad
después de aproximadamente 2 meses de dejar las muestras tanto en el sol como
en la oscuridad.

En la parte superior de la columna se evidencia la aparición de bacterias aeróbicas

que se encuentran principalmente en ambientes acuáticos. Esta zona de la
columna está rica en oxígeno y poco azufre, por esta razón se observan algas, las
cuales realizan fotosíntesis y liberan oxígeno.
Seguido de esto se tomaron muestras de la botella que no tuvo interacción con la
luz, para observar mejor las bacterias del fondo y se realizó el siguiente
procedimiento con una muestra de dicha botella:

 Extender y fijar la muestra del fondo o del medio

 Adicionar cristal de violeta ( 1 minuto)
 Lavar con agua
 Adicionar lugol (30 segundos)
 Lavar con alcohol-cetona
 Adicionar fucscina o safranina ( 1 minuto )
 Lavar con agua y secar
Este paso se hizo con el fin de teñir de las bacterias gram positivas y negativas. En
el resultado de este procedimiento se encontró:

Como se relaciona la práctica con los ciclos biogeoquímicos

El Ciclo del Carbono

El carbono es esencial para construir las moléculas orgánicas que caracterizan a

los organismos vivos. La principal fuente de carbono para los productores es el CO2
del aire atmosférico, que también se halla disuelto en lagos y océanos. Además,
hay carbono en las rocas carbonatadas (calizas, coral) y en los combustibles fósiles
(carbón mineral y petróleo). Durante la fotosíntesis, las plantas verdes toman CO

del ambiente abiótico e incorporan el carbono en los carbohidratos que

sintetizan. Parte de estos carbohidratos son metabolizados por los mismos
productores en su respiración, devolviendo carbono al medio circundante en forma
de CO2

. Otra parte de esos carbohidratos son transferidos a los animales y demás

heterótrofos, que también liberan CO2 al respirar.

El ciclo completo del carbono requiere que los descomponedores metabolicen los compuestos
orgánicos de los organismos muertos y agreguen nuevas cantidades de CO2 al
ambiente. A todo lo anterior debe sumarse la enorme cantidad de CO2
 que llega a la atmósfera como producto de la actividad volcánica, la erosión de las rocas
carbonatadas y, sobre todo, la quema de combustibles fósiles por el hombre.

Ciclo del Nitrógeno

Los seres vivos cuentan con una gran proporción de nitrógeno en su composición química. El
nitrógeno oxidado que reciben como nitrato (NO3–) es transformado a grupos
aminoácidos(asimilación). Para volver a contar con nitrato hace falta que los
descomponedores lo extraigan de la biomasa dejándolo en la forma reducida de ion
amonio (NH4+), proceso que se llama amonificación; y que luego el amonio sea
oxidado a nitrato, proceso llamado
nitrificación. Así parece que se cierra el ciclo biológico esencial. Pero el amonio y e
l nitrato son sustanciasextremadamente solubles, que son arrastradas fácilmente
por la escorrentía y la infiltración, lo que tiende a llevarlas al mar. Al final todo el
nitrógeno atmosférico habría terminado, tras su conversión, disuelto en el mar. Los
océanos serían ricos en nitrógeno, pero los continentes estarían prácticamente
desprovistos de él, convertidos en desiertos biológicos, si no existieran otros dos
procesos, mutuamente simétricos, en los que está implicado el nitrógeno atmosférico (N). Se
trata de la fijación de nitrógeno, que origina compuestos solubles a partir del N, y la
desnitrificación, una forma de respiración anaerobia que devuelve Na la atmósfera. De
esta manera se mantiene un importante depósito de nitrógeno en el aire (donde
representa un 78% en volumen).
Ciclo del Azufre

Es menos importante que los otros elementos que hemos visto, pero imprescindible porque
forma parte de las proteínas. Su reserva fundamental es la corteza terrestre y
es usado por los seres vivos en pequeñas cantidades. El azufre es un nutriente
secundario requerido por plantas y animales para realizar diversas funciones,
además el azufre está presente en prácticamente todas las proteínas y de esta
manera es un elemento absolutamente esencial para todos los seres vivos. El
azufre circula a través de la biosfera de la siguiente manera, por una parte se
comprende el paso desde el suelo o bien desde el agua, si hablamos de un sistema
acuático, a las plantas, a los animales y regresa nuevamente al suelo o
al agua. Algunos de los compuestos sulfúricos presentes en la tierra son llevados
al mar por los ríos. Este azufre es devuelto a la tierra por un mecanismo que
consiste en convertirlo en compuestos gaseosos tales como el ácido sulfhídrico
(H2S) y el dióxido de azufre (SO). Estos penetran en la atmósfera y vuelven a tierra
firme. Generalmente son lavados por las lluvias, aunque parte del dióxido de azufre
puede ser directamente absorbido por las plantas desde la atmósfera. La actividad
industrial del hombre está provocando exceso de emisiones de gases sulfurosos a
la atmósfera y ocasionando problemas como la lluvia ácida.
Ciclo del Hierro

