Evaluación de la proteína del patógeno P21 como modulador potencial

de la inmunidad protectora inducida por

los parásitos atenuados por Trypanosoma cruzi
Cecilia Pérez Brandán , 1, + Andrea C Mesias , 1 Leonardo Acuña , 1 Thaise Lara Teixeira , 2 y Claudio Vieira da
Silva 2

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Resumen
Para muchas enfermedades parasitarias, las vacunas tenían el potencial de superar la falta de un
tratamiento quimioterapéutico eficiente, o su eficacia limitada, y sus efectos secundarios asociados. Ha
habido un gran progreso relacionado con el desarrollo de vacunas para varias enfermedades parasitarias,
pero para la enfermedad de Chagas, así como para otras enfermedades olvidadas, el progreso no ha sido
tan alentador. Sin embargo, en la última década, un número creciente de evidencia sugiere que una
vacuna contra Trypanosoma cruzi sería factible y razonable en términos de valores económicos. Se han
realizado varios intentos inmunoprofilácticos e inmunoterapéuticos para prevenir T. cruzi
establecimiento y persistencia en el anfitrión. La mayoría de los protocolos evaluados incluyeron
esquemas de inmunización heterólogos, de primer refuerzo basados en la combinación de vacunas de
ADN y proteínas recombinantes. 1 Estos fueron entregados o complementados en varias formas,
incluyendo potenciadores de la respuesta inmune como
adenovirus, 2 Salmonella sp atenuada , 3 Vaccinia Ankara modificada 4 y más recientemente,
nanopartículas. 5 Además, el uso de adyuvantes de nueva generación basados en saponina 6 o
agonistas de los receptores de peaje (TLR) 7, por ejemplo, ha despertado la atención. Además, la
generación de T. cruzi genéticamente modificado. Las cepas mutantes y su uso como inmunógenos
experimentales han mostrado una protección significativa contra la infección letal, 8 , 9 y
presumiblemente no persisten en el huésped, lo que hace que valga la pena seguir trabajando en esta
alternativa. 10 , 11 Por otro lado, varios antígenos parásitos, como las proteínas de la superfamilia trans-
sialidasa (TS), o las proteínas Tc 24 y Tc 52, por ejemplo, también se han probado en modelos
animales. 12
Entre las proteínas T. cruzi , hay una que particularmente llamó nuestra atención. P21 es una proteína
clave secretada por todas las etapas de desarrollo de T. cruzi. Está implicado principalmente en la
invasión celular y la modulación de la respuesta inmune del huésped, aunque su papel durante la
infección por parásitos aún no se ha aclarado por completo. Se ha demostrado que el P21 recombinante
(rP21), producido por expresión heteróloga, promueve la invasión de células de T. cruzi al confinarse en
el receptor de quimiocinas CXCR4 expresado en macrófagos y actúa como un inductor de fagocitosis
activando la polimerización de actina en la célula huésped. 13 , 14 También se ha demostrado que rP21
participa en la activación de los macrófagos al aumentar la producción de mieloperoxidasa, por lo tanto,
recluta células inmunes como linfocitos y neutrófilos. Aún más, se ha observado una disminución en la
formación de vasos sanguíneos en presencia de rP21, lo que lleva a la hipótesis de que su efecto
antiangiogénico puede estar relacionado con anormalidades vasculares y con isquemia focal observada
en la miocardiopatía chagásica crónica. 15 , 16
En nuestra experiencia y también de otros, una infección subparente con parásitos atenuados
modificados natural o genéticamente es suficiente para conferir una fuerte protección contra una
infección posterior. 10 , 17 , 18 Por lo tanto, si se describe rP21 como una proteína determinante que
favorece la invasión y la permanencia de las células del parásito en el huésped, podríamos especular que
la suplementación adicional de rP21 durante el proceso de inmunización con los parásitos atenuados
promovería la continuidad de los parásitos en el huésped durante más tiempo. período de tiempo, dando
así tiempo adicional para el desarrollo de una respuesta inmune profiláctica capaz de evitar un segundo
establecimiento de parásitos. Por otro lado, también estaríamos favoreciendo el reclutamiento de células
inmunes en mayor medida pudiendo mejorar la respuesta inmunitaria protectora conferida por los
parásitos atenuados.
