Seminario 6 - Enzimas 2 - 2019 PDF

DEPARTAMENTO DE BIOQUÍMICA HUMANA
MATERIA QUÍMICA BIOLÓGICA - CICLO LECTIVO 2019
SEMINARIO 6
ENZIMAS 2
Regulación de la actividad enzimática.
Inhibidores.
Enzimas Michaelianas y alostéricas
INHIBIDORES DE LA ACTIVIDAD ENZIMÁTICA
La actividad de una enzima puede ser disminuida o eliminada completamente por la acción
de ciertas sustancias a las cuales se las conoce con el nombre genérico de inhibidores
enzimáticos. Debemos aclarar que en este grupo de sustancias no deben ser incluidos aquellos
agentes que producen simplemente una destrucción irreversible de la enzima, como podrían ser
todos aquellos que conducen a su desnaturalización, como por ejemplo los ácidos fuertes.
La inhibición enzimática es de gran importancia fisiológica ya que, a veces, la inhibición de
una sola enzima que forma parte de una cadena de reacciones metabólicas puede inhibir por
completo a todo el proceso metabólico involucrado y ejercer de esa forma un efecto profundo y a
veces fatal sobre el organismo. De más está recalcar la importancia que este fenómeno tiene en
farmacología y toxicología como así también en el desarrollo de herbicidas e insecticidas. De ahí
que el estudio del mecanismo de acción de los inhibidores se haya constituido en una de las más
exploradas de la enzimología práctica
Los inhibidores pueden clasificarse en dos grandes grupos:
1) Irreversibles
2) Reversibles
i) competitivos
ii) no competitivos
En el primer caso, los inhibidores irreversibles, la enzima no recobra su actividad por
remoción del inhibidor libre. Esto es debido a que este tipo de inhibidores actúa por lo general
modificando irreversiblemente o aun destruyendo algunos de los grupos esenciales del centro
activo. En el segundo caso, los inhibidores reversibles, la enzima recobra su actividad por
remoción del inhibidor libre (por ejemplo, por simple diálisis), lo cual demuestra que hay un
equilibrio entre el inhibidor libre y la enzima.
Ejemplos de uno y otro tipo de inhibidores los encontramos entre los llamados reactivos de
tioles. Estas sustancias tienen la particularidad de reaccionar específicamente con grupos
sulfhidrilos (-SH) de las proteínas presentes en los grupos laterales correspondientes a los
residuos de cisteína. Existen ciertas enzimas que requieren para actuar que algunos de esos
grupos sulfhidrilos estén libres. Es evidente que en esos casos los reactivos de tioles, al bloquear
los grupos sulfhidrilos esenciales de estas enzimas, pueden actuar como inhibidores.
Entre algunos reactivos de tioles
podemos mencionar al p-
cloromercuribenzoato y el alquilante
iodoacetato, que ejemplifican a un
inhibidor reversible y a un inhibidor
1
irreversible, respectivamente. Ambos reaccionan con los grupos sulfhidrilos libres de las proteínas,
pero mientras que el primero lo hace formando un complejo reversible (mercaptida), el segundo
forma un carboximetil-derivado de gran estabilidad, incapaz de disociarse.
En el primer caso, una vez establecido el equilibrio, si se elimina el p-cloromercuribenzoato
la reacción se va a desplazar hacia la izquierda por el principio de acción de masas, disociándose
el complejo enzima-inhibidor en enzima libre e inhibidor. Si la eliminación es total, toda la enzima
recuperará su forma libre activa.
En cambio, en el segundo caso, una vez formado el carboximetil-derivado, es imposible
disociarlo dada su
extraordinaria estabilidad, por
ende, la eliminación del
exceso del inhibidor será
ineficaz para hacer recuperar
la actividad original.
Otro ejemplo de inhibición irreversible es el representado por los llamados gases
neurotóxicos que se desarrollaron durante la 2ª Guerra Mundial, para ser utilizados como gases
de guerra. Son sustancias que reaccionan con el grupo alcohol del resto lateral correspondiente a
la serina de algunas enzimas que tienen un hidroxilo en el centro activo y que es necesario para
que la enzima presente actividad.
Una enzima de este tipo es la acetilcolinesterasa que interviene en los procesos de
transmisión del impulso nervioso y cuya inhibición causa, entre otros efectos, parálisis de los
músculos estriados.
acetilcolinesterasa
Acetilcolina + H2O colina + acetato
Una de las primeras sustancias

que se utilizó con este fin fue el
diisopropilfluorofosfato que reacciona con
la enzima como se muestra en la figura.
Se lo utilizó también como
insecticida (pertenece al grupo de
organofosforados). Es muy efectivo, pero sumamente peligroso por su volatilidad.
Inhibición reversible
Vamos ahora a referirnos exclusivamente a la inhibición reversible, en la cual el inhibidor
también interactúa con algún grupo esencial de la enzima, pero haciéndolo en forma reversible.
Las distintas formas de interacciones se traducen en varios tipos de inhibición perfectamente
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diferenciables experimentalmente. Los dos tipos más comunes son la competitiva y la no
competitiva.
En la inhibición competitiva el inhibidor se combina reversiblemente con la enzima en el
sitio por el cual se debería unir el sustrato, impidiendo por lo tanto la formación del complejo activo
enzima-sustrato. De ahí surge el nombre de competitiva, dado que, efectivamente, tanto el
inhibidor como el sustrato compiten por el mismo sitio y tratan de desplazarse mutuamente de la
enzima. Las posibles formas de reaccionar del sustrato y el inhibidor con la enzima pueden
presentarse con ecuaciones (ver figura)
Por ello este tipo de inhibición se
caracteriza en que puede disminuirse
considerablemente aumentando la
concentración de sustrato, de modo que
desplace al inhibidor.
En este tipo de inhibidores se
incluyen sustancias que
estructuralmente son muy parecidas al sustrato (llamados análogos estructurales) y que, por lo
tanto, pueden ocupar el lugar que ocuparía el mismo en la enzima, pero no pueden ser atacadas
por la misma.
Un ejemplo clásico de este tipo de inhibición es el de la succinato deshidrogenasa, enzima
que tiene por sustrato el ácido succínico. Puede ser inhibida por otras sustancias estructuralmente
parecidas al ácido succínico, tales como el ácido malónico, el ácido oxálico y el ácido glutárico.
Ácido succínico
Succinato
deshidrogenasa Ácido malónico
Ácido oxálico
SUCCINATO FUMARATO
Ácido glutárico
En la inhibición no competitiva se postula que el inhibidor se une con la enzima en otro

