Guia de Practicas de Operaciones Unitarias II

UNIVERSIDAD CATÓLICA DE SANTA MARÍA
FACULTAD DE CIENCIAS FARMACÉUTICAS

BIOQUIMICAS Y BIOTECNOLOGICAS
ESCUELA PROFESIONAL DE INGENIERÍA

BIOTECNOLÓGICA
GUIA DE PRACTICAS DE OPERACIONES

UNITARIAS II
2019
Ing. Cinthia Córdova Barrios

Ing. Irma Valdivia Carbajal
El término “biotecnología” es
relativamente nuevo, sin embargo, la
U.C.S.M. E.P. Ing. Biotecnológica VI Semestre
Prácticas de Operaciones Unitarias II
biotecnología está presente en la vida cotidiana, siendo una actividad
antigua, que comenzó hace miles de años cuando el hombre descubrió la
obtención del pan, queso, vino, cerveza y yogurt por fermentación.
Por tanto, consideremos que la Biotecnologí a es la utilización de

organismos vivos como bacterias, hongos, plantas o animales, parte de
ellos o los productos de su metabolismo para la obtención de un bien o
servicio útil para el hombre.
Al comprender mucho más cómo ocurren los procesos biológicos que

permiten la obtención de productos biotecnológicos, se han desarrollado
nuevas técnicas a fin de modificar o imitar algunos de esos procesos y
lograr una variedad mucho más amplia de productos, estos conocimi entos,
dieron lugar al desarrollo de la biotecnología moderna, que utiliza
técnicas de ingeniería genética, para modificar y transferir genes de un
organismo a otro.
La Ingeniería Biotecnológica con su gran avance científico tecnológico,

actualmente está liderando el desarrollo socioeconómico, ya que conjuga
los principios básicos, técnicos y científicos de las ciencias físicas,
químicas y biológicas con la ingeniería, para la obtención de un bien o
servicio útil para mejorar la calidad de vida del ser hum ano.
Dentro de la industria biotecnológica, el bioproceso es una parte esencial

que utiliza sistemas biológicos para generar un producto de importancia
económica como proteínas, enzimas, ácidos orgánicos, polisacáridos,
vitaminas, biocombustibles y minerales; con aplicación en la industria
farmacéutica, alimentaria, textil, papelera, de la biominería, de los
detergentes y en la generación de energía.
Esta asignatura pertenece al área de formación especializada, de

naturaleza teórico-práctica y que pretend e explicar los principios básicos
y fundamentos de las operaciones unitarias que se llevan a cabo en los
procesos de recuperación, concentración, purificación y formulación de
productos biotecnológicos. La comprensión de dicho estudio, le permitirá
realizar el diseño y la configuración óptima de l os bioprocesos implicados
en la obtención de productos de importancia económica con aplicación en
la Biotecnología ambiental, médica, animal, industrial y vegetal.
SEGURIDAD EN EL LABORATORIO
El trabajo en el laboratorio por sus propias características, presenta una serie de

riegos de origen y consecuencias variadas, los cuales pueden estar relaciones con la
manipulación de reactivos, materiales y equipos. (1)
La manera más eficiente de poder trabajar con sustancias químicas y biológicas, es
aquella en la que se reduzca o minimice la probabilidad de que suceda un accidente
o exposiciones a compuestos. Para poder reducir la probabilidad de accidentes
deben tener en cuenta lo siguiente:
• Practicar el hábito de la prevención de accidentes (Infórmate sobre la

peligrosidad de las sustancias a utilizar).
• Utilizar equipo de protección personal (Ej.: mandil, guantes, barbijos, etc.) todo
el tiempo que se esté en el laboratorio.
• Si vas a hacer experimentos en lo posible utilizar la menor cantidad de
reactivo.
• Si es posible sustituir un reactivo que representa mucho riesgo por otro de
menor riesgo, hazlo.
• Analizar siempre tu entorno de trabajo e identificar los posibles actos inseguros
en el laboratorio.
Al trabajar en un laboratorio, existe el peligro potencial de poder sufrir un accidente

durante el manejo de las sustancias y de los materiales que se utilizan, los cuales
en un porcentaje alto son producidos por los errores humanos (Figura 1.).
SUSTANCIA ERROR
ACCIDENTES
PELIGROSA HUMANO
*Fuente: Elaboración Propia
Figura 1. Factor que produce un accidente en el laboratorio.
Es importante generar los lineamientos de seguridad para el trabajo en el

laboratorio, conociendo las precauciones y medidas generales que debemos conocer
para el adecuado trabajo al realizar nuestros experimentos.
“Realizar los procedimientos con seguridad no es solamente la manera correcta de

trabajar, es la única manera de hacerlo”.
Por consiguiente, cuando se trabaja en el laboratorio, se debe tener presente una

serie de reglas o consejos que disminuyen y en algunos casos logran evitar los
accidentes.
REGLAS Y CONSEJOS PARA EVITAR ACCIDENTES
PAUTAS EN EL TRABAJO DE LABORATORIO
ORDEN
El área de trabajo siempre debe estar limpia y con los materiales ordenados.
VENTILACIÓN
Conviene trabajar siempre en un lugar bien ventilado.
VESTIMENTA
Es necesario el uso de una vestimenta protectora adecuada.
ESTUDIE CADA EXPERIENCIA ANTES DE CLASE

Ahorrará tiempo y evitará errores y accidentes innecesarios. Siga todas las
indicaciones que le han sido designadas con seriedad.
NUNCA COMER, BEBER O FUMAR

Ni apoyar comida sobre la mesa del laboratorio.
NO INTERFERIR EL PASO
No se debe permitir el almacenamiento o disposición momentánea de elementos
que interfieran los corredores del laboratorio.
REGISTRAR LOS INCIDENTES

Comunicar inmediatamente para evitar accidentes posteriores
TRABAJANDO CON PRODUCTOS QUIMICOS
ROTULAR
Etiquetar cualquier recipiente que sea llenado.
CALENTAR UN LÍQUIDO EN UN TUBO DE ENSAYO

No mirar al interior del tubo durante el calentamiento y siempre mantenga este
lejos de los demás.
NUNCA ASPIRE A TRAVES DE UNA PIPETA CON LA BOCA

Para llenar la pipeta use una propipeta o perilla.
USO DE BURETA
Llenar la bureta a una altura en la cual pueda observarse sin dificultad.
OLOR DE LAS SUSTANCIAS GASEOSAS

Solo si fuera necesario, para percibirlo mueva lentamente la mano y aspire con
precaución, evitando el contacto directo.
LIQUIDOS VOLÁTILES
Los experimentos que producen gases deben ser realizados en una campana de
extracción.
LIQUIDOS INFLAMABLES
Mantener lejos de una fuente de encendido o llama abierta. Para calentarlo trabaje
con un baño de agua, aceite o vapor.
RECIPIENTES CON GRANDES VOLÚMENES DE SUSTANCIAS

No deben ser guardados en compartimientos ubicados en una altura superior a la
altura propia del personal del laboratorio.
TAPONES Y NEXOS DE GOMA EN MATERIAL QUEBRADIZO

Nunca fuerce dentro o fuera los nexos de goma de material que se pueda quebrar.
La glicerina o el detergente facilitan dicha tarea.
ARMADO DE EQUIPOS
Usar soportes que se apoyen bien en la mesa.
Vigilar continuamente los aparatos con centro de gravedad alto.
RESIDUOS QUIMICOS
Informarse sobre la forma adecuada de desechar los restos y residuos químicos.
LIMPIEZA DEL MATERIAL AL FINALIZAR EL TRABAJO

A fin de evitar contaminaciones y/o reacciones no deseadas en posteriores
experimentos.
PRIMEROS AUXILIOS
Contar con un adecuado equipo para primeros auxilios y conocer los pasos a seguir
en cada caso luego de un accidente.
PROTECCION
Vestimenta protectora
Mandil:
Absolutamente necesario.
Lentes de seguridad (goggles o safety glasses):

Lo recomendable es usar lentes de seguridad (goggles o safety glasses) y esto
es obligatorio cuando se lleven a cabo operaciones de laboratorio de alto riesgo,
como por ejemplo: destilaciones al vacío, destilación de grandes cantidades de
líquidos inflamables y experimentos que requieran gran cantidad de sodio metálico.
Calzado:
Debe poseer suela sólida y firme que asegure completa y totalmente el pie.
Guantes:
Deben utilizarse cuando se trabaja con químicos ácidos. Es importante tener en
cuenta si el material de los guantes es el apropiado para los químicos con los
cuales se esté trabajando, ya que algunos químicos pueden penetrar los guantes
estándares con mucha facilidad.
PRIMEROS AUXILIOS EN EL LABORATORIO
Quemaduras
Cualquiera que sea la causa de una quemadura, como por ejemplo con fuego,
metal caliente, líquidos calientes, ácidos, álcalis caústicos, etc. se debe:
1. Remover cualquier residuo de ropa empapado con ácido o álcali.