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MATERIALES Y MÉTODOS
Declaración de ética : todos los protocolos de animales se adhirieron a la '' Guía para el cuidado y uso de
animales de laboratorio '' de los Institutos Nacionales de Salud (NIH) y fueron aprobados por la Facultad
de Ciencias de la Salud y por el Comité de Ética de la Universidad Nacional de Salta, Argentina (Nº
311/18).
Preparación de proteínas y parásitos : para los ensayos de inmunización, se usó la
proteína recombinante T. cruzi rP21, así como los tripomastigotes metacíclicos de la cepa TCC atenuada
naturalmente de T. cruzi . rP21 se obtuvo del cultivo de bacterias como se describió
previamente. 19 Epimastigotes se cultivaron a 28ºC en medio de triptosa neutralizado digerido con
hígado (LDNT), suplementado con 10% de suero fetal bovino (FBS) hasta que alcanzaron la fase
logarítmica. Luego se obtuvieron tripomastigotes metacíclicos por diferenciación de epimastigotes en
condiciones químicamente definidas (medio TAU 3AAG: NaCl 190 mM, KCl 17 mM, CaCl 2 2 mM ,
tampón fosfato 8 mM, MgCl 2 2 mM , pH 6.8, suplementado con NaHCO 3 al 0.035%, L-prolina 10 mM,
glutamato de sodio 50 mM, l-aspartato 2 mM y glucosa 10 mM) y cosechando parásitos diferenciados
después de 10 días. Las formas resistentes al complemento se purificaron incubando parásitos
diferenciados con suero humano no descomplementado normal a 37ºC durante 5 h. Los parásitos
purificados se lavaron luego con PBS 1X dos veces, se cuantificaron bajo microscopía óptica y se usaron
adicionalmente para inocular animales experimentales.
Ratones - Se usaron ratones C57BL / 6 machos de seis semanas de edad. Los animales se obtuvieron del
centro de instalaciones para animales de la Facultad de Ciencias de la Salud de la Universidad Nacional
de Salta, Argentina.
Protocolo de inmunización : se utilizaron cinco ratones por grupo (n = 5) a lo largo de este estudio. Los
ratones se mantuvieron en condiciones estándar en un ciclo de luz-oscuridad de 12 h en un entorno de
temperatura controlada (25ºC) con alimentos y agua a voluntad . Los ratones bajo anestesia se
inmunizaron por vía intramuscular (IM) con dos dosis, administradas a intervalos de 4 semanas, de
10 5 parásitos TCC metacíclicos atenuados en combinación con 20 µg de rP21. Los grupos de control,
incluidos rP21 y parásitos atenuados por separado, así como PBS-5% de saponina (control -) se
incluyeron durante todos los experimentos. Todas las formulaciones se emulsionaron en PBS-5% de
saponina como vehículo (Cat. Nº SAE0073-Sigma-Aldrich) en 50 µL de volumen final porratón. Antes
del desafío, se recogió sangre de todos los ratones para recoger muestras de suero para la determinación
de IgG. Además, dos ratones de cada grupo se sacrificaron por exposición a CO 2 para la extracción del
bazo y un mayor aislamiento de los esplenocitos y mediciones de citocinas. Todo el protocolo
experimental se repitió dos veces desde la inmunización hasta el desafío.
