AISLAMIENTO

BACTERIOLÓGICO
Paula Barreto
Camila Velandia
Las bacterias no pueden
cultivos
Para obtenerlas
estudiarse como
debemos cultivarlas,
individuos aislados,
utilizando medios de
sino como poblaciones, cultivo con los
por su tamaño. nutrientes necesarios
Estas poblaciones
y en cantidades
deben cumplir con el apropiadas a los
requisito de provenir requerimientos
de una sola célula. específicos de los
microorganismos
 BRUCELLA spp.
Aislada por primera vez por Sir David Bruce
en 1886, que observó el microorganismo en
cultivos esplénicos de soldados que habían
fallecido por fiebre en Malta, país donde
la enfermedad era endémica.

Aunque la prueba más específica para el

diagnóstico de brucelosis humana es el
aislamiento de Brucella spp., su eficacia
es baja y un resultado negativo no puede
descartar la enfermedad, sobre todo en las
formas crónicas en las que los cultivos
negativos son frecuentes.
 Características
El género Brucella está formado por bacilos gramnegativos
pequeños, inmóviles y aerobios, de crecimiento lento.

Brucella melitensis afecta fundamentalmente a cabras y

ovejas, pero puede afectar a bóvidos y cerdos

Brucella abortus es el microorganismo implicado con mayor

frecuencia en la brucelosis bovina

Brucella suis afecta primariamente al ganado porcino. Las

tres especies menores (Brucella neotomae, Brucella ovis y
Brucella canis), no revisten importancia en patología
humana.
MUESTRAS
Hemocultivo
leche: infección en uno o
Producto de abortos:
más cuarterones de la
Membranas fetales, Fetos
ubre, se toma 20 mL
abortados, placenta.
aprox. de cada pezón.
Animales sacrificados:
Exudado vaginal: Se
tejido reticuloendotelial
encuentran durante las 6
(bazo, hígado, ganglios
semanas siguientes al
linfáticos, médula ósea),
parto o aborto, se
útero grávido o puerperal
obtiene por escobillon.
y ubres.
 Medio Bifásico clásico Ruiz
Aislamiento Castañeda, emplea fase sólida y
líquida; en procesos agudos tras
incubación de 2 a 4 días se
Suele obtenerse por observa en fase sólida pequeñas
hemocultivo, cultivo de colonias que se deslizan por el
médula ósea o raramente agar similares a lágrimas de
por cultivo de líquido cera.
cefalorraquídeo, líquido
articular, exudado
purulento.
Se emplean sistemas como VITAL
(bioMérieux), BACTEC
(Becton-Dickinson) y BACT/ALERT
(Organon Teknika), resultando ser
el sistema BACTEC el más eficaz,
capaz de detectar la presencia
del microorganismo tras 3 a 5
días de incubación
 MEDIOS DE CULTIVO
Se recomiendan como medios de
Para el aislamiento y la
cultivo básicos (no selectivos)
reproducción de las brucelas son
que esten suplementados con
preferibles medios sólidos, que
suero (5%) :
facilitan la identificación y el
aislamiento de las colonias y
● Medio bifásico Ruiz
dificultan la disociación. Para
Castañeda (Hemocultivo)
cultivar líquidos, especialmente
● agar-dextrosa con suero
sangre, los medias líquidos
● agar-triptosa con suero
ofrecen la ventaja de que permiten
● agar-tripticasa-soja
sembrar mayores cantidades que los
sólidos.
Características de colonias en
cultivo
Colonias que suelen ser visibles al 3er dia, la placas
se examina hasta el 4to o 5to dia cuando son
redondeadas, con borde liso.

En medios selectivos la proliferación es mas lenta; a

veces no crece mas que una colonia por placa, al ver
la placa a contraluz se ven las colonias translúcidas
y color ámbar pálido.
Colonias de Brucella canis en agar tripticasa soya con 5% de suero bovino,
incubadas a 37° C por 72 h. Se observan colonias pequeñas y traslúcidas. Cepa
aislada de orina de un perro aparentemente sano
 AGAR BRUCELLA
Enriquecido con un 5% de sangre de
caballo, fue diseñado originariamente
para el aislamiento de Brucella spp.La
bacteria crece lentamente, necesitando
un mínimo de 3 días hasta 2 semanas. La
temperatura óptima de incubación del
cultivo es de 35ºC. Son aerobios
estrictos.

Las colonias pueden ser

traslúcidas o presentar un aspecto
opaco, granular y pegajoso. La
morfología está determinada por el
Ag O del lipopolisacárido de la
pared celular
 Otros medios a emplear como selectivos

● Agar-dextrosa con glicerina(2:1)

● Agar-infusión patata
● Agar-dextrosa con suero
● Medio Kuzdas y Morse: a 1 L de base 100 mg de
cicloheximida (fungistático) 25000 UI de bacitracina
activa y 6000 UI polimixina B, mas adición de violeta de
etilo (sin embargo hay cepas de brucellas spp. sensibles
a los colorantes y no se desarrollan)
 Cultivo por muestra
Leche: (Prueba del anillo se debe separar muestra); antes
del cultivo se centrifuga la leche, en la placa de agar se
siembra extendiendo una mezcla de nata y sedimento con asa
grande por método masivo.

Exudado vaginal: Se flame el extremo que no penetra la vulva

se extra el escobillón, este se frota en la superficie del
medio.
Hemocultivo: Se emplean 10 mL de sangre y se emplea frasco
de hemocultivo de Ruiz Castañeda, se agita suavemente,
incubación vertical.

Membranas fetales: Se lava antes del cultivo (suelen estar

muy contaminados) con solucion salina esteril ~3 lavados,
después de los lavados se cortan en trozos y se frotan sobre
la superficie del medio

Fetos abortados: Se extiende el material gástrico sobre la

superficie de la placa de cultivo con asa o escobillón,
tejidos y meconio se frotan sobre el medio.
Tinciones
Tinción de Gram: Bacilos o
cocobacilos Gram negativos.

Método de Koster modificado o

STAMP: Tinción para detectar
especies de Brucella en tejidos de
mamíferos. Se utiliza safranina
como colorante de las
preparaciones.

Método de Ziehl-Neelsen modificado:

Brucella teñidas de rojo sobre
fondo azul, en membranas fetales
se observan agrupadas en racimos.
¿qué hacer
en el
laboratorio?
Reacción de Reacción de Indol
catalasa, oxidasa y Voges Proskauer
y ureasa positiva. negativa
 Diagnóstico diferencial
Bordetella bronchiseptica: tejidos de cobayo, diferenciación
por estructura Ag’s , uso de CS y motilidad en medio.

Vibrio fetus: (Campylobacter fetus) móvil y morfología en

coma.

Moraxella y Acinetobacter: No fermentación de glucosa,

diplococos y pueden ser encapsulados, pueden o no oxidar la
glucosa, negativos para ureasa y nitratos. (no distinción
fácil de Brucella)

Yersinia enterocolitica tipo IX: Diferenciación fermenta la

glucosa, motilidad a 22 °C y mayor tamaño morfológico.
REFERENCIAS
Alton G, Jones L, Pietz D. las técnicas de laboratorio para
brucelosis. 2da ed. FAO OMS; Consultado: 10 Septiembre 2019.