sitio, que no es aquel por el cual se une el sustrato. Por esa razón la unión del sustrato con la
enzima no es afectada por la presencia del inhibidor y se puede formar entones un complejo
enzima-sustrato-inhibidor. Pero este complejo es catalíticamente inactivo y no puede escindirse en
productos de la reacción y complejo enzima-inhibidor. El inhibidor presenta afinidad tanto por la
enzima libre como por el complejo enzima-sustrato. En este caso, las posibles formas de
reaccionar del sustrato y el inhibidor con la enzima se representan por las ecuaciones siguientes:
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Este tipo de inhibición se caracteriza
entonces porque no puede ser revertida por
un aumento de la concentración de sustrato.
El sustrato no puede desplazar al inhibidor
unido a la enzima.
Experimentalmente ambos tipos de
inhibición (competitiva y no competitiva)
pueden distinguirse fundamentalmente
mediante la aplicación del método de
Lineweaver-Burk antes descripto a la
reacción enzimática con y sin inhibidor, en cuyos respectivos casos se obtendrán los gráficos
indicados en las figuras siguientes.
Inhibición competitiva
Michaelis-Menten Lineweaver-Burk
Vo 1/Vo
Vmáx Sin inhibidor Con inhibidor
Con inhibidor
Vmáx/2
1/Vmáx
Sin inhibidor
10 0
Km Km inh
(sustrato) 1/(S)
-1/Km -1/Km inh
Como puede apreciarse en los gráficos, en el caso de la inhibición competitiva la Vmáx

para una dada cantidad de enzima no se modifica por el agregado de inhibidor porque agregando
una concentración lo suficientemente grande de sustrato se pude desplazar completamente al
inhibidor. Sin embargo, el Km aumenta porque la presencia del inhibidor hace que se necesite una
mayor cantidad de sustrato para saturar a la enzima que la que se necesitaría si el inhibidor no
estuviera presente.
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Inhibición NO competitiva
Michaelis-Menten Lineweaver-Burk
Vo 1/Vo
Vmáx Con inhibidor

Sin inhibidor
Vmáx/2 Con inhibidor Sin inhibidor

1/Vmáx inh
Vmáx inh
Vmáx inh/2
1/Vmáx
Km = Km inh (sustrato) -1/Km 1/(S)
En cambio, en la inhibición no competitiva, el inhibidor disminuye el valor de la Vmáx ya

que el sistema se comporta como si la concentración de la enzima hubiera disminuido, dado que
la fracción de enzima unida al inhibidor no tiene actividad catalítica. Sin embargo, no se modifica
el Km ya que la unión del sustrato a la enzima no está alterada por la simultánea unión del
inhibidor.
En resumen:
Tipo de Sitio de unión de la enzima En presencia del Esquema

Inhibición inhibidor
reversible
- La unión del sustrato y del - el valor de Km
COMPETITIVA inhibidor son mutuamente aumenta
excluyentes.
- A muy altas - Se mantiene el
concentraciones de sustrato valor de Vmáx
desaparece la inhibición.
- Por lo general, el inhibidor
competitivo es un análogo
estructural del sustrato.
NO Se une a un lugar diferente - El valor de Km

COMPETITIVA del sitio activo de la enzima se mantiene
- Se une a la enzima libre y - Disminuye el

también al complejo valor de Vmáx
enzima-sustrato
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ENZIMAS ALOSTÉRICAS
Las enzimas a las cuales nos hemos referido hasta este momento, las enzimas
michaelianas, corresponden a lo que se ha dado en llamar “enzimas clásicas”. Pero además
existen ciertas enzimas con características regulatorias que poseen propiedades que las
distinguen de las primeras y que se denominan enzimas alostéricas.
Las enzimas alostéricas, como las clásicas, reconocen y se asocian en su centro activo a
un sustrato específico y catalizan su conversión en productos. Pero estas enzimas, además,
tienen la propiedad de reconocer selectivamente a uno o varios compuestos distintos del sustrato
cuya asociación reversible con la proteína tiene por efecto modificar su actividad frente al sustrato,
ya sea activándolo o inhibiéndolo, sin participar en nada en la reacción en sí. Dichos compuestos,
que reciben el nombre de efectores o moduladores alostéricos, interaccionan con la enzima en
un sitio distinto y generalmente distante del centro activo que recibe el nombre de sitio alostérico.
Se acepta que la asociación del efector alostérico a la proteína en el sitio alostérico produce una
alteración de la configuración espacial de la enzima (transición alostérica) que se transmite al
centro activo, modificándolo de tal manera que la actividad de la enzima aumenta o disminuye
según se trate de un efector o modulador alostérico positivo o negativo, respectivamente.
Las enzimas alostéricas tienen por lo general una estructura proteica más compleja que la
de las enzimas no regulables o clásicas: están constituidas por subunidades. Además, pueden
responder a la acción de más de un efector alostérico (positivos y/o negativos), en cuyo caso
poseen en su estructura un sitio alostérico distinto para cada uno de ellos.
Desde ese punto de vista, las enzimas alostéricas se pueden clasificar en tres grandes
grupos:
a) Homotróficas: en las cuales el mismo sustrato puede actuar como modulador,
generalmente positivo.
b) Heterotróficas: aquellas que son moduladas positiva o negativamente por sustancias
distintas del sustrato, para cada una de las cuales la enzima posee un sitio específico de
reconocimiento.
c) Homotróficas-heterotróficas: responden a efectos regulatorios del mismo sustrato y de
sustancias distintas del mismo.
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Desde el punto de vista metabólico estas enzimas, que generalmente catalizan reacciones
prácticamente irreversibles, se encuentran ubicadas estratégicamente en ciertos puntos de las
vías metabólicas, de tal manera que su regulación coopera en forma efectiva en la economía
general de la célula. Así, por ejemplo, las encontramos como primera enzima de una secuencia de
reacciones, de tal manera que su activación o inhibición aumente o disminuya respectivamente la
velocidad de toda la vía metabólica involucrada de acuerdo a las necesidades de la célula.
Las enzimas alostéricas tienen propiedades
cinéticas que las diferencian de las enzimas Vmáx
V0
michaelianas. Si bien exhiben saturación cuando la [S]
es suficientemente alta, cuando se grafica V0 en
Vmáx
función de [S] las enzimas alostéricas muestran una 2
curva de tipo sigmoidal, no hiperbólica como las
enzimas michaelianas clásicas. En estas curvas
sigmoidales podemos encontrar también un valor de K0,5 [S]
[S] en el cual la V0 es la mitad de la Vmáx, pero no podemos referirnos a este valor como Km, ya
que estas enzimas no siguen la relación hiperbólica de Michaelis-Menten. Se la representa
entonces como K0,5 o Km aparente.
En algunos casos, el sustrato actúa también como modulador positivo (homotróficas): la
unión de una molécula de sustrato altera la conformación de la enzima, incrementando la unión de
subsecuentes moléculas de sustrato. Esto explica la cinética sigmoidal observada en el cambio de
V0 con [S] crecientes. Una característica de la cinética sigmoidal es que los pequeños cambios en
la concentración de un modulador pueden estar asociados con grandes cambios en la actividad,
sobre todo en [S] cercanas a la parte empinada de la curva. En el caso de las enzimas alostéricas
heterotróficas, donde los moduladores son otros metabolitos diferentes al sustrato, es difícil
generalizar cómo se modifica la forma de la curva de saturación de sustrato. Hablaremos un poco
de ello más adelante.
Modelos para las enzimas alostéricas