Determinaciones específicas de anticuerpos : los anticuerpos IgG totales y los subtipos de IgG contra T.
cruzi y rP21 se midieron mediante el ensayo inmunoabsorbente ligado a enzimas (ELISA) utilizando T.
cruziepimastigote homogeneizado (EH) sembrando 1 µg de EH / 100 µl de tampón de recubrimiento /
pocillo, y 0,5 µg de rP21 / 100 µl de tampón de recubrimiento / pocillo, como antígenos. Para identificar
el total de anticuerpos y subtipos, las placas se bloquearon con PBS-5% de leche en polvo sin grasa, y
luego se incubaron con muestras de suero (dilución 1: 100, 100 µL / pocillo) durante 1 h. Después de
lavar tres veces, IgG anti-ratón de cabra conjugada con biotina (Cat. Nº B6649 - Sigma-Aldrich), IgG1
(Cat. Nº 550331 BD Biosciencies) e IgG2a / c (Cat. Nº 550332 - BD Biosciencies) en un 1: Se añadieron
6000 diluciones (100 µl / pocillo). Después de 1 h de incubación, la placa se lavó tres veces con PBS y
se añadió conjugado de estreptavidina-peroxidasa de rábano picante (Cat. Nº 550946 - BD Biosciencies)
y se dejó durante 1 ha 37ºC. El color se desarrolló con el conjunto de reactivos de sustrato TMB (Cat.
Respuesta de citocina : se extrajeron bazos de ratones inmunizados sacrificados, se maceraron en una
malla estéril y se resuspendieron las células en medio RPMI 1640 (Nº de cat. R7755 - Sigma-
Aldrich). Después de la centrifugación a 160 × g durante 10 minutos a 4ºC, las células se resuspendieron
en una solución de lisis (0,17 M Tris pH 7,2, 0,16 M NH 4 Cl) para eliminar los eritrocitos. Los
esplenocitos restantes se lavaron tres veces con RPMI y se resuspendieron en medio RPMI
suplementado con glutamina 20 mM, 10% NaHCO 3 y 10% de FBS. La viabilidad de las células se
evaluó mediante exclusión con azul Trypan y se determinó el número de células en una cámara de
Neubauer. Los esplenocitos (10 6 células / pocillo, por triplicado) se cultivaron durante 48 h a 37ºC y CO
5% 2, con o sin estimulación con 25 µg / ml de rP21, 25 µg / ml de homogenato de epimastigote
(EH) de T. cruzi o 50 µg / ml de fitohemaglutinina (PHA). El medio de cultivo celular se recogió para
medir la liberación de IL-10, TNF-α e IFN-γ por ELISA de acuerdo con las instrucciones del fabricante
(kits de ensayo de inmunoabsorción ligados a enzimas optEIA, BD-Biosciencies, San Diego, CA).
Infección de desafío en ratones y parasitemia : para evaluar la respuesta a T. cruzi tras la inmunización,
los ratones de cada grupo fueron desafiados con la cepa de T. cruzi Tulahuen (500 tripomastigotes / ratón
en sangre, intraperitonealmente). La mortalidad fue dos veces por semana hasta 30 días después del
desafío. La parasitemia se realizó de acuerdo con métodos previamente estandarizados. Brevemente, se
extrajo sangre (10 µL) de la punta de la cola de los ratones con ligera anestesia, y se registró el número
de parásitos por cada 100 campos de monturas de sangre fresca bajo un microscopio de campo brillante.