2. Lavar con agua helada completamente y de manera profusa el área
quemada por al menos 10 minutos.
3. Secar suavemente con un manta seca ó usar algodón.
4. Si es posible, cubrir el área afectada con gasa estéril.
5. Transferir inmediatamente al paciente al hospital y que el médico
proporcione el tratamiento más adecuado.
Casos especiales
Quemaduras con bromo: Cuando haya experimentos que involucren el uso de

bromo líquido se recomienda tener éter petróleo (80º-100º C) a la mano. Si el
bromo salpica a las manos, lavar el área afectada con el éter de petróleo y procure
remover tanto bromo como sea posible. Subsecuentemente, la piel, que ha estado
en contacto con el éter de petróleo, se vuelve suave y se puede sentir algo de
picazón, se puede remover una pequeña película de grasa y luego se puede aplicar
aceite de oliva.
Quemaduras con sodio: Esto es frecuentemente causado por pequeñas

lentejuelas de sodio o de hidróxido de sodio. Remover con una pinza tanto sodio
sea posible usando unas pinzas, lavar bien con agua helada, luego añadir ácido
acético al 1% y finalmente cubrir con gasa empapada con aceite de oliva.
Quemaduras por fósforo: Lavar bien la zona afectada con agua helada y luego
empapar con solución de AgNO3 al 1%. Si la quemadura es seria, lavar
nuevamente.
Accidentes en los ojos:
Cualquiera que sea el líquido (ácido o álcali) que haya penetrado a los ojos, lavar
inmediatamente de manera profusa y continuar con agua helada durante al menos
10 minutos, además debe limpiar las cejas y piel alrededor de los ojos, para
asegurar que el producto químico ha sido retirado, luego acuda inmediatamente a
un oftalmólogo.
Si trozos de vidrio han penetrado, por ningún motivo se debe intentar remover los
trozos de vidrio, pues esto debe ser directamente hecho por el correspondiente
médico especialista. El daño puede ser peor si una persona sin la necesaria práctica
lo hace.
Cortes
La mayoría de cortes en el laboratorio son causados por vidrio de laboratorio,

operaciones cuando se trata de abrir frascos que tienen su tapa demasiada
ajustada, o por tubos de ensayo u otro material de vidrio que se quiebra durante un
experimentos. Todos estos accidentes pueden evitarse si se trabaja con cuidado y
sobre todo si se aplica el sentido común.
Cuando ocurra un corte lo primero que se debe hacer es enjuagar la herida con
bastante agua, luego limpiarla con una solución antiséptica, secando la herida y los
alrededores de la parte afectada, para luego cubrirla con una curita esterilizada.
Venenos
Venenos líquidos y sólidos
1. Si se queda en la boca y no se ha tragado, escupirlo inmediatamente y lavar

la boca de manera repetida con agua.
2. Si se tragó, cualquiera que fuera la sustancia (ácido, álcali, arsénico o
compuestos mercuriales) diluirlo ingiriendo por lo menos 500 mL de leche o
agua.
3. No se debe hacer algún intento para que el paciente vomite, especialmente
si se ha ingerido álcalis o ácidos.
4. Luego solicitar atención médica urgente.
Antes de usar cualquier producto químico, es importante informarse acerca de los
posibles peligros en su uso. Además del nombre y el símbolo de peligro que se
encuentra en la etiqueta del envase, también se puede encontrar información útil
sobre los riesgos específicos del producto, así como las precauciones a seguir en la
sección de guías de riesgos o guías R y guías de seguridad o guías S.
Además, es importante consultar la ficha técnica de los productos químicos, las

cuales son de carácter obligatorio en todos aquellos laboratorios que se trabajan
bajo las normas de Buenas Prácticas de Laboratorio (Good Laboratory Practices,
GLP). Estas fichas se denominan usualmente Material Safety Data Sheet, MSDS
o SDS, (Hoja de Datos de Seguridad del material).
Las MSDS o SDS especifican los cuidados que se debe de tener, como por ejemplo
niveles de toxicidad, incompatibilidades, etc.
Las SDS pueden ser conseguidas a través de cualquier buscador en Internet. (1)
PRACTICA Nº 1.
AISLAMIENTO Y CULTIVO DE MICROORGANISMOS BIOLIXIVIANTES
1. OBJETIVOS:
1.1. Preparar el medio de cultivo 9K líquido y sólido.

1.2. Aislar microorganismos biolixiviantes en medio de cultivo 9K líquido a
partir de su ambiente nativo.
1.3. Cultivar microorganismos biolixiviantes en medio de cultivo 9K solido.
1.4. Mantener el desarrollo de la biomasa en las condiciones de incubación.
1.5. Inculcar en el proceso enseñanza-aprendizaje valores de puntualidad,
responsabilidad, cooperación y perseverancia.
2. MARCO TEÓRICO:
La observación de las transformaciones naturales que sufrían diversos

compuestos de hierro y azufre, procedentes de la disolución de ciertos
minerales, hizo que desde principios del siglo XX se viniera postulando la
presencia de microorganismos quimiolitótrofos en ciertas aguas. Sin embargo,
no se logró aislar un tipo de bacterias del genero Acidithiobacillus de las aguas
de drenaje de unas minas de carbón bituminoso, ni se pudo dar una explicación
clara de estos fenómenos, hasta mediados del siglo XX. (2)
En 1951, Temple y Colmer, comprobaron que una de estas bacterias era

responsable de la rápida oxidación del hierro ferroso y, en consecuencia, de la
acidez de estas aguas por la hidrólisis del ión férrico producido. La denominaron
Thiobacillus ferrooxidans, ya que presenta diferencias fisiológicas y morfológicas
respecto a otras bacterias de este mismo género. Esta bacteria ha sido aislada,
posteriormente, por numerosos investigadores, observándose una amplia
distribución en microambientes de naturaleza ácida, con la presencia de ión
ferroso o sulfuros metálicos, ricos en metales, convirtiéndose en una buena
opción para su lixiviación. (2) (3)
La lixiviación bacteriana, también conocida como Biolixiviación puede ser

definida como un proceso natural de disolución que resulta de la acción de un
grupo de bacterias específicas para lixiviar, o extraer, metales o concentrados
minerales presentes en las minas. El producto final de la biolixiviación es una
solución ácida que contiene el metal en su forma soluble.
La lixiviación bacteriana es un excelente ejemplo de cómo la actividad biológica
controlada puede servir al hombre en la explotación de los recursos naturales sin
el uso intensivo de energía. (3)
Desde la década del 50, en que se descubrió que los responsables de la

acidificación de aguas de minas eran microorganismos, hasta hoy se ha
avanzado mucho en el entendimiento de los mecanismos a través de los cuales
se llevan a cabo la solubilización de las especies metálicas, y en la aplicación de
estos principios en desarrollos tecnológicos.
En la Industria minera se hace frecuente la búsqueda de métodos menos

contaminantes en la extracción de metales, ya que se ha visto que los métodos
convencionales generan alto costo en lo económico y ambiental, debido a la
utilización de procesos químicos que producen alto índice de contaminación.
Dependiendo de la composición del mineral sulfurado, la lixiviación bacteriana es
una alternativa biológica ventajosa a las tecnologías pirometalúrgicas por
demandar menores inversiones de capital y tener menores costos de operación.
Por otra parte la no emisión de SO2 la convierten en una tecnología más limpia,
cuestión no menor frente a la creciente preocupación pública por los efectos
ambientales de operaciones industriales. Esta tecnología permite además el
beneficio de minerales marginales y la exploración de botadores que en muchos
casos constituyen hoy pasivos ambientales, y al ser una tecnología de fácil
aplicación es atractiva para ser empleada en países en vías de desarrollo.
Desde el aislamiento de la primera cepa de Acidithiobacillus ferrooxidans han

sido muchos los medios propuestos para el cultivo de este microorganismo,
siendo los medios más conocidos como 9K y T&K, los que mejores resultados
muestran en el crecimiento microbiano. En cuanto al cultivo de Acidithiobacillus
ferrooxidans en medio sólido es fundamental para la purificación del mismo, para
los estudios genéticos, así como la estimación del tamaño de la población
mediante el recuento de microorganismos viables. Las bacterias de este género
se caracterizan por ser quimiolitoautótrofas, mesófilas y acidófilas. (2)
Entre los parámetros básicos que influyen sobre el comportamiento del

microorganismo, cabe destacar, el pH, temperatura, oxígeno y dióxido de
carbono. Sin embargo, se pueden producir efectos sinérgicos para el crecimiento
de dichos microorganismos. (4)
3. MATERIALES:
3.1. Muestras:
• Drenaje ácido de roca.
• Drenaje ácido de mina.
• Mineral.
• Relaves.
3.2. Reactivos:
• Agarosa.
• Cloruro de potasio, KCl.
• Fosfato ácido de potasio, K2HPO4.
• Nitrato de calcio, Ca(NO3)2.
• Sol. Ácido sulfúrico 5N (H2SO4).
• Sol. Etanol 70%.
• Sulfato de amonio, (NH4)2SO4.
• Sulfato de magnesio heptahidratado, MgSO4.7H2O.
• Sulfato ferroso heptahidratado, FeSO4.7H2O.
3.3. Material de vidrio:

• Baguetas.
• Balones, 500 mL.
• Beakers, 250 y 400 mL.
• Fiolas, 100, 250 y 500 mL.
• Matraces, 250 mL.
• Placas petri.
• Probetas, 100 mL.
• Pipetas, 10 mL.
• Pipetas Pasteur.
3.4. Otros:
• Cinta universal de pH.
• Espátula.
• Filtro millipore whatman (0,2 um)
• Jeringa, 20 mL.
• Mecheros.
• Micropipeta, p20.
• Parafilm.
• Piceta.
• Plastic wrap.
• Tijeras.
• Tips.
• Tubos de centrifuga.
3.5. Aparatos:
• Autoclave.
• Balanza analítica.
• Centrífuga.
• Cocina eléctrica.
• Potenciómetro.
• Shaker.
• Ultrasonido.
4. METODOLOGÍA:
4.1. Toma de muestra:

Se ubicó geográficamente el lugar donde se tomaron las muestras con un
GPS (Sistema de posición geográfica) en las siguientes coordenadas.
Se realizó la caracterización morfológica, aspecto y coloración de la
muestra.
4.2. Preparación del medio 9K líquido y sólido:

El medio 9K se preparó según la formulación propuesta por Silverman y
Lundgren (1959) (2), la cual se detalla a continuación en la Tabla 1:
Tabla 1. Composición del Medio 9K propuesto por Silveman y Lundgren

(1959).
Solución A
Componente g/L
Sulfato de Amonio 3.0
Cloruro de Potasio 0.1
Fosfato ácido de Potasio 0.5
Sulfato de Magnesio Heptahidratado 0.1
Nitrato de Calcio 0.01
Solución B
Componente g/L
Sulfato Ferroso 33
pH 1.5 - 2.5
*Fuente: Elaboración Propia
Se esterilizó la Solución A por calor húmedo, mientas que la Solución B se

esterilizó por microfiltración.
Para el caso del medio 9K sólido se agregó agarosa al 1% a la Solución A
y seguidamente, se adicionó la Solución B.
4.3. Aislamiento de microorganismos biolixiviantes:

Se registró el pH inicial de la muestra y se inoculo la muestra en medio
9K líquido. Se mantuvo las condiciones de incubación: 30°C, agitación y
CO2.
4.4. Cultivo de microorganismos biolixiviantes:

Se concentró una alícuota del medio líquido, se resuspendió en un
volumen de agua ácida y finalmente se inoculó en el medio 9K sólido.
5. PROCEDIMIENTO DETALLADO:
6. RESULTADOS Y DISCUSIÓN:
7. CONCLUSIONES:
8. SUGERENCIAS:
9. CUESTIONARIO:
¿Qué estrategias se utiliza para preparar o procesar la muestra?