Se han propuesto algunos modelos para interpretar las interacciones entre la proteína, el
sustrato y el o los efectores de las enzimas alostéricas. Entre ellos vamos a describir brevemente
los debidos a Monod, Wyman y Changeux (1965) y a Koshland, Nemethy y Filmes (1966).
El primero de ellos, conocido con el nombre de modelo concertado simétrico (Monod,
Wyman y Changeux), parte del supuesto de que la proteína regulatoria (oligómero) consiste de
dos o más subunidades idénticas (protómeros) que se asocian de tal manera que la molécula
posea por lo menos un eje de simetría. Cada subunidad contiene un sitio de unión para cada
sustrato y efector, manteniéndose la simetría de la molécula. Cada subunidad puede existir en dos
estados conformacionales distintos: estados R y T, que difieren en la posibilidad que poseen de
unirse al o los sustratos y los efectores. Así la forma R (“relajada”) tiene afinidad por el sustrato y
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por lo tanta alta actividad, mientras que la forma T (“tensa”) tiene baja afinidad por el mismo y
por ende baja actividad. La transición de una conformación de una subunidad es concertada con
la correspondiente transición en las subunidades vecinas, de tal manera que todas las
subunidades se encuentren en el mismo estado conformacional simultáneamente y la simetría
molecular se mantenga. Es decir, la enzima tiene solo dos estados globales de "todo o nada". Por
otra parte, el equilibrio entre la forma R y la forma T se establece en ausencia de los sustratos y
efectores.
Los sustratos y activadores tienen mayor afinidad por el estado R y los inhibidores por el
estado T. De esta forma, los ligandos van a desplazar el equilibrio entre los estados T y R, de
modo que todas las subunidades de la enzima se encuentren en uno u otro estado.
En la figura se representa esquemáticamente este modelo para una proteína oligomérica

constituida por dos subunidades en la cual sustrato (S) y el efector positivo (A) se unen sólo al
estado R, mientras que el inhibidor (I) lo hace exclusivamente al estado T. En ausencia de
sustrato y activador el equilibrio entre los estados T y R está desplazado hacia el estado T, es
decir la mayor parte de las moléculas de la enzima se encuentran al estado T. Al agregarse el
sustrato (S) o el activador (A), y dado que estos ligandos se unen selectivamente a las moléculas
que se encuentran en el estado R, el equilibrio se desplaza en este sentido.
Como la transición entre las formas T y R para las subunidades es concertada, es
suficiente la unión de la molécula de sustrato o activador a una sola de las subunidades para que
la otra quede en la forma R, dejando de esa forma disponible otro sitio de más alta afinidad para el
sustrato. Cuanto más sustrato o activador se agregue mayor será el número de oligómeros en la
forma R, observándose en consecuencia lo que se denomina un efecto cooperativo positivo del
sustrato y del activador, que se traduce en una curva de saturación sigmoide.
En el primer caso (sustrato), y de acuerdo a lo que se indicó anteriormente, el efecto será
homotrófico cooperativo o positivo y en el segundo caso (activador), heterotrófico
cooperativo o positivo. Pero si se agrega activador en cantidad suficiente, el equilibrio quedará
totalmente desplazado hacia la forma R, y todas las moléculas del oligómero estarán
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exclusivamente en esa forma y la adición del sustrato en ese caso, no podrá producir un mayor
desplazamiento del equilibrio, comportándose entonces el sistema como un sistema para el cual
es válido un tratamiento cinético del tipo Michaelis-Menten, obteniéndose entonces una curva de
saturación para el sustrato de tipo hiperbólico.
En contraste con lo que ocurre con el sustrato y el activador, el inhibidor se une

exclusivamente a la forman T. Si debido a la presencia de sustrato en concentración saturante, la
enzima se encontraba originalmente casi exclusivamente en el estado R, el agregado de inhibidor
producirá un desplazamiento hacia la forma T y por ende la curva de saturación para el sustrato
se hará más sigmoide a medida que aumenta la concentración del inhibidor. El efecto en este
caso será heterotrófico negativo (del inhibidor con respecto al sustrato).
El modelo de Koshland, Nemethy y Filmer también denominado modelo secuencial se
basa en la explicada teoría del ajuste inducido. El modelo establece que la unión de un ligando
(sustrato, activador o inhibidor) a una de las subunidades de la molécula enzimática oligomérica,
produce un cambio conformacional de dicha subunidad. Esa distorsión en una subunidad puede
afectar secuencialmente la estabilidad y configuración de las subunidades vecinas, en la misma
forma que la distorsión de una parte de una cadena polipeptídica, aumentando o disminuyendo la
afinidad de las mismas por el sustrato. La siguiente figura ilustra lo dicho para el caso de una
enzima alostérica que posee dos subunidades, cada una de ellas capaz de unirse a una molécula
de sustrato y que presenta un efecto homotrófico positivo de S sobre S.
En el modelo secuencial las interacciones entre las subunidades son posibles estando las
subunidades en distintos estados conformacionales.
En el modelo concertado sólo serían posibles los estados TT y RR de la figura anterior y no
el híbrido TR, los cuales por otra parte deben preexistir actuando el ligando como estabilizador del
estado al cual se une preferencialmente. En cambio, el modelo secuencial, si bien no descarta la
posibilidad extrema de un cambio simultáneo en todas las subunidades, sostiene preferentemente
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la existencia de cambios secuenciales en la conformación de las subunidades inducidas por la
unión del o los ligandos, con la posibilidad de ocurrencia de estados conformacionales híbridos
cuando la proteína está parcialmente saturada.
Enzimas alostéricas:
• Presentan estructura cuaternaria.
• Tienen diferentes sitios activos, unen más de una molécula de sustrato
• La unión del sustrato es cooperativa
• La curva de velocidad en función de la (s) presenta una forma sigmoidea
• Pequeños cambios en la concentración del modulador se asocian con grandes cambios en
la actividad de la enzima
Regulación enzimática
Cuanto más se avanza en el conocimiento de la bioquímica celular, especialmente por los
aportes hechos en los últimos años por la biología molecular, más se afianza el concepto
enunciado oportunamente por Changeux, de equiparar el funcionamiento de una célula al de una
“verdadera fábrica química automática diseñada para aprovechar lo más eficientemente la energía
disponible”. En efecto, en una fábrica automática coexisten varias líneas de producción que
trabajan simultáneamente en forma concertada y que se regulan a sí mismas y entre ellas por
medio de controles automáticos, consistentes en circuitos electrónicos específicos de
retroalimentación.
Estos principios pueden aplicarse también a los seres vivos. Así, el funcionamiento de la
célula más sencilla, implica la existencia de una verdadera maraña de procesos metabólicos
consistentes en secuencias de reacciones químicas catalizadas por enzimas específicas. Cada
una de estas vías metabólicas sería equiparable a las mencionadas líneas de producción de la
fábrica automática y las máquinas elementales de la fábrica celular serían las mencionadas
enzimas. Existen en principio cuatro formas posibles de que la célula controle la velocidad de
funcionamiento de dichas vías metabólicas:
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1) DISPONIBILIDAD DE SUSTRATO
Como ya hemos indicado, la actividad de la enzima guarda proporcionalidad con los
niveles de sustrato. Estos determinan la mayor o menor velocidad en la actividad enzimática. Al
aumentar la concentración de sustrato en la célula aumenta su utilización y viceversa.
Generalmente el sustrato debe ingresar a la célula o al interior de una organela. Ejemplo: -
oxidación y síntesis de cuerpos cetónicos.
2) MODIFICACIÓN COVALENTE
Muchas enzimas son reguladas por el agregado o sustracción de grupos unidos
covalentemente a la misma. La regulación covalente más frecuente se realiza por modificación de
los residuos de tirosina, serina y/o treonina de las enzimas por un proceso de unión o eliminación
de grupos fosfatos. Las enzimas reguladas por fosforilación pueden variar su actividad de
diferente manera. En algunos casos la fosforilación aumenta su actividad, como es el caso de la
glucógeno fosforilasa, la citrato liasa, la fosforilasa b quinasa y la HMG-CoA reductasa quinasa.
Por el contrario, otras enzimas reducen su actividad cuando se encuentran fosforiladas, como la
acetil-CoA carboxilasa, la glucógeno sintasa, la piruvato deshidrogenasa y la HMG-CoA
reductasa
Existen también enzimas cuya actividad es modulada por la inserción covalente de otros
grupos, como la adenilación, uridilación, ADP-ribosilación, mutilación, etc.
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3) MODULACIÓN ALOSTÉRICA.
Ya se describió anteriormente (ver página 6)
Algunos casos particulares dan origen a diferentes modos regulatorios.
En algunas vías metabólicas, la enzima que
cataliza la primera etapa de la serie suele ser inhibida por -
el producto de la última-que actuaría como el regulador
E1 E2 E3 E4
alostérico-. Cuando la concentración de ese producto final
aumenta, ello indica que su elaboración excede las S1 → A → B → C → P
necesidades y se frena el funcionamiento de la vía
reduciendo la actividad de la enzima reguladora. Se habla +
de un proceso de retroinhibición.
E1 E2 E3 E4
También puede suceder que una enzima sea
estimulada por algún agente que se acumula en el medio.
S1 → X → Y → Z → P
Cuando existe un exceso de sustrato, por ejemplo, puede
ocurrir que él mismo promueva su utilización activando a la enzima.
4) INDUCCIÓN O REPRESIÓN DE LA SINTÉSIS DE LA ENZIMA.