Detección de ADN del parásito : treinta días después de la exposición a CO 2, los ratones fueron
sacrificados para eliminar los órganos diana. El ADN total del músculo esquelético y el tejido cardíaco
(50 mg) se aisló usando el kit de ácido nucleico ADN-Puriprep Highway (Cat. Nº K1205-250;
InbioHighway), de acuerdo con las instrucciones proporcionadas por el fabricante. Se utilizó ADN total
(10 ng por muestra) como plantilla, y se realizó una reacción en cadena de la polimerasa (PCR) en
tiempo real en un sistema de detección de secuencia LineGene 9640 (BIOER) con Eva Green Supermix
(Cat. Nº 92005; Bioline) y Tc18S rDNA- oligonucleótidos específicos (SAT_F
5'GCAGTCGGCKGATCGTTTTCG-3 'y SAT_R 5'TTCAGRGTTGTTTGGTGTCCAGTG-3'). Los
datos se normalizaron a TNF-α murino (TNF_F 5'-TCCCTCTCATCAGTTCTATGGCCCA-3 'y TNF_R
5'CAGCAAGCATCTATGCACTTAGACCCC-3'). 20
Análisis estadístico: el análisis estadístico se realizó utilizando el software GraphPad Prism V5.00. Las
variables continuas, tales como los niveles de anticuerpos y las concentraciones de parásitos en muestras
de sangre, se analizaron con la prueba de rango con signo de Wilcoxon de dos colas para trazados de
tiempo y con la prueba de Mann-Whitney o Kruskal-Wallis para mediciones de un solo día con
Comparación múltiple de Dunn Prueba. Los valores se expresan como media con errores estándar de la
media (SEM) de al menos dos experimentos independientes, con tres conferencias por muestra en cada
caso. Las diferencias entre dos grupos considerados significativos se denotan como * p ˂ 0.05, ** p ˂
0.01, *** p ˂ 0.001 o ns no significativo.
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RESULTADOS Y DISCUSIÓN
Hace unos años describimos una nueva proteína T. cruzi , llamada P21. Sabemos que rP21 promueve la
invasión de células de T. cruzi , 13 por lo tanto, los parásitos invasores podrían multiplicarse libremente
dentro de la célula huésped e invadir otras células. Además, rP21 también podría estar actuando como un
inductor de fagocitosis activando la polimerización de actina en la célula huésped 14 , por lo tanto, en
este escenario, los parásitos podrían estar confinados dentro de la célula invadida debido a este
fenómeno. En consecuencia, y con estas ideas en mente, nos preguntamos cuál sería el papel de rP21 en
un esquema de refuerzo principal basado en parásitos altamente atenuados formulados con rP21, seguido
de un desafío letal con parásitos virulentos de T. cruzi .
La respuesta humoral específica anti-rP21 se anula bajo la presencia de parásitos atenuados . Como
primera instancia, nos centramos en determinar los niveles de anticuerpos IgG totales en suero de
animales inmunizados. Para esto, los ratones fueron inyectados con dos dosis de TCC + rP21
emulsionadas en PBS-5% saponina con los grupos de control correspondientes. Cuatro semanas después
de la última inmunización, la medición de los niveles de anticuerpos específicos anti-rP21 indicaron que
los ratones que recibieron una formulación basada en TCC + rP21 no pudieron mantener los niveles de
IgG anti-rP21 provocados por la administración de rP21 solo ( Fig. 1 A) . Cuando se midieron los
niveles totales de IgG frente a un homogeneizado de T. cruzi completo , la respuesta de anticuerpos
inducida por los parásitos atenuados se mantiene a pesar de la adición de rP21 (Fig. 1 B) que indica que
al menos a este nivel la respuesta humoral total contra T. cruzi no se ve afectada.
Figura 1:
respuesta de anticuerpos en animales inmunizados. Grupos de ratones (n = 5 por grupo) se inmunizaron
con TCC + rP21, TCC, rP21 y como control negativo, PBS-saponina 5%, que es el vehículo en el que se
resuspendieron todas las formulaciones. Cuatro semanas después de la última inmunización, se recogió
sangre y se midieron los niveles de IgG anti-rP21 (A) y anti- Trypanosoma cruzi (B) totales en muestras de
suero. También se midió el total anti-rP21 IgG1 / IgG2c (C) y anti- T. cruzi IgG1 / IgG2c (D) en muestras de
suero. Los datos se presentan como media ± SEM. *, *** representan p ˂ 0.05 y p ˂ 0.001
respectivamente, ns para no significativo.