¿Qué métodos se utilizan para la determinación de la oxidación del medio de
cultivo?
¿Cómo optimizar el crecimiento de microorganismos biolixiviantes?
¿Qué microorganismos seleccionaría para conformar un consorcio microbiano con
el propósito de mejorar un proceso de lixiviación?
Haga un comentario sobre las oportunidades de la Biotecnología en la
Biominería?
10. BIBLIOGRAFÍA:
11. ANEXOS:
DATOS Y APUNTES:
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PRACTICA Nº 2.
CARACTERIZACIO N DE MICROORGANISMOS BIOLIXIVIANTES
1. OBJETIVOS:
3.1. Caracterizar macroscópicamente el cultivo de los microorganimos

biolixiviantes aislados de su ambiente nativo en medio 9K sólido y líquido.
3.2. Caracterizar microscópicamente los microorganimos biolixiviantes
aislados a través de una preparación simple y una tinción diferencial.
3.3. Enfatizar en el proceso enseñanza-aprendizaje valores de puntualidad,
2. MARCO TEÓRICO:
La observación al microscopio óptico con distintas coloraciones de los cultivos

bacterianos, el conocimiento de la composición bioquímica de las diferentes
estructuras bacterianas, así como su metabolismo, tienen un rol importante en la
identificación de las bacterias y su ubicación taxonómica.
Recientemente, los avances de la genética bacteriana hicieron posible el
desarrollo de técnicas de biología molecular con aplicaciones a nivel de la
investigación científica y la industria. (4)
Las bacterias que intervienen en los procesos de lixiviación son generalmente

aeróbicas, mesófilas, acidófilos y quimiolitoautótrofas, lo que implica que
obtienen las energía necesaria para su funcionamiento mediante la oxidación de
compuestos inorgánicos, utiliza C02 como única fuente de carbono para todas
sus necesidades metabólicas, no requiere de nutrientes orgánicos y es capaz de
desarrollarse a valores de pH muy bajos, en el rango de 1 a 3.
Acidithiobacillus ferrooxidans, ha sido la bacteria más estudiada, tiene forma

bacilar, es gramnegativa y mide aproximadamente 0.5 µm de diámetro y 2 µm
de longitud. Otras importantes bacterias lixiviantes son Acidithiobacillus
thiooxidans y Leptospirillum ferrooxidans. Estas tres especies son las más
frecuentemente encontradas en operaciones mineras y tienen un papel directo
en las reacciones de biolixiviación. (3) (2)
En los últimos años han despertado gran interés microorganismos termófilos

extremos, capaces de crecer a temperaturas de 65 y 80 °C, que presentan
buenas características lixiviantes sobre sulfuros reconocidamente recalcitrantes.
Estos organismos pertenecen al dominio de la arqueas, las cuales han sido
mayoritariamente aisladas de aguas termales y géiseres. (2)
3. MATERIALES:
3.1. Materia prima:

• Cultivos de microorganismos biolixiviantes.
3.2. Reactivos:
• Aceite de inmersión.
• Alcohol isopropílico.
• Sol. Etanol 70%.
• Tinción de Gram.

• Cubreobjetos.
• Portaobjetos.
3.4. Otros:
• Algodón.
• Asa de Kolle.
• Mechero.
• Micropipeta, p20.
• Soporte de tinción.
• Tips.
3.5. Equipos:
• Microscopio óptico compuesto.
4. METODOLOGÍA:
3.1. Caracterización macroscópica:

Se caracterizó la morfología de las colonias y los cambios característicos
del medio 9K líquido tales como color o turbidez por crecimiento de
biomasa.
3.2. Caracterización microscópica:

Se realizó una preparación simple o en fresco y la tinción diferencial de
Gram.
3.3. Caracterización fisicoquímica:

Se realizó la determinación del pH, temperatura, oxidación de hierro y
potencial redox.
Registrar los cambios característicos del medio de cultivo 9K líquido.

Describir las características morfológicas de las colonias de los microorganismos
biolixiviantes aislados.
Evaluar las características microscópicas de los microorganismos biolixiviantes
aislados a través de una preparación simple y la tinción diferencial de Gram.
7. CONCLUSIONES:
8. SUGERENCIAS:
9. CUESTIONARIO:
Caracterizar a las arqueas como organismos biolixiviantes.

Utilizando las herramientas de la Biología molecular, describe ¿Qué métodos se
utilizan para identificar microorganismos biolixiviantes?
Describe ¿Qué métodos se utilizan para medir la actividad microbiana en los
procesos de biolixiviación?
Explica las tecnologías desarrolladas por BioSigma para la biolixiviación:
Explica los métodos utilizados para la identificación y biocaracterización de
microorganismos biolixiviantes propuestos por BioSigma
¿En qué consiste la técnica de epifluorescencia directa en filtro (DEFT)?
¿En qué consiste el método de bioluminiscencia – LixKit?
¿Qué factores fisicoquímicos se deben evaluar en un proceso biolixiviación?
¿Cómo? y ¿Porque?
10. BIBLIOGRAFÍA:
11. ANEXOS:
DATOS Y APUNTES:
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PRACTICA Nº 3.
BIOXIDACIO N DEL ION FERROSO POR MICROORGANISMOS

BIOLIXIVIANTES
1. OBJETIVOS:
1.1. Evaluar la Biooxidación del ion ferroso por los microorganismos

biolixiviantes aislados.
1.2. Determinar la concentración del ion ferroso en solución.
1.3. Explicar la importancia de la Biooxidación del ion ferroso en el proceso de
Biolixiviación de minerales refractarios.
2. MARCO TEÓRICO:
Los microorganismos son los responsables directos del reciclaje de los

elementos en la biosfera, llevando a cabo, gracias a su extraordinaria
diversidad metabólica, muchas de las transformaciones de compuestos tanto
orgánicos como inorgánicos que resultan esenciales en los ciclos de la materia.
(6)
El hierro es un elemento muy abundante en la tierra y se encuentra

principalmente en dos estados de oxidación: Fe (II) y Fe (III). Gracias al alto
potencial del par Fe (II)/Fe (III), 0.76 V, el único aceptor electrónico capaz de
oxidar el Fe (II) es el oxígeno. Por ello, a un pH neutro, el Fe (II) se oxida
espontáneamente a Fe (III), que forma compuestos insolubles por lo que
precipita rápidamente. Sin embargo, si el pH es acido, el hierro puede
permanecer en la forma más reducida, Fe (II).
La mayoría de las reacciones de oxidación/reducción que sufre el hierro a lo

largo de su ciclo, son catalizadas biológicamente bajo distintas condiciones. En
condiciones de anaerobiosis, el Fe (II) puede ser reducido por microorganismos
como Shewanella putrefaciens al usarlo como aceptor de electrones. En
presencia de oxigeno el Fe (II) puede oxidarse espontáneamente; sin embargo,
algunos microorganismos tienen mecanismos capaces de aprovechar el Fe (II)
antes de su oxidación como fuente de energía disponible. Estos incluyen
representantes del genero Acithiobacillus, organismos adaptados a ambientes
acidófilos done el Fe (II) es más abundante. (2) (6)
Hasta hace poco tiempo la Biooxidación de Fe (II) solo se había utilizado

industrialmente en hidrometalurgia, en procesos de biolixiviación y tratamiento
de las aguas de drenaje acidas de minas. Actualmente, debido a la atención
que se presta a los problemas medioambientales que acarrea la utilización de
gases y carbón con un alto contenido de azufre, se ha incrementado el interés
por estos procesos biológicos para la desulfuración de estos.
La industria metalúrgica está reconociendo que el uso de microorganismo en
ciertos procesos hidrometalúrgicos en una solución potencial a los problemas
presentados en muchas minas, donde la escasez de minerales de alta ley
incrementa la necesidad de desarrollar métodos aceptables económicamente,
para recuperar los metales a partir de minerales de baja ley. Así en la
actualidad, la biolixiviación se está utilizando para la obtención de elementos
tales como uranio, zinc, níquel, cobalto, pero especialmente para el cobre. (2)
3. MATERIALES:
3.1. Muestras:
• Medio del cultivo 9K con microrganismos aislados.
3.2. Reactivos:
• Solucion de Etanol 70%.
• Solución extractiva.
• Solución de Dicromato de potasio 0.01N.
• Solución de Difenilamina acida 1%.

• Buretas, 25 mL.
• Beakers, 100 mL.
• Pipetas, 10 mL.
3.4. Otros:
• Jeringas hipodérmicas, 5 mL.
• Soporte universal.
• Pinzas.
• Algodón.
• Mecheros. (2)
• Micropipeta, P20.
• Plastic wrap.
• Picetas.
• Tips estériles.
4. METODOLOGÍA:
4.1. Toma de muestra:

Se tomó 5 mL de la muestra, y se añadió 10 mL de la Solución Extractiva
(H2SO4 al 98%, H3PO4 al 88% y agua destilada) y algunas gotas de la
solución de Difenilamina acida 1%.
4.2. Determinación del ion ferroso:

Se tituló la muestra por Dicromatometría, esperando el viraje de color a
un azul - violáceo.
Determinar la concentración del ion ferroso en la muestra.
7. CONCLUSIONES:
8. SUGERENCIAS:
9. CUESTIONARIO:
Además de la biolixiviación ¿Qué otras alternativas se han desarrollado como

aplicación de la biooxidacion del ion ferroso?
¿Por qué es importante la biooxidación en el tratamiento de minerales de oro?
10. BIBLIOGRAFÍA:
11. ANEXOS:
DATOS Y APUNTES:
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PRACTICA Nº 4.
TALLER
REVISION DE ARTICULOS CIENTI FICOS
Para el presente taller, leer el Artículo científico:

Bioleaching of a chalcopyrite concentrate with moderate

thermophilic microorganisms in a continuous reactor system
L. Cancho, M.L. Blázquez, A. Ballester, F. González, J.A. Muñoz
Department of Materials Science and Metallurgical Engineering, Universidad Complutense, Madrid, Spain
Received 28 June 2006; received in revised form 14 December 2006; accepted 19 February 2007
Available online 21 March 2007
ACTIVIDADES:
1. Formule el Objetivo general y tres Objetivos específicos para el presente