Implica el control de la síntesis de las enzimas regulatorias involucradas en un camino
metabólico. Se habla entonces de inducción enzimática o represión enzimática según que la
velocidad de producción de una dada enzima (o de un conjunto de enzimas metabólicamente
relacionadas) y por ende su concentración celular, sea aumentada o disminuida respectivamente
como respuesta a las necesidades de la célula, actuando por lo general un metabolito particular
como señal desencadenante del proceso. Este mecanismo es mucho más lento que los anteriores
ya que implica cambios (aumento o disminución) en la síntesis de las enzimas involucradas.
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EJERCITACIÓN GENERAL
1) ¿Qué es una enzima? ¿Cuál es su función?
2) ¿Qué significa que una enzima es un catalizador biológico?
3) ¿Cuál es la estructura química de las enzimas? ¿Qué es el sitio activo de una enzima? ¿Por
qué tres aminoácidos que forman parte del sitio activo pueden estar alejados en la estructura
primaria?
4) Explique a qué se denomina apoenzima, holoenzima, coenzima, cofactor y grupo prostético.
5) Explique y ejemplifique qué son las isoenzimas.
6) ¿De qué depende la especificidad de las enzimas?
7) Para la reacción Sustrato → Producto se aplica el siguiente diagrama:

G (cal/mol)
400 Estado activado
300
200
Sustrato
100
Producto
Grado de avance de la reacción
Calcule:
a) El G para la reacción de Sustrato → Producto, indicando si se producirá

espontáneamente esta reacción en el sentido en el que está escrita.
b) La energía de activación (Ea) en presencia y ausencia de enzima, indicando qué curva

corresponde a cada caso.
8) ¿Cómo se hace para determinar la concentración de una determinada enzima en una muestra
de extracto tisular o de algún líquido biológico?
9) Defina actividad de una enzima. ¿Cómo se determina? ¿Qué son las Unidades
Internacionales (UI)?
10) ¿Qué información brinda la actividad total y la actividad específica?
11) 20 l de un homogenato de tejido hepático (250 g de proteínas) catalizan la formación de

56,7 moles de glu-6P en 15 minutos de incubación en las condiciones óptimas para la
determinación de la actividad de glucoquinasa.
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a) ¿Cuántas UI de enzimas habrá en dicha preparación?
b) ¿Cuántas por ml de homogenato?
c) ¿Cuál será la actividad específica de dicha preparación?
d) ¿Cómo esperaría que fuera este último valor con respecto al de la enzima pura?
e) ¿Cuál es el valor de actividad enzimática expresado en Katales?
12) La hidrólisis de pirofosfato a fosfato constituye una fuerza impulsora importante en muchas
reacciones químicas (por ejemplo: síntesis de ADN). La Vmáx de una pirofosfatasa purificada de
E.coli es de 2800 UI/mg de enzima.
¿Cuántos moles de sustrato serán hidrolizados por segundo por mg de enzima cuando la
concentración del sustrato es mucho mayor que el Km?
13) Un extracto formado por 94 g de proteínas totales contiene una enzima (no purificada) que
cataliza la transformación de 480 moles de sustrato en producto en 30 segundos. Luego de
varios pasos de purificación, se obtuvieron 27 mg de proteínas totales, capaces de transformar
220 moles de sustrato en 30 segundos.
a) calcule la actividad (en unidades internacionales) y la actividad específica de las

preparaciones antes y después de la purificación.
b) ¿Cómo varían la actividad y la actividad específica en el proceso de purificación?
Justifique.
Recuerde:
Actividad enzimática:
Unidad Internacional UI = moles/ min
Katal = mol/ seg
Actividad Específica AE = UI/ mg proteínas
14) ¿Cuáles son los factores que modifican la actividad enzimática?
15) Explique cuál es la influencia de las variaciones de temperatura sobre las velocidades de
reacción enzimática.
a) Dibuje un gráfico de la velocidad de reacción en función de la temperatura explicando qué