Podríamos especular que la falta de detección de anticuerpos específicos anti-rP21 en el grupo TCC +
rP21 podría atribuirse a la producción endógena de P21 por los parásitos inmunizantes y el secuestro
adicional de estos anticuerpos anti-P21 específicos. Otra posible explicación de los resultados
observados podría estar relacionada con la presencia de una gran variedad de antígenos cuando se
introducen parásitos atenuados. En esta situación, la adición de rP21 exógeno podría ser irrelevante y
conducir a la generación de anticuerpos limitados a antígenos más competitivos expuestos por parásitos.
Se midieron los niveles de anticuerpos IgG1 e IgG2c específicos de T. cruzi y rP21 totales para estimar
el perfil de células T inducido en animales inmunizados. Los animales inmunizados con TCC se
caracterizan por presentar una respuesta Th2 basada principalmente en la producción de anticuerpos
IgG1 específicos de T. cruzi . En el caso en que los parásitos TCC se formularon con rP21 (TCC + rP21),
la respuesta se mantiene invariable. Ni anti-rP21 IgG1 ni IgG2c se detectaron en animales inmunizados
con TCC + rP21 ( Fig. 1 C). Se ha demostrado que varias proteínas recombinantes de T. cruzi pueden
generar anticuerpos dirigidos por Th1 en ratones vacunados; 21 , 22 , 23 sin embargo, se detectaron
niveles elevados de IgG1 anti-rP21 en animales cebados con rP21, lo que indica que un perfil de sesgo
Th1 para una proteína recombinante de T. cruzi no siempre es la regla. El perfil Th2 encontrado en los
animales inmunizados con TCC + rP21, con un predominio de anticuerpos anti- T. cruzi IgG1 y una
menor proporción de anticuerpos anti- T. cruzi IgG2c, fue similar al obtenido para los animales cebados
con TCC, lo que indica que la adición de rP21 no alteró este perfil ( Fig. 1RE). Por lo tanto, estos
resultados nos permiten concluir que rP21 no tiene el potencial de modificar el perfil de anticuerpos
desencadenado por parásitos atenuados por TCC. Aún así, hemos evidenciado que es posible la
modulación de la respuesta inmune del huésped durante la infección atenuada por TCC. Anteriormente
hemos demostrado que la administración de un plásmido de expresión eucariota que codifica IFN-γ
murino podría tener efectos beneficiosos, como aumentar la producción de anticuerpos específicos del
huésped en respuesta a la infección atenuada de T. cruzi . 24
La carga de parásitos en la sangre periférica y los órganos diana después de la exposición virulenta no
se reduce por la presencia de rP21 : la cepa de TCC atenuada naturalmente es conocida por conferir una
fuerte protección contra una infección virulenta posterior. Para evaluar la posible capacidad adyuvante
de rP21, todos los ratones inmunizados fueron desafiados con una dosis letal
de parásitos virulentos de T. cruzi , de la cepa Tulahuen (Tul), cuatro semanas después de la última
inmunización. La supervivencia después del desafío se controló dos veces por semana ( Fig. 2A), y
mostró que los grupos de control, inoculados con saponina PBS-5% o rP21, murieron entre 20 y 30 días
después de la infección virulenta, mientras que los ratones inmunizados con una formulación viva que
contiene TCC, pudieron resistir la infección virulenta. La parasitemia se registró dos veces por semana
hasta que los ratones del grupo de control murieron. Los animales que fueron inmunizados con la
fórmula TCC + rP21 presentaron una parasitemia similar a los inmunizados con parásitos atenuados
( Fig. 2 B) que no mostraron diferencias significativas a este nivel. Al analizar la carga parasitaria en el
corazón y el músculo esquelético, la carga parasitaria de los grupos TCC y TCC + rP21 se mantuvo por
debajo de los niveles detectados para los grupos de control. Sorprendentemente, los animales
inmunizados con rP21 presentaron una elevada carga de parásitos de T. cruzi en estos órganos (Fig. 2 C-
D). Estos resultados podrían atribuirse al hecho de que algunos residuos de proteína rP21 aún podrían