Artículo científico.
2. Formule una hipótesis para el presente Artículo científico.
3. Mencione las ventajas y desventajas del uso de reactores en la biolixiviación.
4. Mencione tres antecedentes en el uso de reactores en el proceso de
biolixiviación.
5. ¿Cuál es el principal objetivo de las recientes investigaciones y que
soluciones plantean?
6. ¿Qué aspecto es el más importante en la selección y diseño del reactor?
7. ¿Cómo interactúan los iones de Ag y los microorganismos en el proceso de
biolixiviación?
8. ¿En qué consistió la muestra?
9. ¿En qué consistió el cultivo de microorganismos? y ¿Cuáles fueron las
condiciones de incubación?
10. Explica ¿Cómo está conformado el sistema continuo de reactores?
11. ¿Qué parámetros de control se establecieron en el sistema continuo de
reactores?
12. ¿Cómo se monitoreó el proceso de biolixiviación en el sistema continuo de
reactores?
13. ¿Cómo se determinó el tiempo de residencia en el estado continuo del
sistema?
14. Explica ¿En qué consistió la prueba preliminar?
15. En la prueba preliminar ¿Por qué hay un incremento del metal en solución en
el reactor 3?
16. ¿Qué diferencias destacan en el monitoreo, entre la prueba preliminar y la
prueba de biolixiviación continua?
17. Según su criterio ¿Cuál es el principal cambio introducido para mejorar la
biolixiviación en el sistema continuo?
18. Defina las variables independientes de la investigación:
19. Defina las variables dependientes de la investigación:
20. Formule cuatro conclusiones obtenidas en el estudio.
DATOS Y APUNTES:
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PRACTICA Nº 5.
BIOLIXIVIACIO N DE COBRE A PARTIR DE MINERALES SULFURADOS
1. OBJETIVOS:
1.1. Evaluar la Biolixiviación de cobre a partir de calcopirita por los

microorganismos biolixiviantes aislados.
1.2. Determinar la concentración del cobre en solución por yodometría.
1.3. Explicar la importancia de la disolución de cobre en el proceso de
biolixiviación de minerales sulfurados refractarios.
2. MARCO TEÓRICO:
El Cobre es un elemento metálico que se presenta en forma bastante abundante

en la naturaleza. Este metal ha sido utilizado por el hombre desde tiempos
remotos. En la naturaleza el cobre se presenta combinado formando dos grupos:
los minerales oxidados y los sulfurados.
Como regla general, los minerales oxidados son fácilmente solubles, por lo que
su beneficio se realiza a través de lixiviación ácida. Por su parte, los minerales
sulfurados son insolubles aun en ácidos concentrados, por lo que para extraer el
cobre de ellos se debe previamente oxidar los sulfuros.
La tecnología convencional para ellos consulta molienda fina, concentración

selectiva por flotación y obtención del metal por pirometalurgia, esto es, la
oxidación de los sulfuros a SO2 y la reducción del cobre cuproso y cúprico a
cobre elemental en hornos a elevadas temperaturas. La lixiviación bacteriana de
los sulfurados de cobre constituye una importante alternativa viable. (2)
La biolixiviación ha pasado a constituir en la actualidad una alternativa válida a

los procesos convencionales, compitiendo fuertemente en términos económicos y
de protección al medio ambiente; por tal motivo, a continuación, se detallan los
factores que afectan la biolixiviación de minerales:
Microorganismos lixiviantes: Bacterias con características

quimiolitoautotróficas acidófilas, lo que implica que obtiene la energía necesaria
para su funcionamiento mediante la oxidación de compuestos inorgánicos, utiliza
CO2 como única fuente de carbono para todas sus necesidades metabólicas, no
requiere de nutrientes orgánicos, es capaz de desarrollarse a valores de pH muy
bajos, y teniendo temperaturas optimas de crecimiento en el rango de 25 a 35°C
y algunas otras siendo termófilas moderadas (40 - 50°C) (2)
Minerales y tamaño de partícula: La velocidad de biolixiviación de minerales

sulfurados de cobre es altamente variable. Mientras la covelina puede ser
lixiviada fácilmente, en el otro lado se ubica la calcopirita y la enargita; que
ofrecen resistencia a la oxidación microbiana. El tamaño de partícula es también
un parámetro crítico en biolixiviación, principalmente por su influencia en la
velocidad del proceso y por los costos asociados a su molienda. Operaciones a
gran escala en pilas y botaderos utilizan tamaños de partícula en el rango de 13
a 200 mm o mayores. (2)
Nutrientes e Inhibidores: Si bien es cierto la mayoría de microorganismos

lixiviantes son quimioautótrofos, hay otros elementos básicos para la nutrición
de los mismos; tales como: sal de amonio, magnesio, fósforo y algunos iones
metálicos pesados en cantidades menores. Si hay una concentración elevado de
ion Fe+3 se produce la inhibición de crecimiento. (2)
Oxígeno y Dióxido de carbono: El Oxigeno molecular actúa como aceptor final

de electrones en las reacciones del metabolismo energético que tiene lugar la
lixiviación bacteriana, como son la oxidación del ion ferroso, azufre reducido y
azufre elemental. El dióxido de carbono es la fuente de este último elemento
para el crecimiento de la población microbiana autotrófica. (2)
Temperatura, pH y Eh: Los microorganismos en general presentan un rango de

15 a 20°C bajo la temperatura óptima en el cual puede mantener una actividad
adecuada. Los participantes microbianos en la lixiviación son acidófilos (1.5 –
2.5). El potencial redox del sistema, es el que condiciona tanto la actividad
microbiana como la oxidación química de los sulfuros. (2)
Para determinar la concentración de cobre disuelto, se realiza una prueba

yodometrica; fundamentado como una técnica indirecta, en el que los oxidantes
se determinan haciéndolos reaccionar con un exceso de yoduro. EL yodo liberado
se valora en disolución débilmente acida con un reductor patrón, como tiosulfato
o arsenito sódicos. (2)
3. MATERIALES:
3.1. Muestras:
• Microorganismos aislados con características lixiviantes.
• Medio 9K
3.2. Reactivos:
• Sol. Tiosulfato de Sodio 0.1 N (S2O3Na2)
• Sol. de Hidroxido de Amonio diluido (NH4OH)
• Sol. Ácido Clorhídrico 3N (HCl)
• Ácido acético glacial
• Sol. Yoduro de Potasio 10% (KI)
• Sol. Almidón.
• Buretas, 25 mL.
• Probeta, 25 mL.
• Pipetas, 10 mL.
• Matraz Erlenmeyer, 250 mL.
• Matraz Erlenmeyer, 50 mL.
3.4. Instrumentos:
• Shaker
3.5. Otros:
• Pinzas.
• Algodón.
• Mecheros.
• Picetas.
4. METODOLOGÍA:
4.1. Operación del Sistema Biolixiviante:

En un matraz de 250 mL se depositó 100 mL de solución acida. Se
adicionó una alícuota con los microorganismos lixiviantes previamente
aislados y 50 g de Calcopirita con un diámetro de partícula de 75 µm.
4.2. Determinación de la concentración de cobre disuelto:

Titular el cobre disuelto por Yodometría (5), anotar el gasto y aplicar la
siguiente formula:
𝑔 (𝑉 × 𝑁 × 𝑓)𝑁𝑎2 𝑆2 𝑂3 × 𝑚𝑒𝑞 𝐶𝑢+ × 1000

𝑑𝑒 𝐶𝑢+2 =
𝐿 𝑉 𝑚𝑢𝑒𝑠𝑡𝑟𝑎
Donde:
V: Volumen de Na2S2O3
N: Normalidad del Na2S2O3
F: Factor de Na2S2O3
Determinar la concentración de cobre en la muestra.
7. CONCLUSIONES:
8. SUGERENCIAS:
9. CUESTIONARIO:
Indique ejemplos de consorcios microbianos que mejoran la operación de

Biolixiviación.
¿Qué otros métodos de cuantificación del cobre en dilución existen?
12. BIBLIOGRAFÍA:
13. ANEXOS:
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PRACTICA Nº 6.
TALLER

Purification of Anti-Japanese Encephalitis Virus Monoclonal
Antibody by Ceramic Hydroxyapatite Chromatography Without
Proteins A and G.
Maiko Saito,1 Yae Kurosawa,1 and Tsuneo Okuyama2
1R&D Department, Pentax New Ceramics Division, Hoya Corporation, Akishima-shi, Tokyo, Japan.
2Protein Technos Institute, Atsugi-shi, Kanagawa, Japan 2012
ACTIVIDADES:
1. ¿Dónde y cuándo se realizó el presente trabajo de investigación?

2. ¿Qué pretende realizar el presente trabajo de investigación?
5. ¿Cómo se denomina la tecnología de obtención de MAb? ¿Explica en qué
consiste?
6. ¿Qué operaciones unitarias se incluye en el DSP para la obtención del MAb?
7. ¿En qué consiste la etapa de purificación convencional de MAb del virus de la
encefalitis? ¿Cuál es su desventaja?
8. ¿En qué consiste la etapa de purificación que sugiere el presente trabajo de
investigación?
9. ¿Qué métodos se utilizaron para identificar y cuantificar al producto
biofarmacéutico? ¿En qué consisten?
10. Defina las variables independientes y dependientes de la investigación:
11. Formule tres conclusiones obtenidas en el estudio.
DATOS Y APUNTES:
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Purification and characterization of Extracellular Protease from
Halotolerant Bacterium Virgibacillus dokdonensis VITP14
V. Devi Rajeswari, G. Jayaraman and T.B Sridharan
Industrial Biotechnology Division, School of Biosciences and Technology, VIT University, Vellore, Tamil Nadu, India.
ACTIVIDADES:

2. ¿Qué pretende dar a conocer el presente trabajo de investigación?
4. ¿Cuál es la importancia de las proteasas en la industria?
5. ¿Qué género microbiano es generalmente fuente de proteasas?
6. ¿A través de qué estrategia se realizó la caracterización molecular de la
bacteria halotolerante aislada?
7. ¿Qué operaciones unitarias se incluye en cada etapa del DSP para la
obtención de la proteasa extracelular?
8. ¿Explica en qué consiste la etapa de purificación para la obtención de la
proteasa extracelular?
9. ¿Qué métodos se utilizaron para evaluar actividad proteolítica? ¿En qué
consisten?
10. ¿Qué es un zimograma?
11. ¿Qué métodos se utilizaron para evaluar el peso molecular y la pureza del
producto? ¿En qué consisten?
12. ¿Qué variables se evaluaron en la determinación de su actividad proteolítica?
y ¿Cuáles fueron las condiciones óptimas reportadas?
14. Formule tres conclusiones obtenidas en el estudio.
DATOS Y APUNTES:
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PRACTICA Nº 7.
SEPARACIO N, CONCENTRACION Y DETERMINACIO N DE LA