pasa a baja temperatura y alta temperatura.
b) ¿Qué es la temperara óptima?
16) Discuta cómo afectan los cambios de pH a la actividad enzimática. ¿Cuál es el mecanismo
por el cual los cambios de pH afectan a la actividad enzimática?
17) En el siguiente gráfico, se muestran los pH óptimos de tres enzimas ¿Qué puede decir al
respecto?
14
Enzima 1 Enzima 2 Enzima 3
Velocidad de reacción (%)
18) En el estudio de una enzima se midió la concentración del compuesto producido (producto) a
lo largo del tiempo. Se obtuvo el siguiente gráfico:
Proponga un diseño experimental para la obtención de este gráfico.
Indique:
a) ¿Qué parámetros se miden y cómo?
b) ¿Qué parámetros se mantienen constantes durante la determinación?
c) ¿Cómo se obtiene la velocidad de la reacción a un tiempo dado?
d) Compare la velocidad de la reacción a t1 y t2.
e) ¿Qué significado tiene la meseta que se observa en el gráfico?
f) Grafique los resultados obtenidos cuando se realiza la misma experiencia
i) con diferente [Enzima]
ii) con diferente [S] inicial
g) Realice un gráfico que muestre cómo varía la velocidad de reacción en función del tiempo.
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h) ¿Qué otras determinaciones necesita realizar para poder determinar los parámetros
cinéticos de la enzima?
19) a) Explique qué información proporciona el siguiente gráfico.
b) ¿Cómo procedería experimentalmente para construir dicho gráfico?
c) ¿A qué se denomina una enzima michaeliana?
d) ¿Cuáles son los parámetros cinéticos de una enzima michaeliana?
e) Señale en el grafico Km y Vmáx.
f) Dibujar en el mismo gráfico la curva que se obtiene con una concentración mayor de enzima.
En este caso ¿cómo se modifican el Km y la Vmáx?
20) En un estudio experimental de una enzima se obtuvieron los siguientes resultados:

300
Tiempo [producto]
(minutos) (mM)
250
0 0
(Producto) mM
5 19,5 200
10 39
15 58,5 150
20 78
30 105 100
50 150
70 182 50
90 207
0
0 20 40 60 80 100
t (segundos)
t (minutos)
16
a) Calcule valor de la velocidad inicial (Vo).
b) Indique hasta qué intervalo de tiempo es posible calcular la Vo.
21) La hidrólisis de la sacarosa, catalizada por la sacarasa:
Sacarosa + H2O→ Glucosa + Fructosa

Tiene el siguiente curso:
Tiempo [producto]
(segundos) (mM) 1,0
0 0,050
0,8
20 0,195
(Producto) mM
40 0,342
0,6
60 0,488
90 0,659 0,4
130 0,770
0,2
180 0,871
360 0,991 0,0
0 100 200 300 400
t (segundos)
Utilizando la tabla y el gráfico de aparición de producto en función del tiempo que se muestra:
a) Calcule la velocidad inicial (Vo).
b) Indique hasta qué intervalo de tiempo es posible calcular la Vo.
c) ¿Cómo varía la velocidad en función del tiempo?
22) Midiendo la velocidad inicial de una reacción en presencia de diferentes concentraciones de

sustrato, se obtuvieron los siguientes datos:
[Sustrato] Vo (M/min)
(M)
150 Vo = f ([S])
2,5 10-6 28
Vo (M/min)
4 10-6 40 100
1 10-5 70 50
[S] (M)
2 10-5 95 0
0,0000 0,0001 0,0002 0,0003 0,0004 0,0005 0,0006 0,0007 0,0008 0,0009 0,0010
4 10-5 112
1 10-4 128
2 10-3 139
-2
1 10 140
a) Indique en qué condiciones se realizó la determinación.

b) ¿Qué significado tiene la meseta que se observa en el gráfico?
17
c) Aunque existen métodos gráficos para la determinación precisa de los parámetros
cinéticos, Km y Vmáx, ambos valores se pueden estimar en algunos casos particulares mediante la
observación de datos como los registrados en la tabla anterior:
i) Estime el valor de Km y Vmáx.

ii) Calcule la velocidad inicial de la reacción cuando
[S] = 3. 10-5 mM.
iii) Utilizando los datos de la tabla, realice el gráfico de Michaelis-Menten. Calcule
según el gráfico los valores de Km y Vmáx.
iv) Realice la representación gráfica de dobles recíprocos o Lineweaver-Burk.
Calcule según este gráfico los valores de Km y Vmáx.
23) La hexoquinasa cataliza la fosforilación de la glucosa y la fructosa utilizando ATP. Siendo el

Km para la glucosa 0,13 mM, mientras que para la fructosa es 1,3 mM.
Indicar por cuál de ambos sustratos la enzima tiene mayor afinidad. Considere que ambas V máx
son muy similares para ambos sustratos.
24) Se tienen dos enzimas que catalizan la misma reacción: A → B
La enzima 1 tiene un Km para el compuesto A de 10 mM.

El Km de la enzima 2 para el compuesto A es de 0,1 mM.
Compare la velocidad de ambas enzimas cuando la [A] = 1 mM, con respecto a la Vmáx de cada
una de las enzimas.
25) Una cantidad constante de una solución de una enzima fue adicionada a una serie de tubos
conteniendo diferentes concentraciones de sustrato [S]. La velocidad inicial (Vo) de la reacción
fue obtenida por la medida de la pendiente inicial de la curva de formación de producto. Los
datos se representan en la siguiente tabla:
Considere que la enzima tiene un comportamiento michaeliano.

[Sustrato] Vo
a) Sin graficar, estime un valor aproximado para ambos (M) (M/min)
parámetros cinéticos, Km y Vmáx. 0,1 0,27
2 5
b) Usando los parámetros cinéticos del inciso a), calcular la 10 22
velocidad inicial cuando la concentración de sustrato es 15 M. 20 40
40 67
c) Utilizando los datos de la tabla, realice el gráfico de Michaelis- 60 80
Menten. Calcule según el gráfico los valores de Km y Vmáx. 100 100
200 120
d) Realice la representación gráfica de los dobles recíprocos o
1000 150
Lineweaver-Burk. Calcule según este grafico los valores de Km y 2000 155
3000 163
Vmáx.
18
26) La penicilina es hidrolizada y así inactivada por la enzima penicilinasa, también conocida por
-lactamasa, presente en algunas bacterias resistentes. Se midió la cantidad de penicilina
hidrolizada en un minuto en función a la concentración de penicilina y se obtuvieron los
resultados resumidos en la siguiente tabla: [Penicilina] cantidad
(M) hidrolizada
a) ¿Sigue la penicilinasa una cinética de Michaelis-Menten? (nmoles/min)
En caso afirmativo, 1,0 11
3,0 25
b) ¿Cuál es el valor del Km?
5,0 34
c) ¿Cuál es el valor de la Vmáx? 10 45
30 58
50 61
(Sugerencia, realice el gráfico de Lineweaver-Burk)
INHIBICIÓN ENZIMÁTICA
27) La biosíntesis de purinas y pirimidinas utilizadas en la síntesis de ADN necesita ácido fólico.
El metotrexate es un análogo estructural del ácido fólico utilizado en el tratamiento de algunos
cánceres. Se fija con 1000 veces más afinidad que el sustrato a la enzima dihidrofolato
reductasa. Esta enzima es importante para el mantenimiento de los niveles del ácido fólico.
a) Grafique Vo en función de [S] en presencia y ausencia del inhibidor.