estar disponibles en el huésped durante el desafío, favoreciendo que los parásitos virulentos invadan
células y múltiples en el huésped. Del mismo modo, un efecto similar también podría haber ocurrido en
el grupo TCC-rP21; sin embargo, en este caso especulamos que la presencia de TCC podría contrarrestar
esto. Anteriormente hemos demostrado medianteensayos de infección in vitro que cuando se agrega la
proteína al mismo tiempo que los parásitos, se observa un aumento significativo en la invasión de la
célula huésped. 13 Luego, podríamos especular que algo similar podría estar ocurriendo en relación con
la carga de parásitos que se encuentra en la sangre, el corazón y los músculos de los ratones inmunizados
/ desafiados con rP21. En este caso, rP21 estaría involucrado en favorecer la invasión de parásitos, en
lugar de actuar como un antígeno para desencadenar una respuesta humoral. El efecto de combinar rP21
junto con parásitos atenuados (TCC + rP21) no se tradujo en una protección mejorada en comparación
con la conferida por inmunización con parásitos atenuados solos. Podríamos determinar que la capacidad
de rP21 para estimular la invasión celular es mayor que su capacidad para desencadenar una respuesta
inmune robusta capaz de proteger contra un desafío virulento como se observa por la falta de protección
en los experimentos de inmunización y desafío.

Figura 2:
carga parasitaria en animales inmunizados con formulaciones de rP21 después del desafío letal. Los ratones
inmunizados y el grupo de control se infectaron con una dosis letal de tripomastigotes de Trypanosoma
cruzi de la cepa Tulahuen de T. cruzi cuatro semanas después de la última inmunización. La supervivencia
se registró dos veces por semana hasta el día 30 (A). La parasitemia (B) se registró dos veces por semana
hasta que el grupo control murió y se midió la carga del parásito cardíaco (C) y del parásito del músculo
esquelético (D) al final de este período. *: p ˂ 0.05; **: p ˂ 0.01; ***: p ˂ 0.001 o ns no significativo.
El perfil de citocinas evocado por infección atenuada se modificó mediante la adición de rP21 : a lo
largo de los años, se ha recopilado una importante evidencia que indica que las citocinas desempeñan
papeles clave en el control de la infección aguda por T. cruzi , siendo IFN-γ, IL-10 y TNF-α entre las
principales citocinas involucradas. 25 Un análisis adicional de la producción de citocinas en esplenocitos
de animales inmunizados mostró que después de la estimulación con rP21 los niveles de las citocinas
analizadas disminuyeron significativamente en el grupo de ratones inmunizados con la fórmula TCC +
rP21 en comparación con el grupo TCC ( Fig. 3 AC) . Cuando se estimuló con lisado total de T. cruzi se
observó un patrón similar ( Fig. 3DF), aún más, en este caso, se evidenció un aumento en los niveles de
IFN-γ de los animales inmunizados con TCC + rP21 ( Fig. 3 D). Estos datos sugieren que la rP21
emulsionada con saponina, cuando se combina con parásitos atenuados, es capaz de aumentar los niveles
de IFN-g tras el estímulo con antígenos patógenos. Se sabe que la producción inicial de IFN-γ ocurre
temprano durante el curso de la infección por T. cruzi y puede ser importante en el desarrollo de
resistencia, siendo las células asesinas naturales las principales responsables de su secreción. De hecho,
la activación de IFN-γ durante la fase aguda de la infección por T. cruzi promueve la activación de
macrófagos y la producción reactiva de especies de oxígeno, y como consecuencia, esta mayor expresión
conduce a la inhibición de la replicación del parásito. 26 De hecho, estudios recientes sugieren que el
IFN-g podría evitar los circuitos tolerogénicos y reducir la carga parasitaria en el corazón y el músculo
esquelético 27 , 28 y, por lo tanto, favorecer el control del parásito en los primeros pasos de la
infección. Debido a estas razones, una regulación positiva de la expresión de IFN-g en ratones