ACTIVIDAD INVERTASA DE Saccharomyces cerevisiae
1. OBJETIVOS:
1.1. Explicar la recuperación de la invertasa a partir de Saccharomyces

cerevisiae.
1.2. Comprender los principios básicos de la hidrólisis enzimática de la
sacarosa.
1.3. Determinar la actividad invertasa analizando la cantidad de azucares
reductores formados.
1.4. Explicar la importancia de la hidrólisis de la sacarosa en los procesos
biotecnológicos.
2. MARCO TEÓRICO:
El consumo de azúcar en el mundo aumenta cada vez más, aunque la remolacha

azucarera y la caña de azúcar constituyen la fuente de materia prima más
utilizada para la industria de la sacarosa, hoy en día se buscan otras alternativas
para su obtención u otros azúcares con mayor efecto edulcorante como la
fructosa, que está cobrando inusitado interés.
La hidrólisis (inversión) de la sacarosa, sea de manera completa o parcial a

glucosa y fructosa, provee jarabes de mayor poder edulcorante, que son más
dulces, más estables, es decir con menos probabilidad de cristalización que
jarabes puros de sacarosa. El más popular “Jarabe Dorado” se produce por
hidrólisis ácida en algunos ingenios azucareros; sin embargo, hay otros tipos de
jarabe que son producidos usando invertasa de Saccharomyces cerevisiae,
levadura panaria, lo que constituye tecnología de enzimas. Aunque esta enzima
tiene la particularidad en que sufre la inhibición del sustrato a altos niveles de
sacarosa (> 20%, p/p), esto no significa su uso comercial. (7) (8)
La invertasa (β-D-fructofuranosidasa, EC 3.2.1.26), cataliza la hidrólisis de

sacarosa, a glucosa y fructosa, es por ello, que la enzima se designa con el
nombre de sacarasa. La denominación trivial de invertasa, hace referencia al
hecho de que la sacarosa desvía la luz polarizada a la derecha, por eso se le
denomina que es dextrorotatoria, mientras la fructosa muestra una acción
levorotatoria de mayor magnitud comparada con la glucosa que es
dextrorotatoria, por eso es que mientras se produce la hidrólisis de la sacarosa,
la dextrorotación gradualmente cae a zero y la solución finalmente muestra una
desviación a la izquierda. Por eso es que este tipo de hidrólisis algunas veces se
llama “inversión”.
En la práctica se realizará la recuperación de la invertasa a partir de

Saccharomyces cerevisiae, Para la determinación de la actividad invertasa se
utilizará un ensayo indirecto en el que los productos de reacción serán
detectados espectrofotométricamente tras su conversión en derivados
coloreados. En concreto, la hidrolisis enzimática de sacarosa en glucosa más
fructosa, se valorará mediante el método del ácido 3,5–dinitrosalicílico (DNS), el
cual se basa en la reducción del DNS (de color amarillo) por la glucosa u otro
azúcar reductor al ácido 3-amino-5-nitrosalicílico (color rojo), cuya presencia
puede detectarse por lectura de la absorbancia a 570 nm. (7) (9)
3. MATERIALES:
3.1. Insumos:
• Sacarosa.
• Levadura liofilizada.
3.2. Reactivos:
• Reactivo DNS.
• Solución de glucosa.
• Buffer acetato 0.1 M pH 5.

• Celdas del espectrofotómetro.
• Pipetas, 1, 5 y 10 mL.
• Tubos de ensayo.
• Tubos de centrífuga.
3.4. Otros:
• Espátulas.
• Gradilla para tubos.
• Hielo.
• Morteros.
• Picetas.
3.5. Equipos:
• Baño de ultrasonido.
• Baño termostático.
• Centrífuga.
• Espectrofotómetro.
4. METODOLOGÍA:
4.1. Separación de la invertasa:

• Se pesó la levadura seca y se procedió a ser pulverizada.
• Se agregó un volumen de buffer acetato al 0.1M pH 5 y NaCl al 0.5M.
• Finalmente, se llevó al sonicador durante 15 minutos para recuperar
la invertasa cruda a partir de la lisis o disrupción celular de
Saccharomyces cerevisiae.
4.2. Concentración de la invertasa:

• Se concentró la invertasa por centrifugación.
• Se midió un volumen del sobrenadante y se añadió Sulfato de amonio
para saturar la solución entre un 41 – 42%, de tal forma que se
permita la precipitación.
• Se dejó en reposo por 45 minutos y se llevó nuevamente a
centrifugación durante 10 minutos.
• Finalmente, el pellet fue resuspendido en un volumen proporcional de
Buffer Acetato 0.1 M a pH 5.
4.3. Elaboración de la curva de calibración:

• A partir de una solución stock de glucosa, se preparó una gama de
soluciones de diferentes concentraciones, se añadió un volumen del
reactivo DNS y se llevó a baño hirviente.
• Se dejó enfriar y se determinó la absorbancia a 570 nm en un
espectrofotómetro.
4.4. Inversión de la sacarosa:

• Se estableció las condiciones favorables para la hidrólisis de la
sacarosa utilizando la invertasa recuperada.
• Se analizó el contenido de azucares reductores por el método DNS.
Graficar la curva de calibración de azucares reductores por el método de DNS.

Determinar la actividad invertasa del extracto.
Describe las operaciones unitarias utilizadas en cada etapa del DSP para la
extracción de invertasa de Saccharomyces cerevisiae.
7. CONCLUSIONES:
8. SUGERENCIAS:
9. CUESTIONARIO:
¿Cuál es el fundamento de la reacción de Fehling?
Explica el método del DNS para la determinación de azúcares reductores.
Describe la etapa de concentración y purificación de la invertasa.
Describe tres aplicaciones de la invertasa en la industria biotecnológica.
¿Qué productos desarrolla Megazyme?
10. BIBLIOGRAFÍA:
11. ANEXOS:
DATOS Y APUNTES:
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PRACTICA Nº 8.
SEPARACIO N, CONCENTRACIO N, PURIFICACIO N E IDENTIFICACIO N

DEL PRINCIPIO ACTIVO DE LA FUROSEMIDA
1. OBJETIVOS:
1.1. Comprender los principios básicos de la extracción sólido-líquido,

precipitación y cristalización como operaciones unitarias.
1.2. Explicar el método de extracción solido-líquido por soxhlet en el
aislamiento del principio activo.
1.3. Explicar el método de extracción acido-base por extracción asistida por
ultrasonido (EAU) en la precipitación del principio activo.
1.4. Realizar la purificación de la furosemida impura por cristalización.
1.5. Identificar el principio activo por determinación del punto de fusión.
1.6. Comparar y evaluar el rendimiento de los métodos de extracción en la
obtención del principio activo puro.
2. MARCO TEÓRICO:
Actualmente la Ingeniería Biotecnológica está en auge y se aplica a

prácticamente todos los sectores, incluso en la elaboración de medicamentos. Se
estima que un 50% de todos los medicamentos nuevos proceden de
biotecnologías, y la proporción aumenta al tratarse de los tratamientos más
innovadores. (9)
La "biotecnología blanca o química sostenible" permite a las compañías
farmacéuticas llevar a cabo métodos de producción que se adaptan a la nueva
normativa sobre desarrollo sostenible.
Mediante la biotecnología y la genómica se pueden diseñar fármacos a medida,
medicamentos que sean más eficaces con nuestra fisiología y nuestra
bioquímica.
En la literatura se reportan varios métodos para el aislamiento y purificación de
los principios activos de un producto, que se fundamentan principalmente en la
extracción solido-líquido, precipitación y cristalización. (10)
Extracción Sólido−Líquido:
Consiste en la disolución de un soluto, principio activo u analito que forman
parte de una matriz sólida, empleando un solvente adecuado en el que es
insoluble el resto del sólido.La disolución separada se denomina extracto y el
resto de sólido se denomina inert. (9)
Extracción por Soxhlet:

Es un tipo de extracción semicontinua, pues una de las fases, el sustrato se
agrega solo al principio, mientras que el solvente de extracción cumple un ciclo
de extracción y purificación continua. (9)
La purificación se realiza en forma paralela por destilación del solvente, de
manera que el sustrato siempre está en contacto con el solvente puro y frío.
El soxhlet funciona cíclicamente, para extraer las concentraciones necesarias de
algún determinado compuesto.
La extracción con soxhlet presenta las siguientes ventajas:
La muestra está en contacto repetidas veces con porciones frescas de
disolvente.
La extracción se realiza con el disolvente caliente, así se favorece la
solubilidad de los analitos.
No es necesaria la filtración después de la extracción.
La metodología empleada es muy simple.
Permite la recuperación del disolvente.
Extracción asistida por ultrasonido (EAU):

La extracción asistida por ultrasonido (EAU) permite extraer las sustancias de
interés utilizando sonidos de alta frecuencia, con el fin de desprender el
compuesto buscado. Las partículas sólidas y líquidas vibran y se aceleran ante la
acción ultrasónica, como resultado el soluto pasa rápidamente de la fase sólida
al solvente.
El proceso de extracción es significativamente más eficiente utilizando el baño de
ultrasonido, el cual es capaz de generar ondas ultrasónicas con la finalidad de
provocar una microagitación muy energética y útil para la disolución rápida de
los principios activos, ya que las ondas acústicas aumentan la interacción del
solvente con las superficies del sólido por un fenómeno mecánico denominado
cavitación.
El mecanismo de extracción involucra dos fenómenos físicos: difusión a través de
la pared celular y el lavado de los contenidos celulares, una vez que las paredes
se han lisado.
El baño de ultrasonido requiere de un medio líquido y un generador de energía,
capaz de transmitir una corriente eléctrica a un sistema mecánico que la
convertirá en energía acústica o vibraciones de alta intensidad generándose
ondas de ultrasonido que generan millones de burbujas microscópicas, las
cuales se expanden y colapsan contra las células causando la ruptura de su
membrana.
Esta técnica es la más económica, productiva y amigable con el medio ambiente,
que los métodos tradicionales, además tiene los requerimientos instrumentales
más bajos entre las últimas técnicas de extracción desarrolladas. (9) (10)
Precipitación:
La precipitación es una operación unitaria de separación que se produce cuando
tenemos una sustancia en disolución que por algún factor externo, forma el
precipitado, sustancia sólida que se forma en el interior de una disolución. Es un
método sencillo y directo para purificar solutos. (9)
Cristalización:
La cristalización es una operación de transferencia de materia en la que se
produce la formación de un sólido (cristal o precipitado) a partir de una fase
homogénea (soluto en disolución o en un fundido). (9)
3. MATERIALES:
3.1. Materia prima:

• Tabletas de furosemida (40mg).
3.2. Reactivos:
• Etanol.
• Metanol.
• Solucion de Hidroxido de sodio (NaOH).
• Solucion de acido clorhidrico (HCl).