El hierro es otro de los elementos indispensables para el desarrollo del ser vivo,
entre otras funciones es necesario para la génesis de los glóbulos rojos por su
presencia en la hemoglobina, también es necesario para determinados seres vivos
como pigmento transportador de del oxígeno. En la biosfera aparece como hierro
orgánico, hierro inorgánico bien soluble o en sedimento. La aparición de sedimentos de
hierro lo desencadenan los cambios en el pH del medio al igual que algunos
microorganismos, a este grupo de bacterias se le denominan ferrobacterias -
Gallionella, Siderocapsa y Sideromonas -. El hierro orgánico pasa a formas de
mayor o menor estado de oxidación. El ion ferroso puede transformarse en ion
férrico y viceversa pasando finalmente de nuevo hierro
organico. Algunas bacterias como el Thiobacillus ferroxidans obtiene la energía a
partir de la oxidación delhierro, de sulfato ferroso a sulfato férrico, con esta energía
que obtienen reducen el anhídrido carbónico (reducción no fotosintética)

¿Por qué se adiciona sulfato de calcio a la muestra sedimento?

RTA:

Funciona como base de sulfato. Se liberan sulfuros que difunden a la zona superior
oxigenada creando un gradiente en el que se desarrollan bacterias fotosintéticas
que utilizan el azufre. Por encima de esta zona pueden desarrollarse las bacterias
purpuras que no utilizan azufre. Cianobacterias crecen en la parte superior y liberan
oxigeno que mantiene aerobia esta zona.

¿Cuál es la función de los restos de hojas, plantas, ramas? etc. en la columna?

RTA:

La función de los restos de hojas, plantas, ramas y demás en la columna, es simular

la materia orgánica que se encuentra de forma natural en el ambiente. Así logrando
una simulación más real que se puede dar de forma natural en el medio. Además,
la materia orgánica promueve el crecimiento de microorganismos y para algunos de
estos sirve como nutriente.

¿Por qué razón la columna testigo se mantiene en la oscuridad durante el

transcurso del experimento?

RTA:
 Esta columna se mantiene en la oscuridad con el fin de poder determinar si en ésta
podrán proliferar microorganismos en la misma cantidad o menor cantidad que en
la columna expuesta a la luz solas. Por otro lado, la columna en mención se
mantiene tapada para evitar
laevaporación. Además, esta columna simula un micro-
ecosistema o microambienteque ilustra cómo los microorganismos ocupan
microespacios altamente específicos de acuerdo con sus necesidades vitales, tales
como: requerimientos de carbono, energía y oxígeno, así como la interdependencia,
prescindiendo de la energía solar.

Microorganismos presentes en la columna

Una vez establecida la columna, se pueden diferenciar tres zonas características

envase a su concentración relativa de oxígeno:

1) zona aeróbica, es la más superficial, dispone de una alta concentración de

oxígeno;

2) zona microaerófilo, inmediatamente debajo de la anterior, con una menor

concentración de oxígeno;

3) zona anaeróbica, que constituye el lecho de lodo.

Las algas y cianobacterias forman una capa superficial de color verde brillante, y al
producir oxígeno ayudan a mantener la aerobiosis en la zona superior de la
columna. Mientras que, en el fondo de la columna, las bacterias reductoras del
sulfato producen sulfuro, que provoca el crecimiento de bacterias rojas y verdes del
azufre (fotótrofos anoxigénicos). De modo que se establecen dos gradientes en la
columna, uno de oxígeno y otro de sulfuro de hidrógeno (H2S).

Las bacterias quimiorganotrofos crecen a lo largo de toda la columna, los

microorganismos aerobios y microaerófilos en la parte superior, los anaerobios en
las zonas donde hay sulfuro de hidrógeno.