b) ¿Por qué este fármaco se utiliza para el tratamiento del cáncer?
c) ¿Por qué el fármaco tiene efectos secundarios que afectan al tubo digestivo y al sistema
hematopoyético?
28) El metabolismo del etanol se produce fundamentalmente en el hígado en dos pasos: en

principio el etanol se oxida a acetaldehído por la enzima alcohol deshidrogenasa (ADH) que
consume NAD+. El acetaldehído es medianamente tóxico, dado que normalmente es oxidado
por la aldehído deshidrogenasa (ALDH) a acetato.
El metanol también es sustrato de la alcohol deshidrogenasa, pero el producto formado

(formaldehído) que se acumula y es muy tóxico.
ADH
Etanol + NAD+ → Acetaldehído + NADH + H+
ALDH
Acetaldehído + NAD+ → Acetato + NADH + H+
Caso A. A un hombre de 43 años se le prescribió disulfiram, pero se le advirtió que no

consumiera alcohol durante el tratamiento. El disulfiram inhibe en forma irreversible a la enzima
aldehído deshidrogenasa y no presenta toxicidad en ausencia de alcohol. El paciente bebió una
19
gran cantidad de etanol en una fiesta y tuvo que ser trasladado al hospital, donde murió esa
misma noche.
¿Por qué el fármaco resulto tóxico para este paciente?
Caso B. Una persona ingirió vino adulterado con metanol. Posteriormente debió ser hospitalizada.
Como parte del tratamiento, el médico le suministró un exceso de etanol.
¿Cuál es el fundamento de este tratamiento?
Caso C. Los orientales son muy sensibles a las bebidas alcohólicas. Esto se debe a que la forma
mitocondrial de la enzima aldehído deshidrogenasa de bajo Km está ausente. Estas personas
solo poseen la enzima citosólica de alto Km.
a) En base a esta información, explique la mayor susceptibilidad al alcohol en estos
individuos.
b) ¿Qué son entre sí las formas mitocondrial y citosólica de la enzima aldehído
deshidrogenasa?
29) La siguiente tabla indica la velocidad con que se transforma un sustrato en una reacción
catalizada por una enzima, en ausencia (C) y en presencia de dos inhibidores (I1 y I2).
Calcule Km y la Vmáx en cada caso, a partir del gráfico de Lineweaver-Burk, e indique de qué tipo
de inhibidor se trata en cada caso.
[Sustrato] Vo (mM/min)
(mM) C I1 I2
1 2,5 1,17 0,77
2 4,0 2,10 1,25
5 6,3 4,00 2,00
10 7,6 5,70 2,51
20 9,0 7,20 2,86
30) Se quiere determinar los parámetros 1/Vo

0,03
cinéticos de una enzima que se comporta
según el modelo de Michaelis-Menten, en
ausencia y en presencia de un inhibidor no
competitivo. Se obtuvo el siguiente gráfico: 0,02
a) Indique cómo se denomina dicho

gráfico.
b) Indique cuál recta corresponde a la 0,01
reacción en ausencia (control) o presencia de

dos concentraciones diferentes de un inhibidor
I (I1, I2). Considere [I2] > [I1].
-1 1 2 3 4
1/(S)
20
c) ¿Cómo calcularía los parámetros cinéticos a partir del gráfico? ¿Qué valores calcula para
Km y Vmáx en cada caso?
d) Realice un gráfico de Michaelis-Menten (Vo en función de [S]) para los tres casos,
identificando a qué corresponde cada curva.
31) Se quiere determinar los parámetros cinéticos de otra enzima michaeliana, en ausencia y en
presencia de un inhibidor. Se obtuvo el siguiente 1/Vo
gráfico:
a) Indique de qué tipo de inhibidor se trata.

0,03
b) Indique cuál recta corresponde a la reacción
en ausencia (control) o presencia de dos
concentraciones diferentes de un inhibidor I (I1, I2). 0,02
Considere [I2] > [I1].

c) ¿Cómo calcularía los parámetros cinéticos a
0,01
partir del gráfico? ¿Qué valores calcula para Km y
Vmáx en cada caso?
d) Realice un gráfico de Michaelis-Menten (Vo
en función de [S]) para los tres casos, identificando -1 0 1 2 3 4 5
a qué corresponde cada curva 1/(S)
32) A partir de los siguientes datos de una reacción enzimática, determinar:
a) el tipo de inhibición presente

[S] Vo (g Prod /h) Vo (g Prod /h)
b) el valor de Km en ausencia y en (mM) Sin inhibidor Con inhibidor
2,0 139 88
presencia del inhibidor
3,0 179 121
4,0 213 149
10,0 313 257
15,0 370 313
33) A partir de los siguientes datos de una reacción enzimática, determinar:
a) el tipo de inhibición presente

[S] Vo (g Prod /h) Vo (g Prod /h)
b) el valor de Km en ausencia y en presencia del mM Sin inhibidor Con inhibidor
1,5 0,21 0,08
inhibidor.
2,0 0,25 0,10
3,0 0,28 0,12
4,0 0,33 013
8,0 0,40 0,16
16,0 0,44 0,18
21
34) Considere los siguientes datos para una reacción de hidrólisis catalizada por una enzima y en
presencia del inhibidor I:
[S] Vo Vo
a) Utilizando una representación de Michaelis-Menten, (M) (M/min) (M/min)
determine el Km de la reacción en ausencia o Sin inhibidor Con
inhibidor
presencia del inhibidor. 6 10-6 20,8 4,2
b) Genere una representación de Lineweaver-Burk de 1 10-5 29 5,8
2 10-5 45 9
los datos. Explique el significado de:
6 10-5 67,7 13,6
i) la ordenada al origen 1,8 10-4 87 16,2
ii) la intersección con el eje de las abscisas
iii) la pendiente
c) Determine de qué tipo de inhibición se trata.
35) Se han realizado dos experimentos con la enzima ribonucleasa. En el experimento 1 se midió
el efecto del incremento de la concentración de sustrato sobre la velocidad de reacción. En el
experimento 2, las mezclas de reacción fueron idénticas a las del experimento 1 excepto por la
adición de 0,1 mg de un compuesto desconocido por tubo.
Represente los datos de acuerdo con el método de Lineweaver-Burk. Determine el efecto del
compuesto desconocido sobre la actividad de la enzima.
Experimento 1 Experimento 2
[sustrato] Vo [sustrato] Vo
mM (mM/hora) mM (mM/hora)
0,5 0,81 0,5 0,42
0,67 0,95 0,67 0,67
1 1,25 1 0,71
2 1,61 2 1,08
22
36) La enzima aspartato transcarbamilasa cataliza la primera reacción propia de la síntesis de
pirimidinas. En un estudio de esta enzima, utilizando aspartato como sustrato, en presencia de
CTP 0,5 M y en ausencia del mismo, se obtuvieron los siguientes datos:
Aspartato V0 V0 con
(mM) sin CTP CTP 0,5 M
(mM/min) (mM/min)
1 0,45 0,2
2 0,8 0,4
3 1,7 0,7
4 2,9 1,0
5 3,4 1,4
7 4,3 2,4
9 5,1 3,7
10 5,3 4,2
12 5,6 4,8
15 5,8 5,5
16 5,8 5,6
17 5,8 5,6
a) Sin utilizar ninguna representación gráfica, estime el valor de Km y Vmáx.