• Capilares.
• Matraces 250 mL.
• Pipetas, 5 y 10 mL.
• Probeta, 100 mL.
• Termometro.
3.4. Otros:
• Espátula.
• Papel filtro.
3.5. Equipos:
• Hotplate.
• Equipo de filtración al vacío.
• Equipo de reflujo.
• Equipo Soxhlet.
• Baño de ultrasonido.
4. METODOLOGÍA:
4.1. Preparación de la materia prima:

• Se pulverizo la materia prima y se registró el peso.
• Se colocó en un beaker y se añadió un volumen de una solución de
NAOH 1N.
4.2. Separación y concentración del principio activo:

• Se aisló el principio activo de la furosemida utilizando el equipo del
soxhlet.
• Se aisló el principio activo de la furosemida a través de una
extracción acido base, utilizando el equipo del ultrasonido.
4.3. Purificación del principio activo:

• Se reflujó el sólido suspendido en una mezcla que permita su
posterior cristalización.
• Se obtuvo los cristales del principio activo de la furosemida por
filtración al vacio, se dejó la torta en un desecador.
4.4. Identificación del principio activo:

• Se determinó el punto de fusión de los cristales obtenidos.
Describe las operaciones unitarias utilizadas en cada etapa del DSP para la
obtención de cristales de furosemida.
Reportar el rendimiento de los métodos de extracción en la obtención de

cristales de furosemida.
Determinar el punto de fusión del principio activo.
Reportar el volumen de etanol utilizado en la cristalización.
Comparar los métodos de aislamiento del principio activo de la furosemida.
7. CONCLUSIONES:
8. SUGERENCIAS:
9. CUESTIONARIO:
Diseña un diagrama de flujo para la obtención de un principio activo a partir de

un medicamento producto de la síntesis química.
Diseña un diagrama de flujo para la obtención de un principio activo a partir de
un medicamento producto de la biotecnología.
Enumera cinco diferencias entre los medicamentos convencionales y los
biotecnológicos.
Describe las operaciones unitarias más utilizadas en la etapa de concentración de
productos biofarmacéuticos.
Describe dos tipos de cromatografía para la obtención de productos
biofarmacéuticos.
¿Qué empresas biotecnológicas destacan en la producción de biofarmacéuticos?
Realiza un breve comentario sobre las actividades que realizan.
10. BIBLIOGRAFÍA:
11. ANEXOS:
DATOS Y APUNTES:
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PRACTICA Nº 9.
CRISTALIZACIO N DE LA SACAROSA
1. OBJETIVOS:
1.1. Comprender los principios básicos de la cristalización como operación

unitaria.
1.2. Cristalizar azúcar rubia comercial con adición de carbón activado y tierra
de diatomeas.
1.3. Explicar la importancia de la cristalización como operación unitaria de
purificación y formulación de productos en el DSP biotecnológico.
2. MARCO TEÓRICO:
Cristalización:
La cristalización es una operación de transferencia de materia en la que se

produce la formación de un sólido (cristal o precipitado) a partir de una fase
homogénea (soluto en disolución o en un fundido).
La cristalización es un proceso de separación que purifica fluidos por la formación
de sólidos.
La cristalización es también un proceso de formación de partículas por el cual
moléculas en solución o vapor son transformadas a una fase sólida.
La cristalización se basa en la mayor solubilidad que suelen presentar los sólidos
en un disolvente en caliente que en frío, el modo más frecuente es preparar una
disolución saturada en caliente del sólido a purificar, utilizando un disolvente
adecuado; filtrar para eliminar las impurezas insolubles que se hallen presentes
y dejar que se separe por enfriamiento la sustancia que estaba disuelta,
cristalizada y en un mayor estado de pureza.
El proceso desarrollado en este trabajo se basa en la baja solubilidad de la
sacarosa en etanol en comparación con el agua, por tanto, la solución
hidroalcohólica azucarada permite realizar la filtración en carbón activado o
tierra de diatomeas para remover impurezas y color. (9) (11)
Métodos de cristalización:
Cristalización por enfriamiento:

Este método sólo puede utilizarse con aquellas sustancias que tienen una curva
de solubilidad que desciende apreciablemente con la temperatura. Este es el tipo
normal de curva de solubilidad para la mayor parte de las sustancias. Por lo
tanto fue el primer método de cristalización que se empleó y que aún es muy
usado. (9)
Cristalización por evaporación del disolvente:

Este método sólo puede utilizarse con aquellas sustancias cuya solubilidad
depende poco de la temperatura o el rendimiento en sólidos por enfriamiento
sería despreciable. En éste método se evapora una parte del disolvente, hasta
que la cantidad de sustancia disuelta en la solución restante supere la
concentración de saturación. Encuentra su principal aplicación en la producción
de la sal corriente. (9)
Cristalización por evaporación al vacío:

Es el método más importante para producciones a gran escala. Si una solución
caliente se introduce en un recinto que tenga una presión total menor que la
presión de vapor del disolvente a la temperatura a que se introduce, el
disolvente se evaporará rápidamente y la eliminación del calor necesario enfría
además la solución. Este método es ventajoso, ante todo, para los casos de
sustancias sensibles a la temperatura, ya que la evaporación en vacío tiene lugar
a temperaturas más bajas. (9)
Cristalización por adición de una tercera sustancia:

La adición de una tercera sustancia que reduce la solubilidad de tal forma que
cristaliza el soluto que se desea. La tercera sustancia en altas concentraciones
reduce la solubilidad del soluto, de tal manera que, a medida que la
concentración del componente muy soluble aumenta, la solubilidad del
componente menos soluble disminuye hasta el punto de que se efectúa la
cristalización. Ej. Evaporación de las soluciones electrolíticas de sosa caustica y
en la evaporación de las lejías de los jabones de glicerina. (9) (10)
3. MATERIALES:
3.1. Materia prima:

• Azúcar rubia.
• Carbón activado.
• Tierra de diatomeas.
3.2. Reactivos:
• Etanol.

• Baguetas.
• Embudos con vástago corto.
• Equipo a reflujo.
• Probeta, 50 y 100 mL.
3.4. Otros:
• Espátula.
• Papel filtro.
• Pinzas.
3.5. Equipos:
• Estufa.
• Hotplate.
4. METODOLOGÍA:
4.1. Prueba preliminar:

• Se reflujó 25 g de azúcar rubia con 50 mL de etanol por unos 10
minutos con agitación constante en el hotplate.
• Con una pipeta Pasteur se añadieron por la parte superior del
refrigerante cada 2 min, 5 mL de agua destilada, hasta observar la
disolución total de la sacarosa.
• Se filtró rápidamente la mezcla por gravedad y en caliente.
• Se dejó enfriar en reposo el filtrado y se observó la formación de los
cristales de sacarosa.
• Después de obtener los cristales por precipitación, se filtraron al
vacío.
Determinar el volumen final de agua destilada necesario para lograr la

disolución total de la sacarosa.
4.2. Purificación de la azúcar rubia con carbón activado:

• Se reflujó 25 g de azúcar rubia, 1g de carbón activado con 50 mL de
etanol por unos 15 minutos.
• Se añadió por la parte superior del refrigerante el volumen de agua
destilada necesario para lograr la disolución total de la sacarosa.
• Se filtró por gravedad y en caliente.
• Se dejó enfriar en reposo el filtrado y se observó la formación de los
cristales de sacarosa.
• Después de obtener los cristales por precipitación, se filtró al vacío.
4.3. Purificación de la azúcar rubia con tierra de diatomeas:
• Se reflujó 50 g. de azúcar rubia, 1g de tierra de diatomeas con 50 mL

de etanol por unos 15 minutos. Se procedió de igual forma que el
tratamiento anterior.
Determinar y comparar el tiempo requerido para la formación de los cristales en

la prueba preliminar y en cada tratamiento.
Reportar y comparar la cantidad de cristales de sacarosa obtenidos en la prueba

preliminar y en cada tratamiento.
Identificar a qué tipo de cristales corresponde los de sacarosa.
Reportar y comparar las características de los cristales obtenidos en cada
experiencia.
7. CONCLUSIONES:
8. SUGERENCIAS:
9. CUESTIONARIO:
¿Cuáles son las ventajas de la cristalización como operación unitaria?

¿Por qué es importante la filtración en caliente?
Determinar la solubilidad de la sacarosa en etanol y agua
Describa Ud. el proceso de reflujo y sus características
Describir el proceso de producción de azúcar refinada.
¿Qué productos se obtienen por cristalización, según el tipo: por enfriamiento,
por evaporación y la adición de una tercera sustancia?
10. BIBLIOGRAFÍA:
11. ANEXOS:
DATOS Y APUNTES:
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PRACTICA Nº 10.
FERMENTACION ALCOHOLICA PARA LA OBTENCIO N DE

BIOETANOL MEDIANTE Saccharomyces cerevisiae INMOVILIZADA
1. OBJETIVOS:
1.1. Comprender los principios básicos de la inmovilización de células.