inmunizados puede representar una modulación valiosa obtenida por la suplementación con rP21. Aún
así, al nivel analizado aquí, el aumento en la producción de IFN-g por los esplenocitos de animales
inmunizados con TCC + rP21 no logró promover un mejor control de la replicación del parásito después
del desafío. Por otro lado, la presencia de rP21 disminuyó la producción de TNF-α provocada por la
inmunización solo con parásitos atenuados, cuando se estimuló con homogeneizado de parásito completo
( Fig. 3EF). Se requiere un alto nivel de expresión de TNF-α para la producción de óxido nítrico por
parte de los macrófagos activados y para lograr la restricción temprana del parásito durante las primeras
etapas de la infección. En nuestro enfoque experimental, la producción menor de estas citocinas exhibida
por los animales inmunizados con TCC + rP21, puede verse como una ventaja obtenida por la adición de
adyuvante, ya que el control del parásito se logró a través de una respuesta dependiente de IFN-γ,
evitando un posible alto efecto perjudicial expresión de TNF-α. Hay varios trabajos que proponen que la
producción de IL-10 por las células T favorece el control de T. cruzi y previene el desarrollo de una
respuesta inmune patológica. 29 , 30 Según nuestros resultados, IL-10 parece no desempeñar un papel
fundamental en el control de la replicación del parásito, ya que la carga del parásito fue similar en los
animales inmunizados / desafiados con TCC y TCC + rP21. Estos datos sugieren fuertemente una
posible modulación diferencial de la producción de citocinas por rP21 durante el curso de la infección de
parásitos atenuados. Sin embargo, esta modulación no altera ni modifica el producto final de la
vacunación.
Fig. 3:
Producción de citocinas por esplenocitos de animales inmunizados. Como antes, se inmunizaron grupos de
ratones (n = 5 por grupo) con TCC + rP21, TCC, rP21 y como control negativo, PBS-saponina al 5%, que
es el vehículo en el que se resuspendieron todas las formulaciones. Cuatro semanas después de la última
inmunización, se sacrificaron dos ratones, se extrajeron los bazos y se recogieron los esplenocitos y se
estimularon con rP21 o lisado de Trypanosoma cruzi total (TcTL) para medir mediante un ensayo
inmunoabsorbente ligado a enzimas (ELISA), la secreción específica de citocinas en el medio de cultivo.
En resumen, describimos por primera vez, el uso de una proteína recombinante de T. cruzi como un
posible modulador durante T. cruziinmunización atenuada Se nos permite concluir que rP21 posee
capacidad adyuvante capaz de modificar el perfil inmune de citoquinas provocado por la infección con
parásitos atenuados. Sin embargo, el pretratamiento con saponina emulsionada-rP21 podría conducir a
exacerbar la infección y la carga de parásitos en los órganos diana, lo que sugiere el importante papel
que tiene P21 sobre el proceso de invasión natural, pero también señala los riesgos que la administración
de este componente puede tener sobre un segunda infección proximal Estas conclusiones pueden tener
una relevancia significativa en las estrategias profilácticas y terapéuticas para el desarrollo de vacunas
contra la enfermedad de Chagas. Además, las observaciones realizadas sobre T. cruzi P21 como
componente adyuvante, podría ser valioso en el diseño futuro de estrategias de inmunización destinadas
al control de reservorios animales.
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EXPRESIONES DE GRATITUD
A María Celia Mora por el cuidado de los animales y a Alejandro Uncos, Renato Uncos y Federico
Ramos por su hábil asistencia técnica.
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Notas al pie
Apoyo financiero: Agencia Nacional de Promoción Científica y Técnica (ANPCyT - PICT 2014-1625). CPB y ACM
contribuyeron igualmente a este trabajo.

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Referencias
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