b) Utilizando la ecuación de Michaelis-Menten, calcular Vo para una [S]= 3 mM.
¿Existe alguna discrepancia entre éstos datos y los experimentales? Justificarlo (la realización del
grafico Vo vs [S] es una buena ayuda).
c) ¿Qué efecto tiene el CTP sobre la actividad enzimática?
37) Completar las siguientes frases:
a) La región de una molécula de enzima con la cual debe interaccionar el sustrato se llama ---------
----------------------
b) La especie química de vida corta que se forma después de que la enzima y el sustrato
interaccionen se llama -----------------------------------
c) Debido a su estructura, un inhibidor -------------------------------- se une al centro activo de una

enzima.
d) Un inhibidor que no altera la KM de una enzima es un inhibidor de tipo -----------------
e) A mayor valor de KM, --------------------- es la afinidad de una enzima por su sustrato.
38) En un ensayo enzimático en el cual la concentración de sustrato es mucho mayor que el K m,

¿qué relación existe entre la velocidad y la concentración de sustrato?
39) La hexoquinasa tiene un Km = 0,1 mM. Si una mutación genera una hexoquinasa que presenta
como única alteración funcional un Km = 0,5 mM, ¿cómo será la actividad de esta enzima en el
23
tejido que expresa la forma mutada con respecto a la del tejido que expresa la forma normal,
cuando la glucemia es igual a 5 mM?
40) Dos isoenzimas E1 y E2 que actúan sobre el mismo sustrato S tienen los siguientes pares de
valores para sus correspondientes parámetros cinéticos:
Enzima E1: Vmáx = 6 µmoles/min/mg y Km = 0,40 mM

Enzima E2: Vmáx = 10 µmoles/min/mg y Km = 0,01 mM
La concentración fisiológica de S en la célula es de 0,4 mM.
En esas condiciones, ¿cuáles serán las velocidades (expresadas en µmoles/min/mg) con
que actuarán cada una de ellas?
41) ¿Cómo es comparativamente la velocidad inicial de una enzima michaeliana en presencia y

en ausencia de un inhibidor competitivo?
42) ¿Qué tipo de mecanismo involucra la regulación de una actividad enzimática por
retroinhibición?
43) ¿Cómo es la velocidad en un ensayo enzimático en el cual la concentración de sustrato es

mucho mayor que el Km?
44) ¿Qué se mide para obtener la velocidad inicial de una preparación enzimática?
45) Ejercicio integrador.
1 E
2 - N
3 Z
4 O I
5 M
6 D A
7 T
8 O I
9 C
10 - O
1) Capacidad de un enzima para discriminar entre sustratos o ligandos competitivos.

2) Modelo matemático que describe el comportamiento de muchas enzimas, como una
dependencia hiperbólica de Vo versus [S] (2 palabras).
3) Enzimas que tienen diferente estructura proteica y catalizan la misma reacción.
4) Zona de la enzima donde se une el sustrato para transformarse en producto (2 palabras).
5) Parámetro cinético relacionado con la afinidad de la enzima por el sustrato.
6) Parámetro cinético que depende de la cantidad de enzima presente (2 palabras).
7) Inhibición enzimática que se puede revertir aumentando la concentración de sustrato.
8) Inhibición enzimática que no se puede revertir aumentando la concentración de sustrato (2
palabras)
9) Ión inorgánico o coenzima necesaria para la actividad enzimática.
10) Molécula que modula a una enzima, por la unión no covalente, en un sitio distinto del sitio
activo.
24
CUESTIONARIO ADICIONAL
46) Como consecuencia del agregado de una sustancia X al tubo donde se desarrolla una
reacción enzimática, se calcula que el Km de la enzima por su sustrato se modifica de 10-5 M a
10-3 M, sin modificar la Vmax. Entonces, la sustancia X:
a) Inhibe a la enzima de forma no competitiva
b) Es otro sustrato de la enzima que afecta la reacción
c) Inhibe a la enzima de forma competitiva
d) Se une a la enzima en un sitio diferente del sitio de unión al sustrato
47) El Km de una enzima para el sustrato A es de 20 nM y para el sustrato B es de 100 nM. Esto
significa que:
a) La Vmax de la enzima en presencia de A es 40 nM/min
b) En presencia de 100 nM de B, la enzima está saturada
c) La enzima presenta la misma afinidad por A que por B
d) La afinidad de la enzima es mayor por A que por B
48) Las enzimas actúan sobre una reacción química:
a) Aumentando el valor de G real
b) Aumentando el valor de la energía de activación
c) Disminuyendo el valor de la energía de activación
d) Sin modificar el valor de G real ni el de la energía de activación
49) ¿A qué se denomina holoenzima?
a) A una enzima que presenta una cinética de Michaelis-Menten
b) A una enzima que no presenta isoenzimas
c) A una enzima activa en presencia de grupos prostéticos y/o cofactores
d) A la estructura proteica de la enzima, en ausencia de grupo prostético o cofactores
50) Un inhibidor enzimático puede ser considerado como REVERSIBLE (competitivo o no
competitivo indistintamente) si:
a) Su afinidad por la enzima es muy baja
b) Puede ser eliminado y entonces la enzima recupera su actividad biológica
c) Se une al sustrato en la reacción y así disminuye la actividad enzimática
d) Se une siempre al sitio de unión al sustrato presente en la enzima
51) En la curva de concentración de producto de producto en función del tiempo (P vs t) de una
reacción enzimática, ¿qué representa la meseta que se observa en dicho gráfico?
a) La velocidad de la reacción corresponde a la velocidad inicial
b) La velocidad de la reacción corresponde a la Vmax de la enzima
c) La velocidad de la reacción es igual (o se acerca) a cero
d) La enzima está saturada por el sustrato
52) Con el fin de calcular la velocidad inicial con el gráfico de concentración de producto en
función del tiempo (P vs t) de una reacción enzimática ¿cuál región del gráfico utilizaría?
a) La región de la curva a tiempos cortos, donde hay una relación lineal
b) La región de la curva donde se llega a la meseta
c) Ninguna. No es posible calcular la Vi a partir de este gráfico.
d) Se obtiene calculando la tangente de cualquier punto del gráfico indistintamente
25
53) Como consecuencia del agregado de una sustancia X al tubo donde se desarrolla una
reacción enzimática, se calcula que el Km de la enzima por su sustrato no se modifica y la
Vmax pasa de 200 moles/min a 80 moles/min. Entonces, la sustancia X:
a) Inhibe a la enzima de forma competitiva
b) Es otro sustrato de la enzima que afecta la reacción
c) Inhibe a la enzima de forma no competitiva
d) Se une a la enzima en el mismo sitio de unión al sustrato
54) En la representación gráfica de Lineweaver-Burk, la intersección de la recta con el eje de las x
corresponde al valor de:
a) Vmax/2
b) Km
c) -1/Km
d) 1/Vmax
55) La actividad específica de una preparación enzimática es igual a 60 UI/mg de proteína. ¿Qué
cantidad de producto se formará, expresado en moles (micromoles) en 30 segundos de
reacción, con 0,5 mg de proteína?
a) 15
b) 60
c) 30
d) 120
56) La actividad enzimática de una preparación es de 45 UI/ml. ¿Qué cantidad de producto se
formará, expresado en mmoles (milimoles), en 1000 ml (1litro) de reacción enzimática, en 30
segundos?
a) 50
b) 100
c) 22500
d) 22,5
57) La actividad específica de una preparación de una enzima es de 35 UI/mg de proteína. ¿Qué
cantidad de producto, expresado en moles (micromoles) se formará con 0,5 mg de proteína
en un minuto?
a) 25,3
b) 17,5
c) 35
d) 0,5
58) Una enzima que presenta una cinética de Michaelis-Menten tiene un Km igual a 0,5 mM y una
Vmax igual a 250 nmoles/min. ¿Cuál será la velocidad inicial, expresada en nmoles/min, de la
reacción enzimática si la concentración de sustrato es igual a 0,5 mM?
a) 125
b) 250
c) 100
d) 500
26
59) Un paciente de mediana edad, fumador, se presenta el hospital refiriendo dolor agudo de
pecho. Se le solicita la determinación de enzimas séricas. ¿Cuáles de las siguientes enzimas
espera encontrar elevadas para confirmar el diagnóstico de infarto de miocardio?
a) Creatina fosfato quinasa (CPK) isoforma BB y lactato deshidrogenasa (LDH)
b) Creatina fosfato quinasa (CPK) isoforma MB y amilasa
c) CPK isoforma MB y LDH
d) Amilasa y glutámico-pirúvico transaminasa (GPT)
60) Un paciente de mediana edad, alcohólico, se presenta el hospital refiriendo dolor abdominal
agudo. Se le solicita la determinación de enzimas séricas. ¿Cuáles de las siguientes enzimas
espera encontrar elevadas para confirmar el diagnóstico de pancreatitis?
a) Amilasa y glutámico-pirúvico transaminasa (GPT)
b) Creatina fosfato quinasa (CPK) y lipasa
c) Amilasa y lipasa
d) Fosfatasa alcalina y lactato deshidrogenasa (LDH)
27