1.2. Explicar la inmovilización de Saccharomyces cerevisiae por el método de
entrampamiento por gelificación.
1.3. Comprender los principios básicos de las operaciones unitarias utilizadas
en la obtención de etanol a partir de materia prima fermentable y
levaduras inmovilizadas.
1.4. Evaluar por refractometría el grado alcohólico del producto de la
fermentación.
2. MARCO TEÓRICO:
La tecnología de fermentación es el más antiguo proceso biotecnológico

conocido, en el cual, los microorganismos responsables de este proceso,
catalizan la conversión de la materia prima inicial en productos biotecnológicos,
como por ejemplo el etanol mediante un proceso conocido como fermentación
alcohólica. (8) (12)
Una fermentación alcohólica consiste en la degradación anaerobia de la glucosa a

etanol y dióxido de carbono. Tras la glucólisis, el ácido pirúvico se descarboxila
pasando a acetaldehído, éste se reduce mediante el NADH + H+ generado en la
glucólisis, gracias a la enzima alcohol deshidrogenada, y como producto final se
obtiene etanol.
Los microorganismos o biocatalizadores de la fermentación alcohólica tienen la

función de procesar los hidratos de carbono (Ej. Glucosa, fructuosa, etc.) para
obtener como productos etanol (CH3-CH2-OH), dióxido de carbono (CO2 (g)) y
una molécula de ATP, la cual es consumida por los mismos microorganismos en
su metabolismo celular energético anaeróbico. (12)
El uso de biocatalizadores para llevar a cabo biotransformaciones es un área de

la Ing. Biotecnológica en continua expansión. Un aspecto clave del proceso es
extender el uso de los mismos en un sistema continuo dando como resultado
una disminución de los costos del proceso y otras ventajas como una mayor
pureza del producto y mayor productividad. (8)
Para lograr este objetivo los biocatalizadores se inmovilizan, según la European

Federation of Biotechnology (1983) define a los biocatalizadores inmovilizados
como células, organelos u enzimas (o combinación de ellos) confinados o
localizados en cierta región definida del espacio, con retención de su actividad
catalítica, que pueden ser usados de modo repetido y continuo, y que además
permite obtener el producto final deseado exento de sustancias biológicas y
células, excluyendo algunas etapas de purificación. (11)
En algunos casos, los biocatalizadores se encuentran unidos a materiales de

soporte insolubles (carriers) y en otros casos se encuentran confinados por
atrapamiento. Uno de los procedimientos biotecnológicos más útiles es
inmovilizar las levaduras en diferentes soportes como agar, alginato de calcio,
carragenatos, colágeno, almidón, etc., obteniéndose pellets, que permiten la
difusión de los sustratos (glucosa) y productos (etanol y dióxido de carbono). Por
tanto, las instalaciones piloto producen durante meses continuamente etanol a
partir de glucosa con la ayuda de células inmovilizadas.
Las levaduras del género Saccharomyces cerevisiae han sido utilizadas

tradicionalmente en la industria de la producción de etanol, con el propósito de
incrementar los niveles productivos. En condiciones anaerobias Saccharomyces
cerevisiae reduce el piruvato a etanol con emisiones de CO2, obteniendo un
rendimiento estequiométrico teórico de 0.511 g de etanol y 0.489 g de CO2, por
cada gramo de glucosa metabolizada. Sin embargo, se ha observado que a nivel
experimental e industrial sólo se alcanza entre el 87% y el 95% del rendimiento
teórico para el etanol, ya que esta levadura también utiliza la glucosa en la
producción de otros subproductos.
𝟏 𝒈 𝒅𝒆 𝑮𝒍𝒖𝒄𝒐𝒔𝒂 → 𝟎, 𝟓𝟏𝟏 𝒈 𝒅𝒆 𝑬𝒕𝒂𝒏𝒐𝒍 + 𝟎. 𝟒𝟖𝟗 𝒈 𝒅𝒆 𝑪𝑶𝟐

A nivel industrial, el proceso fermentativo se lleva a cabo en fermentadores
industriales de gran tamaño, también conocidos como Biorreactores.
El objetivo es incrementar la producción de etanol, simultáneamente con el
mantenimiento del nivel proteico mediante la utilización de las técnicas de
inmovilización. La cristalización es una operación de transferencia de materia en
la que se produce la formación de un sólido (cristal o precipitado) a partir de una
fase homogénea (soluto en disolución o en un fundido). (8) (12)
3. MATERIALES:
3.1. Material biológico:

• Levadura liofilizada, Saccharomyces cerevisiae.
3.2. Reactivos:
• Alginato de sodio.
• Solución de Cloruro de calcio al 2% (CaCl2).

• Baguetas.
• Embudos de vidrio.
3.4. Otros:
• Embudo Buchner.
• Espátulas.
• Gasa.
• Jeringa hipodérmica (20 mL).
• Matraz Kitasato.
• Mortero.
• Papel filtro.
• Parafilm.
• Picetas.
3.5. Equipos:
• Bomba al vacío.
• Hotplate.
• Refractómetro.
4. METODOLOGÍA:
4.1. Obtención de la materia prima fermentable:

• Se obtuvo y filtró la materia prima fermentable.
• Se tomó una alícuota, considerando la muestra a tiempo cero y se
leyó los grados Brix o porcentaje de azúcar en el refractómetro.
4.2. Inmovilización de la levadura:

• Se solubilizó la levadura liofilizada en agua destilada.
• Se disolvió el Alginato de sodio en la suspensión de levadura. Se
homogenizó
• Se tomó en una jeringa hipodérmica 20 mL de la mezcla y se dejó
caer gota a gota en un beaker que contiene la Solución de Cloruro de
calcio al 2%.
• Se repitió el paso anterior hasta agotar la mezcla.
• Se separaron los pellets por filtración al vacío y se lavaron con la
Solución de Cloruro de calcio al 2%.
4.3. Obtención de etanol:

• En un beaker, se colocaron los pellets y la materia prima
fermentable. Se agitó la mezcla en un hot plate.
• Finalmente se tomaron alícuotas y leyeron los grados Brix en el
refractómetro, cada día durante una semana.
Reportar la variación en grados Brix o el porcentaje de azúcar de la materia

fermentable a través del tiempo.
Reportar el grado alcohólico del producto fermentado.
7. CONCLUSIONES:
8. SUGERENCIAS:
9. CUESTIONARIO:
¿Cuáles son las ventajas de la inmovilización de células?

¿Qué otros método se utiliza para inmovilizar células?
¿En qué consiste la fermentación alcohólica?
En esta práctica se usó la levadura Saccharomyces cerevisiae, ¿Que otros
microorganismos son utilizados para las fermentaciones alcohólicas y que
productos se obtienen de dichas fermentaciones?
¿Cuál es el fundamento del refractómetro?
¿Cómo se obtiene el Bioetanol?
10. BIBLIOGRAFÍA:
11. ANEXOS:
DATOS Y APUNTES:
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PRACTICA Nº 11.
TALLER
Información Tecnológica Vol. 22(6), 3-14 (2011)
Fermentación de los fructanos del Agave tequilana

Weber Azul por Zymomonas mobilis y Saccharomyces
cerevisiae en la producción de Bioetanol
José L. Montañez (1), Juan C. Victoria (1), Rebeca Flores (1) y María Á. Vivar
(2)
(1) Centro Interdisciplinario de Investigación para el Desarrollo Integral Regional, Justo Sierra 28, C.P. 59510, Jiquilpan, Mich.-
México. (2) Instituto Tecnológico de Tuxtepec, Av. Dr. Víctor Bravo Ahuja S/N. Col. 5 de Mayo,Tuxtepec, C.P. 68350, Oaxaca-
México
ACTIVIDADES:

4. ¿Cuáles son las ventajas de utilizar Zymomonas mobilis en la producción de
Bioetanol en vez de Saccharomyces cerevisiae? ¿Por qué?
5. ¿Cuáles son las ventajas de utilizar hojas de Agave tequilana Weber Azul?
6. ¿Qué motiva a la búsqueda de fuentes alternas de energía renovable?
7. ¿Qué materia prima destaca para la producción de bioetanol?
8. ¿Qué son los fructanos? ¿Cuál es su fuente de obtención?
9. ¿Cuáles son las estrategias utilizadas para la obtención de Bioetanol a partir
de fructanos?
10. ¿Cuáles son las etapas del Upstream Processing que se consideraron en el
presente estudio?
12. Formule las conclusiones obtenidas en el estudio.
PRACTICA Nº 12.
OBTENCIO N DE BIODIESEL
1. OBJETIVOS:
1.1. Comprender los principios básicos de las operaciones unitarias utilizadas

en el proceso previo y posterior a la transesterificación.
1.2. Obtener biodiesel a partir de aceite de origen vegetal por
transesterificación.
1.3. Explicar la importancia de la obtención de biodiesel como alternativa
energética.
2. MARCO TEÓRICO:
La creciente demanda energética mundial, el agotamiento y elevado costo de los

combustibles fósiles y el cambio climático son problemas que deben ser
solucionados con urgencia. Para mitigar estos problemas, se debe ampliar la
matriz energética utilizando fuentes renovables para la obtención de
biocombustibles.
El Biodiesel es un biocombustible que está constituido por ésteres de metilo de

ácidos grasos de cadena larga derivado de diversos tipos de aceite de origen
animal, vegetal, microbiano e incluso de microalgas, por transesterificación para
ser utilizado como sustituto o aditivo del diesel convencional
El termino bio hace referencia a su naturaleza renovable y biológica en contraste
con el combustible diesel tradicional derivado del petróleo; por su parte, diesel
alude a su uso en motores de este tipo.
El biodiesel es un líquido amarillo ámbar claro con una viscosidad similar al
diesel de petróleo. Con el punto de inflamación de 150 °C, el biodiesel no es
inflamable ni explosivo. (8) (11)
El diésel y el biodiésel, a lo largo de todo su ciclo de vida, producen cantidades

similares de CO2. La gran diferencia radica en que la mayor parte del CO2
emitido por el segundo ha sido fijado previamente por las plantas oleaginosas
utilizadas para su producción, que a lo largo de su vida han consumido mayor
cantidad de CO2 que la que emitirán una vez convertidas en biodiesel. Incluso,
diversos estudios señalas que el biodiesel emite finalmente, menos CO2 que el
fijado mediante el proceso de fotosíntesis por estas mismas plantas oleaginosas.
Por ello, es posible afirmar que sustituyendo o complementado diesel con el
biodiesel se poder ayudar a combatir uno de los principales efectos del uso de
combustibles fósiles: el problema del cambio climático. (12)
El biodiésel, al ser un combustible oxigenado y no contener azufre, tiene una

combustión más completa que su antecesor y, por ello, una composición
notoriamente mejor en sus emisiones. Asimismo, el biodiesel, aun usado en
mezclas de solo 10% por 90% de diesel convencional, reduce notablemente las
emisiones de monóxido de carbono (CO), óxidos de azufre (SOx), compuestos
aldehídicos como el formaldehido y acetaldehído y, prácticamente, elimina las
emisiones de benceno, que es un peligroso compuesto cancerígeno. La
combustión del biodiesel produce menos humo visible y menos olores
desagradables que su antecesor derivado del petróleo, por lo que su uso como
sustituto o complemento del diesel puede contribuir a disminuir la polución del
aire y los riesgos a la salud pública relacionados con ello. (8)
3. MATERIALES:
3.1. Insumos:
• Aceite de origen vegetal o usado.
3.2. Reactivos:
• Etanol.
• Hidroxido de potasio.
• Metanol.