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DEPARTAMENTO DE BIOQUÍMICA HUMANA

MATERIA QUÍMICA BIOLÓGICA - CICLO LECTIVO 2019

Una de las primeras sustancias

En la inhibición no competitiva se postula que el inhibidor se une con la enzima en otro

Como puede apreciarse en los gráficos, en el caso de la inhibición competitiva la Vmáx

Vmáx Con inhibidor

Vmáx/2 Con inhibidor Sin inhibidor

Km = Km inh (sustrato) -1/Km 1/(S)

En cambio, en la inhibición no competitiva, el inhibidor disminuye el valor de la Vmáx ya

Tipo de Sitio de unión de la enzima En presencia del Esquema

NO Se une a un lugar diferente - El valor de Km

- Se une a la enzima libre y - Disminuye el

Modelos para las enzimas alostéricas

En la figura se representa esquemáticamente este modelo para una proteína oligomérica

En contraste con lo que ocurre con el sustrato y el activador, el inhibidor se une

4) INDUCCIÓN O REPRESIÓN DE LA SINTÉSIS DE LA ENZIMA.

2) ¿Qué significa que una enzima es un catalizador biológico?

4) Explique a qué se denomina apoenzima, holoenzima, coenzima, cofactor y grupo prostético.

5) Explique y ejemplifique qué son las isoenzimas.

6) ¿De qué depende la especificidad de las enzimas?

7) Para la reacción Sustrato → Producto se aplica el siguiente diagrama:

400 Estado activado

Grado de avance de la reacción

a) El G para la reacción de Sustrato → Producto, indicando si se producirá

b) La energía de activación (Ea) en presencia y ausencia de enzima, indicando qué curva

10) ¿Qué información brinda la actividad total y la actividad específica?

11) 20 l de un homogenato de tejido hepático (250 g de proteínas) catalizan la formación de

a) calcule la actividad (en unidades internacionales) y la actividad específica de las

14) ¿Cuáles son los factores que modifican la actividad enzimática?

a) Dibuje un gráfico de la velocidad de reacción en función de la temperatura explicando qué

b) ¿Qué es la temperara óptima?

Velocidad de reacción (%)

Proponga un diseño experimental para la obtención de este gráfico.

a) ¿Qué parámetros se miden y cómo?

b) ¿Qué parámetros se mantienen constantes durante la determinación?

c) ¿Cómo se obtiene la velocidad de la reacción a un tiempo dado?

d) Compare la velocidad de la reacción a t1 y t2.

e) ¿Qué significado tiene la meseta que se observa en el gráfico?

f) Grafique los resultados obtenidos cuando se realiza la misma experiencia

i) con diferente [Enzima]

ii) con diferente [S] inicial

19) a) Explique qué información proporciona el siguiente gráfico.

b) ¿Cómo procedería experimentalmente para construir dicho gráfico?

c) ¿A qué se denomina una enzima michaeliana?

d) ¿Cuáles son los parámetros cinéticos de una enzima michaeliana?

e) Señale en el grafico Km y Vmáx.

20) En un estudio experimental de una enzima se obtuvieron los siguientes resultados:

21) La hidrólisis de la sacarosa, catalizada por la sacarasa:

Sacarosa + H2O→ Glucosa + Fructosa

22) Midiendo la velocidad inicial de una reacción en presencia de diferentes concentraciones de

a) Indique en qué condiciones se realizó la determinación.

i) Estime el valor de Km y Vmáx.

23) La hexoquinasa cataliza la fosforilación de la glucosa y la fructosa utilizando ATP. Siendo el

24) Se tienen dos enzimas que catalizan la misma reacción: A → B

La enzima 1 tiene un Km para el compuesto A de 10 mM.

Considere que la enzima tiene un comportamiento michaeliano.

a) Grafique Vo en función de [S] en presencia y ausencia del inhibidor.

28) El metabolismo del etanol se produce fundamentalmente en el hígado en dos pasos: en

El metanol también es sustrato de la alcohol deshidrogenasa, pero el producto formado

Caso A. A un hombre de 43 años se le prescribió disulfiram, pero se le advirtió que no

30) Se quiere determinar los parámetros 1/Vo

a) Indique cómo se denomina dicho

reacción en ausencia (control) o presencia de