• Bureta, 10 mL.
• Pera de decantacion.
• Termómetro.
3.4. Otros:
• Agitador magnético.
• Espátulas.
• Picetas.
• Pinzas.
3.5. Equipos:
• Hotplate.
4. METODOLOGÍA:
4.1. Preparación de la materia prima:

• Se eliminó los sólidos gruesos y finos por sedimentación, filtración y
centrifugación.
• A continuación, se determinó la humedad de la materia prima y se
procedió al secado.
• Se determinó la acidez de la muestra por titulación con KOH 0.1%, y
con el indicador fenoftaleína.
4.2. Transesterificación:
• Se preparó el metóxido, para lo cual se mezcló metanol con KOH
como catalizador, se homogenizó en el hotplate y se añadió el aceite.
• Se calentó la mezcla a 50 ºC por 60 minutos.
• Se dejó en reposo por 8 horas.
• Se separó y se caracterizó los productos obtenidos.
Reportar las condiciones del proceso de transesterificación.

Reportar el volumen de biodiesel y glicerina obtenido
Reportar las características de los productos obtenidos (pH, color, aspecto)
7. CONCLUSIONES:
8. SUGERENCIAS:
9. CUESTIONARIO:
Describe el DSP para la obtención de biodiesel a partir de microalgas.

¿Cuáles son las ventajas de la producción de biodiesel a partir de microalgas
oleaginosas en vez del cultivo de plantas terrestres?
Describe los métodos para caracterizar fisicoquímicamente el biodiesel.
Investiga sobre los países de Latinoamérica que producen biodiesel como
alternativa de energía renovable. Describe brevemente las actividades que
realizan.
10. BIBLIOGRAFÍA:
11. ANEXOS:
DATOS Y APUNTES:
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PRACTICA Nº 13.
DESTILACIO N SIMPLE, AL VACI O Y POR ARRASTRE DE VAPOR
1. OBJETIVOS:
1.1. Comprender los principios básicos de la destilación como operación

unitaria.
1.2. Aplicar la destilación simple en la separación y purificación de etanol a
partir de un producto fermentado.
1.3. Aplicar la destilación a presión reducida en el secado al vacío de un
producto termolábil.
1.4. Aplicar la destilación por arrastre de vapor en la obtención de aceites
esenciales.
2. MARCO TEÓRICO:
Destilación es una operación unitaria de separación y purificación de los

componentes de una mezcla liquida o las disoluciones de dos o más líquidos por
vaporización parcial de la misma y condensación del vapor generado.
Es un proceso que consiste en calentar un líquido hasta que sus componentes
más volátiles pasan a la fase de vapor y, a continuación, enfriar el vapor para
recuperar dichos componentes en forma líquida por medio de la condensación.
El objetivo principal de la destilación es separar una mezcla de varios
componentes aprovechando sus distintas volatilidades, o bien separar los
materiales volátiles de los no volátiles y así, obtener el componente más volátil
en forma pura. (8) (9) (13)
Destilación simple:
Se aplica en la separación de líquidos con punto de ebullición inferior a 150ºC.
Implica la separación de impurezas no volátiles solubles e insolubles y de
aquellos líquidos cuyos puntos de ebullición difieren extraordinariamente en
aproximadamente 25 °C.
Se trabaja de forma discontinua en una sola etapa, la sustancia impura se
calienta en un recipiente hasta que sus componentes más volátiles se evaporan,
los vapores producidos son inmediatamente canalizados hacia un condensador
hasta obtener el producto destilado. (9) (13)
Destilación al vacío:
El punto de ebullición de las sustancias varía en relación directa con la presión.
La relación entre la presión aplicada y la temperatura de ebullición de un líquido
está determinada por su comportamiento presión de vapor-temperatura. Un
líquido alcanza su punto de ebullición cuando su presión de vapor iguala a la
presión atmosférica o de operación, por lo tanto, al reducir la presión de
operación, la temperatura de ebullición disminuirá.
Muchos líquidos orgánicos no pueden ser destilados a presión atmosférica debido
a que se descomponen al llegar a su punto de ebullición o por debajo de éste,
esto es frecuente en compuestos con punto de ebullición superior a 150 ºC,
estas sustancias se purifican o separan por una destilación a presión reducida
para evitar su descomposición. En otros casos se prefiere la destilación al vacio
por el ahorro en el suministro de energía. (9) (13)
Destilación por arrastre de vapor:

Se utiliza para separar aceites, sustancias insolubles en agua y literalmente
volátiles de otros productos no volátiles. Se aplica principalmente para la
obtención de productos naturales. En el proceso de destilación predomina un
sistema de dos fases inmiscibles a lo largo de la destilación. (9) (13)
Destilación fraccionada:
Si la diferencia que hay entre los puntos de ebullición es demasiado pequeña
para que una destilación simple resulte eficiente, es necesario recurrir a
destilaciones repetidas. Se trabaja en forma continua con una columna
fraccionadora, a través de la cual la fase de vapor y la fase condensada fluyen en
direcciones opuestas. La eficiencia de tales columnas se expresa en platos
teóricos, definido como la unidad de la columna que tiene la misma eficacia en la
separación que una destilación simple y se expresa a menudo en cm de altura de
la columna. Se utiliza una columna de fraccionamiento entre el recipiente que
calienta la sustancia y el condensador, desde el piso inferior el vapor asciende
por los distintos niveles formados por platos teóricos donde tienen lugar
sucesivas evaporaciones y condensaciones de la mezcla en función del punto de
ebullición; en los platos inferiores quedan retenidos los líquidos menos volátiles,
y en los superiores los más volátiles. (9) (13)
3. MATERIALES:
3.1. Material vegetal:

• Flores, hojas, corteza, frutos o semillas de plantas aromáticas.
3.2. Insumos:
• Muestra termolábil.
• Producto fermentado.

• Equipo de destilación simple.
• Equipo de destilación al vacío.
• Equipo de destilación por arrastre de vapor.
3.4. Otros:
• Agitador magnético.
• Conectores.
• Espátulas.
• Papel filtro.
• Picetas.
• Pinzas.
3.5. Equipos:
• Bomba al vacío.
• Hotplate.
4. METODOLOGÍA:
4.1. Destilación simple:

• Se destilo el etanol de 200 mL de un producto fermentado.
4.2. Destilación al vacío:

• Se secó al vacío un producto termolábil. Con las siguientes
parámetros: 60°C y una presión al vacio de – 40KPa
4.3. Destilación por arrastre de vapor:

• Se obtuvo aceites esenciales a partir de material vegetal.
Considerando los siguientes parámetros: 60°C para la temperatura
de destilación.
Montar los diferentes equipos de destilación e identificar sus partes.
Registrar la temperatura a la cual se inicia la destilación en cada tipo de

destilación.
Reportar el volumen de destilado obtenido en cada tipo de destilación.
Reportar las condiciones de cada tipo de destilación.
¿Qué aceite esencial está presente en la materia prima utilizada?
Graficar en el eje de las abscisas el tiempo vs en el eje de las ordenadas la
humedad en base seca o húmeda del producto termolábil.
7. CONCLUSIONES:
8. SUGERENCIAS:
9. CUESTIONARIO:
¿Por qué las fracciones de destilado se dividen en cabeza, cuerpo y cola?

¿Explica cómo optimizar el proceso de destilación?
¿Qué son los aceites esenciales? Enumera y describe las principales aplicaciones
de 10 aceites esenciales.
Diseña un diagrama de flujo para la obtención de un producto en el cual se
utiliza la destilación simple, al vacío o por arrastre de vapor como operación
unitaria.
Investiga sobre las empresas de destilación que existen en nuestro país,
describe brevemente el rubro al que se dedican.
10. BIBLIOGRAFÍA:
11. ANEXOS:
DATOS Y APUNTES:
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BIBLIOGRAFÍA:
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[Online].; 2014 [cited 2019 07 22. Available from:
http://psicopedagogico.edu.sv/archivoL/Libro004.pdf.
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Biomineras Chile: Ediciones Universitarias de Valparíso; 2005
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6. OSINERGMIN. Tecnología de la Lixiviación Baccteriana de Minerales Lima:

Osinergmin; 2016.
7. Aehle W. Enzymes in Industry. Tercera ed.: Wiley; 2007.
8. Rennerberg R. Biotecnología para principiantes España: Reverté; 2008.
9. Filckinger MC. Downstream Industrial Biotechnology New Jersey: Wiley; 2013
10. Walsh G. Pharmaceutical Biotechnology San Francisco: Wiley; 2007.
11. Smith J. Biotecnología España: Escribia; 2009.
12. Thieman W, Palladino M. Introduction to Biotechnology USA: Pearson

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13. Wankat P. Ingeniería de Procesos de Separación. Segunda ed. México: Pearson

Educación; 2008.

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Ing. Cinthia Córdova Barrios

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ESTUDIE CADA EXPERIENCIA ANTES DE CLASE

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REGISTRAR LOS INCIDENTES

TRABAJANDO CON PRODUCTOS QUIMICOS

CALENTAR UN LÍQUIDO EN UN TUBO DE ENSAYO

NUNCA ASPIRE A TRAVES DE UNA PIPETA CON LA BOCA

OLOR DE LAS SUSTANCIAS GASEOSAS

RECIPIENTES CON GRANDES VOLÚMENES DE SUSTANCIAS

TAPONES Y NEXOS DE GOMA EN MATERIAL QUEBRADIZO

LIMPIEZA DEL MATERIAL AL FINALIZAR EL TRABAJO

Lentes de seguridad (goggles o safety glasses):

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4.3. Aislamiento de microorganismos biolixiviantes:

4.4. Cultivo de microorganismos biolixiviantes:

¿Qué estrategias se utiliza para preparar o procesar la muestra?

CARACTERIZACIO N DE MICROORGANISMOS BIOLIXIVIANTES

3.1. Caracterizar macroscópicamente el cultivo de los microorganimos

La observación al microscopio óptico con distintas coloraciones de los cultivos

Las bacterias que intervienen en los procesos de lixiviación son generalmente

Acidithiobacillus ferrooxidans, ha sido la bacteria más estudiada, tiene forma

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3.1. Materia prima: