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]NTRODUCCION A LA
INGENIERIA BIOOU]MICA

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B

NTRODUCCION A LA
INGENIERIA BIOOUIMICA

w
UNIVERSIDAD NACIONAL DE COLOMBIA
FACULTAD DE INGENIERIA
DEPARTAMENTO DE INGENIERIA OUIMICA
INSTITUTO DE BIOTECNOLOGIA

ALBERTO DUARTE TORRES

Profesor Titular

SANTAFE DE BOGOTA, JULIO DE 1995

TABLA DE CONTENIDO

Frlogo

...xvii

1. NTRODUCCTON
I.,t LA CELULA

!i

1.1,1 Tiposbsicosdeclulas ...


.1.2 La informacin gentica

1.2.1

i..,.

..,...

.2.1.1

....

Procesos de prodgccin de
1

1.2 METABOLISMOMICROBIA1

,r .

energfq,

Gluclisis

1.2.1.1.1 Ruta metablica

I
Embden

Meyerhof-Parnas..
1.2.1.1.2 Ruta metablca del
fosfato-pentosa .
1 .2.1.1.3 Ruta mstablica
Eatner-Doudoroff
1.2.1 .2 Respiracin

I
11

12
13

1.2.1.2.1 Ciclo del cido

...
fosforilacinoxidativa,.....
tricarboxlico

13

.2.1.2.2 Transporte electrnco y

.,
1.2.1.2.3

16

Reacciones de

oxidacin-reduccin

16

1.3

APLICACIONES DE LA INGENIERIA BIOOU]MICA .

1.4

CONSIDERACIONES GENERALES SOBRE EL


DISEO PRELIMINAR DE UN BIOPROCESO .

22

29

1.4.1 El biocatalizador
1.4.2 Cultivos de clulas y tejidos
1.4.3 El biorreactor
1.4.4 Esterilizacin

30

31

1.4.4.1 Esterilizacin de equrpo


1.4.4.2 Esterilizacin de medios
1.4.4.3 Esterilizacin de aire

1.4.5

35

Separacin y purificacin de productos


de la ingenierla bioqufmica. . .

1.4.5.1

1.4.5.2

Separacideclulas'.....
Rupturadeclulas . . . . . . . i.

Productosextracelulares....;

1.4.5.3 Purificacin final del

producto

1.4.5.3.1 Filtracin de clulas

36
37

38

Productosintacelulares....i..

1.4.5.1.1
1.4.5,1.2

39
39

40
40
41

'travs d membranas
1 .4.5.3.2 Extraccin lquido-lquido
de antibiticos
1.4.5.3.3 Recupercin de
'
antbiticos y protelnas
mediante intercambio inico

1.5

33
35

....;.

41

42

42

APLICACION DE LOS LENGUAJES DE

SIMULACIONENINGENIERIA...J.II";

43

Etapas'en el planteamiento y la
solucin de un modelo' . .
Lenguajes de simulacin continua

43
45

1.5.1
1.5.2

BIBLIOGRAFIA.. .:...

46

2
2.1

BALANCE DE MATERIALES

52

BALANCE GENERAL DE MATERIALES

2.2 BALANCE DE ELEMENTOS OUIMICOS

53
54

2.2.1

Velocidad especfica de consumo de sustrato,


crecimiento de biomasa y formacin de producto.
2.2.2 Balances de carbono y oxgeno

'

Ejemplo

2.1 Balance de elementos qumicos


enunafermentacinanaerobia . . . . .. . . .

2.3 BALANCE POR EL METODO DE ELECTRONES DISPONIBLES

2.3.1 Grado de reduccin


2.3.2 Bdance de electrones disponibles
2.3.3 Ecuacin de crecimiento
Ejemplo

2.2

Ejemplo

2.3

Determinacin
en un proceso
Determinacin
en un proceso

de la ecuacin de crecimiento
aerobio
de la ecuacin de crecimiento
anaerobio . . . .

Ejemplo 2.4. Determinacin de la composicin


de un microorganismo

Ejemplo

2.5 Equivalencia de los factores

Ejemplo

2.6 Factores de rendimiento

62
64
66

70

70
70
71

71

de rendimiento

2.5.5
2.5.6

57

69

2.5 FACTORES DE RENDIMIENTO


Rendimiento de sustrato en biomasa . . .
Rendimiento de oxgeno en'biomasa
Rendmiento de electrones en biomasa . .
Factores de rendimiento en el
crecimiento aerobio

56

58
58
59

2.4 COMPOSICION ELEMENTAL DE LOS MICROORGANISMOS

2.5.1
2.5.2
2.5.3
2.5.4

54
55

en el
crecimiento aerobio de S. cerevisiae .

Rendmento de sustrato en producto


Rendimento mximo de sustrato en producto

72

74
75
76
ilt

2.5.7
2.5.8
2.5.9

2.6

77

Coeticiente de rendimiento verdadero


en medios mnimos
Rendimiento verdadero en medios complejos
...:...
Rendimientoverdadero del oxgeno

78
79
79

FORMULACION DE ECUACIONES CTNETICAS PRNTIR OET


BALANCE DE MATERIALES DE UN CULTIVO CONTINUO . .

Ejemplo

2.7

2.7

Evaluacin del rendimiento mximo en la


produccin de cido cltrico

Ejemplo

....

. . . . . 80

2.8 Formulacin

de las ecuaciones cintcas


requeridas para el control de
un cultivo continuo de clulas
de S. cerevisiae.

80

88*

DISEO DE MEDIOS DE CRECIMIENTO Y PRODUCCION

2.7.1

88-

Requerimientos nutrimentales
2.7.1

.1

Requerimiento de elementos

89

gg

2.7.1.2 Fuentes de carbono y energa


2.7.1.3 Requerimientosmnimos . . .
2.7.1.4 Requerimiento de nutrimentos

90

especficos

92

2.7.2 Requerimiento de energa


2.7.3 Requerimientosambientales
2.7.4 Consideraciones tcnico-econmicas

2.7.5Agua
2.T.6Fuentesdecarbono
2.7.6.1
2.7.6.2
2.7.6.3
2.7.6.4
2.7.6.5

2.7.7

Hidrocarburos

2.7.7.2 Torta de soya


2.7.7.3 Licor de papa .
tv

..:......:......97
......98

Melazas, cebada.y extracto de malta


Licor de sulfito
Alcoholes sintticos
Aceites vegetales

Fuentes de nitrgeno inorgnicas y

......

sintticas

93
94
94

98,100
100
101
101
101

1O2

'lO2

2.7

.7.4

2.7.7.5

Extracto fermentado de salvado


y aceite de semillas
Extracto de levadura

104
105

2.7.8 Medios de cultivo definidos


2.7.9 Control ambiental . .

106
107

2.8 FORMULACION DE MEDIOS


Ejemplo

108

DE CULTIVO

2,9 Diseo preliminar

de un medio

PROBLEMAS...
BTBLTOGRAFT1

1'14

..

116

120

TERMODINAMICA DE LOS PROCESOS BIOOUIMICOS

3.1 PRINCIPIOS DE LA TERMODINAMICA


3.1
3.1

.1 Conservacin
.2 Entalpfa

120
"t21

de energfa

123
124
124

libre
3.1 .4 Entropfa
3.1.3

Energla

3.2 ANALISIS TERMODINAMICO DEL METABOLISMO MICROBIAL . .


3.3 ENERGIA LIBRE ESTANDAR

3.3.1
3.3.2
3.3.3
3.3.4
3.3.5

3.1

132
133
134
137
138

Eficiencia de la clula en el proceso de


captura de energfa en la reduccin
del piruvato hasta lactato . .

3.4 EVALUACION DE ENTALPIA Y CALOR

126
130

Energa libre estndar de hidrlisis


de algunos compuestos fosforilados
Energla libre estndar de algunas
reacciones biolgicamente importantes
Ciclo energtico de las clulas
Energa libre estndar de hidrlisis del ATP
Principio del intermediario qufmico comn

Ejemplo

DE COMBUSTION

139

. . ..

140

3.4.1
3.4.2

Datos termodnmicos de algunos compuestos


representativos
Calor de combustin

140
142

3.5 CALOR DE REACCION

145

3.6 DISIPACION DE ENERGIA Y EFICIENCIA TERMODINAMICA

146

3.6.1
3.6.2

Disipacindeenerga
termodinmica

.......r.

Eficiencia

146
146

'i

3.7 EFIC]ENCIA ENERGETICA DEL CRECIMIENTO MICROBIAL


Ejemplo

149

3.2

Determinacin del calor de combustin


de las clulas y del calor generado
por mol de O, consumido .
Ejemplo 3.3 'Determinacin de los calores de
combustin de la biomasa y otros
compuestos orgnicos.
Ejemplo 3.4 Determinacin de la produccin de
calor bajo represin por glucosa

3.8

FACTORES DE RENDIMIENTO DE ENERGIA EN BIOMASA

3.8.1

3.8.3

lbl
153

. . . . . . 154

Factores de rendimiento basados en el.calor producido

duranteel crecimientomicrobial

3.8.2

1S0

....

1Ss

Factores de rendimiento basados en la


Factores de rendimiento basados en la

energaliberadaporcatabolismo.,.:..

Ejemplo

1Sg

3.5 Evaluacin de rendmientos


basados en

energa

59

3,8.4

Factores de rendimiento basados en la


generacin de ATP
3.8.5 Factor de rendimiento de ATP en biomasa
en el crecimiento asociado a la energa.
3.8.6 Rendimiento de ATP en biomasa en el
crecimiento no asocado a la energf
'3.8.7 Coeficiente de rendimiento verdadero
3.8.8 Rendimiento mximo de Afp en ctulas

vt

161
161

162
163
163

3.9 BALANCE DE ENERGIA

164

Balance general de energa


Calor generado por la actividad rnetablica .
Calor generado por el metabolismo aerobio
Calor generado por metabolismo
aerobio en un reactor por lotes .
3.e.5 Calor generado por metabolismo

164
166
167

's,s.o aerobioenunreactorcontinuo

168

3.9,1
3.9.2
3.9.3
3.9.4

........

Evaluacin experimental del calor


generado por el metabolismo

Ejemplo

3,6 Balance

Ejemplo

3.7

"171

Balance de energa del proceso

anaerobio de obtencin de
etanol a partir de glucosa

174
178

PROBLEMAS

.,,.i..

BIBLIOGRAFIA..

CINETICA DE LAS REACCIONES CATALIZADAS POR ENZIMAS

4.1

.1 Cofactores y coenzimas . .

4.1.2
4.1
4.1

lsoenzimas y enzimas

alostricas

.3 Clasificacin
.4 lmportancia industrial

4.2 ACTIVIDAD ENZIMATICA.


4.2.1

185

186
187
187
1 88
191

Velocidad inicial de una reaccin


catalzada por una enzima.

Ejemplo

4.2.2

181

185

INTRODUCCION
4.1

169

de energla del proceso aerobio


de produccin de levadura a partir de

glucosa

167

4.1

Determinacin de la actividad
de la enzima B-glucosidasa

Nmero de

recambio

191

192
193

vil

4.2

Ejemplo

4.2.3

Determinacin del nmero de

recambio , .

196

lnfluencia de los factores ambientales

4.2.3.1 pH
4.2.3.2 Temperatura

4.3

Ejemplo

4.3 MODELOS
POR

194

196
196

Determinacin de las energas


de activacin e inactivacin de
un sistema enzimtico.

198

CINETICOS DE LAS REACCIONES CATALIZADAS

ENZTMAS

200

4.3.1 ModelodeMichaelis-Menten i".,


4.3.1.1

Ejemplo

4.4

Evaluacin grfica de los


parmetros de la ecuacin
de Michaelis-Menten.

2O4

Evaluacin de los parmetros de


la ecuacin de Michaelis Menten
para la hidrlisis del almidn.

206

4.3.1.2 ModelodeBriggs-Haldane
4,3.1.3 Simulacin del modelo

vilt

2Og

212

Modelo tipo Michaelis-Menten para


una reaccin enzimtica reversible

215

Ejemplo

4.5

Ejemplo

4.6

4.3.3
4.3.4

. . . .;.

Menten.

de Michaelis

4.3.2

2OO

Determinacin de la relacin entre


el caudal y el grado de conversin,
en la isomerizacin de glucosa, en
un reactor empacado.
Determinacin de la relacin entre
la concentracin de sustrato y el ..
tempo de reaccin, en un reactor
por lotes, empacado con enzima

Modelo de inhibicin competitva


Modelo de inhibicin no compettiva. .

217

223
225

Ejemplo

4.7 Determinacin

del tipo de reaccin


y
enzimtica evaluaci6n de las

constantescaractersticas...
4.3.5

4.4

Modelo de inhibicin por

REACTORES

4.4.1
4.4.2

ENZIMATICOS

Reactor por

lotes

Reactor continuo de flujo

Ejemplo

sustrato

4.8 Simulacin

tapn

i....

ENZIMATICA EN FASE HETEROGENEA

4.5.1 lnmovilizacin por mtodos qufmicos


4.5.2 Mtodosfsicos :....
4,5.3 Enzimas inmovilizadas sobre la
superficie de una partlcula insoluble
4.5.4 Enzimas inmovilizadas Por
copolimerizacin o microencapsulacin
4,5.5 Balance de materia
4.5.6 Consumo de sustrato de acuerdo con
la cntca de Michaelis-Menten

4.9

Determinacin de la variacin de la
concentracin de sustrato con respecto
a la distancia radial para diferentes
valores d'el modulo de Thiele. Efecto
del modulo de Thiele sobre el factor
de efectividad Para Paftlculas

esfricasinmovilizadas.

4.5.7
4.5.8

234
234

de la hidrlisis del

enzimanvertasa.

Ejemplo

231

233

azcar de caa por accin de la

4.5 CATALISIS

226

".

Consumo de sustrato propol'cional"a la


concentracin de sustrato
Consumo constante de sustrato

235
239

240
242
243
245
245
246

249
252
254

PROBLEMAS

255

BIBLIOGRAFIA

259

lx

ts

crNETrcA DEL cRECMrENTo DE BroMAsA, coNsuMo


DE SUSTRATO Y FORMACION DE PRODUCTOS

5.1

263

CRECIMIENTO DE BIOMASA EN UN CULTIVO POR LOTES

264

Densidad de la biomasa
Etapas
del crecimiento
5.1.2
5.1 .3 Velocidad especfica

264
264
266

5.1 .1

Ejemplo

5.1

Determinacin de las velocidades


especfficas de una fermentacin.

267

Velocidad de crecimiento
Perodo de replicacin
de bacterias y levaduras
5.1.6 Perlodo de replicacin de los
organismos flamentosos

5.1.4
5.1.5

5.2

INFLUENCIA DE LAS CONDICIONES AMBIENTALES


SOBRE LA VELOCIDAD ESPECIFICA DE CREC]MIENTO

269
271
27

.:. . .

..i..,.
5.2.1 Temperatura . .i.!
. . r . . .,,. . .,,
5.2.2 Energfadeactivacin. ./. . .,,
....,
5.2.3 Actividaddel agua
5.2.4 Tonicidad, osmolalidad y osmolaridad. . .
5.2.5 pH
i.....

272

272
274
275
276
278

5.2.5.1 Efectos del pH del medio sobre


5.2.5.2

la velocidad de crecimiento de
algunas bacterias.
lnfluencia del pH del medio sobre
la velocidad de un bioproceso

5.3 MODELOS CINETICOS NO ESTRUCTURADOS PARA


CRECIMIENTO DE BIOMASA, CONSUMO DE SUSTRATO
Y FORMACION DE PRODUCTO.

5.3,1

lnfluencia de la comBosicin del


medio sobre la velocidad especfica
de crecimiento.
5.3.1 .1 Modelo de Monod
5.3.1 .2 Modelo de Moser
5.3.1 .3 Modelo de Contois y Fujimoto

28O

281

282

283
283
285
246

286
286
287

5.3.1.4 Modelo de Teissier


5.3.1,5 Modelo de Konak
5.3.1,6 Modelo de Kargi y Shufer

5.3.2

lnfluencia de la concentracin de
biomasa sobre la velocidad especfica
de crecimiento: Modelo de Meyrath.
5.3.8 Perodo de adaptacin:
Modelo de Hinshelwood
5.3,4 Fase estacionaria: Modelo de La Motta
5.3.5 Fase de muerte microbial.

5.3.6

5.4

288
288
289
289

5.3.5.1 Modelo de Chiu


5.3.5.2 Modelo de Moser y Steiner

29O

endgeno

290

Metabolismo

289

MODELOS CINETICOS PARA LA INHIBICION DEL CRECIMIENTO

5.4.1 lnhibicin por

sustrato

292

292
293
294
295

Efecto de'la fuente de carbono.


5.4.1.2 Efecto de la fuente de nitrgeno
5.4.1 .3 Modelo de Andrews
5.4.1.4 Modelo de Tseng y Waymann
5.4.1.1

5.4.2 lnhibicin

por

producto

5.4.2.1 ModelodeHolzberg
5.4.2.2 Modelo de Ghose y Tyagi
5.4.2.3 Modelo de Jerusalimsky . .
5.4.2.4 Modelo de Bazua y Wilkie

5.4.3

5,5

Represin catablica

..

,'....'i

aMODELOS CINETICOS PARA LA FORMACION DE PRODUCTO


5.5.1
5.5.2

Clasificacin de los productos


Modelos cintcos .

5.5.2.1 Formacin de producto asociada


al crecimiento microbial,
5.5.2.2 Formacin de producto no asociada
al crecimiento microbial

292

295
295
296
296
296
297

. . . 297
298
299
299
300
xt

5.5.2.3 Formacin de producto parcialmente


asociada al crecimiento: modelo de
Luedeking y Piret

5.6 EVALUACION DE PAR,AMETROS CINETICOS A PARTIR DE


DATOS EXPER]MENTALES

5.6.1
5.6.2

Mtodo integral de anlisis


Mtodo diferencial de anlisis . .

Ejemplo

5.7

Evaluacin de los paimetroi cinticos


de la Ecuacin de Monod a partr de
datos experimentales.

Reactor por

Ejemplo

5.3

lotes

3OB

322

de Aerobacter cloacae

lotes.

5.7.2 Reactor continuo de flujo tapn


5.7.3 Reactor continuo de mezcla completa (CSTR)
5.7.4 Productividadygradodeconversin . ...
5.7,5 Reactor por lotes con alimentacin continua.
Ejemplo

5.7.6

5.4

Simulacin del crecimiento de


Aerobacter cloacae en un reactor por
lotes con alimentacin continua.

Reactor continuo de mgzcla completa


con recirculacin

5.7.7Fementadoresenseriei....
5.7.8

Columnas de burbujeo y reactores con


circulacin lquida inducida

PROBLEMAS . .
BIBLIOGRAFIA

xil

302
305

Simulacin del crecimiento


en un.reactor por

'
'

301

CONSIDERACIONES GENERALES SOBRE BALANCE DE MATERIALES,


322
CINETICA Y SIMULACION DE FERMENTAqORES

5.7.1

5.2

301

323
327
328
330
334

335
338
342
343
347
351

ESTERILIZACION

356

6,1 TNTRODUCCION

356

6.2 CINETICA DE LA DESTRUCCION


MEDIANTE CALOR

6.2.1
6.2.2

.,. , . .

357

Energa de activacin y coeficiente

deArrhenius....

359

Reduccin fraccional de la poblacin


de microorganismos.

362

LOTES

369

6.3 ESTERIL]ZACION

6.3.1
6.3.2

DE MICROORGANISMOS

HUMEDO.

POR

Seleccin de! microorganismo de diseo.


Diseo de ciclos de esterilizacin

Ejemplo

6.1 Determinacin

Ejemplo

6.2 Determinacin

Ejemplo

6.3

del perlodo de
sostenimiento en una fermentacin
371

por lotes,
de la influencia del
perodo de calentamento sobre el
perodo de sostenimiento.
Determinacin de la influencia
del volumen del caldo sobre el
perfodo de sostenimiento,

374
375

6.4 ESTERILIZACION CONTINUA


6.4.1 Esterilizacin mediante calentamiento
directo por nyeccin de vapor.
Ejemplo

370
370

6.4 Esterilizacin contnua

376

vaPor

mediante inyeccin de

6.5 ESTERILIZACION DE AIRE

375

380

384

6.5.1

Condiciones del aire reqerido


por la industria boqufmica . .
6.5.2 Esterilizacin de aire por calor

6.5.2.1 Compresin politrpica


6.5.2.2 Calentamiento directo
6.5.2.3 Calentamiento indrecto con
gasescombustibles, .

385

386
386
388

i!..,

388
xlil

6.5.3

Filtracin

388

6.5.3.1 Filtros empacados


6.5.3.2 Filtros de vela
6.5.3.3 Filtros de'membrana

6.6 EFICIENCIA
6.6,1

389
391

392

DE LOS FILTROS FIBROSOS

393

Eficiencia de fibra

Ejemplo

6,6.2

393

6.5 Espesor

de un lecho empacado
con fibras de vidrio

396

Determinacin de la prdida de presin


en los filtros de fibra de vidrio

Ejemplo

398

6.6 Determinacin

de la prdida de
presin del aire en un filtro de
fibras de vidrio

399

PROBLEMAS

400

BIBLIOGRAFIA

402

FENOMENOS DE TRANSPORTE EN

BIOPROCESOS

7.1 REOLOGTADELCALDO

.....

7.1.1 FluidosNewtonianos....
7.1.2 Plsticos Bingham
7.1.3 Comportamiento pseudoplstco .,,.
7.1.4 CuerpodeCasson.. .

7.2.1

potencia i
entregada al fluido
! .:., ! ,
Evaluacin de la

7.2.1

.1

7.2.1.2

7.2.2
xlv

Dispersin de

Agitacin

.......,.
...:.

4Og
4Og

4,lO

41O

... ,i !

;....

406

4Ol

....,,,.

gases

Agitacin de fluidos Newtonianos

nogaseados

406

412
413

...416

7.2.3 Agitacin

de fluidos Newtonianos

gaseados

Ejemplo

7.2.4

t.2.5

7.1

4'19

Consurno de potencia por

..

422

Agitacin de fluidos gaseados

423

TRANSFERENCIA DE CALOR EN FERMENTACION

424

7.3.1 Area de transferencia de calor


7.3.2 Balance de energfa . . . .
7.3,3 Coeficiente de transferencia de calor

425
428
429

7.3.4
7.3.5
7.3.6
7.3.7
7.3.8
7.3.9

'

Reactoresequipadosconcamisa

Reactores equipados coh serpentfn . . .


Reactores equipados con tubos verticales
Reactores con serpentines de placa vertical
lntercambiadores de superficie raspada
Transferencia de calor en condiciones
inestables en recipientes agitados

Ejemplo

7.4

421

Agitacin de fluidos no Newtonianos

nogaseados

no Newtonianos

7.3

agitacin

7.2

Tansferencia de calor en un
reactor aerbico

...,.

431
433
434
435
435

436
437

TRANSFERENCIA DE MASA

444

7.4.1 lntroduccin
7.4.2 Determinacin

444

experimental del
coeficiente de transferencia de oxlgeno

450

7.4.2.1

Mtodo de oxidacin de una


solucin de sulfito de sodio
7.4.2.2.Mtodo del balance de oxlgeno
7.4.2.3 Mtodo esttco
7.4.2.4 Mtodo dinmico

Coeficiente de transferencia de masa


Evaluacin del coeficiente
de transferencia de masa .
7.4.5 Faccin volumtrica del gas en la fase dispersa.

7.4.3
7.4.4

450
451

452
455
457

460
462

7.4.5.1
7.4.5.2

7.3

Ejemplo

7.4.6

Dispers.in de aire en

sistemas sin agitacin mecnica


Dispersin de aire en
sistemas con agitacin rrrecnica

Transferencia de masa en un reactor aerbico . .

463

Evaluacin de los gases producidos


durante la fermentacin en reactores
a escala de laboratorio . . .

7.4

Ejemplo

7.4.7

467

...r?.

Transporte de oxfgeno en biorrggctoles

paraelcultivodeteiidosanimales .

7.4.7.1 Condiciones ambientales


7.4.7

.2

Sistemas de

cultivo

468

.,. ;.

7.5 Difusin
7.4.7

de oxgeno en frascos

.2.3

7.4.7.2.4
CAMBIO DE ESCALA

7.5.1
7,5.2
7.5.3

Transferencia de
Transferencia de

Ejemplo

7.6

T..

Difusin de oxgeno a
travs de capilares

Microencapsulacin

Agitacin

480

tpicas

7.4.7.2.1 Reactores agitados


7.4.7.2.2 Difusin de oxgeno en frascos T . .
Ejemplo

465

Toma de muestras llquidas y gaseosas


y evaluacin de! caudal de gases
producidos durante la fermentacin

aceto'butllica,.....

7.5

462

480
481

482
482
485

487
490
4g1

calor
masa

.....

492
493
496

Estudio del comportamiento de algunas


variables en el procedimiento de

cambiodeescala

.i.r

498

.PROBLEMAS

502

BIBLIOGRAFIA

505

xvr

PROLOGO

Algunos problemas del hombre moderno tales como la alimentacin, la


recuperacin y preservacin de ecosistemas y el desarrollo de
industrias no cOntaminantes, son Susceptibles de manejo o tratamiento con
tcnicas biolgicas. Una porcin crecente de la tecnologla del prximo futuro
depender de la utilizacin de recursos naturales renovables mediante el empleo
de sistemas vivos, sus productos metablicos o sus componentes.

salud, la

La lngenierfa Bioqumica integra la Bioqufmica y Eiologa con la estrategia


y metodologa de la lngeniera Oumica, aprovecha las capacidades degradantes

y sintticas de los microorganismos, y aplica estos conocimientos en la produccin, procesamiento y conservcin de materiales de valor econmico, mediante
agentes biolgicos tales como microorganismos, clulas, enzimas, anticuerpos
y tejidos animales y vegetales.
El presente volumen est escrto como material didctico para el curso

introductorio en lngeniera Bioqumica de la lnea de profundizacin en bioprocesos del nuevo plan curricular de lngeniera Oumica. Los estudiantes que
siguen esta lnea desarrollan normalmente su proyecto de grado en las reas de
lngeniera Ambiental, lngeniera de Alimentos o en lngeniera Bioqufmica.

Los principios de la lngeniera Oumica son aplicables en todos los


procesos que incluyen fenmenos de transporte, termodinmica y cintica' La
mayorla de los textos tradicionales de lngenierla Oufmica estn fundamentados
en ejemplos recopilados de la industria petroqumica y los principales textos de
lngeniera Bioqumica disponen de muy pocos ejemplos o carecen de ellos.
y analizar informacin dispersa en
fsicos, qumicos y biolgicos
integrar
los
fenmenos
una abundante literatura,
y contrbuir al desarrollo de la Biotecnologa en nuestro medio, Ms de cuarenta
ejemplos resueltos y un nmero mayor de problemas de final de captulo tienen
el propsito de reforzar la experiencia del aprendizaie mediante una prctica
guiada y detallada una vez expuesto cada nuevo principio.
El objetivo de este libro es recopilar

xvil

Despus de una introduccin de los aspectos de la lngeniria Bioqimica


el texto se divide en capltulos y secciones, algunos de los cuales corresponden

con otras asignaturas del plan de estudios tales como balance de materiales,
balance de energa, termodinmica, cintica y fenmenos de transporte con el
objeto de enfatizar las analogas y aplicaciones de la lngeniera oumica en
lngeniera Bioqumica. Asf, por ejemplo, la cintica de las reacciones catalizadas
por enzimas y su aplicacin en el diseo de reactores, la seccin sobre catlisis
enzimtica en fase heterognea y el efecto de la resistencia a la transferencia
de masa, las secciones sobre agitacin, aeracin y dispersin, las secciones de
transferencia de calor y transferencia de masa, la seccin sobre difusin de
oxlgeno en cultivos de tejidos animales y la seccin sobre estrategias de
cambio de escala, demuestran al lector la aplicacin de los principios de la
lngeniera Oumica en el campo de la Biotecnologa.
La aplicacin de los lenguajes de simulacin digital constituye uno de los
aspectos ms importantes de la moderna educacin en lngenierla, La disciplina
lograda mediante el anlisis de un comportamiento complejo, de acuerdo con la
teora disponible, expresada en forma de ecuaciones matemticas, constituye

un medio valioso para entender la interaccn entre causa y efecto en

un

sistema real. Este volumen incluye varios programas, algunos en lSlM, utilizado
como ejemplo de uno de los lenguajes de simulacin continua. Sin embargo,
como su disponibilidad es bastante restringida comparada con la universalidad
de otros lenguajes como el BASlc, los ejemplos en lSlM presentados-en este
texto, excepto uno, son desarrollados simultneaente en GWBASIC, con el
objeto de confrontal estas dos herramientas de clculo, facilitar el estudio de
algunos de los modelos ms importantes en lngeniera Bioqumica y motivar al
lector hacia el desarrollo de nuevos programas.
Esta obra es fruto de la nteraccin entre el Departamento de lngeniera
Oumica y el lnstituto de Biotecnologa de la Universidad Nacionalde Colombia,
y del Seininario sobre Biotecnologa que ininterrumpidamente se ha desarrollado
desde el ao de 1983. Las diferentes llneas de investigacin del lnstituto de

Biotecnologfa

y del Departamento de lngeniera

Oumica han apoyado la

realizacin de numerosos proyectos de grado y constituyen la base del programa


actual de postgrado en lngeniera Oumica con rea de nfasis en lngeniera
Bioqumica.

XVIII

Agradezco a Myriam, mi esposa, y a mis hiios Alejandra, Ximena y


Felipe por su paciencia y su estimulo mientras escribla este lbro. Tampoco serla
posible esta obra sin la permanente colaboracin de la Doctora Dolly Montoya
Castao, directora del lnstituto de Biotecnologla, del lngeniero Gustavo Buitrago
Hurtado, subdirector del lnstituto de Biotecnologla, del lngeniero Luis A. Caicedo
M., con quien comparto el curso de postgrado en lngenierfa Bioqumica, de
todos los profesores del Departamento de lngenierfa Oufmica, de los profesores
e investigadores del tnstituto de Biotecnologfa, y de los estudantes de los
cursos pregrado y postgrado de lngeniera Oumica quienes ayudaron a corregir
y enriquecer los borradores del presente texto.
Extiendo mis agradecimientos a los siguientes profesores, quienes a
travs de cursos y eventos nacionales e internacignales contribuyeron a mi
formacin en el rea: Dr. Enrique Galindo Fentanes, Dr. Agfrstfn Lopez Munguia
Canales, Dr. Rodolfo Ouintero Ramirez, Dr. Tonatiuh Ramirez, y dems
profesores e investigadores del lnsttuto de Biotecnologla de la Universidad
Nacional Autnoma de Mxico (UNAM), Al Dr' Carlos Rolz, investigador titular,
y dems profesores e investigadores del lnstituto Centroamericano de
lnvestigacin y Tecnologa lndustrial (lCAlTl) de Guatemala. Al Dr. Fernando
Acevedo Bonzi, Dr. Andres lllanes V., y dems profesores e investigadores de
la Universidad Catlica de Valparafso, Chile.

Alberto Duarte Torres

xtx

CAPITULO

INTRODUCCION

La lngeniera Bioqumica integra los conocimentos de bioqumica y'biologa con


la estrategia y metodologa de la lngenierla Oumica, aprovecha las capacidades

degradantes y snttcas de los microorganismos y aplica estos conocimientos


en la produccin, procesamiento y conservacin de materiales de valor
econmico, mediante agentes biolgicos tales como microorganismos, clulas,
enzimas y anticuerpos.

,."aro. qumicos tradicionales


principalmente en la sensibilidad de los reacfivos y los productos hacia las condiLos procesos bioqumicos difieren de los

cionss afbHtales:y en la complejidad de las reacciones bioqulmicas que


normalmente solo toleran pequeisimos cambios de temperatura, pH e intensidad inica.
Cuando se examina el crecimiento de clulas separadas del organismo vivo tal
como un cultivo de clulas vegetales, de clulas animales, o de organismos
unicelulares, se.encuefia que,lasaesfieohas oondcioArnbientales proporcio-

nada porel'organismo.vivo deben r-,pfovistas.Et*ficialrnente. Y aunque


muchos reactores comerciales no requieren un control con estos limitados
mrgenes de tolerancia, las clulas deben ser protegidas de cambios repentinos
en las condiciones ambientales, de los elevados esfuerzos cortantes producidos
por la agitacin del caldo y de los microorganismos extraos.

1.1 LA CELULA

La clula es la manifestacin ms sencilla de la vida. En la clula se unen


tomos para formar molculas, se conectan molculas para formar estructuras,
y se coordinan'estructuras para producir mas clulas. La clula crea y mantene
orden, organizacin, y complejidad.

De acuerdo con la egunda Ley de la Termodinmica, la.ntropa aumenta


invariablemente en cualquier lugar del universo. La estrategia de la vida es
afrontar esta tendencia de la naturaleza hacia el azar y generar orden mediante
la creacin de estados inestables. Estos procesos requieren energa, ya sea
directamente de la luz solar o de las sustancias nutritivas que rodean la clula.

.1

.1

Tipos bsicos de clulas

Los dos tpos bscos de clulas, maario(es : y eucdrjotesj dfieren en la


complejidad de su organizacin celular (Figura 1.1). Las clulas eucariticas
tienen estructuras intracelulares limitadas por membranas, denominadas

Entre los orgnulos est el ncleo (contiene el genoma celularJ, los mitocondrios
(sitio de sfntesis y tr'ansporte de energaf , los lisosomas {eontienen las enzimas

degradantesl,

y los cloroplastos en los organismos fotosintticos.

El niio

orgnulo comn a procariotes y eucariotes es el ribosoma (stio de sntesis de


las protenas).
En la Tabla 1 .1 se presenta la clasificacin de los microorganismos del reino
protsta. El reino de los protistas est formado por organismos dotados de una
organizacin biolgica muy simple comparada con la de las plantas y animales.
Pertenecen a este reino fodos los organisrnos unicelulares, y los multicelulares
formados por clulas del mismo tipo.

Figura 1.1 Representacin esquemtca de clulas "tfpicas". AI componentes


de una clula tfpca; Bl Paramecium, microorganismo, tipo animal, de una sola
clula; Cl Euglena, microorganismo tipo vegetal, unicelular; D) Clula bacteriana.
lPelczat, et al., 19771,
CuerDo

de

GolQ

Lrgsma

-Membraa celular

Relcuro

tleliculo

end@lsnrco

ercoosmico

Svrco bucal

Mrcronceo '

N:.,r

i=

Cromosoma
Nqleo

ilt em bra na

/,z-x'

ucleat

\Qo
v(,

Vacuolas axrenttcias
Crloprqio

o'.

, t);, .

).,(fi-=
o-C)--'='

t* :fii

Tnc@lo

cloolasma

'-

M[Eri

Olostoma

cr,**--l\u,\tltl,r,

r rrrrrr,-r,,
"^.,on"t/"jrrrrr,.
o r ri fij !!*,
'

Vescula

prn6rlsca

Vacuola

o"

Vacuola

contrclil conlrct

Veslibulo.
Eslrgma de

pgreno
Grnulo de azul

Paed cella
Membrana
aloplasmrca

Flib6oms

Grnulo lrgldco
Grnuos de volulina

1.1.2

La informacin gentca

E! cido desoxirribonucleico, ADN, es

el depositario de la informaein

que
instruye a la clula sobre la disposicin correcta de sus tomos; rnolculas,
cadenas y estructuras, para convertirse en una clula completa, transmitirse de
generacin en generacin, y volver a iniciar el proceso. El ADN e una larga

cadena molecular formada por cuatro tipos de eslabones; adenina, guanina,


citosina, y tmna. Estas cuatro bases, o letras, se unen formando secuecias,
o palabras, con las cuales puede escribirse el nmero infinito de frases que
constituyen la informacin gentica.

Tabla

1.1

Clasificacin de microorganismos del reino Protista. (Bailey y Ollis,


1986).

Todas las ctulas contienen unos orgnulos denominadqs ribosomas.donde se


copian fragment6s, o genes, de la informacin del ADN, con la ayuda de una
protena, enzima, que acta como catalizador. Esta copia de la informacin es
el cido ribonucleico mensajero, ARN^. Es un mensajero porque transporta el
mensaje de los genes, desde el ncleo, donde se encuentta el ADN, hasta el

citoplasma, espacio celular alrededor del ncleo, donde se encuentran los


ribosomas. Las molculas de ARN, ms cortas que las de ADN, contienen
uracilo en lugar de timina.
En el ribosoma se lee la secuencia de los nucletidos del ARN^ y se produce una
protena. Enzimas muy especficas unen cada aminocido con una molcula
peque de cido ribonucleico de transferencia, ARN. El ribosoma selecciona
cada ARM con su aminocido agregado, de acuerdo con el orden indicado en
el ARN^ lefdo en ese momento. De esta manera, cada nuevo aminocido, y su
correspondiente .ARl,, entran en el ribosoma y se sitan de modo que diCho
aminocidO queda qumicamente ligado con el arninocidO que le precede en el
ribosoma. As, los eslabones quedan unidos secuencialmente, y cuando termina
la lectura de la cadena del ARN^, se libera la cadena,protefnca. Cada gene
codifica una protena.

Las protenas son cadenas moleculares formadas por veinte clases de eslabones,
los aminocidos. El orden, o secuencia de los aminocidos en la cadena es

exacto y determina eltipo de protefna. Cada protena tiene funciones biolgicas


especiales. As, por ejemplo, la hemoglobina es una protelna que se pliega segn
una configuracin tridimensional, la nica capaz de aceptar y liberar eloxgeno.

1.2

METABOLISMO MICROBIAL

La energa obtenida por la clula a partr de las sustancias nutritivas del entorno,

oife la luz solar, es utilizada en la realizacin de trabajo qufmico, en la biosfntesis de las protenas, cidos nucleicos, lfpidos, pbfisacridos y dems
componentes celulares importantes para su desarrollo y replicacin. Tarnkin se
requiere energa para la realizacin de trabajo osmtico, en el transporte de
sustancias nutritivas a travs de la membrana celular y en el trabajo mecnico
de contraccin y locomocin.
Metabolismo es el conjunto de todas las secuencias de reacciones catalizadas
ehzimticamente que ocurren en la'clufa. Cada secuencia se conoce como ruta
metablica y los productos de estas reacciones son los metabolitos. un
adecuado conocimiento de la estequiometrfa de las diferentes rutas metablicas
facilita la aplicacin del anlisis estadstico en la evaluacin de los datos
obtenidos durante el desarrollo de una fermentaci, Tsai y Lee, 1987. Algunos
subproductos del metabolismo celular tales como alcohles, cidos orgnicos
y los aminocidos, son aparentemente innecesarios para la funcin celular,
otros, como los antbitcos y enzimas extracelulares, satisfacen un propsito.
Desde el punto de vista de la Ingeniera Bioqufmica son importantes aquellas
rcciones ceJulares biolgicarnt ' ineficientes' que producen sustancias
biiiulmicas en cantidades sulieriores a lds necesidades de l clula. lnnumerables reacciones mantienen la vida'celular, en la Tabla 1.2 se presenta, a manera
de ejemplo, un resumen de la actividad biosinttica del Eschericha coli. En un
medio de crecimiento rico en nutrientes y bajo condiciones ambientales apropiadas esta bacteria tiene un ciclo de replicacin de veinte minutos, perlodo
durante elcual ocurren con gran precisin, equilibrio y productividad, numerosas
reacciones.

Catabolismo es Ja-fase dgradenterdet metabofismo.-Las molculas o,rgnie6


nutcitiuas tales como hidratos de oarbono, hpidos y.p_rotenas, son,degradadds
hasta productos firM.fdes comoeido lctico, ci_d_o,aetico, CO,2;jamonaco
y urea, En las reacciones oxidativas del catabolsmo se !ibera la energa inherente a la compleja estructura de las macromolculas orgnicas en la forma de
trifosfto de adenosine ATP.

Anabolismo es la fase de construccin,i las molculas pequeas de los


precu rsores son ordenadas para f ormar.'lo com poFtentesorolectfla resvelative rnenteglandes de la clula tales como polisacridos, cidos nucleicos, protefnas
y lpidos. Las reacciones de biosntesis del anabolismo requieren la energa libre
aportada por la escisin del ATP.
El catabolismo se puede describir en tres fases tal como se muestra en la Figura

.2.-En la fase l, loq polisacridos son degradados hasta pentosas o hexosas;


los lpidos hasta cidos grasos, glicerina y otros componentes, y las protenas
liberan, mediante hidrlisis, sus veinte aminocidos componentes. Generalmente, los productos de la fase I son degradados en la fase ll hasta acetil-coenzima
A. En la fase lll, el grupo acetlo del acetil-Co/ se incorpora al ciclo del cido
tricarboxlico y se oxida hasta CO, y agua.
1

anabolismo tambin ocurre en tres fases a partir de las unidades estructurales


provenientes de la fase lll del metabolismo. La sntesis de las protenas se inicia
El

en la fase lll con la formacin de o-oxcidos y otros precursores de los


aminocidos. En la fase ll los a-oxcidos son transtormados en o-aminocidos,
los cuales forman, en la Fase l, las cadenas polipeptdicas de muchas protenas
diferentes. Anlogarnente, los gr:upos acetlo provenientes de la fase lll son
transformados, en la fase ll, en cidos grasos, con los cuales se construyen los
diversos lpidos,
Asf como las rutas catablicas on convergentes, las anabticas son divergentes. Cada fase delcatabolismo o delanabolismo de una determinada biomolcula es catali.zada por un sistema multienzimtico diferente. Generalmente la ruta
catablica, y la correspondiente, aunque opuesta, ruta anablica, entre
precursor y producto, difieren en sus metabolitos y en las enzimas catalizadoras
de las. etapas intermedias. La fase lll del metabolismo es amfiblica, funciona
catablicamente en la degradacin de las molculas producidas en la fase ll, o
anablicamente en la formacin de molculas precursoras de la biosntesis de
las macromolculas celulares.

Tabla

1.2 Actividad

biosntetica durante los veinte minutos del ciclo de


replicacin de E. coli. (Lehninger, 19711

Componente

qumico

Poreentaj
de peso

geco

Peso

molecular
aproximado

Nmero de
mo1cu1as

por c1uIa

,I

2-O0O.000-000

RN

10

1.000.000

15 - 000

Protenas

70

60.000

1 .700 . 000

Lfpidos

10

1-000

15.000.000

200.000

39 - 000

Po]-igcridos

Componente

qulmieo

ittolcuIas

sintetizadae
por eegundo
0,00083

Protefnae

Lpidos
PoIi-sacridos

Porcentaj e
de Ia energra
biosinttica
total

2,5

75 .000

3,1

1.400

2.120.OO0

88,0

12 .500

87.500

3,7

65.000

2,'7

'

ARN

Moiculas
de ATP,
gintetizadas
por segundo
60.000

ADN

1.2.1

1-2,5

2'

tr

Procesos de produccin de energa

Las funciones espcffcas del metabolismo son: ohtei$d.BiO WfraG del


de les'f,ntncia,Sgnic nutritivaso& +a hz sotar;'tnvertr
t''eoni, I fiffi
:,"estruefti f al ; d' {bs

trtitffi

ebrF6enterincrd}ole]&gi iras 'cIulas; nir.:b precffibr'itfa


formar protelnas, cidos nuclecos, lfpidos, pkcii} Otros ccrB4*ts

celulafes; formar y degradar las biomolculas necesarias para las funciones


celulares especializadas. El propsito de esta Seccin es presentar un resumen
de los principales procesos mediante los cuales la clula obtiene energa.

1.2.1.1

Gluclisis

La gluclisis es una de las diversas rutas empleadas por diferentes especies dd

organisrtos para degradar anaerbicaments h glucosa hasta cid ictco,'on:


elobieto de obtener energa qufmica, Los carbohidratos constituyen la clase ms
importante de sustancias carbonaceas nutritivas para los microorganismos.
Algunas especies metabolizan tambin aminocidos, hidrocarburos, grasas y
aceites. La mayora de los microorganismos que metabolizan carbohidratos, fermentan la glucosa, segn las rutas conocidas como Embden-Meyerhof:ty del
fosfato pent6a. Otro tipo de fermentacin anaerobia es la fermentacin alcohlica, donde las levaduras degr:adan la glucosa hasta etanol y dixido de
carbono. Los organismos facultativos despus de catabolizar la glucosa oxidan
aerbicamente los productos de la fermentacin. La ruta anaerobia de escisin
de la glucosa precede a la fase aerobia de la respiracin. Este proceso es
caracterlstico, no slo de muchas bacterias, levaduras y hongos, sino tambin
de las clulas aerobias de la mayor pafte de los animales superiores y de las
plantas.

1.2.1.1.1 Ruta metablica Embden-Meyerhof-Parnas

En la Figura 1 .3 se representa la ruta metablica Embden-Meyerhof-Parnas,


EMP, conocida tambin como la ruta del difosfato hexosa o ruta de la gluclisis.
El piruvato formado en la ruta EMP es una fuente de precursores anablicos
claves y para los organismos aerobios constituye tambin un sustrato para la
oxidacin. Para los organismos anaerobios, el piruvato, o los productos de su
transformacin, constituyen los agentes reoxidantes de la forma reducida del
nicotinamid-adenln-dinucletido, NADH.

Figura

1.2

Fases del catabolismo y del anabolismo. Las rutas catablicas son

representadas con flechas descendentes y las anablicas mediante flechas


ascendentes. La fase lll es amfiblica, constituye la ruta finalde la degradacin
de los alimentOs hasta COz la cual proporciona las sustancias precursoras de
pequeo peso molecular para el anabolismo'

Polisacridos

Protefnas

hexosas

aminocidos

II

Fasel

il

pentosas

1t

lt

gliceraldehldo

3-fosfato

rt

fosfoenolpiruvato

Fase ll

Itr

piruvato

1l

Fase

lll

llr
tt
fumarato

succinatc

CO,

La ecuacin global de la gluclisis por la ruta EMP es:

t1 .11

2Hro'ao +2NADII +2ATP +2H2O +2H

Figura

1.3

Ruta metablca EMP. (Ratledge,

tg87)

Smbolos; Pr,ion fosfato; Pr fosfato; Pr:difosfato. Los pasos 6-10, incluyen 2


rholes deireactivos y productos por'mol.de:glucosa utilizada. Las enzimas que
actan en la ruta EMPson: (1)hexoqujnasa, (2) glucosa fosfato isomeraea, (31
fosfofructqquinasa, (4) aldolasa, (5) triosa fosfato isomerasa, (6) gliceraldehdo
fosfato' deshidtogenasa, (7) 3-fosfoglicerato quinasa, (8) fosfo-gtceromutasa,.

ATP

t2t

glucosa

glucosa 6-P

=...--

fructosa 6-P

ADP
ATP

dihidroxiacetona 1-P

(s)

fructosa
1,6-P2

NAD*

ADP

(6)

gliceraldehdo 3-P

glicerato
1,3-P2

NADH

HT

(9)

fosfoenol
piruvato

H2O

glicerato
2-P
ADP
110)

ATP

10

prruvato

glicerato 3-P

1.2.1.1.2 Ruta metablica del fosfato-pentosa

La mayora de los microorganismos metabolzan entre el 66Yo V 80% de la


glucosa por la vla EMP y el resto por la ruta del fosfato pentosa, o ruta del
monofosfato' hexosa. En la Figura 1.4 se muestran los pasos de !a ruta del
fosfato pentosa.

Figura

1.4

Ruta metablica del fosfato pentosa.

Smbolos: P, fosfato. Las enzimas que actan en la ruta del fosfato pentosa
son: (1) hexoquinasa, (2) glucosa 6 fosfato deshidrogenasa, (3) fosfogluconato
deshidrogenasa, (41 isomerasa, (51 epimerasa, (6) transquetolasa, (7)transaldolasa, (81 transquetolasa. (Ratledge, 1987)
NADP
(1)

glucosa

glucosa 6-P

ribosa 5-P

ribulosa 5-P

gluconato 6-P

xilulosa 5-P
fructosa 6-P
eritrosa 4-P
piruvato

11

1.2.1.2

Respiracin

La clula microbial tiene la capacidad de reproducirse a partir de sustancias


nutritvas simples. El nmero de rutas metablicas utilizadas por una clula para
lograr su reproduccin es muy grande. Probablemente una clula bacterial
contiene aproximadamente unas mil enzimas dferentes, y una clula eucaritica
el doble. En todas las rutas metablicas diversos sistemas enzimticos transforman los sustratos con o sin cambio del esqueleto carbonado y los convierten en
aminocidos, lpidos, vitaminas y muchos otros componentes celulares y
productos del metabolismo. Resulta imposible en un texto de nivel introductorio, describir las numerosas rutas metablicas, su estudio corresponde a la
bioqufmica general.
Las principales rutas catablicas descritas en la seccin anterior conducen hacia
la formacin de piruvato y funcionan tambin durante la respiracin. Las

reacciones tfpicas de la respiracin parten de piruvato, como sustrato de la


oxidacin y como fuente de precursores anablicos fundamentales. En la Tabla
1.3 se presenta una lista de algunos agentes oxidantes y reductores y de los
correspondientes organismos que realizan la respiracin. En ausencia de oxgeno
e! proceso se denomina respiracin anaerobia.

1.2.1.2.1 Giclo del cido tricarboxlico

En la Figura 1.2 se muestra la admisin, a la Fase lll del catabolismo, de los


grupos acetilo. obtenidos en la Fase ll, a partir de los carbohidratos, lfpidos y
aminocidos. La Fase lll est constituida por un sistema multienzimtico,
catalzador delciclo delcido tricarboxlico (Figura 1.61. Este ciclo se desarrolla
en tres etapas: En la primera se forma Acetil-Co-A, a partir de la oxidacin de
piruvato, cidos grasos y aminocidos. En la segunda se producen CO, y
tomos de hidrgeno mediante la degradacin de los restos acetilo en el ciclo
del cido tricarboxlico. En la tercera etapa, los electrones equivalentes a los
tomos de hidrgeno, son transportados mediante la fosforilacin del ADP,
hasta el oxgeno molecular.

13

Tabla

i .

1.3

Reductores y oxidantes en las respiracioneg bacteriales. (Sistrom,


1969),

Reductor

Oxidante Poductos

H2

02

'

(SO4)'?-

H2

Compuestos O,

orgnicos

, i'.

Oz '

NH,

,,

9rganlsmo

.' Bacter:ia de1

Hro

:"hidrgeno
HrO

+ 52-

,QO,

Desulfovibrlo

ltrrO

(NOr) - + HrO

Muchas bacEerias
todas 1as plant.as
y animales
ij

I ,

::i

Bacterias .''
ni,trifipant.es

ir,r,,
..,j

(NO;)- '

O,

CompuesEos (NO3)
orgnicos

(NO3);-:'

t.

+ fLO

N, + CO,

Bacterias

denitrificantes
:.

(Fe)

2t

02

Baeterias
nitrif icanEes ';.. "'

1Fe)'*

- i-

FerrobaciTLus
(bacteria del

hierro)

s2-

02

(so{)'?- +

Hro,

rhiobaciflus
,(bgceeria de1
a.zufre)
ii

La'reposicin de los intbrmeUiarios del ciclo se reliz' mediante reacciones


eirimtcas,enoininada, anaplerficas. Si se remeve un itermediario; no se
sintetiza oxalacetto. n se rgenera ctrato. La reaccin anaplertica ms
amportnte es te carboxilacin del piuvat para formar oxalacetato, poi accin
de la enzima piruvato carboxilasa
14

En los organismos que se desarrollan con acetato, como nica fuente carbona-

da, entra en juego la derivacin del acido glioxflico (lfnea a trazos de la Figura
y otros
1 .6), una variante del ciclo del cido tricarboxflico, formndose succinato
'Muchas
para
ruta
de
otra
disponen
clulas
intermediarios, a partir de acetato.
receptor
degradar glucosa, conocida como ruta del foSfogluconato, El
electrnico de estas reacciones es el nicotinamid-adenfn-dinucletido-fosfato,
NADP. Su forma reducida el NADPH, es uno de los principales reductores en
la sfntesis de molculas ricas en hidrgeno tales como los cidos grasos y el
colesterol.

Figura 1.6 Ciclo del cido tricarboxlico. (Ratledge, 1987).

Slmbolos: Las lneas a trazos corresponden a la derivacin glioxilato; FAD,


FADHr: flavin adenfn dinucletido y su forma reducida; NAD, NADH: nicotinamid-adenn dinucletido y su forma reducida; GDP, GTP: nucletidos de la
guanosina, difosfato y trfosfato, respectivamente; ADP, ATP: adenosin difosfato y adenosin trifosfato, respectivamente; Co-A: coenzima A'

fosfoenolpiruvato

--->

azcares

ATP
(13)

malato

(10)

aconitrato

oxal-

acetato

(3)

NADH
I
(1 1

fumarato

FADI I

isocitrato

NADH
CO,

Co-A

","",1',,,i1o'[
t7t

succinilCo-A

l(6)
NAD*

15

Las,enzimas que intervienen en el ciclo del cido tricarboxlico son; (1) citrqto

sintetasa; (2) y {3): aconitasa; (a} v {5) ,isocitrato deshidrogenasa; (6} 2


oxogluconato deshidrogenasa; (7) succinato tioquinasa; (8) succinato deshidrogenasa; (9) fumarasa; (10) malato deshidrogenasa; (,1,1) isocitrato liasa; (12)
malato'sintasa; (1 3) fosfoenol piruvato carboquinasa.

1.2.1.2.2 Transporte electrnico y fosforilacin oxidativa

y la fosforilacin oxidativa representan la ltima fase


de la oxidacin biolgica. Los electrones, separados de los intermediarios del
ciclo del cido tiicarbbxlics, fluyen por una cadena de mltiples eslabones,
coiistituidos por las enzimas de transporte electrnico con niveles de energfa
El transporte electrnico

'sucesiVamente menores, hasta alcanzar el oxgeno molecular, ltmo aceptante


electrnco en la respiracin.
En este proceso se conserva la mayor parte de la energa libre de los electrones

mediante el proceso de fosforilacin oxidativa, como energfa asociada al enlace


fosfato del ATP. En los tejidos animales y vegetales, las enzimas catalizadoras
del transporte electrnico y la fosforilacin oxidativa estn localzadas en los
mitocondrios.

1.2.1.2.3 Reacciones de oxidacn-reduccn


a

Numerosos procesos biolgicos de conversin de energa incluyen reacciones


de oxidacin-reduccin, Oxidacin es una prdida de electrones y ieduccin es
una ganahcia de electrones.
Un sistema tfpco de oxidacin-reduccin (O,9) se puede expresar como:
11.2t

Donde, n: nmero de electrones transferidos en la reaccin. si un electrodo de


16

metal inerte (platino o plata) se sumerge en un sistema OR, se establece una


diferencia de potencial entre los electrones en la solucin y los del metal,
conocida como potencial de electrodo :

E = Eo

R'T ,nlox'l

n.F

t1.31

lred.l

Donde, Eo, es una constante especal para un sistema dado, conocida como
potencial de electrodo patrn, o fuerza electromotriz patrn; R : 8,314
J.(mol.K)-1: constante de los gases; F:96,485 kJ.(mol.V)'l: constante de
Faraday; r: temperatura absoluta, Ki lox.l y lred.l: concentraciones de las
formas oxidada y reducida del sistema
Un electrodo sumergido en una solucin de un sistema OR forma lo que se
conoce como semipila, cuya diferencia de potencial es imposible de medir, ya
que se trata de un electrodo simple. Para medirla se combina con otra semipila,
obtenindose entonces una pila completa. La diferencia de potencial entre
ambas semipilas se mide con un potencimetro.
En la determinacin del potencial de electrodo de un compuesto se requiere un

electrodo de hidrgeno como patrn de referencia cuyo potencial es arbitrariamente definido como cero. En lugar del electrodo de hidrgeno puede
utilizarse un electrodo de construccin ms sencilla, como el de calomelano,
cuya diferencia de potencial con relacin a la semipila de hidrgeno se conoce
exactamente,
Por consiguiente hay necesidad de definir un nuevo smbolo: En, donde h indica
que elelectrodo de comparacin ha sido calibrado con respecto al de hidrgeno:

En=E'Es

I1.41

Donde E, es el potencal de electrodo del hidrgeno que, por definicin, es cero.

Por tanto, la ecuacin general para calcular el potencial de electrodo de un


sistema OP es:

E=Eo.yr:*+H

t1.51

"t7

El valor.de E^ vara de acuerdo con el valor de la relacin entre las concentracones de la forma oxidada y la forma reducida. Cuando estas concentraciones son

iguales: E

Eo.

S se conoce el valor de Eo, se puede calcular el potencial de electrodo del


sistema en cualquier grado de oxidacin o reduccin. Por otro lado, el grado de
oxidacin se puede obtener a partr de la medicin del potencial de electrodo.
EI trmino E" se refiere a mediciones realizadas a pH cero. una condicin difcil
de lograr en la prctica. El trmino Eo' se utiliza Bara indicar. que el potenciat de
electrodo patrn fue establecido a un dado valo|de pH.

El potencial de reduccin de una media reaccin, en la cual las formas oxidada


y reducida estn presentes en concentraciones no patrn, se calcula a partir de
la ecuacin de Nernst:

E=

E'* R'r ,n lox'l


n.F lred.l

[1,6]
.

Otra forma de la Ecuacin [1.6] es:

(n.F.AE)) =

- n.T.ln K,

11.7t

Donde K. es la constante de equilibrio. El trmino de la derecha de la Ecuacin


[1.7] coincide con el mismo trmino de la Ecuacin t1.31, portanto;

LG; =

n.F.A,E',

t1.81

Donde, n: nmero de electrones transferidos; F: constante de Faraday [F :


96,5 kJ.(mol.V)-l]; AEo': cambio de potencial estndar, V; AG"': cambio de
energa !ibre estndar, kJ/mol.
En la Ecuacin [1.8] el valor de AE"'debe ser positivo, con el propsito de
obtener un AG"'negativo, o sea, un valor positivo de AEo' indica una reaccin

espontnea. De acuerdo con la Ecuacin [1.8] el cambio de ener,ga libre


estndar de una reaccin puede calcularse a partr de la diferencia entre los
valores de Eo'. De igual manera, puedecalcularse una variacin deenerga libre
para sistemas individuales y, de esos datos, calcularse una variacin de energa
libre de los sistemas combinados:
1B

^G;=^GA-^G;2

t1.91

En las reacciones de transferencia electrnica, como las que ocurren en la


cadena respiratoria, los electrones son transferidos desde un donante, o
reductor, hasta un aceptante, u oxidante. En algunas reacciones la transferencia
se efecta mediante tomos de hidrgeno. En este caso deshidrogenacin
equivale a oxidacin e hidrogenacin equivale a reduccin.

- Reacciones cido-base:
Donane de Ptonnes

(===)

tl.101

+ Aceptanfc de protorus

- Reacciones de oxido-reduccin:

tl.11I

e-

+ Acepttre de electrones

L" t"nd"n"ia de un reductor a perder electrones se expresa

mediante el
potencial de reduccin estndar, definido como la fuerza electromotriz, en
Voltios, suministrada por un electrodo en una disolucin de un reductor y de su
oxidante conjugado, cuando la concentracin de ambos es 1 M, a 25oC y pH
7,O.
En la Tabla 1.4 se presenta un resumen de los potenciales de oxirreduccin de
algunas reacciones bioqumicas. En esta Tabla se observa que et acetaldehdo
tiene una tendencia muy alta a perder electrones y oxidarse hasta cido actico,
mientras que el agua tiene muy poca tendencia a perder electrones y formar
oxfgeno molecular,

Cualquier sistema Or? puede ser oxidado por un sistema ms positivo, esto es,
situado en una posicin ms baja en la escala, Debe tenerse presente que frecuentemente se requiere un catalizador con el propsito de lograr una reaccin
entre ambos sistemas. La mayora de los pares electrnicos que ingresan a la
cadena respratoria proviene de algunas enzimas conocidas como deshidrogenasas ligadas a la piridina, catalizadoras de las siguientes reacciones generales:

19

susffato redrcifu + NAD'

(===)
a1.12)

/istrato oxidado + NADH + H.

t1'13I
s'ustrato oxidado + NADPH +

H'

''';i

;-

Donde, NAD, NADH: nicotinamid-adenn-dinucletido y sq.correspondente


forma reducda; NADP, NADPH: fosfato de nicotinamid-adenfn-dinucletido y su
correspondiente forma reducida.

Tabla

1.4

Potencial de reduccin estndar de algunas reacciones bioqufmicas,


(Lehninger, 1973)

Reaccin

Actividad unitaria de todos los componentes, Eo'


pH: 7,0
xcepto el H*. cuya concentraciOn'es tO:TM.
Voltios ..
Gases: 1 atmosfera de presin.
acetato + CO,
acetato

+ 2H* + 2e ->

zH.',

'2e

!..

ferredoxina- Fe*3

piruvato

-> acetaldehfdo

1e

2H*

+ 2e-->

electrones

- O,7O
-

0;60

--> ferredoxina-Fe*z - 0,432

H*+1e--)O,5H,
CO,

Direccin
flrjo

- 0,42
formato

co-A
"
+ 2H' + 2e--> malato

- 0,42

acetil-co-A + 2.H* + 2e--> acetaldehfdo +

- o,41

piruvato + CO,

-.9,33
Contina

20

Tabla 1.4 (Continuacin)


Reaccin

Actividad unitaria de todos los componentes,


excepto gf H* cuya concentracin es 10-7 M.
Gases: 1 atnosfera de presin.

acetaldehdo
NADPT

+ 2H* + 2e -->

NAD*

+ 2H* + 2e -->

2H*

piruvato +

H-

oxaloacetato

r;,;,j*r.,""

+ 2H* + 2 e-->

+ 2H* + 2e--)

ubiquinona + .?H.
crotonil-Co-A

-i*,o

malato

-,.o.32

ubiquinona-H,

+ 2 H* + 2e ->

butiril-Co-A

o,14

- 0,102
-

succinato

+ 2e -->

63

- 0,19

FADH2

+ 2H* + 2e -->

O,1

0,06

+ 0,03
+ 0,10

+ 0,19

citocromo c-Fe*3

1e

->

citocromo c-Fe*2

. + 0,25

citocromo a-Fe*3

1e

->

citocromo a-Fe*2

+ p,29

:1'

0,5 02 + HrO + 2e --> HrO,


Fe*3

+ 1 e-->

O,5 02

Direccin
flujo
electrones

- o,32

2H* + 2e --> lactato


_NHs

fumarato

+ 2E--> NADH + H*

o-cetosrutarato r

FAD

etanol

NADPH

,Eo'.
pH: 7,0
Voltios

Fe*2

+ 2H* + 2e --)

HrO

+ 0,30
+

O,771

O,816

21

Otras enzimas asociadas al transporte electrnico son las deshidrogenasas


ligadas a la flavina, constituidas por flavin-adenn-dinucletido IFADI o flavinmono-nucletido IFMM. Los electrones y tomos de hidrgeno, participantes
en las oxido-reducciones, son conocidos como equivalentes de reduccin. La
coenzima O, conocida como ubiguinona, por su ubicuidad en todas las clulas,
es el aceptante de los equivalentes de reduccin de las deshidrogenasas ligads
a la flavina. Lob electrones aportados por las flavin-deshidrogenasas son recogidos por la coenzima O. La velocidad de transporte electrnico se controla
mediante las concentraciones de ATP

y ADP. Los citocrornos, grupo de

ferroprotenas responsables de la transferencia de electrones en las clulas aerobias, actan secuencialmente en el transporte de electrones desde la coenzima
O hasta el oxgeno molecular. Todos los componentes de la cadena respiratoria
aceptan electrones de los compuestos precedentes en la cadena y los transfieren al siguiente eslabn.

1.3 APLICACIONES DE LA INGENIERIA BIOOUIMICA

Las aplicaciones de la ingeniera bioqumica son numerosas. En las Tablas 1.5

y 1.6 se presenta una lista de algunos productos industriales, diferentes de los


antibtcos, producidos por bacterias (Tabla 1,5), y por hongos (Tabla 1.61. En
el Captulo 4, se presenta una lista de aplicaciones industriales de las enzimas.
La Tabla 1.7 es una lista de algunos productos, obtenidos a partir de bacterias
y hongos, tiles com antbticos.

Otros productos farmacuticos obtenidos por biotecnologa son: antgenos


(sustancias que estmulan la respuesta de los anticuerpos); sustancias para
diagnostico; endorfinas (neurotransmisores); gammaglobulina (prevencin de
infecciones); hormona de crecimiento humano; seroalbmina humana (tratamiento de trauma fsico); reguladores inmunitarios,insulina, interfern
(tratamiento de infecciones); interleuquinas, limfoquinas (modulacin de la
reaccin inmunitarial; anticuerpos monoclonales (diagnstico y liberacin de
drogas); pptidos neuroactivos, vacunas, etc.

22

Algunas aplicaciones de la biotecnologa en agricultura son: desarrollo de plantas

con mayor capacidad de fotosntesis y fijacin de nitrgeno; desarrollo de


insecticidas biolgicos, pesticidas, fungicidas y herbicidas, Algunas aplicaciones
industriales de la biotecnologa son: produccin de cido actico, acetona, butanol, etanol, gas carbnico, h'idrgeno, aminocidos, enzimas, vitaminas, lfpidos,
bebidas dlcohlicas, protena unicelular, edulcorantes y biopolmeros; separacin
de minerales cocfltracin de metales; control de la contaminacin; degradacin de residuos txicos; recuperacin de derrames de petrleo; produccin de
biosensores.

Tabla

1.5 Algunos productos industrales,

diferentes de los antibiticos,


producidos por bacterias. Pelczar, et a|.,1977.

PRODUCTO

MICROORGANISMO USOS

Butanolacetona

Clostrdium
acetobutylicun
y otros

qumica

2,3 Butanodiol

Bacillus polimixa,
Ent. aerogenes

Solvente, fiumectante,
intermediario qumico

Micrococcus

Adtivo de alimentos

Lisina

Solventes, manufactura

glutamicus
Dihidroxiacetona

G. suboxydans

Producto qulmico fino

Acido lctico

Lactobacillus
delbruecckii

Productos alimenticios, textles y lavanderas, manufactura


qufmica, curtdo de pieles

Amilasa
bacteriana

Bacillus subtilis

Modificador de almidones,
encolado de papel, desencolado de textiles

Proteasa
bacteriana

B. subtilis

Laminado de pieles, desencolado de fibras, quitamanchas, ablandador de carnes


Contina

23

Tabla

1.5

Continuacin

PRODUCTO

MICRORGANISMO

usos

Dextrn

L.mesenteroides

Estabilizador de almentos,
sustituto del plasma sanguneo

Sorbosa

G.suboxydans

Manufactura cido ascrbico

Cobalamina

olivaceus; Propioni'
bacterium freuden-

reichii

Tratamiento de la anemia
perniciosa; suplemento
alimenticio

Acido
glutmco

Brevibaterium sg.

Aditivo de alimentos

Estreptoquinasaestreptodornasa

Streptococcus

Disolvente de cogulos
sanguneos

Tabla

S.

hemolyticus

1.6 Algunos productos industriales,

diferentes de los antibiticos,


(Pelczar,
et al, 19771
deriVados de los hongos.

PRODUCTO

MCROORGANISMO

Acido ctrico

Aspergillus niger

A.wentii

usos
Productos alimenticios, citratos medicinales, en sangre
p'ara transfusiones

Acido fumrico

Rhizopus nigricans

Manufactura de resinas alqu


dicas, agentes humectantes

Acido
glucnico

A.niger

Productos farmacuticos, textiles, curtido de cueros, fotograffa

Acido
itacnico

24

A. terreus

Manufactura de resinas alqufasentes nr."".:1";r"

Tabla

1.6

Continuacin

USOS

PRODUCTO

MICROORGANISMO

Pectinasas

A.

1-y-hidroxiprogesterona

R. Arrhizus, Rhizopus

nigricans, olros

Acido
giberlico

Fusarium monoliforme Guarnicin de frutas,


produccin de semillas

Acido lctico

R. orizae

Tabla

1.7

wentii

A. aurcus

Agentes clarificantes en la
industra de jugos de frutas

lntermediario para 17 -yhidroxicorticoesterona

Alimentos y productos
farmacuticos

Productos metablicos de bacterias y hongos tiles como

antbiticos (Pelczar, et al,, 19771

ANTIBIOTICO

DERIVACION

ESPECTRO

MODO DE

PRODUCIDO

MICROBIANA

PRIMARIO

ACCTON

Ampicilina

Penicillium sp

Bacterias gram
positivas y
gramnegativas

lnhibe sfntesis
de la pared
celular

Streptomyces
nodosus

Varias micosis
causadas por
hongos

lnterfiere la
funcin de la

Bacillus

Bacterias

subtilis

grampositivas

lnhibe sntesis
de la pared celular

S. halstedii

Rickettsias,
bacterias
grampositivas

Amfotricina

Bacitracina

Carbomicina
(Magnamicina)

membrana

lnhibe la
sntess de
protefnas
Cqntina

25

Tabla 1.7 (Continuacinl

ANTIBIOTICO

DERVACION

ESPECTRO

MODO DE

PRODUCIDO

MICROBIANA

PRIMARIO

ACCTON

Cefalosporina C

Cephalosporium

Bacterias

lnhibe sntess

sp.

grampositivas

de la pared
celular

Cloramfenicol
(Cloromicetina)

S. venezuelae

Amplio
espectro

lnterfiere
sntesis de
protefnas

Clortetraciclina
(Aureomicna)

s_

Amplio
espectro

lnterfiere
sfntesis de
protenas

Colistn

B. colistinus

Pseudomonas
spp.

Deteriora la

aureofaciens

(Colimicina)

membrana

celular
Cicloheximida
(actidiona)

S. griseus

Hongos,

lnhibe sfntesis

especialmente
micosis de las

o" ,ro.r=tn".
.

plantas,*'Cicloserina

Dimetil

S.orchidaceus,
S. lavendulae

Mycobacterium
tuberculosis

lnhibe sntgsis
de la pared
celular

S. aureofaciens

Amplio
espectro

lnterfiere la
sfntesis de
protenas

tetraciclina

mutant

Eritromicina
(lloticina)

S. erythraeus,

Fumagilina

Aspergillus
fumigatus

(Amebacilina)

Rickettsias,
bacterias
grampositivas
Amebas

,'

lnterfiere la
sfntesis de
protenas

lnterfiere la
sntesis de
protenas
Contina

26

Tabla 1.7 (Continuacin)

ANTIBIOTICO

DERIVACON

ESPECTRO

MODO DE

PRODUCIDO

MICHOBIANA

PRIMARIO

ACCrOr

Griseofulvina

Streptomyces
griseus

Hongos
patgenos

lnterfiere la
sfntesis de la
pared celular
del hongo y del
cido nucleico

Kanamicina

J.
kanomyceticus

Myco-

lnduce slntesis
de protenas
anormales

bacterium
tuberculosis

Bacterias

Lincomicina

grampositvas
Meticilina

lnhibe slntesis
de protenas

Estafilococos'

lnhibe sntess
de la.pared
celular

Bacterias gram
positivas y
gramnegativas; M. tuberculosis

lnduce sntesis
de protenas
anormales

Bacterias

lnhibe
polimerizacin

Neomicina

S. fradiae

Novobiocina
(Catomicina)

S. griseus;
S. niveus
S.,spheroides

grampositivas

S. noursei

Candida

Daa la

intestinal;
hongos

membrana
celular

Rickettsias;
bacterias
grampositivas

lnhibe
sntesis de
protenas

Nistatina

Oleandomicina

s.
Antibioticus

del

ADN

Contina
27

Tabla 1.7 (Continuacin)

t
ANTIBIOT]CO,

DERIVACION

ESPECT8O

MoDooE

PRODUCIDO

MICROBIANA

PRIMARIO

ACCTON

Oxitetrocielina

S. rimosus

Amplio
espectro

(terramicinal'

Penicllina G

Polimixina B.

Estreptomoia,
'

Vancornicina

BacteriaS"'
grampositivas

lnhibe sntess
de la pared
celular

B. polymixa

Bacterias'"

gramnegativas

Deteiioi la
pared celular

Bacterias gram

lnduce i'

positivas y

protefnas

gramnegatvasi M.
tuberclo:si

anormales

S,

griseus

i'

S. aureofaciens

S. oEntalis

Amplio
espectro

Bactdrias

grampostvas

Neisseria,
tetani('

Cl.

Viomicina

28

lnterfiere la
sntesis de
protenas

chrysogemtm

P.

-{.1

Tetraciclina

,'

S. floridae

lnterfiere la
sntesis de
protenas

lnhibe "
sntesis de
la pared
celular

M.

lnterfiere la

tuberculosis

slntesis de
protefnas

1.4 CONSIDERACONES

GENERALES SOBRE EL DISEO


PRELIMINAR DE UN BIOPROCESO

Generalmente

un proceso bioqumico se puede descomponer en

etapas:

Breparaci d materias primas; sterlizacin del e@po, del medio de fermentaiOn y dei aire; biosntesis; sfraracirt y'Puificacih O" los pioducios di la
fermentaCin; tratamiento de agua para consumo; tratamento de aguas
residuales, y tratamiento de los residuos slidos y del aire efluente de la planta.

Los balances de materiales y de energa facilitan, en el caso de productos con


rutas bioqufmicas conocidas o estudiadas, la evaluacin de los rendimientos de
sustrato en clulas, y de sustrato en producto, los requerimientos de oxgeno,
y la formulacin de los medios de crecimiento y produccin, con el propsito de
satisfacer las necesidades de formacin de biomasa y de productos'
Las velocidades de consumo de ustrato y formacin.de producto dependen del
microorganismo especffi'co'y de ls condiciones d crecimiento. Estas velocidd es geneialment son eva luada,s *Iyartir de datos experiinenta' o-tecliante' l a
analoga con procesos sirhitre3.
El rendimiento de sustrato en producto es afectado por el carcter lbil de las

biomolculas susceptbles de degradarse en la etapa de separacin y purificacin, La baja concentracin de producto en el efluente del reactor y la naturaleza

concentracin de los contaminantes influyen desfavorablemente en

el

rendimiento del proceso.


Una vez producida la ruptura de las clulas, si el proceso es intracelular, el
producto aparece mezclado con otras biomolculas con propiedades muy
similares a las del producto final, lo cual dificulta su recuperacin.
La pureza inicial del producto depende de su localizacin intra o extracelular.Los
altos requerimientos de pureza, en el casO de algunos productos farmacuticos,
pOr ejemplo, se traducen en un creciente nmero de etapas

y por consiguiente,

en un menor rendimiento del proceso.

29

1.4.1

El biocatalizador

Los recientes avances en gentica

bioqufmica facilitan

la utilizacin de

enzimas, cluls y tejidos animales y vegetales para la produccin de molculas


biolgicamente activas. Uno de los aspectos fundamentales en el diseo de un
bioproceso es el desarrollo de cepas de produccin, Una cepa hiperproductora

crece usualmente a menor velocidad que una silvestre y generalmente es


eliminada en el ambiente natural altamente competitivo. Adems la clula esta
sometida a estrctos controles de tipo inhibitorio y represivo con el propsito de
prevenir la sobreproduccin de metabolitos y conservar los recursos para
funciones ms qsenciales tales como la reproduccin, El desarrollo de nuevas
cepas requiere la comprensin de los sistemas de control celular y el empleo de
algunas herramientas de la biologa molecular tales como genes mutadores,
transposones y mutagnesis en sitios especlficos.
Generalmente el biocatalizador seleccionado es una enzima cuando la conversin

de las materas primas en productos tiles slo requiere una o dos reacciones
simples. Se prefieren enzimas solubles, si no son costosas o no es necesaria su
remocin del producto final, como en el caso de la hidrlisis del almidn con o
amilasa y glucoamilasa. En el caso contrario se prefiere la utilizacin de enzimas
inmovilizadas,
La poblacin celular se mantiene en estado de crecimiento cuando el producto
deseado es biomasa, como en el caso de produccin de levadura de panadera
o de protelna unicelular, o cuaQdo el producto es extracelular o cuando la forma-

cin de producto est asociada al crecimiento. Si hay necesidad de limitar la


cantidad de materia prima, para facilitar la recuperacin de producto, conviene
utilizar una poblacin celular en crecimiento estable o en crecimiento detendo.
En este caso las clulas pueden inmovilizarse sobre soportes adecuados,
Generalmente, si la formacin de producto puede ser independizada completa
o parcialmente del crecimiento, como en el caso de los cultivos con poblaciones
bacteriales mezcladas en las plantas de tratamiento de agua, o.en la produccin
de etanol a pArtr de levaduras, se utiliza un reactor donde la poblacin celular
pueda mantenerse en un estado de crecimiento detenido con el propsito de
disminuir el requerimiento de materias primas, facilitar la recuperacin de
producto y lograr mayores productividades.

30

1.4.2 Cultivos de clulas y teidos

Las clulas inmOvilizadas de tejidos animales y vegetales pueden cultivarse y


aumentar en nmero y tamao fuera del cuerpo donante. Feder y Tolbert,
1 983, presentan algunas de las principales diferencias entre los cultivos de
tejidos y los cultivos de microorganismos:

- Las clulas de tejldos animales y vegetales son de mayor tamao que las
clulas de bacterias y hongos.
El metabolismo de las clulas animales y vegetales es ms complejo y lento
que el de las clulas microbiales, lo cual se traduce en una menor productividad

y en perodos ms prolongados de esterilizacin.


- Las clulas de tejidos de plantas y animales son ms sensibles a los esfuerzos
cortantes (agitacin) que las clulas microbiales. Las clulas animales estn envueltas en una delicada membrana plasmtica. Generalmente estas clulas slo
crecen adheridas a una superficie.

Las clulas de tejidos animales y vegetales forman parte de un tejido


organizado y no pueden considerarse como un organismo celular individual''

- Las clulas animales no metabolizan nitrgeno inorgnico y sus requerimientos


nutricionales son ms exigentes que los de los microorganismos' El medio de

cultivo requiere aminocidos, vitaminas, hormonas, factores de crecirniento,


sales minerales y glucosa. Uno de los medios ms utilizados es el suero de
Sangre, pero eS costoso y puede Ser fuente de Contaminacin con virus y
micoplasma. La naturaleza qumica del suero vara de uno a otro lote y la
presencia de tantas protefnas diferentes en este medio complica los procesos de

separacin y purificacin del producto'

Los cultivos de tejidos de mamferos son utilizados para la produccin de


Sustancias bioqumicas tales como la hormona de crecimiento, interfern,
vacunas antivirales y antcuerpos monoclonales. Algunas de estas sustancias
inicialmente eran extrafdas de animales vivos y de cadveres'

31

- .?

Cuando una sustancia extraa entra al cuerpo de un anirnal vertebrado, sus


linfocitos segregan protenas denominadas inmunoglobulinas o anticuerpos con
la propiedad de reconocer algunos sitios de la sustancia extraa, los antgenos.
El anticuerpo se liga al antgeno para neutralizar y eliminar la sustancia extraa.
Los anticuerpos constituyen una herramienta poderosa en la identificacin y
deteccin de drogas, Broductos bacteriales y virales, hormonas y otros
anticuerpos en muestras de sangre,
Los cultivos,de tejidos vegetales constituyen una fuente valiosa de metabolitos
secundarios. Estas sustancias facilitan la interaccin de la planta con el medio
ambiente y le permiten defenderse de 'microorganismos y predadores. Mientras
los metabolitos secundarios son producidos en trazas, los metabolitos primarios
tales como carbohidratos, aceites vegetales, protenas y cidos grasos son

producidos en grandes volmenes.

Algunos metabolitos secundarios de inters comercial, obtenidos a partr de


tejidos vegetales (Shuler, 1981, Sahai y Knuth, 1985) son;

- Colorantes : azafrn, antocianinas, betacianinas.


- Edulcorantes: miraculina, monelina, taumattna.
- Aceites esenciales: jazmn,limn, menta, naranja, ajo.
=

Sabores: albaricoque, banano, cacao, durazno, frambuesa, fresa, manzana,


pia, vainilla, uva, ceteza, esprrago, apto.

- Especias: cardamomo, canela, romero, safvia.

- Alcaloides: ajmalacina, atropina, codena, Or,nina, morfina, escopolamina,


serpenttna.

- Esteroides: digitoxina, digoxina, diosgenrna.


- Otros: shikonina, saponina, ubiquinona.

'

Sustancias qumicas para la agricultura: pretrinas, rotenona, sustancia


qumicas alopticas.

32

1.4.3

El biorreactor

Los principios de la lngeniera Oumica consttuyen el fundamento del anlisis,


dseO y operacin de los biorreactores. Sin embargo, deben tenerse presentes
las siguientes restrcciones:

El caldo del fermentador es una mezcla relativamente compleja, durante'el


proceso son sintetizados los catalizadores y generalmente hay un incremento de
la biomasa microbial.

- La densidad aparente de las clulas y la del sustrato es usualmente slmilar a


la del medio. El tamao de las clulas es muy pequeo comparado con los
catatizadores qumicos. En condicones normales las velocidades de flujo entre
las fases continua y dispersa son relativamente peqeas y difcilmente se
logran condiciones de transferencia en flujo turbulento.
- Los sustratos, polimricos en algunos casos, los metabolitos y el crecimiento
micelial de muchos microorganismos producen una mezcla viscosa de carcter
no newtoniano que restringe apreciablemente la dinmica de fluio en el reactor.
El crecimiento micelial de algunos microorganismos origina la formacin de
agregados celulares que dificultan la transfrencia de masa y conducen al agota-

miento parcial de nutrientes y a la intoxicacin por producto,

- Los biorreactores operan bajo condiciones moderadas de temperatura,

pH,

intensidad ionica y presin, pero estas condiciones deben controlarse cuidadosamente para prevenir daos en las clulas vivas y dems componentes lbiles
esencales para el Proceso.

- La concentracin de sustratos y productos es sustancialmente baja.


consiguiente, se requieren grandes volmenes

Por
prolongados perodos de

retencin.
- La necesidad de mantener un solo tipo de microorganismo y eliminar todos los
microorganismos indeseables impone restricciones adicionales al diseo del
reactor.

33

Una de las etapas en el diseo de un biorreactor es la seleccin de las


especificaciones del sistema: sistema viable o un sistema enzimtico no vivo;
sistema aerbico o anaerbico; condiciones aspticas o no aspticas; cultivos
simptes o mezclados; clulas simples o agregados multicelulares; medios simples

o multisustrato.

Otra etapa es la seleccin del modo de operacin: clulas suspendidas

,o

inmovilizadas; enzimas disueltas o inmovilizadas; sustratos_solubles o insolubles;


sustratos monomricos o polimricos; operacin continua o por lotes; procesamiento en tanque agitado o en flujo tapn; sistema sencillo o de multietapa;
operacin en corriente sencilla o con recirculacin.
Uno de los reactores ms ampliamente utilizados en la industria bioqumica es

el reactor de mezcla completa (SIR) operado en forma continua (CSIR)

discontinua ldCSTRl. Tambin son muy utilizados los reactores de lecho fijo en
diferentes configuraciones tales como lecho empacado, el reactor con lecho
formado por placas o lminas y el disco rotatorio.
Los reactores impulsados por aire " airlift" utilizan aire para satisfacer la demanda

bioqumica de oxfgeno DBO,la demanda qumica de oxlgeno DOO, impulsar el


contenido del reactor y satisfacer las necesidades de aeracin y agitacin en los
cultivos aerbicos,

Los reactores de lecho fijo y los de flujo tapn (PFB) son apropiados para
aquellas reacciones inhibidas por la formacin de producto. Los reactores
agitados mantienen una concentracin uniforme de sustrato y son apropiados
para aquellas reacciones inhibidas por sustrato.
Los reactores pueden ser operados en for'ma contnua o por lotes y como lechos
fijos, lechos fluidizados y tanques agitados. Los reactores operados en rnodo
continuo conducen a una mayor productividad y a una utilzacin ms eficiente

de sustrato para la produccin de biomasa, pero menos eficiente para la


obtencin de productos, cuandO se confrontan con los reactores operados por
lotes.

Generalmente las plantas continuas funcionan ptimamente cuando Son


diseadas para un slo producto. Las plantas multipropsito en la industria
bioqumica son operadas por lotes. En algunos casos se utlza una operacin
semicontinua por lotes alimentados lfedbatchl.

34

Algunos procesos requieren la recirculacin del contenido del reactor. Las


clulas son separadas del caldo mediante centrifugacin, sedimentacin y
filtracin y luego devueltas al reactor para mantener una elevada concentracin
celular.

Los reactores enzimticos cqn enzimas inmovilizadas son operados de manera

similar a los reactores qumicos catalticos heterogneos. En este caso es


necesario determinar la vida media de la enzima y su desactivacin en funcin
del tiempo y los efectos de la transferencia de masa y de calor comg consecuencia de su inmovilizacin. La productividad de un biorreactor depende deltpo de
operacin del reactor y de las velocidades de crecimiento de biomasa y de

formacin de producto.

1.4.4

Esterilizacin

1.4.4.1

Esterlzacin de equipo

Generalmente el equipo se esteriliza con vapor de agua a presin. Cuando las


limitaciones de temperatura impiden la utilizacin de este mtodo se emplean
agntes qumicos lquidos y gaseosos de acuerdo con las circunstancias. La luz
ultravioleta, las radiaciones ionizantes y las vibraciones ultrasnicas encuentran
aplicacin como agentes auxiliares potenciadores de otros procesos esterilizantes. Una combinacin de diferentes mtodos tal como vapor de agua, agentes
qumicos y radiacin, es eficiente. En algunos casos una esterilizacin por
etapas, donde se utilizan diferentes agentes esterilzantes en cada lote, puede

ser ms eficaz que'cuando se emplan los mismos agentes. En cada caso


especlfico deben onsiderarse la naturaleza del equipo, los requerimientos de la
esterilizacin y la economa del proceso. El agente o la condicin esterilizante
debe actuar eficientemente durante el proceso de esterilizacin pero una vez
finalizado este proceso no debe presentarse una accin residual. En el caso de
una fermentacin industrial una posible accin residual puede ser tanto o ms
perjudicial para el proceso que la presencia de ciertos contaminantes.

35

1.4.4.2

Esterilizacin de medios

El objetivo de la esterilizacin de un medio es la remocin o eliminacin de toda


forma de vida animal o vegetal, macroscpica o microscpica, saprfita o no,
existente en el medio. El grado de esterilizacin de un medio depende del
proceso, Algunas aplicaciones como la fermentacin lctica de hortalizas o el
tratamientd biolgico de residuos no requieren esterilizacin. En otros procesos
las condiciones del medio favorecen la actividad del microorganismo deseado y
afectan la'actividad de los contaminantes. Este es el caso de la fermentacin
alcohlica donde las condiciones normales de asepsia permiten eldesarrollo del
proceso sin una reduccin apreciable del rendimiento, En el caso de la
produccin de levadura para panificacin, gracias al bajo pH requerido, basta
una simple ebullicin de la melaza y su posterior dilucin con agua de buena
calidad para una fermentacin normal.

Por el contrario, hay procesos muy exigentes como los de produccin de


antibiticos, enzimas, vitaminas, acetona y butanol. La penicilina, por ejemplo,
puede ser parcial o completamente destruida por la accin de la enzima penicilinasa producida por microorganismos contaminantes. Otro ejemplo es la
fermentacin de la melaza con Clostridium acetobutilicum para la produccin de
solventes: etanol, butanol, acetona, y gases: CO, y Hr. En este caso el microorganismo adems de ser un anaerobio estricto es muy sensible a la accin de
los bacterifagos.
La esterilizacin de medios a nivel industrial se realiza preferiblemente mediante

calentamiento con vapor de agua en los propios reactores o por separado.

En

el primer caso se esteriliza el equipo mediarite un proceso discontinuo de


esterilizacin, y tambin el medio, con el propsito de evitar los riesgos de
contaminacin durante la transferencia del medio hacia el reactor. En la
esterilizacin discontinua la temperatura del vapor de agua, del orden de 121 oC
a 1 atmsfera de sobrepresin, garantiza la destruccin de las esporas. Sin
embargo, el calentamiento del medio a elevadas temperaturas por perodos
prolongados favorece la descomposicin de los nutrientes. El proceso continuo
de esterilizacin se realiza a mayores temperaturas, tlpicarnente entre 1 30 y 165
oC. El menor tiempo de esterilizacin se traduce en una menqr descomposicin
de nutrientes, una rnayor productividad del proceso, y un menor requerimiento
de agua de refrigeracin.

36

La esterilizacin continua se puede realizar mediante inyeccin directa de vapor

de agua a una presin entre 6,8 y 8 atmsferas, o mediante intercambiadores


de placas o de tubos. En el primer caso debe preverse la dilucin del medio,
entre 10 y 15 o/o, por la condensacin del vapor inyectado. El enfriamiento del
medio esterilizado se logra en forma indirecta mediante camisas, serpentines o
intercambiadores de calor.

1.4.4.3 Esterilizacin de aire

El punto de partida de la produccin de antbticos, vitaminas y enzimas y


muchos otros procesos de importancia industrial es una fermentacin aerbica
donde se requiere un suministro continuo de aire libre de contaminantes que
varia tlpicamente entre 0.5 y 1 volumen de aire por volumen de licor cada
minuto. Todos los mtodos de esterilizacin de medios pueden ser empleados
con aire. Sin embargo, la esterilizacin de aire mediante calor no slo es
imprctica sino ineficiente debido a los bajos valores de la capacidad calorffica
y de la conductividad trmca del aire. Uno de los mtodos ms eficientes es
la esterilizacin de aire con filtros fibrosos y filtros membrana.
Se han ensayado diferentes tapos de materiales fittrantes tales como algodn,
carbn, lana de vidrio, papel, nylon, tefln, polialcohol de vinilo, steres de celulosa, vidrio sinterizado, bronce sinterizado y materiales cermicos. Actualmente
los filtros ms empleados son los de polialcohol de vinilo, formados por placas
de I cm de espesor, de altura y dimetro variable desde 5 hasta 1 1O cm; los

filtros de placas de acetato de celulosa; los filtros de vela o cartucho de


cermica porosa y vidrio sinterizado; los filtros de membranas porosas de
steres de celulosa, y los filtros de microfibras cillndricas de borosilicato
envueltas en malias de polipropileno, En la prctica, el dimensionamiento de un
filtro para un determinado caudal de aire, incluye la evaluacin del espesor y
rea transversal del lecho, y la prdida de presin del aire. Esta prdida se relaciona con el consumo de la energa elctrica requerida para comprimir el aire. En
el caso de filtros empacados con lana de vidrio siempre existe la posibilidad de
utilizar diferentes dimetros de fbra, menor dimetro de fibra significa menor
espesor del lecho. Por otra parte un aumento del grado de compactacin de las
fibras disminuye el espesor del lecho pero aumenta la prdida de presin.

37

La vida media de un lecho depende de las condiciones de operacin del filtro.


Cada cuatro meses, aproximadamente, debe ejecutarse el cambio de lecho, Este
costo adicional debe tenerse presente si se considera que el objetivo final del
diseo el lograr el mejor filtro al menor precto.

1.4.5

Separacin y purfcacn de productos de la ingeniera


bioqumica

La aplicacin comercialde los productos de la lngeniera Bioqulmica requiere u


cuidadosa purificacin qon el propsito de eliminar la actividad indeseable de

otras sustancias contaminantes. Generalmente las reacciones catalizadas por


clulas y enzimas ocurren en una solucin acuosa diluida, el producto se
encuentra en muy baja concentracin, en muchos casos de slo partes por
milln, y su separacin requiere la remocin de grandes cantdades de agua,
Usualmente la corriente afluente a la etapa de bioqeparacin es la corriente
efluente del biorreactor constituida por una mezcla diluida y compleia de dos o
ms fases formada por clulas, un lquido acuoso, nutrientes y productos del
metabolismo celular.
Los requerimientos de pureza del producto y la naturaleza de las materias primas

empleadas constituye la prncipal diferencia entre una bioseparacin y una


separacin"en la lngeniera Oumica tradicional. El gradq deseable de pureza de
los productos bioqumicos significa su separasin de otros contaminantes de
estructura qumica similar. , En algunos casos la obtencin de una protena
particular significa su separacin de una mezcla compuesta por las centenares

de protenas normalmente producidas por la clula, La dificultad aumenta


cuando hay necesidad de distinguir entre.estereoismeros para obtener una
preparacin pticamente pur.aLa ausencia de modelos predictivos para la mayora de las operaciones unitarias
y el gran nmero de alternativas disponibles, dificulta la seleccin de un modelo
apropiado para la separacin y purificacin de productos. La seleccin del

diagrama de flujo de las etapas de separacin


generalmente en los.siguientes enfoques:

38

y purificacin

se fundamenta

- Remover primero el contaminante ms abundante.


- Separar primero el contaminante ms fcil de remover.
- Dejar para el final del proceso las.operaciones ms diffciles y costosas.,
- Seleccionar, el proceso basado en las mayores diferencias entre las propiedades

del producto y las de sus contaminantes,

El producto deseado puede ser intracelular o extracelular, usualmente los


productos extracelulares son de bajo peso molecular (1 00 - 700 : aminocidos,
antibticos, esteroides), o de alto peso molecular (1000 - 100000: pptidos
y enzimas), y estn acompaados de una menor cantidad de contam[nantes.

1.4.5.1 Productos ntracelulares

Generalmente la mayora de las protelnas producidas por bacterias manipuladas


genticarnente no son excretadas al licor sino que precipitan dentro de la clula.
Los lfpidos y algunos antibtcos tambin peden ser productoS intracelulares.

-4.5.1 .1 Separacin de clulas

El criterio empleado con mayor frecuencia para la recuperacin de clulas es la

remocin inicial del componente ms abundante. La centrifugacin s una


operacin unitaria eficiente en la separacin de partculas de tamao mayor que
5 /m y densidad ligeramente mayor que la del agua. En el caso de partfculas
ms pequeas pueden usarse tcncas de coagulacin y flocul'dOn. Las prdida
de clulas durante Ia centrifugacin varfa entre 1 y 5'o/o. La filtracin recupera
todas las clu'las, excepto cuando hay ruptura o lisis. Generalmente las clulas
son separadas mediante centrfugas de disco, microfiltros y ultrafiltros.

39

1.4.5.1.2 Ruptura de clulas

Las protenas intracelulares pueden estar presentes en forma natural

desnaturalizadas. Los productos desnaturalzados generalmente son insolubles.


Algunos productos intracelulares estn localizados en el espacio periplsmico

entre la membrana

y la pared celular. La ruptura de las clulas se logra

mediante homogenizadores de alta presin (500


de bolas, o choque osmtico.

1000 atmsferas), molinos

Despus de romper las clulas y liberar el producto se requiere la remocin de

los restos celulares mediante una o varias de las siguientes operaciones unitarias: centrfugacin, microfiltracin, ultrafiltracin, destilacin y filtracin (filtro
rotatorio, filtro prensa). Si el producto es soluble se recupera del efluente de la
centrfuga o delfiltrado. Si el producto es insoluble generalmente hay necesidad
de resuspender y centrifugar repetidamente la fase pesada. Cuando no es
Suficiente el lavado con agua se emplean detergentes en Solucin para remover
simultneamente otros contaminantes.

1.4.5.2 Productos extracelulares

Uno de los criterios empleados con mayor frecuencia para la recuperacin de


productos extracelulares es la remocin inicial de contamnante ms fcil de
separar. Los productos extracelulares usualmente son separados mediante

centrffuga de discos, filtro rotatorio al vaco, microfiltracin, ultrafiltracin y


flotacin.
En algunos casos la separacin del oroducto eh un filtro rotatorio requiere la
utilizacin de ayudas filtrantes y la formacin de una precapa. En algunos casos
la cantidad de ayuda filtrante es igual o mayor que la cantidad de producto
recuperado. El principal inconveniente del filtro rotatorio es la separacin o la
disposicin final de la mezcla de precapa y producto. La centrfuga produce
usualmente una pasta formada por 57 - 70 o/o en volumen de slidos y el resto
lquido. El producto se recupera mediante sucesivos lavados y centrifugaciones.
.40

1.4.5.3 Purificacin final del ptoducto

Las etapas de purificacin depbnden del grado de pureza requerido. Generalmente los productos'farmacuticos requieren alta pureza. En otros casos la
purificacin final se lmita a un secado o a una remo6in de solventes'

Los procesos.y operacioneS unitarias empleados usualmente en lngeniera


Bioqurica en la purificacin de productos son: filtracin, microfiltracin, ultrafiltracin, smosis inversa, evaporacin, destilacin, deshidratacin, extraccin,
inteicambio inico, adsorCin, Separaciones cromatogrficas, esterilizacin y
estabilzacin del producto.

1.4.5.3.1 Filtracin de clulas

a travs de membranas

Las membranas consttuyen una alternativa a la separacin de clulas mediante


centrifugacin. Entre los tipos de clulas separados usualmente por membranas
estn los virus, hongos, levaduras y clulas de tejidos animales. El flujo de una

suspensin a travs de una membrana puede ser perpendicular o tangencial a


la superficie filtrante. La filtracin con propsitos de esterilizacin se realiza
generalmente mediante flujo perpendicular y las partculas de mayor tamao
quedan retenidas sobre la superficie del filtro'

En la filtracin en flujo tangencial el fluido se desplaza parallamente a la


superficie filtrante. Las partculas de tamao mayor que el dimetro de poro al
ser arrastradas por el fluido limpian la superficie del filtro, En la remocin de
ctulas se logran caudales entre'1O0 y 1'000 veces mayores en flujo tangencial
que en flujo perpendicular. La filtracin a travs de membrana es un sistema
hermtico ritil para ptevenir la formacin de aerosoles en el sitio de la operacin,
aspecto muy importante cuando se manejan microorganismos patgenos O
recombinantes,

41

1.4.5.3.2 Extraccn lquido-lquido de antibiticos

Una etapa importante en la produccin de antibiticos es la recuperacin del


producto presnte en el caldo de fermentacin. La extraccin lquido-lquido es
un mtodo efectivo y econmicp para la recuperacin y concentracin de un
nmero importante de antibiticos.
Estas separpciones son realizadas en unidades dg contacto centrfugo como el
extractor de Podbielniak diseado para manejar en condiciones de hermeticidad
sistemas altamente ernulsificados y lquidos con pequeas diferencias de densidad. Los cortos tiempos de residenca caractersticos de estos equipos,
previenen el riesgo de degradacin del producto por accin del calor, por
hidrlisis, o por reacciones enzimticas indeseables durante la operacin de
extraccin.

1.4.5.3.3 Recuperacin de antbticos y protenas medante


ntercambio inico

La secuencia de operaciones para tra recuperacin de antibiticos y protenas


mediante intercambio inico en lechos fijos o en lechos fluidizados es similar a
la empleada en la industria qufmica: Despus de cargar el intercambiador y
realiza el contacto con el caldo de fermentacin se remueve et caldo residual

mediante lavado, A continuacin, una o varias etapas de contacto con el


solvente apropiado remueven el antibitico, El solvente residual se remueve
media.nte lavado. Finalmente se regenera el intercambiador para emplearlo en,un
nuevo ciclo despus de un nuevo lavado para remover el medio regenerante. Los
intercambiadores ionicos utlzados normalmente en la remocin.de antibiticos
y protenas son macromolculas hidroflicas basadas sobre celulosa natural
regenerada o modificada tales como carboximetil, dietilaminoetil, sulfopropil y
derivados cuaternarios.

42

1.5

APTICACION DE LOS LENGUAJES DE SIMUTACION EN


INGENIER!A

La aplicacin de los lenguajes de simulacin digital constituye uno de los


aspectos m imilortantes de la moderna ducacin en ingeniera. El estudiante
plantea las ecuaciones de balance de materiales, balance de energfa, cintca y
fenmenos de transporte, que a su juicio, representan mejor el comportamiento
de un proceso, El lenguaje de simulacin provee medios simples y directos para
resolver los conjuntos de ecuaciones simultneas que conforman el modelo
bsico.

Aunque los resultados de una simulacin constituyen probablemente slo una


primera aproximacin del comportamiento del sistema real, estos resultados
confrontados con los datos experimentales, aumentan el grado de comprensin
del sistema real y ayudan a mejorar el modelo. Adems la disciplina lograda
mediante el anlisis de un comportamiento complejo, de acuerdo Con Ia teora
disponible, expresada en forma de ecuaciones matemticas, constituye una
herramienta poderosa para entender las interacciones entre causa y efecto en
un sistema real. El xito de esta metodologa se basa en la posibilidad de
obtener una solucin numrica inmediata, los detalles del procedimiento
numrico son manejados por el computador, mientras el usuario concentra su
atencin en los aspectos relevantes del problema real de ingeniera'

1.5.1

Etapas en el planteamento y Ia solucin de un modelo

El procedimiento de formulacin

simulacin de un modelo comprende

usualmente las siguientes otpas:


- Definir los lmites de la regin de

control. Estos lmites pueden ser las paredes

del recipiente o una superficie de separacin entre fases.


- Examinar diferentes modelos fsicos y especificar los objetivos del proceso de
simulacin con el propsito de plantear el problema.

43

Expresar:

la tegra disponible mediante relaciones matemtcas tales como

ecuaciones diferenciales simultneas y ecuaciones algebraicas.


Estas ecuaciones son generalmente ecuaciones de balance para cada una de las
propiedades extensivas del sistema tales como masa, energa, o elementos
qumicos; ecuaciones de velocidad de transferencia de masa, de energa y de
flujo de componentes individuales a travs de los lmites de la regin de control;
ecuaciones d.e generacin o de consumo de especies individuales dentro de la
regin de control; y ecuaciones que relacionan las propiedades termodinmicas
tales como presin, temperatura, densidad y concentracin ya sea dentro de la
regin de control, ,como en el caso de las leyes de los gases, o a uno u otro lado
de un llmite entre fases, como en el caso de la ley de Henry.

- Especificar el conjgnto de variables del modelo. Estas variables corresponden


a las del problema pero estn restringdas de manera que slo pueden cambiar
de acuerdo con las ecuaciones del modelo.

- Verificar la validez de los datos producidos por el computador, en forma de


tablas o de grficas, con los valores tericos o experimentales expresados, La
validez de la solucin obtenida depende de la conformidad del modelo con el
sistema real.

La solucin de ecuaciones por simulacin digital se realiza medante

una

secuencia de operaciones lgicas y aritmtcas sobre lps variables del proceso.


La solucin de ecuaciones diferenciales se asocia con mtodos numricos de
integracin y rutinas tales como las de Runge-Kutta-Merson, Gill y Gear, etc.
El usuario del lenguaje de simulacin, de acuerdo con la dificultad del problema,
selecciona la rutina adecuada.
Durante el proceso de integracin son evaluadas simultneamente las velocidades diferenciales de cambio de todas las variables del modelo, con el propsito
de obtener nuevos valores de las variables mediante pequeos incrementos en
el tiempo o en la longitud de la etapa de integiacin. Generalmente las fallas del
procedimiento de integracin estn relacionadas con el tamao de esta etapa,
ajustable de acuerdo con algn criterio de error.

44

1.5.2

Lenguajes de simulacin continua

La mayora de los lenguajes de simulacin digital estn constituidos por los


nombres de las variables y conjuntos de operadores FORTRAN, BASIC,
qASCAL. Estos lenguajes de simulacin continua IACSLI proven al programador de la potencialidad del lenguaje estandarizado de alto nivel, junto con las
caractersticas de cada lenguaje partcular.

El lenguaje /S/M, (lSlM, 1983. Simulation Sciences, 36 Ladybridge, Ave'


Worsley, Manchester M28 5 BP. Salford University Business Serv Ltd.
lnglaterra), utilizado en algunos ejemplos de simulacin en este texto, es un
lenguaje similar al FORTRAIy', con la estiuctura bsica de un lenguaje ACSL
caracterizado por tres regiones: lNlTlAL, DYNAMIC V TERMINAI, adems de
una regin opcionalde control. En la regin lNlTlAL se anotan los valores de las
constantes y se efectan los clculos previos a cada ejecucin del programa,
Las ecuaciones del modelo se escriben en la regin DYNAMIC, y en la regin
TERMTNAL se desarrollan los clculos y se obtienen resultados en forma grfica

mediante el comando GRAPH, o tabular, mediante el comando ouTPUT.

El programa tSlM resuelve ecuaciones diferenciales por diferentes mtodos


seleccionables con el comando ALGO. As, ALGO : 0: corresponde al mtodo
de Runge-Kutta de 5o orden de intervalo variable; ALGO : 1: Runge-Kutta de
40 orden de intervalo fiio; ALGO : 2: Runge-Kutta de 20 orden, intervalo fiio;
ALGO : 3: Runge-Kutta de 2o orden implcito.
En la solucin de algunos de los ejemplos desarrollados en este libro se utilizan
simuftneamente los programas lSlM V GWBASIC con el propsito de confrontar
estas dos herramientas de calculo, facilitar el estudio del comportamiento de

algunos de los modblos ms importantes en lngeniera Bioqumica y motvar al


lector hacia el desarrollo de nuevos pfosFamas' La discusin de algunos temas
como la evaluacin de parmetros cinticos a partir de datos experimentales, en
el Capftulo 5, perderfa su enfoque prctico sin la ayuda de programas como el
tStM, GWBAS|C y AUATTRO.

45

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51

-t

CAPITULO 2

BALANCE DE MATERIALES

Las consideraciones estequiomtricas constituyen elfundamento del diseo

mdios de-c*ecimienb del @ntrol de

bioproeesos Bor computador,

y de los

requerimientos de.transf_erencia de,cakmy d,e r.R_asa,.{Cooney et a|.,1977}. Un


adecuado conocimiento del metabolsmo conduce a la determinacin de los
compuestos que intervienen en el balance de materiales de un bioproceso. Las
reacciones,,del anabolismo utlzan los materlales producidos en el catabolismo
de la fuente de carbono. Los tomos de los diferentes elementos son reordenados en los procesos metablicos y la cantdad total de cada elemento, incorporada en la clula, es igual a la cantidad removida del ambiente.

En la concentracin de clulas generalmente estn incluidas las grandes


molculas complejas formadas en el anabolismo. La concentracin de biomasa
es el punto de partida para la evaluacin del consumo de sustrato. Todos los
elementos requeridos para la formacin de compuestos tales como ADN (cido
desoxirribonucleico) y ARN (cido ribonucleico), o para la formacin de productos, o de subproductos partculares del metabolismo, deben tenerse en
cuenta n la ecuacin de balance.
52

,<

2.1

BALANCE GENERAL DE MATERALES

l-a ecuacin general de balance para los componentes representados en la Figura

2.1, es:
(velocidad de actmulacin de componente i) = (velocidad de entrada de i al
sstema) - (velocidad de salida de i del sistema) + (velocidad de generacin de
... a2.11
componente il - (velocidad de consumo de componente i)

Figura

2.1

Corrientes utilizadas en los balances de masa y energa de un reactor


microbial.

Blomosq

Fuente de corbono

Pnoducto
cu2

0xigeno

La aplicacin de la Ecuacin [2.1] requiere el conocimiento de todas las


reacciones metabticas que ocurren en la clula. Esta dificultad desaparece si
en el balance se utlizan elementos, con la ventaja de que estos no se pueden
generar ni consumir:

(velocidad de acumulacin del elemento i) = (velocidad de entrada de i a!


..-12.21
sistema) - (velocidad de salida de i de! sistema)
En el caso dL procesos continuos, o de procesos por lotes a una escala de
tempo mayor gue un lote, la ecuacin anteror se convierte en, (Burns, 1989):
(velocidad de entrada de elementos al sistema) =
(velocidad de salida de elementos del

sistema)

-.-12-31

53

-r
2.2

BALANCE DE ETEMENTOS.OUIMICOS

Aunque las clulas contienen muchos elementos, un anliqis elemental


demuestra que el 95o/o del flujo de materia puede explicarse nicamente con
cuatro elemenros: c, N, H y o, {Roels, 1980) . El azufre y el fsforo entran en
el balance de materales de los procesos donde se forman prodqctos consti-

tuidos por cantidades,apreciables de estos elementos.

2.2.1

Velocidades especficas de consumo.de sustrato,


crecmento de biomasa y formacin de producto

'r

Las siguiente ecuacin, vlida para medios mnimos, donde.la fuente de carbono

es utlizada en la produccin de biomasa y energa, reemplaza las ecuaciones


estequiomtricas globales (Ecuaciones 2.1, 2.2 y 2.3]r:

As+AOz=Lr+ACO2+Lp

12.4'l

Donde, s, Or, x, CO2, pi concentracin de sustrato, oxfgeno, clulas, COr, y


t
producto, respectivamente.

t4;7frr-1dx'+1dco2*L@x & x & x x, &


.

t2.s1
..:-

Los diferentes trmnos de la Ecuacin t2.51 son conocidos como velocidddes


especlficas:

1ds
v,=;e

12.61

Donde, r.: velocidad especfica de consumo de sustrato, (moles sustrato).(mol


clulas.h)-1, o en (g sustrato).(g cl.hora)-1. . l

1 doz
..
lro" =
; dt
54

fz.7.l

.r
Donde, plOzi: velocidad especlfica de consumo de oxfgeno, (mol Or).(mol
clulas.hora)-1

1dx
,r=;A
Donde,

t2.81

pr: velocidad especffica de crecimiento de biomasa, hora-l.


llcoz =

1
;

dCOz

t2.91

d,

Donde, U(.COrl: velocidad especlfica de produccin de COr, (mol COr).(mol


clulas.horal-1

1do
pr=i
Donde,

/r:

12.101

velocidad especffica deformacih de prducto, (mol producto).(rnol

clulas. hora)-1.

Cuando las velocidades especfficas, definidas en las ecuaciones anteriores, son


reemplazadas en la Ecuacin [2.5], se obtiene la siguiente expresin para el
balance de materiales;
Fs

2.2.2

.t lo, = l * Vco, +

Fe

12.111

Balances de carbono y oxgeno

El balance de carbono, expresado en trminos de la Ecuacin 12.1 11, es:


ds.F.y =

dx.lrx + uc,fco + cr.lr

12.121

Donde, os, oy, o, opi carbono en el ustrato,'en las clulas, en el CO, y en los

pfoducto, respeclivamente, g c/mot,

55

El balance de oxfgeno, expresado en trmnos de la Ecuacin f2.1 11,. es:

[or=A.Vs -B.Fx -C.ltp

t2.131

Donde,4: oxfgeno requerido para la combustin del sustrato hasta CO, HrO y
NH, si el sustrato contiene nitrgeno. mol O./mol sustrato; 8: oxlgeno requerido
para la combustin de las clulas:,secas hasta CO2, H2O y NH3, mol Orlmol
clulas; C: oxlgeno requerido para la combustn de los productos hasta COr,
H! y NH., si los productos contienen nitrgeno, mol Orlmol producto,
La Ecuacin t2.131 es tilpara conocer un cociente metablico no determinado
xperimentalmente, Por ejemplo, puede calcularse la velocidad de consumo de

sustrato de un microorganismo, si se conocen

Ejemplo

lx

y /(Oz) cuando /p es cero.

2.1 Balance de elementos qumcos

en una fermentacin

anaeroba

En la produccin de etanol mediante cultivo continuo entran al reactor glucosa

y amonlaco en condiciones estriles y salen biomasa y etanol. Las clulas


crecen y se reproducen continuamente para reponer la biomasa retirada.
Determinar los requerimientos mfnimos de amonfaco y glucosa, para producir
7666 litros/dfa de etanol, (densidad: p : 789 kg/m3). Suponer que un mol de
. glucosa se convierte en

0,7 moles de producto y en biomasa, CO, y

Suponer que la frmula de los microorganismos es

agua,

CH1,e4Oo,2eNo,2E.

Solucin:

- La ecuacin de balance de biomasa es:


aC.H,rOu.+

bNHr:

cCH,,roOo,rnNo,r,

dCH3CHTOH

+ eCO2 + f H2O

- La velocidad de flujo molar de etanol es:

da
ms 7gg&- not
T6tuo
dla W s 1000 linos s O,W kg
d

56

= 1,522 mol etanol/s

,,, .

De acuerdo con las condiciones del problema:

: i -

tr

iai

,, _---_t

.,

,52210,7 :'2,174 mol glucosa/s.

0,7 a. Por consiguiente: a

- Ecuaciones de balance de elementos qumcos:

C:
H:
O:
N:

Y-

'

6a: c+zd+e
12a+ 3b:1,94c+6d+2f
6a=O,29c+d +2e+f
b:0,25c
b : 1,839 mol amonfaco/s
c:7,356mo1 clulas/s
e : 2,644 mol COrls

. ''lr

L'

2.3 BALANCE POR EL METODO DE ELECTRONES DISPONIBLES

'/

Los eleegones disponib.les para la transfesencia de oxfgeno en la combustia


de un o@rnpuesto hasta C0r;.1gua y amonlaco, son los ocupantes de los
orbitales'electrnicos externos; los de mayor energfa, en el tomo. Estos
electrones son intercambiados eh las reaeciones qufmicas normales.
En trminos generales, los microorganismbs, en condiciones estables, obtienen

carbono, nitrgeno y energia, del ambiente.'Adems, en el crecimiento aerobio


los microorganismos btienen del ambiente un aceptante electrnico oxidado,
el oxfgeno.

Lq energa requerida para impulsar el proceso de la vida es geneiada por el


aceptante de los electrones, al recibir los electrones provenientes del sustrato,
fuente de carboho y energa, o de la fuente de nitrgeno, para luego retornarlos
al ambiente en una fqrma reducida.

57

Adems, p!99g-g-u,onerse que er nmero totar


de electrones_exter.os se
conserva' por tanto, er nmero de equivarentes
erectrn"o. Lpo^;;,r;; ,;
frmula de un compuesto orgnico es 4 para
C, 1 para H, _ 2 para Oy _ 3 para

//. El nmero de erectrones disponibres es una medida der


contenido de energfa
de un compuesto,

2'3'1

Grado de reduccin de un compuesto orgnico

El grado de reduccin de un

compu
ae#fjtrefumO el nmero de
equivalentes de#trones disponibles
por consgu,"^i", .,
dB#
,"
frmula elementar de un compuesto es : c"HnooNn,,,entonces
,

Nu
El

gradodo,r.e&rccisry

er nmero de

Nro, es:

f,

4.c + ht2-o - 3.n

12.141

de este compuesto hipottco es:

))"

2.3.2 Balance de electrones

12.151

disponibles

El balance de electrones disponibles de un proceso


aerobio sn formacin de
prciductos no celulares tal como el proceso
aerobio de obtencin de levadura de
panaderla a.partir de glucoSa,.se expresa
como:

0.I5 * 0o.Io Donde, Q5, o6,

*-I, J

t2.16I

<0,: verocidad de flujo de sustrato,


oxgeno y cruras, respectiva,
mente,.mol s-l; l-s, l-q, l-r: grado de,reduccin del
sLstrat, orfgeno y clulas,
respectivamente, {mol electrn disponible).(mol).r.

58

r
El CO2 obtenido a partir del sustrato en el crecimiento anaerobio, sin la presencia
aparente de un aceptante de los electrones, eS por lo menos formalmente, el

aceptante de lpS electrones. ESte CO, es luego transfofmado en productos con


mayor grado de reduccin. Un ejemplo tlpico es el proceso de formacin
anaerobia de etanol, a partr de glucosa, mediante una levadura. En este caso
el balanc de electrones disponibles se expresa como:

Qs.Is =

0.I* * XQr,'L, I

f2.171

Donde, Oo,: velocidad de flujo de producto i; mol.s-l; l-0,: grado de reduccin del
i-simo producto, en (mol electrn disponibfe).(mol producto il1.
Los eiectrones nO conservados en la biomar. ,on transferidOs al aceptante de
electrones:

0 = Os-Is

- 0*.I*

12'181

Donde, <p.r: electrones transferidos entre el sustrato


electrones, mol electrones s-r.

2-3.3

y el aceptante de los

Ecuacin de crecimiento

En el crgcimiento de una clula intervienen numerosas reacciones qumicas cuya


suma es la ecuacin de crecimiento. Esta'ecuacn incluye la frmula de la

, clula, las sustancias nutritvas particu-lares, los sustratos utlizados como fuente
de carbono o de energa, y los pro.ductos del metabolismo:

CHr"O',!{o, + o 02 1
Y' 4rC II t p o,N n,

a NII1

* t Y' on"C H 4,9 onNr,

t2-191

i
I

+wH2O+cCO2

Esta expresin es una forma de la eCaCin de Crecimiento, con amonlaco como

fuente de nitrgeno y ningn factor'tie crecimiento. Donde: o, a,Y"vs,Yr,"' w'

59

+
c: coefcientes estequomtrcos para 02, Nl-{r, biomasa, el i-simo producto,
agua y COr, respectivamente; hs, 05, n": tomos de hidrgeno, oxfgeno y
nitrgeno en el sustrato; h, o, flr tomos de hidrgeno, oxgeno y nitrgeno
en las.clulas; ho, ori, ne: tomos de hidrgeno, oxgeno y nitrgeno en el isimo
producto. El superndice c en los factores de rendimiento de sustrato en

biomasa, Y'7s, y sustrato en producto i, Y'rs, enfatiza el hechp de que la


Ecuacin 12.191est escrita sobre una base molar arbitrariamente seleccionada
de 1 mol de carbono.
Esta ecuacin, de carcter general, puede incluir otros elementos, Adems, en

: 0, asl como Yloirs = 0 para


En'el
mtodo
de efu:tronss dis-ponibleg
aerobios.
numerosos microorganismos
ry
oxgenq Bor las'dificehade
de hidtgeao
b se,'iflflir I
experimentales para la deteccin de cambircs erJa concentracin de agua.
el caso de microorganismos anaerobios, o

El balance elemental de carbono se expresa como:

1=Y'fls+EY'r{s+c

t2.20t

El balance elemental de nitrgeno se expresa como:

ts' + a ='Y"fls.nx + EY"r4s.fipi

f2.211

Las siguientes ecuaciones expresan el grado de reduccin del sustrato, las


clulas y el isimo producto:

rs=4*s-2.or-3.n,

12.221

I =4+hx-2.o*-3.n*

12.231

o1 =

4 a hpi -

2.oo

3.noi

12.24)

El balance de electrones disponibles de la Ecuacin t2.191:

12.251

Ld3'Ecuaciones [2.20], 2.211y 12.251, incluyen las incgnitas: o, a, Y",75, c, Y


varios coeficientes Y"o,,r, .segn el nmero de productos orgnicos. Ya se
menciqn que en este enfoque el coeficiente h/ no es de inters. por ser el agua

60

*
abundante y diflcil de medir experimentalmente. En el caso de las fermentaciones aerobias, generalmente Y"pirs es cero, y en el de fermentaciones anaerobias,

o =.0.
An en estos casos, quedan cuatro incgnitas de inters y solo tres ecuaciones
para relaconarlas. Una posible solucin de este problema requiere la determinacin experimental de Y"s, l partr de la representacin grfica de los datos del
carbono celular sintetizado en funcin del carbono en el sustrato consumido.
Otra posible solucin es la determinacin de Y"s, a partir de datos de la
bioqumica molecular.

Los sustratos orgnicos pueden ser utlzados pr un microorganismo para


sntesis celular, para la obtencin de energa, o para la formacin de productos
orgnicos no relacionados con el metabolisrno de energa, como en el caso de
una protena recofnbinante.
El siguiente balance de carbono expresa el fraccionamiento del

sustrato, (Lynd,

1'989):

1=Y'fls+EY"rs+f"

12.261

Donde, Z Y"o,,s: fraccin de carbono en el sustrato, incorporada en el producto


orgnioi no relacionado con el metabolismo de energla, El subfndice/ es un
subconjunto de i; f": fraccin de carbono en el sustrato utlizada para catabolismo.
pede ser utlzado por la clula
para sintetizar nuevas clulas o para.sintetizar productos no relacionados con

ATP disponible de los procesos catablcos

el metabolismo de energa, (Lynd, 1989).

f,G.^o = :-

'dAt?

- :, *
'ptlAT?

12,271

Donde, Go-r: nmero de moles de ATP sintetizados/mol de carbono en el


sustrato catabolizado, o ganancia de ATP Y^,orr: relacin entre el carbono
celular sintetizado y los moles de ATP disponibles de los procesos catablicos:
Yxerp: O,4O4 mol C en clulas/mol ATP, (Ecuacin 3.80); Yprere: rendimiento
de ATP en producto, mol C en productolmol ATP.

61

El trmno f".Go,, representa la produccin total de ATF por mol de carboU&n


el sustrato utiizado. Los trminos de la derecha de Ia Ecuacin 2.271indican
los requerimientos de ATP para sntesis de clulas y formacin de producto,
respectivamente.

En aquellos casos donde los coeficientes Y"pls son nulos o despreciables,


entonces: f -' 'l - Ycx/s, segn la Ecuacin f2.261, y cuando se sustituye esta
"
expresin en [a Ecuacin 12.271, se obtiene, (Lynd,1989):
.t2.281

Las ecuaciones deducidas en esta Seccin permiten la determincin de los


coeficientes estequiomtricos de la ecuacin de crecimiento, en el caso de'
crecimiento aerobio sin formacin apreciable de productos orgnicos, y en
aquellos casos de crecimiento anaerobio con formacin de un solo producto. En
el caso-de reacciones ms complicadas biolgicamente, como la fermentacin
anaerobia con formacin de diferentes productos orgnicos, o la produccin de
una protefna recombinante, en cantidades no proporcionales a la produccin de
clulas, resulta' difcil considerar la estequiometra, desde un.punto de vista
tericb, y los clculos y diseos de estos procesos, dependen riormalmente de
resultados experimentales.

Eiemplo

2.2

Deterrninacin de la ecuacin de crecimiento en un


pfoceso aefobo
:

",,

Hallar la ecuacin de crecimiento correspondiente al proceso.aerobio de


produccin de levadura a partir de glucosa. Suponer que se emplea NH, como
fuente de nitrgeno y que no se obtienen otros productos orgnicos. La frmula
de los rnicroorganismos, es: CH,,roOo,.No,ar, y elrendimiento de ATPe clulas:
Yxttp : 0,404 mol C en cllmol ATP, lEcuacin 3.80).
Soluciri:

62

La

de respiracin de la glucosa, de acuerdo con los


1987; Bailey y Ollis, 1986; Atkins, 1983, es :

C,f~O& + 6 0 2 .+ 36 ADP

3Q P "" 6 C02

38 ATP

siguiente~

44 H2 0

[2.291
GATP =

38 mol ATP
mol glu.
mol glu. cataboliwda 6 mol e

6133 mol ATP


mol e

- El coeficiente estequiomtrico de la biomasa, Y\ 15 , en la Ecuacin [2 .19), o


rendimiento de sustrato en biomasa, se calcula mediant'e la Ecuacin [2.28]:
ycx!a =

6,33(0,404)
= O, 719 mol e en cl .
1 . + 6,33(0,404)
mol e en'. sustrato

- Una forma de la Ecuacin [2.29], expresada con la notacin de la Ecuacin


[2.191, sobre la base de 1 mol de C, es:
(11

.
. .~Glucos
'>-. a .: .e

-2=4

"

Clulas: CH,, 94 0 0 .3No.2s

r x = 4 + 1,94 - 0,3(2) - 0,25 (3) = 4,59

..

Oxgeno:

0 2

r<Ol 2

-2 (2)

= -

- Balance de carbono, (Ecuacin 2.20):

1=Y\
- Balance

d~

15

+e=0,719 +e ;e:::

0,2~1
~

nitrgeno, (Ecuacin 2. 21 ):
a=" YXJsnx = 0,719(0,25) = 0,18

- Balance de electrones, (Ecuacin 2.25):

63

_,*_=+

- De acqerdo con los resultados obtenidos, la ecuacin de crecimiento, (1), se


conerte en:

cHro + 0,175 o, + 0,18 NH3 : 0,7'19 CH1,s4go,3No,ru

0,281,COz

...12.

De acuerdo con los conceptos mencionados anteriormente, por ser el agua


difcil de evaluar experimentalmente,'n se realizan los balances de H v O. La
forma final de la ecuacin de crecimiento se obtiene mediante la multiplicacin
de la Ecuacin l2l por el nrfmero de tomos de carbono en el sustrato:
--

C6H,2O6

.Ejemplo

1,05 O,

2.3

+ 1,08 NH3 :4,31

CH1.s4Oo,3No,r,

1,69 COrz ...(3)

Determinacin de la ecuacin de crecimiento en un


roceso anaefobo
,

Hallar la ecuacin de crecimiento co.rrespondiente al proceso de obtencin de


etanol a partir de glucosa mediante fermentacin anaerobia. Suponer la frmula
de los microorganismos: CH1.s4Oo,3NO,25,'v el rendimiento de.4IP en clulas:
Yxrrrp : O,4O4 mol C en cll mol AIP.(Ecuacin 3.80).'suponer tambin que
se emplea NH. como fuente de nitrgeno y que no se obtienen otros prodctos.
Solucin:

- La ecuacin global de la fermentacin alcohlica, (Ratledge, 1987; Bailey y


Ollis, 1986; Atkins, 1983I; es:
C6H12O6

+ 2Pi + 2ADP:2CzHsOH + 2CO2+ 2ATP + 2HrO ,..t2.301

- La ganancia de ATP, es:


G,ttp

2 mol ATP
mol glu. catabozada

mol ATP
mol C

- Coeficiente estequomtrico de la biomasa, Y"x/s, o rendimiento de sustrato en


biomasa, (Ecuacin 12.2il1:

64

'

0'3flg.(0'404)
Y",
#' =
1

+ 0,3ff1.(O,M)

=0.119

wol C cl
t@l C swfrcto

Una forrna de la E
[2.30], expresada con la notacn de la Ecuacin
t2.191, sobre la base de 1 mol de C, es:

CHrO + a,NH3

Y"ro CH1,e4Oo,3No.r,

Y9evs

CH3Oo,s

cCO,

..,(11

- Grado de reduccin:

Glucsa

fs:4 *2-2=4.

CH,O

Celul CH1,s4Oo.3No,;s

lx: 4 + 1,g4- 0,3(2) - 0,25.(3) = 4,59 ..

Etanol

fo:4+a-0,1,{2) :'6:

CH3Oo,s

tl

f. + o.fp, = Y"xrs'Fx * Y"ois..fri :4 + 0 :'0,119(4,59)


'J/:l

Y"o,.! 0,576, y oe ta ecuacin

de-

balance de C:

: '"*[il l:'

+ Y"pirs.(6

'
-

0,305

-'De acurdo cori los:iesultados obtenidos, la ecuacin de crecimiento, (1), se'


onvierte en:

cHro + o,o298NH.

b,ttgcH1,;4oo,3N,25

0'576 CH3Oo,s + 0'305

CO2

...12t_

65

'_:--7

- La forma final de la ecuacin de crecimiento se obtiene mediante la multiplicacin de la Ecuacin l2l por el nmero de tomos de carbono en el sustrato:

__

cor-+i2o6

+ 0,17g NH. =

o,714cH1,e4oc,3N o,ru
+ ycrHuoH
+
|||||||||||||||||||||||||
|||||||||||||||||||||||||
|||||||||||||||||||||||||

|||||||||||||||||||||||||
|||||||||||||||||||||||||
|||||||||||||||||||||||||
|||||||||||||||||||||||||
|||||||||||||||||||||||||

?-

2.4

__

ro,
|||||||||||||||||||||||||
nt
|||||||||||||||||||||||||
|||||||||||||||||||||||||

nZ(

COMPOSICION ELEMENTAL DE LOS MICROORGANISMOS

Los anlisis de clulas realizados con tcnicas estandarizadas de microcombustin demuestran que no hay una frmula nica para un microorganismo. En la

Tabla 2.1 se muestra como slo 22, de los aproximadamente 100 elementos
qumicos hallados en la corteza terrestre, son componentes esenciales de los
organismos. Los ltimos 6 elementos (& Al, V, Ma, l, Sr) de la Tabla 2.1 , son
esenciales slo para certas especies. Adems, la distribucin de elementos en
los organismos yivos, en la litosfera, y en la atmsfera, es diferente. En la Tabla
2.2 se presenta la composicin elemental de la bacteria Escherichia coli.
El carbono es un elemento gue por su versatilidad para ligarse covalentemente

con otros elementos y formar enlaces simples, dobles y triples, ocupa una
posicin fundamental en la qulmica de los seres vivientes. El carbono al unirse
con otros tomos de carbono forma los esqueletgs lineales, ramificados y
cclicos de las biomo!culas. La asimetra producida por la unin de un to4o de
carbono con cuatro grupos funcionales diferentes tiene consecuencias
biolgicas. En la mayora de las reacciones, altamente especfficas, solo puede
utlizarse un estereoismero del compuesto. El mismo grado de especificidad
de una reaccin se aplica a los ismeros crs y trans que pueden existir en las
biomolculas con enlaces dobles entre carbono y carbono. lArmstrong,

983).

En la Tabla 2.3 se presentan datos sobre los constituyentes inorgnicos de


diferentes microorganismos. El agua es el compuestro sencillo ms abundante
en todos los tipos de clulas y organismos, constituye aproximadamente el 70
o/o del peso total. En la Tabla 2.4 se presentan datos sobre la composicin
elemental de diferentes microorganismos. Se observa que la composicin vara
con la velocidad de crecimiento y con el sustrato limitativo del crecimiento

66

rz

fubv\rr()u

-+ '4
*C [i1"-'\1

g(t.c

Tabla 2.2

fabLa 2.L El-ementos de Ia


materia orgfnica, (Lehninger,
1973 )
r

Composicin

elemenEal de1 E. coli,


(Luria,1950)

Elemento

,'H

Carbono
Oxfgeno

Nitrgeno
Hidrgeno
Fsforo
Azufre
Potasio

Iones monoat.micos:

Na., K-,

Nlg'-

Ca'-

--?

CI

peso 6eco
50
20
1,4

3
1
1

'1

Sodio

Calcio

ELement,os que se

or5
o,5

Magnesio

encuenEran en Erazas:

W7, Fe, Co, Cu,

Cloro

O,5

Hierro

o,2
o,3

Ot.ros

Zn

B, Al-, v, Mo, I, Si

Tabla 2.3 Constituyentes inorgnicos de dferentes mtcroorganrsfno,, en


(gramos)/(100 g de peso) seco {Aiba, S.. Humphrey, A.E., and Millis, N.F.,

1973)

:,

Elemento

Bacterias

Fsforo
Azufre
Potasio

2,0
0,2
1, 0
0,1
0,5

Magnesio
Sodio

Calcio
Hierro
Cobre
Manganeso

Molibdeno
Ceniza total

3,0
1,0
-. 4,5
- o,s
- 1,0
0,01 - 1,1
0,02 - 0,2
0,01 - 0,02

0,4
0,1

0'2
0,1
0

,02

0,1
0,1

o, 001- o, o1

-7

-2t

Levaduras

Hongos

2'

4,5
0,5
2,5
0,3
0,5
L,4
0,2

0., 1
0; 01
0,002 0, 0005 q, oool 0,8
0,
1,
0,
0,

01
00
10
01

2,6
0,24

4,0
0,5
0,1
0,3
0,5
0,01

0,007

0,0002
-L0

67

Tabla 2.4 Datos de la composicin elemental de diversos microorganismos; p:


velocidad especlfica de crecimiento de biomasa; M: peso "molecular" (Atkinson

y Mavituna, 19831.

M'cioorganismo Sustrato
limitativo

Bacteria

(1

p
h-1

Bacteria

Frmula qumica
emplrica".

K.

aerogenes

Glicerol

0,

K.

aerogenes

Glicerol

0,.85

2A,7

cH2No,25Oo 5 '

25,5

L'.

cH1,78No 24Oo,33

22,5

cH1,74No,22Oo,43

23,7

cH1,73N0,240o.43

24,O

Leyadura (3)

cHr,66No,13Oo40

Levadura

cHl,7sNo,r 5Oo,s

,(4)
'-.:Candida utitis
Levadura

'1i

cH1,66No'2Oo,27

'

Aerobacter l2l
aerogenes

23,5
23,9
26,9

't-"Gu"o."

0,08

GH1"B2No,;eOo.47

24,O

Candida

utilis

Glucosa

o,45

CH,';oNo,rOo,r.

25,6

Candida

utilis

Etanol

o,06

cH1,82No,1sOo,46

23,9

Candida

utils

'Etanol

0,43

cH,,3aN6,2Oe,55

25.5

Observaciones:.

(f):

Porcentale en peso de cenizas 8%


(2): Porcentaje en peso de cenizas 8,g%
(3): Porcentaje en peso de cenizas 87o
(4): Frmula qumica:'CH1,64No.16Oo,rrPo,o,So,oo.

68

Eiemplo

2.4

Determinacin de la composicin de un
-1
microorganismo
l'1.
lJ
'i) U.

En la Tabla 2.6 se presenta un resumen dl procedimiento seguido usualmente


en la determinacin de la frmula de un microorganismo tlpico, En la segunda
columria se anota elporcentaje de cada elemento sgn los resultados de Un

anlisis cuanttativo, La composicin de! microorganismo, segtin los Valores


obtenido3 en la ltma columna de la Tabla 2.5,

es:

CH1,s36Oo.2erNo,rr,,
u-l^

Tabta

2.5

Determinacin de la frmula de un microorganismo tfpico.

Eemplo 2.4.
o/o

Eiemento.

c:

'

v.

PGSo SeCo.,

49,3

moles/mol C

moles/100 g

+10

1,21

0,295

14,5.

1,O3

o,251

8,0

7,94

1,936

3,3

0,1_1

i'/

',:

19,4
,

N.

:
s

.1,:2

1,1

0,03

0,6

0,o3

Na

0,04

'o,o27
9,76.1

'

0:3

7,32,10'3
7,32.10'3
2,44.7;3

Ca

0,6

Mg

0,5

o,o2

4,88.10'3

ct

0,5

0,01

2,44.1o-3

Otros

'1,0

-l-

69

2.5

FACTORES DE RENDIMIENTO:

El concepto de rendimiento es un aspecto mportante en la evaluacin


econrnica del potencial de un sustrato orgnico para la produccin de biomasa
o la formacin'de subproductos. La definicin del factor de rendimientc utilzada

por Monod (19421, de naturaleza macroscpica, ha sido modificada para


cuantfcar rendimientos en clulas, en subproductos e inclusive en energa.

2.5.1 Rendimiento

de sustrato en bomasa

La factibilidad econmica de algunos procesos, como el de produccin de


protena unicelular, depende bsicamente del costo de la materia prima. En la
prctica, la.seleccin de un microorganismo con un, elevado rendimiento.de
sustrato en biomasa favorece la productividad del proceso y disminuye el costo
de remocin de calor. Generalmente, cuando el sustrato es el factor limitativo
del crecimiento, la cantdad de biomasa producida es proporcional a la cantidad
de fuente de carbono consumida:
dx

tYyo= - ^
'
ts

_&
ds

f2.311

dt
Donde, Yr,.: factor de rendimiento de sustrato en bomasa r*, rr: verocidades de
formacin de biomasa y consumo-de sustrato, respeetivamente, g.(litro.hl-r; t
s: concentraciones de biomasa y de sustrato, respectivamente, g.litro-1.

2.5.2 Rendimiento

de oxgeno en bomasa

El oxgeno.. representa el valor global de la activOaO cataOlica cuando las


reacciones productoras de energa ocurren principalmente por la va de la.fosforilacin oxidativa. El factor de rendimiento de oxlgeno en biomasa, y*,o, se
define como:

70

dx
v_l
txlo

'ro-

t.,

__

dt

do

f2.32'l

dr

Donde, rr, ro: velocidades de formacin de biomasa y de consumo de oxfgeno,


respectivamnte, g,(litro.h)-1; x, O: concentracones de biomasa y de oxfgeno,
respectivamente, g,litro-1.

2.5.3 Rendimiento

de electrones en bomasa

El factor de rendimiento de electrones en biomasa fu definido por Payne


(1970):

v.r, -MrQ*
-

I"

t2.331

O,

Donde, Yr,.: rendimiento de electrones en biomasa, (g clulas).1""616)1; M:


peso molecular de las clulas, (g cl).(mol)-l; F.: grado de reduccin del sustrato,
electrones disponibles (mol sustrato)-1; Or: velocidad de flujo de masa de sustrato, mol.s-'; tDr: velocidad de flujo de masa-de clulas, mol.s-1. En lugar de tas
velocidades de flujo pueden utilizarse las respectivas concentracions de sustra-

to, s, y clulas, x, mol.litro-l

2.5.4

Factores de endimiento en e! crecmento aerobio

En la Tabla

2.6 se presenta un resumen de los factores de rendimiento, en

el

crecimiento aerobio de diferentes microorganismos en diversos medios mnimos


(la fuente de carbono se utlizada para la produccin de biomasa y energa).

71

En algunos casos los factores de rendimiento son aproximadamente constantes


para un determinado microorganismo en un sustrato especfico. En estos casos
la estequiometra provee una metodologa til para relacionar los factores de
rendimiento con las diferentes variables de un bioproceso y prever, por ejemplo,
la influencia de los cambios de la composicin del sustrato, o de la concentracin de algn producto, sobre la composicin de la biomasa o la generacin
de calor.

En otros casos los factores de rendimiento, empricamente definidos como


relaciones estequiomtricas aparentes, no son constantes para un determinado
microorganismo en un sustrato especfico. Pueden observarse variaciones del
factor de rendimiento con la velocidad especfica de crecimiento, como una
respuesta de los microorganisms a ta alteracin de su ambibnte (temperatura,
pH, concentracin de sustancias nutritivas, activdad del agua, etc). Cada
conjunto de condiciones ambientales significa una variacin de las cantidades
relativas de sustrato asimiladas en masa celular o utlizadas en la sntesis de
productos, o consumidas para satisfacer las necesidades de energa de las clulas,

Ejemplo

2.5

Equivalencia de los factores de rendmento

Demostrar la equivalencia de los rendimientos expresados en las diferentes


columnas de la Tabla 2.6 con los datos de crecimiento de Candida uflr.s en glucosa:

72

Electrones disponibles de ta glucosd, C6H12O5, (Ecuacin


2.141:
Ne

= 6. l4l + 12-8.(21 =24

Yxr = 91,8 (g.ctlmot gtu).(mol gtqlil24


Y*,=

Tabla

2'6

e)

3,82 (g.clulas)/{electrn disponible)

Factores de rendimiento en el crecimiento aerobio de


diferentes

microorganismos sobre diversas fuentes de carbono. (Nagai,


1g7g).
Yx

Yxrs

Yr.

Yro

YxE

glg.c

glg

glg.c

1, 03

3,11
3,67
3,77
3,00

Organismo

Sustrato

glg

g/mol

Aerobacter

Maltosa
Manitol
Fructoaa

749,2
95,5
75,1
72 ,7
g1,g

7,28

1,50
1g
7,46
1,11
L,32

77,1,

1, 08

L,

Candida

Glucosa

0,45
0,52
0,42
0 ,40
0,51

PeniciTlium

Gl-ucosa

o,43

Pseudomonas

Glucosa

0,38 68,4

Rhodopseudo- Gfucosa

0,45 91,0

1,!2

!,46

3,37

s0
4,35
0,25
0 ,45
0,18
o,20
0, 18

90, 0

L,25

3,75

53,2
29,7
4L,8
75,6
77,g
10, 5

,62
,75'
0 ,46
o ,49
0,43

0,9:l
0, gg
0,62
0,97
0,37
0,48
0,31

aerogenes

Glucosa

ut.iTis

chrysogenum

f l-uorescens
monas

1,32
1, 05
1, 01

,95

L,

35

3,92
3

,22

0.95 2,93

spheroides

S..,cerevisiae

Glucosa

Aerobacter

Ribosa
Succinato

aerogenes

GIicerol

IJactato

Piruvato

Acet,ato

0,

0, 88
0
1

,66
2,L2
2,gg
1,39
7,79
1,31
2

Contina
73

Tabla

2.6

Continuacin

Yr.

Yo"

Yo"

Yro

Yrr.

g/mol

glg.c

g/g

g/g.e

0,70 2,62

Organismo

Sustrato

glg

Candida

Acetato

0,35 2L,0

0, 90

Pseudomonas

Acetato

,28 L6 ,8
,49 22 ,5
0.,69, 3L,2

0,70
0, 93
1,30

Kl.ebsieLLa Metanof

0,38

]-2,2

1, 01

0,

MethyTomonas Metanolsp.

'0,'4.9

,4

1,,28

0,53. 2,3

Pseudomonas Metanol
sp.

0,4L 13;1

1, 09

o,44 2,lg

MethyTococcus sp.

1,

,34

o,29 2,02

utfis

f-Zuorescens

Etanol-

ntanoI.,

Candida

uti-Lis
sp.

Metano

0
o

15

01 L6,2

,46

2 ,1,0

. 0,42 7,P7
.0,51 2,60

56 2,03

Pseudomonas Metano
sp.

0,80 72,9

1, 06

0,2a 1,60

s eudomona s Metano
sp.

0,50

9,6

0,80

0,

Pseudomonas

0,s5

9,0

0,75

o,77 I,L2

methanica

Metano

19

,-

Ejemplo

2.6

,20

t__t ,, \

Factores de rendimento en et crecimiento aerobb de


Saccharomyces cerevisiae

calcular los factores de rendimiento en el crecimiento aerobio de Saccharomyces cerevisiae en glucosa y comparar los valores obtenidos con los
correspondientes datos de la Tabla 2.6.
Solucin:
74

: i ='

Para el crecimiento aerobio de Saccharomyces cerevisiae en glucosa se utiliza


la siguiente ecuacin, Battley, 196O):

uH,rO,

+ 3,84 O, + O,29 NH3 : 1,95 CH1,72Oo,onNo,,.


+ 4,09 CO2 + 4'72 H2O + 2005'1
,

kJ

- Rendimiento de sustrato en clulas:


Yxrs

(1,95 mol cl/mol sustrato).(22,86 g cllmol cel)

=3,?-g cllmol sustrato; Tabla 2'6: Y*,": 90 g/mol


- Rendimiento del oxgeno en clulas:

v =rxlo

Yxto

2,, g ct. mol O"


32 g o,
o,
3,u
^rt.L
^rt
1,95 mot ct.

=H, tfft

rabb 2.6: Yilo = o,g7

tt

- Rendimiento de los electrones en clulas:


- Electronss en la glucosa: N.o : 6. (4)
Yxe

44,6 lg cilmol glu).(mol

Tabla 2.6:

2.5.5

Yxr

+ 12' (11 ' 6. l2l :

24

glut} e) = 1,858 g cllelectrn

3,75 g clle

Rendimiento de sustrato en producto

La evaluacin del factor de rendimiento de sustrato en producto es complicada

y algo incierta en el caso de metabolitos cuya biosfntesis, o es muy compleja,


o no est bien definida (Acevedo,1987; Gommers et al., 1988)' El factor de
rendimiento de sustrato en producto se define como:
75

dP

dt
y_.=_rr.=_
rt
rs

ds

e.g4l

dt
Donde, rr, r.: velocidades de sntesis de productoo y de consumo de sustrato,
respectivamente, g.(litro.hora)-1 ;s, p: concentracin del sustrato y del producto,
respectivamente, g.litro-1. La evaluacin de Yr,", basada en la estequiometra de

la reaccin global desde sustrato hasta producto es sencilla en el caso de


productos con rutas biosintticas conocidas,

2.5.6 Rendimiento mximo de sustrato

en producto

El lmite superior del rendimiento en producto de un sustrato orgnico depende

de su grado de reduccin, Bailey y Ollis, (1986):

,,=R+-

12.35t

Donde, fr: fraccin de los electrones disponibles en el sustrato, presentes en el


producto; op, osi fracciones de carbono en el producto y en el sustrato,
respectivamente; fp, f-": grados de reduccin del producto y del sustrato, respectvamente (Ecuacin 2.15l.; Yr,r: rendmiento del sustrato en producto.
Si se tiene en cuenta que las energas del sustrato y del producto son aproximadamente proporcionales a su contenido de electrones disponibles, el trmino fo

puede nterpretarse como un rendimiento en el contenido de energa del


producto a partir del sustrato. Por consiguente, el valor mximo de fo es la
unidad:

o"'4
(Yil*- or.4

76

t2.36I

,o

Donde, (Yp7s).6,: rendmiento mximo de sustrato en producto, g producto/g


sustrato. En la Tabla 2.7 se presenta un resumen de valores d (Yps),,,
calculados a partir de la Ecuacin t2.361, para diferentes productos obtendos
a partir de diferentes sustratos,

Tabla2.7 Llmite superior delrendimiento de sustrato en producto, g producto/g


sustrato, calculado a partr de la Ecuacin t2.361, (Eroshin y Minkevich, 1982)'
Sustrato
Producto

a-alcanos

Etanol

Glucosa

Acido cltrico
Polisacridos
Acido ctco

4,55

Lisina

2,23

2,77
1,96
1,96
1,36

1,42
1,00
1,00
0,70

3,21
3,21

0,66

Estreptomcna
Etanol

Triglicridos

1,64
1,18

..,

0,51

o,72

0,37

Los vatores de Yr,, sirven como referencia para evaluar el comportamiento de


un determinado proceso y adoptar decisiones sobre la accin a seguir' As, por
eJemplo, un Yp/s muy alejado de (Yprs).a., indica que ese proceso puede mejorar
mediante la inversin de recursos adicionales en investigacin y desarrollo' Por
el contrario, los valores de Yr,. prximos al mximo respaldan la decisin de
suspender inversiones en la optimizacin del proceso.

Ejemplo

2.7

Evaluacn del rendimiento mximo en la produccn


de cido ctrico

Calcular el rendimiento mximo de sustratO en producto, (Yp7s).,, en el proceSo


de produccin de cido cltrico a partr de etanol'

77

Solucin:

- Producto: Acido cltrico: C.HBO,


Peso molecular:

192 glmol

Grado de reduccin: fe:f4.(6) +B-7.(2llt6


Grado de reduccin: Fp = 3 (Ecuacin 2.15!
Fraccin de carbono: o : 112, 16111192 : 0,375

- Sustrato: Etanol:
Peso

C2H6O

molecular:

46 g/mol
: [4. (2) +

Grado de reduccin: f"


Fraccin de carbono: o"

- 2lt2 :6
1"12. 1211146 : 0,522
G

- Rendimiento mximo de sustrato en producto (Ecuacin 2.361:


(Yps).,

1O,522. (6)1/t0,375, (3)l

2.5.7 coeficiente

: 2,78l9 acido)/{g

etanot}

de rendmento verdadero en medios mnimos

Los rendimientos definidoS en los numerales anteriores como relaciois


estequiomtricas aparentes, son considerados constante, pa'ra un organisro
dado en un medio espcfico y en unas condiciones ambientale determinadai:
En un proceso real de fermentacin, el rendimiento dpende de diversas
variables ffsicas, q.ufmicas y biolgicas tales como temperatura, pH, actividad

de agua, la cepa, el sustrato, la velocidad especfica de crecimiento,

tas

concentraciones de sustrato, de biomasa y de productos, las relaciones entre


elementos como c/N y P/o, el tipo'de reactoi,, las condididnes de operacin:y
el tiempo medio de residencia.
El coeficiente de rendimiento verdadero de sustrato en biomasa, (y*r.lu, para

medios mnimos, donde la fuente de carbono es utilizada en la sntesis de


clulas, sin descargar productos no celulares al medio, se calcula mediante la
siguiente ecuacin, (Nagai, 1979):

78

P"="*{"u,
1

2.371

Donde, r": velocidad especfica de consumo de sustrato, molsustrato (g cl.h)-1;

m.: coeficiente de mantenimiento basado en el sustrato, mol sustrato (g


clulas.hora);1; (Y,,,.)u: coeficiente de rendimiento verdadero de sustrato en
biomasa, g biomasa (mol sustratolt; lt*: velocidad especlfica de crecimiento de
biomasa, hora-] .

2.5.8

Rendimiento verdadero en medos complejos

En un medio complejo la fuente de carbonp es desasimilada completamente en

los procesos de produccin' de energa. Segn Naga, 1979, la siguiente


ecuacin define el rendimiento verdadero:

u"={t*Y*'F*

t2.38I

Donde, mr: coeficiente de mantenmiento basado en la generacin de calor,


kJ.(g cl.horal-1; AH.: calor de combustin del sustrato, kJ.(mol sustrato)-l; Ysv:
sustrato catabolzado por actvidad biosinttica verdadera, molsustrato (g clulas)-1; /x: velocidad especfica de crecimiento, hora-1;pr: velcdad especffica de
consumo de sustrato; {mol sustrato).(g cl.horal-1 .

2.5.9

Rendimiento verdadero del oxgeno

Nagai (19791, supone que los procesos de produccin de energa estn


dominados principalmente por la fosforilacin oxidativa y que la mayor parte del
oxgeno es consumida mediante sistemas via oxidasa en lugar de la fosforilacin

7g

a nivel de sustrato. En este caso el coeficiente verdadero se calcula mediante


la siguiente ecuacin, (Pirt, 1965):

Fo=mo*

{rr.u,

t2.391

Donde,I/o = velocidad especffica de demanda de oxgeno, (mol Or).(g cl.hora)'; mo: coeficiente de mantenimiento (mol Or).(g cl,hora)-1; (Y,,o)u: coeficiente
de rendimiento verdadero del oxgeno, (g cl)/(mol Orl; tty: velocidad especfica
de crecimiento de biomasa, hora-1 ,

2.6

FORMULACION DE-ECUACIONES CINETICAS A PARTIR DEL


BALANCE DE MATERIALES DE UN CULTIVO CONTINUO

La medicin de algunas de las variables ms importantes de un proceso continuo

de fermentacin tales como concentracin de biomasa, concentracin


sustrato, consumo de oxgeno y produccin de CO, es el punto de partda

de
de

un balance de materiales con el propsito de formular las ecuaciones cinticas


requeridas para controlar un cultivo.

Ejemplo 2.8 Formulacin de las ecuacones cinticas reqerdas


para e control de un cultvo contnuo de clulas de S, cerevisiae.

En la Tabla 2.8 se presentan datos obtenidos experimentalmente (Mor y


Fiechter, 1968), en un reactor continuo de mezcla completa (CSffl. En el
proceso aerobio crecen clulas de Saccharomyces cerevisiae en un medio compuesto por etanol como fuente de carbono.

80

Tabla 2.8 Resultados experimentales de un proceso contnuo de fermentacin


con clulas de Saccharomyces cerevisiae en un medio limitado por etanol, (Mor
y Fiechter, 1968).
Y*,.

020 3, 93
0, 0s5 4 ,70
0, 095 4 ,75
0,115 4,L4
0, 119 2 ,92
0,

0, 10

o,02
0, 06
,54
2 ,59
0

t l0zl

0,4t4 19,5
0,49t 4l.,5
0,498 63,9
0,462 77 ,8
0 ,422 80 ,7

ttl0,02l Ct

11,

l_

23 ,8

,9
38,2
38,3
32

0,56
0,54
0,5L
0 ,49
0 ,47

o/o

C en '
clulas
(base secal

50,05
49,29
49,70
48 ,98
49 ,9a

Donde;

ltxi velocidad de dilucin, hora-1; pr: velocidad especffica de crecimiento de


clulas, hora-1; D = UV; O: caudal, m1/hora; V: volumen ocupado por el lquido
en el reactor, m3; x:concentracn de biomasa en el reactor: (g c|. secas)/litro;
s: concentracin de etanol en el reactor, g etanolilitro; so: concentracin de
etanol en el alimento a reactor: 10 g etanol/litro; Yr,r: rendimiento delsustrato
en clulas, (g cl secas)/(g etanol); ttlOrl: oxlgeno en el aire estril alimentado
al reactor, ml O, /g cl,hora; a(COrl: CO, formado, (ml COr)/{g cl.horal; Cr:
cociente respiratorio, (ml CO, formadol/(m! O, consumido).

Determinar:

1- La posibilidad de formacin de productos ng celulares y, en el caso positivo,


calcular la cantidad descargada al medio en cada ensayo.

2- El coeficiente de mantenimiento de oxfgeno y el coeficiente de rendimiento


verdadero de oxgeno.
3- Formular las ecuaciones cinticas requeridas para Controlar un cultivo similar
de microorganismos.
Solucin:

81

- Balance de carbono
- En la Tabla 2.9 se presentan los resultados del balance de carbono, evaluados
segn la Ecuacin f2.12):

'

,'

or.Fs = dx. lrx

c.Fco2

+ up.pp

(1)

Donde, os, oy, os, op; Contenido de C, en sustrato, clulas, CO, y producto,
respectivamente, g Clmol; lts, lte, UlCOrl: velocidad especlfica de consumo de
sustrato, de formacin de producto y de produccin de cor, respectivamente;
mmol/g cl.h; p, : D: velocdad especffic de crecimiento de biomasa y
velocidad de dilucin, respectivamente, h-1.

- Muestra de clculos para D

0,115

h-1:

Pr=;l As
Af =;(s,-r.1,
1

Fs

- 0,6f) .8 !.tanol oj15 hora-1


gr,"l litro
4,14

(10

lttTo

g etangl mol,etaw! lIACD


y- = e-15,
' g c|. h 46 etarul nnlmntol
e

ls = 5,65

mmol etanol

ct.h

:)

os

os.tts

ax

ox.ltx

oc

a2

24 (g.C).(mol etanol)-l

(24)(5,65)

'

= 135,6 (mg C).(g cl.h)-1

':

0,5 (S O.(S cl)-1: (ltima columna de la Tabla 2.8)

0,5 (g C/g cll(O,1 15 h-1)(1000 mg/g)

12 (g C).(mol

CO2)'1

57,5 (mg Cl.(g ct.h)'1

s,c.r(co)
'r e =

c 1 mol .u,z.^l co"


P.nolg CO,
22,4 litro
g cl.h

''P(CO)=

ZO'aS'ffi#

or.pr: C en productos no celulares descargados al medio de cultivo, Ecuacin


(1):

oe.!e

135,6 - 57,5 - 20,46

= 57,64 mg C/(g cl.h)

- Balance de oxgeno:
t.

,i:

En la Tabla'2.1 0 se presentan los rultados del,balance de oxfgno, evaluados


de acuerdo con la Ecuacin t2.131:

tzt

For=A.ltr:B.Fr-g.Ln

,:,

Tabla 2.9 Balance de carbono durante el crecimiento de Saccharomyces


cerevisiae Gn,rrn cultivo cootinu) lirnitado por etanol. Ejemplo 2.8.
\1

Fx

Fs

ds.lts

dx.Fx

o..ylCOrl oe.Fp ,r.p,


ds-ls

,020

1, 09

0, 05s

0,095
0, 115
0, 1l-9

4,32
5,65
6

',54

,48

,2
6L, O
103 ,7
135,5
155, 5
26

10,

,5
4't ,5
57,5
59, 5

27

5, 95

t2;75"
17,62
20 ,46
20

,52

t0,25
20;7s
3e, s
57 ,64
75 ,48

0,391
0

,'340

,372
0,425
o

0,4.85

83

Tabla

D=

2.10

Fx

Balance de oxfgeno durante el crecimiento de Saccharomyces


cerevisiae en.,un cultivo continuo !imitado por etanol. Ejemplo 2.8.

plo2l

A.Irs

Q.Fc

(mmolOr).{g cl.h)-1

h-r
0

B.p,

3,27
,62
L2,96
16,95
L9 ,44

,020

0, 055
0,095
0,115
0, ll9

0,87
1, 85
2,85
3,47
3,60

4,5'7
5,53
5,73

A.ps

A.lts

C.ttp

,440
,409
0,427
0 ,469
0,520

7,44
3,72
5,54
7 ,95
10,1

0.96
2,65

c.vP

1, 83
4, 50
7 ,42
9, 00
9,33

Donde:
.

A, B, C: oxgeno requerido para la combustin del sustrato, las clulas y los


productos, respectvamente, hasta CO2, l.lO y NH (si el sustrato y los productos contienen nitrgeno), en (mol Orl.(mol sustrato)-1.

- Muestra de clculos para D


C2H6O

Por tanto:

0,115

h-1;

+ 3 O, :2COz + 3 H2O

A : 3 moles Orlmol sustrato.


A.uIr

mol o' :r.U rurc| etomt


g cl.h
mol eunol

=,

= 16,95

mmol

o'

cl.h

Se supone la frmula de la biomasa: CH,,,rrOo,ooNo.,,, (Battley 1960). Por


consiguiente, el ogeno requerido para la combustin de las clulas, es:
CH1,72O..44N0.,,

1,1

02: CO, + 0,15 NH3 + 0,635

Por tanto:

B = 1,1
'

84

no! oz=!::l=-cl
mol c122,86

g lgfrcnrno]
mol

8,12

H2O

B.tt,

4si2#
t

Tabla 2.8, para D

o,tts -r = s,5o

(O)

77,8^l

O:

8c

0,115 hora-l.

tt(o)

77,8
I

^lrrOr"

CCt.N)r4

It(o) = S,Ol

1 mol
?2,4 lina

ffi

C.gr: oxgeno en los productos no celulares descargados al medio de cultivo,


Ecuacin (2):

C.lt,

A.tt"- B.ttx- ltlOzl

16,95 - 5,53 - 3,47

7,95 mmol/g cl,h

Los valores de ls..prlllos./s), anotados en la iiltima columna de la Tabla 2.9,


y los correspondientes a la penltima columna de la Tabla 2.1O, lC.ttrlllA.ltsl,
demuestran que en todos los ensayos hay formacin de productos no celulares
en cantdades equivalentes a 40 - 50 7o del etanol consumido.

- La Figura 2.2 es una representacin grfica de los datos de pl02l, en (mmol


Or)/(g cl.hora), (Tabla 2.10l., y los datos de A.p" - C.lte, en (mmol O2lllg
cl.hora), en funcin de los valores correspondientes de px en hora-l. Las
relaciones lineales observadas en la Figura 2.2 confirman la validez de la
Ecuacin [2.39]:

tL(o)=n"*Oh;+,

(31

85

: .i

2.2 Determinacin grfica de los coeficientes de mantenimiento y rendimiento verdadero t'bxgeno, durante el ,crecimento de .S. cerevisiae en un
cultivo continuo limitado por etanol. Ecuacin (3): p(or) vs lJx; Ecuacin (4):
(A./s - C.ltrl vs pr. Ejemplo 2,8.
Figura

- (mmol oxigeno)/(g

ceLh)

,U_

{*:,
2
o

o,o2

0,o4

0,06

0,o8

0,1

0,12

Velocldad de dllucion, 1/h.

Si/(Or) se reemplaia en la ecuacin de balance de oxsen, Ecuacin (2), se


obtiene:

A'.tt"

*, . (o*),"

.11, =

t4t

Et coeficiente de mantenimiento de oxfgeno, mo, calculado como el valer


promedio del intercepto, Ecuaciones (3) y (4), Figura 2.2, es:

m.

O;326 (mniot O2lllg ct.hora)

El valor del coeficiente de rendimiento verdadero del oxgeno, calculado a partir


de las pendientes, Ecuaciones (31 v (a), Figura 2.2, es:

(Yvo)u

86

: 40,6

(g cl)/(mol Or)

Figura 2.3 Variacin del contenido de oxgeno de los productos no celulares


con el coCiente respiratorio , lC.Pp vs Crl, durante el grecimiento de S' cerevisiae
en cultivo contnuo limitado por etanol.

t2

(mmol oxigeno)/(9. celulas.hora)


\i

.\_-i

10

\:l

"i'

:\

......'.-----...-....-.--i..-.-\sr---.-..-.....--"""'+'--'

i\i
:\i

i\i

-?---.--..--'-""""'-"'-""'--"""'--'\""'i

"

o
o,4

:ii\
'ii
"'--"
'-'--'--."'----""-"'-"--'1""""
,i:
jri

o,44

""

""' - --"'+":"'

o,48

o,52

o,56

o,6

Cociente res?iratorio, Cr

- La Figura 2.3 es una representacn grfica de los datos deloxgeno presente


(mmol
en los productos no celulares descargados al medio lC.ltpl,f abla 2.10, en
Orl/(O cl.hora), en funcin de los respectvos vglores del cociente respiratorio,

cr, Tabla 2.8. La relacin lineal observada corresponde a la ecuacin:

C.ttp=kr-4-C,

(5)

54,95 (mmol de productosl/(g cl.horal; kz : 90,5 ml O, (mmol


productos)/ml COz(g cl.hora); Cr: cociente respiratorio, (ml'CO, formado)/(ml
paraO, consumido). El consumo de oxgeno puede medirse con un analizador
magntico de oxgeno, y la produccin de CO, con un analzador infrarroio de
COr. Los valores del coCiente respratgrig, C/, demuestran que esta variable es
apropiada para controlar el cultivo.
Donde,

kr

- Las ecuaciones, (3, (4) y (5), tambin se pueden expresar respectivamerite


como:

r, = (Yp)

".ro,

x.m(Y4o)"

87

],

:i

r" =

*(r.^, *(,

#,.r

" r)

1,.
,o=i(kr-k2.Cr).x
-dxdoz-ds-dp
ro"='r=A
dt

'"=-

'r=

Donde, rx; ro; rs y r": velocidades absolutas de crecimiento de biomasa, consu-

modeoxfgeno,consumodesustratoyformacindeproducto,enmol/l,h.
Estas ecuaciones cintcas son indispensables para el control del proceso de
crecimiento de S. cerevisiae en un cultivo continuo limitado por etanol.

2.7

DISEO DE MEDIOS DE CRECIMIENTO Y PRODUCCION

Uno d'ios fadtbib's^pps rnortalles


fermentacin es el diso del medio d

e'n

creci

{ff

p*roceao'#

in.! El medio no

slo debe satisfacer los requerimientos nutrimentales y ambientales


microorganismo, sino tambin las restricciones tcnicas y econmicas

'

del
del

proceso, con el propsito de minimizar los costos.de separacin y purificacin


.y obtener un producto de mxima calidad al menor costo posible.

2.7.1

::'
Requerimientos nutrimentales

Las consideraciones estequiomtricas sobre crecimiento

formacin

de

producto (Ecuacin 2.1 9l constituyen el punto de partida hacia la determinacin

de los requerimientos nutrimentales y ambientales y la composicin de los


medios de crecimiento.

88

Tabla

2.11 composicin

qumica de los principales productos de la


fermentacin. (Cooney, 1 982)

Antibtcos

Bacitracina
Cefalosporina C
Eritromicina
Penicilin G
Estreptomicina
Acido
Acido
. Acido
Solventes

ctrico
gluBnico
lctico

Acetona
Butanol
Etanol

C6sH1o3N17Or6S

C16H21N3O.S
Ca7H67NO13

'C,6H18N2O4S

C,

H3eN7O12

CuHrO,
C6H12O,

C.H'O.
CaH6O
C4HroO
C2H6O

Vitaininas y amnoiidos

B',,
Rboflavina
Acido glutmico
Lisina
Triptfano

Cu.HrrCoN,oO,oP
Cr7H2oN4O6

CsHsNO4
C6H14N2O2
C1r H12N2O2

2.7.1.3

Requerimientos mnimos

En trminos generales, los requrimentos rhnimos de un nutrimento son


calculados esfequiorhtricamente. La necesidad de una sustancia nutritiva de
inters se evala expeiimentalrhente mediante unalserie de ferm"entaciones por
lotes, en las cuales esa sustancia se suministra en cantidades timitadas mientras
Jos

otros nutrimentos son suministrados en exceso. 'l-a'.Figura 2.4 es una

representacin esquemtica de los resultados dq este tipo de ensayo. Eventualmente, a medida que aumenta la concentracin de la sustancia nutritiva, esta
se hace disponible en exceso y alguna otra sustancia se vuelve limitativa del
crecimiento.

90

ocasionalmente, cuando tal experimento se realiza, el intercepto (curvas A y B


de la Figura 2.41 no coincide con el origen. La curva A se obtiene cuando hay
traspaso del nutrimento ensayado desde el cultivo semilla. Otra situacin se
presenta cuando hay necesidad de una concentracin crftca del nutrimento, ya
sea porque el nutrimento se liga con algn material celular y forma un
precipitado o un complejo, o si se destruye, o si su concentracin disminuye
durante la esterilizacin. En el balance de materiales deben tenerse presentes los
requerimientos nutrimentales interdependientes. Por ejemplo, el sodio puede
satisfacer parcialmente la necesidad de potaso. otros elementos como el
calcio, no son esenciales para el crecimiento pero pueden ser necesarios para
la establidad del producto.

Muchos microorganismos, heterotrofos, requieren una fuente orgnica de


carbono que simultneamente cumple la funcin de fuente de energa. Los
microorganismos fotosintticos y los autotrofos, utilizan carbono inorgnico:
CO2, H2{COg)- y (COr}2- y una fuente separada de energa, puede ser la energa
luminosa o la proveniente de la oxidacin de un compuesto inorgnico.

Tabla2.12 Principales tipos de nutricin de las bacterias. (Pelczar, et at.,


1977t
Tipo

Fuente de

Fuente de
carbono

Ejemplo del gnero

energla

Fotolitotrficas
(Autotrficas)

Luz

CO,

Chromatium

Fotoorganotrficas
(Heterotrficas)

Luz

Compuestos
orgnicos

Rhodopseudomonas

Ouimiolitotrficas
(Autotrficas)

Oxidacin de
compuestos
inorgnicos

CO,

Ouimioorganotrfcas
(Heterotrficas)

Oxidacin de
compuestos
orgnicos

Compuestos
orgnicos

Fototrficas

Ouimiotrficas
Thio-

bacillus
Escherichia

9t

Figura 2.4 Representacin esquemtica de la influencia de la concentracin de


un nutrrnento sobre la concentracin final de clulas. La curva A se obtiene

cuando hay traspaso de nutrimento desde el cultivo semilla. La curva


representa la necesidad de una concentracin crtca de nutrimento.

Concentracion de celulas

Concen traclon de nu trimen to

En la Tabla 2.13 se presentan los resultados de un anlisis realizado por


Haggstrom (1975), quien examin la literatura y confront la composicin
elemental de las clulas con la cantidad de cada nutrimento aadida al medio.

2.7.1.4 Requerimento de nutrimentos

especfcos

Muchos microorgairismos tienen requerimientos nutrimentales especlficos como


consecuencia de su incapacidad para sintetizar algunos factores de irecimiento
tales como vitaminas, aminocidos y nucletidos. La identificacin de estos

nutrimentos se logra, generalmente, mediante procesos experimentales de


eliminacin. Una vez identificados los requermentos, estos son calculados
estequiomtrcamente a parti de datos sobre la'iomposicin celular. En la
fabla 2.13 se observa que algunos elementos generalmente son aadidos en
exceso lP,nK, Cll , mientras otros son suministrados en cantidades prximas:a
su valor lmite,

:
92

Tabla 2.13 Concentracin relativa de elmentos en las clulas y en los medios


de'cultivo ms utilizados. Las cifras representan los valores promedio de los
datos publicados para bacterias Gram positivas y Gram negativas crecidas en

un medio mineral, X: proporcin del elemento con respecto al nitrgeno; n:


nmero de referencias consultadas.(Haggstrom, 1 975).
Elemento

Medios

Clulas

100

100

23

25

776

66

L4

24

20L

't

s9

6s
70

27

15

74

66

4L
47

Fe

8,9
4,9
3,2
3,0
2,5
0,3

Zn

0, 14

Cu

0, 03
0, 05
0, 003
0, 002
0, 006

s
Mg
Na
Ca

cl

Mn
Co
Mo

2.7.2

25

t_1

)-23

20
5

2t
20
2
3

11

29'"

2,2

50

0, 13
0, 04
0,15
0 ,02
0,09
0, 01

26

27
26
13
L7
9

Requerimento de energa

L energa requerda por una clula iar

ta ,rnr"",a

de tnasa celular, manten-

minto y formacin de producto, generalmente esta asociada con la utilizacin


de la fuente de carbono. La oxidacin de la fuente de carbono en el metabolismo
anaerobio, piovee energla y genera Compuestos que sirven como aceptantes de
los electrones generados en el proceso de oxidacin.

93

El rendimiento de un sustrato en clulas se calcula a partir de datos experimen=


tales, o del rendimiento de ATP en clulas, Y,orr. Adems, se ha encontrado
que la relacin Y*)o* es constante e igual a 10,5 (9. cl).(molATPfl = O,4O4
(mol C en cl). (mol ,4TPl-1, (Ecuacin 3.80). En aquellos casos donde un
producto es el resultado deseado de una fermentacin, hay que utilizar la fuente
ms apropiada de carbono para la sntesis del producto. La demanda de
sustrato es (pr.x)/Yrs, donde p, es la velocidad especlfica de formacin de
producto, x es la concentracin de clulaS, y Yps el rendimiento de sustrato en
producto (Secciones 2.5.5 v 2.5.6, y Tabla 2.7l,.

2.7.3 Requerimentos ambentales

Las sustancias nutritivas deben suministrarse a la clula en una forma y en un


ambiente apropiados para su eficiente utilizacin. Entre las variables ambientales ms importantes estn la temperatura, pH, actividad delagua, concentracin
de nutrimentos, concentracin de oxgeno disuelto (en el caso de fermentaciones aerobias) y presin parcial de COr. Sin embargo, es necesario insistir en el
hecho de que los valores ptimos de estas variables no necesariamente coinciden para crecimiento y para formacin de producto.

2.7

.4

Consideracones tcnico-econmcas

Entre las principales consideraciones tcnico-econmicas del diseo de medios


de crecimiento y produccin estn los costos y la disponibilidad de materias primas, la necesidad de fuentes especlficas de carbono y nitrgeno, los costos de

separacin y purificacin de productos y todos los aspectos del control


ambiental, La funcin objetivo primario de una fermentacin es la minimizacin
del costo del producto. Un aspecto mportante en el estudio de factibilidad
tcnico-econmica de bioprocesos es la minimizacin del costo de los
nutrimentos, ya que estos representan entre el 1O y el 60 % de los costos de
manufactura de un producto.

94

2.14 Materias primas utilizadas con mayor frecuencia en las industras de


procesos bioqumicos. (Precios de 1988: valor promedio en dlares EE. UU.lkg
(Petrides et al., 19891.
Tabla

Matera prima

Precio

Comentarios

US /kg

Fuente de carbono:
Dextrosa monohidrato

Dextrosa anhidra 95%

0,50

Glucosa

Solucin 70% peso/vol.

o,32

Jarabe de maz

95o/o, equivalente de

0,40

dextrosa

o,28

Miel de maz
Melazas de remolacha

Slidos totales: 70%


Azcares fermentables : 50

Melazas de caa

Similar a las de remolacha

0,09

Aceite de soya

Refinado

0,80

Aceite de maz

Refinado

o,82

Etanol

Grado USP, libre de


impuestos

0,56

0,1 0
o/o

Metanol

0,19

n-alcanos

0,50

Fuente de nitrgeno:

Anhidro: grado fertilizante

o,20

Acuoso: 29,4o/o, base NH,

o,21

Harina de soya

Potena: 44o/o

o,24

Semilla de algodn

Harina: 62Yo Protefna

0,51

Licor de la
maceracin del maz

Nitrgeno: 4, 5% peso/peso

0,1 5

Caseina

N:

2,40

Sulfato de amonio

Grado tcnico

Nitrato de monio

Grado frtilizante, 33o/o de


en volumen

Amonaco

13,5o/o peso/Peso

o,12
l

0,14
Contina
95

abla 2.1

4 Continuacin

Materia prima

Comentario

Precio

US $/ks

Urea

Grado: agrieultura
N: 460/o

o,20

Levadura

Cervecerla, sin sabor amargo.

2,40

Suero

Seco: 4,57o l, peso/peso

o,45

KH2PO4

Grado USP, grnulos

1,65

K2SO4

Puro, grhulos

2,20

Fuente de P, S, Mg, Ca, K, Na:

NarHPOo

1,29

MgSOo.THrO

0,33

ZnSOo.THrO

Grado: agricultura, polvo

0,50

Otros matriales y sustancias qulmicas para reactores:


Ampicilina

295,00

Penicilina

25,00

Estreptomicina

49,00

Medio celular
animal, total,
Antiespumante

Medio dqfinido. Escala


que 1 m3/da.

mayor

1,00
0,75

El costo de la fuente de carbono y energfa es el factor ms importante n la


evaluacin del costo de las sustancias nutritivas, (Tabla 2.141. Las fuentes de
carbono utilizadas con mayor frecuencia son: almidn de ma2, dextrosa (de
ma[zl , melazas, aceites vegetates, manteca de cerdo, metanol, n-parafinas, celulosa y lactosa. La segunda contribucin importante al costo de las materias
primas corresponde a la fuente de nitrgeno. Generalmente las fuentes
compleias son ms convenientes para la fermentacin que las.sencillas como el
amonaco o las sales de amonio.

96

Las fuentes de nitrgeno utlizadas con mayor frecuencia son: licor

de

maceracin de ma2, harinas de soya y de pescado, hidrolizados y extractos de


levadura, hidrolizados de protefnas, rea, amonaco gaseoso y los productos
solubles de las destileras. Materiales como el licor de cocimiento de ma2, los
hidrolizados de protefnas y los extractos de levadura incrementan los rendimientos y productividades de un proceso, pero contienen otros materiales no utilizables, que deben separarse del producto final y luego tratarse con los efluentes
de la planta. A medida que se conocen con mayor detalle los mecanismos de
regulacin metablica, aumenta la tendencia hacia la utilizacin de fuentes
definidas de nitrgeno, mediante la regulacin de la velocidad de adicin de
compuestos especficos, en lugar de la utilizacin de materiales complejos.

2.7.5

Agua

El agua se utlza en la preparacin de medios, en los procesos de separacin y


purificacin de los productos de la fermentacn, en los procesos de refrigeracin, desinfeccin y esterilizacin, y para el lavado de equipos, En algunas
localidades la calidad del agua es variable y, por tanto, debe controlarse por
mtodos fsicos, qufmicos y biolgicos.

Estos tratamientos se dividen en cuatro categoras:


1- Ajuste de la composicin qumica, o sea, la remocin de hierro, cloro libre,
cido carbnico y de la dureza del agua.

2- Remocin de sustancias suspendidas en el agua mediante floculacin,


sedimentacin, filtracin, centrifugacin, y otros mtodos de separacin.
3- Remocin de microorganismos mediante filtracin, desinfeccin y esterilizacin.

4- Remocin de coloides mediante floculacin, coagulacin y sedimentacin


filtracin, o mediante smosis inversa.

97

Las trazas de amonfaco en el agua indican contaminacin. simitarmente, las


sales de los cidos nitroso y nftrico afectan desfavorablemente el estado fisiolgico de los microorganismos.

Las sales de hierro, en altas concentraciones, originan la decoloracin de


algunos microorganismos como las levaduras, inhiben la bigsntesis de algunas
sustancias corno en el caso de los antibiticos y causan la corrosin de tuberas

y eqripos.
Las aguas con un recuento bacterial menor que 20

- 100 grmenes por ml, son

consideradas como aguas de alta calidad, Las fluctuaciones de la dureza del

agua

y de los niveles de los cationes presentes,

especialmente calcio y

magnesio, afectan los rendimientos de sustrato en producto, En algunos casos,


generalmente a escala de laboratorio, se utiliza agua desmineralizada o deioni-

zada para agregarle todas las sustancias necesarias en las proporciones


adecuadas.

2.7.6

Fuentes de carbono

2.7.6.1

Melazas, cebada y extracto de malta

En la preparacin de medios de cultivo complejos se utlizan desechos o


subproductos y extractos naturales tales como melazas, licor de maceracin de
malz, extracto de levadura y otros. La composicin qumica de estos medios es
variable, contienen diversas fuentes de iada elemento y generalmente deben ser
complementadas con otros compuestos para proveer las cantidades adicionales
de N, Mg, Py otros elementos. En la Tabla 2.15 se presenta un resumen de la
composicin de las melazas de remolacha y caa, obtenidas como subproducto
de la elaboracin de azcar. La cebada (Tabla 2.1 6) es una fuente tradicional de
carbono en cervecerfa y en la produccin de levadura. La malta (Tabla 2.171 se
prepara mediante germinacin de la cebada. En la cervecera Ia malta se tritura,
se mezcla con agua y se mailtiene a una temperatura elevada, para que las enzimas, amilasas y pectinasas, puedan degradar el almidn de la malta,
98

Tabla 2.15 Composicin de las melazas de remolachE y caa (White, l g48l.


Componente

Melazas

Remolacha %

Caa

Peao seco

7g

,0

85,

Total de carbohidratos

48,0

58,

0,2

PrO,
CaO

0,01 0,15 -

Mgo

0, 0l_ -

KrO

2,2
0,1
0, 00s-

4r5

0, 001-

sio,
AI2o3 'i{

'r

'

FerO.

28,O

Cenizas

4,O

2,8
0 ,02
0,7
0,1
0,5
o,
]

,02

34,0,
8,0

i it

.,.,.

o/o

78,0 - 95,0
50,0 - 59,0
0,08 - .0,s
0,009- 0,07
0,1s -_ q,8
0,25 - 0,8
0,8 - 2,2
0,05 - 0,3
0,01 - 0,04
0, 0q1- 0,01
28 ,0: - 33;,0
3,5 - 7,5
,

Tabla 2.16 Monosacridos y oligosacridos en la cebada. (Sikyta, 1983).


Carbohidrato

Peso seco
mg.g-r

Glucosa

t.

Fretosa

';'

Maltosa
Sucrosa
.Raf inosa

.Cetosa

0,2 - 0,93
0,33 - r;5g
0,0 - ,1,35
3,Atr = tr6,90

0,70'0,97 0,40 1,44

i:

"Fructosanod: solubles en etn'ol


Fructosanos solubles en aqu

lr^

8."32

4,33
5,35
9,0

99

Tabla 2.17 Composicin de extracto de malta en polvo. (Sikyta,


Componente

Maltosa
Hexosas (glucosa y fructosa)
Sucrosa

Dextrina
Otros carbohidratos
Protena
Ceniza

983).

52,2
t9 ,11r8
15, 0

3,8
4,6
1r5

2.7.6.2 Licor de sulfito

El licor de sulfito es un subproducto de la industria de pulpa y papel, contiene


entre 1 I V 20 o/o de minerales, y entre 80 y gO o/o de sustancias orgnicas. Su
composicin vara con el tipo de proceso de obtencin de la pulpa. El licor con
un pH entre 1 ,5 y 3,2, se neutraliza con hidrxido de calcio o con carbonato de
calcio. Estas sustancias forman sales insolubles con la mayora de los cidos
presentes en el licor,

2.7.6.3 Alcoholes sintticos

Otras materias primas potencialmente importantes son los alcoholes sntticos.


Las ventajas del etanol son: disponibilidad, precio razonable, calidad estandariza-

da, homogeneidad y solubilidad en agua. Entre las desventajas estn

las

prdidas por evaporacin, que pueden alcanzar el 10 o/o del volumen total, y sus
propiedades como sustancia de superficie activa que contribuye a la formacin

de espuma en el medio, aunque es una espuma delgada que facilita

la

distribucin de aire en el lfquido. La presencia en el etanol de sustancias como


el croton-aldehfdo inhibe el crecimiento de microorganismos. El metanol
comparte algunas propiedades con el etanol pero es ms txico y ms voltil.

100

2.7.6.4 Aceites

vegetales

Algunos bioprocesos, especialmente los de bioslntesis de antibiticos, utilizan


aceites vegetales como fuente de carbono. Los microorganismos metabolizan
fcilmente la mayorfa de los aceites vegetales, que por otra parte tienen amplio
uso como antiespumantes.

2.7.6.5

Hidrocarbuos

Los microorganismos tienen la capacidad de utilizar, en mayor o menor


extensn, todos los hidrocarburos. La mejor fuente de carbono, entre los
hidrocarburos, son los n-alcanos. El metano es asimilado por muchas bacteras
pero no por las levaduras. Un kilogramo de metano produce 0,8 kg de clulas
secas. Generalmente los microorganismos crecen mejor en una mezcla de'
alcanos que sobre un solo compuesto.

2.7.7 Fuentes de nitrgeno inorgnicas y sintticas

Muchos microorganismos, especialmente los hongos, se proveen de nitrgeno


amonio. Generalmente los mcroorganismos
que asimilan nitrgeno inorgnico crecen con mayor rapidez en presencia de una
fuente de ntrgeno orgnico. El sulfato de amonio, un'de tos impuetos'rhs
econmicos, se utiliza junto con el hidrxido de amonio y el amonfaco gaseoso
como regulador del pH. La rea constituye una fuente apropiada de nitrgeno,
pero es costosa y se descompone a elevadas temperaturas, razn por la cual se
esteriliza mediante filtracin. El fosfato cido de diamonio, fuente de nitrgeno
a partir de las sales inorgnicas de

y de fsforo, se disuelve en agua formando un lodo voluminoso, diffcil

de

sedimentar compuesto por fosfato de calcio y fosfato ferroso. El amonfaco se


utiliza en forma gaseosa, o en solucin acuosa al 25 o/o. La solucin acuosa
libera amonfaco gaseoso y por consiguiente las tuberfas y equipos deben ser a
prueba de gases y estar construdos con materales anticorrosivos.
101

2.7.7.1 Licor de maceracin de rnaz

El licor de maceracin de maz es un subproducto del procesamiento de ma2.


su composicin (Tablas 2.18 y 2.1 g) depende del tpo de proceso, de la calidad
del malz, y de algunos procesos microbiales que tienen lugar durante la
maceracin, como es el caso de la fermentacin del cido lctico. Un criterio
importante en la calidad del licor es la relacin entre nitrgeno amino.y nitrgeno
total. Esta relacin indica la intensidad de la fermentacin lctica durante la
maceracin y su valor debe estar alrededor de o,4, o sea, aproximadamente un
2 o/o de nitrgeno amino en la materia seca.

2.7.7.2 Torta de soya

La torta de soya es una importante fuente de nitrgeno.

de protelna; 0,5

contiene:44 - 47

- 1,2 o/o de grasas; 5;5 . 6,6 % de celulosa; 31 -..32

o/o

o/o

de

sustancias libres de nitrgeno disuelto; 5,5 - 6,0 o/o de cenizas; o,3o/o de calcio;
0,62 - 0,65 % de fsforo; 2,O - 2,5 7o de fosfatos. Los constituyentes
principales son protenas, grasa y fsforo. La torta s obtiene mediante extraccin del aceite del frijol soya y su calidad depende de la fuente del frijol y del
proceso de extraccin.

2.7.7.3 Licor de papa

El lquido residual obtenido al prensar la pulpa de papa .en la produccin de


almidn se somete inicialmente a sulfuracin y fermentacin lctica, mediante
un cultivo de Lactobacillus delbrckii y luego se seca.. El calentamiento del licor
(Tabla 2.201 por encima de l0OoC y su subsiguiente enfriamiento origina un
precptado blanco-grisceo, formado principalmente por fosfatos de calcio y
magnesio, que interfiere la medicin del crecimiento microbial.

102

Tabla 2.1 I Cornposicn qumica


promedio del licor de maceracin
de mafz. (Liggett,y Kgffler, 1948)

(ardinal y Hedrick,

45,0

948)

rr.

edinocido t de nitrgeuo
Ntes de
Deepue de

Couponente

Agua

Tabla 2.19 Aminoidos prsentes


en el lcor de maceracin de ma2.

55,

htdr6lisis

htclrtr f

Leucina

5,86

,80

sie

N total

2,7

4,5

fsoleucina

3,42

,80

N amino

1,0

1r8

Valina

3,88

,85

Aeido

Sustancias 0,1
reducEoras

Acido

5,0

Ceniza
Acidos
voltiles

9,0
0,1

so,

11,

15,

glutmico

Treonina
t'

1ce{co

lt.

,97

5,.44

Lisina

0,3

Arginina

8,23

q;009 -

'0,

ejta

Ca
Cu0-

0,5

1r5

Histidina
Profina
Penil

Fe
ItIg

0,01 0, 05 -

Mn

o, 004

2,0

3,0

Metionina
Acido
asprtico
Cisteina
Alanina

lr0

2,0

Tirosina

0, 34

Zn

0, 0s

10,

1i.5

0,

001-

,. .9, 05

1r0

alanina

3,0

,9'7

4,75
2,05
1,07
L,6B
1-,22
27 ,'7

0,7'4

103

Tabla 2.2O Composicin del licor de papa. Sikyta, 1983.

Componente'

Sin fermentacin
Ictica

Coh fermentacin
lctica

Peso seco
Nit.rgeno total

72,'7

Nitrgeno amino
Sustancias'reductoras
Acido lctico

5,1
7,9
27 ,5
5,0

Cenizas

20 ,8

2.7.7.4 Extracto fermentado

,5
6,0
2,4
12 ,5
9,7
22,2
52

de salvado y aceite de semillas

El extracto fermentado de salvado y aceite de semillas (Tabla 2.211 se prepara

con salvado de avena, semillas molidas, agua, cido lctico y superfosfato.


Despus de seis das de fermentacin lctica a 50oC, el llquido se filtra y luego
se evapora al acfo.

Tabla

2.21

Composicin del extrcto de salvado y aceite de semillas (Zelinka,


1 960)

Componente

Peso seco

Nitrgeno total
Nitrgeno amino
Sustancias reductoras
Carbohidratos no reductores
Total de carbohidratos

104

7o peso/volumen

70,0
4,6
2,0
19,2
4,2
23 ,4

2.7.7.5 Extracto

de levadura

extracto de levadura (Tabla 2.221 se prepara mediante autlisis o plasmlisis


de la levadura de panaderfa o de la levadura de cervecerfa, El sabor amargo de
l levadura de cervecerla se remueve mediante tavado a pl'l entre 6,5 y 7,0; Las
clulas de la levaduia se mantienen viables durante las operaciones de tavado
y filtracin para prevenir la prdida de componentes celulares.
El

Tabla2.22 Composicin tlpca de un extracto de levadura. (Bridson y Brecker,

Componente

mg.g-1

Nitrgeno totaf
Nitrgeno amino
Cloruros, como NaC-].

75 34-48
0,7 -

Peso seco
Fosfatos , coro
Carbohidratos

105
13

300
PzOs

38
82

lva

56

30

Ca

0r

Fe

0, 05

Mg

Cu

0, 05

zn

0, 05

Mn

0, 005

Co

0, 005

La autlisis se realiza en grandes recipientes bajo agitacin continua. La


temperatura se incrementa gradualmente hasta 48 - 50oC y luego se mantene
en este nivel durante varias horas. Despus de la autlisis las enzimas son
inactivadas mediante calentamiento halta 75oC. La levadura entonces es
105

transferda a un recpente que contiene cloruro de sodio para inducir la plasmli-

sis.

El extracto contene entre 3O y 40 o/o de cloruro de sodio, en peso.


Finalizada la plasmlisis, las mer.nbranas y las paredes celulares son separadas
de la solucin mediante filtracin o centrifugacin. El lfquido se concentra
rpidamente, a temperaturas menores que 37oC, con el propsito de prevenir
la contaminacin y la degradacin de las sustancias termolbiles,
Una de las principales razones del inters de los industriales en fuentes de
carbono tales como metanol, etanol y cido actico, es su pureza. El costo por
unidad de masa de estos nutrimentos es mayor que el de los tradicionales, pero
los costos de recuperacin y limpieza son mucho menores. En la preparacin
de medios de cultivo definidos se utlzan compuestos puros tales como glucosa,
sulfato de amonio, metonina y fosfato monocido de potasio. La composicin
qumica de estos medios es conocida y reproducible, generalmente contienen
una sola fuente de cada elemento y los nutrimentos requeridos en cada caso
particular. Estos medios son utilizados en investigacin bsica y aplicada, y en
el desarrollo de procesos de fermentacin.

Una clase especial de medio definido es el denominado medio mlnimo,


constituido por una fuente de cada elemento y libre de otros nutrimentos no
esenciales. Un medio mlnimo contiene, por ejemplo, glucosa, sulfato de amonio
y otras sales minerales. En la Tabla 2.23 se presentan dos ejemplos de medios
definidos. La preparacin de estos medios facilita la exclusin de sustancias
txicas, o inhibitorias, y la inclusin de sustancias precursoras, o inductoras, en
las concentraciones adecuadas. Por esta razn cuando se utiliza un medio
definido, en lugar de uno complejo, se logra mayor productividad en los procesos que requieren control ambiental estricto.

2.7.8 Medios de cultivo definidos

Los medios de cultivo complejos contienen grandes cantidades de materiales no

fermentables tales como sales inorgnicas, carbohidratos no utlizables, ntrgeno y fsforo. Alfinalizar la fermentacin estos materiales deben separarse de
los productos y tratarse, factor que contribuye a la elevacin de los costos de
control ambiental.

106

2.7.9 Control

ambiental

En el diseo de una nueva planta de fermentacin, entre el 10 y el 15% de la


inversin de capital, y una porcin similar de los costos de operacin, estn
asociados con el tratamiento de efluentes (Cooney, 1982).

El estudio de las materias primas adecuadas para un proceso es un aspecto


importante de! estudio de los costos de tratamiento de efluentes. La tendencia
en la industria de la fermentacin es considerar globalmente el proceso e incluir
en el estudio de factibilidad tcnico-econmica los costos de preparacin de
materias primas, esterilizacin, fermentcin, sepracin y purificacin de productos y tratamiento de efluentes,

2.23 Ejemplos de medios definidos. A: medio mlnimo calculado para una


concentracin celular de 6 g/litro, con (NHo)rSOo como sustrato limitativo y
biomasa con 7,5o/o de l; B: medio para el eRsayo de lisina. (Difco Laboratories
lnc.)
Tabla

A:'

g.litro-1

Glucosa

g.litro-1

18,0
3,2
0,39

MgSOo

KH2P04

0, 68

IqHPO4

5,0
0,4
1,2

NACl

0, 008

NaCl-

FeSOn .'lH2O

,002

FeSOo .7H2O

0,02,

CuSOn.sHrO

0, 001
0, 003

CH3-COONa'

15 aminocidos

o, 1- o,

0, 028
0, 0002

4 nucletidos
10 vitaminas

,002
2.10-6 - 2.ao-3

(NH4 )

'SO{

MgSOn.TH2O

ZnSOn -7HzO

CaC1,

CoCIr.
MoO,

SHrO

GLucosa
NHAC1

50,

0
I

,02

40,

0
6

0, 00001

107

En el diseo de medios de cultivo se logra un efecto regulador del pH, mediante


la adicin de componentes con este propsito. Por ejemplo, una mezcla de
K2HPO4

2.8

KHTPO. permite el ajuste del pH alrededor de 7,O.

FORMULACION DE MEDIOS DE CULTIVO

prlmer paso,en la formrlacirin de.medbs.de G{tivoes Ia determinacin & l.a'


eonc*n8aein celular desedaen el fermentador.,"En la Tabla 2.24 se presenta

f[

un resumen de los intervalos de concentracin celular ms utilizados.

El

segundo paso es el conocimiento de la composicin elemental de la biomasa


{Seccin 2.4 y Eemplo 2.4l.. Eltercer paso es la determinacin de las fuentes
de cada elemento, utilizadas como nutrimentos, y la necesidad de factores de
crecimiento.
La cantidad requerida de una sustancia nutritiva se evala a partir del cono-

cimiento previo del rendimiento de sustrato en clulas, Y*,., (Seccin 2.5 y


Tabla 2.61. Pueden obtenerse experimentalmente valores de Y^,r, mediante la
relacin entre el incremento de biomasa y el sustrato consumido en un determinado perodo.
En un cultivo alimentado por lotes son fundamentales las masas y no las
concentraciones, ya que el volumen del cultivo varfa con el tempo. En un
cultivo continuo, en un reactor de mezcla completa (CSIR), operado como quimistato, el valor de Y*,. es el cociente de la divisin del valor de la concentracin de biomasa, x, por la diferencia entre las concentraciones de nutrimento en
la alimentacin y en el efluente. El valor de Yr,, depende de las condiciones del
cultivo. En aquellos casos donde no se dispone de datos experimentales, hay
que calcular o,estimar este valor, segn la ecuacin:
olo

Yrtt

o/o

cn la biomas
en el nutrimetfu

elcmento

elmento

12.41t

En esta ecuacin se supone que toda la sustancia nutritiva es utilizada en la


sfntesis de biomasa. Por tanto ninguna porcin de esta sustancia, en el caso de
la fuente de carbono y energa, se emplea para mantenimento y produccin.
108

La evaluacin de Yr,, para la fuente de carbono y energfa se fundamenta en el

concepto de electrones disponibles y grado de reduccin'(Seccin 2.3). Un


procedjmiento alternativo es la evaluacin delcoeficiente de rendimiento vrdadero de sustrato en clulas, (Y7s),, en medios mlimos y en medios complejos
(Seccin ?.5.7 v 2.5.81. La cantidad de cada nutrmento se calcula a partr de
la definicin del factor de rendimiento:
o=,F-

xF'

xo

Yrtt

12.43t

Donde, s: concentracin del sustrato, g litro-l; x: concentracin de biomasa, g


litro-i; el subndice o se refiere a la concentracin inicial y el subndice F a la
concentracin final,
,

lnicialmente se asigna un valor de cero a s.. Entonces los valores de s. obtenidos son multiplicados por un factor que oscila entre 1 ,5 y 2, excppto en el
caso del sustrato limitativo (Acevedo, 1987), Otro paso en la formulacin de
medios de cultivo es la deterrinacin de los rendimientos de sustrato en producto, Yr,., (Secciones 2.5.5 y 2.5.6). Un enfoque alternativo es la evaluacin
de Yr," mediante los conceptos sobre electrones disponibleS y grado de
reduccin (Seccin 2.3).
La optimizacin de un medio de cultivo, dado el elevado nmero de variables,
se realiza con la ayuda de procedimientos estadlsticos tales como el de BoxWilson (Box y Wilson, 1951) o elde Plackett-Burman, o mediante mtodos evoItrcionarios, como el Evop Simplex (Sierra y Acosta, 1987).

Ejemplo

2.9

Diseo prelmnar de un medio de cultivo

Realizar el diseo preliminar de un medio de cgltivo con el propsito de alcanzar

una concentracin de 14 (g clulas secasl.(litro de medio)'1, a partir de la


composici elemental de una cepa de mcroorganismos, columnas 1 y 2 de la
Tabla 2.25, y de las materias primas anotadas en Ia columna 3 de la msma
Tabla.

110

Tabla 2.25 Diseo preliminar de un medio de cultivo. Columna 1: lerhnto;


Columna Z g ele'mento (g clulas)-t; Columna 3: materia prima seteccionada y
respectivo peso molecular (entre parntesisl; Columna 4: (g elemento),(g nu-

trimento)-r; Columna 5: (g clulas).(g nutrimentol-1; Columna


mento).(litro de medio)-1.

6: (g nutri-

+rry,"vv
I \tb
1

N[^-'"
C

,493

c5H1206'

(180)

0, 145
0, 0g

12.l_0-3

(NH4 )

(L32, 'SO4
t)
Na2HP04

" (1-42)

Ca

FE

2L.10-3

9,576

P: 0,218

Pz 78,17

O,'77L

P: 8,48

'1,652

,6.10-3

(\7 4 ,21

I(:

CaCI, -2H2O

ca.0,273
c7:o i48z

Ca.45,5

0,308

5 - l-0-3

IUg:0;099
.S: 0, 130

M9=7,9,8

O,'t[l

(246 ,4)

2.L0-3

FeSOn.TH"O

Fe:0,20).

Fe:100,5

0,139

Cut 0 ,254
0 , L28

C32540

5,51.10-3

,246

Mn;492O

2,84.10-3

Co:

1,13'. 10-4,

MgSOn.TH2O

1.10-4

CuSOn.5HrO

(24e
Mrl

lV: 1,46

Pz 0,178

IqHPO4

,.Q77,9)
Cu

N: 0,21-2
.9: 0,242

Na.0,324

lt47l
Mg

C: O,49 28,747

,194

(0,4).f
= 0,24

5 . L0-s

, g),

MnSOn .4HrO

,449

0,.115

,S:

Iutn:0

.9: 0 ,]-44

(223)

rr

Co

2.L0-6

CoCJ-,.5H,O

(237 ,8)

Co:0,248
C7:0,298

)-24000

Contina

)
111

Tab1a 2.25 ConLinuacin

L234's
s

K
Na
c1

.'

12 - 10-3

11.10-3
5.10-3
5 - 10-3

Otros:
7,85.10

I
i

i
i

Solucin:
1- En los numerales anteriores se analza la necesidad de optimizar el medio de
cultivo y de seleccionar las materias primas por mtodos estadfsticos a partir
de datos obtenidos en el laboratorio y Ia planta piloto despus de un estudio de
la factibilidad tcnco-econmica del proceso.

El propsito de este ejemplo es realizar una prmera aproximacin hacia la


del medio, sin considerar los aminocidos, vitaminas y otros
"omposicin
nutrimentos especficos, ni las restricciones tcnico-econmicas.
2- La demanda de fsforo, 33.10-3 g de Pi.(O clulas)'1, columna 2, se reparte
en dos fracciones: 12.10-3 v 21.10-' g.g-', p"r" rr."utisfechas por los fosfatos
cidos de sodio y de potasio, y atender simultneamente las necesidades de P,

3- Los elementos H y O, aportados en exceso por elagua y los otros nutrimentos, no figuran en el balance.

4- En la columna 3 figuran las materias primas preseleccionadas y sus respectivos pesos moleculares.

112

5- En la columna 4 figuran los resultados obtenidos al dividir el peso de cada


elemento por el del respectivo compuesto seleccionado como fuente del
elemento.

6- En el caso del rendimiento de glucos"a en carbono (fila 1 y columna 4, Tabla


2.25!., el resultado obtenido al dividir el peso de carbono en la glucosa por el
peso molecular de la glucosa, se multplica por 0,6, En un proceso'aerobio, aproxima@mente un 60 o/o de carbono es incorporado a la biomasa, mientras el 40
% restante es liberado como COr, ya que la glucosa es tambin fuente de
energfa. En un enfoque atternativo, cuando se conocen ms datos del proceso,
se utlzan las ecuaciones de crecimento (Seccin 2.3.3).

7- En la columna 5 figuran los resultados obtenidos al dividir los valores de la


columna 4 por los correspondientes de la columna 2:
g'eleruenu

g rutrir,rtto _ g clulas
g ebnento g ruttrimenn
g cfulas
8- En la columna 6 figuran los resultados obtenidos al dividir la concentracin
deseada de clulas, 14 (g c|. secas).(litro)-1, por los correspondientes valores
de la columna 5:
14 g cL.
ltro netlio
g ca.
g unilo

g runinento

lito

medio

9- Determinacin del contenido de sodio:

s NqIPo+ o.gz4 s Na
,.n.,
'
ttttirnottto
lito

mtlb

I,

14 S cL.
litro nudio

cel.

113

10- Et contendo de K, Cl y S, se evala de manera similar al del sodio. Los


elementos Cl y S son aportados simultneamente por diversos nutrimentos y l
cantidad total, calculada, de estos elementos en el medio es:

K:

0,0529

K=

11.10-3

cL.

'

cL.

'

cL.

PROBTEMAS

2.1 En la Tabla 2.8 se presentan los resultados experimentales de un proceso


contnuo de fermentacin con clulas de Saccharomyces cerevisiae en un medio
limitado por etanol. Calcular el coeficiente de mantenimiento de etanol, ms, en

(mmol etanol).(g cl,hora)-l, y el coeficiente de rendimiento verdadero de


sustrato en clulas, Y*,r, en (g cl).(mol etanol)-l
.

2.2 Se utiliza un reactor de mezcla completa para producir anaerbicamente en


cultivo contnuo etanol a partr de glucosa. El alimento libre de clulas y de productos contiene glucosa y amonfaco. En el efluente del reactor salen continuamente etanol, COr, agua y clulas (composicin promedio: CH1,BlOo,s1N;1).
Calcular los requerimientos mfnimos de amonfaco y glucosa para producir 5
kg/minuto de etanol. Suponer que por cada mol de glucosa, 0,7 moles son
convertidas en etanol y el resto en clulas, CO, y agua.
2.3

Se utiliza un reactor de mezcla completa para producir en cultivo continuo,


bajo condiciones anaerbicas, glicerol a partir de glucosa y amonaco. Suponer

que el rendimiento de glucosa en CO, es de 0,54 moles de CO, por mol de

114

glucosa. Calcular los rendimietos de glucosa en producto, en (g glicerol)/(S


glucosa) y de sustrato en clulas (composicin: CH,,,r,rOo.u.,No,r,l en (g clulasl/(g
glucosa), y las velocidades de alimentacin de glucosa en (kg de glucosa)/(hora)
y de formacin de clulas en (kg clulas)/(hora), requeridas para producir 12 (kg
de glicerol)/(hora),

que el rendimiento de glucosa en clulas


glucosa).
(mol
Calcular los rendimientos de
de
de
clulas)/(mol
es de 1,8
glucosa,
respectivamente.
glucosa en COr, agua y glicerol en moles/mol

2.4 Suponei en el problema anterior

Calcular el rendimiento mximo de sustrato en producto, (Yrr.l6;^, en el


proceso de produccin de cido ctrico a partir de glucosa.

2.5

Calcular el rendimiento mximo de sustrato en producto, (Yr,")ror, en el


proceso de produccin de cido actico a partir de etanol.

2.6

Se utiliza un reactor por lotes para producir cido cftrico a partr de glucosa.
El rendimiento de sustrato en clulas es O,22 (g clulas)/(g glucosa) y el de

2.7

sustrato en producto 0,58 (g cido)/(g glucosa). Calcular el volumen de aire


estrl lf : 22 oC, presn : 16 psia) requerido para obtener 4800 kg de cido
ctrico por lote.

2.8 En un proceso aerbicO se obtienen clulas y un producto orgnico , a taz6n


de 1 mol de producto orgnico por.cada 3,4 moles de clulas, a,partir de
glucosa y amonfaco .como sustfato. Hallar la ecuacin de crecimiento
correspondiente a este proceso si se supone un rendimiento de ATP en clulas
Yxrrp : O,4O4 (mol C en clulas)/(mol / Tn : Yprrp : O,4O4 (mol C en
producto)/(mol ATPI. La formula global de las clulas es CHl,r,Oo,srNo,zz y la del
producto orgnico es CH,,,uroo,.rNo,rr.
,

115

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119

CAPITULO 3

TERMODINAMICA DE LOS
PROCESOS BIOOUIMICOS

3.1

PRINCIPIOS DE LA TERMODINAMICA

La termodinmica qufmica estudia los diferentes aspectos que tornan realidad

hacen que la misma se realice en trmnos de las


variaciones de energfa con ella asociadas. Estas variaciones en un sistema que
experimenta cambios qufmicos deben interpretarse en trminos de una
redistribucin de su contenido energtico entre las diversas formas de la energa
presente en el sistema, (Crocomo, 1975).

una reaccin qufmica

Un sistema es el conjunto de materia objeto de estudio. Todo lo dems en el


universo que no hace parte de ese sistema partcular es el medio. El sistema y
el medio forman el universo termodinmico. En ese universo la energa puede
pasar del sistema hacia el medio, y de este regresar al sistema. Ese flujo de

energa puede analizarse termodinmicamente en trminos del contenido


energtico del estado inicial del sistema, incluido el medio, y del estado final
despus de alcanzar el equilibrio. Los atributos mensurables del sistema tales
como temperatura, presin, volumen, masa y otros, responsables del contenido
energtco de cada estado, pueden relacionarse termodinmicamente mediante
una ecuacin de estado.

120

La termodinmica utiliza parmetros macroscpicos para analizar las variaciones

de energla y, por tanto, no requiere del conocimiento de la composicin molecu-

lar del sistema o su medio, o del mecanismo molecular mediante el cual un


proceso tiene lugar. Un anlisis termodinmico de las variaciones de energla
tiene en cuenta soamente los estados inicial y final del sistema, y es independiente de la velocidad de los procesos que ocurren, aspecto que debe ser
estudiado por mtodos cinticos.
Un sistema puede ser aislado, cerrado o abierto. Un sistema es aislado cuando
no intercambia matgria ni energla con su medio. Es cerrado cuando no
intercambia materia con su medio pero la energfa es libremente ntercambiada.
El anlisis de los sistemas cerrados es relativamente simple porque slo depende
de los estados inicial y final despus de alcanzar el equilibrio. El estado de un
sistema puede definirse en trminos de su presin, temperatura y composicin.
Las variaciones de energa estn drectamente rlacionadas con los intercambios
en la composioin material cuando la presin y la temperatura permanecen

constantes.

3.1

.1

Conservacin de energa

La primera ley de la termodinmica establece que "la energla totalde un sistema


aislado es constante, independientemente de las variaciones de su forma dentro
de ese sistema". En otras palabras, la energfa no puede ser creada ni destruida
pero puede sufrir transformaciones de una a otra forma como energfa calorfica,

luminosa, elctrica, mecnica o qulmica. El principio de conservacin de la


energfa incluye no solamente los sistemas aislados sino tambin los intercambios
de energla entre un sstema cerrado y su medio, una vez que el sistema cerrado
ms su medio, forman un sistema aislado,
La diferencia entre la energa potencial de los reactivos y la de los productos, en
una reaccin qufmica, es la energa liberada o absorbida por la reaccin. La
magnitud de esta energa depende de la naturaleza qufmica de los reactivos y
de los productos. Una parte de la energla es liberada como calor y otra como
trabajo, pero la suma de estas dos cantidades es siempre igual para una dada
cantidad de reactivo:

121

A,U=Ur*t-Un,a

t3.11

Donde AU es la variacin de energfa cuando el sistema cambia desde el estado


inicial hasta el final.

Un sistema ierrado realiza diversos tipos de trabajo sobre su medio, cuyas


cantidades pueden ser sumadas baio el trmino W (trabajol. La energa totaf
gastada por el sistema para realizar trabajo es. - W.
La variacin de la energfa interna de un sstema isotrmico, a presin (p)
constante, que simultneamente pierd energfa (- w) para su medio, y adquiere
enera bajo la forma de calor (+ O) a partir de su medio, es:

Donde,

w: trabaio realizado por

LU = Q -

el sistema;

o: calor absorbido por el sistema.

f3.21

La transferencia de energa entre dos sistemas se realiza medante flujo de calor


o de trabajo. La energa es una propiedad caracterfstica de un sistema. Elflujo

de calor o el trabajo no son propiedades de un sistema. uno de los tipos de


trabajo ms importantes en una reaccin qufmica es el resultante de una variacin def volumen del sistema, generalmente conocido como trabajo presinvolumen (trabajo PV).
La variacin de la energa de un sistema isotrmico que slo realiza trabajo
derivado de la expansin sobre su medio, es:
a - volumen constante;

4U=Q"

t3.3I

,U=eo_p.^V

f3.41

b - presin constante:

Donde, Ou: calor absorbido bajo volumen constante, sin expansin

sin

realizacin de trabajo; oo: calor absorbido bajo presin constante, cuando l'

nico trabajo realizado es el trabajo de expansin prsin-volumen; p.aV:


trabajo presin-volumen reatizado por el sistema sobre su medio como consecuencia de la expansin; aU: incremento de la energa interna del sistema.
't22

Cuando se consideran otras formas de trabajo (W'), la primera ley de la


Termodinmica se expresa como:

Finalmente, si

AU=Q-P.LV-fl

t3.51

LU=Q-P.AV

t3.61

W':0:

3.1.2' Entalpa

La energfa interna (U) .de un sistema es un atributo que depende del estado
presente del sistema, por ser una fpncin de estado. No se puede medir e.l valor

de U de un sistema cerrado en cualquier estado, pefo s es posible medir la


diferencia que U adquiere entre dos estados. En condiciones de presin
constante, el valor de Qo se calcula a partr de la Ecuacin [3.4]:

Qo=(Ur-Ut*P.Vz-P.Vt)
.?

Qo =

\U, + P.Vz) - (U, + P.Y1l

t3.7I
t3.81

(-O, es una funcin de estady, por consiguente, puede calcularse como

la diferencia entre los valores de una propiedad de estado, entre los estados inicial y
final.

(U + P.V) es la entalpfa (H) del sistema. La entalpa es una funcin


de estado. De acuerdo con la ecuacin anterior, la variacin de entalpa de un
proceso que se desarrolla a presin constante es:
La funcin

H=Qp=Hz-Ht

t3.91

El trmino AH expresa el calor liberado o absorbido por un proceso que se


desarrolla a presin constante. Si se libera calor hacia el medio la entalpa del
sistema disminuye (AH es negativo) y la reaccin es exotrmica, Si el sistema
absorbe calor (AH es positivo) y la reaccin es endotrmica.
1-23

3.1.3

Energa libre

La segunda ley de la Termodinmica fija algunas limitaciones a los tipos de


transformaciones de energa que ocurren en los procesos qumicos o fsicos, De
acuerdo con esta ley "las reacciones espontneas realizan trabajo til cuando
ocurren bajo condiciones apropiadas". Ese trabajO tl se expresa mediante la
energa libre (G).
Generalmente Se supone que un Sistema experimenta una reaccin espontnea
cuando pierde calor hacia su medio baio condiciones de temperatura y presin
constantes. Si este fuera el caso, todas las reacciones exotrmicas seran espontneas. Adems se supone que las reacciones endotrmicas no ocurren
espontneamente. Ninguna de estas suposiciones es correcta. La variacin de
entalpa, AH, que acompaa una reaccin no es una medida de la capacidad de
la reaccin para realzar trabajo til. Por otra parte el cambio de energa libre,
AG, que acompaa una reaccin es una medida de la capacidad de la reaccin
para reahzar trabajo adicional adems del trabajo PV.
Cuando AG es negativo el sistema pierde energa fibre, que puede ser utlizada
en la realizacin de trabajo. Cuando AG es postivo, el sistema recibe energa
libre y la reaccin no puede realizar trabajo, De acuerdo con la segunda ley, una
reaccin espontnea se caracteriza por la prdida de energa libre. La segunda

ley predice la direccin de una determinada reaccin, pero no predice su


velocidad. Cuando AG es negativo, la reaccin es exergnica. Si AG es
postivo, la reaecin es endergnica. Cuando AH es negatvo, la reaccin es
exotrmica. Si AH es positivo la reaccin es endotrmica.

3.1.4

Entropa

una reaccin exergnica no necesariamente es exotrmica, pero es espontnea


bajo condiciones de temperatura y presin constantes. Por consiguiente, la
cantdad'de calor absorbida o generada por una reaccin, cuando no realiza
trabajo til, AH, generalmente difere del valor de AG.

124

Esa diferencia comnmente es tan grande (Crocomo, 1975) que convierte a AH


en un trmino sin valor como lndice de espontaneidad de la reaccin. Por tanto,

debe ocurrir otra variacin en la distribucin de la energa, independiente de la


variacin de la energla libre. De hecho, la dferencia entre los valores de H y G,
puede atribuirse a una variacin smultnea en el valor de otra funcin de estado
del sistema, la entropfa.

La tercera ley de la Termodinmica establece que "en el cero absoluto, los


cristales perfectos de todos los compuestos tienen entropa nula". O sea, cuanto
ms ordenado es un sistema, menor es su entropla. La entropa (S) es una
medida de la desorganizacin de un sistema y es un valor que determina la
magnitud de la porcin de la energla de un sstema que es incapaz de producir
trabajo til. Bajo unas condiciones dadas de temperatura y presin, la variacin
de entropla, AS, es igual a la suma de las entropas de los productos menos la
suma de las entropfas de los reactvos. La expresin que relaciona el cambio de
entropla con los correspondientes cambios de energa libre y entalpfa, es:

AG=LII-T.LS

t3.10I

Todo proceso tiende hacia la direccin donde la entropa delsistema, ms la del


medio, aumenta, hasta alcanzar el equilibrio, punto en el cua! la entropa tiene
el mximo valor posible bajo las condiciones dadas de presin y temperatura.
El equilibrio puede definirse como un estado ms all de cual ninguna variacin
fsica o qufmica tiene lugar y en el cual la temperatura, la presin y la concentracin, permanecen constantes en todo el sistema. En otras palabras, en un
si*eoe--en,equilibrio se agota la capacidad de-l sistema

-p37Ea[egr1gutjo

sojlg_su_CIgdio. Un proceso que ocurre con aumento de entropa y alcanza el


equilibrio no puede sufrir una reversin espontnea y regresar a su estado nicial
ya que ese paso requerira una disminucin de la entropfa.
Todo proceso que ocurre con aumento de entropla es irreversible, mientras que
los procesos que ocurren sin variacin de entropa son reversibles. En nuestro
mundo fsico todos los procesos reales, incluida la vida, son irreversibles.
Las reacciones bioqufmicas tienen lugar en soluciones acuosas diluidas, bajo
condiciones de temperatura, presin y volumen constantes. Por consiguiente,

si el trmino P.AV es cero, entonces AH

= AU, y la Ecuacin t3.101

se

convierte en:

125

AG=AU-T.AS

t3.111

AU=A,G+I.As

13.121

Las dos ecuacones anterores son vlidas para condciones de temperatura,


presin y voluinen constantes. A medida que el sstema se aBroxima hacia el
equlibrio la nergla libre AG disminuye hacia su mnimo valor.
Un sistema bajo condiciones constantes de lemperatura y presin, intercambia
libremente energa con el medio, sin intercambio de masa. Cuando un sistema
sufre una variacin que lo lleva al equilibrio, la energfa total del sistema ms la
del medio permanece constante, aunque la energa del sistema solo, puede
crecer, permanecer constante o disminuir. Simultneamente, el sistema puede
cederle calor al medo, o recibir calor del rnedio. Ya se mencion que la entropa
del sistema, ms el medio, aumenta hasta alcanzar un mximo en el punto de
equilibrio. La entropa de un sistema que se dirige hacia el equilibrio no siempre
aumenta. Su valor puede aumentar, permanecer constante o disminuir Sllg
entrop del -cistema disminuye, en@ta
ellqna. santdad

tal que la suma de las variaciones de entropfa del sistema, ms el

,yAlr.,ir]61sorffi

medio,

.r"n,i6ilir_dili*y.!"ro

la del medio aumenf.

3.2

ANALSIS TERMODINAMICO DEL METABOLISMO


MICROBIAL

La termodinmica analiza las transformaciones de la energa, su metodologa se


fundamenta en la posibilidad de definir la calidad y la cantidad de energa de un
sistema mediante las funciones de estado, energfa interna U y entropa S, l-os
organismos vivos transforman la energfa radiante en los procesos fotosintticos,
o la energa qumica en los procesos bioqumicos, en otras formas de energa.
En estos procesos la energla fluye desde una forma de alta calidad, o de menor
entropa, hasta una forma de menor calidad, o de myor entropa y, de acuerdo
con la primera ley de la termodinmica, los procesos que ocurren en el sistema
no alteran la cantidad total de energa.

126

Para realizar su actividad metablca los organismos intercambian energfa con


el ambiente en la forma de sustancias qumicas y calor. En la Figura 3.1 se
representa esquemtcamente un sistema microbial con elpropsito de analizarlo
macroscpicamente. Las velocidades de flujo de masa de las sustancias
qumicas son representados por (Di, mol i.s-1; el
qJa
molar parpial, h;, kJ/(mol i), v
s,, kJ. (mol i. K)-1. El calor intercambiado con el ambiente se define como Oo, kJ.s1. Todos los

flujos son definidos como positivos cuando se dirigen hacia

sistema. Los subndices ".4" y

Figura

"F

3.1 Anlisis termodinmico

el

indican afluente y efluente respectvamente.

de un organismo, representacin

esquemtica

Micr oongonismo

En la descripcin macroscpica de un sistema, el cambio con respecto

al

tempo, de las denominadas cantidades extensivas tales como masa y energa,


puede expresarse mediante ecuaciones de balance, En el caso partcular de la
energfa interna U, la respectiva ecuacin de balance es:

Ut=v-4u

t3.13I

Donde, U': velocidad global de cambio en U, kJ.s-t; nu: velocidad de produccin

de energla de los procesos que ocurren en el sistema; {Dr: velocidad de


transporte de energa hacia el sistema. En condiciones estables U' es igual a
cero. Adems, de acuerdo con la primera ley de la Termodinmica, los procesos
de transformacin dentro de un sistema cerrado no alteran la cantidad total de
energa, de manera que rru : 0 y la ecuacin anterior se convierte en:
127

t3.141

0u=0

Segn esta cuacin, el flujo total de energa que un sistema en condiciones


estbles intercambia con el ambiente es cero.

Pueden distinguirse'diferentes contribucones


cqntenida.en las sustancias qumicas:

tDu:

el calor y la

energa

t3.151

0u=o+(rt.Qr)

Donde, rDo: velocidad de flujo de calor hacia el sistema, kJ.s-1; h,: entalpa molar
parcial, kJ.(mol i)-1; O: velocidad de flujo de masa de i, mol i.s'l.

Si en la ecuacin anterior se reemplaza Q, = 0 se obtiene la ecuacin

de

intrcambio de energfa entre un sistema en condiciones estables y el ambiente:

0a=-8,(,'0,)

t3.161

La ecuacin de balance de entropfa es:

S/

rs

t3.17I

+ 0s

Donde, S'; velocidad de cambio de entropa, kJ.(s.K)-1; nr: velocidad de


prduccin de entropfa; tD": velocidad de intercambio de entropa entre el sistema y el ambiente. En condiciones estables, S': 0, y:

ro=-0s
De acuerdo con la segunda ley de la Termodinmica

t3.18t

debe ser mayor que cero

para que el proceso ocurra y, en consecuencia, <Ds, el flujo de entropfa hacia el


sistema, es negativo. Pueden distinguirse dos contribuciones al valor de Q": el
cambio de entropfa asociado con calor, Qo/T, y el cambio de entropa asociado
con el transporte de sustancias qumicas, I,(tD,.s,l. (Roels, 1987):

.,=t:alg')

128

<o

t3.19I

Donde s,: entropfa molar parcial, kJ.(mol i.K)-1;

<D,:

velocidad de flujo de masa de

i, (mol i)/s; <Do: velocidad de flujo de calor, kW (1 kW : kJ.s-t); T: temperatura


absoluta, .K. En esta ecuacn se observa que la segunda ley de la Termodinmica (Qs < 0) no necesariamente significa flujo de calor hacia elambiente (<Do

negatvo) desde un sistema donde ocurre un proceso, como en e! caso de una


reaccin bioqufmica en un organismo.
Roels (1987) al referirse a la Ecuacin [3.19], expresai "Mientas los procesos
aerobios son impulsados por la produccin de calor, los procesos anaerobios son
impulsados por las diferencias de entropa de las sustancias qulmicas intercambiadas entre el sistema y el ambiente"

Los procesos endotrmicos donde el calor fluye desde el ambiente hacia el


sistema son posibles (Qo positvo) por la contrbucin de los flujos molares
parciales de entropa, que hacen negativo elflujo total Os. Cuando se reemplaza
rDq, de la Ecuacin [3,16], en la Ecuacin t3.191, se obtiene:
(o"gJ
0=- D

t3.201

Donde, gi: entalpa libre molar parcial, kJ.lmol )-r , defnda como:

&=h-I's,

t3.211

Donde, h,: entalpa molar parcial, kJ.(moli)-1; s,: entropa molarparcial, kJ,(mol
i.K)1.
De las ecuaciones t3.181 y 13.191, y la restriccin impuesta por la segunda ley,
se obtiene;

E(0.8J > 0

f3.221

Esta ecuacin expresa las restricciones de la primera y segunda leyes de la


Termodnmica al intercambio de sustancias qumicas entre un sistema en
condiciones estables y el ambiente, como en el caso del metabolismo microbial.
Una conclusin muy importante, impllcita en la Ecuacinf3.221, est relacionada
con aquellos compuestos que no manifiestan intercambio neto con el ambiente.
esto es, compuestos para los cuales O es cero y, por tanto, no afectan esta
ecuacin.

129

En la descripcin de los procesos que ocurren en un sistema microbial hay


numerosos compuestos que en situaciones normales no estn sometidos a intercambio con el ambiente, es el caso de los transportadores de energa, ATp y
NADH. En un anlisis termodinmico detallado de las diversas rutas bioqumicas
estos compuestos aparecen, pero en un tratamiento macroscpico. acorde con
la Ecuacin 1,3.221, estos compuestos no intervienen.(Roels, 1987).

3,3

ENERGIA LIBRE ESTANDAR

Las molcutas orgnicas complejas tienen ,n eleraOo nivel de energla potencial


originado en su alto grado de orden estructural. Cuando la molcula de glucosa
se oxida hasta CO, y HrO, cede energla libre, esto es, la forma de energa capaz
de realizar trabajo en condiciones de presin y temperatura constantes. Esta
energa qumica se recupera al sintetizarse, de nuevo, el trifosfato de adenosina,
ATP, formado a partir de difosfato de adenosina, ADP y el fosfato inorgnico,
Pi, en una reaccin enzimtica. El ATP, asl formado, se difunde hacia aquellos
puntos de la clula,. donde se requiere su energa.
La clula utiliza esta energa para realizar tres tipos de trabajo: sntesis qumica
de molculas grandes y complejas, transporte hacia el interior y hacia el exterior

de la clula o de sus orgnulos internos, de sustancias inicas y neutras, y


trabajo mecnico requerido para el movimiento y la divisin celular.
El cambio de energa libre, AG', de la reaccin qumica:

t3.231
Se expresa como:

L,

G'= A Go' + R.T ln d6.e"


a" -bi
-

Ig.24t

Donde: a, b, d,e: denotan las concentraciones molares de los compuestos A,


B, D, y E AG"': cambio estndar de energa libre en kJ.(mol)-1, cuando los
reactivos y los productos de la Ecuacin t3.231 estn presentes a temperatura
y presin normales, en concentracin 1 M, en una solucin acuosa de pH : 7.
130

Por esta razniel ltmo trmino de la Ecuacin t3.241 no n"i.iye las concentraciones de agua e H*, an en el caso de que estas dos sustancias sfiguren en
la ecuacin t3.231. El superndice prima denota evaluacin en una solucin

acuosa a pH : 7i o, B, 4 e, son los coeficientes estequiomtricos de la


Ecuacin 13.231; F: constante de los gases, F = 8,314 J.(gmol.K)-1; T:
temperatura absoluta, K. Las soluciones biolgicas son tlpicamente dluidas, y
por consiguiqnte, la Ecuacin 13,241se expresa en trminos de concentraciones
molares en lugar de las correspondientes actividades.
La reaccin expresada mediante la Ecuacin t3.231 se desarrolla en un sistema

cerrado de izquierda a derecha, si y slo si AG' es negatvo. Adems, AGo',


denota el cambio de energa libre estndar de la Ecuacin t3.231 en una solucin
acuosa neutral con todos los reactivos y productos presentes en concentracin
1 M. Esta consideracin es una aproximacin, ya que, ni la clula es un sistema

cerrado ni los reactivos estn presentes en concentracin 1 M, (Lehninger,


19711. En el equilibrio, AG' = 0, y la Ecuacin t3,241se convierte en;

AGo=-R.TlnK,

t3.25I

Donde Kr, es la constante de equilibrio. Esta constante incluye las concentraciones de agua e H*, a pH 7, cuando estas sustancias participan en la reaccin.
Debe tenerse presente que la direccin de una reaccin aislada no indica la
direccin de la ruta metablica. Asl, por ejemplo, en la siguiente reaccin,
(Bailey y Ollis, 1986), el cambio negativo de energfa libre favorece la formacin
de fosfato de dihidro-oxiacetona:

CHO
I

AG"'

CHOH

- - 7,658 kJ/mol

t3.261

cH2o- P
g1

iceraldehfdo-

fosfato dihidro -oxiacetona- fosfato

Donde P denota fosfato. Si se analiza la ruta Embden-Meyerhof-Parnas, EMP,


(Figura 1.3), el gliceraldehdo 3 fosfato es remo'.rido contnuamente mediante
reacciones que lo convierten finalmente en cido pirvico y la reaccin t3.26I
es forzada a realizarse de derecha a izquierda para mantener el equilibtio.

131

3.3.1

'

Energla libre estndar de hidrlisis de algunos compuestos

fosforilados

En laTabla 3,1 se presentan valores de la energa libre estndarde hidrlisis de

algunos compuestos fosforilados. Las reacciones qufmicas exergnicas (variacin de energla libre estndar negativa) se verifican en la direccin en que se
hallan escritas si se inician con todos los componentes en concentracin 1 M.

Tabla

3.1 Energa libre estndar de hidrlisis

de algunos compuestos

fosforilados. (Lehninger, 1973)

AG'', kJ

Compuesto

Fosf
1.3

oenol-piruvato

67,9

-Difosfo-glicerato

49 ,4

Fosfocreatina

43,1,

AcetiLfosfato

42 ,3

Fosfoarginiha

32 ,2

ATP

30,5

Glucoso-1-fosfaEo

20 ,9

fosfato

Fructoso-

Glucoso-

fosfato

1- f osf

ato de gI iceri

Direccin de
transfelencia
de! grupo fosfato

1_5

,9

13,8
l-o

9,2

El calor slo se,,.convierte en traba.io cuando fluye desde un cuerpo a mayor


temperatura hacia otro a menor temperatura, pero los organismos vivos son
esencialmente isotrmicos y, por consiguiente, la energla liQgrada en la oxidacin de un combustible tal como la glucosa, se conserva en forma de energla
qumica para realizar trabajo rltil en condiciones isotrmicas.

132

- .i ?

3.3.2 Energa libre estndar de algunas reacciones biolgicamente


mportantes
En la Tabla 3.2 se presentan valores de la energa libre estndar de algunas

reacciones biolgicamente importantes. Se observa, en la Tabla, que las


reacciones de oxidacin, son las reacciones productoras de energa ms
importantes del metabolismo, ya que se realizan con disminucin relativamente
grande de energfa libre estndar.
Tabla

3.2

Variacin de la energfa libre estndar de algunas reaccones qulmicas


(pH = 7,O;f = 25oC). (Lehninger, 1973).
AG"., KJ

Reaccin

Hidrlisis:

- nhtdridoE de cl,do
- EBereE
Acetato de etilo + HrO --> etanol + acetato
Glucoso-5-fosfaEo + HrO -> glucosa + fosfato
- Anldag
Glicilglicina
- Gluc6sidog

+ HrO ---> 2 glicocola

Sacarosa + HrO ---> glucosa + fructosa

- L9,7
- 13,8
-

9,2

- 29,3

ReordenacLn:

Fructoso-6 fosfat.o -- > glucoso-6-fosfato


Elinl.naci6n:
Malato
-> fumarato + H2O

- 1,7
+ 3,1

Oxldaci6n:

Acido pal-mt,ico + 23 O" --> 16 CO, + 16 HrO

- 9784,5
133

3.3.3 Ciclo eirergtico d'las"clulas

tos tres ncletidos: ATP, ADP Y AM? representados en la Figura 3.2, estn
presentes en todas'las clulas. La suma de sus concentraciones es relativamente constante, en la niayorfa de las clulas vara entre 5 y 15 mM.

Figura

3.2 ATP, ADP v AMP,

a pFt ZO. Los enlaces ricos en energfa aprecen


representados por el sirbOlo -,(Lehninger, 1973).

o- o-

o-

o1l

oil

llt o-P,-.o-P:o_cH,
-g-Poil

1.,

K.,H

OH

O}I

ATP

Complejo de

Mg" y ATP

,MS:'

ttr

-O-P - O-P - O-P-O-

llillr
ooo

Ribosa-Adenina

sin embargo, las proporciones relativas de ATp, ADp

y AMp en la clula varan


considerablemente de acuerdo con su estado metablco. Los nucletidos ATp
y ADP estn presentes en la clula como complejos: MgATp2- y MgADp-, a
causa de la afinidad de los grupos pirofosfato por los cationes divalentes y por
la elevada'concentracn de Mg2* en el fluido intracelular.

134

Un indicativo til del estado energtico de una clula es la carga energtica


(Atkinson, 19771:
corga energti* =

3.271

ffi

Asl, por eiehplo, una clula "plenamente cargada" con ATP como

nico

nucletido tiene una carga energtica de 1,0. Si las concentraciones de los tres
nucletidos son iguales:

\ATPI:IADP):IAMP)
y la carga de energa es 0,5, (Bu'lock y Krstiansen, 1987).
,l
En la mayorfa de las clulas el valor de la carga energtica vara entre 0,87 y
0,94. La carga energtica alcanza su mfnimo valor cuando las clulas estn en
la fase exponencial del crecimiento, en este caso el ATP es utlizado tan pronto
como se forma. A medida que la velocidad de crecimiento disminuye, aumenta
la cantidad relativa de ATP, y la mxima carga eriergtca se alcanza cuando las
clulas termidan su crecimiento y todo su ADP y AMP es convertdo en ATP.
La posicin intermedia del trifosfato de adenosina, ATP, en la escala termodin'

mica de energas del enlace fosfato (Tabla 3.1) y la especificidad de las enzimas

de transferencia del fosfato hacia el difosfato de adenosina, ADP, o hacia el


ATP, demuestran que el sistema ADP-A IP es el intermediario comn obligatorio
en el transporte de los grupos fosfato, desde los fosfatos de elevado ninel energtico formados durante el catabolismo, hasta los receptores de fosfato de baio
nivel energtico.
El 1 ,3 difosfoglieerato y el fosfoenolpiruvato, formados durante la degradacin

anaerobia de la glucosa hasta cido lctico, en lugar de experimentar hidrlisis


en la clula intacta, ceden su grupo fosfato mediante enzimas especlficas, para
forma ATP:

l,3difosfoglicerato + ADP

fosfoenolpiruvato

(:=)

+ADP (::)

3fosfoglicerato + ATP

aG"':-18,9kJ

t3.281

piruvato +ATP
AGo'

= - 31,39 kJ

I3'29I

135

Donde la reaccin t3.281 es catalizada por la enzima fosfoglicerato-quinasa y la


t3.291 por la piruvato quinasa. La.energfa liberada por los steres fosfrjcos
provicrie, no de los enlaces que se rornpen, sino del hecho de que los produc,tos
tidmi,'rnenor energb lhre flotafiiie tos reactivos ,. ,t Q o'1o v z ty't a cr
Hay muchas enzimas que catalzan la transferencia de un grupo fosfato, desde
el ATP hasta aceptantes especficos de fosfato; para formar compuestos de ba.io
contefldo de energa:

ATP + glicerina --gliceroguinasa--> ADP + l-glicero-3-fosfato

...AG"': -21,3kJ
ATP + D-glucosa --hexoquinasa--->

t3.301

ADP + D - glucoso-G-fosfato
...4G"': - 16,7 kJ
t3.311

La variacin de la energa libre total de una reaccin es la diferencia entre las


energfas libres estandarizadas de hidrlisis de los reactivos y de los productos.
As, por ejemplo, en el caso de la reaccin [3.28], los valores de AG"' para 1,3
difosfo glicerato y ATP, son respectivamente, - 49,4 y - 30,5 kJ/mol, (Tabla
3.1). Por consiguiente, el cambio de energa libre de esta reaccin es: - 49,4 (- 30,51 = - 18,9 kJ.

y D-glucoso-6(Tabla
fosfato, son respectivamente 30,5 y 13,8 kJ,(mol)-J,
3.1). Por consiEn el caso de la reaccin t3.311, los valores de AG"' paraATP

guiente, el cambio de energa libre de esta reaccin es: - 30,5 -(- 13,81

-16,7

KJ,

Generalmente el ADP es el producto de las reacciones gue utilizan ATP en la


clula, y el ADP es el aceptante direqto del fosfato en las reacciones que ceden
energa. Algunas reacciones utilizan ATP y dan lugar.a la formacin de monofosfato de adenina Mn y pirofosfato lPPil, como en el casode la activacin
enzimtica de un cido graso para formar su ster con el coenzima/:

+ CoA-SH+ATP (::>
cido coenzima
graso A

R.COOH

136

AMP+PPi +

R-CO-S-CoA

Acil-CoA del
cido

graso ---l

...t3.321

El pirofosfato inorgnico experimenta hdrlsis, por accin de la pirofosfatasa,

y forma dos molculas de ortofosfato inorgnico:

PPi

+ H2O ---> 2 Pi

En las reacciones de biosfntesis el .4 TP cede energa medante la liberacin de


un grupo ortofosfato, Pi, o de un grupo pirofosfato, PPi, para convertirse en
ADP o en AMP, respectivamente. El AMP se refosforila hasta ADP por accin
de la enzima adenilato-quinasa, conocida tambin como mioquinasa:

AMP+ATP <::)

3.3.4

2ADP

...t3.34I

Energa libre estndar de hidrlisis del ATP

La hidrlisis enzmtca del grupo fosfato terminal del ATP da lugar


formacin de ADP y su fosfato inorgnico P/:
ATP + HOH.> ADP + Pi

...AG'' = - 30,5

kJ/mol

a la

t3.351

Anlogamente, la hidrlisis del ADP da lugar a la formaci6n de AMP y su fosfato


inorgnico Pi:

ADP + HOH.> AMP + Pi

...4G"'= -30,5 kJ/mol

t3.361

Donde el valor de la energa libre estndar de hidrtisis del ATP, o del ADP, LG'
: - 30,5 kJ/mol, supone que el pH es 7 ,O; la temperatura 37 oC; que hay iones
Mg2* en exceso, y que los reactivos y productos estn presentes en concentracin lM. EI valor estndar de AGo' = - 30,5 kJ, no es aplicable en las
condiciones de la clula ntacta, donde el pH y la concentracin de Mg2* difieren

de las condiciones estndar. Adems, las concentraciones de ATP, ADP y

'137

fosfato en la clula intacta no son 1 M. El valor de la energta libre de hidrlisis


delATP en una clula intacta, en condiciones reales, es - 52,31 kJ, (Lehninger,
1973l., valor obtenido despus de efectuar las correcciones para pH, y concentraciones de Mg2*, ATP, ADP y fosfato, en elfluido intracelular. La energa libre
de hidrlisis del ATP no es constante sino que vara con la edad y el sitio dentro
de la clula y con las concentraciones locales de Mg2* , ADp y fosfato,

3.3.5 Principio de! intermediario qumico comn

ATP acta en la clula como un intermediario qufmico comn al conectar las


reacciones liberatorias de energla con las reacciones que la precisan. Este
mcanismo se muestra en las dos ecuaciones siguientes, donde Xrepresenta un
donante de grupos fosfato, I es un aceptante, Er y E, son las enzimas
especficas que transfieren fosfato, y P representa el grupo fosfato:
El

--) X + ATP

t3.371

ATP + Y --E, --> ADP + Y-P

t3.381

X-P + ADP -- E1

La ecuacin t3.351 muestra que la hidrlisis del ATP libera una elevada cantidad
de energfa libre y, al invertir la reaccin y aadir fosfato al ADp, se almacena
energa libre para ser utilzada posteriormentg.
El concepto de intermediario qufmico comn se ilustra a continuacin mediante

un ejemplo tomado de la ruta Etnbden-Meyerhof-Parnas (Figura 1.3). En este


caso se utiliza la oxidacin de un aldehdo, en medio acuoso, hasta cido carboxlico, reaccin que produce un cambio de energa libre de 29,3 kJ/mol, energa
qufmica que sera disipada en una solucin aislada:

R-CHO

138

HOH

--> 2H + R-COO-+ H*
..AGo' = - 29,3 kJ/mol t3.39I

Esta reaccin no ocurre en la clula viva, En la oxidacin bioqumica, cuando


el 3 fosfogliceraldehdo se convierte en cido carboxflico (3 fosfoglicerato), se
recupera enzimticamente ATP a parltir del ADP. Por consiguiente, la oxidacin
del aldehfdo hasta cido carboxlico se realiza prcticamente sin cambio de
energfa libre:

R-CHO

H{PO4)2-

ADP3'

---> 2H + RCOO +

ATP4-

AG'': 0

t3,4OI

La energa capturada por la clula se obtiene al restar la Ecuacin 13.391 de la


Ecuacin t3.401:
ADP3-

Ejemplo

3.1

H(PO4)2-+ H*

-->

+ HOH
AG"': + 29,3 kJ/mol ..t3,41I

ATP4-

Eficiencia de la clula en el proceso de captura de


energa en la reduccin de pituvato hasta lactato

Los microorganismos obtenen energa mediante la degradacin delcido lctico,

en el proceso anaerobio de reduccin del piruvato hasta lactato, por accin de


la enzima lactato deshidr"ogenasa:

2 Piruvato + 2 NADH

+2H'->

2Lactato + 2 NAD*

...13.421

Calcular la eficiencia de la clula en el proceso de captura de energa.

Solucin:

- La ecuacin global de la gluclisis por la ruta EMP es:


Glucosa

+'2 NAD* + 2 ADP + 2 Pi --->


2 Piruvato + 2 NADH + 2 ATP + 2'H2O + 2Ht

...t3.431

139

- La ecuacin global hasta lactato es la suma de las dos ecuaciones anteriores:

Glucosa

+ 2ADP + 2Pi --> 2Acidolctico + 2ATP + 2H,O


AG"': - 135,6 kJ.(mol glu.)

...f3.441

- Esta ecuqcin se descompone en dos procesos:


a- degradacin de la glucosa:

Glucosa

--> 2 Acido lctico AGo'= - 196,7 kJ.(mol glu.)1

...t3.45I

b- energa capturada por la clula:

2Pi + 2ADP-> 2ATP + ZHrO AG"': + 61,1 kJ'(mol glu.)-l ..'t3.461


Aparentemente la efciencia de la clula para capturar energla es: (61 ,11196,71x100 = 31 ,1 o/. La eficiencia real del proceso s, aproximadamente, 53 o/o. Este
valor se obtiene mediante la correccin de los datos de energa libre para las
concentraciones y pH predominantes en el sistema vivo. (Bailey y Ollis, 1986).

3.4

EVALUACION DE ENTALPIA Y CALOR DE COMBUSTION

3.4.1 Datos termodnmico5 de algunos compuestos


repf esentativos

La evaluacin numrica del balance de energa de un proceso bioqufmico slo


es posible mediante datos de entalpfa y contenido de entalpa libre de los
compuestos que participan en el metabolismo. En numerosas aplicaciones del

balance de energa se utilzan valores de las cantidades termodinmicas en


qondiciones estndar de temperatura y presin (generalmente 298,1 5 K y
140

101,325 kPa, respectivamente) con los reactivos en concentracin 1 M' Estas

condiciones. no son apropiadas para describir la energfa de un sistema microbial,


donde las concentraciones del ion H* y la del agua difieren ampliamente del

valor 1 M.

Tabla

3.3

Datos termodinmicos de algunos compuestos representativo'


(Roels, 1987).
ago

Compuesto

ago

kJ/mol

Acido frmico
Acido actico
Acido palmftsico
Acido ]ctico
Acido glucnico
Acido oxIico
Acido succfnico
acido mIico
Acido cftrico
Glucosa
Metano
Etano
Pentano
Metanol

cH2o2

28L

CxHaO2

94,

c]6H3202

9800

c3H603

L377
2667

c6Ha2o.7

327
1599

c2H2o4
c4H604

L444
2L47
2872

c4H6os
c6H8o7
c6H12o6

8L8

CHn

1467
3385
693

CrH.

CrH.,
cH4o

EtanoI

c2H6o

13 19

GIiceroI

c3H803

l-643

Amonio

NHnt

Acido nitroso
Acido ntrico
Sulfuro de H
Acido sulfuroso
Acido sulfrico

HNO,

Biomasa

cHl,

355

8L,4
7,3

HN03

323

H,S

-249
-507

H2S03
H2SO4
8oo . sNo

,2

54L

236
844
9583
L322

255
876
9989
1359

2593

238
1500
1345
1998
2843
813
14 5 8
3367
682
1308
1629
316
41

246
1493

7329
]-963
2807
892
1-562

3533
728

1369
1663
383

,5

- 32,5
243
-329
-587
536

30

247

-329
-602
56 0

141

Los datos termodinmicos basados en cantdades molares parciales no son una


propiedad de una sustancia dada. Estos datos estn relacionados con las
propiedades de una mezcla integral y con las concentraciones de los componentes presentes en el punto donde ocurren las reacciones qumicas. Por consiguente, en diversas aplicaciones, las condiciones estndar son modificadas de
manera que la entalpa libre y la entalpa del agua son evaluadas como las
correspondientes al agua lquida libre, y para la concentracn de ion hidrgeno
se utiliza el valor correspondiente a pH 7,0. Estas consideraciones slo afectan
los cambios de entalpfa libre, ya que los cambios de entalpla son menos
dependientes de la concentracn de los reactivos involucrados.
En la Tabla 3.3 se presenta un resumen de datos termodinmicos de algunos
compuestos representativos. En la Tabla: ago, es la entalpa libre de combustin
referida a condiciones estandarizadas en el sentido estricto, kJ.{mol) 1; ago', es

la entalpa libre referida a las concentraciones modificadas de ion H* y agua;


AHo, es el calor de combustin evaluado bajo condiciones estndar.

3.4.2

Calor de combustin

Diferentes autores (Erickson, 1980; Ho y payne,lg.7g), han observado que el


calor de combustin de la biomasa microbial por electrn disponible, aHr,r, es
prcticamente constante. Ho y Payne (1 979), informaron un valor promedio de
- 26,8 (kcal)/(electrn equivalente), (- 112,2 kJ/electrn), dentro de un intervalo
entre - 26 y - 31 kcal/electrn.
En ausencia de datos experimentales, el calor de combustin de las ctulas y el

de otros compuestos orgnicos, se calcula como la energla obtenida por la


transferencia de electrones, desde un compuesto con grado de reduccin l-,
hasta compuestos como el co, y el agua con grado de reduccin cero. Roels
(1987), presenta las siguientes ecuaciones para estimar datos termodinmicos
con una razonable aproximacin:

kl

^fl,=-(115)r mol C

142

kI
AII"=-(115).lVEd
' 'molfucompucsto

^c:=La

Ecuaci

(94,.f + 86,6) k/
twl C e cl comptusto

n ,r.OT expresa la proporcionalidad

13.471

t3.48I

directa entre el calor

de

combustin del compuesto (por mol de carbono) y sus respectivo grado de


reduccin, o sus respectivos electrones disponibles, Nro.
La Ecuacin t3.481 permite calcular la entalpfa libre de combustin (por mol de

C en el compuesto). Estas ecuaciones indican que las entalplas libres de


combustin de los compuestos con menor grado de reduccin, como la del
cido oxlico, exceden los respectivos calores de combustin, mientras que lo
contrario ocurre con los compuestos con alto grado de reduccin, como en el
caso del metano. Este comportamiento se explica por la contribucin de la
entropa a la entalpa libre de combustin (Ecuacin 3.211.

El calor de combustin de las clulas y de otros compuestos orgnicos se


calcula a partir del oxgeno requerido para su combustin, segn los conceptos
mencionados anteriormente sobre energla disponible por electrn equivalente:

r, _

A rlzt6

4E

L,H^
'v=

26,8 keal

112,2kJ

elctn

electrn

t3_49I

kJ
.l_*"t gn*
- 112,2
elcctn mol O,

t3.50I

LHo =

- ffi,74

H
mol O, consumido

Donde, AHo: es el calor de combustin evaluado sobre la base del oxgeno


consumido.

[3.50], es un valor promedio, similar a los


443,7
valores tercos informados:
v 452,1 kJ.(mol Orl-'y cercano del valor
determirrado experimentalmente: 5'19,1 kJ.(mol Or)'', (Nagai, 1 979).
El valor de AHo dado por la Ecuacin

143

L~s. Ecuaciones [3.491 y [3.501 expresan el calor producido en cualquier clase


de cultivo, sumergido o. semislido, cuando 'en el proceso nicamente se
produce biomasa sin la formacin de productos no celulares .

Servizi y Bogan ( 1961 ), observaron que la energa estndar libre de combustin,


t.G, de numerosos compuestos tales como carbohidratos, intermediarios del
ciclo del cido tricarboxlico y algunos productos de la gluclisis, es:

AG"

= -

(485,6).M0

kJ

(3.51J

mol sustrato

()onde, M 0 : moles de oxgeno requeridos _para la oxidacin completa de 1 mol


de su~trato.
La energa estndar libre de combustin de los compuestos aromticos, alcohles y cidos alifticos, es:

AG" = - (435,3).M0

kJ

(3.52]

mol sustrato

Segn Hattori (1973), el valor de M 0 es:

Mo=~
32

(3.53)

Donde, DQO: demanda qumica de oxgeno, gramos de oxgeno por mol de


sustrato.
La energa estndar libre promedio de sustratos combinados se calcula mediante
la siguiente ecuacin:
[3.54)
s se calcula a panir
de reduccin de la
Donde: M;: moles del i-simo sustrato; t.G;: energa
completa del sustrato i.

144

(A HJc =

3,5

CALOR DE REACCION

cultivo industrial es un
ya que este calor
y
fermentador,
un
de
operacin
diseo
aspecto importante del
para
mantener la temperatura ptima de crecidebe removerse continuamente
miento. Sin embargo, la determinacin experimental del calor producido en una
El conocimiento previo de la produccin de calor en-un

fermentacin slo es posible a pequea escala, debido


prcticas del anlisis calorimtrico'

a las dificultades

*'1'J ni"L-{"< (ti'""l


r,:4l'irl,#7,
7a;
'o@fot

''

producido'durante el )%?ra"
La determinacin indirecta del calor de reaccin,
aalian+a
.,^ l..atana
la entalpa:
anfrlna'
a)
-^^l:-^
- -- -r-.-'---L^^
de
un
balance
se realiza mediante
crecimiento microbial,
-:^-^L:^l

HR =

A I,.(-As)

- AEP.AP -

AII,,AX

t3.s5I

Donde, AH^: calor de reaccin qeatopedr*c(o.durantael-clecirnieotQ, kJ.l-1;


y AH*: calor de combustin del sustrato, los productos y las clulas,
aHs,
^Hp
respectvarnente, kJ/mol; As, Ap y Ax: concentracin del sustrato, los productos y las clulas, respectivamente, mol/litro. La ecuacin [ 3.55], escrita sobre
ia base de 1 mol de C en el sustrato, se convierte en:
(^

nJ.

(A

rJ. - (rpd". (a Ep), - (yxd". (L rr )"

13.561

Donde, (AH*)": calor producido durante el crecimiento microbial, o calor de


reaccin, evaluado sobre la base de 1 mol C en el sustrato, kJ.(mol C en el
sustrato)-1. (Y*,.t": rendimiento de sustrato en clulas, mol C en cl.(mol C en el
sustratol-1; (Yr,r)": rendimiento de sustrato en producto, mol C en producto.(mol
C en el sustrato)'1; (AHs)", calor de combustin del sustrato, kJ'(mol C en el
sustrato)'l; (AHr)": calor de combustin del producto, kJ.(mol C en producto)-1,
{valores de la Tabla 3.3 divididos por el nmero de tomos de C en el respectivo
compuestoli AHxr = -26,8 (kcal)/electrn: -112,2 kJ/electrn; (AH*)": Calor
de combustin de las clulas en kJ.(mol Cen cl)'1. El calor de combustin de
las clulas se calcula a partir de la Ecuacin [3.49] y
el grado de reduccin de Ia biomasa:

(^ H)" = -

112,2

#r-

elcctrn

mol C cl

t3.571

145

f
t'

il'
J

3.6

3.6.1

DSIPACION DE ENERGIA Y EFICIENCIA TERMODINAMICA

Disipacin de energa

f(
,L,V

r\

(.

Los electrones no'conservados en la biomasa constituyen la fuente de energfa


disipada en el proceso de crecimento (Roels, 1987):

<

{
\
{
\
*

T.tr, = (a c'')r.(0r.I,

0x.Ix

'*.)
)'A-'

t3.581

Donde, nr: produccin de entropla, kJ.K'1.s'1; (Ag"')ro: cambio de entalpa libre


para la transferencia de un ml de electrones entre el sustrato y e aceptante de

los electrones, kJ.(mol electrn)'1, (Tabla 3.4); T: temperatura absoluta, K.


Roels (1987)-define la energfa,disipada en el proceso de crecimiento mediante
la funcin de disipacin D:

D=+=(Le")r.

t3.59I

Donde, D: funcin de disipacin, kJ.(rnol C en cl)-1; tD*: velocidad de flujo de


clulas, mol c|, s-1; M,.: peso moeiular de las clulas, (g c|. secas).(mol C en
cl)-r; Y*,..: factor de rendimiento de los electronps disponibles, g c|.(mol electrOnllrJfcuacin 2.331; l-^: grado de reduccin de la biomasa: electrones dispgnibles (mol C en clulas)'1.

3.6.2

Eficiencia termodnmca

flujos de materia que abandonan un sistema


no puede exceder la entalpa libre de los flujos combinados de materia que
entran al sistema. La energla y una funcin de estado derivada, tal como la
entalpfa libre, no tienen un valor nico y slo pueden determinarse con respecto
a un nivel de referencia.
El contenido de entalpa libre de los

146

Una base realista para el nivel de referencia de los microorganismos, es la


energfa contenida en una mezcla deCO", HzO, N2 y Oz, ya que en ausencia de
otras formas de energa,- diferentes de la energla qulmica, los organismos no
pueden obtener energla til de tal mezcla para su metabolsmo. La entalpla libre
o contenido de entalpfa de un compuesto qufmico con respecto a este nivel de
referencia es, por tanto, igual a la entalpa libre o entalpla (calorl de combustn
hasta COr, HrO, y Nr.
Una vez definido el sistema de referencia, la eficiencia termodinmica se define
como la relacin entre la entalpa libre de fs flujos de materia que salen del
sistema y la correspondiente entalpa libre de los flujos combinados de materia
que entran al sistema.
Roels (1987), define la eficiencia termodinmica, con respecto a la produccin

de biomasa, como:

rlr

(Le')
=

(ag")",

cx

t3.601

+D

Donde, (Ag"').*: entalpa libre de combustin por mol de C en la biomasa,


kJ.(mol C en cl)-1, (Ecuacin 3.48); D: funcin de'disipacin, kJ.(mol C en
clulasl-1, (Ecuacin 3.59).
En la Tabla 3.4 se observa, en el caso de crecimiento aerobio, que el cambio de
entalpla libre por la transferenca de un mol de electrones, Ago', es prcticamente igual al cambio de entalpfa (calor de combustinl, (Ah"').. La produccin
de calor es casi iguaf a la disipacin de energa libre y un tratamiento en funcin

de calores de combustin es suficientemente exacto, En el

crecimiento
anaerobio, los valores de (Ag"'le son mayores que los de (Ah"')e, (Tabla 3.4).
Si adems se considera que la disipacin total es similar, tanto en los procesos
aerobios como en los anaerobios, entonces la produccin de calor por unidad de

biomasa producida es menor en los procesos anaerobos. En la Tabla 3.4


tambin se observa que el crecimiento aerobio sobre sustratos altamente
reducidos tales como metano, metanol y etanol, se desarrolla con mayor
produccin de calor y por consiguiente con menor eficiencia termodinmica,

147

Tabla,3.4 Disipacin de calor y de entalpa libre, y rendimiento en biomasa de


los electrones disponibles, para diversas combinaciones entre el sustrato y el
aceptante de los electrones. (Ah")rr: disipacin de calor bajo condiciones
normalizadas de temperatura y presin con los reactivos en concentracin 1 M;
Yr,ro: rendimiento de los electrones en biomasa, g clulas. (electrn dsponiblel-1;

(Ag.'lro: cambio de entalpla libre baio condlciones modificadas (la entalpa del
agua se toma como la del agua lquida libre y la concentracin de H* es la
corres-pondiente a pH 7; (Roels, 1987).

Sustrato

Aeeptante de
Ios electroneg

o2

111,5
LzL ,3
]-t4 ,1

u2

L18,I

Metano

o2

Metanol
EtanoI

o2

icerol
Acido Ictico
Gl

Glucosa

ecldo succfnico
Acido ctrico
Acido m1ico
Acido frmico
Acido succnico
lcido succfnico
Acido succfnico

Affru
kl (nol

o2
w2

o2
o2

o,

v2

(NO3)- -->
(NO2)- -->

N2

114,1
1t6 ,7
L06 ,6
109,1
110,8
127,5
100,6

N2

A9"'.i

Y4a

electr6n) 9/e
101, 6
1]-3,7
109, 0
l]-6 ,4
110, 1
118,5
]-07,L
111, 0

LL2,t
118,0
100,6
727,0
107,1

,56

2,27
, 2 ,l'7
3,55
,26
,84
2 ,90
3,09
, 3, 18
3
3

3,t7
2,28
2 ,77-

Glucosa,
Glucosa
Glucoga

CO, (etanol) *
CO, (cido lctico)
CO, (propinico/

2,9
2,9
7,6

t2,9

2,76
3,26
0,88
0,81
7,48

Glucosa

cido actico)
Co, (metano/
cido actico)

6r7

i4 ,4

1, 63

-2 ,0

3,9

0,36
0, 91
0 ,27
0 ,4L

Gfuconato

Acido actico
Metanol

Acido frmico
Acido propinico

o2

106,6

7L7

o2

CO, (metano)
CO, (metano)
@, (mtano)
CO, (metano)

9r

l-5,0
-2 ,3

|I

9,5
8r3

t2;0
: 16,4
4,0

- Los productos del metabolismo anaerobio figuran entre parntess

148

3.7 EFICIENCIA ENERGET]CA DEL CRECIMIENTO MICROBIAL

La generacin de calor por la actividad catablica se define como:

LHar, = AIr.(-As)

- E t'ttr't'P
t3.611

AHor=Atrf+AHr'LX
Donde, aH"or: calor generado por catabolismo, kJ/litro; aH^: calor de reaccin,
kJ.litro-l; aHx , aHs, AHr: calor de combustin de las clulas, sustrato y producto, respectvamente, kJ.(mol)-1; Ax, As, Ap: concentracin de clulas, sustrato
y producto, respectivamente, mol/litro.
La ecuacin t3,61lexpresada sobre la base de 1 mol Cse convierte en:

(LHc^)" = (AEJc

- E(yow)c.(A,rrr)c

13.621

La eficiencia energtica del crecimiento microbial es la relacin entre la energa

de enlace qufmico incorporada en las clulas y la energa de enlace qumico


disponible de los procesos catablicos, (Lynd, 1989):

rlx

gs)"-(LH)c
=

13.631

(r*d".(Hr)c + (AflJs
El calor de reaccin por mol de C en el susirato consumido depende de la
eficiencia energtca del crecimiento microbial y de la energa potencialmente
disponible para crecimiento, (AH.or)":

(LH),

= (1

- r)-(Aflc.J.

t3.64I

149

Ejemplo

3.2 Determinacin del'calor de combustin de las clulas


y del calor generado por mol de O, consumido

Las siguientes ecuaciones estequiomtricas del crecimiento de Saccharomyces


cerevisae (Battley, 1960) sirven como ejemplo para 'analizar la produccin de
calor durante el crecimiento;

- Crecimiento anaerobio con glucosa como sustrato:


C6H'2O6

+ O,12 NH3 : 0,59 CH1,7sOqorNo,, + 1.3 C2H6O

glucosa

clulas

etanol

r 0,43 CaH8O3 + 1,54 CO, + 96,3 kJ


glicerol
- Crecimiento aerobio con glucosa como sustrato:
C6H,2O6

+ 3,84 O, +

O,29 NH3

1,95

..,t3.OSl

"

CHr,72Oo,ooNo,,r

clulas

+ 4,09 CO, + 4,72H2O + 2005,1 kJ ...t3.66I


- Crecimiento aerobio con etanol como sustrato:
C2H6O

+ 1,82 O, + O, 15 NH3 =

1,O3

CHr,72Oo,44No,r5

+ 0,97 CO, + 2,31 l-l20 + 853,9

kJ

...t3.67I

Calcular el calor de combustin de las clulas y el calor generado por mol de


oxgeno corlsumido, en el crecimiento-de Saccharomyces cerevisr,ae, (Ecuaciones 3.65,.3.66 y 3.621.
Solucin: El calor de combustin de las clulas, segn la Ecuacin t3.551, es:

LHx

150

Aflr.(-As) - E H".Ap - AH,


A

El calor generado por mol de oxgeno consumido AHo es:


a

no =

afl^

Donde, AH^: produccin de calor durante el crecimiento; AO: moles de oxgeno


consumido. En la Tabla 3.5 se presenta un resumen delprocedimiento seguido
y los resultados obtenidos para As : (1 mol de sustrato).(litrol-l.

Ejemplo

3.3 Determinacin

de los calores de combustin de la


biomasa y otros compuestos ofgncos

Calcular el cator d combustin de la biomasa y el de los compuestos orgnicos


que intervienen en las Ecuaciones de crecimiento [3.65], [3.66] y [3.67], y confrontar los resultados obtenidos, con los anotados en la Tabla 3'5.

Sotucin: A continuacin se presenta la muestra de clculos para la biomasa en


la Ecuacin t3,671. Los resultados obtenidos se presentan en la Tabla 3.6.

- Nmero de electrones disponibles, Nro, (Ecuacin 2.14}.:


Ne

: 4 + 1,72 - l0,44ll2l

- (0,15)(3)

4,39

- Oxgeno requerido para la combustin de 1 mol de clulas hasta CO, y agua:


CH1,72Oo,44No,.,u

1,1 Oz

= CO, + 0,15 NH3 + 0,635

H2O

- Calor de combustin de la biomasa, AH^, (Ecuacin 3.471:

aHx

aH"

- (115)(4,39)

- 504,85 kJ/mol

- Calor de combustin de la biomasa, AH*, (Ecuacin 3'50):

AHx: AHo:

-1448,74l'1',1,1)

= -493,6kJ/mol
151

: ,

Tabla 3.5 Determinacin del calor de combustin de las clulas, AHr, y del calor

generado por mol de oxgeno consumido, en las ecuaciones de crecimiento


Saccharomyces cerevisrae, [3.65], t3.661 y t3.671.

aH"

o1,
Ecuacl.n

kil,/mol

k/1ttro
.

6s]

96

,3

fa.bIa

aH,

aP

fu/mol

mo1,/1itro rnol/liEro

1359
J.663

1,3

3 .3

2807

0,59

[3

.56]

2005,1

2807

1, e5

13.67)

8s3,s

L369

1,03

PeEo

k,r/mol
[3

6s]

36s

41:-;Z

[3.56]
f.3

,9

.57)

s00

AH,

c1u1ae

g/mo1
23

,7s

22,86
22

,86

l1t

0,43

-\

AO

AHo

mol/litro

k/ro1

15,41

L7,.99 I s,84

s22,2

21,,88

469 ,2

1.82

3.6

Determinacin del calor de combustn de las clulas


compuestos orgnicos por dferentes mtodos, Ejemplo 3.3:

Tabla

Coulueeto

N"o O, para
Eeu. conbuetl6n:
12..L41

moleg
: c.H,,o" 24
Etanol: C,H.O t2
Glicerol: C=H'O. 14
Gl-ucosa

Biomasa

152

3
3,5

otros

Calor de cobuEtin
k/nol

Ecu.
t3 .471
27 50
.?807
1369 1380
7663 1610
Tabla
3

.3

Ecu.
t3 .50I
2692

,4

L346,2

7570,6

cH1,r2oo,44No,1s

4'39

---

arr

[3

Eeuacln At!

de

1'1

550

504'8

493'6

De acuerdo con Baileyry Ollis (1986), el peso de las clulas secas, evaluado
expermentalmente, incluye aproximadamente un 10% de cenizas. Por tanto:

AHx

- (493,6)(0,9) = - 444,24 kJ/mol

AHx

l- 444,24 kJlmollll22,86 g.c|./mol)

- 19,43 kJ/g

Segn Kargi y Moo-Young (1985), los valores tlpcos de AH^ se encuentran


entre 20 y 25 kJ/(g.clulas).

3.4

Eiemplo

Determinacin de Ia produccin de calor bajo


repiesn por glucosa

El efecto de la represin por glucosa queda demostrado en el crecimiento


aerobio de S. cerevisiae, en medios con altas concentraciones de azcar, donde
se forman productos no celulares an en condiciones de plena aeracin. En este

caso el sustrato es metabolizado por dos caminos separados: uno es la ruta


glucultica, donde se forman productos no celulares, tales como etanol, glicerol
y COz, el otro es la ruta oxidativa donde el agua y el CO, son los productos
finales.
Evaluar la produccin de calor bajo represin por glucosa en el crecimiento de
Saccharomyces cerevisiae, Ecuaciones [3.65] v t3.661.
Solucin: - El coeficiente estequiomtrico y la frmula de los microorganismos
se ajustan a 0,61 CHr,72Oo.44No,1s, ofl la Ecuacin [3.65], con el propsito de
simplificar clculos.

- La ecuacin de crecimiento de S.cerevisiae, bajo represin por glucosa, es


promedio aritmtco de las ecuaciones t3.651 y t3,661:
C6H12O6

0,65

1,92 O, + 0,21

C2H6O

+ 0,215

NH. : 1,28 CH',rrOo,noNo,,u

C3HBO3

+ 2,82 CO, + 2,36

el

H2O

105O,7 kJ

't53

:l

- El calor generado en 9l proceso de crecimiento de S- cerevisiae, bajo represin


por glucosa, puede calcularse como el promedio artmtico de los calores de

reaccin correspondientes a las Ecuaciones t3.651 y t3.661, (1050,7 kJ), o


calcularse mediante la Ecuacin t3.5SI:
AHB

AH.

(AH.l.(-As) -

AHp.Ap - AHx.Ax

2807 - (0,65)(1369) - (0,215)(1663)


glicerol

sustrato etanol
- 1.28(365,9 +

41

1,2112

.-

AHR

1O62,26kJ

c[ulas

Los calores de combustin del sustrato y dems compuestos orgnicos fueron


tomados de la Tabla 3.3, El calor de combustin de las clulas es el promedio
arimtco de los valores calculados para las Ecuaciones t3.6Sl y t3.661, tal como
se muestra en la Tabla 3.5.
El valor calculado 11062,26 kJ), coincide con el valor promedio (1OEO,7 kJ),
obtenido de las Ecuaciones t3.651 y t3.661. por consiguiente la Ecuacin t3.S5l

es apropiada para evaluar la produccin de calor bajo represin por glucosa.

3.8

FACTORES DE RENDIMIENTO DE ENERGIA EN BIOMASA

Los balances de entalpla expresados en las ecuaciones t3.ssl

y t3.61I
consttuyen la pase de los factores de rendimiento de energa en biomasa:
LHR=

^flr.(-As)

-XL,Hr.h,p - AH,.Lx

LH"^, = Alls.(-As)

-t

[Ecu.3.55]

AHr.p
t3.61I

Atn=AIl+LHx.Lx

154

Donde, AH^: calor de reaccin o calor producido durantb el crecimiento,


kJ.(litro) 1; AHs, AHp y AH*: calor de combustin del sustrato, los productos y
las clulas, respectivamente, kJ/mol; As, Ap y Ax: concentracin del sustrato,
los productos y las clulas, respectivamente, mol/litro; AH.or: calor generado
por catabolismo, kJ.(litro)-1.

3.8.1

Factores de rendimiento basados en e calor producido


durante el crecimiento mcrobial

El factor de rendimiento basado en el calor de'reaccin, o calor producido


durante el crecimiento microbial, se define como:
(Ynol^ =

*k
t3.681

(Ynrl*

Lx

Arr.(-As) - E

tH,tp -

LH*.Ax

Donde, (Y*,rr)^: rendimiento basado en el calor de reaccin, (g clulas secas)/kJ.


En el caso de crecimiento aerobio sin formacin de produetos no celulares, Ap
0, y la ecuacin anterior se convierte en:

(Ysol*=ffi

t3.691

Esta ecuacin tambin'se expresa como:

t3.70t

Donde, Yro: rendimiento del sustrato en clutas, (g clulas)'(mol sustrato)-1;


AHr: calor de combustin del sustrato, kJ/(mol sustrato): AH,,: calor de
combustin de las clulas, kJ.(g cl)-r, (Tabla 3.3).

155

Generalmente los hidrocarburos producen ms calor que las especies parcialmente oxigenadas-. ,fsl, Oor ejemplo: (Yvrrl",rr^,o ) (Y)ys16
Por consiguiente, los reactores que contienen sustratos con mayor grado de
reduccin requieren mayores remociones de calor, aspecto muy importante en
el estudio de factibilidad econmica de un proceso (Bailey y Ollis, 1986).
El calor de reaccin,

o calor producido durante el crecimiento microbial, en

el

crecimiento aerobio sin formacn de productos no celulares, puede calcularse,


aproximdamente, a partir del oxgeno consumido (Ecuacin 3.50):

.^HR = LHo.LOz

t3.71I

*ol o'
kI
- ffi.74
' mol 02. Lo^' Iitro

3.8.2

Factores de rendimiento basados en la energa total


disponible en el medo

El factor de rendimiento basado en la energa total disponible en el medio se

define como:
(Yo),

Lx
LHr,+ AHx.Lx

13.721

Donde, (Yr,*r)r: rendimiento basado en la energla total dsponible en el medio,


(g clulas secas)/kJ. El primer trmino del denominador de esta ecuacin
expresa la energa liberada por catabolismo y el segundo la energa incorporada
biosintticamente en el material celular. Si la expresin para AH"o, (Ecuacin
3.61) se remplaza en la ecuacin anterior se obtiene:

"(Ytr),

156

A
LH*.Ax + AIls.(-As)

LHp.LP

Yilt

t3.73I

L,II..Y4s a AtrI5 - AHP.Y4I

Donde, Ax, As, Ap; concentracin de clulas, sustrato y producto, respectivamente, g.litro-l; AHx, AHs, AHr: calor de combustin de las clulas, sustrato y
producto, respectvamente, kJ.g-t; Yro, Yr,.: rendimiento de sustrato en ctulas
y de sustrato en producto, respectivamente, g.(g sustratol'1, En un medio
complejo prcticamente toda la fuente de carbono es utilzada en la produccin
de energfa y una porcin muy pequea de la fuente de carbono es asimilada en
clulas (Bauchop y Elsden, 1960). En un medio mfnimo una porcin de la fuente
de carbono es metabolizada por las vas bosntticas y el resto por las vfas
catablicas.
La fraccin del sustrato convertido en clulas es:

(As)ce =

2
c1

f3.74t

^,

Donde, As"rrl sustrato convertdo en clulas, (mol sustrato).(ltro)-1; Ax:


concentracin de clulas, (mol clulas). (litrol-1; o2i (g C en clulas). (mol clulas)-1
; a1: (g Cen sustrato).(mo! sustrato)-t.
La fraccin del sustrato convertida en energfa, es:

(As)." =
' 'q

6t

r _ uz.Ax)
c1.AsJ
t

t3.751

El calor generado por las reacciones de catabolismo en un medio mnimo,


(AH61).., (Ecuacin 3.61), se define como:

(LHc^)^= aas.as.(, -

Z "r,)

E,

ta,.tp

t3.761

157

Y el factor de rendimiento basado en la energa total disponible en el medio


mfnimo es:

(Yxu),

A
AHur + L,H*.Ax

13.77t

yrt,
AHx.Yx^ a

AII

l,\ar- I "o,) !np.yils

3.8.3 Factores

de rendimiento basados en la energa liberada por


catabolismo

Elfactor de rendimiento basado en la energa liberada por catabolismo se define


como:

( Yrw )o,

Ax

AHr.(-As)-Etnr.tp

A.r

LII^ + AH*.Ax
t3.781

Ynt

Afl, - E AHr.Y$
Donde, aH^: calor de reaccin o calor producido durante el crecimiento,
kJ.(ltro).1; AHs, AHp y AFlr: calor de combustin del sustrato, los productos y
las clulas, respectivamente, kJ/mol; As, 4p y Ax; concentraein del sustrato,
los productos y las clulas, respectivamente, rnol/l; Ys, YpTs: rendimiento de
sustrat en clulas y de sustrato en'producto, respectivamente, g. (g sustrato)-1 .
El factor de rendimiento basado en la energa liberada por catabolismo, en el
crecimiento aerobio sin formacin de productos no celulares, se puede calcular
a partrde la siguiente ecuacin obtenida alreemplazar Ia Ecuacin t3.71len la
Ecuacin t3.781:

158

(Ysr)"

LH^
A,H- + ------"
^ yrto

Donde, AHo: - 448,74 kJ.(mol O, consumidol


en clulas, (g cl).(mol Or)1.

Ejemplo

3.5 Evaluacin

'

t3.791

; Y*,o: rendimiento de oxgeno

de rendmentos basados en energa

Calcular los factores de rendimiento basados en energfa para el crecimiento


aerobio de Saccharomyces cerevisiae en etanol. Suponer que la ecuacin de
crecimiento aplicable a este problema (Battley, 1960) es:
C2H6O

1,82 O, + 0,15 NH3 : 1,03

CH1,72Oo,44No,ts

+ 0,97 CO, + 2,31

H2O

853,9. kJ

- Datos:
- calor de combustin del sustrato:

aHs':

- Calor de combustin de las clulas: AH*

1-369 kJ/mol'

500,1 kJ/mol,

(Tabla 3.3)
(Tabla 3.5)

- Produccin de caibr durante el creciminto microbial


calor de reaccin: AHR

853,9 kJ/litro.

- Concentracin del sustrato: As

1 mol/litro.

- Peso molecular de las clulas: 22,86 (g cl)/mol.


- Concentracin de clulas: Ax

Ax

1,03 mol/litro.

(1,03 mol/litrcl122,86 g/mol) : 23,54 g clulas/litro


159

Concentracin de los productos: en este caso no se forman productos no

- Rendimiento del sustrato en clulas:


Yxrs

1,03 mol cl/mol sustrato

- Rendimiento de oxlgeno en clulas:


Yxro

(1,03/1

,821:0,567

mol cllmol O,

Solucin:

-Rendimientobasadoenelcalorqueacompaaelcrecimientomicrobial,(calor
de reaccin), (Ecuacin 3.68):
(1,03 nnl

(Ynul^

c04fi3

=O'O27699f ';

Este factor tambin se puede calcular a partir de la Ecuacin [3.70]:

(Yno)*=

ffi.ou,

cl
= O.O27S s
= 1369(1,Gt).(22,86)
(1,03).(500,1)
H
-

- Rendimiento basado en la energa total disponible en el medio.


De acuerdo con la ecuacin de crecimiento no se.forman productos no celulares,

(Ap = g. Por consiguente, (Ecuacin t3.731:

Yr{t
tY \ -Vxlktlt LHx.Ygs * aIIs

160

(1,03).(22,86)
(500,1).(1.03) +

= o.O12S

1369

cl

- Factor de rendimiento basado en la energfa liberada por catabolsmo:


forman productos no celulares'
De acuerdo con la ecuacin de crecimiento no se

(Ap = 0), Por consiguiente, (Ecuacin [3'78]:

!r,t-Y"

Vr)am

LH"

(1,09).(22,86)

1369

-E

Aflr.yw

= O.OflZ

,c!l

kt

t3'791:
Este factor tambin se puede calcular a partr de la Ecuacin

(Y*,)o,

W,74 kJlmol 02
0,566 mol cltmol O"

(Yw\o,

= 7.73.10-a

(Yru\o, = O,O1T1

g.8.4

,86

Factores de rendimiento basados en a generacn de ATP

y 12'6 (g clulas
Bauchop y Elsden (1960), obtuvieron valores entre 8'3
generacin de ATP en el
secasl/(mol ATP), para los rendimientos basados en la
donde prcticacrecimiento aerobio de microorganismos en medios complejos,
produccin
de energfa' El
mente toda la fuente de carbono es utilizada en la
sustrato
nmero de moles de ATP sintetizados por mol de carbono en el
partir
del
conocimiento
a
calculable
catabolizado, o ganancia de ATP, G1p, eS
en un orden
de la ruta catablica. Los valores de GATP varan aproximadamente
cada micro'
de magnitud, segrfn el sustrato y el metabolismo de energfa de
organismo.
161

3.8.5 Factor

de rendimiento de ATP en biomasa en el crecimiento


asociado a la energa

Un trmino til en la evaluacin del rendimiento de sustrato en biomasa, Yr.,


es la relacin'entre el carbono celular sintetizado y el AIP disponible de los
procesos catablicosi Y^rrr.
Para numerosos procesos microbiales, se ha encontrado que la relacin Y^,o-,

es constante, con algunas excepciones (Stouthamer, 1973), e igual a 10,5 (g


clulas)/(mol ATPI, con una desviacin estndar de + 0,3 g/mol. Adems, si
se utlza un contenido representativo de carbono en la clula de 46,2 o/o,
porcentaje en peso seco, con una desviacin estndar de2,3 %o, se obtene:

yxun =

to,s

ffi

@,4,2)

mol C

ct{.

12gc
t3.801

3.8.6

El

mol C
O.44
'

cl'

mol ATP

Rendimiento de ATP en biomasa en el crecmento no


asocado a la energa

factor limitativo de algunos procesos es la velocidad de formacin de uno o

ms compuestos esenciales para la bioslntesis celular, en lugar de la velocidad

de formacin de ATP. El exceso de energla es desechado como calor y el


crecimiento no est asociado a la energa. Es el caso del metabolismo anaerobio
de carbohidratos, donde con frecuencia los microorganismos siguen utilizando
los carbohidratos, an despues de cesar su crecimiento. En la produccin de
sake a partir de aftoz,la produccin de alcohol y ql consumo de sustrato prosiguen despus de detenerse el crecimiento de S. cerevisiae y el' exceso de ATP
es desechado como calor. En este caso el caldo se refrigera para favorecer la
productividad de alcohol (Nagai, 1979).

162

3.8.7 Goeficiente de rendimiento verdadero

Las clulas consumen sustrato para asimilarlo en masa celular, proveer energla
para la sfntesis celular y proveer energa para mantenimiento. El trmino mante-

nimiento expresa la energla requerida por la clula para satisfacer actvidades


tales como transporte actvo de iones y otras especies a travs de las membranas celulares, reemplazar los consttuyentes celulares degradables Y
preservar el estado celular.

As =

AsuarcroN

+ ASro"*

* ASrum*',,,noo

t3'811

Donde, As: concentracin del sustrato, g.litro-1 , Esta ecuacin es vlida para
organismos quimiotrofos, que utilizan el mismo sustrato como fuente de carbono
y de energa. Si la ecuacin anterior se divide por la concentracin de biomasa,
Ax, en (g clulas secas)/litro, por ejemplo, se obtiene:

1_1*A"*4"
(Yn), (r*rr), a*,

Ax*

3.821

Donde los subndices: V, A, C, M, indican respectivamente, verdadero,


asimilacin, crecimiento y mantenmiento. En esta ecuacin el trmino (Y"s),
es una cantdad relativamente constante, estequomtricamente def inida,
mientras (Yx/s),, el coeficiente de rendimiento vefdadero, no lo es. La distribucn de! sustrato en los tres componentes indicadoS en la Ecuacin t3'811
es variable. Una poblacin en rpido crecimiento consume ms sustrato para
asimilaCin y crecimiento, en tanto que una poblacin en reposo conume una
mayor proporcin de sustrato para mantenimiento'

3.8.8

Rendimiento mximo de ATP en clulas

El factor de rendimiento de sustrato en ATP, Yorr,", se evala a partir de


informacin sobre las rutas bioqumicas establecdas" o se calcula a partir de
datos experimentales sobre la fuente de energfa utilizada, o sobre los productos
163

finales formados. El rendimiento mximo de ATP en clulas, {Y*ro.r}ro,


evala mediante la ecuacin, (Nagai, 1979):

Qlw -

frATP +

t3.83I

Donde, (Y^,^rr)r^r: rendimiento mximo de ATP en clulas, (g cl)/(mol ATH;


Oorr: velocidad especfica de formacin de ATP, mol ATPllg cl.hl; rr.t.qrp:
coe'ficiente de mantenimiento basado en la geneiacin de ATP, mol ATp lg'
cl.h)-1; p: velocidad especfica de crecimiento de biomasa, h-1.

3.9

BALANCE DE ENERGIA

Las clulas consumen los sustratos que proveen la energa y las materias primas
requeridas para la sntesis de nueva masa adicional. La energa libre de las sustancias nutritivas utilizadas es mayor que la de las clulas y productos del meta-

bolismo, Las clulas utilizan eficientemente la energfa qumica, pero, como en


todos los procesos reales, parte de la energla disponible en el sustrato es
liberada como calor.
El balance de energa de un proceso es uno de los aspectos importantes de la
lngeniera Bioqumica por la necesidad de mantener una temperatura ptima para

crecimiento o para formacin de productos. Las dificultades prcticas del


anlisis clorimtrico, especialmente en cultivos aerobios, limitan la determincin experimental del calor generado a los procesos a escala de laboratorio y de
planta piloto.

3.9.1 Balance general de energa

una forma de la ecuacin general de balance de energa aplicada a un caldo de


fermentacin; es:
164

Qutt * Qrc = Qrc + 4wt + Qrut + Lsnt

t3.841

- errivelocdad de generacin de calor por la actvidad metablica, kW

(:

kJ.s-

'). El trmino qr* describe el calor asociado con el crecimiento y mantenimiento de los microorganismos y tambin con la formacin de productos.
- qoo: velocidad de generacin de calor por agitacin mecnica y por aspersin
de gses.

- qo": velocidad de acumulacin de calor.


En condiciones estables. Qc : 0. En condiciones inestables, la qiguiente
ecuacin general describe la velocidad de acumulacin de calor en un reactor:

qrc=E

!!P

t3.85r

Donde, l/: volumen ocupado por el caldo, litros; c,: concentracin de componente kg.litro-1; H,: entalpfa del componente i, kJ.(k0)'1; t: tiempo, s.

En el caso de un reactor por lotes, bien agitado, la ecuacin anteror se


convierte en:

e^, =

Mr(C)".#

t3.86I

Donde, M,: masa total del caldo de fermentacin, kg; 7: temperatura, oC; (Cr)-;
capacidad calorfica media del caldo, kJ.(kg.oC)-1.
En el caso de un reactor continuo de mezcla completa

(CSIA

ta gcuacOn t3.85I

se convierte en:

Q,tc=Fu.G)^.Fq-T4)

t3.871

Donde, Fr: velocidad de flujo de masa del caldo, kg.s-t; To,, Trr: Temperatura
media, del afluente al reactor y del efluente, respectivamente, oC.

165

- qrNr: velocidad de transferencia de calor entre el reactor y los alrededores o


entre el reactor y el intercambiador externo. En condiciones establesi grr :
Qrver

Qc.

- ervpi velocidad de prdida de calor por evaporacin. El trmno qruo, incluye


las prdidas de calor producidas por la evaporacin del agua en el aire
dispersado en,las fermentaciones aerobias. Estas prdidas son apreciables,
especialmente cuando el aire dispersado se seca durante la compresin. Este
efecto se evala a partir del balance de entalpla del aire que pasa.por el
fermentador. Las prdidas por evaporacin se pueden eliminar, en el caso de
cultivos aerobios, mediante la utilizacin de aire saturado a la temperatura del
caldo de fermentacin.

Qseri elocidad de cambio de la entalpa sensible de las corrientes lquidas y


gaseosas que entran o salen del bioreactor a temperaturas diferentes de la de

fermentacin. El trmino q"., incluye los efectos sobre el calor sensible del
equipo producidos por los cambios de temperatura.

3.9.2

Galor generado por la actividad metablca

El calor generado por la actividad metablica,

qrrr, se evalua partr de la Ecua-

cin t3.841, despus de calcular la magnitud de los trminos restantes. Otro


procedimiento consiste en evaluar qr* mediante datos de entalpa y contenido
de entalpla fibre de los compuestos presentes en el metabolismo:

eam =

(FMi.H)s

- D (FMi.H)p

t3.871

Donde, Fr,: velocidad de flujo de masa de componente 4 kg/s; H,: entalpa del
i-simo componente, kJ.(kg)-l; Los subfndices s y p se refieren al sustrato y a
los productos, respectivamente. Los productos pueden ser celulares (biomasa)
y no celulares. La Ecuacin [3.87], expresada en trminos del calor de reaccin,
se convierte en:

166

husr =

V'AH*'r,

t3'88I

Donde, V: volumen del caldo de fermentacin, litros; AH^: calor de reaccin


(Ecuacin 3.64), kJ/(mol C en el sustrato); r": velocidaQ de consumo de
sustrato, (mol C en el sustrato).litro-1.s-1.

3.9.3 Calor generado por e! metabolismo aerobo

La velocidad de produccin de calor por el metabolisme aerobio ha sido


relacionada con la velocidad de consumo de oxlgeno por Cooney et a|.,{.1968!.,
para elcrecimiento de numerosos microorganismos con diferentes sustratos, en
cualquier clase de cultivo, sumergido o semislido, cuando en el proceso slo
se produce biomasa sin la formacin de productos no celulares (Ecuacin 3.50):
ear = (ffi,74).Qo2

t3.89I

Donde, e(O)r: velocidad de consumo de oxgeno, (moles de O, consumido)/s;


qr.r: calor generado por el metabolismo aerobio, kJ.s-1 .

3.9.4 Calor generado por metabolismo

aerobo en un reactor por

lotes

La velocidad instantnea de generacin de calor por metabolismo aerobio en un


reactor por lotes (Bailey y Ollis, 1986), es:

,wr

Y.lt.r.

t3.90t

167

:2
'

Donde, (Yr,*r)*: rendimiento en clulas del calor producido durante el crecimiento .t


aerobio (Ecuacin t3.70l), g cll(kJ); qrur: velocidad instantnea de generacin
de caor en el metabolismo aerobio, kJ.sl; V: volumen del caldo de fermentacin, litros; r*: velocidad especfica de crecimiento, s-l; x; concentracin de
biomasa, (g c|. secasl/litro.

3.9-5 Calor generado por metabolismo,

aerobo en un reactor

contnuo
-a

La velocidad instantnea de generacin de clorpor metabolismo aerobio en un


reactor continuo agitado (C.SfPl en condicones de flu;jo estable, (Bailey y Ollis,
1

986) es:
(Ydu)R.(cMr)

= V.tr*,
t3.91I

= (",

- ").r.(Y,) -

xrk.V

Donde, (Y7rr)^: rendimiento en clulas del calor. prducido durante el crecimiento


aerobio (Ecuacin 3.70), (g clulas).(kJ)-1; qr.r: velocidad instantnea de genera-

cin de calor en el metabolismo aerobio. kJ.s-1; V: volumen del caldo de


fermentacin, litros; p^: velocidad especfica de crecimiento, s-l ; x: concentracin de biomasa, fg clulas secas)/litro; so, s: conentracin del sustrato en el
afluente y en el reaCtor, respectivamente, (g sustrato).litro-1; Y*,.: rendimiento
del sustrato en clulas, (g clulas).(g sustrato)-1; F: caudal afluente al reactor,
litro/s; k.: velocidad especfica de metabolismo endgeno, s-'.
Otra forma de la ecuacin anterior es:

ryY
Donde,

168

= F,

- s)'D'(rrJ (Yao)*

D -- F/V : velocidad de dilucin, s-l.

'ft,

r3.e21

-,

3.9.6 Evaluacin experimental delcalor generado por metabolismo

El calor generado por metabolismo o calor de reaccin puede calcularse a partir

de una serie de mediciones de la temperatura media del caldo d fermentacin


en un reactor operado en condiciones inestables. En la Figura 3.3 se muestra
esquemticamente un montaje experimental para la evaluacin del calor
generado por metabolismo, qrrr. El reactor es un tanque provisto de agitador y
sensor de temperatura. Las prdidas de calor por radiacin y evaporacin son
despreciables. El intercambiador de calor puede ser un serpentfn colocado dentro
del tanque, o una camisa alrededor del tanque, o un ntercambiador de doble
tubo, o de coraza y tubos instalado fuera del tanque.
En la Figura 3.4 se muestra esquemticamente la variacin de la temperatura del

reactor

y su contenido durante la fermentacin. El sistema de reactor e

intercambiador funciona inicialmente en condiciones estables, fiT/dil = 0, en


el perlodo comprendido entre los tiempos t = A y t : B. El intercambiador
remueve el calor generado en el reactor, La ecuacin de balance de energa,
aplicable en esta etapa del ensayo es:

gucr + Qte = Qntr = Ftu.Cil.(To

- Tr)

t3.93I

Donde, Qrurr, Qre, q,nr: calor generado por metabolismo, calor generado por
agitacin y dispersin de gases y calor intercambiado, respectivamente, kW (:
kJ.s'1); Fro: velocidad de flujo de masa de agua, kg.s-'; cro: calor especlfico del
agua, kJ.kg-1 oC-l ' Trr, Tro: temperaturas del agua efluente y afluente, respectivamente, al intercambiador, oC. En el tiempo t = B se desconecta el intercambiador, q,* - 0.
El calor generado por metabolismo se acumula en el sistema
balance de energa, aplicable en esta etapa del ensayo es:

Qtur + Qrc'=

y la ecuacin

de

Q,rc

t3.94I

dT V.
= LIIn.ts
Qtc = V.Cp.
dt

169

Donde, qo":calor acumulado en elreactor, kw; dr/dt: variacin de-la temperatura del caldo de fermentacin con el tiempo, oc.s-t, es la pendiente de la curva
de la Figura 3.3 entre t : B y t : c; cr: capacidad calorfica global del reacror,
kJ.litro-l.o6-t, (Tabla 3.h; v: volumen delcaldo, litros; rr:velocidad de consumo
de sustrato, (mol C en sustrato).litro-l.s-l; AH^: calorde reaccin, kJ.(mol Cen
sustrato)-1

La Ecuacin [3.94], utilizada en la'determinacin del calor de reaccin, o dbt


calor generado por el.,metabolismo, a partir de una serie de'mediciones de
temperatura y tiempo, se conoce como.aproximacin de uhlich; Moser (1g8Bl.
El intercambiador se conecta nuevamente en el tiempo t i= tc, (Figura 3.4), el
calor acumulado en el reactor es removido del sistema y la ecuacin de balance
de energa, aplicable en esta etapa del ensayo, inrnediatamente despus de t :

t",

es:

{3.9st

Lrc=4m

3.7 Datos tlpicos de calor especfico y capacidad qalorlfica en fermenta(Cooney


cin.
et al., 1968).
Tabla

Medio,

Calor

Gapacidad

especlfico

calorlfica

kJ.(kg. "G1.1

kJ.(litro.9,C)-1

Caldo de fermentacin

4,186

4,228

Material de vidrio

0,837

0,290

Material de acero

0,502

o,039

Valor global total

170

4,504

Figura 3.3 Montaje experimental utilizado en la evaluacin del calor generado


por metabolismo. T"o, Tro: Temperaturas de los fluidos, caliente (caldo) y fro (agua), respectivamente, afluentes al intercambiador; T"r, Trr: Temperaturas de
los fluidos, caliente y frio, respectivamente, efluentes del intercambiador.

Figura 3.4 Variacin de la temperatura, T, del caldo con el tiempo, f, del


ensayo. El sistema de reactor e intercambiador funciona inicialmente en
condicionesestables, @T/dil - O,entre lostiempost: Alt:
B. Enel
:
:
B el intercambiador se apaga; y en el tiempo t
tiempo t
C se prende
nuevamente.

Reqctor

Intercqnblodor

Figura 3,3

Tierrpo

Figura 3.4

zH"rrl-r;L, , oHcv*o.,tn , 414a.t.c4b


Ejemplo 3.6 Balance de energa delproceso aerobo de produccin
de levadura a partr de glucosa
Realizar el balance de energa del proceso aerobio de produccin de levadura a
partir de glucosa, analizado en el Ejemplo 2.2 y calcular: el calor de reaccin, el

calor generado por las reacciones de catabolismo, la eficiencia del crecimiento


microbial, la eficiencia termodinmica y la disipacin de energa,
171

Solucin:
1- Eeuacin de.recimiento, (Ejemplo 2.2l,:

+ 1,05 O, + 1,08 NH3 :4,31

C6H'2O6

CH1,e4Oo,3No,ru

1,69

CO,

2- La ecuacbn de crecimient'iescrita sobre la base de 1 mol '0" C


sustrato; es:

Hro + 0,r75 o, + 0,18

NH3

0,719 cH1,s4oo.3No,r,

0,281

"n

co2

3- El calor de reaccin, o calor producido durante el crecimiento

...(11

A ''
...i.21

microbial

(Ecuacin 3.56), es:

(aH*)": (aHs)"-(Yp/s)".(AHp)"-(Y5)",(AHxl" '

Donde:

(YxrJ: = O,7"19 (mol C en clulas).(mol C en glu.)1


(Yps)"

{AHs)"

0: (no hay formacin de productos)

: l-2807tl : - 467,83

kJ.(mol Cen glucosa)'1 (Tabla 3.3},

Grado de reduccin de las clulas:

CHr,e4Oo,3No,2E

f* :'4 + 1,94 - (0,3).(2) - (0,25).(3) :


Calor de combustin de las clulas, (Ecuacin

4,59

3,49): ,

AH *,,

= - 26,8 kcal/electr = - 112,2kJlelectn

(AHx)"

= (- 1l2,2kJlelectrn).{4,59 electrn/mol

C)

- 515 kJ.(mol C en".cl)'.

Calor de reaccin, Ecuacin (3):


(AtlR)"

172

l.

.rt

- 467,83 - {10,719).(- 515) = - 97'54 kJ.lmol Cen glu,)1

(- 97,54).(6)

- 585,24 kJ.(mol

glu)-1

..

..(gl

<

4- Calor generado por las reacciones del catabolsmo (Ecuacin 3.62):

(AHcAr)": (AH5}"-E(Yoys)".(AHpi).

.,.(4)

Si se considera que no se forman productos no celulares:


(AHcAr)"

(AHs)"

= - 467,83 kJ.(mol

C en glucosa)

5 - Eficiencia del crecimiento microbial, (Ecuacin 3.63):

(Y4)c'(^II)c
(rryJ..$H)" + (A,H)
'l

(0,719),(515) =0.79
n'' _ (0,719).(510
+ 97,il
6 - Rendimiento de electrones en biomasa:
De acuerdo con la Ecuacin (2). elrendimiento de sustrato en biomasa es: (Y,51,

= O,719

(mol C en ctulas), (mol C en glucosa)-1. Por tanto:

(yt), = 0.719 nul C c


nol C gb

2.,24 g cl mol C slt


nol C cl 4 ctct,

s cl
elecon dirynibl por

nnl C cn gfu.

7 - Energla disipada en el proceso de crecimiento, (Ecuacin 3.591:

D=+ =t^e\. (#
D=

',)

- l1o,s .(?f - o,*) = - r14,e #;A

173

,r

114,9

mol C

W
cl

0,719 mol

mol C

C cl

glu

82

kJ

mol C glacosa

Donde, M,: peso molecular de las clulas, 22,24 (g c|. secas).(mol C en cl)-l;
Ag"': cambio de entalpa por la transferencia de un mol de electrones entre el
sustrato y el oxfgeno: 118,5 kJ.(mol electrn)-1 (Tabla 3.4); Yr,ro: factor de
rendimiento de los electrones dispoibles, (4 g cl).(molelectrn)-1; l-r: grado de
reduccin de la biomasa: (4,59 electrones disponibles).(mol C en clulas)-1.

- Eficiencia termodinmica, (Ecuacin 3.60):

rlr

(as')cx
(Ago)"* + D

(Ag')cx = 94,4.fr *

86,6

(g')cx = (94,4).(4,59) + 86,6 =

.,.(Ecu- 3,481

519,9

519.9
n- = -------l-lJL" 519,9 + 114,9 = O-[lB.

Donde, (Ag"'1.*: entalpfa libre de combustin por mol C en la biomasa, kJ.(mot


C en clulas)'l, (Ecuacin 3.48); & funcin de disipacin, 114,9 kJ.(mol C en
clulas) t.

Ejemplo 3.7 Balance de energa delproceso de obtencin de etanol


a partr de glucosa

Realizar el balance de energfa del proceso anaerobio de obtencin de etanol a


partir de glucosa, analizado en el Ejemplo 2.3 y calcular: el calor de reaccin, el

calor generado por las reacciones de catabolismo, la eficiencia del crecimiento


microbial, la eficiencia termodinmica y la disipacin de energa.

174

Solucin:
1- La ecuacin de crecimiento (Ejemplo 2.3), es:
C6H12OB

+ O,179 NHr: O,714 CH;,rooo,.No,rt

+ 1 ,728 C2HEOH +' 1,83 CO2

.,

...(1

2- La ecuacin de crecimiento, escrita gobre la base de 1 mol de C, es:


CHrO + 0,0298 NH3 : 0,119

CHr,s4Oo,3No,2s

+ 0,576

3-

El calor de reaccin,
(Ecuacin 3.56), es:

(AHB).
Donde, (Yx,.l.

CH3O.,5

+ 0,305

CO2

...121

o calor producido durante el crecimiento microbial

(AHslc - (Yr/slc.(AHp)6 -

(Ys)6.(AHx)c

..(31

0,119 (mol C en cll.(mol C en glu.)'1;

(Yp,s)"

0,576 (mol C en etanol).(mol C en glr"osa)-;

Calores de combustin,. (Tabla 3.1):

(AHslc

: l- 2807til : - 467,83

(AHplc

= (- 1369/21 =,o.684,5 kJ.(mol

Grado de reduccin de las clulas:

f^ :

4"

kJ'(mol C en glucosa)-l
C en etanol)''

CH1,e4Oo,3No,2s

+ 1,94' (0,3).(2) - (0,25)'(3) =

4,59

Calor de combustin de las clulas,.lEcuacin 3.49):


AHxie

(AHx)c

(-

11

- 26,8 kcal/electro = - 112,2kJlelectrn

2,2kJlelectrn){4,59 electrn/mol O

- 51 5 kJ.(mol Cen

cl}-1

175

Calor de reaccin, Ecuacin (3):


(AHR).

: - 467,83 - 0,'119(- 515) - {- 684;5 x 0,5761

: - 12,27 kJ.{mol C en glucosal-1


: l- 12,27!.(6) :

- 73,64 kJ.(mol glucosa).1

4- Calor generado por las reacciones del catabolismo (Ecuacin 3.62):

AHcAr)c

(AHs). - (Yp/s)c.(AHp)c

(AHnlc

(Yx/s).{AHxlc

"'l4l
(AHcAr)c

: -

- 467,83 - [- (684,50. (0,576]l


73,56 kJ.(mol

: - 12,27 + t- (515).(0,119)I

Cl-1.

5 - Eficiencia del crecimiento microbial, {Ecuacin 3.63):

t^
_

(Y$s) c.(^ Hx) c

(Yxs)c.$Hx)c + (Aa""

(0,119).(515) =on??
- vr(,go

Rendimiento de electrones en biomasa


De acuerdo con la Ecuacin (2), el rendimiento de sustrato en biomasa es: (Y*,.)"

0,119 (mol C en cl).(mol C en glu.)-t. Por tanto:.

tv
| vdBtc

0,119 mot

cl 22,24 g cl nol C gtt


' r*t C ct 4 tnr.
"t

y_
lDc-

176

O,ffigcl
por nol C en glacosa

elctrn disponiblc

: , '*

7 - Energa disipada en el proceso de crecimiento,(Ecuacin 3.59):

,=+=(as.)u#
=

r4

H
- 9.s
- .(2''24 - 4.s9) = - 2TG.52
nolCcl
\0,66
)

H . 0,119 mol C cl _ _ 32,9 H


mol C cl
mol C ght
mol C ght.
276,52

Ago': cambio de entalpla por la transferencia de un mol de electrones entre el


sustrato y el etanol: 9,5 kJ.(mol electrnl'1 {Tabla 3.4}; Yxeo: factor de rendimento de los electrones disponibles, 0,66 (g cl).(mol electrnl-1; l-r: grado de

reduccin de la biomasa: 4,59 (electrones disponibles).(mol C en clulas)-l.

8 - Eficiencia termodinmica, (Ecuacin 3.60):

rr =

(Lgolcx

(A,g")"* + D

(s")cx = 9l,4.Ix *

86,6

.....(r. 3.18)

(Ag')r = (*,41.(4,59)+ 86,6 = - ,,ll*9,Y

,,=gffi=o'65
519.9

Donde, {Ag''}"r: ehtalpla libre de combustin por mol de C en la biomasa,


(kJ).(molCen cl)-1, (Ecuacin 3.481; D:funcin de disipacin,276,52 (kJ).(mol
C en c1.) 1.

177

PROBLEMAS

3.1

Se utiliza un reactor de mezcla completa para producir en cultivo continuo


(composicin de las clulas: CH1,B1Oo,51No,zr) bajo condiciones anaerbicas, 12
(kg de glicerol)/(hora), a partir de glucosa y amonaco. Suponer que el rendi-

miento de glucosa en CO, es de 0,54 moles de CO, por mol de glucosa.


Calcular el calor generado en kJ/(mol de glicerol).

3.2

Suponer en el problema anterior que el rendimiento de glucosa en clulas

es de 1,8 {mol de clulas}/(mol de 'lucosa}. Calcular el calor generado en


kJ/(mol de glicerol).

3.3 Se utiliza un reactor

por lotes para producir 4800 kg de cido ctrco a partir


glucosa.
El
rendimiento
de
de sustrato en clulas es 0,22 (g clulasl/(g glucosa)
y el de sustrato en producto 0,58 (g ecidoli(g glucosa). La aeracin se realiza
con aire estril lT: 22 oC, presin : 16 psial. Calcular en el calor producido
por el cultivo en kJ/lote. Este calor debe ser retirado por el sistema de
enfriamiento del reactor.

3.4 Fermentacin alcohlica:

La ecuacin global,de la gluclisis por la ruta EMP

ES:

Glucosa

+ 2 NAD* + 2 ADP + 2Pi --->


2 Piruvato + 2 NADH + 2 ATP +2H2O + 2H*

..,(1)

En el proceso de ferm.entacin alcohlica las levaduras cultivadas inicialmente


en un ambiente aerobio'son luego sometdas a condiciones anaerobias para
degradar la glucosa hasta etanol y COr. El piruvato formado por la va EMP se
convierte en acetaldehdo, por accin de la enzima pruvato descarboxilasa:

2 Piruvato ---> 2 Acetaldehdo

't78

+ 2CO,

,,,121

Glucosa

+ 6O, +.38ADP + 38Pi--> 6CO, + 38ATP + 44H2O

,,,(21

Bajo condiciones anaerobias, el NADH y el piruvato, son totalmente consumidos

sin oxidacin neta, y estos dos moles de ATP representan el mximo rendimiento alcanzado (fosforilacin a nivel de sustratol.
La Ecuacin (1 ) puede descomponerse en dos procesos:
a- oxidacin de la glucosa: Glucosa

+ 6 O, ---> 6 CO2 +

b- energa capturada por la clula: 36 ADP

6H2O

+ 36 Pi ---> 36 ATp + 36 H2O

calcular la eficiencia de la clula en el proceso de captura de energa y


confrontar el valor calculado con la eficienca real del proceso lmavo .que 7oo/o,
Bailey y ollis, 1986) obtenida mediante la correccin de los datos de energa
libre para las concentraciones y pH predominantes en,el sistema vivo, la energa
restante se disipa como calor que debe retirarse del sistema para mantener la
temperatura ptima requerida por las clulas.

3.6 Calcular el factor de rendimiento de glucosa en clulas, basado en la energa total disponible en el medio mnimo, a partir de la siguiente ecuacin estequiorntrica del crecimiento anaerobio de Saccharomyces cerevisiae,lBattley,
1960):

CBH12O6

glucosa

O,12 NH,

0,59

Cl=ll,7sOo,ouNo,,

clulas
+ 0,43

CaHBO3

+ 1,3 C2H6O

etanol
"1,54

CO, + 96,3 kJ

glicerol

3.7 En la Figura 3.5 se presentan datos obtenidos por de Vries et a\.,1970, en


el crecimiento anaerobio de Lactobacillus casei, en un medio. complejo con
glucosa como fuente de energa.

Calcular el coeficiente de mantenimiento, ffirrp


mximo en la generacin de ATP, lYya,pl.
180

y el factor de rendimiento

y.

3.5

Representaiin grfca de la velocidad especffica de formacin de


ATP, o.1p, en funcin de la velocidad especlfica de crecimiento de elulas, p,,,
de Vries et al., 1970. Problema 3.7.
Fgura

28

(mmol ATP) /(9. celulas.hora)

24

20
16
12

a
4

o,t

o,2

0,0

0,4

0,6

0,6

Velocldad especiflca de creclmlento, l/h

0,7

0,a

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1184

CAPITULO 4

CINETICA DE LAS REACCIONES


CATALIZADAS POR ENZIMAS

4.1

TNTRODUCCTON

Las enzimas son protenas elaboradas por las clulas a paftir de aminocidos.
Cada enzima es una molcula especializada catalizadora nicamente de un tpo
especfico de reaccin qumica. Secuencias de reacciones enzimticas son

catalizadas en fracciones de segundo con un rendimiento de 1OO 7o sin


formacin de subproductos. El propsito de este captulo es realizar una
descripcin de las caracterlsticas generales de las reacciones catalizadas por
enzrmas.
El grado de especificidad de una enzima, con respecto a la reaccin catalizada,
o a la funcin de los reactvos, depende de su funcin biolgica. El sitio actvo
de una enzima es una regin tridimensional formada por unos pocos aminocidos orientados en la direccin apropiada para permanecer biolgicamente
activos y ligarse con el respectivo sustrato. Generalmente an no estn
completamente elucidados los mecanismos de enlace y la accin cataltica en
el sitio activo, pero el concepto bsico de formacin de un complejo enzimasustrato es el fundamento de las ecuaciones de velocidad de muchas reacciones
enzimticas.

185

4.1.1 Cofactores y coenzirnas

Las enzimas son protenas constituidas por una o ms cadenas polipeptdicas,

algunas contienen otro componente qumico necesario para su ,actividad,


denominado cofactor, Tabla 4.1., o una molcula orgnica compleja, llamada
coenzima. Algunas enzimas requieren cofactor y coenzima, Frecuentemente el
cofactor est ligado con la porcin proteica de la enzima, en cuyo caso recibe
el nombre de grupo prosttico. Las enzimas son los catallzadores de las millares
de reacciones qumicas, conocidas colectivamente como metabolsmo
intermediario de las clulas. Las enzimas denominadas con el mismo nombre,
pero obtenidas de diferentes microorganismos, frecuentemente tienen distintas
secuencias de aminocidos y diferentes propiedades y activdades catalticas.

Tabla

4.1

Algunas enzimas que contienen o requieren iones metlcos como


cofactores. (Bailey y Ollis, 1986)

o-Amilasa (pncreas de cerdo)

Ca2t

Colagenasa
Lipasa

Nucleasa micrococal
Co2 *

Cu2* (Cu*

Glucosa isomerasa lBacillus coagulansl


(Tambin requiere Mg" )
I

Fe2* o Fe3*

Galactosa oxidasa
Catalasa

Citocromos
Peroxidasa

Mg3t

Desoxirribonucleasa (pncreas .bovino)

Mn2*

Arginasa

Nat

ATPasa de la membrana del plasma


(Tambin requiete K* y Mg")

Zn2*

Alcohol deshidrogenasa
Fosfatasa alcalina
Carboxipeptidasa

186

4.1.2

lsoenzimas y enzimas alostricas

Algunas enzimas existen en formas mltiples, llamadas isoenzimas. La forma de


la isoenzima cambia durante el desarrollo del organismo y segn el tjdo del
cual formaft parte. Las enzimas poseen trna conformacin tridimensional

especlfica que usualmente cambia durante el ciclo cataltico, sometendo la


molcula a tensin, y hacindola susceptible a la reaccin. Las enzimas
reguladoras o alostricas son estimuladas o inhibidas por la unin con alguna
molcula, el efector o modulador, generalmente un producto metablico, cuya
concentracin en la clula es crltica.

4.1.3 Clasificacin
Crueger y Crueger, 1984, clasifica las enzimas disponibles comercialmente en:
- Enzimas industriales tales como amilasas, proteasas, glucosa isomerasa, lipasa,

catalasas, y penicilin-acilasas.

Enzimas analticas tales como glucosa oxidasa,. galactosa oxidasa, alcohol


deshidrogenasa, hexoquinasa, muramidasa, y colesterol oxidasa'

- Enzimas mdicas: asparaginasa, proteasas, lipasas, y estreptoquinasa.


La Comisin lnternacional de enzimas clasific en 1964 las enzimas en seis
clases principales de acuerdo con la sustancia sobre la cual actan y con la
naturaleza de la reaccin catalizada, fabla 4.2. Cada clase principal puede
contener subctases y sub-subclaseS. Por consiguiente, cada enzima es designada por un.,edigo numrico. As, por ejemplo, segn Bohinski, 1970, la
alcohol deshidrogenasa tiene el cdigo 1 .1 .1 .1 :
1.1: La enzima acta sobre el grupo de sustratos caracterizados por: :CH-OH'
'1.1.1:La enzima requiere NAD* o NADP* como aceptante

d;l hidrgeno.

1.111.1: El sustrato especfico de la enzima es el alcohol etlico.


187

Tabla

4.2

Clasificacin internacional de las enzmas. (Lehninger, 1973l.

. Oxidoreductasas Reacciones de transferencia electrnica


2. Transferasas
Transfieren gfupos funcionales
3. Hidrolasas
Reacciones de hidrlisis
4. Liasas
Adicin a los dobles enlaces
5. lsornerasas
Reacciones de isomerizacin
.Forrnacin
6. Ligasas
de enlaces con escisin de ATP
1

4.1.4 lmportancia

industria!

En la Tabla 4,3 se presenta un resumen de las principales enzimas y sus


aplicaciones industriales. Todas las enzimas son producidas a partir de
organismos vivos, plantas, animales, o ricrobos.
.

Tbbla

4.3

Algunas enzimas de importancia industrial. (Arima, 19641

Nombre

Aplicacin y comentarios

Fuente

Amilasas licuificadoras del almidn

Diastasa

Malta

Takadiastasa

Aspergillus

Ayuda digestiva; suplemento del


pan; jarabes,.Tiene actvidad o-amilasa y actividad B-amilasa

orizae

Ayuda digestiva; suplemento del


Ban; jarabes' Contiene muchas enzimas diferentes: proteasa, RNAsa

Amilasa

Bacillus
subtils

Desencolado de textiles; jarabes; industria de la fermentacn de alcohles; produccin de glucosa. La


preparacin cruda contiene proteasa
Contina

188

Tabla 4.3 (Continuacin)


Nombre

Fuente

Aplicacin y comentarios

Amilasa cido
resistente'

Aspergillus niger

Ayuda digestiva; pH ptimo: 4,5

Amilasas sacarificadoras del almidn

Amiloglucosidasa

Rhizopus niveus,
A.niger. Endomicopsis fibuliger

Produccin de glucosa

Tripsina

Pncreas de
animal

Uso mdico; ablandador de carne;


remueve turbiedad de la cerveza

Pepsina

Estmago de

Ayuda digestiva; ablandador de

animal

carnes

Estmago de

Usos mdicos

a-Ouimiotripsina

animal

Cuajo

Estmago de
ternero

Manufactura de queso

Proteasa del
pncreas

Pncreas de animal

Ayuda digestiva; limpieza; laminacin de pieles; remocin de pelo;


mejorador de alimentos

Papalna

Papaya

Ayuda digestiva; usos mdicos;


remocin de la turbiedad de la cerveza; ablandador de carnes

Bromelina,

Pia, higo

Ayuda digestiva; usos mdicos;


remocin de la turbiedad de la cerveza; ablandador de carnes

ficina
Proteasas microbiales
Proteasa

A.

Proteasa

A. niger

limentos para animales; ayuda


digestiva. Resistente a los cidos;
pH ptimo: entre 2 y 3

Proteasa

B. subtilis

Detergentes; remocin de la gelatina


de las pelfculas (recuperacin de
plata); ablandador de carnes; pH

orizae

Saborizante del sake; remocin de la


turbiedad del sake

ptimo: 7,O

Continrla
189

Tabla 4.3 (Continuacin)


Nombre

Fuente

Aplicacin y comentarios

Proteasa

Septomyces
gnseus

Detergentes; remocin de la gelatina


de las pelculas (recuperacinde
plata);-ablandador de carnes; pH ptimo: 8,O

Varidasa

streptococcus sp.

Uso mdico.Lederle

Estreptoquinasa Streptococcus sp.

Prof ibrinolsina

Algunas otras enzimas comerciales


Lactobacillus
brevs, Arthrobacter simplex,

Glucosa -->fructosa. Novo, lCl, Gist

Penicilinasa

B. subtilis,
B. cereus

Remocin de penicilina. Takamine,


Schenley

Glucosa
oxidasa

Aspergillus niger,
Dee O, Dee G

Remocin de oxgeno o de glucosa


de diversos alimentos; indutrializacin del huevo seco. Takamine

Glucosa
tsomerasa

Actinoplanes
missourensis

Penicillium
chrysogenum
Hialuronidasa
Lipasa

Determinacin de glucosa. Nagase


Co.

Animales,
bacterias

Uso mdico

Pncreas,

Ayuda digestiva; saborizante de


productos lcteos

mohos
lRhizopusl

Citocromo c

Brocades

Levadura

Uso mdico. Sankyo Co.

lCandidal
Catalasa

Esterilizacin de leche

Oueratinasa

Streptomyces
fradiae

Remocin del pelo de las pieles.


Merck Co.

b l-ostodi-esterasa

Penicillium citrnum; S. griseus


B. subtilis

Manufactura de cido inosnico y de


cido guanlico (5'nucletdos). Yamasa Co., Takeda Co.
:

Acido adenlico

A.

AMP --> lMP. En Takadiastasa.

orizae

deaminasa

Contina
190

Tabla 4.3 (Continuacin)


Nombre

Fuente

Aplicacin y comentarios

Cuajo mcrobial

Mucor sp.

Manufactura de queso. Meito Sangyo Co.

Naringinasa'

Aspergillus niger

Remocin del sabor amargo de los


jugos ctricos. Rohm & Haas.

Laccasa

Coriolus
versicolor

Secado de lacas.

Celulasa

Trichoderma
koningi
Trichoderma
viride

Ayuda digestiva; pH ptimo: 4,6


Hidrlisis de la celulosa. Mezcla de
enzrmas

lnvertasa

Saccharomyces
cerevisiae

Confitera, previene la cristalizacin


del azcar; chocolates; melazas de
alto grado

Pectinasa

Sclerotina libertina, Coniothyrium diplodiella

Clarificacin de jugos; remocin de


pectina; concentracn de caf.
Scrase (Sankyo);"Pectinol (Rhm &
Haas); Takamine.
Rohm & Haas; Takamine
Pectinasa Clarasa (Takamine)
Filtragol (1.G. Farben)

A. orizae
A. niger
A. flavus

4.2

ACTIVIDAD ENZIMATICA

4.2.1 Velocidad inicial de una reaccn catalzada por una enzma

Un experimento tpco para medir la velocidad de una reaccin catalizada por


una enzima pura consiste en mezclar las soluciones de sustrato y de la enzima
pura apropiada, tiempo cero, en un recipiente bien agitado, en condiciones
isotrmicas, con una solucin amortguadora (buffer) para controlar el pH.
191

sustrato y de producto es registrada en diversos momentos


mediante tcnicas espectrofotomtricas, manomtricas, polarimtricas,
electrodos y mtodos de muestreo y anlisis.
La concentracin de

La variacin inicial de la concentracin de sustrato, o de producto, con respecto

al tempo, puede calcularse a partir de la ecuacin:

=l #L. = I'r=o

t4.1I

Donde, p, s, ei concentracin de producto, sustrato, y enzima, respectivamente;


r: tiempo de reaccin; v: velocidad inicial de la reaccin. Para t : 0: e : eo,

P: P.YS:

so'

Generalmente, la representacin grfica de los datos de un experimento tpco


para medir la velocidad inicial de una reaccin catalizada enzimticamente
indica, como en el caso del Problema 4."1, algo de producto en el tiempo
registrado como cero y, por consiguiente, este tempo realmente no es el tiempo
inicial de la reaccin; Adems, cuando una enzima se remueve de su ambiente
biolgico nativo y se cgloca en un ambiente acuoso "extrao", pierde gradual-

mente su actividad catalt;ca. Sin embargo, a pesar de estas dificultades, el


mtodo de determinacin de las velocidades iniciales de la reaccin, es razonablemente reproducible. Las unidades de actividad indican la cantidad de enzima
que produce una determinada actividad catalltica bajo un conjunto definido de
condiciones estandarizadas para esa enzima particular. Generalmente se
encuentran diferentes definiciones de actividad para la misma enzima estudada
bajo diferentes conteitos.

Ejemplo

4.1 Determinacin

de la actividad de la enzima B-

glucosidasa

Lee; 1992, describe el siguiente procedimiento experimental, con el propsito


de medir la actividad de una enzima y la velocidad inicial de la reaccin: Se agregan 5 ml de celobiosa (concentracin: 1 0O pmol/mll a 44 ml de solucin amortiguadora (buffer) en un recipiente agitado. Se agrega entonces, para iniciar la
reaccin, 1 mlde solucin de la enzima (B-glucosidasa, concentracin: 0,1 (mg

192

enzima)/ml y se toman muestras (Volumen: 0,1 ml) de la mezcla a los 1, 5, 10,

15 y 30 minutos. Los datbs del contenido de glucosa de cada muestra

se

presentan en la Tabla 4.4.

Calcular: (1) La velocidad inicial de la reaccin; (21 La actividad de la Bglucosidasa expresada como la cantidad de enzima que produce 1 (pmol
glucosa)/minuto.

Tabla

4.4

Determinacin de la actividad de la enzima B-glucosidasa, Lee, 1992.


Concentracin de glucosa en /mol/ml

Tiempo en minutos

0, 05
0,23
0,38
0 ,52
t-, 03

10
15
30

Solucin: - Los datos de la Tabla 4.4 son representados en la Figura 4.1. La


velocidad inicial de la reaccin se calcula a partr de la pendiente de la lfnea a
trazos:
vctocidad iniciut =

Affi

4.2.2

*3

= (o,o4sg).(so

= o,o45e

n[

##f

= 2,288

W,

Nmero de recambio

Elnmero de recambio, N, de una enzima (Tabla 4.5) es el nmero de molculas


de sustrato transformadas por unidad de tiempo por una molcula de enzima,
o por cada centro cataltico, cuando la enzima es el factor limitativo de la velocidad.

193'

: ,.

Figura 4.1 Determinacin de la velocidad inicial de.la reaccin entre ta


B-glucosidasa y una solucin de celobiosa. Ejemplo 4.1.

_ Glucoso producido,

enzima

micromol/ml.

^c-'

0.5
o.4
0.3
Q.2
0.1

10

15

Tiempo de reoccion, mnutos


+

Ejemplo

4.2

Dotos experimentoles '--- - Tendencio inicol

Determinacin'del nmero de recmbio

Hallar el nmero de recarnbio de una enzima (peso molecular: M : 1 16OO0), si


12 Ug de enzima transforman 32 micromoles de sustrato por minuto.

Rcconbio

Molculas d sustrao transformadas

(ticmpol.(noUcub de ewimal

Por consiguiente el nmero de recambio es;

32.10-6 mol sustrato 110O e nzima


(niruao).(l2. 10-6Sr euinw) mol euima
Nnro d econbio =

194

mal s+rao
minuto.mol etuims

3@.333,3

Tabla 4.5 Nmero de recambio.de algunas reacciones catalzadas por enzimas


y catalzadores slidos. (Maatman, 1973); ly': nmero de molculas por sitio
activo por segundo.
Enzima

Reaccin

lntervalo de los
valores de /V informados, entfe 0 y
370C

Ribonucleasa

Transferencia del fosfato de un polinucletido

- 2.10-3

Tripsina

Hidrlisis de pptidos

3.10-3

- 1 .102

Papaina

Hidrlisis de pptidos

8.10'2

Bromlna

Hidrlisis de pptidos

4.10-3 - 0,5

Anhidrasa
carbnica

Hidratacin reversible
de los compuestos de
carbonilo

9.10'1 .6.105

Fumarato

L-malato
Hro

hidratasa

fumarato +

.103 (hacia la

derecha)

3.103 (hacia la iz-

quierda)

Catalizador sHo

Reaccin

so2 - Al2o3
(impregnado)

Destilacin
fraccionada
del cumeno

3.10-8

2.104

420

Zeolita
decationizada

Destilacin
fraccionada
del cumeno

325

Deshidrogena-

7.10-11

cin del ciclohe-

102

vro,

10e
108

Temperatura,

oc.

25

25

25
350

xeno

Cu.Au
tratado

cin de HCOrH

Alcl3-Al2o3

lsomerizacin
de n-hexano

Deshidrogena-

(lquido)

2.107
3.1010

1.10'2
1,5.10-2

25
327
25
60

19s

4.2.3 lnfluencia

de los factores ambientales

En la clula se forman continuamente centenares de enzimas que funcionan


coordinadamente para fomar productos en la proporcin correcta y aprovechar,

sin desperdiciar, los nutrientes disponibles. La estructura de una

enzima
depende de numerosos enlaces dbiles no covalentes. Por esta razn la enzima
tiende a perder su conformacin o a desnaturalizarse, La actividad especfica de
una enzima es perturbada por factores ambientales como pH, temperatura, los
esfuerzos cortantes, la intensidad inica del medio y el estado de la enzima en
el reactor (en solucn, o inmovilizada sobre un soporte). Estos factores deben

tenerse en cuenta en el diseo de reactores para la conversin de sustrato en


productos tiles. EI propsito de esta Seccin es describir el efecto del pH y la
temperatura sobre la actividad enzimtca,

4.2.3.1

pH

En la Figura 4.2 se muestra la influencia del pH sobre la actividad de tres


enzimas, Hay un valor ptimo de pH para el cual la actividad enzimtica es
mxima. La influencia del pH se debe a los grupos ionizables presentes en el
sitio activo de la enzima, estos grupos pueden tener una carga positiva o
negativa, de acuerdo con el pH del medio, pero el stio actvo debe estar en la
forma inica adecuada para tener actividad cataltica, Ennis y Maddox, 1987t
Bahlet al., 1982.

4.2.3.2 Temperatura

La temperatura, en el intervalo adecuado, favorece inicialmente la activacin de

la enzima y luego cuando es demasiado alta la inactiva o desnaturaliza. A


medida que la temperatura aumenta, aumentan la velocidad de reaccin y la
196

frecuencia de las colisiones entre molculas de enzima y de sustrato. Esta


velocidad atcanza un mximo a la temperatura ptima para la actividad de cada
enzima particular. Un incremento adicional de temperatura reduce gradualmente
la velocidad de la reaccin catalizada a causa de la ruptura de los enlaces covalentes dentro de la molcula de enzima. Un aspecto fundamental en el diseo
de reactores enzimticos es el logro de un microambiente apropiado para la
enzrma.

Figura 4.2 Efecto del pH sobre la actividad enzimtica de tres enzimas:


pepsina, descarboxilasa y arginasa' (Fruton y Simmonds, 1953)'

too

Actividod relativo, %

ao
60
40

20
o

17

pH

Los recientes avances en biologla molecular estn dirigidos hacia la modificacin


de la estructura de la enzima con el propsito de retener su activdad dentro de
n intervalo ms amplio de temperatura y de pH, 'y aurnentar as su campo de

aplicacin. Generalmente, la influencia de la temperatura sobre la activacin o


inactivacin de un sistema enzmtco, puede describirse mediante la ecuacin
db Arrhenius:

ft

= .r{.exP-

(#,)

f4.21

197

Donde: Eo: energla de activacin, J.mol-l; R: constante de los gases, R : 9,314


J.mol-l .K-l ;T: temperatura absoluta, K; A:factordefrecuencia, s-1; k: constante
de velocidad, s-1.'

Ejemplo

4.3

Determinacin de las energas de activacin e


inactivacin de un sstema enzmtco

Sizer (1944), estudi la activacin e inactivacin del sistema catalasa-peroxido


de hidrgeno. La catalasa utilizada fue extraida del hlgado de vaca y luego
recristalizada. En este caso la actividad de la enzima se define mediante la
velocidad de produccin de O, (convertida a temperatura normal) del sistema
catalasa-Hror. La velocidad de produccin de gas se evala con un manmetro
Warburg-Barcroft en el intervalo de temperatura entre 0 y 60oC.

La Figura 4.3 es una representacin grfica de los datos experimentales.

La

ordenada representa el logaritmo de la velocidad de produccin de oxgeno, en


(mm)3/(minuto), y la abcisa representa el recproco de la temperatura absoluta.
Calcular las energlas requeridas para la actvacn e inactivacin del sistema.
Solucin:

- Los valores experimentales obtenidos aparecen repartidos en dos grupos en


la Figura 4.3. El primer grupo est relacionado con la activacin de la enzima
en el intervalo de temperatura entre 0 y 53oC (correspondiente a valores de 1/T
entre 3,66.10'y 3,O7.10-3 K-1), El segundo gruBo est relaconado con ]a
inactvacin de la enzima a mayores temperaturas, hasta 66oC {correspondiente
a valores de 1/T : 2,95.103/K.

- La ecuacin

de Arrhenius describe adecuadamente la dependencia de la


temperatura de muchas reacciones catalizadas por enzimas, y la descomposicin
del HrO, consttuye un buen ejemplo.
La pendiente de la curva ln k vs 1/T es

198

(EA/R), Ecuacin t4.21:

::t

lnt, = ln,lr-{fi
lntz=ln
por tanto.' Ea

EA

"- nJ,

2,303 (og

&-log tt)

R.. IT1 +
-

(1t

T2

4.3 Representacin grfica de la influencia de la temperatura, en grados


K, sobre la activacin e inacfivacin del sistema catalasa-perxido de hidrgeno.

Figura

Velocidad de la reaccin: velocidad de produccin de 02, Bn, (mm)3/(minuto),


Sizer, 1944.

^=-Loo, velocidod de reoccion


25
z.J

7.9

t7
1.5

2.9

3.

3.2

3.3

3.4

3.5

3.6

J.7

3.8

Parala rama derecha de la curva (Figra 4.3):


log

k, : 2,4i

1lTl-

3,25.10-3

: 2,1'

1lT1

3,61.10-3

log k,

199

: ''

Si se reemplazan estosvaloresen la Ecuacin (1), donde R

se obtiene la energla de activacin: E^

= - 15.956

8,314J.mo|-l.K-1, *

J.mol-1.

Similarmente, paa la rama izquierda de la curva (Figura 4.3):

log

kz: 2,2i

1lT2

log

k,: 1,7'

llT

j:

2,985.103
2,94.103

Si se reemplazan estos valores en la Ecuacin (1), se obtiene la energa

de

activacin:

E=-212.746J.mo|'1
La energfa de inactivacin

los valores anteriores de


AHd

4.3

Al{., de la enzima es elvalor absoluto de la suma

de

Eo:

15.955,9 + 212.746

228.70"1,9 J.mol-l

MODELOS CINETICOS DE LAS REACCIONES


CATALIZADAS POR ENZIMAS

4.3.1 Modelo de Michaelis-Menten

Un modelo es un conjunto de relaciones entre'las variables de inters del


sstema estudiado. Estas relaciones pueden expresarse mediante ecuaciones,
grficas o tablas. En el caso de la cintica enzmtca homognea, las variables
de inters tales como ternperatura, concentracin, pH, oxgeno disuelto,
velocidad de reaccin, son generalmente uniformes en la regin de control
considerada,

200

Michaefis y Menten (Bailey y Ollis, 19861 hicieron importantes contribuciones


a la deduccin de las ecuaciones de velocidad de la reaccin irreversible:

s--k-->

t4,31

para la cual se plantean los siguientes mecanismos:

S + E --- k,, --)

ES

S+E (--kr--

ES

t4.3.al

ES ---k.--) P+E

t4.3.bl

Donde: S, P, ES, E, indican el sustrato, el producto, el complejo enzimasustrato, y la enzima respectvamente. La ecuacin anterior supone que cada
molcula de enzima acomoda slo una molcula de sustrato, aunque hay
moiculas de enzimas con varios sitios activos disponibles para ligarse con
mriltiples molculas de sustrato,

Sise supone que la ecuacin t4.3.al est en equilibrio, o en otras palabras, que
equilibrio se logra rpidamente si se-compara con la menor velocidad de'la
reaccin [4.3.b], la velocidad de la reaccin [4.3], es:

'el

rs=

-#=rr=#

=kr(cs)=r

14.41

Donde: s, p, (es), representan la concentracin molar de sustrato, de producto


y de complejo enzima-sustrato respectvamente; rs: velocidad de consumo de
sustrato; rr: velocidad de formacin de producto.
La ecuacin de balance de materiales de la enzima es:

eo=e+(es)

t4.51

Donde: oo, o, os, representan la concentracin molar de la enzima cargada al


reactor, de enzima libre, y de enzima ligada al complejo respectivamente. Si la
ecuacin anteror se divide por eo, se obtiene:

=fs*fs

t4.61

201

Donde: f, : eleo, fEs : (es)/eo: representan la fraccin de la enzirna total


presente en forma libre y la fraccin de enzima ligada al complejo, respectivamente.
Despus de reemplazar

fr. en la Ecuacin

14.41, se obtiene:

r = h.e"-fo

f4.71

Adems si en la reaccin t4.3.al se supone que el complejo est en equilibrio


con los componentes libres se obtiene;

e.s=k_kc,s

t4.81

K1

_
t,-

t4.9t

fts*s

Donde k. es la constante de disociacin del complejo enzma-sustrato.

Si la velocidad de formacin de producto est contolada por la velocidad k.,


entonces k3 < < k, Y k. = Kr,, donde K, es la constante de Michaelis-,Menten.
Si la fraccin fr. de la Ecuacin 14.91 se reemplaza en la Ecuacin t4.71 se
obtiene:
f=

Vx's

t4.101

Kr*s

Donde la mxima velocidad de la reaccin se define como:

vv = 4-e"

14.11'-L

En la Ecuacin [4.10] conocida como ecuacin de Michaelis-Menten, V, es la


velocidad mxima o velocidad limitante y K* es la constarfte de Michaelis. Puede
observarse que K, es la concentracin del sustrato para la cual la velocidad de
la reaccin es la mitad del valor mximo.
El valor de K, varla ampliamente de acuerdo con la fuente de la enzima. Cuando
la concentracin del sustrato es alta, s > > Kr, la velocidad de la reaccin

202

enzimtica es prccamente iguala la mxima velocidad y es independiente de


un incremento de s:

t-Vu

f4.12t

Si s < ( Kr, la velocidad de la reaccin, r, es muy sensible a los cambios de


concentracin del sustrato:

=Vu's
Ku

t4.131

Figura 4.4 tnfluencia de la concentracin del sustrato sobre la velocidad de la


reaccin enzimtca de hidrlisis del almidn con o-amilasa,.Dawes {1967)' La
concentracin, eo, de la enzima, Se mantiene constante. DatOs de !a Tabla 4.6.
140

velocidod relotivo de lo hidrolisis

20

oo
ao
60
40
20

12
I
6
3
concentrocion de sustroto, mg/ml

En la Figura

4.4 se representa

15

la ecuacin de Michaelis-Menten, la concentracin

de la enzima se mantiene constante cuando se estudia el efecto de la concentra-

cin de sustrato sobre la velocidad de la reaciin catalizada'

203

- Representacin grfica de Lineweaver-Burk:

1 *Ku
r - Vx Vus

4.141

- Representacin grfica de Langmuir:

!-Ku * 1"
rVaVM

14.151

- Representacin grfica de Eadie-Hofstee:

r=Vu - KuL
s

t4.161

En el mtodo de Lineweaver-Burk, Ecuacin f4.141 los valores de 1/r son


representados grficamente contra los correspondientes datos de 1/s,
obteniendose una recta, de pendiente K/Vp, e intercepto 1/Vr.
Los vlores de r determinados con mayor exacttud, o sea, aquellOs correspon-dientes a elevadas concentraciones de sustrato, para las cuales el cambio de la
concentracin de sustrato s con respecto al tiempo es muy pegueo, son los
puntos cgn los mejores datos, pero estos quedan agrupados cerca del
intercepto, y la pendiente queda determinada, predominantemente, por los

valores menos exactos. Por esta razn no debe utilizarse, con estos datos, el
ajuste de valores por mfimos cuadrados

[4.15], por-elcontrario, tiende a esparcir los


puntgs de datos,haCia mayores valores detr, y, por tanto, la pendiente 1/V*
puede catcularse con mayor exactitud, pro el ntercepto KM/VM, generalmente
queda muy cerca del origen y la determinacin de K, puede estar sometida a
El mtodo de Langmuir, Ecuacin

errores.

205

En el mtodo de Eadie-Hofstee, Ecuacin t4. 1 61, los valores de r son representa-

dos grficamente contra los correspondientes datos de r/s,la variable medida,


r, aparece en ambas coordenadas y los grrores cometidos en la determinacin
de K, y V, pueden ser grandes. Una metodologa apropiada consiste en evaluar
Vr, por uno de los mtodos anteriores y luego construir una grfica de r vs s,
similar a la Figura 4.4, con el propsito de hallar la concentracin del sustrato
para la cual la velocidad r esY*12. Como se mencion anteriormente, este valor
de la concentracin de sutrato s es el correspondiente a Kr.

Ejemplo

4.4

Evaluacin de Ios paimetros de la ecuacin de


Michaelis-Menten para la hidrlisis del almidn

En las dos prmeras columnas de la Tabla 4.6 se presenta un resumen de los


datos experimentales de la hidrlisis del almidn con o-amilasa, obtenidos por
Dawes (1967). Determinar la constante de Michaelis, Kr, y la velocidad
mxima, Vr.

Solucin:
- Los datos de la Tabla 4.6 son representados grfieamente^en las Figuras 4.4,

4.6,.4.7 y 4.8.

- De

la, Figura 4.6, representacin grfica de !a ecuacin de Lineweaver-Burk


(Ecuacin 4.141, se deduce: Kr,r : 3,57 mg/ml; Vu : X29,9

- De la Figura 4.7, representacin grfica de la ecuacin de tangmur (Ecuacin


t4.151), se deduce: Krv : 3,5 mg/ml; Vy = 129,4.
- De la Figura 4.8, representacin grfica de la ecuacin de Eadie-Hofstee tEcuacin'4.16), se deduce: Ku : 3,43 mg/ml; Vu : ;128. :
,

206

Tabla 4.6 Datos de la hidrlisis del almidn con o-amilasa, Dawes, 1967 r:
velocidad relativa de la hidrlisis; s: concentracn del sustrato, mg/ml.
1/s

1lt

s/r

r/s

10r_, 0

0, 080

0,124

,2
,4
90, 0
82 ,7

0,089
0, 111
0 ,]-23
0, 158

,04
8,74
10,27

79,1-

0, 178

io,g

0,,234
0,28].
Q ,427
1,000

0,0099
0, 0L01
0,0108
0, 0111
0 ,072].
0 ,0L26
0, 0141
0, 0154
0,0193

L2,56
L7- ,24
9, OO'
8,)-2
6,33
5 ,61
4 ,28
3, 55
2,34
1,00

98
92

55,0
51 ,7
28 ,8

0, 114
0, 097'
0,090
0.076
0, 071
0,050
0, 055
0, 045
0, 035

0..n0347
,.#f

1r-, 08

13,05
7-4,)-O

].6,56
]-8,26
22, Q9
28,80

ii

4.6

Representacin grfica de Linewaver-Burk de los datos experimentales obtenidos por Dawes (1967) en la hidrlisis del almidn con a-amilasa'

Figura

1,/,
o.o3

o.o2

o.o I

-o.4

-o.2

l/Km

0.4
o.2
1/s, ml/mg

o.6

207

4.3.1.2 Modelo de Briggs-Haldane

1925, aplicable al complejo intermedio, ES, es vlido para reacciones en un sidtema cerrado, siempre que so > >
eo. La reaccin 4.3.a, no alcanza elequilibrio sila velocidad de descomposicin
del compleio ES, hsta producto y enzima libre, es rpida, comparada con la
veloeidad de disociacin de ES, hasta E + S.
El modelo propuesto por Briggs y Haldane,

En un sistema con una concentracin inicial de sustrato mucho mayor que la


concentracin iniciaf de enzima, puede aplicarse la aproximacin de estado
cuasiestable, dbd/dt : 0. al complejo intermedio'

4.7

Representacin grfica de Langmuir de los datos experimentales


obtenidos por Dawes (1967) en la hidrlisis del almidn con a-amilasa.
Ftgwa

0.

l4

0.12
o.1
--i-...--

0.08
0.06
0.04

'm/Vrnax

o.o2
o

-2
-4
- Km

208

4
6
s, mg/ml

to

12

14

En la Figura 4.9 se muestran los resultados obtenidos con el prograrna


C:\lSlM\MENTEN.SIM, resumido en la Tabla 4.7, o con el programa C:\GWBASIC\MENTEN.BAS, resumido en la Tabla 4.8, Los dos programas producen resultados similares.

Figura 4.9 Variacin de las concentraciones de sustrato, enzima y complejo


enzm-sustrato, de acuerdo con elmodelo de MicheJs-Menten. Representacin
grfica de los resultados obtenidos con los programas C:\lSlM\MENTEN,SIM y
C:\GWBASIC\ M ENTEN. BAS.

o,3

Si;ustrato,

Producto

Enzima,
Enzima, Complejo
Cometeio ES

o,o3

En la Figura 4.9 se observa que la suposicin de estado cuasiestable, dbd/dt


: O, constituye una buena aproximacin despus de un breve periodo inicial,
cuando la relacin entre los valores de las concentraciones iniciales de sustrato
y enzima, so/eo, es muy grande
En una clula viva las concentraciones de sustrato y de enzima son del mismo
orden, y no se aplica la aproximacin de estado cuasiestable. Si en la Ecuacin
t4.181 se reemplaza dbs)/dt : 0, y se eliminan e y s mediante la Ecuacin
[4.5], se obtiene (Bailey y Ollis, 1986]:

210

t4.19I

De acuerdo con la Ecuacin


constante d Michaelis, es:

14.1 11,

Klt

V, : kr.eo. Por consiguiente Kr, la

kz*h
=

k"

= t. + --:

"t,

k1

14.201

Donde k. es la constante de disociacin del complejo enzima-sustrato definda


en la Ecuacin t4.81.
En la deduccin de Michalis-Menten, la constante de Michaelis,

Ky,

es igual

la constante de disociacin, K, - ks = krlk,, mientras que'en la deduccin


Briggs-Haldane, K, : (k2 + k3)/kr. Estos valores de K, coinciden sik2 > >

de
ks;

lo cualsignifica que la etapa de liberacin de producto es ms lenta que la etapa


de disociacin del cctnplejo enzima sustrato,

Si se reemplazan k,eo y K* en la Ecuacin t4.191 se obtiene laecuacin de


Michaelis Menten (Ecuacin 4.10):
i-=--=-

"

dS

Vx.s

dt

Ka*s

cuando esta ecuacin se integra entre


obtiene:

*, ,.(|) .

t:

".

0, s

-s=Vil.t

so,

Yt : t, con s = 9, s
f4.211

Donde t es el tiempo requerido para alcanzar una concentracin dada de


sustrato.

211

4.3.1.3 Simulacin del modelo de Michaelis-Menten

fabla

4.7

Simulacin del modelo de Michaelis-Menten. Programa


C:\lSlM\MENTEN.SIM

:MENTEN,SIM

:Simulacion del modelo de tichaelis-Menten


Ei-ir

'

CONSTANT VM:0.01: mg/(ml.minuto) | ;"


CONSTANT KM :0.1 : mg/ml
CONSTANT E0:O.01 : mg/ml
CONSTANT S0= O.Q: mg/ml
: ,.
CONSTANT ESO:0
CONSTANT PO:O
CONSTANT CINT:0.01: Paso de integracion
CONSTANT TFIN: 100 : Valor final de la variable independiente
SIM

lNlTlAL : Condiciones iniciales

S:

SO

ES

P:

PO

ESO

DYNAMIC
E: EO-ES : Balance de materiales
:Constantes

K3-VM/EO; K3:VM/EO:1

K2:10*K3: K2 >> K3;K2:10


Kl =K2IKM:

K1

:10/(0,1)=100

: Ecuaciones diferenciales
K2*ES-Kl *E*S; Ecuacion 14.171
ES' : K1 *E"S-(K2 + K3l"ES: Ecuacion t4.181
P' : K3*ES: Ecuacion [4.4]
S'=-1 *P'

S':

212

: Salida de resultados en forma de tabla


OUTPUT T,S,P,ES,E

: Control de salida de datos (En este caso cada 1000.C|NT)


NOCI : 1000.0

S VAL

Tabla

4.8

Simulacin del modelo de Michaelis-Menten. Programa


C

:\GWBASI C\M ENTEN. BAS

1O REM MENTEN.BAS

20 REM Simulacion del modelo de Michaelis-Menten


30 KEY OFF
40 CLS
50 NN:1
60 REM Escribir las constantes:
70 VM:.01
'
80 Kl = 100
90 K2:10
100 K3=1
110 KM=.1
12O E0 =.01

130 REM Paso de integracion: T1


140 T1 =.01
150 REM Valor final de la variable independiente: T2

160T2:1OO
170 REM lntervalo de impresion de los resultados: T3

180T3=10
190 PRINT "MENTEN.BAS"
2OO PRINT

210
220
230
240
250
260
270
280

PRINT "Simulacion del modelo de Michaelis-Menten"


PRINT

PRINT
PRINT "T: variable independiente (tiemo, minutos)"
PRINT "Valor final de , 2="T2
PRINT "T1: paso de integracion, T1 =";T1
PRINT "T3; intervalo de impresion, T3-";T3
PRTNT

213

: .;

'

290 PRINT "PULSE ENTER !"


300 ANS$: INPUT(1)
3IO CLS
320 PRINT "RESULTADOS"
330 PRINT
340 PRINT "T: tiempo, minutos"
350 PRINT "O(1): concentracion de sustrato, mg/ml"
360 PRINT "O(2): concentracion de complejo enzima-sustrato, mg/ml"
370 PRINT "O(3)i concentracion de producto, mg/ml"
380 PRINT "E: concentracion de enzima, m/ml!:
390 PRINT
400 REM Numero de ecuaciones diferenciales:
410 N:3
420 REM condiciones iniciales: Ol :S;O(2):ES;O(3):P;O(4):E j
430 O(1)=.3
440 O(2)=0
450 0(3):0
460 REM Subrutina de Runge-Kutta de orden 4;
,
47O :lNT(T2fr1 +.5):T1 :f2lT:l = INT(T3/T1 +.5):T3 :T"T1 :T :0:T4
480 T8:1 :GOTO 720
490 IF(T-T4 +T1 l'l0)< 0 THEN 530
500 T4:T4+T3:T5 :lNT(TiT1 +.5):T:T5*T1 : GOSUB 780
510 1F(T-T2 +T1l10l<0 THEN 530
520 LOCATE 23,1:END
530 0N T8 GOTO 550,590,630,670
540 PRINT"** ERROR **':STOP
550FORT5=1 TON
560 T0(TS) :T1 *l(T5):T6(T5) : O(T5):O(T5) : O(T5) + T0(T5)/2
570 NEXT T5
580 T:T+T1 l2:T8:2:GOTO 72O
590 FORTS:1 TO N
000 T7 =T1 *l(TS):T0(TS)=T0(T5) +2*F7:OlT S):T6(T5l +T7t2
610 NEXT T5
620 T8:3:GOTO 720
630 FOR T5:1 TO N
640 T7 :T1 *l(T5):T0(T5l :TO(T5) + 2+T7:O(TS) -T6(T5) + T7
650 NEXT T5
660 TB =4:T =T + T1 i2:GOTO 72O
670 FOR T5=1 TO N
680 0(T5) :T6(T5) + (T0(T5) +T1 *r(T5))/6

214

:0

690 NEXT T5
7oo rB: 1 :GoTo 720
710 REM ECUACIONES DIFERENCIALES:
72O
73O

tll l: K2*O(2)-K1 *(EO-O(2))*O(1)

ll2l:

K1

*(E0-O(2))'O(1l-lK2+ K3)"O(2)

740 l(3)= K3+O(2)


750 E = E0-O(2)
760 GOTO 490
770 PRINT
TEOPR|NTSpC(3);"T = ";T;SPC(3);"O(1) = ";O(1);SPC(3);"Ol2l =" t0l2l;SPC(3)
;"O(31 : ";O(3);SPQ(J);"E: ";E

790NN=NN+1
8OO RETURN

4.3.2 Modelo tipo Michaelis-Menten para una reaccin enzimtica


fevefsible

El modelo considerado en esta Seccin, para una reaccin enzimtca reversible,

tipo Michaelis-Menten, se fundamenta en las siguientes ecuaciones:

S + E---k,---)

ES

S + E <--k2----

ES

ES--k3---> E +

4.221

ES(---ko--. E+P
La velocidad de esta reaccin es:

=-'i ds
dt' =h.s.c-k.@l

t4'231

Cuando se aplica la aproximacin de estado pseudoestable alcompleio enzimasustrato, (es), se obtiene:

215

14.24t
i -

i;
,:',

'.

.n::

Ecuacin
La ecuacin de balance de materiales para la enzima,
'1
I

'

[4.5], es:

(es)+:@o
Y, de acuerdo con las dos ecuaciones anterores:
14.25t

Finalmente, si las concentraciones de e y (es), definidas en Ias dos ecuaciones


anteriors, son sustituidas,en la Ecuacin 14.2Ol;

r =tq.".[r, VN

Kx
1i

Donde: V, =

(rs)]

- k.(*1"''
VP

jltrr

f4 26t

KP

P
--'+
Ka KP

[Ecu. 4.1 1]

kr.eo

-K*-\:

Vr=fk^ .Yu
h

fEcu. 4.201

K, =

k.

t.k"

t4.271

dLtetacin t4.261 es la"expresri de la vlcidad-de una reaccin enzimtca


reversible.

216

Eiemplo

4.5

Determinacin de la relacin entfe el caudal y el


grado de conversin, en la isomerizacin de glucosa,
en un feactor emPacado

Determinar el caudal afluente a un reactor (dimetro interno: 0,085 m; altura del


lecho: O,425 m) empacado con glucosa isomerasa inmmovilizada sobre almina
o/o de glucosa en
con tamao controlado de poro, necesario para Convertir 40

fructosa.
El reactor se alimenta, durante su instalacin, a azn de 6 ml/s,.con una mezcla

:
compuesta por 36 Yo len peso) de glucosa pura (densidad de partcula: p,
o/o
dela
1544 kg/m3, y agua pura (p : 1000 kg.m3) encontrndose que el24
glucosa es convertida en fructosa.
Solucin:

1. Velocidad de la reaccin.
La isomerizacin de glucosa hasta fructosa es una reaccin enzmtica reversible
catalzada por la enzima glucosa isomerasa. En condiciones de equilibrio la

mezcla de glucosa y fructosa est formada por 52 7o de glucosa y 48 % de


fructosa. Las constantes KM y K, son aproximadamente iguales a 0,005 M,
(Atai, 1989).
Si se reemplaza, Kn

Kr, en la Ecuacin ta.26l:

- Vp.p
Kr+s+P

Vu.s

En el equilibrio,

r = 0, por tanto:

sE.Vy

= P6'Ve

(1)

l2l

Donde, s y pr: concentraciones de glucosa y fructosa, respectivamente, en el


equilibrio. El balance de materiales del sustrato, es:

So:S+P

(3)

217

Oohde so;,;,p: l'conifti'rc,frtFHf cle Strrstrato, de s'mtrflibd y de susttqto


snr'los;ro(fuctG,. fespectivmrente. i;.-'rij r '., i
i,
,::;-'.:'

.\:.:'j6.

r \'-,..,.

Cuando se reemplazan las dos ecuaciones anteriores en la Ecuacin (1), se


obtiene:

Kr.+ ,

-',

,=-J"-.["-o.(",-")]
\
' Kx+sot
\,'
ds

dt

vx
Klt *

so

,:

.ls. -

l.

(5t

c)

Donde:
i.
Q=-:-=

P"

Adems: s

so, ofl

t:

0; s = s, o t

tI

: t.

Portanto:

,,trx *.s,

(6t

,,

h!'--" =:'',
s.b-c Ko+so t=k,.t

La Ecuacin (6) es la ecuacin de diseo e un reactor Je ujo tDBn.

2.'volumentai'tn

r = f,.a2t
'218

.'i,:.'::i,

.1.,

t,

r' | 1'f-l

f.{o.geslz.o,

, :; ".-

..

zs = 2,41.10-s ms

3. Tiempo de retencin

v
t=L=

2.41
-"'==4O1

6.1n-3

.7

s,

4. Concentracn del sustrato


Base de calculo: 1 kg de mezcla (36 %, en peso;,de glucosa, y el resto agua)'

0,38 kg gfu.

*
1w ks.m-3
-o
"-=

0,64 kB agua

looo kg

= g.73.16-4 m3

22-s

0'S ,=412,3kg.^-"

g,7g.lo-4

5. Concentracin del sustrato efluente para una conversin de 24 7o de glucosa


en fructosa: s : O,76.s..

6. Constante de velocidad, k (Ecuacin


A=

6):

:.

O,52
's= ---:---l
-p. 0,48 = 1,08B '

b = 1 + a = 2,0833:. c = d.so = 1,083l.so


2,0833.so
-'-- - -. 1,0838.so
, ,
ln
"' (2,083ft).
(0,76).s,.- 1,0833.s,

=k'.4O1,7

:;

k' = 1,7?f -1@ 0,"-t =,0,1035 (nhwo)-1


7. Velocidad mxima, V, (Ecuacin 6):

b'v,
K*+so
Donde

- 2,OOS| I

L,

, = 4123 g.(litrol-r

219

Kr = 0,005 nol.180 c.(mol)-1 = g,g e.(litro)-l

vy = o34

d;

Puede obaeivarse, gn"este ejemplo particular, so


So/Kv

412,310,9

))

458,1

8. Caudal correspondiente a una conversin de 40


En la Ecuacin (6) se remplaza

"

o/o

de glucosa en fructosa:

0,6.so:

rn@
.:"@f=l't*'I,--'t
r = 1038.34

Kr:

Q = 2,g2

=tz)sto-s

141 litres''

oa

. 10-s litro

9. lnactivacin de la enzima.
.i

--

Suponer que la actividad de la enzim'inmovilizada en !a'columna disminuye


gradualmente de acuerdo con'ta ecuacin: ln (k/k") ': - ko.t. Hallar la velocidad
de degradacin, ko, de la enzima si la actividad enzimtica, despus de 60 dfas
de operacin, disminuye a\72,3 % del valor inicial.

*Ko = -

ko.t =

o'7?.3'k'
11

tp = 5,4.10-s

Ko

- tp.fl)

(ilo\-1

Si el objetivo del proceso es mantener constante la calidad del producto, la


velocidad de alimentacin a la columna s debe reducir al 72,3 % del valor
inicial, despus de 60 dlas de operacin.

220

4.6

Determnacin de la relacin entre la concentracin


de sustrato y el tiempo de reaccin en un reactor por lotes
empacado con enzima inmovilizada sobre un soporte
Ejemplo

Calcular e! tiempo de reaccin requerido para convenir 40 % de glucosa en


fructosa, en un reactor operado por lotes. El reactor contiene 12 litros de una
mezcla formada por 36 o/o, n pesO, de glucosa, y el restO agua pura.
Realizar clculos para so : 0, 1.Ky; so : K^r; so = 10.Kr; s" = 100.Kru y so :
458,1.KM.
Solucin

1. Velocidad de reaccin.
La ecuacin de velocidad aplicable a este proceso es la Ecuacin (6) del Ejemplo

4.5. Sin embargo,


k' : Constante.

debe tenerse presente que en el Ejemplo 4,5, so

))

Krrr

2. Tiempo de reaccin correspondente a so = 0, 1.Kr.


Los siguientes datos fueron tomados del Ejemplo 4,5:
O,342 g.litro-1.s-l; c : (1,0833).s";b : 2,0833).s".

K, = 0,9 g.litro-l; V,

40 o/o de conversin de glucosa


en fructosa os: s : 0,6.s". Cuando estos valores son remplazados en la
Ecuacin (6) del Ejemplo 4.5, se obtiene:
La concentracin de sustrato correspondiente a

,t'=0,7196t t=2,49s

221

S.fiempo de reaccinco[rgspondier-e a so =

:i

Kur

o,9

s.l{1ro]r1.

,'.1,ro='k,.t=#*#,
.

k'=

0,3958

,,_'

t = 4,53 s

4. Tiempo dq reaccin correspondienite,F so = 10.KM = 9 g.(litro)-r.


I

1,792 =

*,., = 2'o9-'o'lP.,
0,9+9

t'=0,07196i t=24,9s
,,: .,

5.'Tiempo d reacci6n correspondate'a.-s"


,:l

1OO.K^

:,rl

-r
1,7e2=fr'.r= 2'ffi';0#.,

9O g.{litro)

i"i

.:!

1".

i.

'

a ':; :
. t,

k'=7,837.1O-s; t

r,

=228,7 s

,1_::-.

6, Tiempo de reaccin correspondiente a s" = 458,1.K,,, = 412,29 g/litro.


1.792 = p,.,
._

i..,

.,
= 2,083'0,u2
+
0,0

412,N

,,

x'=t..,7?7,{-3i r = 10,3#s
Este tiempo de reaccin es igual J,tempo de retencin en el reactor de flujo
continuo descrito en el Ejemplo anterior.
.tr.ir

tz?2

_l

4.3.3 Modelo de inhibicin

competitva

La inhibicin es un mecanismo fundamental de regulacin qulmica de la


actividad enzimtica, En el caso de inhibicin competitiva el inhibidor y la
molcula de.,sustrato compiten por el mismo sitio activo de la enzima. El
inhibidor que puede ser una especie inerte, un producto de la reaccin, o el
mismo sustrato, se une con la enzima, en el sitio actvo, formando un complejo
no reactivo. El modelo de inhibicin compettva, considerado en esta Seccin,
se fundamenta en las siguientes ecuaciones:

ES

E+
ES

I (==:)
--k-->

EI

P+

KS

t4.281

Donde, S, E, ES, l, El, P: representan elsustrato, la enzima, el compleio enzmasustrato, el inhibidor, el complejo enzima-inhibidor y el producto, respectivamente; K., K,: constantes de disociacin de los complejos enzima-sustrato y
enzima-inhibidor, respectivamente.
La ecuacin de balance de materiales de la enzima es:

co=e+(cd)+(es)

t4.291

Donde, eo, e, (ei), (es): concentracin inicial de la enzima, de la enzima libre, de


la enzima en el complejo enzima-inhibidor y de la enzima en el complejo enzimaSustrato, respectivamente. Si la ecuacin anterior se divide por eo, se obtiene:

1--fB*fa*Fs

fr=

e
eo

ifer=*rrr= ?

t4.301

fs=1-(fw*f'')
223

Si las reacciones que conducen &.la{ftrmacin de ltis:compljos,,(eil, .(es),


estn en equilibrio, la velocidad de la reaccin, en condiciones estables, es:

=-ds

.dtd
.:

. -:,

,.1t

,ifs

,
=
Its

=+=k.co.f6,

O.ls,

:.r'
i'..
tF.r =

: !

,.)

l,

Urr,

Eond, bi i: cncntacih motar d'sustrto tnhiUUor, repectivinente.


.-lj:,'",

De

.\

fs*fn=f"-l
'o
'u 'D (rr" *-!-l
Kr)

t4.321
'i

,,!

t4.33I

+- s
x.
i

:- ,-,.*

,t

\i j arr"-il

:t_

i f.. de ta ecuacin anteior se reemplaza en la.ecaci de la velocidad..de


reaccin, Ecuacin [4.35], se obtiene:
t.

'it-

r = k.eo.fu =
li

".r,
Kn"

224

Vv's

cr.s

s+K*
(r

,)

! *; (' .)

f4.341

Donde,Vr:k.eo,(Ecuacin4.14t.; Kr.:constantedeMichaelis.modificadapara
inhibicin competitva. Elefecto de la inhibicin competitiva es aumentar el valor
de la constante aparente de Michaells, sin alterar el valor de la velocidad
mxima, Vr, de la reaccin.

4.3.4 Modelo de inhibicin

no compettiva

En el caso de inhibicin no competitiva la enzima se une en sitios actvos


diferentes con el sustrato y el inhibidor., Frecuentemente el inhibidr se une con
la enzima en un sitio esencial para su funcin. Las reacciones bsicas del
modelo considerado en esta Seccin, son:

S + E (::=)
E+I

(===)
-" ='

ES
EI
?

+.e
EIS

rA)

Ks

t4.35.a1

t4.35.bI

Ks

t4.35.c]

t4.35.dI

Donde, S, E, ES, l, El, EIS: representan el sustrato, la enzima, el complejo


enzima-sustrato, elinhibidor, elcomplejo enzima-inhibidor, y elcomplejo enzimainhibidor-sustrato, respectivamente. Se supone que la presencia de sustrato o
de inhibidor en el entorno de la enzima no interfiere la unin del sustrato o del
inhibidor con la enzima. Por consiguiente, las constantes de disociacin, K. y
K,, de los respectvos complejos binarios (Ecuaciones 4.35.a y 4.35.b) son idnticas a las constantes, K. y K,, de las reacciones 4.35.c y 4.35.d.
La ecuacin de balance de materiales de la enzima, es:

eo=+(ci)+1s)+(eis)

t4.36I

225

Donde, o, e, (es), (eil, (eis): concentracin inicial de la enzma, de enzima libre,


de enzima'en el complejo enzima-sustrato, de enzima en el complejo enzima-inhibidor, y de enzima en el complejo enzima-inhibidor-sustrato, respectvamente.
En condiciones estables la ecuacin de la velocidad de la reaccin se obtiene
mediante un procedimiento similar al de la Seccin 4.3.3:

Va's

.t| +-

Kr Vaxc-s
Ks*s - Ks*s

a4.371

Donde:

14.37.A1

Donde, Vrr.: es la mxima velocidad de la reaccin. La inhibicin rio compettiva disminuye la velocidad mxima, Vr, por el factor (1 + i/Kr) sin afectar el
valor de la constante aparente de Michaelis.

Ejemplo

4.7

Determinacin de! tipo de reaccn enzimtca y


evaluacn de las constantes caractersticas

En las-dos primeras columnas dd las Tablas

4.9 y 4.1O se presenta un resumen


de los datos experimentales de la hidrlisis del almidn con o- amilasa,
obtenidos por Dawes (1967). l-ss datos de la tabla 4.9.corresponderi a la
hidrlisis en presencia de maltsa como inhibidor (concentracin i : 12,7
mg.ml-1). Los datos de la Tabla 4.10 corresponden a la hidrlisis en presencia
de a-dextrina como inhibidor {concentracin i : 3,34 mg/ml}.
Determnar, a partr de la representacin grfica de los datos por el mtodo de
Lineweaver-Burk, el tipo de inhibicin, compettiva o no, y las constantes
caractersticas, K, y V* en cada caso.

226

4.9 Datos de la hidrlisis del almidn en presencia de maltos li = 12,7


mg/ml), (Dawes, 1 967); s: concentracin delsustrato, mg/ml; r: velocidad relativa de la hidrlisis.
Tabla

10, 00

,0
7! ,4
62 ,5
7'7

7,70
5,26
4 ,55
3,33
2 ,0,4

58, 9
57 ,4
38,9

1,89
L,67

1/s

1l

0, 10
0, 13
0,19
0,22

0,013
0, 014
0, 016

o,ol7

0,30,

0, 019

,49
o, 13
0,50

,0
34,2

37

,026

,0 , 027
0

,029

Figra 4.10 Representaci6n grfica de t-ineweaver-Burk conespodiiinte a fa


hidrlisis del almidn con o-amilasa. Llnea continua: hidrlisis en presencia de
maltosa. Lnea a tra.zos: hidrlisis en ausencia de inhibidor (Figtrra 4.6).
t

,.?o

1,/,

o.o3

o.o2

o.o1

o.2

-o.2
7

248

0.4

/s, m//mg

,i

El intercepto sobre

el ee l/s, !nea a trazos de !a Figura 4.11, es:

- (1/KMl = - O,28. Portanto:

Krvr

3,57 mg/ml.

l'intercepto sobre el eje l/s,lnea continua de la Figura 4.11, es:


' : (1 lK,,l : - 0,2. Por tanto Kr, = 5.
Puesto que la inhibicin es competitiva, este valor corresponde a la constante
de Michaelis modificada para inhibicin competitiva, Kr",
El valor de la constante K, segn la Ecuacin

4.34, es:,
i'

Krc

=r,.(1 .

t ={s,sz).(r.?)

Kt = 8,34 nglrnl

4.10 Hidrlisis del almidn en presencia de a-dextrina (i 3,34 mg/ml),


(Dawes, 1967): s: concentracin del sustrato, mg/ml; r: velocidad relativa de la
hidrlisis.

Tabla

33,30
20, 00
L2 ,90
10, 00
6 ,06
3,,.64

,82
,84
1,60
t ,43

I
l_16 , 0

109,0
L02 ,0
85, 5
'7]- ,5
55,6
4'l ,6
35, 5
32,2
29,5

1ls
0,030
0, 050
0 ,077
0, 100
0, 165
0,275
0.355
0, 543
0

,625
,599

llt

8,62,L0

9,17.10-3

9,80.10-'
11,70.10-3
13,99.10-3
17, 98 . 1o''
21, 00 .10-'
28, 09.10-3
31, 05.10-3
33, 90 .10-3

229

2, lnhibicin por o-dextrina.

La Figura 4.1 1 es un diagrama de Lineweaver-Burk, construdo con los datos de


la Tabla 4. 1 0. La curva correspondiente a la a-dextrina se representa junto con

la curva obtenida en ausencia de inhibidor, (Figura 4.6, Ejemplo 4.4l..

Figura.,4.11 Representacin grfica de Lineweaver-Burk correspondiente a la


hidrlisis del almidn con o-amilasa. Lfnea continua: hidrlisis en presencia de
o-dextrina, Lfnea a trazos: hidrlisis en ausencia de inhibidor (Figura 4.6),
o.o4

1/r

o,o3

o,o2

o.o

o.2
0.4
1/s, ml/mg
4.11 puede observarse como la presencia de a-dextrina origina un
mayor valor de la pendiente y un menor valor del intercepto sobre el eje l,/s, sin
En la Figura

afectar el valor del intercepto sobre el eje I /r. Por consiguiente, la inhibicin es
competitiva. El intercepto sobre eleie l/r, de las dos curvas de la Figura 4.11,
es (1/V") : O,OO77. Por tanto: V,u : 129,9 (sin inhibidorl.

230

4.3.5 Modelo de inhibicin por sustrato

La inhibicin por sustrato es uno de los mecanismos comunes de regulacin de


la actividad enzimtica de la clula. Generalmente a bajas concentraciones, la
unin de una'molcula de sustrato con la enzima, en uno de sus sitios activos,

aumenta aparentemente la afinidad de la enzima por otras molculas de


sustrato, incrementandose la velocidad de la reaccin catalizada hasta alcanzar
una mxima concentracin de sustrato. Cuando se sobrepasa esta concentracin crftca, disminuye la velocidad de la reaccin. En algunos casos el exceso
de sustrato influye sobre la presin osmtica y la consiguente deshdratacin
de la clula
inhibicin por sustrato, considerado en esta Seccin, se fundamenta en las siguientes ecuaciones:
El modelo de

S+

E--->

S+

ES

--->

ES

SES

t4.38.a]

kl
k2

ES -k-->E+P

t4.38.b]
t4.38.c]

Donde, S, E, ES, SES, P: representan el sustrato, la enzima, el complejo enzimasustrato, el Complejo Sustrato-enzma-Sustrato, y el producto, fespectvamente;

kr y k, son las constantes de disociacin del complejo enzima-sustrato y

del

complejo sustrato-enzma-sustrato, respectivamente. La ecuacin de balance de


materales de la enzima es:

n=c+(es)+(ses)

't4.391

Donde, eo, e, (es), (ses): concentracin inicial de enzima, de enzima libre, de


enzima en el complejo enzima-sustrato, y de enzima en el complejo'sustratoenzima-sustrato, respectivamente. Si la Ecuacin t4.391 se divide por eo, se

obtiene:

,r-=f*frs*fses

231

Dickensheets et al., 1977, simplifican la ecuacin de Andrews para el caso de


inhibicin a elevadas concentraciones de sustrato:

lsl
r Kr.V*

Vx

t4.431

La representacin grfica de 1lr vs s, corresponde a una recta cuya pendiente

es: 1/(K,.Vrr).y cuyo ntercepto es 1/Vr'


sustrato, s6, n el modelo de inhibicin por sustrato,
se alcanza en el punto correspondiente a dr/ds = 0. Por consiguiente, de la
Ecuacin 14.411:
La concentracin crtica de

d, =o
ds

--

"

(+

.i. r)'( 3 . +)

Paa: = O :,s=.scn
ds

k1
V'-:='s2k2
Por

4.4 REACTORES

14.41

tantot sc = $:1, = ,lk.t*,

ENZIMATICOS

El propsito de esta seciin es analizar algunos factores tales como caudal,


tiempo de retencin y productividad, relacionados con el diseo y operacin de
reactores donde ocurren transformaciones bioqumicas orig.inadas por la accin
de enzimas. Se supone que la reaccin enzimtica se desarrolla de acuerdo con
el modelo de Michaelis-Menten. En el Cptulo 5 se analizan algunos reactores
dode ocurren fermentaciones cuya cintica corresponde al modelo de Monod'

233

permanece constante en cada punto con respecto al tiempo. En este caso la


concentracin de sustrato sa evalua de acuerdo con la Ecuacin t4.451. Sin
embargo, como la operacin es continua el tiempo de retencin se calcula segn
la ecuacin:
Y

t4.46t

F
Donde, V: volumen til del reactor, litros; F: caudal, (litros)/minuto.

Ejemplo

4.8

Simulacin de la hidrlisis del azcar de caa por


accn de la enzma invertasa

La hidrlisis del azcar de caa (sacarosa) por accin de la enzima invertasa,

obtenida

a partir de levadura, produce

canti{ades iguales de glucosa y

fructuosa:

C6H12O6
sacarosa
(PM : 342,31

glucosa
(PM.

180,16)

c6H12o6

fructosa
(PM : 18O,16)

14.471

Suponer qu por las necesidades del mercado se requiere la produccin de 84O0


kgida de producto (glucosa + fructosa) a partir de una soluiin deosacarosa
(concentracin 80 g/litro). Se dispone de varios rectores de 4000 litros de volumen efectivo operados en forma continua como reactores ideales de flujo tap.

Deducir la relacin entre el nmero de reactores, el caudal, el tiempo de


retencin y la productividad, con el propsito de alcanzar un porcentaje de
conversin de sacarosa en producto superior at 95 %.
Solucin
En la Tabla 4.11 se presenta el programa C:\|SIM\INVTSA1.SlM, y en la Tabla

4.12 el programa C:\GWBASIC\INVTSA1.BAS, elaborados a partr de la


ecuacin de Dickensheets et'a1., 1977 y los siguientes parmetros obtenidos
mediante regresin lineal de los datos suministrados por Bowski et al.. 1971,
para la enzima invertasa en solucin (Tabla 4.15 y Problema 4.5):

235

: /'

'Vn

0'99 gi(litro'minuto)

K, : 123 gr/litro
Kr = 177 gllitro

Los programas INVTSAl .SlM e INVTSAl .BAS producen resultados similares, los

cuales'son representados grficamente en las Figuras 4.12,

4'13'

Tabla 4.1 1 Simulacin de la hidrlisis del azcai de caa por accin de la


enzima invertasa a bajas concentraciones de sustrato. Modelo de Michaelis-Menten, Programa C:\lSlM\ lNVTSAl,SlM.

:IVTSAl,SIM
:Cinetica de la invertasa a bajas concentraciones
:de sustrato. Modelo de Michaelis-Menten
:Simulacion de un reactor ideal de flujo tapon
CONSTANT
CONSTANT
CONSTANT
CONSTANT
CONSTANT
CONSTANT
CONSTANT
CONSTANT

KM

VM

:0.99: g glucosa/(litro.minuto)

23: g/litro

:'177 : g/litro
V0=4000: Volumen efectivo del reactor, litros
P0:840O: Demanda de producto, kgidia
S0 = 80: g sacarosa/litro
T0 = 0.1 E-4:Tiempo inicial, minutos
Kl

CINT:

O.O1

SIM
INITIAL

S=S0

V: V0
T:TO
DYNAMIC

S'= RS
*2lKlll: Ecuacion de Andrews, 14.421
RS =-VM*S/(KM + S + (S*
X:100"(SO-S)/S0: Porcentaje de conversion de sacarosa
P :2* 1 80. 1 6"(S0-S)/342.3: Producto, gilitro
236

F:Y

lT: Caudal, litros/minuto


:60*P/T:Productvidad del reactor, (g producto)/(litro.hora)
NUM:O.Ol O4T"PO1|PD +0.00001):Numero de reactores (de 4000 litros c/u)

PD

OUTPUT T,S, P,X,NUM, PD,

VAL
vAL

TFIN =
NOCI

600.00
1000.0

Simulacin de la hidrlisis del azca de caa por accin de la


enzima invertasa a bajas concentraciones de sustrato. Modelo de Micha'elis-Menten. Programa C:\GWBASIC \INVTSAI 'BAS.
Tabla

4.12

1O REM INVTSA1.BAS

20 REM Cinetica de la inveftasa a bajas concentraciones de sustrato'


30 REM Modelo de Michaelis-Menten
40 REM Simulacion de un reactor ideal de flujo tapon
50 KEY OFF
60 CLS
70 NN:1
80 REM ESCRIBIR LAS CONSTANTES:
90 KM:123

VM:,99
110K|:177
100

120 P0:8400
130 V0:4000
140 S0:80
150 REM PASO DE INTEGRACION: T1
160 T1 :.01
170 REM VALOR FINAL DE LA VARIABLE INDEPENDIENTE: T2
180 T2:600
190 REM INTERVALO DE IMPRESION DE LOS RESULTADOS: T3
200 T3:20
210 PRINT "INVTSAI .BAS"
220 PRINT
230 PRINT "Cinetica de la invertasa a bajas concentraciones de sustrato"
240 PRINT
250 PRTNT
260 PRINT "T: variable independiente (tiempo)"
270 PRINT "Valor final de , ) =";f 2
237

: '

280 PRINT 'T1 : paso de integracion, T1 : ";Tl


290 PRINT "T3: intervalo de impresion, T3:'l;T3
3OO PRINT

310 PRINT "PULSE ENTER!"


320 ANSS : INPUT$(1)
330 CLS
340 PRINT "RESULTADOS"
350 PRINT
360 PRINT "O(1): concentracion del sustrato g sacarosa/litro"
310 PRINT "P: concentracion de producto, g/litro"
380 PRINT 'CS: Porcentaje de conversion de sacarosa"
390 PRINT "F: Caudal, litros/minuto"
400 PRINT "NUM: Numero de reactores"
410 PRINT "PD:Productividad del reactor, (g productoli(litro.hora)
420 PRTNT
430 REM NUMERO DE ECUACIONES DIFERENCIALES: r'
440 N=1
450 REM CONDICIONES INICIALES:
460 0(1):80
470 REM SUBRUTINA DE RUNGE-KUTTA DE ORDEN 4:
480 T: INT(T2[T1 +.5):T1 :T2|T:T: INT(T3/T1 +.5):T3:T"T1 :T =0:T4:0
490 T8: 1 :GOTO 730
500 |F{T-T4 +T1110)<0 THEN 540
510 T4 =T4 +T3:T5 : |NT(T/T1 + .5):T:T5*T1 : GOSUB 920
520 |F(T-T2 +T1110)<0 THEN 540
530 LOCATE 23,1:END
540 0N TB GOTO 560,600,640,680
550 PRINT"** ERROR """;STOP
i
560 FOR T5=1 TO N
570 T0(T5) :T1 *l(T5):T6(T5) : O(T5):O(T5) : O(T5) + T0(T5)/2
580 NEXT T5
590 T=T+T1 |Z:T9:2:GOTO 730
600 FOR T5:1 TO N
610 T7 =T1 *l(T5):T0(T5) : T0(T5) + 2"T7:O(T5) :T6(T5) +T712.
620 NEXT T5
630 T8:3:GOTO 73O
640 FOR T5:1 TO N
650 T7 :T1 "t(TS):T0(T5) :T0(T5) + 2"T7:O(T5) :T6(T5) +T7
660 NEXT T5
670 T8:4:f :T +T1i2:GOTO 730
.,1

238

680 FOR T5=1 T0 N


690 O(T5) :T6(T5) + (T0(T5) +T1 *l(T5))/6
7OO NEXT T5

710 T8: 1 :GOTO 730


720 REM ECUACIONES DIFERENCIALES:
730 l(1 ) :-VM*O(1 )/(KM + O(1 ) + (O(1 ).O(1 )/Kl))
7 40 P : 2* 1 gO.1 6* (S0-O( 1 t342.3
750 CS : 1 0O"(S0-O(1 t)/So
760 rF T:0 THEN T:.00001
77O PD:60*P/T
780 F:Vo/T
790 lF PD =0 THEN PD: '00001
800 NUM:.01042*PO/PD
810 GOTO 500
820 PRINT
830 PRINT SPC(3); "T : " ;T;SPC(3);'O( 1 : " ;O( 1 );SPC(3);

"

;CS;SPC(3)

840 NN:NN+
850 RETURN

4.5

" NUM : "

; NUM;SPC(31;' PD

"P

"; PD;SPC(f, ); " F

: " P; SPC(3); "CS


:" F
;

CATALISIS ENZIMATICA EN FASE HETEBOGENEA

Una enzima inmovilizada es una enzima fsica o qumicamente asociada, o


contenida, en un soporte o matrz, usualmente slido, no. esencial para su
actividad, Woodward, 1 985; Fukushirna et al., 1988. Generalmente los
sistemas de inmovilizacin de enzimas suelen clasificarse de acuerdo con eltipo
de interaccin entre enzima y soporte en qumicos y fsicos. .

239

Figwa 4.12 Representacin grfica de la productividad, el porcentaje de


conversin y el nmero de reactores en funcin del tiempo de retencin. Simulacin de la hidrlisis delazcar de caa por accin de la enzima invertasa a bajas
concentraciones de sustrato. Programas: C:\lSl M\l NVTSA 1,SlM y C:\GWBASIC
\lNVTSA1.BAS., elaborados segn el modelo de Michaelis-Menten.
250

25

200

150

'1

00

50

100

200

300

Trempo de rele

4.5.1

nc io

400
n,

m in

500

utos

lnmoVilizacin por mtodos qumcos

- Enlace covalente: La inmovilizacin se realiza mediante el enlace covalente de


molculas de la enzima va residuos aminocidos no esenciales a soportes
funcionalizados insolubles, Los grupos funcionales de los residuos aminocidos
no esenciales apropiados para el proceso de inmovilizacin sgn los grupos libres
a, B o r carboxilo, los grupos a y B amino, y los grupos fenil, hidroxil, sulfidril

o imidazol. Otra

variacin de la inmovilizacin por enlace covalente es la

copolimerizacin de la enzima con un reactivo monmero. Segn Zaborsky,


1973, los soportes insolubles en agua, empleados con mayor frecuencia para

la unin covalente con la enzima, son los soportes naturales tales como

la

agarosa (sefarosal, celulosa, dextrano (sefadex), vidrio y almidn, y los soportes


sinttcos tales como los polmeros basados en acrilamida, en anhdrido maleico,

240

en cido metacrlco y estireno, y los polipptidos. Normalmente los polmeros


naturales y sintticos antes de agregarse a la enzima son activados mediante un
tratamento con reactivos. Otros polmeros como los copolmeros del anhdfido
maleico slo requieren entrar en contacto de la enzima para inmovilizarla.

Entrecruzamiento de la enzima con un reactivo multifuncional como el


glutaraldehfdo con el propsito de producir un derivado insoluble.
- Adsorcin de la enzima sobre la superficie de un soporte insoluble seguida de

un entrecruzamiento intermolecular para efozar la unin. Los adsorbentes


emplados con mayor frecuencia (Zaborsky, 1973) son: almina, resinas de
intercambio inico, carbonato de calcio, carbn, celulosa, arcilla, colgeno, tierra
de diatomeas e hidroxiapatita.

4.13

Representacin grfica de las concentraciones de sacarosa y de


producto y del porcentaje de conversin en funcin del tiempo de retencin.
Simulacin de la hidrlisis del azca de caa por accin de la enzima invertasa
a bajas concentraciones de sustrato. Programas: C:\|SIM\INVTSAl.SlM y
C:\GWBASIC\INVTSAl .BAS., elaborados segn el modelo de Michaelis-Menten.
Figura

100

Co ncentracro n, g/ lrtro

'r

00

200

300

400

50c

Trempo de retencion, mrnutos

241

4.5.2 Mtodos fsicos

- Adsorcin fsica de la enzima mediante el contacto de una solucin acuosa de


la enzima con el adsorbente. Elestado de inmovilizacin de la enzima depende
del pH, intensiijad inica y temperatura de la solucin. El proceso es reversible

pero el enlace con el soporte es dbil y la cantidad de enzima cargada por


unidad de masa de soporte es usualmente baja.

Confinamiento de la enzima dentro de rnicrocpsulas de una membrana


semipermeable. La solucin acuosa de la enzima se agrega al reactor agitado
que contiene el solvente orgnico con un copolmero y un agente de superficie.
La membrana de polfmero se forma en la superficie de separacin lfquido-lfquido
mientras la fase acuosa queda dispersa en pequeas gotas. Este mtodo de
inmovilizacin preserva las propiedades intrfnsecas de la enzima.
El confinamiento de la enzima tambin se puede lograr mediante su inclusin en

una matriz (gell, tal como el gelde poliacrilamida utilizado en la inmovilizacin


de glucosa isomerasa, glucosa oxidasa, alcohol deshidrogenasa, ureasa y otras
enzimas.
En la mayorfa de los mtodos de inmovilizacin la enzima se encuentra asociada

a un sopofte slido. Por consiguente, estos sistemas deben analizarse como


un proceso de catlisis heterognea dado que reactivos y productos se
encuentran en fases distintas. Adems, el microambente del catalizador dfiere
de las propiedades del seno del liquido donde son evaluados los efectos de la
reaccin.
La cintica de enzimas inmovilizadas es la resultante de la superposicin del
fenmeno cintico "intrnseco" de la enzima en su microambiente, del fenmeno

de transporte de reactivos desde al seno del llquido hacia la superficie del


biocatalizador y viceversa. Estos fenmenos combinados matemticamente
originan las expresiones cinticas representatvas de la accin de la enzima
inmovilizada.

242

4.5.3 Enzimas inmovilizadas sobre la superficie de una partcula


insoluble

Cuando la enzima se inmoviliza sobre la superficie de una.partcula insoluble, la


resistencia a'la transferencia de masa entre el seno del fluido y la capa lfquida
relativamente no mezclada alrededor de la partcula se agrega a la resistencia
por difusin a travs de esta capa.

La velocidad de transferencia de masa es proporcional a la diferencia de


concentracin:

/Vr=fr./.(s,-s)

14.481

Donde, N.: velocidad de transferencia de masa, (mol sustrato)/s; Kr: coeficiente


de transferencia de masa, m/s; A: rea superficialtotal de las partculas, m2; so:
concentracin del sustrato en el seno del fluido, (mol sustrato)/m3; s: concentra-

cin del sustrato en la superficie de la partcula.

La velocidad suministro de sustrato per transferencia de masa, durante la


reaccin enzimtica, es igual a la velocidad de consumo de sustrato. Por
consiguiente, en el caso de una reaccin enzimtica que sigue la ley de
Michaelis-Mentenl

r"

K".c.(so - s)

Yu.S
=

Ky+

f4.491

Donde, r.: velocidad de la reaccin, (mol).m'3.s-'; Vr,: velocidad mxima de la


reaccin, mol.m-3.s'1; Kr: constante de Michaelis-Menten, mol.m-3; a : A/V; :
rea superficial total, m2; V: volumen de la solucin, m3.
La ecuacin anterior expresada en forma adimensional se convierte en:

1-z

B.z

DA =1+B.Z

t4.50I

243

Donde

Z=~;

so
Donde, el nmero de Damkhler, DA, es la relacin entre la mxima velocidad
de reaccin y la velocidad de transferencia de masa.
En el caso de DA < < 1 predomina la velocidad de transferencia de masa sobre
la velocidad de la reaccin y la reaccin global es controlada por la reaccin
enzimtica:

[4.511

Si DA > > 1, preqomina la velocidad de reaccin sobre la velocidad de


transferencia de masa y _la reaccin global es controlada por la velocidad de
transferencia de masa:

[4.521

La disminucin de la velocidad de reaccin por la resistencia a la transferencia


dJ3 masa se expresa mediante el factor de efectividad IJ, definido como la
relacin entre la velocidad real de la reaccin y la velocidad de la reaccin no
frenada por difusin:

TJ =

V.11.S

B.Z

K 11 +s

1 + B.Z
B
1 +B

V.w.SB
KM +ss

[4.531

Si Z = 1 , la concentracin sustrato en la superficie de la partcula es igual a la


concentracin de sustrato en el seno del fluido, /J = 1, no hay limitacin por
transferencia de masa. Si Z - > O, /J - > O y la velocidad de transferencia de
masa es muy !enta comparada con la velocidad de la reaccin.

244

4.5.4

Enzimas inmovilizadas por copolimerizacin o


microencaPsulacin

En el caso de enzimas inmovilizadas por copolimerizacin o microencapsulacin

se presenta una resstencia adicibnal interna a la transferencia de masa que


afecta la actividad interna de la enzima inmovilizada'

4.5.5

Balance de materia

El siguiente modelo, denominado "modelo

dstribuido" se fundamenta en las si-

1 - La reaccin ocurre en cualquier punto de

guientes suposiciones {Lee, 1 992):


la enzima; 2- La cintica de la reaccin es similar a la observada con la enzima
libre; 3- La transferencia de masa en la enzima inmovilizada ocurre mediante

difusin molecular; 4- No hay limitacin a la transferencia de masa en la


superficie exterior de la enzima inmovilizada; 5- La enzima inmovilizada es
esfrica.
El balance de materia, en condiciones estables, correspondiente a una partcula
esfrica permeable de radio Ro entre R y (R + dR), si se supone constante la

difusividad efectiva D., del sustrato dentro de la partcula, se expresa mediante


la ecuacin:

(-

4,-R1^ (
#
"
=

r"

#a-r-n'z),+df,)

(4.n.R2.dn)-r,

f4.541

Si esta expresin se divide por 4.n.dR y se reordena:

,,.[^'.4)
'I d/r*.*r l*'.*)l
\ di*l=R2-rs
dR

245

Y en el lmite cuando dR

-.)

(n'.e )=n,..-
D-.d
"dR\
dR)

'' (#.*#)=,,

t4.s5I

4.5.6 Gonsumo de sustrato de acuerdo con Ia cintica

de

Michaelis-Menten
ta velcdad de consumo de sustrato, si se supone que la cintica ntrQseea de

la reaccin local de la enzima inmovilizada sigue la.ecuacin de MichaelisMenten, es:


[4,561.

'

Vu=e.P.g

:':

Donde, Vr: velocidad mxima de la reaccin; e: actividad de la enzima


inmovilizada, (pmol sustrato convertido).s-l.(gmol enzima)'l; p: densidad del
soporte, (g soporte).(volumen de soporte)-l; q:; carga,.de enzima, (rmol
enzima).(g soporte)-1
Si se reemplaza la Ecuacin t4.561 en la Ecuacin [4.55]
resultado en forma adimensional, se obtiene:

d"z

dtr

246

z - n?.r,
*zT dz
= 9.2
dT
1+B.Z Ds.s,

y se expresa

el

r4.s7l

Z=

B= s

T=R

KL'

Ro

( v" \'o
3

R'

l\Ds.rf

t4.s8l

Donde, : modulo de Thiele; Ro: radio de la partcula esfrica (soportel. Las


condiciones de frontera asociadas con la Ecuacin [4.57] son:

(*^)r=o=o I s=soen R=Ro


Estas condiciones expresadas en forma adimensional se convierten en:

(4\=o
\dr )

. en r=R"
Ro

.'1

Z=1 ,enT=1
Donde, R": radio crftco; la concentracin de sustrato es

0 en R

Rc.

La velocidad global de consumo de sustrato en una partcula esfrica con


enzimas inmovilizadas es:

vn=+''(#)*-o,

t4.59t

Donde, V^: velocidad observada de consumo de sustrato; Ar/Vr: relacin entre


el rea superficial y el volumen de la partfcula, (ApNp) : 3/R" para partculas
esfricas.
La Ecuacin t4.591 expresada en forlna adimensional se convierte en:

3.s..Dt (2 \
vn=_#l=
|
^ R \drltr-t

t4.601

247

La Ecuacin t4.561 expres.gda en forma adimensional se conviefte en:


Vo=

Yy.o
Kr+so

Yx.Bo

1+Bo

t4.61I

Donde, Vo: velocidad de la reaccn correspondiente a la concentracn de


sustrato So prevaleciente en el seno del fluido.
La velocidad mxima de la reaccin, expresada en funcin modulo de Thiele, es:

Ro'.v* nl .vu.n"
t2=g4.Kr=
e
g-Dr*,

Vv=

9.S2.Dr.s,

f4.621

n3-n,

La velocidad de la reaccin no frenada por difusin se obtene mediante el


reemplazo de V^, de la Ecuacin f4.62) en la Ecuacin [4.61]:
Bo
,, _ 9.Q2 .Dr.so'1-4

"-

*?"4

t4.6sl

Elfactor de efectividad, n, se define com la relacin entre la velocidad real de


la reaccin (Ecuacin t4.601) y la velocidad de la reaccin no limitada por difusin (Ecuacin t4.631):

(**),=,
14.64t

fl

'*H"]
248

4.9

Determinacin de la variacin de la concentracin de


sustrato con respecto a la distancia radial para diferentes valores
del modulo de Thiele. Efecto del modulo de Thiele sobre el factor
de efectividad para partculas esfricas inmovilizadas, segn la
cintica de Michaelis Menten
Ejemplo

Solucin:
La Ecuacin 14.571, ecuacin diferencial no lineal, se resuelve convirtiendola en
dos ecuaciones diferenciales simultneas de primer orden:
dY

9.2.02

{T
-=

1+B.Z

- 2.r
T
t4.651

dz
dT

=y

sometidas a las siguientes condiciones de frontera:

R^
.sRY=O,'RsoR
enT=-!i Z=ZO=-2,cn T=--Y=TO
Z=1,en T=1 ,Donde: Z=!so
Donde R": radio crtco; ZO

Sc/S".

La concentracin de sustrato es S = S" en R : Rci S": concentracin de


sustrato en R = R". La concentracin de sustrato es S : 0 para R < R..
El programa THIELE.SIM, resumido en la Tabla 4.13, resuglve el problema de
valor lmite planteado en la Ecuacin [4;65]. El mtodo numrico empleado
convierte el problema de valor lmite en un problema de valores iniciales. El
programa requiere la suposicin de los valores iniciales de ZO y TO de manera
que Z = 1 enT:1.
La instruccin: 1 SIM;INTERACT;RESET;GOTO /, asigna nuevos valores a las
condiciones iniciales sidespus de cada simulacin se ejecuta la instruccin GO.

249

-?

Este procedimiento, usualmente muy lento, sqacelera con la instruccin V/L.


Esta instrucci.n permite al usuario del prggrama alimentar nuevos valores de las

condiciones iniciales de acuerdo con los resultados obtenidos al final de cada


simulacin. La simulacin termina cuando los resultados obtenidos se ajustan
a las condicions de frontera, que en este ejemplo partcular correspnden aZ
: 1 en T : 1. Los resultados obtenidos con elprograma THIELEI.SlM son'presentados en las Figuras 4.14 y 4.15.
En la Figura 4.1 4 se presenta la variacin de la concentracin de sustrato con
la posicin radial en una partcula esfrica para diferentes valores del modulo de

Thiele, Q, y de la relacin BO

S"/Ku, segn la cintica de Michaelis Menten.

4.15 se presenta el efecto del modulo deThiele, , sobre el factor


de efectividad, y diferentes valores de la relacin BO : S./KM, segn la cintica
de Michaelis Menten, para enzima inmovilizada en partculas esfricas.
En la Figura

Tabla

4.13

Programa C:\lSlM\THlELEl.SlM: Determinacin de la variacin de


la concentracin de sustrato con la posicin radial en una partfcula esfrica.
Efecto del modulo de Thiele, , sobre elfactor de efectividad segn la cintica
de Michaelis Menteri.

1:THlELEl.SlM
2:
3

Enzimas inmovilizadas

4:por copolimerizacin o microencapsulacin


5:

6:Consumo de sustrato segn Michaetis-Mgnten

8 CONSTANT CINT :O.OO1,T :O.OO1,TFIN = 1


9:

10 1 SIM;INTERACT;RESET;GOTO t
11 INITIAL
12 Y:0
1

T:TO

14ZO:ZO+AF
'5 Z:ZO
16 B:BO
17 DYNAMIC
250

".

,i

4.5.7 Consumo de sustrato proporcional a la concentracin

de

sustrato

La velocidad de consumo de sustrato expresada como una reaccin de primer


orden con respecto a la concentracin de sustrato, es:

rs: K.S vlidaParaS <<

t4.66I

KM

Donde, K: coeficiente de velocidad de primer orden, s-t; S: concentracin de


sustrato, g/litro.

Figura 4.15 Efecto del mdulo de Thiele, Q, sobre el'factor de efectivr'dd, y


diferentes valores de la relacin BO : s./Kr. datos obtenidos con el programa
THlELEl.SlM, segn la cintica de Michaelis Menten, para enzm inmovilizada
en partculas esfricas,
Efectlvidad

\\r
\

\:\
\\

:\ \

!\

Ll!!j.::.i:
-t--l

::ail

l"i"i"i'l{

o,ot
o,o1

o,1
-E-BO-t

252

to

Modulo de Thlele

--+-8O.6

-4-AO -tO

100

14.711

t''e*),,=,,
'

La velocidad de la reaccin no frenada por difusin en los poros es K.so. Por


consiguiente, despus de diferenciar la Ecuacin [4.70] 6on respecto a T y
sustituir ta expresin resultante en la Ecuacin 14.711se obtiene:

4.5.8

_ 3.0r.coth (3.Q,)-

14.721

Consumo constante de sustrato

Si la velocdad de consumo " ,r"trrto es constante con respecto a

la

conceniracin de sustrato (cihtica de orden cero);

rs

= Ko paras > 0; vlidaparas >>

t4.73)

KM

Donde, Ko: coeficiente de velocidad de orden cero.

Si K. se remplaza e'la Ecuacin t4.551'se obtiene:


'd?s

*2

d.R2,

ds

-Ko =O
.R dR Ds

,q,1+l

:'i, i
s > 0. Donde la concentracin de sustrato s est limitada a medida
queRtiendeaceroys: soen R: Ro; Ro: radiodelapartculaesfrica. Por
consiguiente:
,

Vlida para

1 K".R:

14
s, 6 s,.D, l,2

254

_'.| )
)

-,

[4.75t

EI radio crftco R" por debajo del cual s vale cero se obtiene mediante el
reemplazo de (s/s") : 0 en la ecuacin anterior:

6.s-.4-

&=R.11-----s-i

r,''u

\12
I

f4.76t

La velocidad real de la reaccin es:

* " (*: - nl ).r"

14.771

La velocidad de la reaccin no frenada por difusin es:

14.78t

f,.".nl,.x,

Por consiguiente, el factor de efectividad, n, definido como !a relacin entre las


dos velocidades anteriores es:

=1-l-t
rR
r

t4'7el

Y despus de sustituir la Ecuacin f4.761en la ecuacin anterior:

r=1_['H)-

t4.801

PROBLEMAS

4.1 La Figura 4.16 es una representacin

grfica de los datos obtenidos en un


reactgr por lotes para la hidrlisis de almidn al3OYo con glucoanilasa (6OoC,
eo : 11600 unidades, volumen del reactor: 1 litro). Bailey y Ollis, 1986.

255

Calcular; (1) [a velocidad inici] de la reaccin; l2l La unidad de actividad de


glucoamilasa exprsada como la cAntidad de enzima que produce un mieromol
de glucosa por minuto en una solucin de almidn de Lintner al 4Yo a 60oC y
pH 4,5,
Figura 4.16 Representacin grfica de los datos obtenidos en un reactor por
lotes en la hidrlisis de almidn al 30 % con glucoamilasa. Bailey y Ollis, 1986.

Glucoso producido, rng/rnl


zvv

20

100
40
80
60
.Tiempo de reoccron, mrn.

120

140

4.2

El siguiente modelo cntco describe la hidrlisis de la lactosa mediante


lactasa obtenida a partr de Aspergllus niger, Scott er a/., (1985):

---) ES
ES --- k, ---) E + S
E

+S

---k,,

ES ---kr---) E+P+O
E+

EP
'

-!

P---ko---)
--- k,

---)

EP

P
r

Donde, E, S, P, O: indican enzima libre, lactosa, galactosa y glucosa, respectivamente.


,

256

- Deducir la ecuacin de velocidad para la produccin de galactosa segn el


modelo de Briggs-Haldane, e indicar si la galactosa es un inhibidor competitvo
o no compettivo.

4.3

El siguiente modelo cintico describe la hidrlisis de la lactosa mediante


lactasa obtenida a partir de Aspergillus niger, Yang y Okos, 1989:

+ S ---k,

---) ES

ES --- k, ---) E + S
ES --- k. --) EP + O
EP --- ko ---) E + P
E + P --- k,

---)

EP

Donde, E, S, P, O: indican enzima libre, lactosa, galactosa y glucosa rbspectivamente. En este modelo primero se libera glucosa a partr del complejo enzimasustrato, y luego se libera galactosa a partr del complejo enzima-galactosa.

- Deducir la ecuacin de velocidad para la produccin de galactosa segn el


modelo de Briggs-Haldane.

4.4

En la Tabla 4.14 se presentan los resultados obtenidos por Eadie, 1942, en


la hidrlisis de una solucin de acetil colna (sustrato) con suero de sangre de
perro (fuente de la enzima). La tercera columna de la Tabla presenta la velocidad inicial de la reaccin en presencia de prostgmna como inhibidor, concentracin: 1 , 5. 1 0-7 (moll/(litro) .

- Evaluar la constante de Michaelis y la mxima velocidad de la reaccin de


hidrliss sin inhibidor mediante: (a) una grfica de Langmuir, (b) una grfica de
Lineweaver-Burk, (c) una grfica de Eadie-Hofstee.
-

Evaluar la constante de Michaelis y la mxima velocidad de la reaccin de


hidrlisis en presencia de inhibidor mediante (a) una grfica de Langmuir, (b) una
grfica de Lineweaver-Burk, (c) una grfica de Eadie-Hofstee y determinar si la
prostgmna es un inhibidor competitivo o no compettvo.

257

Tabla 4.14 Datos experimentales de la velocidad inicial de la reaccin de


hidrlisis de acetil colina en presencia y en ausencia de un inhibidor, Eadie,
1942.
Concentracin de sustrato

mmol/litro

Velocidad inicial de reaccin

mmol/{litro.minuto)
Sin inhibidor

3,2
4,9
6,2
8,0
9,5

111
148

r43
766
200

Con inhibidor
59

7l
91

L11

r25

4.5

En la Tabla 4.15 se presenta informacin sobre la velocidad inicial de la


reaccin de hidrlisis del azcar de caa por accin fle la en4ima invertasa a
diferentes concentraciones de sustrato, obtenida por Bowski et al., 1971, con
la enzima invertasa o B-fructofuranosidasa lE.C. 3,2,1 ,26) obtenida a partir de
levadura. l-a cintica de la reaccin a baias concentraciones de sustrato sgue
el modelo de Michaelis-Menten. Sin embargo hay una concentracin crtica de
sustrato, entre 66 y 104 g/litro, segn la cepa de levadura empleada como
fuente de invertasa, por encima de la cual la velocidad de reaccin es inhibida
por el sustrato.
Realizar un,anlisis de regresin lineal con los 6 primeros datos de la tabla, y
calcular la velocidad mxima V, de la reaccin y la constante Kr, de Michaelis-

Menten: a) por el mtodo de Lineweaver-Burk; bl por el mtodo de EadieHofstee; c) por el mtodo de Langmuir-Hanes; c) Dor elmtodo de Dickensheets
et al., (Ecuacin 4.43l..
Realizar un anlisis de regresin con los ltimos 5 datos de la tabla y calcular la
constante de inhibicin, K,, de la_ecuacin de Dickensheets et al., 1977, (Ecua-

cin 4.43)

258

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CAPITULO 5

CINETICA DEL CRECIMIENTO DE


BIOMASA, CONSUMO DE SUSTRATO
Y FORMACION DE PRODUCTOS

El conocimiento de la cintica del cultivo permite predecir el desarrollo de la


fermentacin y evaluar rendimientos y productividades, datos importantes en el
diseo de estrategias de produccin y optmzacin de procesos.
Las clulas consumen las sustancias nutritivas requeridas para crecimiento y las

convierten en nuevas clulas y productos metablicos. La velocidad de estos


procesos varfa con el desarrollo del cultivo.

A medida que las clulas crecen se acumulan en el medio los productos finales
del metabolismo celular, Frecuentemente, estos componentes alteran el pH y
la reologfa del medio, factores decisivos sobre la actividad celular y los mecanismos de transporte. Adems, la poblacin celular en crecimiento es heterognea,
y en cualquier momento, en cada punto del fermentador, coexisten clulas de

diferentes edades, con diversas funciones y actvdades metablicas.

5.1

CRECIMIENTO DE BIOMASA EN UN CULTIVO POR LOTES

5.1.1 Densidad de la biomasa

La masa de una muestra se expresa como biomasa seca, esto es, la masa
residual obtenida despus de.someter la muestra a, un procedimiento estandarizado de secado, por la dificultad tcnca para remover el agua adherida a la
superficie de un biomateral, sin retirarle tam.bin el agua interior.. La densidad
de un biomaterial es la calltidad de biomasa seca presente, por unidad de volumen de biomaterial hmedo. Generalmente, el,agua constituye aproxinladamente el 8O% de la masa total y la densidad verdadera de un biomaterial, o
sea, la masa total por unidad de volumen de biomaterial hmedo, es similar a la
del agua. Por consiguiente, la densidad de un biomaterial es aproximadamente
200 kg.m-3 y su volumen especfico es aproximadamente 0,005 m3.kg-l, (Fredrickson y Hu, 1989).

5.1.2

Etapas de! crecimiento

La evaluacin del crecimiento microbial requiere la normalizacin de mtodos


experimentales para la obtencin de datos confiables. En el cultivo por lotes,
despus de proveer las sustancias nutritivas al fermentador y suministrar los
materiales y la energa requeridos para la sntesis de biomasa, se inocula el
medio con una determinada cantidad de clulas viabls. El cultivo se desarrolla
sin intercambo de materiales con los alrededores, excepto por la transferencia
de gases tales como aire, CO, e Hr. El desarrollo de un cultivo por lotes bajo
condiciones fisicoqulmicas adecuadas en un sustrato simple y homogneo, libre
de gradientes de concentracin y de sustancias inhibitorias, donde las clulas
se reproducen a intervalos regulares, puede representarse mediante una curva
tpica, similar a la Figura 5.1, en la cualse observan las diferentes etapas representativas de los qambios de la biomasa y de su ambiente.

264

5.1.3 Velocidad

especfica

En los procesos de fermentacin los microoorganismos desarrollan su a'ctividad


vital en medios de elevada complejidad. El agente responsable de la transformacin es una clula viva que asimila diversos materiales, se reproduce y produce
otras sustancias, algunas de inters econmico. uno de los aspectos ms
importantes del estudio de la cintica de estos procesos es la seleccin de
mtodos analticos seguros para evaluar confiablemente las sustancias consumidas y producidas por el microorganismo y l variacin de su concentracin
con el tiempo.

La concentracin de cfulas en el medio constituye una medida adecuada de la


concentracin del sistema enzimtico responsable de la transformacin. ,por
esta razn las velocidades de consumo de sustrato y de formacin de producto
generalmente son expresadas como velocidades especficas referidas a la concentracin de clulas:

lx

1dx
xdtx^

t5.11

Donde, p^: velocidad especfica de crecimiento del ffiicrg996ismo, h-l; x:


concentracin de clulas, (g clulas secas).litro-l; r: velocidad de crecimiento
de las clulas, g.litro-t.h-1 .
ls

1.& =1.r^
xro

5.21

Donde, s: concentracin del sustrato, (g sustrato).1tro-1; r": velocidad de


consumo de sustrato, g.litro,l .h-'; /s: velocidad especficdde consumo de sustra.

to,

h-1;

1b
1
u,=;'=;'',

i
4.

t5'3I

Donde, pr: velocidad especfica de formacin de producto, hora-l; p: concentracin,del producto, (g producto).litro-1; rr: velocidad de formacin de producto,
g.litro-l.h-l.

266

Ejemplo

5.1

Determinacin de las velocidades especficas de una


fermentacin

En las FigurEs 5.2, 5.3 y 5.4, se presentan los resultados obtenidos en una
fermentacin alcohlica, Borzani, 1975. Calcular las velocidades especfficas de
crecimiento de levadura, consumo de azcar y produccin de etanol en el

tiempot:5horas.
Figura 5.2 Representacin grfica de los resultados obtenidos en una fermentacin alcohlica. Variacin de la concentracin de levadura, Borzani, 1975.

X, g/titro

4s6'
Tiempo,

X vs t

:h

'--- dx/dt

3,45 g.litro-1.
La concentracjn de clulas en el instante = 5 horas, es: x
Figura
la
velocidad
de
crecimiento
De acuerdo con la Ecuacin t5.11y la
[5.2],
de levadura es:

dx _ (3,9

dt

- 2,6) g = 0.438 g.c|.


lino.h
- 3)

(1t

litro.(6

267

i1,

lrx

djf,33
3,45

0,126 -r

Figura 5.3 Representacn grfica de los resultados obtenidos en una fermentan alboh6lica.'variacin de ta concentracin de sustrato. Borzani, 197s,

34567
Tiempo, h

S ys t

---- ds/dt,

De acuerdo con la Ecuacin t5.21 y la Figura [5.3], la velocidad de consumo de


sustrato es:

= 100 - 70 =7j g. ulcar

7-9,2 "v tro.h


tzt

rt'=#
|

( .

=2' -t

,'1,-

De acuerdo con la Ecuacin tb.31 y ta Figura [S.4], las velociiiades de produc_


cin de etanol sonl

4I-'= 20 - Ot = 75, g ctanot


dt 8,2 - 3,5 "- lfuo.h

268

(3)

tx= dr = lr.x &


Donde,

t5.4I

k.x

x: concentracin de la masa celular, (g biomasa

seca).litro-r; r*:

velocidad de formacin de biomasa, (g biomasa seca).litro-1.h-l; t: tiempo, horas;


g^: velocidad especfica de crecimiento de biomasa, h-1; ko: velocidad especfica
de muerte celular y metabolismo endgeno, h-1.
Para un cultivo en la fase exponencial del crecimiento,

p* > >

kd, y: lt* - kol =


El valor de px, constante durante el perodo de
crecimiento exponencial, corresponde al valor de la pendiente de la curva de
crecimento en esta etapa:

!x,

a la Ecuacin

[5.4].

v-=+*=*u"o
x=xo.en t=tue i t,=x,n t=t
Por tanto:

= r,.Xp

15.51

[pr. (r - tun))

Donde, tloo: duracin de la fase de adaptacin; xo: concentracin de biomasa al


final del periodo de latencia, (g biomasa seca).litro-1.
Si la velocidad de crecimiento se caracterza por el nmero de clulas, en lugar
de la masa celular, la ecuacin anteror se convierte en:
IV = /V,.exp
[rrr.1r

- h")]

Donde, N: nmero de clulas o microorganismos viabres al tiempo


nmero de clulas o de microorganismos viables al tiemBo t : tue.

15.61

t : t; No:

La ecuacin [5.6] expresa el crecimiento exponencial de Ia biomasa cuando la


concentracin de sustancias y las condiciones fisicoqurnicas det medio de
crecimiento permanecen constantes. En un cultivo por loteg los microorganismos modifican continuamente estas condiciones y afectan la concentracin de
biomasa.

270

dM

= pu.4tc.R'?# = b.,.(S .n.p*)'o .uE'

Donde:

b. =

# i

bz =1.(36.n

.pul'F
t5.81

Portonto: M=(

"r^-?)t'

Donde, 9r y bz: constantes; Mo: masa de la pelotilla en el tiempo t : 0; t:


intervalo de tiempo. La Ecuacin [5.8] concuerda con observaciones experimentales segn las cuales el crecimiento de los organismos filamentosos es
proporcional al cubo deltiempo. La diversidad de la anatonomfa microbial y de
las condiciones de crecimiento afecta la velocidad de crec.imiento. Generalmente, entre mas complejo es un ricroorganismo, mayor es su tiempo de
divisin celular. En la Tabla 5.1 se presentan datos delperiodo de reproduccin
de algunas especies de bacterias.

5.2

INFLUENCA DE LAS CONDICIONES AMBIENTALES SOBRE


LA VETOCIDAD ESPECIFICA DE CRECIMIENTO

5..2.1 Temperatura

La'temperatura afecta la velocidad de Ias reacciones eelulares, la naturalezadel


metabolismo, los requerimientos nutricionales y energticos, y la composicin
de. la biomasa. Generalmente los microorganismos crecen en un intervalo de
temperatura ambiente entre 25 y 3O'C. Sin embargo, existen microorganismos
que se desarrollan a temperaturas inferiores a 0"C y otros a temperaturas superiores a 93"C.

272

El requisito fundamental es la presencia de agua lfquida. En la Antrtida hay


bacterias que se reproducen a 7"C, pero que se desarrollan a mayor rapidez a
temperaturas entre 20 y 30"C, (Pelczar, 19771' En la Tabla 5'2 se presenta una
clasificacin de los microorganismos en trminos de la dependencia de la velocidad de crecimiento con la temperatura.

Tabla

5.1 Periodo
1

de reproduccin de varias especies de bacterias, Spector,

956.

Bacteria

Temperatura Periodq

Medio

oC

Caldo

37

B. thennophiTus Caldo

, 55'

BaciTTus
mycoideis

de

reprodccin
minutos
28

18,3

Escherichia coli

Cafdo
Leche

37
37

t7

Lactobacllus

Leche

37

65-

87

M. tubercuTosis

Sinttico

37

192 -

932

Rhizobium
Japonicum

Sales minerales
+ levadura

25

344 - 46].

12,5

acidophiTTus

Extracto

manitol

StaphyTococcus caldo:

37

2'7 -

aureus

Streptococcus
lactis

Caldo + lactosa

leche

37
37

48
26

Trepoema

Testculos de

37

1980

paTTidum

conej o

273

5.2.2 Energa

de activacin

La temperatura, en el intervalo adecuado, inicialmente estimula el crecimiento


de los microorganismos, y luego, cuando es demasiado alta, los destruye. La

ecuacin de Arrhenius constituye una hiptesis apropiada para describir el


efecto de la temperatura sobre el crecimiento:

v=A.exp

(*) -r,.r* e)

t5.9I

Donde, rr.: velocidad efectiva del crecimiento, velocdad de sntesis menos


velocidad de muerte, h-'; A, AD: factores de frecuencia, s-1; Eo: energa de
activacin'para crecimiento, kJ.(mol)-1, es la energa requerida para llevar las
molculas a un estado de energa en el cual puedan reaccionar; Eo: energa de
actvacin para muerte trmica, kJ.(mol)-l; R: constante de los gases, R :
8,314 J.(mol.K)-1; T: temperatura absoluta, K.
La aplicacin de la ecuacin de Arrhenius a un proeso microbiolgico es un
procedimiento cintico formal. Sin embargo, la complejidad del crecimiento
microbial, entendido como una secuencia de reacciones, permite prever
desviaciones de este comportamiento, Moser, 1988.

5.2 Clasificacin de los microorganismos'de acuerdo con la dependencia


la
velocidad
de
especfica de crecimiento con la temperatura, stanier, et al.,
1 975.
Tabla

Temperatra oC
Gtupo

Mfnimo

Termfilos

40

45

Mesfilos

10

r5

Sicrfilos obligados

-5
-5

Facultativos

274

Optimo
55 75

Mximo

60

80

30
15
25

35
19
30

47

45
18

30

22
35

Finalmente es necesario recalcar, en la optimizacin de procesos, que la tempe-

ratura puede afectar de manera diferente las velocidades de crecimiento de


biomasa y de formacin de producto. Por tanto, estas dos funciones obletivo
deben optimzarse independientemente.

5.2.3 Actividad del agua

El agua es el

compuesto ms importante para los organismos vivos. Las fuerzas

de atraccin, en forma de puentes de hidrgeno, entre molculas de agua,


explican los valores relativamente elevados del punto de fusin, punto de
ebullicin, calor especfico, calor de vaporizacn, y tensin superficial del agua.
La polaridad del agua y su facilidad para establecer enlaces de hidrgeno, la
convierten en un excelente disolvente de muchas molculas inicas y neutras.
El agua tambin aglomera molculas amfipticas tales como jabones y llquidos
polares, en forma de miclas, donde los grupos hidrfobos se sitan hacia el
interior del agregado, y los grupos hidrfilos hacia el exterior.

Algunas propiedades del agua tales como el punto de fusin, el punto de ebullicin, la presin de vapor y la presin osmtica, conocidas como propiedades
coligativas, son modificadas por la presenciade solutos disueltos. La disolucin
de un peso molecular gramo (1 mol) de un soluto ideal en 1000 gramos de agua
(disolucin 1 molal), a presin atmosfrica normal, disminuye el punto de
congelacin del agua en 1,86 oC, eleva 0,543 oC el puntb de ebullicin, y
ejerce una presin osmtica de 22,4 atmsferas, Un soluto ideal no se disocia
en dos o ms componentes, ni se asocia para disminuir el nmero total de part
culas. Las leyes coligativas solo se cumplen con exactitud en soluciones muy
diluidas,
Los efectos de los solutos sobre las propiedades del agua tienen una importancia
biolgica considerable. Asf, por ejemplo, los peces pueden permanecer activos
a temperaturas de congelacin, y la presencia en la sangre de solutos incapaces
de atravesar membranas como en el caso de las proteinas, confiere a la sangre
una presin osmtca mayor que la del fluido.extracelular rl el agua presente en
este fludo tiende a difundirse hacia los capilares sangufneos.

275

Elagua constituye en promedio el 80 % de peso de la clula, intervine en la


reacciones de hidrlisis y en la reduccin del oxgeno en la cadena de transporte
de electrones. La actividad del agua se define como: i
l

A,

I!p_

ts.10I

Donde, Pr: presin del vapor de agua de una solucin a una temperatura dada;

Pr: presin de vapor del agua a la misma temperatura


Segn la ley de Raoult, la disminucin relativa de la presin de vapor del solvente, en una solucin de una sustancia.no electroltica ideal, es igual a la fraccin
molar de soluto en la solucin:

Pw-Ps
Pv

n+N

[5.11]

Donde, n: nmero de moles de soluto; y': nlero de moles de agua en la solucin. Cuando el soluto es un electrlito, se reemplaza z.rl e lugar de n, donde
z es el nmero de iones por molcula. Cuando el soluto no se comporta
idealmente, se reeemplaza Q.z.n, en lugar de n, donde Q es el coeficiente
osmtico.

5.2.4 Tonicidad,

osmola!dad y osmolardad

El valor de la actividad del agua en los medios de cultivo

diluidos difiere muy


pgco de la unidad, por esta raznla accin del agua se expresa en trminos de
la tonicidad del medio. Una solucin de NaCl al9 o/o, en agua, es isosmtica
e isotnica. Aunque isotnico e isoosmtico son trminos sinnimos, trminos
como toniciuad e isotonicidad son utilizados generalmente con los lquidos
fisiolgicos. Una solucin hipotnica tiene una presin osmtica menor que la
I
de los llquidos'corporales, o la del NaCl al 9 o/o.

276

,Un osmol es la cantidad de soluto que provee un nmero de Avogadro,


6,02.1023 partlculas en solucin, y que al disolverse en un kilogramo de agua,
genera un ncremento de 22,4 atmsferas en la presin osmtica. La solucin J
de un electrlito como el NaCl, representa un ion Na y un on Cl, o sea, 2
osmoles. Por consiguiente, 1 osmol de NaCl corresponde a 29,1 g de NaCl, Una
Lobcin 1 osmolal contiene 1 osmol de soluto por kilogramo de agua, en tanto
que una solucin 1 osmolar contiene un osmol de soluto por litro de solucin.
Los valores de la actividad del agua o de la tonicdad del medio son tiles en los
estudios de crecimiento de microorganismos en medios concentrados, en los
estudios de contaminacin microbial, y en el estudio del crecimiento de hibridomas, metabolismo y produccin de anticuerpos, Ozturk, S.S., y B.O. Palsson,
1991. Las bacterias son mas sensibles a la actividad del agua que los mohos,
Los mtodos de prevencin de la contaminacin de los lquidos estn basados
en este comportamiento. Si se reduce la actividad del agua, A*, por debajo de

0,95 las bacterias no crecen y para valores de la actividad del agua, A*, por
debajo de 0,7 no crecen los mohos. En la Tabla 5.3 se presentan datos del
valor ptimo de la actividad del agua, y su Correspondiente tonicidad, para el
crecimiento de algunos microorganismos.

Tabla

5.3

Actividad y toncidad del agua. Pirt, 1975'


Tonicidad

Actividad del agua


(m"-l
Organismo

optimo

Mlnimo

optimo

Pseudomonas f Tuoresc ene

0,999

0,960

0,05

2,30

KlebsieTTa aerogenes

,999

0,950

o,

05

2,9O

,994

0,950

0,,28

,994

0,860

o,28

A,4O

AspergiTTue niger

,975

0,860

l,2a

AepergiTTus ansteTodilni

0,950

0,700

2,Ls

19,80

cluJa's f, de ratn

0, 99s

0, 993

0,30

0,40

SaTmoneTTa
S

neryort

taphyT o coccus a.ureus

Mximo

,90

,40

* Osmolalidad real
277

l,-n

En la Figura 5.5 se presenta elefecto de la actrvidad delagua sobre la velocidad

de diversos procesos fsicos,"qumicos y enzimticos. La actividad se determina


experimentalmente con un higrmetro, o mediante la evaluacin de la disminucin del punto de congelacin, (Bol et al., 1980). En trminos generales la
velocidad relativa de los procesos indicados en la Figura 5.5 es proporcional a
la actividad del agua,

5.2.5

pH

El agua ioniza ligeramente, formando ones hidronio (HrO*), e hidrxilo (OH).


La concentracin de estos iones en una disolucin acuosa diluida, se determina

mediante la expresin:

K*=ln-llon l= 1..10-14

t5.121

Donde, K*; producto inco del agua, a 25 oC, es el fundamento de Ia escala


de pH, definida como pH : - logro [H*].
La actividad metablica de los.microorganismos es muy sensible a los cambios
'de pH. segn Ia teora de Brnsted-Lowry un cido es un donante de protones,

(H*), y una base es un aceptante, (A-), de protones. Un pai cido-base

conjugado (HA) se define como un donante de protones con su correspondiente


aceptante. La constante de disociacin, K'o, a una temperatura dada, indica la
tendencia de un cido, en solucin acuosa, a donar protones:
K, =

frl t-l

t5.131

IHA)
En la Tabla 5.4 se presentan los valores de pH de algunos fluidos. Se observa
que el jugo gstrico, los refrescos a base de cola y el jugo de limn tienen un
pH bastante bajo.
Los cidos dbles como el ion amonio manifiestan una alta afinidad por sus pro-

tones y tienen una considerable importancia biolgica, ya que actan como


amortiguadores para resistir los cambios de pH, y mantenerlo en un nivel
adecuado, en el organismo.

278

Figura 5.5 lnfluencia de la actividad del agua, a temperatura constante, sobre


Ias velocidades relativas de diversos procesos. Curva 1 : Destruccin de clorofila
en espinaca a 37 oC; Curva 2: Degradacin del cido ascrbico; Curva 3:
Oxidacin de astillas de papa almacenadas a 37 oC; Curva 4: lnactivacin de
fosfatasa en leche desnatada; Curva 5: lnactivacin del Closidium botulinum;
Curva 6: Secado de glucosa a 30 oC. (Thijssen, 1979).

Vet'ocldad relatlva

o,3 0,4 0,5 0,6

0,7

o,8

o,9

Actividad del agua

La ecuacin de Henderson-Hasseltialch permite calcular el valor de pK,

log.,o

K') de cualquier cido, a partir de la relacin molar entre la

pH

pK'. bg

(pK':

especie

t5.14I

Los fluidos intra y extracelulares de los organismos vivos contienen pares con-

jugados cido-base que actan como athortiguadores. El principal sistema


amortiguador intracelular es el par conjugado HrPOo- - HPO42', IBK' *'7,21'.
tambin contiene amortiguadores muy actvos. Si sd aade
mlde HCl, 0,1 N, a 1 litro de suero fisiolgico (NaCl, 0,15 M)a pH 7,0, el pH
desciende hasta pH 2, ya que la solucin de NaCl no posee capacidad
amortiguadora. Sin embargo; si se aade 1 ml'de HCI, 10 N, a 1 litro de plasnia
sangulneo, a pH 7 ,4, el pH desciende hasta pH 7 ,2,
El plasma sanguneo

279

Tabla

5.4

pH de algunos fluidos. (Lehninger, 1973)


pH

Fluido

Plasma sangulneo

7,O - 7,5
7,4

Fluido interstical

7,4

Agua de mar

Fluidos intracelulares
Msculo

6,1

Hlgado

6,9

Jugo gstrico
Jugo pancreco

1,2 - 3,O
7,8 - 8,O

Saliva

6,35 - 6,85

Leche de vaca

6,6

O'ina

Zumo de tomate

4,3

Zumo de toronja

3,2

Refrescos a base de cola

2,8

Zumo de limn

2,3

-8

5.2.5.1 Efectos delpH delmedio sobre la velocidad de crecimiento


de algunas bacteras

Elvalor ptimo de pH, entendido como el valor para el cual la velocidad de crecimiento es mxima, vara entre 6,5 y 7,5 para bacterias, entre 4 y 5 para
fevaduras, y entre 5 y 7 paramohos. En la Tabla 5.5 se presentan los valores
mnimo, ptimo y mximo, para el desarrollo de algunas especies de bacterias.
El pH del medio de cultivo cambia como respuesta a la actividad microbial: se
genera H* durante la demanda de NHo*; se consume H*, en el metabolismo de
NO.-; se consume H* en la utilizacin de aminocidos, como fuente de carbono.

280

cultivo, usualmente medante la adicin de cido clorhdrico o sulfrico, y una


de las bases: hidrxido de sodio, de potasio o de amonio, al medio. Se prefiere
el amonlaco gaseoso en lugar del hidrxido de amonio, por la posibilidad de
contaminacin, de este ltimo compuesto con esporas bacteriales.

Tabla

5.5

Valores de pH para el desarrollo de varias especies de bacterias.

Lmite
inferior

Bacteria

Optimo

Lmite
superior

0, 5

2, o -

4,o - 4,5

5,4 - 6,3

7 -

4,2

7,O - 7'5

9,3

5,5

7'i O - 7 .5

8,

ChTorobium TimicoTa

6,0

5,8

7'O

Thermug aquatieue

6,0

'7,5 - 7,8

9,5

ThiobaciTTus thiooxidans
Acetobacter

aceti

StaphyTococcus aureus
Azotobacter

spp.

,5

Fuente: Datos tomados del Manual of Determinative Bacteriology de Bergey. 8a


ed. Williams & Wilkins. Baltimore, 1974,

5.2.5.2 lnfluencia del pH del medio sobre la velocidad de un


bioproceso

Generalmente hay un valor del pH del medio para el cual la veloqidad de un bioproceso es mxma. Valores de pH menores que el mximo estimulan la velocidad y valores mayores la inhiben. Humphrey 11977 , 1 978) presenta la siguiente
ecuacin:

28'l

fi = fmax

1r,.s(r.*.8)

t5.151

Donde: r,: velocidad de produccin o de consumo de la especie i. El subndice


irepresenta uria concentracin, en g,.litro'l . As e, X, o, pt s, h*:concentracn
de enzima, de masa celular, de oxfgeno, de producto, de sustrato, y de ion
hidrgeno, respectivamflti [,.o: mxima velocidad de produccin o de consumo de especie i; K.,: constante cntca, rbpresenta elefecto estimulante del pH
sobre la velocidad de un bioproceso, en g.litro-l; Kr: constante cintica, representa el efecto inhibitorio del pH sobre la velocidad de u4 proceso, g.litro-].

Otros autores, (Andreyeva y Biryukov, 1973), presentan la influencia del pH


sobre la velocidad de un bioproceso mediante una curva de ajuste:

r,=r,*[t
Donde:

5.3

so + s.1 .@Hl x

"2.bfl\2.,)

t5.16I

q: coeficientes de un polinomio.

MODELOS CINETICOS NO ESTRUCR'RADOS


PARA CRECIMIENTO DE BIOMASA, CONSUMO
DE SUSTRATO Y FORMACION DE PRODUCTO

Fredrickson , et a|.,1 970, clasifican los modelos de crecimiento de una poblacin


microbial en estructurados y no estructurados. El modelo estructurado considera algunos aspectos bsicos de la estructura celular e identifica una o dos
especies qumicas claves dentro de la clula, quizs aquellas que pueden
extraerse a escala comercial, y agrupa los dems componentes de la clula, en
una o dos clases generales tales como protenas y lfpidos. Sin embar(o, para
muchos propsitos tecnolgicos es suficient un modelo no estructurado, donde
el microorganismo o la clula se considera como gn componente simple, generalmente con una composicin qumica fija. Los modelos segregados nsideran
la poblacin celular como una coleccin heterognea de entidades discretas, en

282

tanto que en un rnodelo no segregado, el comportamiento de la poblacin celular


se aproxima al de una clula promedio.

En un fermentador real el crecimiento es estructurado

y segregado.

Sin

embargo, cuando la heterogeneidad celular no afecta los procesos cinticos.de


inters, son vlidos los conceptos de clula promedio y modelo no segregado.
En el estado de crecimiento,csnocido como balanceado todas las actvidades de
sfntesis celular esiri csihdas de manera que la composicin celular promedio no se afecta por la proliferacin de la poblacin. En este caso un modelo
adecuado no requiere la conideracin de la naturaleza multicomponente de la
clula.

']
5.3.1 lnfluencia

de la composcin del medo sobre la velocidad


especfca de crecimiento

5.3.1

.1 Modelo de Monod

El efecto de la'composicin de un medio de cultivo libre de sustancias


inhibitorias sobre la velocidad especfica de ,clecimiento fu estudiado por
Monod (19581. Las ecuaciones bsicas que describen la interaccin entre el
crecimiento de los microorganismos y el sustrato limitativo del crecimiento son:

!d,
xdt
I

o
^

lLx

'ds
-

--

dt

= llu

s+Ks

dx

Yus dt

t5.1 7I

t5.181

Donde, s: concentracin del sustrato limitante, (g).litro-l ; r": velocidad de consumo de sustrato, (g sustrato).(litro.hora)-'; Yxi":factor de rendimiento de sustrato en producto, (g clulas).(g sustrato)-1; x: concentracin de biomasa, (g
clulas secas).litro 1; p*: velocidad especfica de crecimiento, h-'; /rr: velocidad
especfica mxima de crecimiento, h-l ; K": constante de saturacin, g.litro-l; K.:

283

es la concentracn del sustrato para la cual la velocidad especfica


crecimiento es la mitad del valor mximo, pr'

de

En la Tabla 5.6 se presentan los valores de la constante de saturacin, Kr,


correspondientes al crecimiento de algunos microorganismos en diversos sustratos. Los valores relativamente altos de K" de la glucosa indican que este
sustrato es una de las fuentes de carbono y energfa "preferidas" por muchos
micrOorganismos. Sin embargo, para otros miCroorganismos existen mejores
sustratos que la glucosa.

Tabla 5.6 Valores de la constante de saturacin_, K., para el crecimiento de


microorganismos sobre diversos sustratos (Cooney, 1982l .

organlsmo (genua)

Escherichia
Escherichia
Escherichia
AspergiTlus
Candida
Escherichia
Saccharomyces
Pseudomonas
Pseudomonas
KTebeieLla
Escherchia
KTebsieLLa
Klebsiefla
KfebsielTa
Candida
Candida
AspergiTTus
Escherichia
'Escherichia
Cryptococcus
284

Sustrato
glucosa
manitol
glucosa
glucosa
glicerol
lactosa
glucosa
met,anol
meLano
Co,
iones fosfato
iones magnesio
iones potasio
iones sulfato
gxgeno
oxfgeno
arginina
tript,of ano
tr:iptof ano
Eiamina

Kr, mg,/Itro
6,8 .10-'z
2,0
4,0
5,0
4,5
20,0
25,o
0,7
0,4
0,4
a,6
5,6 .10-l
3,9.10-1

2,:l
4,5.10
4,2.10

I
2

5, 0.10-l
1, 1 . 10-3

,9 .!0'4
L,4 .10-1

En el caso de medios con mltiples fuentes de carbono, una vez agotado un


sustrato, la clula adapta sus "rutas metablicas", catalizadas por enzimas, a la
siguiente fuente de carbono y, despus de un nuevo periodo de adaptacin, se
reinicia el crecimiento. Este fenmeno se conoce como crecimiento diauxico.

5.3.1.2 Modelo de Moser

Con el propsito de lograr la representacin de los datos experimentales con un


mayor grado de ajuste, diferentes investigadores han propuesto otros mdelos
como alternativa a la ecuacin de Monod. Las ecuaciones presentadas en esta
Seccin corresponden a modelos cinticos no estructurados, considerados como
una buena aproximacin cuando la composicin celular es independiente del

tiempO, cuando el crecimiento es balaneado, o cuando la composicin celular


no es importante a escala industrial.
El modelo propuesto por H. Moser (19581, se expresa mediante la ecuacin:

Px =

'
Ks * sn

t5.19I

Donde, n: constante emprica. Las variables tienen el mismo significado que en


ls Ecuaciones [5.17 y 5.181.

La expresin logartmica de la Ecuacin t5.191 es til en la evaluacin de los


parmetros n y Ks del modelo:

bg

---IrPr-Px

= ,r.logs

- log,

t5.19.a]

La representacin grfica de log tpx/fun - ltx)l en las ordenadas versus log s en


y
[aS abcisas corresponde a una lnea recta cuya pendiente es n cuyo intercepto

es L log

Kt.

285

.)
5.3.1.3 Modelo de Contois y Fuiimoto

El modelo propuesto por Contois, (1959)

Fujimoto, (19631, se aplica en

sistemas donde prevalecen altas concentraciones de biomasa cuyo crecimiento


est acompado por la produccin de metabolitos o inhilidores txicos:
rrx =

pll.I,jls

ts.zol

Donde las variables tenen el mismo significado que en e! modelo de Monod,


Ecuaciones 5.17 y 5.181.

5.3.1.4 Modelo de Teissier

La ecuacin que expresa el modelo propuesto por Teissier (1936), es:

Fr=Fv

['

-"'e()

Donde las varibles tienen el mismo significado que en el modelo de


Ecuaciones [5.17 y 5.18].

'u"'
Monod,

5.3.1.5 Modelo de Konak


El modelo propuesto por Konak 119741, se expresa mediante la ecuacin:

286

= k'(vx - F, )o

15'221

r-

k :, l/fu*Kt; p: coftstante

empfrica.' Las variables tieneh el rnismo


que
Monod,.Ecuaciones
t5.17 y 5.181,.,.Adems,
de
modelo
en
el
significado
la ecuacin de Monod,
que
en
esta ecuacin se convierte
Konak demostr
Ecuacin 15.17l,para p : 2, Y en la ecuacin de Teissier, Ecuacin [5.2O], para
Donde,

p:

1.

5.3.1.6 Modelo de Kargi Y Shuler

El modelo propuesto por Kargi


modelos mencionados:

y Shuler (1979), es una generalizacin de

los

15.231

En la Tabla 5.7 se presentan los valores de las constantes K'

m y p, correspon'

dientes a cada modelo.

Tabla 5.7 Valores de tas constantes de la Ecuacin [5.2O]. Moser, 1988'


Modelo

Monod

t/rx

Moser

1-t/n

)- + L/n

Teissier

n/ (K")'/"
l/K*

Contois

t/ (K,.x)

Konak

k. p,

247

S.g.zlnfluencia de la concentracin de biomasa sobre la velocidad


especfica de crecimento: Modelo de Meyrath

Meyrath (1973), considera la influencia de la concentracin de biomasa sobre


la velocidad especfica de crecimiento como una consecuencia de la limitacin
por sustrato. Sien un medio de crecimiento se mantienen constantes las condiciones fisicoqumicas y la concentracin de nutrientes, la velocidad especlfica
de crecimiento es aproximadamente igual a su valor mximo, pr. Los
microorganismos formados modifican continuamente las condiciones del medio
y alteran la concentracin de biomasa.

f5.24t

[x = ]la,
Ks*

1; Las dems
Donde, so: concentracin inicial del sustrato limitante, (mg).litro
variables tenen el mismo significado que en el modelo de Monod, Ecuaciones

f5.17 y 5.181.

5,3.3

Perodo de adaptacin: Modelo de Hinshelwood

El perodo de adaptacin de la clula a los cambios de su ambiente fisicoqufmi-

co, conocido tambin como perfodo de latencia o perfodo lag, puede calcularse
por el mtodo de Hinshelwood (1946), o de Lodge v Hinshelwood'(1943):

tt=t-

1x
Fr
--ln

-xo

Donde, t,_ : perfodo de adaptacin; xo: concentracin de biomasa en


concentracn de biomasa en la fase exponencial en t : t.

288

t5.2sI

t:

tr; x:

5.3.4

Fase estacionaria: Modelo de La Motta

La Motta (1976), utiliz la ecuacin loglstica de Kendall (1949) para cuantificar

el crecimiento de biomasa en los cultivos continuos despus de un prolongado


periodo de fermentacin como en el caso de algunos procesos de tratariento

biolgico de aguas residuales y de algunos procesos de produccin de


antbiticos, donde la formacin de producto ocurre despus de cosar el
crecimiento:

fx=

t5.261

ff=u*'*'['*t)

Donde, xM: concentracin de'biomasa en la fase estacionara, g.litro'l

5.3.5

Fase de muerte microbial

5.3.5.1 Modelo de Chiu

La importancia de la fase de muerte microbial es directamente proporcional al


tiempq de residencia gnrlos.pro@sos con perfodos prolongados de retencin
como en el caso deltratamiento bolgico de aguos residuales. Las ecuaciones
que describen este modelo, empleado exitosamente en el procesg de lodos
actvados, segn Chiu, et al., (1972), son:

--

-ds - 1 -r-^
dt Yn,

- -dx = px.x ^

kD.X

15.27.a|

.5.27.bl

289

Donde, rr: velocidad de consumo de sustrato, g.litro'1.h'1; r^: velocidad de


crecimiento de biomasa; Y*,.: rendimiento del sustrato en clulas,

19 cluias)/(O

sustrato); ,rr: velocidad especffica de crecimiento, h-1; x: concentracin de


biomasa, (g biomasa secal,litro-l; ko: velocidad especffica de muerte celular y
metabolismo endgeno, h-l .

5.3.5.2 Modelo de Moser y Stener

La aplicacin del modelo de Monod (Ecuaciones 5,17 V 5.18) puede conducir


a valores falsos, e inclusive negativos de Kr, cuahdo se ignora el valor de la
constante ko. Moser y Steiner (1975), presentan la siguiente ecuacin para
modelar la fase de muerte microbial:

1 = L*
Vx * ko lr.s

f5.28t

Fa

5.3.6 Metabolismo endgeno

La disrninucin de la masa global de clulas en los procesos con perodos


prolongados de retencin obedece a dos factores independientes: la muerte
celular y el metabolismo end,geno:

Ko=Kl+K,

f5.291

Donde: Ko: velocidad especfica de muerte celular y metabolismo endgeno; h-1;


Koo: velocidad verdadera de muerte, h-1; Kr: velocidad especffica de metabolismo
endgeno, h-l.

290

Las constantes de velocdad, Ko, y K, generalmente son evaluadas por el


mtodo recomendado por Snclair y Topiwala, '1970, a partr de la representacin grfica de la Ecuacin f2.371, (Figura 56):
lL, =

1
il" * ("rJ.u,

IEcu.2.37l

Donde, p": vlocidad especfica de consumo de sustrato, {mol sustrato). (g cl.h)'

de mantenimiento basado en el sustrato, (mol sustrato).(g


cl.hora)-1; p^: velocidad especlfica de crecimiento de biomasa, h-'; (Yrs),:
coeficiente de rendimiento verdadero de sustrato en biomasa, g biomasa (mol

'; m.: coeficiente

sustrato)-1.

Figura

5.6

Evaluacin de las constantes de velocidad del metabolismo


endgeno. Sinclair y Topiwala, 1970,

Volocldad especlflca de consumo de sustrato, l/hora

Velocidad especi flc"a de crecirrllento, l/h

La Figura 5.6, representacin grfica de la Ecuaci 6n 12.371, lustra el mtodo de

Sinclair y Tofiwala, 1970:

El coeficiente de rendimiento verdadero de sustrato en bisrasa se evalua


partir del valor de la pendiente,

291

El valor de la velocidad verdadera de muerte,


ntercepto con el eje de las x.

Ko, es el correspondiente al

El valor del coeficiente de mantenimiento es el correspondiente al ntercepto


con el eje y. El valor de la velocidad especfica de metabolismo endgeno, Kr,
se calcula a partir del intercepto con el eje de las y:

t5.301

5.4

MODELOS CINETICOS PABA LA NHIBICION DEL


CRECIMIENTO

5.4.1

lnhibicin por sustrato

5.4.1,1 Efecto de la fuente de carbono

Los valores de la constante de saturacin, K", para diversas fuentes de carbono,


(Tabla 5.6), varan tfpcamente entre 1 y 10 mg.litro'l. Estos valores significan

que las clulas crecen a su mxima velocidad cuando la concentracin de la


fuente de carbono excede 1 0,Ks, o sea, entre 1 0 y 1 00 mg.litro'1. Para todos Ios
nutrientes hay un valor de la concentracin que al ser sobrepasado origina una
disminucin de la velocidad de crecimiento. Este efecto, conocido como
"inhibicin por sustrato" puede presentarse en el caso de carbohidratos alrededor de 50 g.litro-1, aunque generalmente, solo se manifiesta entre 100 y 150
g.litro-1. Usualmente un incremento de la concentracin de sUegglo nfluye
sobre la presin osmtca y causa una deshidratacin parcial de la clula.

292

Otros sustratos como el fenol, el tolueno o el butanol, extraen componentes de


la clula y deterioran la membrana celular cuando su concentracin es de unos
pocos g,litro-1
I

En la inhibicin competitiva la sustancia inhibitoria compite con el sustrato


limitante del crecimiento. En la inhibicin no compettiva, la sustancia inhibitoria
reacciona o se combina con la biomasa sin afectar su afinidad por el sustrato.
Otros modelos de inhibicin incluyen caractersticas tanto de la inhibicin
competitiva como de la no competitiva.

5.4.1.2

Efecto de la fuente de nitrgeno

Los microorganismos metabolzan prcticamente todas las formas orgnicas e


inorgnicas de este elemento para proveer las protefnas intracelulares, los cidos
nucleicos, y las protenas que conforman la pared celular, El nitrgeno
consttuye hasta el 12o/o del peso, base seca, de las bacterias, y el 1Oo/o del
peso de los hongos. Los valores de la constante de saturacin, K", para los
aminocidos, varlan entre 0,003 y 0,2 mg.litro-'!, y para amonfaco entre 0,1 y

mg.litro-1.

Estos valores de K. demuestran la capacidad de los microorganismos para crecer


a su mxima velocidad con muy bajas concentraciones de nitrgeno. Generalmente la concentracin de los compuestos nitrogenados en el ambiente es baja

y aquellos microorganismos capaces de crecer a estas concentraciones tienen


una apreciable ventaja competitiva.
Frecuentemente, cuando se provee demasiado nitrgeno, se originan problemas
de inhibicin por sustrato. El amonfaco causa inhibicin a concentraciones
superiores a 3 - 5 g.litro-l. Al agotarse.la fuente de carbono en un medio de

cultivo, en presencia de aminocidos, los microorganmos consumen el


esqueleto carbonado de los aminocidos y se acumula arhonfaco. Cuando se
utlizan nitratos como fuente de nitrgeno, estos compuestos son parcialmente
reducidos hasta NOr, sustancia que puede ser txica para las clulas.

293

5.4.1.3

Modelo de Andrews

Andrews, '1971 , recomienda la siguiente ecuacin para la inhibicin pirr sustrato


de un cultivo en'un reactor de mezcla completa:

'^ '-

[5'31]

'

r*K*''

Ks

Donde, !x, !i velocidad especfica y velocidad especfica mxima de crecimiento; Kr: constante de saturacin, mg/litro; K,.: constante de inhbcin por sustra-

to, mg.litro-l ; s: concentracin de sustrato,

mg,litro-1

Edwards. (1970). confronta la Ecuacin t5.311 y las deducidas por otros


aujores, (Noack, 1968, Aiba er at., 1968; Yano t al., 1966; Webb, 1963, on
datos experirnentales y deduce que todas estas ecuaciones conducen a resultados similares.
El valor de la concentraqin del sustrato, corespondiente a
partr de la Ecuacin t5.311:

lr,

se'obtiene

*=o=py.(,.+.*)'(_:.*)
.

De dondc

s = (K"

. Xo)'o

-:,

15-.32'l
,

Y a! reemplaza la concentracin de sustr,ato s, en la Ecuacin [5,31]:,

'

lu

5)'o

1 + 2,1-

(r"

/
\
)

294

t5.33r"

5.4.1.4

Modelo de Tseng y Waymann

En algunos casos el patrn de la inhibicin por sustrato difire del expresado por

Ecuacin t5.311 y demuestra un decrecimiento lineal de la velocidad


especfica de crecimiento, /.rx. Tseng y Waymann, 1975, presentan una
ecuacin, vlida para concentraciones de sustrato mayores que un valor crftico,

la

sci
)L

= Fu-

Kt*s

Kr.(s - S.

t5.34I

5.4.2 lnhibicin por produeto

Los modelos cnticos de inhibicin por producto presentados por diferentes


investigadores ajustan los datos experimentales de acuerdo con el patrn
especfico de comportamiento de cada proceso. El decrecimiento de la
velocidad especfica, /x, puede ser lineal, exponencial, por etapas, etc., y,
generalmente el cambio de una cepa o la modificacin de las condiciones
experimentales alteran los resultados.

5.4.2.1 Modelo de Holzberg

Holzberg et al., (1967), presentan un'modelo cintico vlido en aquellos casos


donde la velocidad especfica de crecimiefito, ltx, decrece linealmente;

Vx=Va-f,t.(p-Kz)
Donde,

0;

ts.3sl

rr: velocidad especfica mximg4e crecimiento, h-r, evaluada con p

p: concentracin del producto, g.(trol-'; K,,: constante cintica, litro.g-1


Kr: constante cintica, g.(litro)'l

.h-1;

295

5.4.2.2. Modelo de Ghose y Tyagi


Ghose y Tyagi, 1979, presentan un modeto para evaluar la' inhibicin del
crecimielto de revadura

*'*;"1'-r.r,
\

-.cx)l

Donde, c: concentracin media del productoi


producto a la cual las clulas son aun viables.

cr,r:

r5.s6,

mxima concentracin de

5.4.2.3. Modelo de Jerusalimsky


El modelo propuesto por Jerusalimsky, 1967, es uno de los modelos utilizados
con mayor frecuencia en la evaluacin de los resultados de la cntica de inhibicin por producto en cultivos discontinuos:

=r"'t'[

Donde, K,, es la constante de inhibicin por

t5'37]

ptoducto. \

5.4.2.4. Modelo de Bazua y Wilkie


Bazua

y Wilkie, 1977,

ajustaron los datos experimentales obtenidos en la

cntca de inhibicin delcrecimiento de levadura en cultivo continuo, por etanol,

mediante la siguiente ecuacin:

\t/2

rr=rc.ll*'c
cx)I

296

t5.381

Donde, pr: velocidad especlfica mxima de crecimiento, cc: concentracin media


del producto en cultivo continuo, g.litro-1; r.: velocidad especfica de crecimien-

to observada a la concentracin c..

5.4.3.

Represin catablca

Un cultivo de microorganiSmos en un medio compuesto por diversas fuentes de

carbono utiliza selectivamente aquella que !e permite una mayor velocidad de


crecimiento y reprime catabolicamente los nutrientes menos tiles. La represin
catablca es un fenmeno importante en algunas fermentaciones industrales
como en la produccin de levaduras y de algunos antbiticos, y cuando hay
crecimiento diauxico y formacin de metabolitos secundarios.
Moser, 1988, recomienda el siguiente modelo de represin catablica:
ft=ltv

(,*".[r.)

t5.391

Donde, r,: velocidad de formacin, o de consumo, de componente i, g'litro-1.h-1;


x: concentracin de biomasa, (g clulas secas).litro-1; s; concentracin de
1.
sustrato, g.litro-l; KR: constante de represin, g.litro

5.5

MODELOS CINETICOS PARA LA FORMACION DE


PRODUCTO

Normalmente los microorganismos convierten la fuente de carbono en biomasa


y producen so.lo la mfnima cantdad de metabolitos esenciales y posiblemente
pequesimas cantdades de metabolitos secundarios o no esenciales. La optimizacin de la productividad de un proceso para la obtencin de metabolitos
secundarios usualmente incluye la interferencia de los mecanismos de regulacin
297

metablica del microorganismo, para convertirlo en sobreproductor del compues-

to deseado, adems de ensayos con microorganismos mutados en diferentes


condiciones ambientales,

5.5.1.

Clasificacn de los productos

Los microorganismos utilizan el sustrato en la sntesis de nuevo material celular

y de productos extracelulares,

para obtener la energfa requerida por las


reacciones de sntesis y recirculacin de materiales, y para mantener las
sustancias dentro de la clula en un nivel de concentracin generalmente
diferente de la concentracin de estas mismas sustancias en el ambiente.
La energla que impulsa los procesos celulares es la energa qulmica del ATP, o

de sustancias similares, obtenida mediante la oxidacin del sustrato por el


oxgeno molecular hasta CO, y agua, proceso conocido como fosforilacin
oxidativa. Otro proceso de obtencin de energla es la fosforilacin a nivel de
sustrato mediante la degradacin del sustrato hasta productos mas simples
como etanol, cido lctico, cido cftrico, CO, y agua. Estos productos
excretados por la clula, mediante fosforilacin a nivel de sustrato, son
conocidos como productos del tipo 1.
Los productos del tipo 2 son compuestos extracelulares tales como exoenzimas,
polisacridos y metabolitos especiales, Las exoenzmas degradan las molculas

del sustrato demasiado grandes para atravesar la pared celular. Los polisacridos como la celulosa y el almidn, cumplen funciones estructurales en la agregaoin de clulas, y como reserva de alimentos. Los metaboltos especales como

los antibiticos, evitan la competencia de otros microorganismos,

'/

En algunos casos donde el medio contiene un exceso de fuente de carbono y


cantidades limitadas de otros sustratos como nitrgeno o magnesio, pueden
obtenerse productos del tipo 3. Los productos del tipo 3 como el glicgeno y
las grasas, actan como depsitos de energa y pueden ser o almacenados o
excretados por la clula. Los productos del tipo 4 son los constituyentes celulares tales como el ncleo, los cromosomas, el citoplasma, el lisosoma y las
membranas celulares.

298

Gaden, (1959), distingue cuatro tipos de formacin de producto de acuerdo con

la relacin cuantitatva entre la cantidad de producto y el crecimiento

biomasa.

de

- Tipo 0: Las clulas en reposo utilizan pequeas cantidades de sustrato para


su propio metabolismo y funcionan como transportadores de enzimas. Como
ejemplos puden mencionarse la transformacin de esteroides y la slntesis de
vitamina E por Saccharomyces cerevisiae.

1:

La formacin de producto est directamente asociada con el


crecimiento. Es el caso de los metabolitos primarios en los cuales la formacin
del producto est asociada con el metabolismo de energa. Como ejemplos

Tipo

pueden mencionarse la produccin de alcohol y cido glucnico, y el tratamiento


biolgico de aguas residuales.

2:

No hay una relacin entre el crecimiento y la formacin de producto.


Como ejemplos pueden mencionarse la produccin de penicilina y de estreptomicina.
- Tipo

- Tipo 3: Hay una relacin parcial entre el crecimiento y la formacin de


producto y por consiguiente una relacin indirecta con el metabolismo de
energa. Como ejemplos pueden mencionarse la produccin de cido ctrico y
la de algunos aminocidos.

5.5.2. Modelos cntcos


5.5.2.1 Formacin de producto asociada al crecimiento mcrobial

Algunas de las ecuaciones que describen la formacin de producto asociada al


crecimiento microbal son:
dP
rp=E

(Yn*).r*

(Yrt*).

dx.

&

t5.401

299

1dP

=r=

rp

v,,il.! ff=vri.v*

(Yrts).""

= (Yry, ).

ds

t5.411

t5.42)

Donde: rp, r, rsi velocidad de formacin de producto, crecimiento de biomasa,


y consumo de sustrato, respectivamente en g.litro-1.h-,; x, p, s: concentracin
de clulas, producto, y sustrato, respectivamente en g.(litro)-1 ; rr: velocidad
especfica de crecimiento de biomasa, h'1 ; ltpi velocidad especfica de formacin
de producto: (g producto).(g clulas)-1.h-1. La siguiente ecuacin relaciona los
factores de rendimiento de las tres ecuaciones anteriores:
t5.431

Donde, Yor: rendimiento del sustrato en clulas, (g clulas)/(g sustrato); yr,.:


rendimiento de sustrato en producto, (g producto)/(g sustrato); Y"rx: rendimiento
de biomasa en producto, (g producto)/(g biomasa).

Moser, 1988, presenta la siguiente ecuacin, Tipo Monod, para la formacin de


producto asociada al crecimiento:
fP=fp,ti.

s.r
Ks *s

15.441

ponde, rr: velocidad de formacin de producto, g.litro-, .li1 ; pr*: velocidad


especffica mxima de formacin de producto, (g producto).(g clulas.h)-r.

5.5.2.2. Formacin de producto no asociada al crecmento


microbial
Generalmente, la cuantificacin de la forma",on ,, producto no asociada al
crecimiento es una tarea diflcil. En algunos casos el siguiente modelo ajusta los
datos obtenidos experimentalmente, Moser, 1 g8B:

300

rt = x'Ky

t5.451

Donde, rp: velocidad de formacin de producto, g.litro-1 .(hora) 1; ,t Jn""nrr"-

cin de biomasa, g.litro-l; Kr: constante de veocdad para formacin

de

producto: (g producto).(g clulas.h)-l.

5.5.2.3

Formacin de producto parcialmente asocada al


crecmento: modelo de Luedeking y Piret

El modelo propuesto por Luedeking y Piret, (1959), para la fermentacin del


cido lctico, es una combinacin de las ecuaciones t5.411 y [5.45], y por
tanto, es un modelo para la formacin de producto parcialmente asociado al
crecimiento:

f = fr.

(Y^) + K,

t5.461

Donde, !p, Kpi velocidad especifica de formacin de produeto y constante de


velocidad de formacin de producto, (g producto).(g clulas.h)-1; p*: velocidad

especfica de crecimiento de biomasa; h'l; Yrr*: rendimiento de biomasa en


producto, (g producto).(g biomasa) 1.

5.6

EVALUACION DE PARAMETROS CINETICOS A PARTIR


DE DATOS EXPERIMENTALES

El modelo de Monod (Ecuaciones t5.171 y t5.181) describe la interaccin entre


el crecimiento de microorganismos en un cultivo por lotes y la utilizacin del
sustrato limitativo del crecimiento en aquellos sistemas donde prcticamente
todo el sustrato es transformado en biomasa:

301

dt

_ Pu-b.r)
Ks*s

dsldx
dr Y*1, df

15.171

15.181

Donde, Y^,=: factor de rendimiento de sustrato en producto, (g clulas).(g


sustrato)-1; s: concentracin del sustrat limtante, g.litro-l; x: concentracin de
biomasa, (g clulas secas).litro-'; lt*: vetocidad especfica m{xima de crecimiento, hora-l; Kr; constante de saturacin, g.litro-l; K.: es la concentracin del
sustrato correspondiente a una velocidad especffica de crecimiento igual a la
mitad del valor mximo, !u.

5.6.1 Mtodo integral

de anlisis

El mtodo integral de anlisis del modelo de Monod.(Ecuaciones ts.17l y


[5.18]], propuesto por Ong, (1983), se fundamenta en.un algoritmo de
bsqueda unidimensional y en un procedimiento de ajuste por mlnimog
cuadrados. El punto de partida del mtodo es la siguiente ecuacin obtenicla
mediante integracin de la Ecuacin [5.18]:

x=o+Y*lr Gr-")

5.47t

Donde,, xo, so: cncentracin inicial de biomasa y de sustrato limitativo'del


crecimiento, respectivamente. Si la Ecuacin'[5.47] se sustitu'ye n la Ecuacin
t5.171 se obtiene:

302

#*

l*o

* Yn,' t", -'l l

ts.481

ds __
dt

+ffi[r'

* *"'(s' -s)]

Kr+s

.ds=- P, la

I " [r, * Yrr-. (", - ")

Jo

1. s .1Lnfi., +a.dll
'.
-t ln- =D.
.
-so
o..=

!s!.

rrr.

-c

t5.491

[5.50]

t5.511

xo

b=1

+ Yrr. s,]
+=l=: [x,
Yv*'Kr t "

t5.521

"=#["*r'r'"']

t5i53I

=(so-s)

t5.541

La Ecuacio tS.SOL Ceducida,por @eory Marlar,, (1968); iedba, una,felaci6n


lineal entre los trminos {(1lt}iIn (s/so}}y {(1/t).ln (1 + a,d)}, Gate&y Mar'lar,
(1968), sugieren un procedimiento basado en la representacin grfica de estos
trmnos para diferentes va[ores supuestos del parmetro a. Los valores de ,
b, y c, asociados con la tnejor,[aea rebta obteirida, son seleccionados como los
mejores estimativos y- son los utilizados en la evaluacn de pu,'K. y Y*,., a
'' i
.' j
partir de las Ecuaciones [5.51], [5.52] y [5.531:
|-u=

b-1

ts.55I

303

_1 *sa
Ks=

t5.561

b-1
t5.57I

Yr6=a.xo
Los parmetros cnticos de la ecuacin de Monod,

/ y

Ks, no pueden

estimarse con la misma facilidad que los de Michaelis-Menten en una reaccn


enzmtica. En el caso de una reaccin enzimtica, la velocidad incial de una
reaccin se mide en funcin de la concentracn de sustrato a partr de una serie
de varios ensayos por lotes. En un cultivo de microorganismos la velocidad

inicial de una reaccin siempre es cero por la necesidad de una fase de


adaptacin durante la cual no se aplica la ecuacin de Monod. Adems, estas
ecuaciones, aunque similares, son diferentes:

- Michaelis-Menten
dP

d,

fx's
_-,r- - Kr*,

t5.581

- Monod

!d* =! 'fx=
xdt x

lr. s

Ks*s

t5.591

De acuerdo con Ong, 1983, el coeficiente de correlacin R, describe el grado de


ajuste de una lfnea recta. Por consiguiente el coeficiente R correspondiente a
la relacin lineal expresada en Ia Ecuacin [5.50] es:

R2=

(n.E;.r - E.Ey )2
I n.Ex2 - (E* f )l".Dy' -(Ey]

15.601

Donde:

-_ln(1

+a.d)
t

Donde, n: nmero de datos analizados; y: ordenada; x: abcisa.

304

t5.61I

t5.62I

En las tres ecuaciones anteriores se conocen todos los trminos, excepto el


parmetro a. La funcin objetivo es minimizar (- R2l. Esta funcin objetivo es
unimodal gara a > 0, esto es, solo tiene un valor ptimo local igual al ptimo
globat,
El algoritmo mencionado en esta Seccin es una modificacin de la tcnica de
bsqueda unidimensional de Powell desarrollada originalmente para la solucn
de un problema de programacin no lineal no restringida descrito por Rskbitas

et al., 1983.
El progiama C:\GWBASIC\MONOD.BAS, resumido en la Tabla

5.12, constituye
un ejemplo de la aplicacin del mtodo integral de anlisis de datos en la
evaluacin de los parmetros cintcos de la Ecuacin de Monod.

5.6.2 Mtodo diferencial de anlisis

Elobjetivo del mtodo diferencial de anliis es la evaluacin de las velocidades


de crecimiento de biomasa y de consumo de sustrato a partir de un conjunto de
datos experimentales de las concentraciones de biomasa y de sustrato en funcin deltiempo en un cultivo por lotes. Aunque existen numerosas alternativas
pra la evaluaclon de estas velocidades, los siguentes procedimientos han sido
utilizados coil alguna frecuencia:
- Et procedimiento geomtrco de diferenciacin de una funcin experimentalen
un punto, propuesto por Leduy y Zaiic, 1973. En el programa C:\GWBAS|C\IEDUYZAJ.BAS,'resumido en la Tabla 5.13, se aplica la subrutina de Leduy y
Zaic, en la evaluacin de la velocidad de crecimiento de biomasa a partir de un
conjunto de valores de la concentracin de biomasa (variable dependiente) en
funcin del tiempo.

305

- El procedimiento

propuesto por Tao, 1987, fundamentado en arreglos de

polinomios de la forma:

flxl = a(i) + b(i). * c(i).x2 * d(i\.xi


Donde, x: variable dependiente;

t5.63I

t: variable independiente.

El programa i:\GWBASIC\SPLINE.BAS, resumido en la Tabla 5.14, evata tos


coeficientes de la curva de ajuste para cada intervalo de la variable independiente (tiempo). La variable dependiente en la ecuacin t5.631 es la concentracin de biomasa. En elprograma se obtienen las derivadas de los polinomios en

cada punto de la curva.


Los valores de los parmetros Ir y Ks son obtenidos a partr de las siguientes
relaciones lineales, deducidas de la ecuacin de Monod, una vez conocidos los

valores de la velocidad de crecimiento de biomasa


consumo de sustrato r":

r, y de la velocidad

de

- Lineweaver-Burk:

1_ 1 *5r

lL Fx Vus

ts.64l

La representacin grfica de 1lp versus l /s, en el caso de microorganismos que

se comportan de acuerdo con el modelo de Monod, corresponde a una lnea


recta, cuyo intercepto es 1lp* y cr,rya pendiente es Kr/gr.

La evaluacin de lrr, y Ks por el mtodo de Lineweaver-Burk depende

las

mediciones realizadas a bajas concentraciones de sustrato. S se considera que


et valor de 1lU tiende a infinito a medida que la concentracir de sustrato
disminuye, los puntos correspondientes a estos valores afectan ta pendiente y
el intercepto.

- Langmuir:

sKsl
l

306

Va

+-.s
Fu

ts.651

La representacin grfica de slp versus s, en el caso de microorganismos que


se comportan de acuerdo con el modelo de Monod, corresponde a una llnea
recta, cuyo intercepto es K./r,, y cuya pendiente es 1lp*,

- Eadie-Hofstee:

l=prr- fs .tr"

t5.66I

La representacin grfica de p versus ltls, en el caso de microorganfsmos que


se comportan de acuerdo con el modelo de Monod, corresponde a una lnea
recta, cuyo intercepto es /rvr y cuya pendiente es - Kr. La principal limitacin del
mtodo diferencial de anlisis en la determinacin de parmetros cntcos es la
dficultad para la realizacin de ensayos en un reactor continuo de mezcla
completa (CSTRI donde existe la posibilidad de mantener un medio ambiente
estable para los microorganismos.
En los ensayos por lotes pueden utilizarse matraces para realizar simultneamente mltples ensayos con diferentes condiciones ambientales. Los ensayos
en reactores continuos requieren tanques de reserva de nutrientes y de producto
cnectados aspticamente alfermentador. El control delcaudal efluente se dificulta en algunos casos por la formacin de espuma y por el taponamiento del
ducto de salida con aglomerados de clulas. La duracin de un ensayo puede
prolongarse durante varios dfas, e incluso semanas, y aumentar el riesgo de

contaminacin y de mutacin de la cepa por su adaptacin a las nuevas


condiciones ambientales. Las diferentes condiciones ambientales en un ensayo
por lotes y en una fermentacin continua afectan la validez del modelo cintico
desarrollado en un reactor continuo para la prediccin del comportamiento de
una fermentacin por lotes y vicversa. Por consiguiente, estos parmetros
requieren una verificacin cuidadosa con el propsito de evaluar la confiabilidad
del modelo establecdo.'
El Ejemplo 5.2 muestra la evaluacin de los parmetros cintcos de la Ecuacin

de Monod a partr de un conjunto de datos experimentales. Los programas


LEDUYZAJ,BAS y SPLINE.BAS obtienen las velocidades de crecimiento de
biomasa y consumo de sustrato; los parmetros I/M, K. y Ys, son calculados
mediante un anlisis de regresin de las ecuaciones de Lineweaver-Burk,
Langmuir y Eadie-Hofstee, con el programa C:\OUATTRO\MONOD.WO1. Los
parmetros de la ecuacin de Monod tambin son obtenidos por mtodo integral
de anlisis con el programa GWBASIC\MONOD.BAS.
307

Ejemplo

5.2 Evaluacin de los parmetros cinticos

de ra Ecuacin
de Monod a partir de datos experimentales

En la Tabla 5.8 se presentan datos obtenidos experimentatmente en un cultivo


porlotes de Aerobacter cloacae en un medio qulmicamente definido, compuesto
por glcerol como sustrato limitativo del crecimiento. Evaluar los parmetros
cinticcis: /rrr, Ks y Yvs, de la ecuacin de Monod mediante los mtodos integral
y diferencial de anlisis de datos.

.5.8

Evaluacin de las velocidades de crecniento de biomasa y de


consumo de sustrato a partr de datos experimentaleS. Anlisis de regresin
realizado con el programa C:\OUATTRO\MONOD.WOI
Tabla

/
f

ABCDEF

Tiempo BiomaEa Sustrato


horas
mg,/Iltro mg/litro

dx/dt
LD-Z

.o,52
q. 86
r;19'
l;1r3
t.74
2,06
2,37
2,48

15,54
L9 ,25
22,og
23,07
L7 ,43
5,40
L,O2

7_

22,5
28 , q
35,3
4L,L
48 ,2
53,0
54,4
54,5

60,5
,2
36,5'
25,5
11, 0
3,1
0,4
49

dx/dt

s.promedio

SPLINE

15,90
,63
22,2s
23,92
20 ,,20,
9,a2
1_,66.

54,90

L9

42 ,85

31,00
1,A,Zs
7 , 05

7,,15

,2

OEIiTKL.
d/dt
P_Iom

LD-Z

'

14,500
L7 ,395
20 ,670
22,58O
20 ,250
l_1,415
3,270

dx/dt
Prom.

(t/s)

t4,o70
L7,765
20 ,950
23,l.05
22,060
L4,660
5,390

0,0149
o, 0182
0 , 0233
o,0323'
0, 0548
0,1418
0,5?t4

x prom.

LL
LD-Z

tL

SPIJINE

SPIJINE

19,00,
25" 55
31, 95
38,20
44,65
50, 50
53,10

o,75j.2
0,6808
0 ,5459
0:,5g,!1
o, 4535
o ,2256
o,os98

0,7405
o, ais:
O

6560

0,6C48

,4s4t
,28s7
0,1004
0
0

Contina
308

Tabl 5.8 ConEinuacin

(a/ p)

(t/

TrD-Z

SPI,INE

1,310

L,469
L ,546
L,692
2 ,205
4 ,433
L6,'129

0,0113

L,524

0, 0151
0, 0191
o

ot24

, 0249

0, 0320

,4s2
,963

I
p

o,

1, 653
2, O24
9

(tt/

(p/ a)
frD-Z

tt)

1, 350
1, 438

P.

, 0342

(e/ p)'
LD-Z

E)

SPIJINE

88;121
80,638
66 ,234
52,445
40,240
3L,251_
29 ,276

0, 01:_0
o , oL27
0, 0153
0, 0195
o,

o27!

0, 0411
O

, O.S?4

Prom.

L/ .t. prom.
IDZ-SPfr

prom.

IJDZ -

PIJ

o,752

1, 330

0,

0, 688
0, 651

L,453
1,535
L,672

0,0152

0,598
o ,'47 4

o,258
o;o8o

2,Lt4
'3,942
]-3,,346

y.)

eO, 814

78,958
55,318
5'1 ,

253

36,938
24,334
1,7 ,43s

LEZ-SPL

le/

.SPIJINE

0112
0, 0125

o, 0193
, 0260
0, 0355
0, 0458
o

/e

s/ pprom.
LDZ-SPL
89 ,467

79,798
65,?75
5)-,849
38, 589
27,'192
23

,355

Observaciones:

A, B, C : datos experimentales. La concentrcn inicial de biomasa:


(mg
15,50
de biomasa seca)/ltro, corr'esponde a la concentracn de biomasa'
despus del pefodo de adaptacin, esto es, la concentracn al comienzo de la
fase exponencial.
- Columnas

- Cotumna D: Velocidad de crecimento de biomasa obtenida con et proErama


C:\GWBASIC\LEDUYZAJ.BAS, flabla 5.13), a partr de la informacin de las
columnas A y B.

- Columna E: Velocidad de crecimiento de biomasa obtenda con el prograrna


C:\GWBASIC\SPLINE.B'AS, (Tabla 5.14), a partr de la informacn de las
columnas A y B.

- Columnas F, G, H: Valores promedo de las columnas C, D y E, respectivamente; Columna l: Recfproco de los valores de la columna

F.

309

- Columna J: Concentracin de biomasa. Promedio de los,valores anotados en


la columna B en cada intervalo de tiempo. Columnas K, L: Velocidad especfica
de crecimiento de biomasa, calculada'con los valores de la columna J, y las
columnas D y E respectvamente, en (horas)-1.
- Columna S: La velocidad especlfica promedio / prom es el promedio aritmtico
de los valorcsranotados en las columnas K y L qn cada ntervalo de tiempo

Tabla

5.9 Resultados obtenidos mediante

anlisis de regresin de los valores

anotados en la Tabla 5.8 aon el programa C:\OUATTRO\MONOD.WOl

R2

ErY

ErrX

75,4252
27,73AA.
21-,5820

o, 0990

Lineweaver-Burk, Ecuacin [5.64]:

sPL
t,1699
LDZ
O,8026
PROM O,9862.

O , 0492
0,1,769
O,0678

0, 9998

O,9992
0,9998

Langmuir, Ecuaein [5.65] z

0,3559
0,L364

SPIJ 16,2L30
LDZ 24,9965
PROM 20,6048

0,8319
2,3695
1,,3236

Eadie-Hofstee,

Eeuacin [5.66]

0,9992
0, 9916
0,9978

!,1_278
0, 9560
1, 0419

0,0138
O, 0394
0

, 0220

sPI+. 9,8723

-0.,014s 0,9,pqg -13r7?O.7 0,343s,..."i.


IJDz.L,o.l25.o,o55oo,g624-zl,+i.gs2,427o
pRoM 0,948':
o,orez:: ois'ddl;,,,-,aa,;de?4,' o,sosz,',
l't

'

Observaciones:

Y:lntetceptoconelejoY;Y:var.iab1edependiante',:.'
1-;

.,

'I

..

-,

Err Y: Error estndar de los valores estimados de Y.

$:,coeficiente de correlacin linear; R2: coeficiente de delerminacin, (steel y


Torrie, 19"80).
,:
I
:

m: Valor de la pendiente o coeficiente de X; X: variable independiente.


,

Err

X: Error estndar de los valores estimados,de X.

310

:1

'v

Lin'eweaver-Burk, Ecuacin t5.641: Variable independiente: datos de la


columna I (Tabla 5.8); Variable dependiente: columna N: mtodo Spline;
columna M: mtodo de Leduy y Zaiic; columna T: mtodo de la velocidad'especfica Promedio de crecimiento.

--

-- Langmuir, ,Ecuacin t5.651: Variable independiente: datos de la columna F


(Tabla 5.8); Variable dependiente: columna R: mtodo Spline; columna O:
mtodo de Leduy y Zgiic; columna V: mtodo de la velocidad especffica

l
l
l

promedio de crecimiento.

columnas
velocidad
dependiente:

- Eadie-Hofstee, Ecuacin t5.661: Variable independiente: datos de las

P, O y U (Tabla 5.8) para los mtodos de Sptine, Leduy y Zaic, y

especfica promedio de crecimiento, respectvamente. Variable


datos de las columnas L, K y S (Tabla 5.81 para los mtodos de Spline, Leduy
y Zajlc, y velocidad especfica promedio de crecimiento, respectvamente.

Tabla 5.10 Parmetros de la Ecuacin de Monod obtenidos a partr de los


valores anotados en la Tabla 5.9, (Mtodo diferencial de anlisis); R: coeficiente
de correlacin.

Lineweaver-Burk, Ecuacin [S.S]

..+,

spline
Leduy y za)ic
Promedio

rr = 0,8548

Fu = 1,2459
ru = 1,014

Langrmuir, Ecuacin [5 .55]

= 0,886'7

Pr

Promedio

ltu=9,9598

F = 1,0450

Eadie-Hofstee, Ecuacin [5.56]

spline

Leduy y zalie

Promedio

= 0,8723
Pr = 1 ,0725
llu = 0,9483

Fu

Ks = 13,185
IG = 34,560
IG = 21 ,884

R: 0'9999
R = 0,9996
R=0
'9999

G = L4'376
IG' = 26 't47
Ks =\9,776

R = 0'9996
R = 0 '9958

IG = 13,72t
Ks = '27,439
Iq = L8,8a7

R - 0,9984
R = 0' 9810

spline

Leduy y zajic

R=0'9989

R:0'9982

311

Tabla 5.11 Parmetros de la Ecuacin de Monod obtenidos con el programa


C:\GWBASIC\MONOD.BAS. resumido -e la Tabla 5.12, pata el conjunto de
valores expefirnentales de la Tabla 5.8.

:,
,
;

!u: 0,8528 (hora)-1


Ke .: 12,326 (mg gliceroll/(litro

gttos valores coinciden con loi informados por Herbert et al., 1956:
Yx/s : 0,53 g/g;lrrrr : 0,85 (hora)-l; K, = 12,3 mg/litro.

de medio)

5.12 Programa C:\GWBASIC\MONOD.BAS. Gates, W.E', y Marlar, 1968;


Moser, 1988; Reklats, G.V., Ravindran, A., and Ragsdell, 1983; Ong,S.L.

Tabla

1983) Rolz Carlgs, 1989.


1O CLS

20 PRINT "MONOD.BAS: METODO INTEGRAL DE ANALISIS"


30 PRINT "EVALUACION DE LOS PARAMETROS DE LA ECUACION
MONOD"

,
r
i

;
i
I

i
'
;
i
;

4o,PRINT

50 PRINT "REFERENCIAS:"
60 PRINT
70 PRINT "Gates, W.E., y Marlar, J.T., Water Poll."
80 PRINT "Contro! Fed. 40: R 469, 1968"
90 PRINT
100 PRINT'Moser, A., Bioprocess Technology, Kinetics"
110 PRINT "and Reactors, Springer Verlag, 1988"
120 PRINT
130 PRINT "Ong, S.L., Biotechnol. Bioeng. 25: 2347, 1983"
140 PRINT
'150 PRINT "Reklaitis, G.V., Ravindran, A. and Ragsdell,"
t60 PRINT "K.M., Engineering Optimization, Methods and"
170 PRINT "Applications, John Wiley & Sons. 1983"
180 PRINT
t 90 PRINT "Rolz Carlos, Curso: lngenieria de'RQacciones"
2O0 PRINT "y Procesos Biologicos. lnsttuto Centroamericano"
210 PRINT "de lnvestigacion y Tecnologia lndustrial,'lcaiti,"
220 PRINT "Programa: MOINTXS.BAS, 1989"

312

DE

230 PRINT
240 PRINT "PULSE ENTER !"
250 ANS : INPUTS(1)
260 CLS
270FOR X:1 TO 10000
280 NEXT X
290 CLS:KEY OFF
3oo GosuB 1o5o
310 CLS
320 WHILE CMD < >3
330 0N CMD GOTO 360,640
340 WEND
350 GOTO 1030
360 PAGINAo/o =1
370 GOSUB 1200
380 REM SUMINISTRAR DATOS Y CONSTANTES
390 PR!NT
400 INPUT "Conc.inicial de biomasa y sustrato ";CXo,CSo
410 PRINT
42O INPUT "Numero de pares de datos, incluir datos para t=0 ";N
430 PRINT
440 l=N
450 Dt M CS(t),T(t), CX(t l,X(t),y(t),A (t), E1 (tl,XX(D,TTill
460 FOR l:1 TO N
470 INPUT "Conc. bio.masa, sustrato, tiempo ";CX(l),CS(l),T(l)
48O NEXT

490 PRINT.,
500 cLS
510 REM ESCRIBIR LOS DATOS EXPERIMENTALES LEIDOS
520 PRINT SPC(1 0);"DATOS EXPERIMENTALES"
530 PRINT
540 PRINT SPC(5);"Conc.biomasa";SPC(5);"Conc.sustrato";SPC(5);"Tiempo"
550 PRINT

560F1$:"
,

##"+" ###.##'+SPACES(S)+" ###.## "+ SPACES(SI+

###.##"
570 FOR l=1 TO

580
v

PRINT USING Fl $;l,CX(l),CS(ll,T(l)

590 NEXT I
600 PRINT
610 PRINT "PULSE ENTER t"
313

620 ANS$ : INPUTS(1}


630 CLS
640 lF PAGINATo>1 THEN PRINT CHR$(12);
650 GOSUB 1200
660 REM CALCULO DEL RENDIMIENTO CELULAR
670 YE : (CX(N)-Cx0)/(CS0-CS(N))
680 REM CALCULO DE AP
690 AP:YE/CXO
7OO REM CALCULO DE X'S E Y'S SEGUN ONG

:.
"

710FORt:1TON

72O
730

X(t):LOG(1 +Ap*(CSo-CS(|)l)/Tfl)

Yfl) : LOc(CSfl)/CSo)/Tfl)
740 NEXT I
750 REM SUBRUTINA DE AJUSTE POR MINIMOS

760
770
780
790
800
810

L:2

INPUT "Criterio de convergencia, (se sugiere 1E-3): ";E


E1

:.5

GOSUB 1740

GosuB 1230
REM CALCULO DE MUMAX Y KS

82O MUMAX :A(2)/(A(1

830
840
850
860
870

CUADRADOS

)-1

KS = ((1 /AP) + CS0)/(A(1 )-1

PRINT

PRINT "Criterio de convergencia usado: ";E


PRINT

PRINT "El valor calculado del rendimiento

y es: ";yE

88O PRINT

890 PRINT "Velocidad maxima de crecimiento, MUMAX ,';MUMAX


9OO PRINT

'

910 PRINT "El valor estimado constante Ks. es: ";KS


920 PRINT
930 PRINT "Desviacion estandar del ajuste ",
940 pRtNT tNT(1 0000000#*D)/1 0000000#
950 PRINT
960 PRINT "Numero de iteraciones requeridas: ";M
970 PRINT
980 PRINT "PULSE ENTER !"
990 ANS : INPUTS(1)
l OOO WHILE CMD < > 3
1010 0N cMD GOTO 290,290
314

,,

1O2O
1O3O
1O4O
1O5O

WEND

1060
1070
1080
1090

PRINT

END

REM VENTANA DE MENU PRINCIPAL


PRINT "MENU PRINCIPAL"

"1. lngreso datos experimentales"


PRINI "2, Reiniciar calculo con nuevos valoresn
PRINT "3. Terminar el calculo"
PRINT

11OO PRINT

1110 INPUT "Favor seleccione numero y luego pulse ENTER !:",CMD'


1 120 PRINT
1130 PRINT "PULSE ENTER !"
1 140 WHILE CMD < > FIX(CMD) OR CMD < 1 OR CMD > 3
11

50

160
1 170
1 180
1 190
1

BEEP

PRINT

SPC(40);

';

INPUT "Favor entre 1 ,2 o 3 : ",CMD


WEND
RETURN

12OO PR]NT'CALCULO DE PARAMETROS DE MONOD'


1210 RETURN
1220 REM SUBRUTINA DE AJUSTE DE LA CURVA POR MINIMOS CUADRADOS

1230 FOR r:1 TO L


1240 E1(r) : E1
1250 NEXT I
1 260 M:O
1270 REM FIJAR RESIDUAL PARA EL ENSAYO
1280 Ll =1000000!
1290 REM RECORRER TODOS LOS PARAMETROS
1300 FOR r:1 TO L
1310 A0:A(r)
1320 REM OBTENER EL VALOR DEL RESIDUAL
1330 A(r):A0
1340 GOSUB 1s90
1350 REM ALMACENAR EL RESULTADO EN MO
1 360 MO :12
1370 REM REPETIR PARA M1
1 380 A(r) :A0*(1-E1 (t))
1390 GOSUB 1590
1400 M1 =L2
315

-?

1410 REM CAMBIAR EL INTERVALO SI ES NECESARIO

1420 REM St LA VARTANZA AUMENTA, DtVtDA E1(l) EN DOS

PARTES

IGUALES
1430 tF M1 >M0 THEN E1(t):-El(t)/2
1440 REM SI LA VARIANZA DISMINUYE, AUMENTE E1(I)

1450 lF M1<M0 THEN E1(t):1.2*E1ltl


1460 REM SI LA VARIANZA AUMENTA, INTENTE REDUCIRLA
1470 IF M1 >MO THEN A(II:AO
1 480 tF M 1 > M0 THEN GOTO 1 340
1490 NEXT I
15OO REM FIN DE UN PASO COMPLETO
1 510 REM ENSAYO DE CONVERGENCIA

1520M:M+1
1530 IF L2:O THEN RETURN
1 540 IF ABS((11 -LzIILZI < E THEN RETURN
1550 REM SI ALCANZA ESTE PUNTO, SE REOUIERE OTRO PASO
1 560 L1 :12
1570 GOTO 1300
15BO REM SUBRUTINA DE GENERACION DE RESIDUAL

590 L2:0
600 FOR J:1 TO N
1610 X:X(J)
1620 REM OBTENCION DE LA FUNCION
1630 GOSUB 1690
*
1 640 L2 : L2 + (Y(J)-Y) (Y(J )-Y)
1650 NEXT J
1660 D=SOR(L2|(N-L))
1670 RETURN
1680 REM SUBRUTINA DE FUNCIONES
1690 Y:A(11"X-A(2)
1
1

17OO RETURN

1710 REM LECTURA ESTIMADOS DE PARAMETROS INICIALES


1720 ANSS : INPUTS(1)
1730 CLS
1740 INPUT "Estimado inicial de Ks para iniciar calculo:";KS
1750 PRINT
1760 PRINT "Estimado inicial de Ks: ";KS
1770 Al1) : (1 + (CXo + YE*CSoI/(YE"KS))
1780 PRINT
1.790 INPUT "Estmado inicial de MUMAX para iniciar calculo:";MUMAX
316

- ) -.

1800 PRINT "Estimado inicial MUMAX: ";MUMAX


1 81 0 A(21 : MUMAX* (CXO + YE*CSO)/(YE*KS)
1820 RETURN

Tabla 5. 1 3 Programa C:\DOS\GWBASIC\LEDUYZAJ.BAS. Leduy, A.L.,y Zatic,


J.E., 1973; Oner, M.D., et al., 1986; Rolz, Carlos, 1989.

fO CLS
20 PRINT "LEDUYZAJ.BAS: METODO DIFERENCIAL DE ANALISIS"
30 PRINT
40 PRINT "PROCEDIMIENTO GEOMETRICO DE DIFERENCIACION DE UNA"
FUNCION EXPERIMENTAL EN UN PUNTO
50 PRINT "
60 PRINT
70 PRINT
tr
80 PRINT "REFERENCIAS:
90 PRINT
100 PRINT'Leduy, A.L.,y Zajic, J.E., Biotechnol, Bioeng.
1 1O PRINT " 1 5: 805, 1 973
120 PRINT
130 PR|NT "Oner, M.D., et al., Biotechnol. Bioeng. "
140 PRINT "28:902, 1986
150 PRINT
rr
160 PRINT "Rolz Carlos, lnstituto Centroamericano de
170 PRINT "lnvestigacion y;fecnologia lndustrial. lCAlTl "
180 PRINT "Curso de lngenieria de Reacciones y Procesos rr
190 PRINT "Biologicos, Guatemala, 1989. Programa: DIFLEZ.BAS"
'ir

2OO PRINT

210 PRINT "EVALUACION DE LAS VELOCIDADES DE CRECIMIENTO

DE

BIOMASA "

220 PRINT "Y DE CONSUMO DE SUSTRATO A PARTIR DE DATOS


MENTALES"
230 PRINT
240 PRINT "PULSE ENTER

250 ANS : INPUT(I}


260 CLS
270 FOR X:1 TO 10000
280 NEXT X
290 CLS:KEY OFF

EXPERI-

!'

317

300 GosuB 790


310 CLS
320 WHILE CMD < >3
330 0N CMD GOTO 360,440
340 WEND
350 GOTO 770
360 PAGINAYo:1
370 REM SUMINISTRAR DATOS

: ,

{'i

38O PR]NT
39O INPUT "Numero de valores de la variable dependiente ";V
4OO PRINT

41O

W:V+3

42O DIM TETA(W),CX(WI,ZMAB(W),ZMBC(W},DCX(W),CXCR(W),ZMNO(W


,ZNNO(W}

430 DIM ZMMO(W),ZNMO(W},TETAC(W)


440 FOR l=1 TO V
450 INPUT"IND,DEP';TETA(ll,CX(l)
460 NEXT I

47O REM ESCRIBIR DATOS EXPERIMENTALES

480 CLS
490 PRINT SPC(1 6l;'DATOS EXPERIMENTALES"
5OO PRINT

0 PRINT SPC(5); "Variable independiente" ;SPC( 51;"Variable dependiente"


520 PRINT
530 Fl$=1 ## "+" ####.#### "+SPACE(10)+" ####,#### I
540 FOR l:1 TO V
51

550

PRINT USING

Fl9;l,TETA(l),CX{l)

560 NEXT I
570 PRINT
58O PRINT "PULSE ENTER !"

590 ANSS : INPUTS(1}


600 IF PAGINA% > 1 THEN PRINT CHR${1 2};
610 CLS
620 PRINT SPC(1 0);"DATOS CALCULADOS"
630 PRINT
640 PRINT SPC(S);"lND";SPC(1 7);"DERIVADA"
650 PRINT
660 GOSUB 930
670 F1$:" ##.## "+SPACE$(8)+" ####.##
080 FoR l:1 TO v
318

690

PRINT USING F1; TETA(|),DCX(I)

7oo NEXT I
71O PRINT

720 PRINT "PULSE ENTER !"


730 ANS$ : INPUTS(1}
740 WHILE CMD < > 3
750 oN.CMD GOTO 290,290
760 WEND
770 CLS
780 END
790 PRINT "MENU PRINCIPAL"
8OO PRINT

2r

81O PRINT

820
830
840
850

PRINT
PRINT

"1. lngreso datos experimentales"


"2. Reiniciar calculo"
"3. Terminar calculo"

PRINT

INPUT "Favor seleccione numero : ",CMD


WHILE cMD < > FIX{CMD) OR CMD< 1 OR CMD> 3

j60
870

BEEP

880 INPUT "Favor entre 1 ,2 o 3: ",CMD


890 WEND
9OO RETURN

910 PAGINAo/o: PAGINAo/o + 1


920 REM SUBRUTINA LEDUY Y ZAJIC
930 l:1
940 DCX(l) : (CX(l + 1)-CX(l))/(TETA(l + 1 )-TETA(ll)
9S0 ZMAB(t+ 1):(CX(t+ t )-CX(D)/(TETA(I+ 1]-TETA(|))
960 zMBC(l + 1 ) = (CX(l + 2)-CX(l + 1 ))/(TETA(| + 2)-TETA(| + 1 ))
970 lF ABS(ZMAB(I + 1)-ZMBC(l + 1 ))< : .001 THEN 980 ELSE 1030
980 DCX(t+ 1):.5"(ZMAB(|+ 1)+ZMBC(l+ t ))
990 l:l+1
1000 lF {l + 2} < : V THEN 1010 ELSE 1O20
1010 GOTO 950
1O2O IF I<V THEN 1110 ELSE 1130
1030 zMNO(l + 1) : (TETA(I + 1l-TETA(l + 2))/(CX(l + 2)-CX(l + 1))
1040 zNNO0 + 1):.5"(CXil + 1)+ CX(l+ 2))-zMNO(l+ 1)*.5*(TETA(l+ 1)+TETA(l+ 2))
1 050 ZMMO(l + I I : (TETA(l)-TETA(l + 1 )l/(CX(l + 1 )-CX(l))
+ 1 ) *.5* (TETA(|) + TETA(I + 1 )'l
ZNMO(I + 1 : .5* (CX(l) + CX(l + 1
1

060

1O7O TETAC(|+

1):

))-ZMMO(|

(ZNNO(l+ 1)-ZNMO(l+ 1))/(ZMMO(l+ 1)-ZMNO(l+ 1))


319

1080 cxcRfl + 1 ) :zMMo(r + 1 I"TETAC(I + 1 I +ZNMO(I + 1 )


1090 DCX(l + 1 = (TETAC(l + 1 )-TETA(l + 1 ))/(CX(l + 1 )-CXCR(l + 1 ))
1 1 o0 GOTO 990
1 1 10 DCX(l + 1 ) :(CX(l + 1 )-CX(l)l/(TETA(! + 1 )-TETA(l)l
1 1 20 GOTO 990
1 1 30 RETURN

Tabla

5.14

Programa C:\GWBASIC\SPLINE.BAS. Rolz, C., 1989; Tao, B.Y.,


1

987.

1O CLS;KEY OFF

20 PRINT "SPLINE.BAS: METODO DIFERENCIAL DE ANALISIS"


30 PRINT
40 PRINT
50 PRINT "EVALUACION DE LOS COEFICIENTES DE LA CURVA"
60 PRINT "DE AJUSTE DE UNA FUNCION EXPERIMENTAL
70 PRINT
80 PRINT''REFERENCIAS:
90 PRINT
100 PRINT "Rolz Carlos, lnstituto Centroamericano de"
110 PRINT "lnvestigacion y Tecnologia lndustrial, lCA.lTl"
120 PRINT "Curso de lngenieria y Procesos Biologicos"
130 PRINT "Guatemala, 1989"
140 PRINT
1 50 PRINT "Tao, B.Y., Chem. Eng. Octobe 26, p. 109, 1987"
160 PRINT
170 PRINT
180 PRINT 'EVALUACION DE VELOCIDADES DE CRECIMIENTO"
190 PRINT "DE BIOMASA Y CONSUMO DE SUSTRATO A PARTIR"
2OO PRINT "DE DATOS
210 PRINT

EXPERIMENTALES

II

220 PRINT "PULSE ENTER !"


230 ANS : INPUT$(1}
240 CLS
250 INPUT "NUMERO DE PUNTOS DE DATOS ";NUM
260 PRINT
270 PRINT "X: variable independienfe: Y: variable dependiente"
280 PRINT
320

290 DlM XDATA(NUMI,YDATA(NUM)


3OO FOR I:O TO NUM-I
31O INPUT"X,Y";XDATA(II, YDATA(I)

32O

NEXT

330 GOTO 390


340 OPEN "O",#1,N$:WRITE #1, NUM
350 FORN= 0TONUM-1
360 WRITE #1, XDATA(N):WRITE #1, YDATA(N)

370

NEXT

380 CLOSE
390 GOTO 480
400 oPEN "1",#1,N

4lO

INPUT #1,NUM

420 DIM XDATA(NUMI,YDATA(NUM)

43O FOR I:O TO NUM.I


44O ]NPUT #1, XDATA(I):INPUT
450 NEXT

#1,YDATA(I)

460
470
480
490

CLOSE

ANS = INPUTS(1)
N=NUM:CLS
PRINT "RESULTADOS"

5OO PRINT
510 PRINT

52O PRINT "X: Variable independiente"


53O PRINT "Y: Variable dependiente"
540 PRINT "B: primera derivada"
550 PRINT "C,D: coeficientes"

560 PRINT
570 DIM A(N),8(N),C(N},D(N), P(N), O(N),R(N},S(N), STEPSIZE(N}
580 REM XDATA(n!, YDATA(nI son arreglos de n puntos de datos
59O REM A(N),8(N),C(Nl,D(Nl son arreglos de coeficientes polinomiales
600 REM en la forma f(x)=1+b(i)+x+c(i)*x^2*d(i)*x^3
610 REM PASO 1 DEL ALGORITMO
620 O(0) : 1 :O(N) : 1 :R(0) :0:S(0) =0:S(N) :0:C(N) :0
630 FOR !=O TO N:A(l):YDATA(I):NEXT I
640 REM PASO 2 DEL ALGORITMO

650 FORr:0TON-1
660 STEPSIZE(I) : XDATA(I + 1)-XDATA(|)

6"70

NEXT

'680 REM PASO 3 DEL ALGORITMO


321

690 FOR|:1TON-1

: i

7OO
A(I.

71

1)

P(l):3"((A(l+1)*STEPSIZE(l-1))-(A(ll*(XDATA(l+1)-XDATA(l-1)))+(-

*STEPSZE(I))I/(STEPSIZE(I-1 *STEPSIZE(I)}
}

O(l) =2*(XDATA(I + 1 )-XDATA{|-1 ))-(STEPSIZE(I-1 }*R(l-1 )}


R(l) = STEPSIZE(l)/O(l)

720
730 S(r) : (p()-(srEpstzEfl-1)"s0-1 ))t/o(l)
740 NEXT
I

75O REM PASO 4 DEL ALGORITMO

760 FOR r:0 TO N-1


77O J : N-1-l
780 C(J):S(J)-(R(J)*C(J+l))
790 B(J) = ((A(J + 1 l-A(J))/STEPSIZE(J))-(STEPSIZE(J)*(C(J
800 D(J) : (C(J + 1)-C(J))/(3.STEPS|ZE(J))
810 NEXT I

1)

2*C(J))/3)

820 REM IMPRIMIR LOS COEFICIENTES DE CADA INTERVALO


FOR r:0 TO N-1
PRINT ":";XDATA(|);SPCt3);"Y:";YDATA(!); SPC(3);"8:";B(l);
SPC(3);"C : ";C(l);SPC(3);" D : ";D(l)

830
840
850

NEXT

860 END

5.7

CONSIDERACONES GENERALES SOBRE BALANCE DE


MATERIALES, CINETICA Y SIMUTACION DE REACTORES

El propsito de esta seccin es analizar algunos biorreactores donde ocurren


reacciones bioqumicas orlginadas por la accin de clulas vivas.

5.7.1

Reactor por lotes

En un reactor por lotes normalmente equipado con un agitador y un sistema de

control de pH la composicn det caldo es uniforme. Por consiguiente, si .el


322

"

modelo de Monod describe adecuadamente elcrecimiento de biomasa en la fase


exponencial de crecimiento:

rr=v-x = P'x'

&*

t5.67I

Las clulas iriician su crecimien,o


del perfodo de adaptacin
"*ron.ncialdespus
::
una vez inoculado el caldo con un cultivo semilla:

1d*

=\

,
[4=far=t_to
JJ
'x

[5'68]

,o

Donde, t.: perlodo de adaptacin; t - to: perodo de retencin en el reactor por


lotes: se representa grficamente como el rea baio la curva' 1/r, vs x, (Figura
5.8, Ejemplo 5.3).

Ejemplo

5.3 Simulacin

del crecimiento de Aerobacter cloac'ae en


un reactor por lote

Herbert et al., 1956, informan los siguientes datos correspondientes a la cintica


de crecimiento de Aerobacter cloacae en un medio de crecimiento con glicerol
como sustrato lmitativo: pr: 0,85 hora-l; Kr: 0,Ol 23 gllito; Yr.: 0,53 (g biomasa seca)/(g glicerol).

Simular el crecimien to de Aerob!"t",


en un reactor por lotes |n .un
"tor"ae
reactor de flujo tapn. Representar grficamente
el tiempo de retencin.
Solucin

- La simulacin del crecimiento de Aerobactr, ,tor")" se

realiza mediante el
programa C:\GWBASIC\HERBERTl .BAS, resumido en la Tabla 5.1 5.

323

- La Figura 5.7 es una representacin grica de la variacin de las concentraciones de glicerol y de microorganismos con respecto al tiempo de retencin

En la Figura 5.8 se representa grficamente el tempo de retencin como'el


rea bajo la curva 1/r* vs x.

Tabla 5.1 5 Simulacin del crecimiento de Aerobacter cloacae en un reactor por


lotes, programa: C:\GWBASIC\HERBERTl .BAS.
1O CLS

20 PRINT "HERBERTI .BAS'


30 PRINT
40 PRINT "Cinetica de crecimiento de Aerobacter cloacae"
50 PRINT
60 PRINT
70 PRINT "CRECIMIENTO POR LOTES SIN FORMACION DE PRODUCTOS"
NO CELULARES"
80 PRINT "
90 PRINT
1OO PRINT "PULSE ENTER !"
1O ANS
1 20 CLS
1

: INPUT$(1

130 NN=1
140 REM Escribir las constantes: UMX:1/hora;KS:g/litro
150 REM Y:g microorganismos/g glicerol
160 REM S0: g glicerol/litro; X0: g microorganismos/litro
170 UMX:.85
180 KS:.0123
190 Y:.53
200 REM Paso de integracion: T1
210 T1 : .01
220 REM Valor final de la variable independbnte: T2
230 T2:3.5
240 REM lntervalo de impresion de los resultados: T3
250 T3:.1
260 PRINT "HERBERTl .BAS"
270 REIU Simulacion del crecimiento por lotes sin formacion de producto
280 PRINT
290 PRINT "T: variable independiente (tiempo, horas)"

324

300 PRINT "Valor final de T, T2:";T2


310 PRINT "T1: paso de integracion, T1 :";T1
320 PRINT 'T3: intervalo de impresion, T3=";T3
330 PRINT
340 PRINT "PULSE ENTER I"
350 ANSS : INPUT(1 )
360 CLS
370 PRINT "RESULTADOS"
380 PRINT
390 PRINT "T: tiempo, horas"
400 PRINT "O(1): concentracion de glicerol, g/litro"
410 PRINT "O(2): concentracion de microoorganismos, g/litro"
420 PRINT "l(2): velocidad de crecimiento de microorganismos, g/litro"

\=

440 REM Numero de ecuaciones diferenciales:


450 N:2
460 REM condiciones iniciales: O1 :S;O(2):X
470 0(1):3
480 0(2):.1
490 REM Subrutina de Runge-Kutta de orden 4:
500 T: INT(T2ffl + .5):T1 :TZ|T:T: INT(T3iT1 + .5):T3:T*T1 :T:0:T4 =0
510 TB:1:GOTO 750
520 IF(T-T4 +T1 110)<0 THEN 560
530 T4 :T4+T3:T5 =lNT(T/Tl +.51:T:T5"T1 : GOSUB 800
540 |F(T-T2 +T1t10)<0 THEN 560
550 LOCATE 23,1:END
560 0N TB GOTO 580,620,660,700
570 PRINT"** ERROR """:STOP
580 FOR T5:1 TO N
590 T0(T5) : T1 *l(T5):T6(T5) : O(T5]:O(T5) = O(T5) + TO(T5)/2
600 NEXT T5
610 T:T+T1 l2:f9:2:GOTO 750
620 FORTS:1 TO N
630 T7 :T1 *l(T5l:T0(T5) =T0(T5) + 2*T7:O(T5) :T6(T5) +f7 2
640 NEXT T5
650 T8:3:GOTO 750
660 FORT5=1 TO N
670 T7: Tl *l(T5l:T0(T5) :T0(T5) + 2*T7:OlT 5) :T6(T5l + T7
680 NEXT T5
690 TB :4:f :T +T112:GOTO 750
325

7OO FOR

T5:1 TO N

0 O(T5) :T6(T5) + (T0(T5] +T1 *l(T5))/6


720 NEXT T5
730 T8: 1 :GOTO 750
740 REM ECUACIONES DIFERENCIALES:
750 r(1t:i|tztry
760 tlzl:U*Q(2)
71

77O

U:

(UMX*O(1 ))/(KS + O(1))

780 GOTO 520


790 PR]NT
SO0PRINTSPC(31;"T: ";T;SPC(3);"O(f )= ";O(l );SPC(31;"Ol2l:";Ol2l;SpC(3);

"l(2l.:";ll2l

810 NN:NN+1
820 RETURN

Figuta 5.7 Resultados obtenidos en la simulacin delcrecimiento de Aerobacter


cloacae en un reactor por lotes, programa: C:\GWBASIC\HERBERTl .BAS. Varia-

cin de la concentracin de clulas y de sustrato con respecto a tiempo de


retencin.

Concen tracion, g/l i tro

326

Figura
'i

5.8

Resultados obtenidos en la simulacin delcrecimiento de Aerobacter

cloacae en un reactor por lotes, programa: C:\GWBASIC\HERBERTI.BAS.


tiempo de retencin requerido corresponde al rea bajo la curva 1/r* vs x.
10

El

l/Rx

o,5

1,5

Concentracion de biomasa, g/litro

5.7.2

Reactor contnuo de flujo tapn

Eri el reactor continuo de flujo tapn los nutrientes y los microorganisms-entran

por un extremo, las clulas crecen a medida que avanzan dentro del reactor, y
las clulas junto con los productos del metabolismo salen por el extremo opuesto. La ausencia de agitacin impide la mezcla completa del contenido del
reactor. La concentracin de clulas, de sustrato y de producto vara en las
direccines axial y radial. Si el reactor es operado en condiciones estables y se
desprecia la variacin de la concentracin en la direccin radial, entonces estas
concentraciones cambian con respecto a la poscin axial dentro del reactor pero
permanecen constantes en cada punto con respecto al tiempo. Las concentraciones en cada punto del reactor en la direccin axial son similares a las alcanzadas en un fermentador por lotes en igual tiempo de residencia.

321

En la prctica el comportamiento de los fermentadores de lecho empacado y


multietapa se aproxima al de flu.io tapn (PFR). Por consiguiente, las ecuaciones
correspondientes a un reactor porlotes (Ecuaciones t5.67ly t5.681) son aplicables al reactor de flujo tapn. Sin embargo, como la operacin es contnua, el
tiempo de retencin se calcula como:
V
L

--

t5.691

En la Figura 5.8 se representa grficamente eltempo de retencin como el rea

bajo la curva 1/r* versus x.

5.7.3

Reactor contnuo de mezcla completa (CSTRI

El reactor continuo de mezcla completa (CSTRI es uno de los equipos ms


utilizados a escala industrial, tanto para fermentaciones aerbicas como
anaerbicas, con microorganismos y con clulas animales y vegetales. Una
seleccin adecuada del impulsor y de la velocidad de agitacin permite el control
de la intensidad de la mezcla. El sistema de cultivo continuo operado como
quimiostato o como turbidostato mantiene la poblacin microbial en un estado
de crecimiento exponencial durante perodos prolongados de tiempo.
En el quimiostato el caudal suministrado por la bomba se mantiene en el valor

deseado y la velocidad de crecimiento se ajusta a este valor. El turbidostato


mantiene constante la turbidez del caldo mediante un sensor ptico y un sistema
de control para ajustar el caudal.

Aunque el quimiostato es un sistema fcil de operar, se recomienda el'


turbidostato cuando hay necesidad de ajustar la fermentacin a velocidades de
dilucin cercanas al punto de lavado. En estQ punto la prdida de cluls en el
. efluente supera el crecimiento de las mismas en el fermentador, fenmeno que
puede prevenirse mediante la regulacin del caudal.

328

Figura

5.9

Representacin esquemtca de un reactor continuo de mezcla

completa (CSTR).

CSTR

La ecuacin de balance de microorganismos en el reactor continuo de mezcla


completa (Figura 5.9), es:

Entradas

Salidas

Crecimiento

F.x^-F.x+V.rx

Y.4
&

Acumulacin
t5.701

Donde, F.x^: microorganismos en elafluente: F: caudal, m3/s; x^: concentracin


de microorganismos en el afluente, kg clutas/m3; F.x: microorganismos en el
efluente; x: concentracin de celulas en el reactor; V: volumen del caldo, m3; r*:
velocidad de crecimiento de las clulas en el fermentador; dx/dt: cambo con
respecto altempo de la concentracn de clulas en el fermentador.
En condiciones estables, los microorganismos crecen a una velocidad suficiente
para reemplazar los que salen en el efluente (dx/dt = 0). Adems si el alimento
es estr! (x^ : g la ecuacin anteror se convierte en:

f=-

x
tx

t5.711

329

Donde, rn,: tiempo de residencia en el reactor contnuo de mezcla completa


(CSTR). De acuerdo con esta ecuacin el tiempo de residencia es igual al rea
de un rectngulo de anchura x y altura 1lr*, tal como se indica en las Figuras
5.10 y 5.11.

Figura 5.10 Rpresentacin grfica de los resultados obtenidos en la simulacin

del crecimiento de Aerobacter cloacae, con et programa: C:\GWBASIC\HERBERTl .BAS. Eltiempo de retencn requerido en un reactor continuo de mezcla
completa (CSTRI para alcanzar una concentracn de producto x, corresponde
alrea de un rectngulo de anchura X = 1,687 (g producto)/litro y altura 1/r*
: 1,947 (litro.hora)/g.
7/Rx

o,5

Concentracion de biomasa,

1,6

g,/l

tro

5.7.4 Productividad y grado de conversin

La productividad, P,, de un proceso, se define generalmente como la masa de


producto, obtenida por unidad de tiempo y unidad de volumen, kg.m-3.s-1.

330

La Figura 5.12 es una representacin grfica de los resultados obtenidos en la


simulacin del crecimiento de Aerobacter cloacae en un reactor contnuo de
mezcla completa (CSTR). Las condiciones de operacin del reactor, catculado
con los datos del Eiemplo 5.3, son evaluadas a partir de la representacin
grfica de la velocidad de formacin de producto, r*. La mxima productividad
es igual a la pendiente de la lfnea tangente a la curva de concentracin de
producto. Los valores,ptimos de la concentracin de producto (x : 1,586 g
producto/litro) y de tiempo de retencin (t : 1,25 horasl coinciden con los
obtenidos en la Figura 5.11.
Un proceso discontinuo requiere un perlodo de adaptacin, t, para cosechar-el
producto, limpiar, esterilizar, inocular y arrancar el proceso. La tangente lrazada
desde el punto: t : t, c : 0, hasta la curva, c vs r, corresponde a la mxima
productividad de un proceso discontinuo:

f5.721

Donde, (P,)0": productividad del proceso discontinuo, en producto j; cojr


concentracin inicial del producto j; cr,: concentracin final del producto; tA:
perodo de adaptacin; tr: tiempo de reaccin requerido para alcanzar la concentracin final c, de producto.
La tangente trazada desde el origen de la curva, cj vs

curva, corresponde

a la

f, Figura 5.12, hasta la

mxima productividad de un proceso continuo

equivalente:

t5-73I

Donde, (P)": productividad del proceso continuo en producto


cin de producto j, alcanzada en el tempo de reaccin t,.

c,,: concentra-

Si se considera que en un proceso continuo no hay perodo de adaptacin:

(P)" > (P)e

332

desustratos muy costosos, el proceso se prolonga hasta la completa


utilizacin del sustrato. En este punto la productivdad terica del proceso es
ceto.
En el casO

El grado de conversin de sustrato en producto se define como:


15.741

Donde, C,.: grado de conversin del sustrato; sio: concentracin inicial del
sustrato r, en el tempo f : 0; sit: concentracin final del Sustrato en el tiempo
t : t. La definicin del grado de conversin (Ecuacin 5.74) supone que el
volumen de lquido en el reactor permanece constante.

Figura 5-11 bimulacin del crecimiento de Aerobacter cloacae en un reactor


continuo de mezcla completa (CSTR), calculado con los datos del Ejemplo 5.3'
Los valores ptimos de la concentracin de producto (x : 1,586 g producto/litro) y de tempo d retencin (t = 1,25 horas) coinciden con los obtenidos ert
la Figura 5.1 1 .
Concen traci on, g/l i tro

1,5

o,5

Sustrato
o
^oF

o,5

o,75

1,25
Tlempo de retencion, horas
1

1,5

1,75

333

En algunos casos

elgrado de conversin se expresa como una cantidad relativa:

Pv=

ci"

(P)"n

t5.75I

Donde, P,,: productividad relativa'del proceso en producto i; C,.: grado de


conversin deliustrato en producto r; (P,)ro*: mxima productividad del proceso
en producto i.

5.7.5

Reactor por otes con almentacin contnua

Uno de los mtodos empleados con mayor frecuencia en la operacin semicontinua de fermentadores es la "operacin de un reactor por lotes con atimentacin
continua (fed-batch) ilustrado en la Figura 5.13. Sila concentracin delalimento es alta el volumen efectivo del caldo en el reactor no cambia apreciablemente.
A causa de la baja solubilidad deloxfgeno, la operacin semicontinua, en el caso
de fermentaciones aerbicas, incluye generalmente la modalidad de alimentacin
continua de aire o de oxgeno.

Figura

5.13

Representacn esquemtica de un reactor por lotes con


alimentacin continua.

o.

334

Generalmente se utilza una de las siguientes estrategas de alimentacin con el


propsito de controlar el reactor:
- Alimentacin con caudal constante o con caudal linearmente creciente.,,

Alimentacin con caudal exponencialmente creciente con el objeto de


mantener cqnstante la concentracin de sustrato y alcanzar un crecimiento
exponencial.

:.'
- Alimentacin con caudal controlado por alguna respuesta del sistema como,
por ejemplo, el cociente respiratorio, la composicin de los gases efluentes, o
la concentracin de algn producto,

- Alimentacin

o en lotes repetidos.

Despus de cada perodo de


operacin el reactor se desocupa parcialmente y entonces se alimenta sustrato
para recuperar el volumen inicial.

clclica

Ejemplo

5.4 Simulacin

de! crecimiento de Aerobacter oloacae en


por
lotes con almentacin continua
un reactor

Simular el crecimiento de Aerobacter cloacae en un reactor reactor por lotes con

alimentacin continua. ltt : 0,85/hora; Ks : 0,0123 gllitro; Yr,.': 0,53 0


I
biomasa seca/g glicerol; F : 160 litros/hora, so = 3 gramos glicerol/litrol.
\

Solucin
:

,t-

La simulacin del crecmento de Aerobacter cloacae se realiza mediante'el


programa C:\GWBASIC\HERBERT2.BAS, resumido en la Tabla 5.16: En la Figura
5.I4 se representa elvolumen de caldo en el reactor, yla variacin de la masa
de glicerol y de microorganismos con respecto al tiempo de retencin,. Los
resultados obtenidos con el programa C:\HERBERT2,BAS, en elcaso de F : O,
concuerdan con los obtenidos con el programa HERBERT1.BAS.

335

: .,

Tabla 5.16 Simulacin del crecimiento de Aerobacter cloacae en u reactor por


lotes con alimentacin continua, programa: C:\GWBASIC\HERBERT2.BAS'
1O CLS

20 PRINT "HERBERT2.BAS"
30 PRINT
40 PRINT "Cinetica de crecimiento de Aerobacter cloacae"
50 PRINT
60 PRINT
70 PRINT "CRECIMIENTO POR LOTES SIN FORMACION DE PRODUCTO"
CON ALIMENTACION CONTINUA"
80 PRINT "
90 PRINT' SiN FORMACION DE PRODUCTOS NO CELULARES"
1OO PRINT.

110 PRINT "PULSE ENTER I"


1 20 ANSS = INPUT$(1 l
130 CLS
140 NN:1
150 REM Escribir las constantes: UMX:1/hora;KS:g/litro
160 REM Y:g microorganismos/g glicerol; Vo:volumen inicial, litros
170 REM SO: g glicerol/litro;XO: g microorganismos/litro
180 REM Fcaudal, litros/hora; MX: masa de microorganismos, g
190 REM MS: masa de sustrato, g
200 UMX:.85
210 KS:.0123
220 Y: .53
230 V0:100
240 SO:3
250 X0 = .1
260 F:160
270 REM Paso de integracion: T1
280 T1 :.O1
290 REM Valor final de la variable.independiente: T2
:
300 T2:6.5
310 REM lntervalo de impresion de los resultados: T3
320 T3 =.5
330 PRINT " HERBERT2. BAS"
340 PRINT
350 PRINT "T: variable independiente (tempo, horas)"
360 PRINT "Valor final de ,l:";T2
370 PRINT "T1: paso de integracion, T1 :";T1
336

380 PRINT "T3: intervalo de impresion, T3:";T3


390 PRINT
4OO PRINT "PULSE ENTER !"

410 ANS = INPUTS(1)


420 CLS
43O PRINT "RESULTADOS"

=,

44O PRINT
45O PRINT "T: tiempo, horas"
460 PRINT 'V: volumen del caldo, litros"
470 PRINT "X: concentracion de celulas, g/litro"
480 PRINT "S: concentracion de glicerol, g/ltro"
490 PRINT "MS: masa de sustrato, g"
500 PRINT "MX: masa de celulas,g
510 REM Numero de ecuaciones diferenciales:
520 N:5
53O REM condiciones iniciales: Ol :S;O(2):X; O(3): volumen
s40 0(1):s0
550 O(2):X0
560 0(3t:v0
570 0(4):V0*S0
58O

O(5):V0*X0

590 REM Subrutina de Runge-Kutta de orden 4:


600 T: INT(T2/T1 +.5):Tl =T2|T:T =INT(T3/T1 +,5):T3 :T*T1 :T=0:T4
610 T8= 1:GOTO 860
620 IF(T-T4 +T1t10)<0 THEN 660
630 T4:T4 +T3:T5 = INT(T/TI +.5):T=T5*T1 : GOSUB 960
640 |F(T-T2 +T1l1O)<0 THEN 660
650 LOCATE 23,1:END
660 0N T8 GOTO 680,720,760,800
670 PRINT"*" ERROR **":STOP
680 FORTS:1 TO N
690 TO(T5) :T1 *l(T5):T6ff5) =O(T5):O(T5) : Offs) +TO(T5)/2

:0

7OO NEXT T5

710

T:T +1112:T8:2:GOTO
T5:1 TO N

860

72O.FOR

730
740
750
760

\i

T7:T1 "l(T5):T0(T5l :T0(T5) +2*T7:OlT5) :T6(T5) +T712


NEXT T5

T8=3:GOTO 860
FOR T5=1 TO N
77OT7=T1*|(T5):T0(T5)=T0(T5)+2*T7:OIT5)=T6(T5)+T7
337

780 NEXT T5
790 TB :4:T:f +T1|2:GOTO 860
BOO FOR

T5:1 TO N

810 O(T5) =T6(T5) + {T0(T5} +T1 "l(T5))/6


820 NEXT T5
830 T8:1 :GOTO 860
840 REM ECUACIONES DIFERENCIALES:
850 REM l(1 ):RS; l(2):RX; l(3):F;l(41 :MS';l(5) =MX'
860 l(1 I =1l2lN
870 tl2l: u"o(2)
880 r(3) : F
890 U : (UMX*O(1 lli(Ks + O(1 ))
900 1(4) :O(3)*l(1 ) + 3*l(3)
910 l(51=O(3)*l(2)
920 0(1):O(4)/O(3)
930 0(2):O(s)/O(3)
940 GOTO 620
950 PRINT

:'

960PRlNTSpC(3); "T
;T;SPC(3); "V : ";O(3);SPC(3); "X = ";O(2);SpC(3);'S
";O (1 );SPC(31;"MS : ";O(41;SpC(3);"MX= ";O(5)

97O

NN:NN+1

980 RETURN

5.7.6

Reactor contnuo de mezcla completa con tecrculacin

Cuando se disminuye el tiempo de retencin en un reactor continuo de mezcta


completa (CSTR) aumenta la productividad celular hasta alcanzar un valor
mximo. sin embargo, sieltiempo de retencin disminuye ligeramente despus
de alcqnzar este valor mximo, la velocidad de generacin de clulas es inferior
a la velocidad de salida de clulas en el efluente del reacior y la prodr.rctividad
disminuye rpidamente debido al 'lavado" de las clulas del reactor.

338

5.14 Simulacin del crecimiento de Aerobacter cloacae en un reactor por


3 gramos/litro!,
totes con alimentacin continua (F : 160 litros/hora, so
=
Figura

'programa:

C:\GWBASIC\HERAERT2.BAS.

!1

Masa, gramos
, ---------------

Vol

..:

umen efec tlvo, I i tros

2000

600

000

500

.5

45

Tlempo, hors

Figura

5.15

Reactor continuo de mezcla completa con recirculacin

CSTR

Fltroclon tongenctol

339

Un procedimiento para aumentar la productividad es recircular las clulas


despus de separarlas del efluente mediante un filtro u otro sistema de
separacin (Figura 5.15). La vefocidad de crecimiento es proporcional a la
concentracin de clulas, x, y al aumentar x aumenta la productividad. Por
consiguiente, el reactor CSTR se puede operar en condiciones estables slo si
hay una recirculacin parcial y una corriente efluente, E, tal como se muestra
en la Figura 5.1 5.
En este caso, el balance de materiales del fermentador es:

F.r^ - E.x + V.1t.x = v-&

t5.76t

dr

Donde, F: afluente

al reactor, litros/hora; E: efluente del reactor; xo, x:

concentracin de clulas en el afluente y en el reactor, respectivamente, g/litro;


V: volumen de caldo en el reactor, litros; p: velocidad especfica de crecimiento

de clulas, (hora)-1; dx/dt: incremento de la concentracin de clulas en

el

reactor, g/(litro. hora).


En condiciones estables, dx/dt :
ecuacin anterior se convierte en:

0, y con alimentacin estril, xo : 6,

E =3=P ;l=

FD

!;,=#,i=,

ls.771

Donde, r: tiempo de retencin, horas; D: velocidad de dilucin, hora-1;


relacin de recirculacin. Si B : 1, no hay recirculacin y D : p.

B;

Sila velocidad de crecimiento sigue la cntica de Monod se obtiene la siguiente


ecuacin para evaluar la concentracin de sustrato despus de reemplazar P :
B.D en la ecuacin de Monod:

B.&
t.lt,o -

15.781
B

Esta ecuacin es vlida para r.p > B. La concentracin de clulas en el reactor


se calcula a partir del coeficiente de rendimiento Y*,.:

340

vtrls -

-s

| . = +.(s

- ")

t5.791

Figura 5.16 Simulacin del crecimiento de Aerobacter cloacae en un reactor


contnuo de mezcla completa (CSTR) con recirculacin (F : 160 litros/hora, so
= 3 gramos/litro), Efecto de la relacin de recirculacin B sobre la concentracin
de clulas y la productividad.

3,5

i,

(e=o,o); concdntraolon de celtas, gllltro

2,5
l::i

tili

1,5

tlvldad, g/(litroihora)
.-.:::__--___]]
vidad, g/(litr

46

Tlempo de retencion, horas

En la Figura 5.16.se presenta el efecto de la relacin de recirculacin sobre la


concentracin de clulas y la productividad en la smulacin del crecimiento de
Aerobpcter cloacae en u.n reactor contnuo de mezcla completa (CSTR) con
recirculacin (F : 160litros/hora, sc : 3 g/litro). En elcaso especial de B : 1,
no hay recirculacin de clulas yi ! = D = 1lr. La concentracin de clulas y

la productividad se duplican en el caso de B

O,5, lp

B.D

: Bltl.

341

5.7.7

Fermentadores en serie

Las siguientes conclusiones generales pueden deducirse de la confrontacin de


las Figuras 5.8, 5.10 y 5.1 1, para un slo fermentador:

- El reactor continuo de mezcla completa (CSTR) operado a una concentracin


de producto correspondiente a (1/r1.^.o. es el sistema ms productivo ya que
requiere el menor tiempo de residencia (Figura 5.1 1).

- Cuando hay necesidad de alcanzar una concentracin de producto

(clulas),
X, n el perfodo de crecimiento estaconario, se logra mayor productividad en

el fermentador por lotes (Figura 5.8) que en el sistema de reactor continuo de


mezcla completa (Figura 5.10).

- La seleccin del sistema ptimo de fermentacin depende de la forma de la


curva 1/r^ versus x y de los requerimientos del proceso, tales como el grado de
conversin deseado o la concentracin final del producto. Si la concentracin
final de producto es menor que la correspondiente a (1/rxl.in^o, es ms eficiente
un slo fermentador que dos conectados en sene.

- sin embargo, si la concentracin final de producto (xr) es mucho mayor que


la correspondiente a (1/rr),,n,-o, la mejor combinacin para rograr er mnimo
tiempo de retencin es un reactor contnuo de rirezcla completa (CSTR) operado

a una concentracin de producto, xpti.o, valor correspondiente a

(1/rx).rn.o,

seguido de un reactor de flujo tapn (PFR), (Figuras 5.17 y S.181.


- Aunque la Figura 5,18 ilustra el procedimiento de evaluacin deltempo total
de retencin del sistema de reactores csrR y pFR en serie, debe tenerse
presente que en el caso particular de la simulacin del crecimiento de Aerobacter cloacae, xF = xpti-o, y, por consiguiente, slo es necesario un reactor.

- De las Figuras 5.10 y 5.19 se deduce que un reactor continuo de mezcla


completa (CSTR) operado a una concentracin de producto correspondiente a
(1/r*).,^,.o seguido de otro reactor csrR conectado en serie (Figura s.1g) es un
sistema ms eficiente que un slo reactor CSTR {Figura S.10).

342

Figura

5.17 Representacin esquemtica

de dos fermentadores conectados en

serie: Reactor continuo de mezcla completa (CSTR) y reactor de fluio tapn


(PFR).

Xe
Se

Pe

CSTR

5.7.8

Rector de FtuJo topon

Columnas de burbujeo y reactores con crculacin lquida


inducida

En trminos generales los costos de obtencin de un producto y todos los


costos fijos y variables disminuyen al aurnentar la capacidad del reactor. Esta
tendencia requiere grandes biorreactores, diffciles de construir y manejar. .Se
presentan considerables problemas de construccin con los reactores agitados
mecnicamente de capacidad superior a 1000 m3, adems los requerimientos
de potencia resuhan muy elevados cuando el criterio de cambio de escala es
mantener la potencia por unidad de volumen constante. Este aspecto significa
elevados costos de energa y de agua de refrigeracin y problemas de remocin

de alor. Por otra parte se dificulta la distribucin uniforme de oxgeno, de


sustrato y otros nutrientes y el control de pH y de agentes antiespumantes.

343

Figura 5.18 Simulacin del crecimiento de Aerobacter cloacae, programal


C:\GWBASIC\HERBERTI.BAS. Tiempo total de retencin requerido por un
fermentador contnuo de mezcla completa (CSTR) y un reactor de flulo tapn
(PFR) conectados en serie.

to

1/Rx

0,6
Concentracion

1
de biomasa,

1,5
g,z/i

tro

Figura 5.19 Simulacin del crecimiento de Aerobacter cloacae, programa:


C:\GWBASIC\HERBERTI.BAS. Tiempo total de retencn requerido por dos
ferrhentadores continuos de mezcla completa (CSTR) conectados en serie.
7,/RX

1
t,6
0,6
Concentracion de blomhsa, 9,4/tro

344

5.20 Representacin esquemtica de algunos reactores de columna: Acolumna de burbujeo; B- columna de platos perforados; C- columna con
Figura

recrculacin; D- lecho empacado.


Co(unnq de
Jeo

ptotos

Are

rforodos

Colurno con

recnculqclon

Alre

Por consiguiente se han desarrollado nuevos tipos de reactores que ofrecen


ventajas tcnicas, econmcaS y, en algunos casos, biolgicas sobre el
fefmentador estndard de tanque agitado, Schgerl (19821. Elfermentador ms
sencillo es el fermentador de columna o de torre de burbujeO, formado por un
recipiente cilfdrico provisto de un sistema de aspersin de gas en el fondo
(Figura 5.201. Las burbujas de aire o de oxgeno a medida que ascienden
mezclan el contenido del reactor y satsfacen la demanda de oxgeno de las
clulas. Este tipo de ferrnentador slo tiene aplicacin en fermentacin aerbica.
La elevada demanda de aire de las clulas cuya velocidad de sedmentacin es

mayor que la velocidad de ascenso de las burbujas, concentradas en el fondo


de la columna, favorece la formacin de epuma y la retencin de burbujas,
fenmeno que disminuye la productivdad del reactor. Las condiciones de diseo
de los fermentadores de columna limitan su aplicacin a un estrecho intervalo
de,condiciones de operacin.

345

Figura 5.21 Representacin esquemtica de algunos reactores de columna: AReactor con circulacin lfquida inducida por aire; B- Columna de burbujeo de
seccin transversal variable; C- Reactor con circulacin lfquida inducida por

agitacin mecnica.

Reqcton 'or-ltFt'
Coturnq de burbuJeo
Clrculoclon lnducldq de seccton tronsversql

Atre

Chculocon nducdo

Atre

La columna de burbujeo de rea transversalvariable (Figura 5.21.bl.satisface la


necesidad de una mayor velocidad del aire en la porcin inferior de la columna
donde la concentracn de clulas es mayor. Las columnas de burbujeo con
placas perforadas (Figuras 5.20.b y 5.20.c) favorecen e
gas:llquido.

"ont""to una bomba


Adems, el contenido del reactor puede recircularse mediante
(Figuras 5.20,c y 5.20.d).

En la Figura 5.20.d se representa esquemticamente un reactor de lecho


empacado provisto de un circuito externo de bombeo. Las partlculas del lecho
sirven como soporte para inmovilizar las clulas. Adems, el fermentador puede
operar como reactor de lecho fluidizado si la velocidad ascendente del fluido
supera el valor de la velocidad mlnima de fluidizacin.
En el fermentador de circulacin llquida inducida por aire "airlift" el aire gue sale
del aspersor'y asciende por el tubo central origina una diferencia de densidad
entre la porcin de caldo saturado de burbujas dentro del tubo y la porcin de

346

5.2

Monod, 1958, presenta los datos anotados en la Tabla 5.18 sobre el


crecimiento de Escherichia Colien un cultivo por lotes con un medio qulmicamente definido, con lactosa como sustrato limitativo del crecimiento. La
concentracin inicial de biomasa: 15,5 (mg de biomasa seca)ilitro, corresponde
a la concentracin de biomasa despus del perodo de adaptacin o a la concentracin al comienzo de la fase exponencial.
Evaluar los parmetros cinticos:
y diferencial de anlisis de datos.

pr,

Ks

Yxvs, mediante

los mtodos integral

5.18 Datos delcrecimiento de Eschericha Colien un cultivo por lotes, en


un medio compuesto por lactosa como sustrato lmtatvo del crecimiento,
Tabla

Monod, 1958.
Tiempo, horas

15,

,54
0, 90

23 ,0

I,23
l-,58

l_, 95
2 ,33

2,70

#-5.3

Concentracin de
clulas, mg/litro
5

30,0
38,8
48 ,5
58,3
6t ,3
62 ,5

Concentracin de
lactosa, mg/litro

151,0
L23 ,0
105,0
75 ,0
43,s
74 ,5
3,5

0,s

Simular el crecimientode Escherichia Coli en un reactor por lotes, Utilizar

los parmetros cnticos l,ry, K. y Yru., obtenidos en el problema anterior.


Representar grficamente el tiempo de retencin.
Simular el crecimiento de Escherichia Coli en un reactor de flujo tapn.
Utilizar los parmetros cinticos /u, Ks y Yxr., obtenidos en el problema 5.2.
Representar grficamente el tiempo de retencin.

&5.4
5.5

Simular l crecimiento de Escherichia Coli en un reactcr por lotes operado


con un caudal constante de alimentacin continua. Utilizar los parmetros
cintcos /rvr, Ks y Yxrs, obtenidos en el problema 5.2.

348

5.11 Simular el crecimiento de un microorganismo en un reactor por lotes.


utilizar los datos del problema 5.1 0 y suponer un perfodo de adaptacin de 1 ,2
horas. Evaluar la variacin de la concentracin de clulas, sustrato y producto
en funcin del tempo.
IEcu. 5.25]

Donde, tL: perfodo de adaptacin.

5.12

simular el crecimiento de un microorganismo en un reactor por lotes.


utilizar los datos del problema 5.10 e incluir en el modelo el efecto de la
velocidad de muerte de los rhicroorganismos (ke = 9,921 (hora)-1). Evaluar la
variacin de la concentracin de clulas, sustrato y producto en funcin del
tiempo.

rx = (p

- kr).*

[Ecu. 5.27.b]

5.13 simular el crecimiento de un microorganismo en un reactor por lotes.


utilizar los datos del problema 5.10 e incluir en el modelo et efecto del

metabolismo endgeno de los microorganismos [m, = O,O3g (g sustrato).(g


clulas.hora)11. Evaluar la variacin de la concentracn de clulas, sustrato y
producto en funcin del tiempo.

rs=ms.x.(r*)

tEcu. 2.37I

5.14 simular

el crecimiento de un microorganismo en un reactor por lotes.


Utilizar los datos del problema 5.10 e incluir en el modelo el efecto de
inhibicin por sustrato [k," : 0,8 (g sustrato).(litro]-11. Evaluar la variacin de
concentracn de clulas, sustrato y producto en funcin del tiempo.
[r

Fa

t*&*1

ks

3s0

tEcu. 5.31I

la
la

5.15

Simular el crecimiento de un rnicroorganismo en un reactor pOr lotes.


Utilzar los datos lel problema.5.10 e incluir en el modelo el efecto de la
inhibicin por producto [kp : O,12lg productol/(litro)].
Evaluar la variacin de la concentracin de clulas, sustrato
funcin del tiempo,
Px = lr.

s
K,

Kn,

"-

K_

_l

y producto en
[Ecu. 5.37]

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r:

r
,d

.t

'

355

1\

CAPITULO 6

ESTERILIZACION

6.1 INTRODUGCION

La mayorfa de Ias fermentaciones industriales ocurren como cultivos puros con

cepas cuidadosamente seleccionadas. La presencia de microorganismos


extraos en el medio, o en cualquier parte del equipo, afecta el consumo de
nutrientes y disminuye el rendimiento y la productividad del proceso' Adems,
los productos de estos microorganismos pueden ser nocivos para la cepa
seleccionada y limitar su crecimiento, La esterilizacin destruye, inactiva o
remueve toda forma de vida microbiana, y produce en los microorganismos una

prdida irreversible de su capacidad de reproduccin en el ambiente considerado, pero no significa la inactivacin de las enzimas celulares y de las toxnas.

La esterilizacin se realiza mediante calentamiento {calor seco o hmedo), o


mediante filtracin en filtros de porcelana no vitrificada (filtro Chamberland), de
tierra de diatomceas (filtro Berkefeld o filtro Mandler), filtros de placas de
amianto utilizables una sola vez (filtro Seitz), filtros de steres de celulosa (Millipore), filtros de placas de vidrio sinterizado, etc. Los microorganismos presentes en un medio tambin pueden removerse mediante centrifugacin, agentes
qumicos, radiacin (ultravioleta y rayos X), y medios mecnicos (vibraciones
snicas y ultrasnicasl.
356

El vapor saturado seco es el medio ideal para esterilizacin por su elevado


contenido de calor por unidad de masa o de volumen, por ceder este calor a una
temperatura constante y controlable, y por ser de fcil produccin y distribucin.
El vapor saturado hmedo cede menos calor que el vapor saturado seco a la
misma temperatura y contiene gotas de agua en suspensin que pueden originar
problemas de contaminacin.

A nivel industrial el mtodo preferido de esterilizacin es el calentamiento


mediante vapor de agua en el mismo recipiente de fermentacin, o en un equipo
separado. En este caso el aire presente en el equipo debe ser cuidadosamente
purgado, La temperatura de una mezcla aire-vapor saturado no solo es menor
que la del vapor sino que disminuye con el contendo de aire en la mezcla. Por
consiguiente, si la esterilizacin se controla mediante la observacin de la
presin, la temperatura alcanzada puede ser inferior a la requerida por el
proceso. Otro aspecto importante originado por la presencia de aire en la
esterilizacin de equipo con vapor de agua es la diferencia de densidad. El aire
ms denso que el vapor fluye hacia el fondo del equipo originando gradientes de
temperatura. La aplicacin de calor seco mediante una llama o aire caliente,
utilizada en la esterilizacin de equipo y de material de vidrio, es menos efectiva
que el vapor de agua debido a la mayor resistencia de los microorganismos al
calor seco. El endurecimiento de la capa externa de las clulas, ocasionado por
la coagulacin de'las protenas que la conforman dificulta la tranferencia de
calor.

6.2 CINETICA DE LA DESTRUCCION

DE MICROORGANISMOS

MEDIANTE CALOR HUMEDO

Generalmente la activacin del crecimiento y de la reproduccin de esporas


puede representarse mediante una curva similar a la curva A de la Figura 6.1,
donde el nmero inicial aumenta rpidamente hasta llegar a un mximo y luego
disminuir aceleradamente. Ocasonalmente la velocidad de activacin por calor
al comienzo del tratamiento puede ser igual (curva B, Figura 6.11o inferior
(curva C, Figura 6.1) a la velocidad de muerte.

357

Figura

'

6.1 Representacin esquemtica de la variacin

- por la ccin del calo r. Richards,

- I - -r
esporas

10

de la poblacin inicialde
ji
1

968..

N,lNoti,.,..:

o,

o,ol
l,OOOE-03

t,oooE-04

|,oooE-05
t,oooE-06
t,oooE-o7

20

'

30

40
50
Tlempo

60.
i

'

70

80

La Figura 6.2 muestra la curva de supervivencia de una pobpci n de Escherichia


coliala accin del calor. En la Figura 6.3 se represetan las curvas desupervivencia o de velocidad destruccin trmica de esporas de B. stearothermophitus.

El nmero ly' de microorganismos an viables despus de un tiempo


rilizacin a ternperatura f constante, es: 1*.
.,.

#=-*"'*
.rv
tn_=
No

Vlida para

T=

- Ko't

'

f de qstet6.11

t6.21

constante.

Donde, Kr: constante de velocidad de muerte trmica en s-1, o en (minuto) 1,


valor de la pendiente de la curva de supervivencia; No: nmero de microorganismos viables en el tiempo t : 0.

358

Figura

6.2

Velocidad de muerte delEsc/rerichia calia diferentes temperaturas,

Aiba et al. 1973.


N/NO
1

o,

1.

o,o

l,OOOE-03

t,oooE-04
l,OOOE-06

6.2.1

Energa de activacin y coefcente de Arhenus

La ecuacin de Arrhenius generalmente describe el efecto de la temperatura T

sobre la constante de velocidad de muerte trmica

Ku:

16.31

t6.41

Donde: Ko: Constante de vetocidad de muerte trmica, s-l; Koo:'Coeficiente de


Arrhenius, s-l; Er: Energla de activacin requerida para llevar las molculas a un
estado de energa en el cual pueden reaccionar, J/(mol); T: Temperatura absoluta, oK; R: Constante de los gases, R : 8,314 J.(mol.K)-1.
359

El valor de la constante de velocidad de muerte


trmca, Kr, a una temperatura
dada es el varor de ra pendiente de ra curva de supervivenciJ

{r;guras 6.2 y 6.3}.


Asf, por ejempro, si los varores de Ko der g. stearothermophirus,
obtendos a
partir de ra Figura 6.3, son representados
en ra Figura 6.4 como rn Ko versus
1ff , se obtiene ra energa de activacin Eo del B.
stearothermophirusa partr de

la pendiente,

EDIR, de esta tfnea:

pcttdictttc

u(
=

ED =

2
= 34456,6'tr'

--Eo

(A4fi,6).(8,314) = 2EO4t2 J

gtol

Figura 6'3 Velocidad de muerte de esporas


de B. stearothermophitus FS 7gs4
en agua destilada a diferentes temperaturas, Aiba
et al., 1g73.

N/No

360

Si se reemplazan en la Ecuacin 6.3 los valores de Eo/R, Ko y su correspondiente


ternperatura T, se obtiene el coeficiente de Arrhenius Koo del Bacillus stearothermophilus. La esterlzacin por lotes tiene la ventaja de ser un proceso sencillo

con algunos inconvenientes tales como la destruccin de muchas vitaminas y


la desnaturalizacin de protelnas por el calentamiento a altas temperaturas'
La destruccin de estds componentes sigue frecuentemente la misma cintica

de muerte de los microorganismos. Adems, de acuerdo con la Tabla 1, las


energlas de activacin de estas reacciones laterales indeseables son tpicamente
menores que las requeridas para esterilizacin.
Con el propsito de prevenir las reacciones indeseables el proceso de,esterilizacin debe operar a la mxima temperatura factible durante el mnimo tiempo

requerido para destruir los microorganismos. Los prolongados perlodos de


calentamiento y enfriamiento de la esterilizacin por lotes impiden el logro de
estos obietivos, Jacobs et al,, 1973.

6.4

Determnacin de la energa de'activacin Eo Y del coeficiente de


Arrhenius Koo de las esporas de Bacllus stearothermophilus FS 7954, Aiba e

Figura

al., 1973.
10

Velocldad de muerte, Kd, l/(mnuto)


l--:.*........-....
____\!

-.

-.

-............

- -

-.. -. - :
i

---

-'.

-.. -..
---.-...-........-'-'+.-........-1'..-

- -

---

1- - -

t.

i.+..,-..

i-

.-.+....-.-'---.....-.."....

-. -... ----... -'-..-

o1

o,o

2,54

2,56

2,58

2,6

2,62

2,64

2,66

(7OOO/T) = (|OOO)/(T, grados Kelvin)

361

Tabla

6.1

Valores aproximados de la energa de activacin de algunas


,reacciones, Bailey y Ollis, 1986.
Energla de activacin

cal/gmol
Acido flico
Alcohol d-pgntot.enil

Destruccin de vit.amina

Hidrocforuro de t.iamina
Ciancobalamina

B,

Destruccin de ribofl-avina
Desnat.uralizacin de peroxidasa
- Pardeado o reaccin de Maillard
entrerproterias y carbohidratos :
Bacilfus stearothermophi)us
Anaerobio putr,efactivo NCE 3679
eabi-Z-Lus

subtiTis

CTostridium botulinum

J/gmol

16800
21000
21000

22000
23100

92092
96697

23600
23500

987 90
987 90

31200

130603
283392
303066

677 00

72400
76000
82000

0325

87 906
87 906

1813 6

343252

En la Tabla 6.2 se presenta el efecto de la temperatura y del tiempo de


esterilizacin sobre la destruccin de tamna por la esterilizacin de un caldo
hasta un nivel constante de la relacin entre esporas de B. stearothermophilus,
viables al final del proceso e inicialmente viables, N/No : 10-16, Humphrey,
1989, Mulley et al., 1975, estudiaron la cintica de degradacin de tiamina por
accin del calor.

6.2.2 Reduccin fracciona! de la poblacin de microorgansmos

Eltiempo requerido para la reduccin fraccional de la poblacin de microorganismos a cualquier temperatura deseada se calcula a partir de las ecuaciones [6.2]

y t6.31:

Y=ln

362

No

lV

= Ko.t = Ko,.r.exP

t6.5I

v
La eneiga de activacin, Ep, y el coeficiente de Arrhenius, Kpo, caracterizan la
destruccin de un microorganismo dado bajo las condiciones del ensayo.

Hasta ahora se ha considerado la muerte trmica de una sola especie de


microorganismos. En la prctica la poblacin est mezclada, aunque una o dos
especies generalmente predominan. En la Figura 6.5 se representa el tratamiento
con calor de'un cultivo mezclado en el cual la especie menos resistente A, de
menor energa de activacin, es la ms abundante inicialmente, No : 1000
microorganismos. La especie B ms resistente al calor es la menos abundante
inicialmente, No : 100 microorganismos. La curva C de la Figura 6,5, que
representa la disminucin total de microorganismos de ambas especies, es la
suma de microorganismos an viables de cada especie en un momento f dado.
En la prctica curvas similares a C indican una poblacin mezclada.

Tabla 6.2 Efecto de la temperatura sobre la destruccin de tiamina por la


esterilizacin hasta un nivel constante de la relacin entre esporas de Bacillus
stearothermophilus viables despus de un tiempo t e inicialmente viables, N/No
: 10-16, Humphrey, 1989.
Temperatura de
esterilizacin

oc

Tiempo en minutos
requerido para
alcanzar una
relacin N/No

100
110

t20
130
140
150

Prdida de tiamina
o/o

10-16,

843
75

7,6
0,8s1
0,107
0, 015

99
89

,99

27
10
3
1

La Figura 6.6 enfatiza elhecho de que una llnea recta no siempre indica una sola
especie de microorganismos. En este caso la especie B, ms resistente al calor,

es la ms abundante inicialmente, No : 900 microorganismos. La lnea C


obtenida al sumar sobrevivientes de A y B en cada tempo r es prcticamente
recta y no indica una poblacin mezclada.

36s

Figura6.5 .Representacin esquemtica delefecto de la esterilizacin por calor


sobre un cultivo." rnezclado. l-a poblacin inicial menos resistente es la ms
abundante. Richards, 1968.

Numero de obrevi vien

16

Figura

6.6

tooo

te;s

20 26. 30
fiemBo, minutos

40

35

45

Representacn esquemtica del efecto de la esterilizacin por calor


de r.m cultivo mezclado: Richards, 1968

Numero de sobrevi vientes

100

10

o510

364

50

20
25
Tlempo, minutos

15

30

35

El factor Del, definido en la Ecuacin [6.5], constituye una metodologa


apropiada para casi todos los propsitos de la esterilizacin por calor con
temperatura variable. Si, por ejemplo, se desea esterilizar 10000 litros de un
caldo de fermentador con una poblacin inicial de 10O0 esporas/ml, el nmero
inicial de esporas es No : (104 litros),(103 esporas/mll.(103 ml/(litro) : 1010
esporas, y si se acepta que el nmero final de esporas viables es N : 0,00O1 ,
entonces:

v = tn

\ = , 10'o' = ln 101a = 32,236


N
10-4

t6.61

Este valor corresponde a la reduccin fraccional de microorganismos en el


proceso de esterilizacin:

Y total =Y calent- + V sosf. + Y et{riam.

t6.71

EI valor de la reduccin fraccional de microorganismos durante el perodo de


sostenmiento a temperatura constante se calcula a partir de la ecuacin:

Y sos@nimiento = Ko.ts

16.81

Donde, t.: Perodo de sostenimiento en minutos; Ko: constante de velocdad de


muerte trmica evaluada a Ts, s-1, o en (minuto)-1; Ts: temperatura de soste-

nimiento, oC.
El diseo de los ciclos de esterilizacin se fundamenta en los valores de la
energla de activacin, Ep, y del coeficiente de Arrhenius, Koo, del microorganismo formador de esporas ms resistentes probablemente presente en el medio.
En la pictica este mtodo es muy adecuado para eliminar microorganismos muy
resstentes tales como el B. stearothermophitus s el Clostridiurn botulinum. La
inaitivacin dg esporas depende de la naturaleza del medio en el cual se
calientan. En general, no solo hay que esterilizar un lquido sino preservar
smultneamente su valor nutritivo como ocurre con los caldos de fermentacin,
Chopra et al., 1981.
365

La Figura 6.7 representa una curva tfpca de variacin de Ia temperatura T con

t para el caldo de un fermentador. La reduccin fraccional de


microorganismos durante los perlodos de calentamiento y enfriaminto son
obtenidos mediante integracin de la Ecuacin [6.5]:
el tiempo

Y=Koni*(

?).

t6.9t

Generalmente los sistemas de esterilizacin por lotes incluyen por lo menos una
de las siguientes fuentes de calor: burbujeo de vapor vivo a travs del medio,
calefaccin elctrica y calentamiento o enfriamiento con un intercambiador.

Figura 6.7 Curva tpica'de variacin de la temperatura T con el tiempo


el caldo de un fermentador.

t40

Temperatura,

para

C,

120

too

Calentamlen

i,riaml'ento

ao
60
40

20
o

40

80

100 120 140


Tiempo, mnutos

160

200 220 240

Deindoerfer y Humphrey, (1959), asociaron para cada sistema de transferencia


de calor un perfil particular temperatura-tiempo. Estas funciones se presentan
en la Tabla 6.4. La,integralde la ecuacin t6.91se eval'mediante segmentacin en tres intervalos: calentamiento, sostenimiento y enfriamiento. En la Tabla
6.3 se presentan cuatro soluciones de la integral, una para condiciones estable
(temperatura constante) y tres para condiciones inestables (distribucin hiperblica, lineal y exponencial).

366

Dotde: , =

R.T,
"
Contina

367

Tblar

6.3 Continuacin

Lineal creciente:

Dottdc:_____
c=

Donde

En

es la integral

ED

R'To

exponencial:

,.,0=|(+)

tG

l4l

Donde: n = nmero de microorganismos. Los sublndices "o" y "F" indican


condiciones iniciales y finales respectvamente; ED: energla de activacin; Koo:
coeficiente de Arrhenius.

Tabla

6.4

Variacin de la temperatura con el tiempo de esterilizacin por lotes,


Deindoerfer y Humphrey, 1959.

- Burbujeo de vapor,

(hiperblical:
,
T=Tol1 *; o.t\
1 I *b.t)

t6.151

o=J!-;
=*
M.CP.T,' M'
- Calefaccin elctrica, (lineal):

T=7.11
o \ +a.d

a=

M.cp-To

16.16I

Continria

368

Tabla 6.4 Continuacin


- lntercambiador de calor con vapor de agua como fluido caliente, (exponencial);
T = Tc .(1

* b.e-o")

U.A

To-7"

M.C,

Tc

a=-'.o=

16.171

- lntercambiador de calor con un refrigerante como fluido frio, (exponenciall:


T=

Tr

(1 + b.e-"'); b

To
=

Tr^

t6.18I

TF'

Do,t&;a=#[, "*( #*r)

Don, h: Diferencia de entalpla entre la correspondiente al vapor de agua a la


temperatura del dstribuidor y la temperatura del medo, J/kg; S: Velocidad de
flujo msico del vapor, kg/s; M: Masa inicial del medio, kg; To: Temperatura
inicial del medio, oC; Q: Velocidad de transferencia de calor, J/s;' U: Coeficiente
global de transferencia de calor; J/(m2.s.oC); A: Area de transferencia de calor,
m2; Tr: Temperatura de la fuente de calor; w: Velocidad de fluio msico del
oC; Cr: Calor
refrigerante, kg/s; Tro: Temperatura de entrada del refrigerante,
oC).
especlfico del refrigerante, J/(kg. oC); C": Calor especffico del medio, J/(kg.

6.3

ESTERILIZACION FOR LOTES

La concentracin de microorganismos sobrevivientes a una esterilizacin por


lotes se calcula mediante la Ecuacin t6.91 y las Tabtas 6.3 y 6.4' Otro enfoque
del problema es la integracin grfica.

369

6.3.1

Seleccin del microorganismo de diseo

Es improbable que en un fermentador la naturaleza del medio y el nmero y


clase de microorganismos presentes puedan permanecer constantes de un lote

a otro. La poca del ao, la naturaleza y la fuente de las materias

primas

empleadas cambian la poblacin y los requerimientos de la esterilizacin.


Lo apropiado, entonces, es seleccionar un microorganismo formador de esporas
resistentes al calor y disear el ciclo de esterilizacin sobre esta base. Deindoer-

fer y Humphrey, (1959), sugieren la utilizacin del Bacillus stearothermophilus


como el organismo de diseo, La experiencia indica que este mecanismo es
apropiado para el diseo de la esterilizacin de caldos de fermentacin.
La concentracin total de microorganismos presentes en el medio se determina

a partr de la incubacin de muestras del caldo del fermentador, sin distinguir


entre las diferentes especies, Esta cifra de la poblacin bacterial total se utiliza
en el diseo del ciclo de esterilizacin como si todos los organismos fueran 8.
stearothermophilus. Aunque este fenmeno conduce a un sobrediseo, el
problema no es serio a menos que el medio sea partcuarmente sensible al calor.

6.3.2

Diseo de ciclos de esterilizacan

Generalmente el perodo de incremento rpido en el valor de la reduccin fraccional de microorganismos est limtado al punto de esterilizacin que ocurre
alrededor de 100 oC y se comete un error muy pequeo al considerar lineales
las curvas de calentamiento y enfriamiento alrededor de 100 oC. Adems, se
pueden despreciar las secciones de estas curvas por debajo de 1 00 oC, ya que
la esterilizacin por debaio de esta temperatura no es apreciable. Si se tienen en
cuenta estas aproximaciones y se supone una velocidad de calentamiento de

l oCl(minuto), pueden calcularse los valores de la reduccin fraccional de

microorganismos obtenidos despus de alcanzar cada temperatura a esta veloci-

dad. Adems, se supone que el valor obtenido para la reduccin fraccional


microorganismos cuando se alcanza una temperatura de 100 oC es cero.
370

de

6.5 presenta los valores, calculados a partr de las ecuaciones t6.31 v


[6.5], de la velocidad de destruccin y de la reduccin fraccional de B. stea-

La Tabla

rothermophrTus, durante el calentamiento o enfriamiento a razn de

Ko

= Kna.exe(

#)

Y=tn*=",,

oC/minuto:

lEcu. 6.31

IEcu. 6.5I

Donde, Kpo : (9,509).(1O3i' (minutos)'r :; E : 283392 J/gmo!, (Tabla 6.1!.: B.


stearothermophilus; R = 8,314 J.(gmol.K)'1: constante de los gases.

Ejemplo

6.1

Determinacin del perodo de sostenimiento en una


fermentacin por lotes

Los perfodos de calentamiento y enfriamiento en un fermentador por lotes de


60.000 litros de capacidad son:

- Calentamiento de 100 hasta 121 oC en 26 mnutos.


- Enfriamiento desde 121 hasta 10O oC en 18 minutos.
- Tres muestras sin esterilizar, tomadas de diferentes lotes de materia prima,
dieron los siguientes recuentos bacteriales: 6.106; 1 ,1 .107 y 3.106/ml.
Calcular el valor del perfodo de sostenimento a 121 oC, si el calentamiento y
el enfriamiento son realizados a razn de 1oC/minuto.
Solucin:

- En este caso se utilizan 1,1.107 (microorganismos)/ml como base del diseo


del ciclo de esterilizacin.
Contina
371

Velocidad de destruccin y reduceiil'fraccional de Bacillus,,stearothetrnophrfus durante'el,calentamiento o enfriamionto a razn de 1-oC/minuto.

'fabh.6.5.
:r;

Toc

kr.t:

Ko minuto-l

acumulado
r_

101
1-02

103

L04

109
1r,0
11

tt2
113
+L4

9.r

18

L,3'?3

tL9

L,715

1,20
].2.L,

722
L23

t24
L25
L26

t27
L28
129
130

i3i2

1"25ii-l-'

:I.ti 1,611

3,313
4,
-

2 ,1,40

, 3,,319,

,126

5,359' '
7, gg0

9,755
L2 ,054
L4 ,903
18,391

6
8

: 2,666,.
4

""

2,055
2 ,613

!s8

1-L7
r_

'

,444

0,700
0,877
1,099

1L5
116

0, 07
0, 110
0,139
Q,L75
' 0,222
o ,'i8 o
0, 353

108

,079
,12L
0,175
0,244
0,331
0,44L
0,580
0,756
0 ,979.
0

0, 059

105
106
107

t-

-----0 ,046

0,o20,
0 ,026
0, 033
0 ,042
0, 054

00

'

l_90

',2,-1,8

,66a
,376

10, 516
13,182
.16,501
20 ,627

25,752
32,lLL
,99]49,746
61, 810
76,71,3
95, 1'04'

39

" 'i

:i

Continuacin (Ejemplo 6.1):

- Nmero iniciar de microorganismos


viabres por lote:
iv" = 60oo0 tinos.t

6,6.t01{

ffi.fi,t.,,0r

orgaaisnos

- se supone

que el nmero aceptable de organismos


sobrevivientes al
tratamento calorfico es 0,O0Ol organismos/lote.

v totat=rn

*=ln

ffi

=4t,st

- El valor de reduccin fraccionar de microorganismos


en ra etapa de carenta_
miento segn la Tabla 6.S, es:
Y calenamicno = 1g,tg2
Este varor de ra reduccin fraccionar
de microorganismos corresponde a
catenta_
mrento aazn de 1 oCl(minuto), o
sea, en 2l mnutor. Slg,jn las condiciones
del problema el calentamiento ocurre
et 26 mnutos:

cohttarnicro = (lg,1gzr.#
= 16,32

- Anlogamente para la etapa


de enfriamiento:
Y enfrianbno = (tg,tSa.# 11,00
=

El varor de ra reduccin fraccionar de


microorganismos en ra etapa de
sostenimiento es:

y sosunimicno
=v total _y catcn. _y crfriam.
Vsosr. = /rc,33 _ 16,92 _ 11,90 ko.t
=
Donde er varor de Ko se evara a ra
temperatura de sostenimiento de 121 0c.

373

Segn la Tabla 6.5, KD


sostenimiento es:

2,666 (minuto)-1, por tanto

vl*'=91

,=

Ejemplo

6.2

KD

2'666

=5,89

ef

valor del perodo de

minutos

Determipa,cin de la influencia del perodo de


calentamie.nto sohre el perodo, de sostenimiento

Suponer que durante la etapa de calentamiento se presenta una falla en el


control de tmperatura dl ferrentador del ejemplo anterior. La tempratura
aumenta normalmente desde 100 hasta 112 oC,"permanece constante durante
14 minutos y luego sube hasta 121 oC.
el valor del perodo de sosteni-

agl+tgl

miento.
Solucin

Ko

a 112 oC (Tabla 6.5): 0,353 (minuto)-1

Ko

a 121 oC (Tabla 6,5): 2,666 (minto)-1

v = rl

.\

= Kz.tz = (0,353).(1a) = (2,666).r,

'z

':

= 1,85 mitutos
l

Portanto 14 minutos a112 oC equivalen a 1,85 minutos a121 oC yelperodo


de sostenimiento se puede disminuir hasta:
Perodo de sostenimiento

374

5,89 - 1,85

4,04 minutos.

Ejemplo

6.3

Determinacin de la influencia del volumen del caldo


sobre el perodo de sostenimiento

Suponer ahora que por ampliacin de la planta se desea construir un fermentador similar al del Ejemplo 6.1 pero de 180.00O litros de capacidad. Los ciclos
de calentminto y enfriamiento sern realizados en 30 minutos y 24 minutos
respectivamente. Calcular el valor del perodo de sostenimiento a 121 oC.

El nuevo fermentador cn una capacidad tres veces mayor tendr una


6.1: No : 6,6.1014.3 : 1,98.1015

poblacin igual a tres veces la del ejemplo


organrsmos.
Y tout=

r,

1'99'1^o-.tt
0,0001

= 44,43

Por consiguiente:

Y calent. =13,182.

Y nfr. = (13,182)

V sosf. = 44,43

l=

6.4

18,83

30
21

= 18,83

.ff = t,oo
15,06 = 10,54

K.t

10,54
= 3,95 minutos
2,666

ESTERILIZACION CONTINUA

Los prolongados perodos de calentamiento y enfriamiento caractersticos de la


esterilizacin por lotes producen la destruccin de vitaminas y la desnaturalizacin de las protenas y otros componentes del medio. Las energas de acti375

vacin de estas reacc.iones laterales indeseables (Tabta 6,'l ) son menores que
las requeridas por la reaccin de esterilizacin. Con el propsito de prevenir la
alteracin de los componentes susceptibles del medio, el proceso de esterilizacin debe realizarse a la mayor temperatura posible durante el menor tiempo,
ffeifer y Vojnovich, (1952); Jacobs et al., 1923.

-La esterilizacin continua satisface estos requisitos adems de proveer


condiciones l:eproducibles y facilitar la recuperacin del calor del medio esterilizado, Lin, 1975. El sistema de esterilizacin continua a alta temperatura y
tiempos muy cortos es fundamental en la industria de alimentos donde el sabor
y otras caractersticas del producto pueden ser afectados por pequeos cambios
de temperatura durante el proceso.
La esterilizacin continua por calentamiento indirecto se realiza usualmente en
un intercambiador de placas o en uno de coraza y tubos, pero debe tenerse
presente que los slidos suspendidos en el caldo de fermentacin pueden
producir ncrustacones sobre la superficie de transferencia de calor. Las

condiciones de un proceso de esterilizacin continua de alimentos con partculas


slidas en suspensin fueron analizadas por de Ruyter y Brunet, 1973.

6.4.1 Esterilizacin mediante calentamento directo por nyeccn


de vapor

En la Figura 6.8 se muestra esquemticamente uno de los sistemas

de

esterilizacin continua por calentamiento directo, mediante inyeccin de vapor

de agua al medio, seguida del paso del fluido caliente por la seccin de
sostenimiento y su posterior enfriamiento instantneo con la ayuda de una
vlvula de expansin. El sistema de esterilizacin por inyeccin de vapor puede
agregar exceso de agua al medio y favorecer la formacin de espuma.
En el sistema de esterilizacin continua, mediante inyeccin de vapor de agua
(Figura 6,8), el medio caliente fluye en condiciones adiabticas por la seccin
de sostenimiento diseada como un tubo largo, Pick, 1982. El tiempo promedio

de residencia en sta seccin es;

376

tr=

t5.191

uM

Donde, ts: tempo de sostenimiento, s; L: longitud del tubo,


media del caldo, m/s.

fili

urvr:

velocidad

Si la prdida de calor en la seccn de sostenimiento es despreciable puede


suponerse temperatufa constante y la reduccin fraccional de microorganismos
se calcula a panr de la ecuacin:

Vs=ln&

=Ko.t"
16.20

vs

= K,o.eXp

( ,%) -

Donde, No: nmero de microorganismos viables a la entrada de la seccin de


sostenimiento; N: microorganismos viables a la salida; Kr: velocidad especffica
de muerte, s-1; Koo: coeficiente de la ecuacin de Arrhenius, s'l; Eo: energa de
activacn para la destruccin de clulas por accin del calor, J/gmol; T.:
temperatura en la seccin de sostenimiento, K.

si e! medio en la seccin de sostenimiento se comporta como flujo tapn ideal,


el tiempo de residencia es el mismo para todo el medio y la esterilizacin es uniforme, En el caso de flujo de fluidos newtonianos dentro de tuberas lisas de
seccin transversal constante, la relacin entre la velocidad meda y la velocidad
mxima del fludo es 0,5 cuando el fluido es laminar. Esta relacin aumenta
hasta 0,75 cuando elflujo se vuelve turbulento, y alcanza el valor de 0,87 para
flujo con nmero de Reynolds mayor que'106 (McCabe, et al. 19g1), por

consiguiente, s se utiliza la velocidad media del flido en Ia Ecuacin [6.19]


para calcular el tiempo de sostenimiento, una porcin del fluido puede quedar
sin esterilizar y originar serios problemas de contaminacin.
Levenspiel, 1972, utiliza un modelo de dispersin para explicar las desviaciones
delflujo tapn ideal ocasionadas por la mezcla axial. El balance de microorganismos suspendidos en el caldo de fermentacin, en la seccin de sostenimiento,
en condiciones estables, es:

377

organismos =
eliminados

organismos
que entfan

or9anrsmos
que salen

t6.211

La diferencia entre el nmero de microorganismos que entran y los que salen por

flujo volumtrico es:


t6.221

Donde, ur: velocidad media del caldo de fermentacin en la seccin de


sostenimiento, m/s; n: concentrac-in de microorganismos en el caldo, (nmero
de microorganismos)/m3; S: rea'transversal deltubo, m2; x: direccin del flujo
de microorganismos, m.

Figura

6.8

Representacin esquemtica de un sistema de esterilizacin continua


mediante calentamiento directo por inyeccin de vapor de agua al medio.'

Voco

Volvulo
de

exponsioi
Seccon

de sostennento
Enfrodor
Instonto
Itedo

sterl

378

La diferencia entre el nmero de microorganismos que entran y los que salen por
dispersin axial es:
- D. s.

!(

-[ - o.s.4.
dxL
b dr\- r. s.4\,]
dx)

t6.23I

Donde, D: goeficiente de dispersin axial, m2ls. D : 0 significa que la


distribucin de vlocidades se aproxima a la de flu'jo tapn ideal. D --) o
significa que el fluido dentro de la tuberla est perfectamente mezclado.
En la Figura 6.9 se presenta !a correlacin entre el grupo adimensional D/(u.d)

y el nmero de Reynolds en la tubera de sostenimiento, Si el nmero

de

microorganismos eliminados por esterilizacin es Ko.n, la ecuacin final de


balance de microorganismos se obtiene a partir de las Ecuaciones t6.201 y
t6.23t:

4b.*)-+")
e\ tu) &

-Ko.n=o

16.241

Donde, Kr: velocidad especifica de muerte, s-1; n: concentracin de microorganismos, (nmero de microorganismos)/m3.
Wehner y Wilhelm, 1956, presentan la siguiente ecuacin como solucin a la
Ecuacin f6.241:

"=(,

DAM =

K^.L
_zuM

[6.25]

= Nmero dc Dm,hlr

379

Pr=

ryl

= Nnrero de Peclt

Figura 6.9 Relacin entre el coeficiente de dspersin, expresado en el grupo


adimensional (D/u".d), v pl nmero de Reynolds, Levenspiel, 1958.

D/(u,d)
1Q

\I:

\!
i\

\.i
)'-"'

o,

100000

10000

1000

100000

Reynolds

En la Figura 6.10, representacin grfica de la Ecuacin [6:25], se expresa la


fraccin de microorganismos viables despus del perodo de sostenimiento en
funcin del nmero de Damkhler para diferentes valores del nmero de Peclet.

Ejemplo

6.4

Esterilizacin continua medante inyeccin de vapor

Se utiliza un sistema de esterilizacin mediante calentamiento directo por


inyeccin de vapor de agua, seguido de un enfriamiento instantneo (Figura
6.8), para esterilizar 0,41 kg/s de caldo de un fermentador. Los recuentos
380

bacteriales de tres muestras de caldo sin esterilizar dieron los siguientes


resultados: 6,8.108; 1,7 1Oe y 3,4.108/ml.

Se requiere reducir la posibilidad de contaminacin de manera que un solo


microorganismo pueda sobrevivir despus de cuatro meses de operacin
continua. Disear la esterilizacin sobre la base de que todas las esporas
bacteriales resistentes a la accin del calor corresponden al B. stearothermophi
/us (Ke" = 1,585.1036.s-1; Eo : 283,46 kJ/{gmol).
La seccin de sostenimento del esterilizador es una tubera de acero de

3,068

pulgadas de dimetro interior, En la planta se dispone de suficiente vapor de


agua saturado a una presin de 6 atmsferas con el propsito de calentar el
caldo hasta una temperatura de sostenimento de 128 oC. Las propiedades del
caldo a esta temperatura son: densidadz p: 1000 kg/m3; viscosidad: 1,23.1O'3
kg.(m.s)-l; calor especlfico:4,187 J.(g.oC)-1. Calcular la longitud de la tubera
de sostenimiento.

Figura 6.10 Fraccin de microorganismos viables despus del perlodo de.


sostenimiento en funcin del nmero de Damkhler para diferentes valores del
nmero de Peclet, Aiba et al, 1973,
1,OOOE- 1 1

N/No

l,OOOE- t 2

t,oooE- t 3
t,oooE-

14

l,OOOE- 15
l,OOOE- 16
l,OOOE- 1 7
l,OOOE- 1A
l,OOOE- 19

20 30 40 50 60 70 80 90 100 110 120 100

140

(Kd,L)/u

381

Solucin

,,

"

1. Longitud de la tubera si el medio fluye en fujo tapn ideal


,

0,41

'

!'

'

&=rCrOO4.O
-,i

mo

Q =O,4L 1O-3 !t3 = 1,410 ,43

lpra

- Microorganism s viables
no=1,7.toezr-3.

no=1,226.1012
_,i

"

t.+tefi.z+

ffln

t= ?,,,h*=

1,384.10-rg

- Criterio de diseo

'nl, = tn

lt

- tn7'2N'10t'

= 29.61

- Velocidad especffica de muerte, (Ecuacin 16.31):

Kr= 1,51,.10s's----1.

- Perfodo de sostenimiento

382

au

- Dimetro de la tuberfa
(3,068).

(0,02il)

= 0,oT79 m

- Velocidad del medio

o,41

& ='*o

m?:u*

i(0,07le)2

ua =0,@6 mls
- Longitud de la seccin de sostenimiento:

u*.t"= 0,096 4.1tS7rSs = IO,SS m

2. Longitud de tuberfa si se considera el efecto de la dispersin axiali


(0'0779)'(0'086)-'(f000)
- Rcvnlds: R,=
='ffi
'

'

1,23. 10-3

- De la Figura 6.9:
D

;n"

Pra

RE = 5i446

- Por consiguiente elcoeficiente de dispersbn,


D

'

es:

'

1.(0,086).(0,0779) = 6,7.10-3 m2ls

- Nmero de Peclet
Para el primer estmativo se supone una longiilO de la seccin "

to:L:14m.

'

*","nimien-

P=+=W=.os.l

383

- Nmero de Damkhler
0,188s-1-14rn
D,,,=Ko'L
=30.6
M uM - 0,086
m/s

- Fraccin de microorganismos viables


El

valorde n/n. correspondiente a P,

179,7 V Drrur

30,6, en la Figura 6.10,

es:

L . 3.10-12 > 1,384.10-13


no

Como la fraccin de microorganismos viables es mayor que la fraccin

r"Or"r,d.

por el proceso de esterilizacin, se supone para un segundo estimatvo una

longitudL:16m:
Pz=2o5,4 i.

Dut=

y de la Figura 6.3:

n
no

=8.10-14 < I,gB4.lo-rg

Por consiguiente, Ia tubera de sostenimiento debe tener una longitud de 16 m.

Este valor es 2,5 m mayor que el calculado en el punto anterior, donde se


desprecia el efecto de la dispersin axial y se supone flujo tapn ideal.

6.5

ESTERILIZACION DE AIRE

En el aire existen microorganismos iables generalmente asociados con partlculas ms grandes como polvo o polen. Las diminutas gotas que salen deltracto
respiratorio al toser, o an al conversar, son transportadores muy efectivos de
microorganismos patgenos.

384

Segn Aiba et al., 1973, las bacterias y esporas detectadas con mayor frecuencia en elaire son:. Aerobacter aerogenes, Bacillus cereus, Bacillus licheniformis,
Bacittus megaterium, Bacitlus mycoides, Bacillus subtilis, Micrcoccus aureus,
Proteus vulgaris, y las esporas de: 8. megaterium, B. mycoides y B.subtilis. El
tamao de estos microorganismos vara desde O,5 - 2,1 pm de anchura, hasta

0,5 - 26 pm de longitud.

6.5.1

Condiciones del are requerdo por la industria bioqumica

El nmero de colonias detectadas por unidad de volumen de aire muestreado


vara de acuerdo con el stio y la actividad, desde aproximadamente 70 colonias/m3 a nivel del piso, hasta 12000 colonias/m3 en una fabrica. A falta de

informacin precisa un nmero confiable a suponer es del orden de 2000


colonias/m3, si el aire es tomado de un espacio abierto y limpio.
La industria bioqulmica requiere aire y otros gases en condiciones estriles en
diferentes etapas del proceso y con diferentes propsitos:
- Salas estrles: Se utilizan para realizar operaciones en las cuales debe evitarse
la contaminacin de los materiales manipulados con microorganismos potencialmente infecciosos. Una sala estril no est completamente libre de microorganis-

mos, pero debe mantenerse escrupulosamente limpia y proveerse de aire estril


a una presin ligeramente mayor que la de las reas adyacentes. Usualmente
en las salas estriles donde se fabrican vacunas, materiales parenterales y se
seleccionan y propagan cultvos, se requieren grandes volmenes de aire estrl
a baja presin (13,8 kPa, o 2 psig).
Transferencia de llquidos: Los lfquidos son transferidos de un recipiente a otro
por gravedad, por bombeo, o por transforte con aire u otros gases. Cuando la
oxidacin es un problema generalmente se emplea nitrgeno. En cualquier caso
-

el gas
7

debe filtrarse cuidadosamente para remover partlculas inertes y


mcroorganismos viables. Se requieren relativamente bajos voltmenes de gas
estril a presiones hasta 206,8 kPa (30 psig).

385

- Aeracin de feimentadores: La mayora de las fermentaciones aerbicas a


escala industrial requieren grahdes volmenes de aire estril para aerar y en
algunos casos proveer agitacn. Generalmente la fermentacin requiere
aeracin asptica durante perodos que oscilan entre tres y diez das a razn de
o,5 - 2 vvm, lvolumenes de aire por volumen de licor cada minuto), si, por
ejemplo, el fermentador tiene un dimetro de 3 m y la profundidad del licor en
el fermentador.,es 3 m, los requerimientos de aire, a razn de 1 vvm, son:

o , n=i.(3r)'
21,2

rlq = prz
4,.6s
mln hr

=21,2m3

mo de aire cstril

hoa

Tericamente la entrada de un solo microorganismo puede infectar todo el lote.


En consecuencia una planta de fermentacin aerbica requiere enormes cantidades de aire estrl a una presn que usualmente vara entre 137,g kFa.y
413,6 kPa (20 - 60 psi), segn la naturleza de la nstalacn, la resistenca de
los filtros y la profundidad del lquido en el fermentador, Stark y pohler, (1gso).

6.5.2 Esterilizacin

de are por cator

6.5.2.1 Compresin politrpica

En muchos casos el.calor generado por la compresin es suficiente para esteriliqar el aire, de manera que no se requierpn otros medios de eliminacin de
microorganismos, Bruckshaw, 1973. El aire requerido para la aeracin de fermentadores se comprime hasta 344,6 - 413,6 kpa (b0 - 60 psig), presin reque-

rida para vencer la cabeza hidrosttica en el fermentador


tuberas, accsorios, vlvulas, etc.

386

y las prdidas en

En condiciones normales, a escala industrial, la compresin del aire es


politrpica, o sea, intermedia entre adiabtica e sotrmca. En este caso;

rz=r,(f

t6.26I

)+

Donde: r: relacn entre los calores especficos del aire a presin constante y
volumen constante; r: 1,3 para compresin politrpica.
As, por ejemplo, la temperatura alcanzada mediante compresin politrpca del
aire en las condiciones de Bogot (presin localatmosirica:10,83 psi; temperatura 1 5 oC) hasta 1 50 psig, es:

z2=(zra.

ls).(%#q
Tz =

)'*

= sos,7

r(

2i2'7'c

Se ha demostrado que las temperatura del aire inferiores a 2OO oC son de poco

valor en esterlizacin, a menos que el aire se mantenga durante un perodo


considerable, casi un minuto, a 150 oC. La esterilizacin de grandes volmenes
de aire debe satisfacer al menos dos condiciones:

- El aire normalmente debe comprimirse hasta una presin tres o cuatro veces
mayor que la requerida por el proceso.
- Un sistema de almacenamiento de aire, tipo serpentn, debe mantener el aire
a elevada temperatura durante un tiempo adecuado.
As por ejemplo, la longitud de tubera aislada, de 15 cm de dimetro interior,
requerida para almacenar 21,2 lm3 de aire)/(minuto) durante 30 segundos, es:

21,24

H.30s

f,.{o,rs ^)r.t

L = 599,84 m

387

6.5.2.2 Calentamento directo

En este caso el aire se hace fluir por el espacio anular entre dos cilindros
concntricos de hierro. El cilindro interior se calienta con un quemador de gas.
Estos hornos, que tambin pueden ser elctricos, slo son tiles para pequeos
flujos de gas hasta 30 litros/minuto. Se han diseado hornos elctricos donde
elaire se calienta hasta 700 oC en un tlempo de 0,4 segundos, con un consumo
de potencia de 1,8 kW/(100 litros/minutol.

6.5.2,3 Calentamento indirecto con gases combustbles

En este caso el aire fluye, separado del gas caliente, por serpentines o tubos,
para prevenir la contaminacin de los productos de la combustin o el agotarniento del oxfgeno. Las dificultades para disear y mantener una unidad de esta

clase son considerables y los costos de capital y operacin son elevados. Por

esta razn el mtodo no es compettvo con el mtodo de filtracin. Con el


propsito de prevenir excesivos perodos de sostenimiento el aire se calienta
hasta 350 "C y se utiliza un serpentln como factor de,seguridad para evitar la
supervivencia de aquellas bacterias enclaustradas o protegidas por slidos.

6.5.3

Filtracin

Los filtros cuyo propsito es remover microorganismos del aire pueden


clasificarse en dos categorlas: aquellos cuyos intersticios son mas pequeos que
las partculas a ser removidas y aquellos donde estos son ms grandes. El
primer grupo comprende los llamados filtros absolutos de cermica, vidrio
sinterizado, o metlicos, su eficiencia es prcticamente 1007o, pero cuando hay
necesidad de esterilizar elevados volmenes de aire, tienen la desventaja de ser
costosos, adems de originar altas prdidas de presin.

388

Los filtros fibrosos de papel, algodn, lana de vidrio y lana mineral, no presentan
esta barrera impenetrable a los microorganismos, los espacios entre fibras son

mayores que el tamao de los microorganismos, pero son eficientes y originan

bajas prdidas de presin, Chen, 1955; Davies, 1973; Decker et al., 1962;
Decker et al., 1957, Conway, 1984; Esta eficiencia se explica por el hecho de
que los microorganismos generalmente estn asociados con partfculas de mayor
tamao.

6.5.3.1 Filtros empacados

filtro empacado. El lecho se


para
prevenir
mantiene entre rejillas metlicas ajustables
el movimiento de las
fibras y el acanalamiento del aire a travs del lecho. En algunos casos los materiales del lecho filtrante se pegan con resinas o se comprimen en bloques o
lminas. En la Tabla 6.6 se presentan las caracterlsticas de uno de estos medios.
En la Figura 6.1 1 se muestra esquemticamente un

Figura

6.11

Representacin esquemtaca de un filtro empacado

389

Tabla

6.6 Caractersticas de la lana mineral,'(Stilmed AST 1 3)-, Richards, .l 968.

Dimetro de fibra,

pm

<6

68 o/o

Distrbucin

12
27 o/o

6-

18
4o/o
12 -

18 - 24
1

'o/o

El medio filtrante Stilmed AST/13 tene una densidad aparente de 1 92,3 kg/m3.
En la Tabla 6.7 se presentan datos de la prdida de presin del aire a travs de

este medo.

Tabla6.7Prdidadepresindelaireenunlechoempacadoconlanamineral,
(Stilmed ASTi 13), Richards" 1968.

Velocidad

Prdida de presin en mrn Hg

del aire

m/s
0, 15*
,23

0,30
0,38
0 ,45
0,60

Espesor
"12,7 mm
7,5

tt,2
,9
78,'t
22 ,4
29 ,9
74

El rnismo medio comprimido

hasta un espesor de 7,6 cm.

L2,t
,7
,4
33,2
L8

25

Velocidad recomendada para produccin continua de aire estril.

El lecho filtrante se esterilza mediante flujo de vapor de agua a presin


ligeramente mayor que la atmosferica durante 2 horas. Esta operacin requiere
una purga previa de todo el aire. Las elevadas temperaturas pueden afectar la
resistencia de las resinas utilizadas para pegar las fibras. Algunos fabricantes
garantzan sus medios filtrantes hasta temperaturas de 800 oC. Otro efecto de
la ternperatura es la contraccin del lecho, fenmeno que puede controlarse con

las placas metlicas desplazables. La esterilizacin del lecho con aire

temperaturas entre 160 y 20O oC durante 2 horas tiene la ventaja de prevenir


la humedad residual del lecho despus del procedimiento de esterilizacin.

390

6.5.3.2 Filtros de vela

Cuando se requieren volmenes relativamente pequeos de aire se utilizan filtros


vela absolutos (Figura 6.1 2) de cermica porosa, vidrio sinterizado, metal, tefln

PTFE (politetrafluoroetleno).

Figura

6.12

Representacin esquemtica de un filtro de vela

+
6.8 se presentan datos sobre la relacin entre Ios caudales de agua
y
y de aire sus correspondientes prdidas de presin en un-a vela de "Celloton".
Este material, similar a la porcelana, se obtiene a elevada temperatura por la
recristalizacin de una mezcla de ahf mina y slice, produciendose una estructura
muy poiosa (porosidad e = O,4). La limpieza de la vela se realiza con cidos,
con detergentes, o mediante ignicin en un horno. La esterlizacin de la vela se
realiza con vapor, con aire caliente o en autoclave.
En la Tabla

391

Tabla 6.8 Prdida de presin en una vela de "Celloton" de 10 pulgadas de


longitud, 2 pulgadas de dimetro exterior y 1,5 pulgadas de dimetro interior.
Richards, 1968.
-Dimetro

de poro
pm
1
1
1

2
2
2
2

Prdida
de presin
psl

Caudal
de agua

litros/hora

Caudal
de aire

litrosiminuto

14

ZU
5

,45
,77
18, 90
7 ,55

o 2
4,L6
18 ,37

10
15

15 ,7-2
22 ,08

30,24

,64
,29
22 ,6s
30,88

10
15

1-5

6.5.3.3 Filtros de membrana

Las membranas filtrantes de celulosa pura, steres de celulosa, nitrato de


celulosa, acetato de celulosa, poliamidas etc, tienen entre 107 y 1011 poros por
cada centmetro cuadrado de membrana filtrante, y por cada micrmetro de
espesor hay alrededor de 100 capas o mallas fltrantes. Las membranas de
acetato de celulosa son compatibles con casi todos los lquidos farmacuticos,
no se deterioran con el xido de etileno gaseoso, pero se disuelven con acetona,
steres y lcalis fuertes. El cido actico y el alcohol tambin las deterioran.
Cuando hay necesidad de usar etanol o metanol se usan membranas de acetato

de cellosa. Los llquidos que pasan por el filtro membrana deben ser prefiltrados. El agua sale de estos filtros libre de sustancias orgnicas, iones y pirgenos. La retencin bacteriana de las membranas es alta, hasta 107 bacterias/cm2.
Las membranas se ensamblan en portacartuchos de acero inoxidable. Hay
membranas hidrfobas y tambin hidrfilas. Las hidrfobas tienen la ventaja de
no obstaculizar el flujo de aire despus de permanecer en un autoclave a 138
oC, o del paso del vapor de agua.

392

6.6

EFICIENCIA DE LOS FILTROS FIBROSOS

6.6.1 Eficiencia de fibra

Los fenmenos bsicos que explican la retencin de las partfculas presentes en


un fluido que se desplaza en una direccin perpendicular a la fibra cillndrica de
un filtro, son:

Difusin: La partfcula que sigue la lfnea de corriente experimenta una

difusividad pequea pero finita que significa una velocidad finita de recoleccin.
Este movimiento de la partfcula se denomina movimiento Browniano.
- lntercepcin: Se supone que todas las partlculas que siguen lfneas de corriente
que pasan a una distancia menor que la mitad del dimetro de partcula, dpl2,

son retenidas por la superficie del colector.

- lmpacto: Si la inercia de la partcula es grande, las fuerzas que permiten

al

fluido rodear la fibra son insuficientes para evitar que la partcula por su inercia,
haga impacto sobre la superficie del colector y sea retenida.
- Gravitacin: La diferencia de densidades entre la partcula y elfluido origina el
desplazamiento de la partlcula dentro del fluido y su posterior retencn al salir
de la lfnea de corriente.

- Fuerzas elctricas: Las partlculas bajo la influencia de un campo elctrico son


desviadas delflujo en lneas de corriente y atradas hacia la superficie del colector.
- otras fuerzas: Algunas fuerzas como las de London y Van der waals aceleran
o retardan la cofeccin de partculas. Las siguientes ecuaciones, obtenidas
analticamente (Bailey y ollis, 1986), permiten calcular la eficiencia de
recoleccin de partlculas por una fibra simple:

393

- Difusin: movimiento browniano

.l K''z )*

srB = o.s
-'' '[r, .dF.dp.U)

16.271
,

- lntercepcin

p, = (1,,

(* I

t6.28I

- lmpacto
,t6.291

- Gravitacin
t6.30I

Donde, Bu: Eficiencia de recoleccin por difusin o movimiento Browniano; B,:


eficiencia de recoleccin por intercepcin; l3,r: eficiencia de recoleccin por
impacto; Bo: eficiencia de recoleccin por gravitacin; Ke: constante de
Boltzmann: 1 ,38.1 O-23 JIK; T: temperatua absoluta, Kj dr: dimetro de fibra, m;
dr: dimetro de partfcula, m; U-: vetocidad superficial (o de torre vacfal del
fluido, mls; pr'. densidad de partcula kg/m3; p" : viscosidad dei fluido,
kg/(m,sl; g: acelpracir.de la gravgdad,,9,8 m/s2. M : pp- pri g\: densidad del

fluido,kg/m3.

i,

La ecuacin para R, tambin se puede escribir como:

g, = (o,e). [(r,$.
Adems las'ecuaciones para

13,

tLr]N.(:,PEF

)-4

B, son validas para:

**-LP<1ipw=!L4rso
394

t6.31I

16.321

tlonde Ro : Nmero de Reynolds; P.r : Nmero de Peclet referido al radio


la fibra; DF : Difusividad de partcula, m2ls:

de

t6.331

En un filtro real, la presencia de-otras fibras altera el campo de flujo en la


proximidad de la fibra considerada y afecta su eficiencia individual de recoleccin, Fitzgerald y Detweiler, 1957. Este efecto se calcula mediante la ecuacin:
9

* 9t*

P = 2,g.K;1F,P;4 * O,62.P61

* 1=ij'o.2.rn
(r *Rr) - r +(r *R.)-2]
2'Ku L \
t6.341

!r(n')o .
]
;*[" (-, ,^", f + 1,24.(K u)-trz

.r

r-ttz. (R

{^*)'."')

")at

Donde; Br,: Eficiencia adicional de recoleccin por la interaccin de fenmenos


de intercepcin y difusin (Bailey y Ollis, t 986); K, : Parmetro de Kuwabara:

13a2
I[ =--lna--+d,-'244

t6.351

Donde, o: Fraccin volumtrica de fibras en el lecho; e : (1 _ o): porosidad del


lecho; Rp, = dp/df : Relacin entre los dimetros de partfcula y de fibra.
Para nmeros de Peclet mayores que 200 y valores de Rpr pegueos la Ecuacin
t6.341 se convierte en:

F*9*Fu=
t6.36I

z,9.x;tts.r;4 * Kit.nfr.lt - c

395

medida que aumenta el caudal, aumenta la'importancia relativa de los


trminos Br, y Bn. La eficiencia total de recoleccin Rr se calcula segn la
ecuacin:

9r=9s*9t*9u*Fzr*Fe

16.371

El espesor L de lecho filtrante requerido para lograr una determiada remocin

de prtclas se calcula mediante la ecuacin:

t6.38I

Donde; N,, Nr: Nmero de microorganismos en el fluente y en el efluente del


filtro, respectivamente; L: Espesor del lecho, m.

Ejemplo

6.5

Espesor de un lecho empacado con fbras de vidrio

Hallarel espesor dellecho filtrante requerido para aer un fermentador con 80


m3'de medo a razn de 20 m3/minuto de aire a 20 oC y 4 psig (presin
baromtrica : 10,83 psi) durante 100 horas. El aire contiene 1800 microorganismos/m3, lpp : 1000 kg/m3, dp : 0,6 Uml, y se acepta una probabilidad de
hallar 0,001 microorganismos en el afluente durante las 100 horas. El lecho
est compuesto de fibras de vidrio (d, : 19 pm, a : O,038). La velocidad
superficial del aire, (/" : 1,85.10-5 kg/(m.s), es 0,46 m/s.
Solucin

1. Densidad del aire:

'

396

P,M
R.T

=(!#f

uo',.szs

ur".x

H t,t273 * 2OlK
bnol.K '

8,314

3_

1,217

+m'

2.

Nmero de Reynolds:

^ dn.U-,pE=-=
lc

Xc =0'592<

*=#4=ffi;
l

DP = 3,865 '10-t1

,,=#=ffi=r3.o6s,eo>50
D-

5.

Parmetro de Kuwabara:

'-

6.

Ev=-

tn, - I.

" - =o,941

Relacin entre los dimetros de partlcula y de fibra:

.',
7.

i =0,(Bo

j'

Euacin [6,361:
g

,,ir

* Fr * Fa=12,S.iO,SA)-I4.(113.065,g8-zs
*(o,923)-f .rO,oqer.t0,962|=2,$14.10-e

'

397

8.

Eficiencia de recoleccin por impacto:


p

rM =

ug7s.tffi

Eficiencia de recoleccin

)'o

o,orro

por gravitacin:

pn= (1@

- f ,2171.9,9.(0,6r.10-92 =2,364.10-5
18.(1,8.10-t).(0,O)

10.

Eficiencia total de.recoleccin:

0r

= 0,0197

1'1. Espesor del lecho:


ln 1800.20.60.1@ _ 4.0,038.0,0197.

r.(rs.t0-6

0,001

I; = 0,52

6.6.2 Prdida de presin

en los filtros de fibra de vidrio

Los filtros de fibra de vidrio son los ms ulilizados en esterilizacin de aire para

las plantas de fermentacin. Las fibras deben reemplazarse despus de un


perodo de operacin que usualmente vara entre 1 y 2 aos. El reemplazo es
costoso y el empaquetamiento del lecho es relativamente difcI. Adems, los
costos de produccin de vapor y de aire caliente para la esterilizacin del lecho
y subsiguiente secado.del mismo son considerables. La prdida de presin del
aire que atraviesa un lecho de fibras se calcula usualmente segn el procedimiento de Kimura e linoya, 1959, estos autores recomiendan la Figura 6.1 3,
construida a partir de valores experimentales, para gvaluar el coeficiente de
arrastre Co, en funcin del nmero de Reynolds:

398

co*

rc

.9.-dr.

2-p.L.r.0 - d^

t6.39I

Donde, dr: dimetro de fibra, m! gc: factor de conversin de unidades, 1 kg.m.s'


2.N-l;p: denSidad detfluido, kgim3; Uo: Velocidad superficial, o de torre vacla,
del fluido, m/s; L: espesor del lecho, m; a: fraccin volumtrica de fibras en el
lecho: o : 11 - el; e: fraccin volumtrica de vacios en el lecho. m = 1,35:
fibras de vidrio; m : 1,45: fibras de algodn.

Ejemplo

6.6

Prdida de presin del aire en un filtro de fibras de


vidrio

Calcular la prdida de presin del aire en el caso del ejemplo anterior.

- Nmero de Reynolds = 0,592


- Corur : 83:Figura 6.13, Para Re = 0,592
- m : 1,35: fibras de vidrio, dr : 19 /m
- Prdida de presin:

A P =#05,3

^p

(,-g-!ALf,A7

Pa

estl = 0,6s4 ps

399

Figura 6.13 Determinacin de la prdida de presin del aire que atraviesa un


lecho de fibras segn el procedimiento de Kimura e linoya, 1959. La ordenada
es el coeficiente de arrastre Co, definido en la Ecuacin t6.391 y !a abcisa es el
nmero de Reynolds.

Coeticiente de friccion

Reynolds

PROBLEMAS

6.1 Los perodos de calentamiento y enfriamiento en un fermentador por lotes


de 40 m3 de capacidad son: Calentamiento de 100 hasta 121 oC en 16
minutos; Enfriamiento desde 121 hasta 100 oC en24 minutos.

- Tres muestras sin esterilizar, tomadas de diferentes lotes de materia prima,


dieron los siguientes recuentos bacteiiales: 8.1 06; i',6.10' y 3.1 06/ml. Calcular
el valor del perodo de sostenimiento a 121 oC.

400

Durante la etapa de calentamiento se presenta una falla en el control de


tempratura del fermentador del problema anterior' La temperatura aumenta a
oC, permanece constante durante
raz6n de 0,8 oC/minuto desde 1 00 hasta 108
oClminuto
desde 108 hasta 121 oC.
8 minutos y luego aumenta a razn de 0,8
Calcular el valor del perodo de sostenimiento.

6.2

Suponer ahora que por ampliacin de la planta se desea construir un


fermentador similar al del problema 1 pero de 120 m" de capacidad. Los ciclos
de calentamiento y enfriamiento sern realizados en 22 mnutos y 28 minutos
oC.
respectivamente. Calcular el valor del perlodo de sostenimiento a 121

6.3

6.4

Se utiliza un sistema de esterilizacin mediante calentamiento directo por

inyeccin de vapor de agua, seguido de un enfriamiento instantneo (Figura


6.81, para esterilizar el caldo de un fermentador. Los recuentos bacteriales de
dos muestras de caldo sin esterilizar dieron los siguientes resultados:8.1011;
que
1 ,7.1O121m3. Se requiere reducir la posibilidad de contaminacin de manera
slo 0,001 microorganismo pueda sobrevivir despus de Un mes de operacin
continua. Disear la esterilzacin sobre la base de que todas las esporas
bacteriales resistentes a la accin del calor corresponden al B. stearothetmophi'
/us (Keo = 1,585,1036.s-1; Eo: 283,46 kJ/(gmol). La seccin delsostenimiento
del esterilizador es una tubera de acero de 24 m de longitud Y 7,79 cm de
dimetro interior. En la planta se dispone de suficiente vapor de agua saturado,
a una presin de 6 atmsferas, suficiente para calentar el caldo hasta una
temperatura de sostenimiento de 130 oC. Los periodos de calentamiento y
enfriamiento son despreciables en este tipo de esterilizador. Las propiedades del
caldo a esta temperatura son: densidad: 10OO kg/m3; viscosidad: 1,12.10'3
kg.(m.s)''; calor especfico: 4,187 J'(g.oQ)'1' Calcular la cantidad de medio,
kg/s, que puede esterilizarse: 1 - si se supone flujo tapn ideal; 2 - si se considera el efecto de dispersin axial.
para esterilizar mediante filtracin el
aire necesario para aerar durante 960 horas un fermentador con 80 m3 de caldo
a razn de 1,5 yym (volunren de aire por volumen de licor cada minutol. Se
dispone de aire a 18 oC y 6 psig (presin bromtrica : 12 psi; viscosidad:p"
: 1,85. 1 0{ kg. (m,s)-1). El aire contien e 24OO microorganismos/m3, (pp : t O00
kg/m3, dp : 0,6/m), y se acepta una probabilidad de hallar0,0o1 microorganis-

6.5 Hallar el espesor del lecho requerido

mos en el afluente al fermentador durante las 960 horas. El lecho est


compuesto de fibras de vidrio (d, : 1 5 Ym, o = 0,03)' La velocidad superficial
del aire es 0,46 m/s.

401

: .i

6.6 Calcular la prdida de presin del aire en el lecho fltrante descrito en


problema

anterior.

el

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405

CAPITULO 7

FENOMENOS DE TRANSPORTE
EN BIOPROCESOS

7.1

REOLOGIA DEL CALDO

Los caldos de fermentacin estn conlituidos por agua, electrlitos, slidos


suspendidos (partculas, flculos y mleriales filamentosos) y materiales
disueltos. Estas sustancias determinan el comportamiento reolgico y la tensin
superficial del caldo e influyen sobre la transferencia de momentum, calor y
masa en el biorreactor.
r

Desafortunadamente la mayor parte de la iformacin disponible sobre consumo


de potencia por agitacin, transferenclT de calor, cambio de escala y transferencia de masa, se fundamenta eR datos obtenidos con agua. El agua y las
soluciones de electrlitos manifiestan un comportamiento reolgico sencillo
descrito por la ley de Newton, Bird et al., (1960). La mayorla de los medios de
fermentacin con bacterias y levaduras tambin manifiestan un comportamiento
Newtoniano..Los medios donde particpan clulas miceliales o donde se forman
compuestos polimricos se comportan generalmente como fluidos no Newtonianos.

406

7.1.1

Fluidos Newtonihnos

La viscosidad de un caldo Newtoniano no es afectada por la velocidad de agita-

cin:
tz -

17.11

Donde, rxz: componente del tensor esfuerzo cor.tante en el plano XZ, N/m2;
{dv./dx}: gradiente de velocidad del caldo, (m/s}/m; p: viscosidad del caldo,
kg.(m.s) '.
La ecuacin anteior puede ser generalizada para incluir ftuidos con material
suspendido o con macromolculas disueltas:
E--

17.2t

La viscosidad aparente, por, kg.(m.s)-1, depende del gradiente de velocidad del


fluido y de la temperatura y presin del caldo Y, Por consiguiente; no es una

propiedad del fluido.

La determinacin del comportamiento r.eolgico de un fluido reqtriere la


construccin de un reograma a partir del ajuste de los datos obtenidos
experimentalmente con un viscosimetro exacto dentro de un amplio intervalo de
viscosidades. Metz, et al., (1979), describen algunos mtodos de obtencin de

las propiedades reolgicas de los cultivos miceliales. Charles, M., (1978),


clasifica los caldos de fermentacin en tres'categorfas: cultivos miceliales,
cultivos con polisacridos extracelulares, y cultivos de bacterias y levaduras.

La Figura 7.1 es una representacin esquemtica de los reogramas tpicos de


algunos caldos de fermentacin. Los resultados experimentales informados por

diferentes investigadores corresponden generalmente a datos obtenidos en


diversos tipos de vscoslmetros, factor que influye ,sobre los resultados y
dificulta la confrontacin de estos valores, aun en el caso del mismo caldo.

407

Figura

7.1 Reogramas

de fluidos con diferentes propiedades reolgicas

Cue

Plqstlco
Blnghorn

de

Cass

luldo
Newtonlono

Esfuerzo

cortqnte

Futdo

drtot

Fludo

pseudoplos tlco

Grodlente de ve[ocldod
Roels

et al., 119741presentan una lista de los modelos matemticos empricos

empleados por diferentes autores para describir la relacin entre la viscosidad


apafente, !p, y el gradiente de velocidad. La magnitud de los parmetros de los
diferentes modelos depende de la concentracin, de la morfologa celulat, y de
las condiciones del crecimiento, si es filamentoso o si es del tipo pelotilla.
Los sustratos de alto O"ro *o,""ular como almidn de maz disuelto en agua,
o una elevada concentracin de slidos no disueltos, afectan la reologa del
caldo aun a bajas concentraciones celulares, La viscosidad es probablemente el
factOr gue afecta en mayor grado el coeficiente de transferencia de calor, La
disminucin de este coeficiente es drstica a partir de viscosidades del orden de
0,5 kg,(m.sl-1, cuando la velocidad de aeracin es alta.

Xueming et al., 1991, estudiaron el efecto de la vscosidad en caldos de


fermentacin de polisacridos (goma xantana) sobre el coeficiente de tranferencia de calor. En el caso de caldos con una concentraclfln de 27 (g de goma)/li,to, aEitados con turbinas Rushton, el valor de este coeficiente puede ser tan
bajo como 6 % del valor en agua.

408

u*=*"(*)" ' -,.(*)'

17.51

El comportamiento pseudoplstico ha sido observado por Tuffile y pinho,


(1'970), en caldos de s. aureofaciens; por Deindoerfer y wet, (1 960l, en caldos
de c. helleboi y en caldos de Penicillium chrysogenum, y por Taguchi et al.,
(1968), en caldos de Endomyces.

7.1.4.

Cuerpo de Casson
'1

La viscosidad aparente de un lquido que se comporta como cuerpo de Casson


es inversamente proporcional al gradiente de velocidad y depende, adems, de
un esfuerzo constante inicial. Este comportamiento ha sido observado por Roels
et al., 11974!., en caldos de P. .Chrysogenum:

("=)'P

l*=1

7.2

"(*)'

("")'o . *"

(*)"

K"'("t1P'(*)' -K:

t7.61

17.71

AGITACION, AERACION Y DISPERSON

El calor aadido al sistema cuando el caldo es agitado para piomover la mezcla


y la tranferenci de calor y de masa, qoe, puede determinase experimentalmente
para diferentes valores de la velocidad de agitacin y del flujo de aire, o evaluarse mediante correlaciones entre los nmeros de potencia y de Reynolds,

410

(Perry y Chilton, 1973). Generalmente la agitacin se realiza mecnicamente


pero tambin se puede lograr mediante dispersin de aire.
En la prctica la potencia suministrada por agitacin a un reactor vara entre 1
y 5 W.(litro)-l, donde aproximadamente 85 - 95 % de este valor corresponde a
agitacin mecnica y el resto a la energfa cintica y expansin isotrmca del

gas dispersado.

trminos cualitStivos aproximados se considera que un sumistro de potencia


al lquido menor que 0,2 W.(litro)1 proporciona una agitacin moderada, entre
0,6 y 0,8 W.(litro)-l la agitacin es vigorosa, y para 1 W.(litro)-1 o ms, la
agitacin es intensa. Estas cifras estn relaconadas con la potencia realmente
entregada al lquido y no incluyen las prdidas en sellos, cojinetes y otras neficiencias elctricas y mecnicas, (McCabe, Smith, y Harriot, 1991).
En

Las prdidas por friccin en sellos, cojinetes, bandas y poleas, generan calor y

contribuyen a la disminucin de la eficiencia de transmisin de potencia, eo,


entre el motor y los impulsores. Harmes 119721encontr una prdida de 3O%
de potencia, entre el motor y el impulsor, en un reactor de 270 litros.
La energa mecnica suministrada puede alcanzar hasta un 25o/o de la carga
calorfica total que debe ser removida de un biorreactor para mantener la
temperatura ptima, (Charles, M., 1985). Las prdidas por friccin en un
fermentador de laboratorio pueden alcanzar hasta el 75 o/o del total consumido
por el motor. A nivel piloto estas prdidas pueden llegar a ser del 30 % con
respecto al consumo total. A nivel industrial la friccin representa slo el 5 %
de la potencia consumida por el motor,

7.2.1 Evaluacin

de la potenca entregada al fluido

La velocidad de un agitador se mide directamente con un tacmetro conectado

al eje, La seal elctrica se utiliza para controlar la velocidad de agitacin y


asegufar una adecuada transferencia de masa. La medicin de la potencia
entregada a un impulsor depende de la escala de operacin. La lectura de un

411

vatmetro acoplado al motor del agitador proporciona datos exactos a escala


industrial y de planta piloto:

P = I.Vu.er.oos$

17.81

Donde, P potencia, W; /: corriente, Amperios; Vor: potencial elctrico aplicado,


V; er: eficiencia del motor; cos tD: factor de potencia.
La potenca entregada al fluido a escala de planta piloto se determina directamente mediante dinmmetros de torsin y detectores de esfuerzo, (Aiba et al.,
1973; Nienow y Miles, 19691:

t7.9t

P=(r),f
Donde, r: momento de torsin. N.m;

u:

velocidad angular del agitador, radian/s.

La potencia entregada al fluido en un fermentador pequo se evala preferen-

cialmente por el mtodo de detectores de esfueeo Gtrain gaugesl y no por el


mtodo del momento de torsin, por la desproporcionada cantidad de energa
disipada en los sellos del agitador. Similarment,; no se recomiendan tcnicas
elctricas de evaluacin de potencia a escala de laboratorio (P < 1 kW o V <
50 ltros),'porque las prdidas en et clcuito pueden ser mayores que la potencia
I
transmitida al fluido.
,

7.2.1.1 Dispersin de gases

La potencia entregada a un fluido por la dispersin de un gas se calcula


mediante la ecuacin:

(o'), - (r'), R.r .


_ln

_f

412

2.s.

Ms

P
P

t7.10I

Donde el primer trmno de esta ecuacin representa el cambio de la energfa


cintica del gas: v,: velocidad del gas en la tuberfa, rr.s-1i v,: velocidad del gas
en el reactor; g": factor de conversin de la ley de Newton (1 kg.m.s-2.N-l).
El segundo trmno de la Ecuacin 7 .101 representa la expansin isotrmica del
gas, desde el punto de salida de gas por la tobera hacia el lquido, donde ia presin es'p,, hasta el punto de salida de gases del reactor donde la presin es p";

R: constante de los gases,8,314 kJ.kmol-1.K-1; M.: peso molecular del gas


(I\lo,.r: 29 kg.kmol-tl I T: temperatura absoluta delgas, K; F.: velocidad de flujo
de masa de gas, kg.s-l

F.=pe-F I pr= Ptx'M,


R.T

17

.111

Donde, F: caudal de gas, m3 s-'; pg: densidad del gas, kg/m3; Por.: presin
absoluta, Pa, (Pa : N.m-2):

Puror*^ = Pu.mwlttrc1 * Pulpustruct

7.2.1.2 Agitacin

Los tipos de fermentadores utilizados con mayor frecuencia en la prctica de la

lngeniera Bioqulmica son los fermentadores de laboratorio, el tanque agitado,


la columna de burbujeo y elfermentador de recirculacin, (Figuras 5.20 y 5.21).

Los fermentadores de laboratorio generalmente son recipientes con un volumen


de operacin entre 0,5 y S litros, usualrnente son de vidrio y estn provistos

de un sistema de agitacin mecnica. Los fermentadores denominados "de


banco" son similares a los de laboratorio, slo que tienen volumenes de trabajo
entre 5 y 15litros.
Sykita, 1983,
dor pequeo:

,r"."nr"

las siguientes caracterfsticas deseables de un fermenta-

413

- Relaciones geomtricas (factores de formal similares a las de un ferrnentador


industrial.

- Construccin hermtica para prevenir la contaminacin del medio.


- Sistemas confiables de registro y control de temperatura, sistemas de control
de pH y ruptura de espuma con el propsito de garantizar condiciones
estandarizadas en los diferentes ensayos.

Volumen de operacin suficientemente grande para permitir la toma de


muestras sin alterar apreciablemente el volumen del cultivo o perturbar las
condiciones de aeracin y mezcla.
La columna de burbujeo (Figuras 5.2O v 5.21) es un tanque cilndrico diseado
generalmente con una relacin entre altura y dimetro mayor que 3 y equipado
con un distribuidor de aire. Este fermentador de reducido costo y fct construccin y mantenimiento requiere una distribucin homognea del aire pero
tene la desventaja de generar demasiada espuma. Entre las industrias que

utilizan este tpo de reactor estn la de cido ctrico, cido lctico, enzimas,
esteroides y levadura para panificacin.
Los fermentadores de recirculacin ms utilizados son el reactor de circulacin

lquida impulsada por aire "airlift" y el fermentador de chorro (Figura 5.21lr. El


fermentador airlift es una columna de burbujeo equipada con un tubo concntri-

co de arrastre "draft tube" con el objeto de distribuir el aire. Este tipo

de

fermentador se utiliza principalmente en los sistemas de tratamiento de agua y


para la produccin de protena unicelular. El fermentador de chorro, similar al
airlift, est equipado con una bomba para recircular el lfquido.

A nivel industral el fermentador ms usado es el tanque agitado. En la Fgura


7.2 se representa esquemticamente un reactor de mezcla completa agitado por
dos impulsores de turbina acoplados al eje de rotacin. Generalment se instalan
entre 2 y 5 impulsores. Eltanque agitado es muy flexible ya que puede manejar
fluidos con viscosidades muy diferentes y satisfacer,un.amplio intervalo de
requerimientos de tranferencia de calor. Cuando el sistema de camisa no es
suficiente para proveer el rea requerida de transferencia de calor siempre existe
la posibilidad de instalar serpentines, internos o externos, o utilizar un
intercambiador externo. Los impulsores son preferencialmente de turbina, tipo
Rushton. Estas turbinas fciles de construir suministran una elevada potencia y
se caracterizan por su alta eficiencia para dispersar el gas. Los impulsores del

414

tipo hlice marina son utlzados cuando se requiere bajo corte y bajas transferencias de oxgeno.
La relacin (H/Dr) entre la profundidad del llquido en elreactor y el dimetro del
mismo vara entre 2:1 y 3:1 . En la prctica Europea se prefiere una relacin 3:1 ,

y en los EE. UU.,2:1.

Algunos fermentadores a escala industrial estn


construidos segn la relacin (H/D) : 1.
En el sistema de eje con 2 impulsores, elimpulsbr inferior se instila a una altura

sobre el fondo del tanque igual a 1,5 dimetros de impulsor (E : 1,5 Dol y el
segundo impulsor se instala a 1,5 Do sobre el primero. Cuando se'instalan'3
impulsores, la distancia (E) a partir del fondo del tanque, y entre impulsores se
reduce generalmente a 1 dimetro de impulsor.

Representacin esquemtica de un reactor agitado por dos


impulsores de turbina: Dr: dimetro del tanque; Do: dimetro del impulsor; E:
altura del impulsor sobre elfondo del tanque y separacin entre impulsores; W:
anchura de las aspas; L: longitud de las aspas; J: anchura de las pantallas
deflectoras; H: profundidad del lquido.

Figwa

7.2

II
k- Do+t
-Dt+l

fr

EI

II
415

Fukuda (1968), encontr una proporcionalidad directa entre el nmero de


potencia y el nmero de impulsores. As, por ejemplo, se puede suponer gue la

potencia total es la suma de la potencia suministrada por cada mpulsor. En


condiciones aeradas el impulsor inferior consume menos potenca que el resto.
El dimetro de un impulsor vara generalmente entre

0,3 y 0,4 veces el dimetro


(0,3
Dr < DA < 0,4 Drl. Usualmente elimpulsor se construye segn
del reactor
la relacin: 20:5:4 : D: W: L, donde W es la anchura y L es la longitud de las
aspas del imBulsor. Generalmente se instalan 4 pantallas deflectoras uniformemente espacialas de anchura igual a 1/10 del dimetro del tanque (J :
Dr/10) con el propsito de crear turbulencia y evitar la formacin de vrtice.

7.2.2 Agitacin

de fluidos Newtonianos no gaseados

Segn McCabe y Smith (1976), la potencia requerida para agitar un fluido


Newtoniano se calcula a partir de:
P.g,
p.n3.DAs

rl\r,+,

r, ,...,r"]

P=8"
p^=
iFr=ol'D^
- p.no -Dt"
=iRe=n'D^2'P
F
I

17.121

s,=N,',=l:s,=l

s,=l,tr=*,t"=l
Donde, Po : nmero de potencia; Re: nmero de Reynolds; Fr: nmero de
Froude; S,, Sr, S., So, S., S.: factores de forma; P: potencia requerida para rotar
un impulsor dado a una determinada velocidad, W; g": factor de conversin de
la Ley de Newton (1 kg.m.s'2.N-'); p = densidad del fluido, kg,m-3; n
416

velocidad del impulsor, revoluciones s-l; l.r = viscosidad del fluido, kg.m-1.s'1;
Do: dimetro del impulsor, m; Dr: dimetro del tanque, m; g : 9,8 m.s-2:
aceleracin de la gravedad; E: altura del impulsor sobre el fondo del tanque, m;
L: longitud de las aspas del impulsor, m; W: anchura de las aspas, m; J: anchura
de las pantallas deflectoras, m.
La Ecuacin f7 .121, vlida para agitacin de fludos Newtonianos no gaseados,
generalmente se representa en forma grfica (Figuras 7.3 V 7 .41 para diversos

tipos de impulsores, diferentes configuraciones (factores de forma) y condiciones de operacin (McCabe y Smith, 1976; Wang, 1979; Perry y Chilton,
1973t.

Figura

7.3 Funcin de potencia versus

Reynolds para un impulsor de turbina de

6 paletas planas. McCabe y Smith, 1976.

t00

Funcion de potencio

-l'-i. t'-t

o
{--1.1.+

t0

,.\

e1
\l

-l

+i *i
'i rfi

t4

iil
\ l-{

?.!.v. t.9:

i l

to

1000

700

too00

ts<

+
1

00000

Reynolds

La representacin grfica de la Figura 7.3 se aplica en'el caso de tanques


equipados con un eje verticalcentral y una turbina de 6 paletas planas. Las dos
curvas de la Figura 7.3 son vlidas para los factores de forma: Sr = Dr/D :
3;Sz = E/DA :1;S. = L/DA = 0,25; Ss = H/Dr = 1. LacurvaAseaplicaen
el caso de tanques equipados con 4 deflectores, cada uno de anchura igual a la
417

: .i

dcima parte del dimetro del tanque (Su : 6,1), y Q


aplica en el caso de tanques sin deflectores.

: P". La curva B se

La fqncin de potencia, {p, representada en las ordenadas de las Figuras


7.4, depende de los nmeros de potencia P" y de Froude, F^:

P'8'
: F^=n"'D^
g
p.ns.D| 'R

Po='

'Q=Pr.Fi^i

7.3 y

t7:131

Figura 7.4 Functn de potencia, (D, versus Reynolds para hlices de 3 aspas.
McCabe y Smith, 1976,
.i

to0

_a\a_

'.4:::.t

.le,tti dr.o16.sri.slFfr

-3i:P-qfg,i?:ili

.EL:..il.

drk

s.P..a:12I

_'

\\
...t\.

d;i,t a-te7"'; i;'i 5,:


Pilil:
---!--j---.- l-----i,-i-i+i
D:iG ddl tctdresi Jl r;Pespitil

t\\

10

'ai

(Uts9i9

i i

\^i..
'ii

\-.--.

-*-: iX

==+:M

it
=

0.1

t0

100

1000

j::iri:i:i1

*+
10000

100000

Reynolds

El efecto del nmero de Froude aparece cuando hay formacin de vrtce, y


entonces slo si el nmero de Reynolds es mayor que 300. En Ios tanques
equipdos con pantallas deflectoras, o p'r impulsores que entran lateralmente
al tanque, o cuando el nmero'de Reynolds es menor que 300, no se forma
vrtice, y el nmero de Froude no afdCta la Ecuacin 17.121 y m : O.

418

El exponente m depende del nmero de Reynolds:

m= a-looRe
'

t7.141

Donde:

ab
1
1,7
0
2,3

Curva
40
1g

Figura
7.3
7.4
7.4
7.4

B
B

18

1g

La representacn grfica de la Figura 7.4 se aplica en el caso de tanques


equipados con un eje vertical central y una hlice de tres aspas, Para todas tas
curvas 52 = E/Do : 1, y Su : g, : 1. La curva A se aplica en el caso de
tanques equipados con 4 deflectores y Ss : J/D, : 6,1
.

7.2.3 Agitacin de fluidos Newtonianos

gaseados

La potencia consumida por un sistema gaseado es considerablemente rnenor que

en un sistema no gaseado. A bajos caudales el gas pasa por el impulsor sin


dispersarse y el lquido fluye sin ser prcticamente perturbado por el gas. A
medida que aumenta ef caudal, una mayor cantidad de gas es capturada por los
vortices formados detrs de las paletas del impulsor, y luego es dispersada. En
este momento el consumo de potencia del sistema aseado comienza a
disminuir con respecto al consumo del sistema sin gasear. El sistema de
agitacin se disea generalmente para el procedimiento de esterilizacin donde
el medio de fermentacin et usualmente en una condicin no gaseada.
El nmero de aeracin,

Ar, relacin entre la velocidad superficial del gas y

la

velocidad en la punta del impulsor define la intensidad de la aeracin:

17.15t

419

Donde, Fo: caudal de gas, m3.s-',; Do: dimetro del impulsor, m; n: velocidad del
impulsor, revoluciones.s-1; n,Do: velocidad en la punta del impulsor, m.s'1.
En los cultivos de microorganismos miceliales se encuentra generalmente que

las clulas sufren dao cuando la velocidad en la punta del impulsor es mayor
que 5 m.s-t, (Lynd, 1989). La relacin entre los consumos de potencia en un
sistema gaseado y en el mismo sistema sin gasear, Pn/P, varla entre 1,0 y 0,3'
wang et al., (1979), presentan la relacin, Po/P, en funcin del nmero de
deracin, A., para el impulsor de turbina de hojas planas:
PG

0,65

= 0,35 *

t7.16I

1 + (f 6,67)-,

Nagata, 1975, presenta la siguiente ecuacin para evaluar la relacin Po/P, en


un reactor equipado con una turbna de hojas planas:

bsio+ =

Donde:

*,

,*(3f'*'*3'"' ';'* ?' 'n"

&

+,

n,

17.171

?,j,

Donde, Pu: consumo de potencia en el sistema gaseado, W; P: consumo de


potencia en el sistema sin gasear, W; Fo: caudal de air, m3.s-'; n: velocidad del
impulsor, revoluciones.s-'; Do: dimetro del impulso, mi pi densidad del caldo,
kg/m3; p: viscosidad del caldo, kg/(m.s).
Michel y Miller (1962) desarrollaron la siguiente
P

= K.P2

n. D

^3

ecuacin:

t7.18t

^-o'$]o'

Donde, K: constante que depende de la geometrfa del sistema y de las Unidades


utilizadas. Los intervalos de las variables fsicas en los ensayos de Michel y
Millerfueron: viscosidad: p - 9.10-4 - 0,:l kg,m-l's'1; densidad del caldo: p :

1650 kg.m-3 ; tensin superficial: O,O27 'O,O72 N.m-'; Potencia


consumida por el sistema gaseado: Po: 3,73 -74,6 W; Volumen del lquido en
el reactor: 3,5 - 10,5 litros,
BOO

420

Ejemplo

7.1

Consumo de potencia por agitacin

un tanque cillndrico de 0,99 m de dimetro, provsto de cuatro

placas

deflectoras, unifOrmemente espaciadaS. de anChura J = 0,1 .Dr, se agita con un


impulsor de turbina de seis hojas planas (DA : Dr/3) que gira a 3 rps. Agua a
25 oC (densidad: p : 997,08 kg/m3, (Perrf,y Chilton, 1973); viscosidad p :
8,9O4.tOo fg/m.s) ltena el tanque hasta un nivel de operacin H : Dr' El
oC y 5,2 psig a azn de 0,4 vvm
tanque se alimenta con aire estrl a 25
(volumen de aire por volumen de licor cada minuto) por un orificio situado
debajo del impulsor. La presin local es 10,8 psi. Calcular la potencia disipada
por el impulsor en el lquido sin gasear y en el lfquido gaseado.
Solucin:

- Volumen de licor:
V = !;(O,gq2.(O,gg) = 0,762

mg

- Caudal de aire:

- O,4.LO:762) = S,0g.l0-o
^60

F,

msls

- Nrimero de Reynolds:
Rr

3.(0,$)2.(997,0q
8,904.10-4

Por consiguiente, Q - Po : 6, (Figura 7.3), y la potencia disipada por el


impulsor en el llquido sin gasear, Ecuacin [7.13], es:

P = 6.(997,08).(3)0.(0,33): = 6s2,1

- Nmero de Froude:
FR =

n2.D,

I
---a

9,8

= 0,303

421

- Nmero de aeracin:

A-= F^ ' n.o|

(5,08.10-1
=O.M7
3.(0,$)3

La potencia disipada en el lquido gaSeado, (Ecuacin 7.'l-1l., es:


ros

."+ = - .'rr.(:#f'o.",n"' .&I'*

.As =

- 0,1471

Pc = (0,7126).(632,1) = 450,4 W
La potencia disipada en el llquido gaseado, {Ecuacin 7.16}, es:

&=o.gs*
P

0,65

1+(16,67)-(O,U7)

=o.T1u

Pc = 6O,V144}.(632,f) =.451,6

7.2.4 Agitacin de fluidos no Newtonianos no gaseados

fluido no Newtoniano no gaseado


(o
velocidad
del impulsorl. Metzner y Otto
la
velocidad
de
corte
de
depende
{1 957} definen un nmero modificado de Reynolds para fluidos pseudoplsticosi
El consumo de potencia en ta agitacin de un

, )'
R*=D^".o"-.^.pl
rt
(0,1).X" \6.n + 2)

t7.1gl

Donde, K": lndice de consistencia de flujo, igual al esfuerzo cortante

correspondiente a una velocidad de orte de 1 s-t; m: fndice de comportamiento

de flujo lm -- 1: fluido Newtoniano;


fluido dilatante).

422

m < 1: fluido pseudoplsticoi m > 'l:

Taguchi y Miyamoto (19661 relacionaron los nmeros de potencia, po, y de


Reynolds, Rerr, para caldos no Newtonianos no aerados en la fermentacin de
glucoamilas a con Endomyces:

Po=k.(fut)"

(+)'(#)'

17.201

Donde, Dr: dimetro del tanque; Do: dimetro del impulsorr

w:

impulsor.

anchura del

En la Tabla 7.1 se presentan los vatores de k, a, b y c, correspondientes a la


Ecuacin f7.2ol. Los caldos de fermentacin con organismos miceliales (como
en el caso de la produccin de antibtcos con Penicillium o Streptomyces) o

con materiales polimricos (fermentacin de polisacridos) manifiestan

un

comportamiento pseudoplstico.

Tabla

.1

Valores del coeficiente y exponentes de la Ecuacin


y Miyamoto, 1966).

Rer.:

<10

10 - 50

32

-0r

11

b
c

-7,7

0,4

7.2.5 Agitacin de fluidos

-o ,4

-L,7
0,5

17

.2oj. (Tguchi

>50
9

-0,0s
-1,2
o, 9'

gaseados no Newtonianos

Taguchi y Miyamoto, (1966), investigaron el efecto de ta aeracin sobre el


consumo de potencia en la agitacin de un caldo no Newtoniano y encontraron
que una forma modificada de la ecuacin de Michel y Miller (Ecuacin 7.19l,
con Kl en lugar de K, fija adecuadamente los datos experimentates de la
fermentacin de glucoamilasa en rgmen turbulento, Re", ) S0:

423

e = Kt -lr2.n.

o^3 -F,{-o's'

]o'45

t7.211

OonO", K,,: constante que depende de la geometra del sstema y de las unidades
utilizadas. Los mismos autores recomiendan la siguiente ecuacin para la zonas
laminar y de transicin:
P

c=

K2.lP2.n. D^s . F;o'


fo'n

t7.221

Donde, Kr: constante que depende de la geometra del sistema.

7.3

TRANSFERENCIA DE CALOR EN FERMENTACION

En los reactores biolgicos hay necesidd de transferir calor en diferentes etapas


y circunstancias del proceso de fermentacin:

- En el procedimiento de esterilizacin se suministra calor para calentar el caldo


hasta la temperatura requerida para la elimininacin de todos los microorgariismos. El caldo se mantiene a esa temperatura durante un tiempo denominado
perodo de sostenimiento. Entonces hay que retirar calor y enfriar el caldo hasta
la temperatura de fermentacin.
- En el tratamiento anaerobio de los lodos de aguas residuales, el calor generado

por la conversin del sustrato es insuficiente para alcanzar lq temperatura


requerida por el proceso (55 - 60oC) y, por consiguiente, hay necesidad de
suministrar calor al digestor,

- La conversin del sustrato genera un exceso de calor con respecto a las


condiciones ptimas del reactor en la mayora de las fermentaciones microbiales
y, por tanto, hay necesidad de retirar este calor,
Los procesos de fermentacin exotrmicos pueden llegar a generar entre 7,32

14,6 Wilitro. La disipacin de energa (por agitacin y aeracin) puede


alcanzar un valor entre 0,73 y 4,4 Wlitro. Los coeficientes globales de
transferencia de calor para un fermentador industrial estndar alcanzan valores
424

entfe 280 W.m-2.oC-1 con medios de baja viscoSidad y 850 W.m-2.oC-ren el


caso de fluidos viscosos y no Newtonianos. La magnitud de la transferencia
de calor depende de los llmites del sistema y de las condiciones ambientales.
Las variables ms importantes en la determinacin de la magnitud del calor
transferido, qir, son: la diferencia de temperatura entre el fermentador y el aire
ambiente, la temperatura del agua de refrigeracin y el rea disponible para
transferencia de calor.

7 -3.1 Area de transferenca de calor

La transferencia de calor se ealtza entre el fluido procesado, caldo

de

fermentacin, y el fluido refrigerante, generalmente agua, mediante sistemas de


Camisas externas, Serpentines internos o externos, flujo a travs de un
intercambiador, o mediante la condensacin o la evaporacin del agua y otros
compoentes voltiles delfluido que contiene las clulas y dems productos de
la ferirrentacin.
El rea efectiva de transferencia de calor de un sistema de camisa externa
(Figura 7.5.a), segn Humphrey (1989), es eJ rea lteral del tanque:

A" = n'DrH

f7.23t

Donde, A: rea de,transferencia de calor de la camisa, m2; D.: dimetro del


reactor, m; H: altura alcanzada por el caldo de fermentacin dentro del reactor,
m.
Con el propsito de controlar la temperatura del caldo durante la fermentacin,
usualmenterentre 25 oC y 35 oC. es necesario remo\rer el calor generado' Con
este propsito se requieren reas de transferencia que generalmente no son

posibles de satisfacer con el rea disponible de la camisa. Por e.sta razn


prcticamente todos los fermentadores de capacidad superior a 1000 litros
requieren un serpentn interno,
Los serpentines helicoidales tienen la ventaja de proveer una gran cantdad de
rea de transferencia en un volumen dado de fluido pero son relativamente

425

costosos y difciles de mantener. El rea de transferencia de calor de un sistema


de serpentfn interno (Figura 7.5.b1, es:

Ar=n.d.Ls=t2.d.Dr.n,

17.241

.Donde, A": rea de transferencia de calor del serpentn interno, mr; d: dimetro
externo del tubo del serpentn, m; Ls: longitud del serpentfn, mi Ls : n. D..n.; D.:
dimetro del serpentn, m.
Generalmente: Ds : 0,9.Dr, para serpentines sencillos de una sola hilera; Dr:
dimetro del reactor; n. : (H./e) + 1 : nmero de espiras del serpentn; H":
altura del serpentn, m. Usualmente: Hs =- 0,8.H; H: attura ocupada por el caldo
de fermentacin dentro del reactor; e: separacin entre espiras adyacentes, m.
Frecuentemente e vara entre 2d y 4d.
En la Figura.7.5.c, se muestra esquemtcamente-el intercambiador fle doble
tubo, el flujo puede ser en paralelo o en contracorriente y cualquiera de los dos
fluidos puede ocuparelespacio anularo el tubo interior. El equipo mostraflo;en
la Figura 7 .5.d, es un intercambiador de un paso por Ia coraza y dos, puatro, o
cualquier mltplo de pasos por los tubos. Elequipo mostrado en la Figura.7,5"e,
es un intercambiador con dos pasos por la coraza y cuatro, ocho, o cualquier
mltiplo de pasos por los tubos.
En la Figura 7.6 sq,representa esquemtiemente la variacin de la temperatura
de los fluidos calente y fro con Ia distancia, medida a partir de la entrada de
fluido fro, en un intercambiador de doble tubo. En figura 7.6.b, se observa que
la temperatura de salida del fluido fro es necesariamente menor que la temperatura de'salida del fluido caliente. El calor transferido es menor que el posible
con flujo en contracorriente en el mismo equipo, y por esta razn el flujo en
paralelo se utiliza raramente en un intercambiador de un slo paso.

El fluio en paralelo se emplea en situaciones especiales donde es necesario


limitar la mxima temperatura delfluido ms frlo o donde es importante cambar
rpidamente la temperatura de uno de los fluidos.
Otros intercambiadores ampliamente utilizados en la industria son los de co(aza
y tubos. Un fluido fluye dentro de los tubos, mientras el otro fluido es forzado
por la coraza a travs de los tubos, mediante placas deflectoras.

426

Figura

7.5

Representacin esquemtica de algunos equipos de transferencia de


'
calor.

:l-Dt
A

x-Dt +

Reocton con
conlso extenno

Reoctor

con

senpentln hterno

Intencqhbodon de
tubro doble

fco
Tfe

TFe

.Tfo

lntercqrrblodor de corozo y ttdoos


un pqso por lo corqzo y ?, 4.,..
posos por los tubos

Tce,

fntereonklodar Ce corqzo y tubgs


dos pqsos por lo corozq y 4, 8-'-.poso:s por los tubos

427

Figura 7.6 Variacin de la temperatura de los fluidos caliente fro en un


intercambiador de doble tubo. T"o, T.r: Temperaturas afluente y efluente,
respectivamente del fluido caliente, oC; Tro, Trr: Temperaturas afluente y
efluente del fluido fro.

Tco

ftudo coltente
T

Fluido colente

AT2

ftudo Pro
Tce

A:

Tf

Tf

ATI

fq

Tfo

Dstoncio

Dstonco

b- flujo en paralelo

a-flujo en contracorriente

7.3.2

[are

ftudo

Balance de energa

En los intercambiadores de calor no'hay trabao de eje, y las energas cintica


y potencial son pequeas comparadas con los otros trminos de la ecuacin de
balancg de energfa. Adems, los intercambiadores de calor operan generalmente en,condiciones estables, excepto durante los cortos perlodos de arranque y
finalizacin. Por consiguiente, la ecuacin de balance de energfa aplicada a cada
una de las corrientes que fluyen por el intercambiador se convierte enl

ewr = Fxr-(Hr"

428

Ho) = Fn.(Ho

Hu)

t7.251

Donde, q,,ur: velocidad de transferencia de caior, kW; Frr, Fr.: velocidad de flujo

de masa de fluido fro y de fluido caliente, respectivamente, kg.s-'; H.r, Hro:


1;
entalplas del fluido frlo, efluente y afluente, respectivamente, kJ. (kg) H"o, H..:
entalpas del fluido caliente afluente y efluente, respectivamente.
La Ecuacin 17 .251expresa un balance global de entalpa, el calor perdido por
el fluido caliente es ganado por el fluido fro. Si se suponen constantes los calores especficos de ambos fluidos, el balance global de entalpa del intercambiador se convierte en:

Qiy=Fap-crr.(fo

Tr )=Fo"'c"r'(To

- Tu\

17

'261

Donde, T6, T6E: Temperaturas del fluido caliente, afluente y efluente, respectioC, En
vamente, oC; Tr, Tr.: Temperaturas afluente y efluente del fluido fro,
la Ecuacin t7.2d los calores especficos se evalan a la temperatura media
aritmtca entre las temperaturas de entrada y de salida def fluido: crr: calor
espectfico del fluido fro, kJ (kg.oC)-1; Cr": calor especfico del fluido calente.
La velocidad de transferencia de calor por unidad de rea se denomina fluio de
calor y se expresa en unidades de potencia por unidad de rea (W.m-'z) de la

superficie por la cual fluye el calor. La mayora de los equipos de transferencia


de calor estn construdos con tubos. El flujo de calor puede expresarse con
respecto al rea exteror, o con respecto al rea interior, y aunque la seleccin
del rea es arbitraria, sta debe quedar claramete establecida.

7.3.3 Coeficiente de transferencia de calor

La ecuacin general utilizada en el diseo de equipo de transferencia de calor es:

ftnn

= U'A'LTu = Uo'Ao'LTu = Ui'Ai'LTM

17.271

Donde, q,^r: velocidad de transferencia de calor (Ecuaciones 7.25 y 1.26l., kW;


U: coeficiente global de transferencia de calor, kW.m-2.oC-l' Uo: coeficiente
global referido al rea exterior; U,: coeficiente global referido al rea interior; A:
rea de la superficie de transferencia de calor, m2; ATr: diferencia media de
temperatura en el intercambiador, oC.

429

El coeficiente global de transferencia de calor de un intercambiador de doble


tubo (Figura 7.5.c} se expresa rnediante las siguientes ecuaciones:
U=
1

hi

A,.ln (r.lr,)

Z.r.L.k

Ao

v.2at

ho

Donde, U,: coeficiente global referido al


coeficiente global referido al rea exterior.
uo

Aol
Ai

-t_

Donde, Ao

hi

,l".ln (r" lr,l


2..L.k

7.291

ho

2.n.ro.L: rea exteror del tubo interior, m2; ro: radio exterior del
tubo interior; L: longitud total de la tubera doble, m; A, : 2.n.r,.L: rea interior
del tubo interior; r,: radio interior del tubo interior; k; conductividad trmica de
la pared deltubo interior, kw.(m.oC) 1 ; ho: coeficiente de transferencia de calor
por conveccin, o coeficiente de pelcula, por el lado exterior del tubo interior,
kW,(m2 oC)-1; hi: coeficiente de pelcula por el lado interior del tubo interior,
Las ecuaciones disponibles en la literatura para la evaluacin de coeficientes de
transferencia de calor dependen de las condiciones del flujo, de la geometra y

configuracin del sistema, de las propiedades reolgicas del fluido

del

mecanismo de transferencia,

Eltema de transferencia de calor es un rea especializada de lngenera Oumica


e lngenierfa Mecnica. En la literatura se encuentran numerosas ecuaciones de
transferencia de calor, aplicables bajo diversas condiciones experimentales:
Welty (1976), Foust (1980), McCabe y Smith (1976), Perry y Chitton (19731,
Holman (1976).
En la Figura 7,6 se muestra esquemtcamente la variacin de la temperatura de
los fluidos caliente fro en un intercambiador de doble tubo (Fgura 7.5.c). una
inspeccin de la Figura 7.6 muestra que la diferencia de temperatura, entre los
fluids caliente y frk., vara entre la entrada y la salda del ntercambiador. S
se suponen constantes los calores especficos y los coeficientes de pelfcula, el
valor promedio de la diferencia de temperatura es:

430

LTM

LT2
LT.
ln'
LTz

LT1
=

17.301

Donde, ATr: diferencia media logarltmica de temperatura, oC. Enunciada en


palabras, AT, es la diferencia de temperatura en un extremo del intercambiador
menos la diferencia de temperatura en el otro extremo, dividida por el logaritmo
natural de la relacin entre estas diferencias de temperatura.
En el caso de los intercambiadores de. tubo y coraza (Figura 7.5.d y 7.5.e), sg
aplica un factor de correccin a la diferencia media logarltmica, ATr, calculada
para un intercambiador de doble tubo con las mismas diferencias de temperatura
en los extremos fro y caliente. La ecuacin global de transferencia de calor,

Ecuacin f7.271, se convjerte en:

enn J (I.A.Ft.^Ty

17.311

Donde, F': factor de correccin de la diferencia media logartmica de temperatura, Holman (1976), Kern (195O). Los fluidos microbiales forman ocasionalmente

incrustaciones sobre la superficie de transferencia de calor que reducen


gradualmente el valor del coeficiente de pelcula por el lado del fluido.

7.3.4

Reactores equpados con camsa

El sistema de camisa tiene algunas ventajas de costo y economa de operacin


con respecto a los sistemas de serpentfn, pero el rea de transferencia de calor

es prcticamente inmodificable una vez construido el tanque.

Brooks y Su, (1959), recomiendan la siguiente ecuacin para calcular el


coeficiente de pelcula entre el lquido en el reactor y la superficie interior del
recipente encamisado) vlida para un amplio intervalo de viscosidadeS y
aplicable en un tanque agitado, equipado con pantallas deflectoras y una turbina
de aspas planas, y documentada por otros investigadores en sistemas equipados
con paletas y turbnas de flujo axial, (Strek, 1963):
431

ho'D,

= 0.74.(R,l)*.

trrl'r. ( -r

)''''

t7.32)

pr=n'Dtz'P i pr=F"-cp
pk
Donde, h": coeficiente de pelcula entre el lfquido en et reactor y la superficie
nterior del iecipiente encamisado, W.m-2. oCi ; Re nmero de Reynolds; pr:
nmero de Prandtl; Do: dimetro del impulsor, m; D.: dimetro del tanque; p:
viscosidad del lfquido a la temperatura media aritmtica, kg.m-'.s-'; lpi viscosidad del lquido a la temperatura de la pared; k: conductividad trmica del lquido,
W.m-''.oC-t; cr: calor especfico del lquido, J.kg''.oC''i p: densidad del lquido,
kg.m-3;

La siguiente ecuacin se aplica a la transferencia de calor hacia o desde

la

camisa de un tanque provisto de pantallas deflectoras y agitado por una turbina

de aspas inclinadas, Cummings y West, (1950):

ho'Dr

0,44.;y

rJ, ()"'

t7.33I

Donde, h": coeficiente de pelcula entre el lquido en el reactor y la superficie


interior del recipiente encamisado, W.m-2.oC-1. El coeficiente de la ecuacin
anterior es 0,76 para turbinas de aspas planas.

Ackley, 1960, analiza los resultados obtenidos por diferentes investigadores y


recomienda la siguiente ecuacin para evaluar los coeficientes de pellcula
correspondientes a la superficie interior del reactor y a la superficie exterior de
las superficies contenidas dentro del tanque:

ho'D,

= a.R"N.P,1F.

17.341

Donde, h.: coeficiente de pelcula entre el llquido en el reactor y la superficie


interior del reactor encamisado o entre el lquido en el reactor y la superficie
exterior del serpentn, W.rn-2.oC-1; Dr: dimetro interior del tanque.

432

Los valores promedio del coeficiente'a"dependen del tipo de agitador y de la


superficie de transferencia de calor:

tgiador

Superflcle

Turbina
Turbina

Camisa

PaIeLa
P.aleta
AncJa

Camisa'
Serpent,f n
Camisa
Camisa
Serpent n

H1
H1

Coeficiente
,62
1,50
0, 35
0 ,87
0 ,46
0 ,54
0,83
0

Serpentfn

ice
ice

Cuando los llquidos son muy viscosos se utiliza un agitador de tipo ancla, Uhl
y Gray (1966):

ho'Dr

= K.R,o.P,o*

()''"

t7.3sI

K : 1, o = 1l2para1.0 < Pe < 300; K = 0,36, a = 0,67 para 3O0<


r9e <40000; ho; coeficiente de pelfcula entre el lfquido en el reactor y la superDonde,

ficie interior del recipiente encamisddo, W.m'2.oC'r.

7.3.5

Reactores equpados con serpentn

Oldshue y Gretton, (1954), recomiendan la siguiente ecuacin para el calentamiento o enfriamiento de lquidos en un reactor equipado con pantallas deflectoras, un serpentln helicoidal y un impulsor de turbina:
hr'do

= (0,14.R:'l

'=P*l'{*l'(-1)'

17.361

Donde:

433

Rc= ".D1.p

i pr =tP

Donde, ho: coeficiente de pelcula entre la superficie del serpentn y el lquido,


; do: dimetro exteror de la tubera del serpentn, m; a: exponente
dependiente db propiedades del fluido tales como viscosidad, capacidad calor
fica y conductividad trmica. Para una evaluacin preliminar, el valor de a,
consistente con otras ecuaciones similares es: a : O,24. La Ecuacin [7.36] se
aplica a un arrollamiento simple. La eficiencia trmica de un segundo arrollamiento con un rea equivalente a la del primero, se estima entre 70 y 90% de
la eficiencia del serpentn simple.
W.m-2.oC-1

7.3.6 Reactores equpados con tubos

vertcales

Los reactores equipados con haces de tubos vertcales aprovechan el efecto


deflector de los haces para generar una accin de mezclado adicional a la
transferencia de calor. Los tubos originan ras de alta turbulencia, Dun[ap'y
Rushton, (1953):
ho'D^

o,(x) ne*

.P:"

(+i'"

(i)" ()'" t7 sr/t

v.cp
k
Donde, no: nmero de haces de tubos; ho: coeficiente de pelfcula entre la superficie de los tubos y el llquido en W.m-2.oC-1. El trabajo de Dunlap y Rushton
dernuestra que en el caso de seis haces de tubos, formado cada uno por tres
tubos de tamao do/D1 = 0,031, (do: dimetro exterior de los tubos; Dr:
dimetro del tanque), los tubos verticales originan una prdida equivalente al 75
o/o

de la potencia consumida por un impulsor en un tanque equipado con


pantallas deflectoras estndar, Cuatro haces de tubos originan una prdida
equivalente al 50 - 60 % de la potencia consumida en un tanque equipado con
deflectores estndar.

434

de placa veftical
7.3.7 Reactores con serpentnes

Y Small' (1978):

R. > 4.103

t7.38I

+ =to,mrzl.n3'*."r".(l
4

< 1,4.103

=(o,rzaa).n:'* r:*

Dor.dc: Re =

+,

t7.391

[tl

n -' u?

Llanchuradelaplaca;ho:coeficientedepelfculaentrelasuperficiedelaplaca
viscosidad del llquido a
p: densidad a"rr"r, * m't. /,:
m.2oc.l;
w
lquido,
v el
''s
de pelfcula' kg'm

Li"rp"t.,ura

media

raspada
.S.Slntercambiadores de superficie

eje rotatorio'

435

La superficie exterior del tubo central est en contacto con vapor de agua o con

el lquido refrigerante. Las porciones de llquido viscoso en contacto con la


superficie de transferencia de calor estn esencialmente en reposo, excepto
cuando son perturbadas por el paso de la hoja raspadora. La transferencia de
calor hacia el lfquido viscoso ocurre en condiciones inestables.

De acuerdo con la siguiente ecuacin, (Skelland, 1958), el coficient de


transferencia de calor sobre una superficie raspada depende de las propiedades
trmicas del lfquido, de su velocidad en la direccin longitudinal, y del dimetro
y longitud del intercambiador:

b? = (4,e).R:'n ,:,'(:?)''" (?)"


Rc=

Dr.v'P

a7.401

;Pr=+

Donde, l-: longitud del intercambiador, m; h,: coeficiente de transferencia de

calor entre la superficie interior del tubo central y el llquido, W.m-',oC-'; v:


velocidad promedio del fluido en la direccin longitudinal, m.s-1; D^: dimetro
interior del tubo central, m; n: velocidad de rotacin del agitador, (revolucioes).s't.

7.3.9

Transferenca de calor en condciones inestables en


recpentes agtados

La ecuacin bsica para el calentamiento

enfriamiento de un caldo de

fermentacin, en un tanque agitado, es:

dQ = U.A.(Tc - TF\.dI = tn-c".dT

f7.411

'Eonde, O: calor transferido, J: Ur coeficiente global de transferencia de calor


entre la superficie de transferencia y el lquido, W.m'.o-t; Ai rea de transfeoC; Tr: temperatura del
rencia de calor, m2; T.: Temperatura del fluido caliente,

436

fluido frfo; /n: masa del caldo en el reactor, kg; co: calor especfico a presin
constante, J.kg''.oC-l; f: tiempo, s.
Si el fluido caliente es un medio de temperatura constante, como en el caso de

vapor de agua a la temperatura de condensacin, y el coeficiente global U se


supone constante, la ecuacin anteriof se puede integrar entre los llmites: t :
0, T, = T.o Y t : tr, T : Tra, Para obtener:

l-m-

T"
T"

- To

- Tru

m.cD,tT

17.42t

u.A

Donde, Tc: temperatura del fluido caliente; Tr: temperatura del fluido fro'

Si el fluido que transfiere calor al caldo no es un medo de temperatura


constante, como en el caso de agua de refrigerain que entra a la temperatura
Tro y sle a Trr, mientras el caldo se enfra desde T"^ hasta T6s, s obtiene:

- Trrt
To - To
Tc^

Fw.crp

R't-1

c.cpc

K1

(u.\

K.=eXDl
I --''
\Fn''o

tr

7.431

Donde, cp, cp6l calores especficos a presin constante del fluido fro y del fluido
o6-t ' Frr: velocidad de flujo de masa de
caliente (caldo), respectivamente, J kg-t

fluido frlo, kg.s-'; mc: masa de fluido caliente (caldo), kg'

Ejemplo

7.2

Transferenca de calor en un reactor aerbGo

Un reactor cilfndrico de 4 m de dimetr provisto de cuatro placas deflectoras


uniformemente espaciadas (J : 0,1'Dr : o,4 m), s agita con tres impulsores

de turbna de seis hojas planas, (Do : Dr/3 : 1,33 m), montados sobre el
mismo eie que gira a 0,8 rps. El tanque de 12,8 m de altura se alimenta con
437

medio de crecimiento a 25 oC (densidad, p : 112O kglm3; viscosidad, p :


O,216 kg/(m.s); calor especfico, c, : 2836 J/(kg.oCl; conductividad trmica,
k : O,44 W.m-1.oC-l1, hasta un nivel de operacin H : 8,g6 m.
La velocidad mxima de consumo de, oxgeno del cultivo es: r(Or) : 0,03 mol
Orl(litro.hora). Se dispone de agua de refrigeracin cuya temperatura vara entre
15 y 18 oC. El tanque se alimenta qon aire estrla 25 oC y 2O,2 psig a razn
de 0,4 vvm (volumen de aire por volumen de licor cada minuto) por un orificio
situado debajo del impulsor. La presin tocal es 10,8 psi.

calcular: 1- Area de transferencia de calor disponible por el sistema de camisa;

2- Area de transferencia de calor disponible por el sistema de serpentn interno


sencillo; 3- calor generado por el cultivo; 4- calor generado por la agitacin del

licor; 5- Calor entregado al licor por la dispersin del aire; 6- Calor total
generado en el reactor; 7- Coeficiente de transferencia de calor entre el lquido
en el reactor y la superficie interior del recipiente encamisado; B- Coeficiente de
transferencia de calgr erltre el lquido en el reactor y la superficie exterior del
serpentn; 9- Area de transferencia de calor requerida por el sistema de camisa;
10- Area de transferencia de calor requerida por el sistema de serpentn
Solucin:
1- Area de transferencia de calor disponible por el sistema de camisa, Ecuacin
f7.231:

A, = n.Dr.H = .4.(8,96) = 112,6 m2


2- Area de transferencia de calor disponible por el sistema de serpentn:
Dimetro exterior del tubo del serpentn:

Separacin entre dos espiras adyacentes

: 2.d:

0,0508

7,17 m

- Altura del serpentln:

Hs': 0,8.H -

1 pulgada

(O,8).(8,96 m)

- Nmero de espiras:

,ro=fl,
" e +l=

438

7,17 +1=142

0,0508

esoias

0,0254 m
m

- Dimetro interior del serpentln:


Ds = 0,8.Dr = (O8).@

nl

= 3,2 m

- Area del serpentfn (Ecuacin 17.24ll:

.,

= ,2.d.Ds.ns = 2.(0,0?#1.@,2.(1421

i,

115,9 m2

- Volumen de licor:
'ns

v,

=lfd2,6
X,(4)2.(s,go)

'

3- Calor generado por el cultivo, qrrr, Ecuacin [3.71]:

a!,2+ a-o,@mol oz ! -tu o

s- = ,*t

o,

-ffi

36oo

4 = Q1,1

kW

4- Calor generado po la agitacin del-licor,

:r

Iirros
-"i
s\"-'-*'
'12.6@)

qoorr:

- Caudal de aire:
.l

'.r

D =- 0,4.(112,6)= u'lo
o,
-8r^aE m-F

--b-

- Nmero de Reynolds:
n_ =

"

0,8.(1,)2.1120
0,216

=77.

: P" : 6, (Figura 7.31, y la potencia, P, disipada por el


impulsor en el lquido sin gasear, Ecuacin [7.13], es:

- Por consiguiente, O

P = 6.(1120).(0,8)3.(1,33)s = 14118,5 w

439

- Nmero de Froude:

Fn=

o2,Q*

= 0,087

9,8

- Nmero de aeracin:

F^

0,75

' ,.ol =,. 0,8.(1,q0)"

A-=

=o.gga

- Potencia disipada en el lquido gaseado, (Ecuacin 7.17t':

-2.

(f}*.*3'"'.

(+

)',*.

Pc = (0,45).(14f!18,5) = W2

bsrc

.1P^

,og,o = -

t,

q*7

;t

- Potencia disipada en el lfquido gaseado, (Ecuacin 7'16):

?=0,*.

+ (16,67).(0,398)

= 0,4.35 .i -.

P6 = (0,435).(1.818,5) =.6221.5 W
- Potencia disipada por los tres impulsores:
3.(6440,2) = 19.320,6

- Potencia disipada por'unitid de volume,pe licor:

. ,:

4rto

=.

1?:1?

-0,172

kw-,

=.

5- Calor entregado al licor por la dispersin del aire:

- Velocidad del aire en la tuberla: se supone que el aire llega al dispersor'a 25


oC y 2O,2 psig por una tuberfa de 4 pulgadas de dimetro:

n, = &-L
= 2,51
L 1+.o,ozil nz
4'

mls

- Velocidad del aire en el reactor:

v^

= o'76

t+

msls

*t'

o,o6 nls

- Densidad del aire en el fondo de reactor:

(N,2 * 10,8\ 101,325 ft,f Zkg

'

'b''I
P.M t t4z |--,z
R.T (8,g14lu.hnot-r.tr-t.(25 + 273)K
p = 2,5 kg-^-"

- Velocidad de fluio de masa del aire:

m.
= o.r5 .25
'--as't9s

= 1,075

&

- La prdida de presin de tas burbujas en el feactor equivale a la profundidad


del licor, (Hr = 8,96 m):

ur=

= B,e6

P.-

,, =
,,#frO

g"

r = ge.i,go

L*, = 14,fi ?rie

441

- Presin en la cima del reactor:

po = 2O,2

- 14/8 -- 5p4 psig

- Potencia entregada al licor por la dispersin del aire:

,1+i.ff,.*)^^

lEcu. 7.10I

, = ((ge,sl,'t (o,oet').r,rru .

("#_:-'.

ffi]f)'r'ezs

= 1'728'7 w

Donde, v*: velocidad dl gas.en el reactor; g": factor de conversin de la ley de


Newton (1 kg.m.s2.N-1); p: presin en el punto de salida de aire por ta tobera
en el fondo del reactor; po: presin en la cima del reactor ; R: constante de los
gases, 8314 J.kmol-1.K-1; Mr: peso molecular del gas (M,n: 29 kg.kmoi'tl; T:
temperatura absoluta delgas, K;'m^: velocidad de flujo de masa de gas, kg.s''.

6- Calor total generado en el reactor


El calor total generado en el reactor es la suma de la potencias entregadas al
fluido por metabolismo, agitacin mecnica y por la dispersin del aire:

q = 421.1) + 19;320,6 +'16.728,7 = 547.1

7- Coeficiente de transferencia de calor entre el lquido en el reactor y la superficie interior del recipiente encamisado:

- Nmero de Prandtl:
P_
'f

442

_ (o'216).(2E36) = 1392,2
0,4

- Coeficiente de transferencia de calor, sistema de camisa, Ecuacin 17.321:

"" -

(0,74).-(o'441

.n?.p)F

!t3,21

m2."c

En este problema no se conoce la viscosidad del licor a la tennperatura de la


pared, pr. Sjn embargo, como la diferencia de temperatura entre la pared de la
camisa y la temperatura del licor es pequea, la relacin de viscosidades plp" es
aproximadamente igual a 1.
B- Coeficiente de transferencia de calor entre el llquido en el reactor y la super-

ficie exterior del serpentn, Ecuacin [7.36]:

u. =

W^:,
ho

r?*(+)o'i(0,%2s4[s

= '1156,2

9- Area de transferencia de calor requerida por el sistema de camisa:

q = 547.150 W = ho.A.7 = (W,21).-(25

A = 227,8 m2 >

18)

112,6 m2

generado. Adems de la camisa se requiere un rea adicional de serpentn..


10- Area de transferencia requerida por el sistema de serpentn:
4:

= 547.150 W = ho.A.AT =

A = 67,6 m2 <

(1

.1#,2)-A.(25

113,9

18)

r2

Por consiguiente el rea exterior de un sistema de serpentln sencillo

es

suficiente para remover el calor gnerado.

443

7.4

TRANSFERENCA DE MASA

7.4.1 lntroduccin

En una fermentacin aerbica por lotes la masa celular y por consiguiente la


demanda de oxgeno aumentan exponencialmente. En etas condiciones
generalmente no es posible mantenel constante la concentracin, C., de oxlgeno
disuelto, por la necesidad de equilibrar la velocidad de demanda de oxgeno
IOURI con la velocidad de transferencia de oxlgeno (OIR) mediante la manipulacin de las variables de operacin.

Et oxlgeno suministrado usualmente mediante burbujeo de aire al caldo es


transferdo desde una burbuja hacia el llquido y luego hacia la pared celular y a
travs de la pared. La mayor resistencia a la transferencia de oxlgeno se
presenta en la superficie de separacin gas-lquido entre la burbuja y el volumen
del lquido. Este fenmeno se manifiesta mediante una diferencia de concentraciones que limita la velocidad de transferencia de oxgeno:
OTR

dc"
=

dt

Kfi.(C.- C)

f7.41

Donde, OTR: velocidad de transferencia de oxlgeno g/(litro'sl; Kra: coeficiente


volumtrico de transferencia de masa, s-I ; C-: concentracin de oxgeno en la
superficie de separacin gas-lfquido, g/litro; C,.: concentracin de oxgeno en el
caldo, g/litro.
La velocidad de transferencia de oxgeno (OIF) puede equilibrarse con la veloci-

dad de demanda de oxgeno lOURl, para una diferencia dada de concentraciones, (C- - C.), mediante la modificacin de algunas condiciones delproceso tales
como la velocidad del impulsor, o el cadal de gas. Una alimentacin de aire
rico en oxgeno aumenta el vlor de C-.

Uno de los factores mas importantes en el diseo de un fermentador es la


provisin de una mezcla adecuada de su contenido. El propsito del mezclador
en fermentacin es dispersar las burbujas de aire hacia los microorganismos, o
clulas de tejidos animales y vegetales, y favorecer la transferencia de masa y

444

de calor hacia el medio, Armenante y Kirwan,

1989. La mayorla de los

nutrentes, excepto eloxfgeno, son altamente solubles en agua, y prcticamente


no requieren una accin previa de mezclado para ser consumidos por los microorganismos.

En la prctica normal de la lngenierla Bioqufmica se utiliza aire estril para


satisfacer la demanda de oxgeno durante una fermentacin aerobia, pero
mientras la demanda de oxlgeno para crecimiento aerobico es alta, la solubilidad
del oxgeno en el medio es muy baia. En la Tabla 7 .2 se presentan los valores
de la solubilidad del oxfgeno, a 1 atmsfeta, en agua, a diversas temperaturas.
El valor de la concentracin de oxfgeno en agua, en equilibrio con aire, C*,, a
presin atmosfrica, se calcula segrfn la ley de Henry:

ci=

P(o)

f7,451

H(O2,7\)

Donde, O(O2): presin parcial de oxfgeno; H(Or,T): constante de la ley de Henry


para O, a la temperatura T.

Tabla 7.2 Solubilidad del.oxfgeno en agua a 1 atmsfera.. El valor de la


solubilidad es el correspondiente a la mxima concentracin de oxgeno en agua,
en equilibrio con oxfgeno puro.
Solubilidad

Temperatura

oc
0

mmol,Orllitro
2,!8

10
15
20

1,70
1_ ,54
1,38

25

1-,26

30
35

7,76
1,09
1,03

40

mg Orllitro
69 ,8
54 ,5
49 ,3

44,2
40, 3
37
34

,9
,9

33,

lnternational Critical Tables, Vol lll, p.271 , McGraw-Hill Book Co', New York,
1928.
445

El valor de la constante de la ley de Henry se obtiene de la Tabla 7.2. por


ejemplo, a 30oC, C-,_ : 1,16 mrnol Orllitro y P(Or) : 1 atmsfera, si se tiene
en cuenta que el gas es oxgeno puro. Despus de sustituir estos valores en la

Ecuacin 7 .451 se obtiene el valor de la constante de Henry para O, a ,la


temperatura T : 30 oc:1|fi,16) : 0,862, La concentracin de equilibrio det
oxgeno en el sistema aire-agua a 30oC es:

0,242 mmol O,
litro

c.

= 0,242

O" a mg Oz
litro .
mmol 02

mmol

eL--

= 7,75

mg Oz
tro

La demanda de oxgeno de los microorganismos en una fermentacin aerobia


vara ampliamente, segn el tipo de microrganismos; pero es del orden de l
g/(litro'hora). Por consiguiente, si no se suministra oxfgeno coRtinuamente, el
oxgeno presente en un caldo saturado de oxgeno sera consumido por los
microorganismos en un tiempo muy corto (Ejemplo 7.41; una falla de este
suministro puede afectar irreversiblemente las clulas. El metabolsmo de un
cultivo es afectado por la concentracin de oxfgeno'disuelto en el caldo. La
velocidad especfica de la dernanda de oxlgeno sigue generalrnente una cintica
del tipo Michaelis-Menten tal como se muestra esquemticamente en la Figur

7.7.
Los valores d saturacih de oxgeno disuelto en agua expuesta a aire saturado
con agua a presiones diferentes de 760 mm Hg., son calculados a partir de los

valores anotados en la Tabla 7,3, mediante la ecuacin:

c = P-'p
C* 760-p

t7.46t

Donde, C*: concentracin de oxgeno en agua, en equilibrio con aire, a presin


atmosfrica (valores anotados en la Tabla 7.3), mg Orllitro; C: concentracin de
oxgeno en agua, en equilibrio con aire, a una presin P diferente de la atmosfrica, mg Orllitro; P: presin absoluta, mm Hg.; p: presin del vapor saturado de
agua a la temperatura del agua, mm Hg.

446

Tbla 7.3 Valores de saturacin de oxgeno disueho en agua expuesta a aire


saturado con agua''. El aire a760 mm Hg contiene 20,9 o/o de oxfgeno.

Temperatura Concentracin de cloruros


oC
en agua, mg/litto
., 0

5000

Presin de
vapor mm Hg

10000

Oxgeno disuetto, mg/litro


o
2
3

14,6
14,2
13,8
13,5

13,"1

5
6

12,8
12,5
12,2
1,9
1,6
1,3

I
I

10
11

1,1

12
13

10,8
10,6
10,4
10,2

14
15

16'
17
18

10,o
9,7
9,5
9,4
9,2
9,0

13,0
12,6
12,3

12,7

12,O

12,4

11 ,7
11 ,4
11 ,1

6
6

13,8

13,4
13,1

12,1

1,8
1 1,5
11,2
1 1,0
10,7
10,5
10,3
1

10,1

9,9
9,7
9,5
9,3
9,1

''

10,9
'l 0,6
10,4
10,1

5
5

7
7

8
8

9,9

10

s,7

11
11

9,5
9,3
9,1

12
13

s,0

14

8,8
8,6
8,5
8,3

15
16
17

8,1

19

8,8
8,7

8,9
8,7
8,6
8,4
8,3

I,O

20

8,5

8,1

7,7

22

25
26
27

8,4

8,0

7,6

24

8,2

7,4

28

7,9
7,8
7,6

7,8
7,7
1,5

19

20
21

22
23
24

29

30

8,1

18

7,9

7,1

25
27
28

7,4

7,O

30

7,3

6,9

32

7,3

Hammer, M.J.,'Water and waste-watertechnology". Sl Version. John Wiley


& Sons, lnc., New York, 1977.

447

oC, con
Asl, por ejemplo, la concentracin de oxgeno disuelto en agua a 15
'na concentracin de cloruros de 2000 mg/litro, en un tanque a una presin
manom&trica de 8 psig, en un sitio donde la presin baromtrica es 11 psi. se
calcula. en los siguientes pasos:
- La concentrciOn de oxgeno disuelto en agua a 15 oC, con una concentracin

de cloruros de 2000 mg/litro, segrfn la Tabla 7.3, es:

C- =

1O.2

(10,2

- 9'4'2000 5000

- La concentracin de oxgeno disuelto, corregida para una presin manomtrica


de 8 psig, y una presin baromtrica de 11 .psi, segn la Ecuacin [7.46], es:

(8 + 111 psia .760 nm HS


14,7 psi

c = ro . fe82'3 -

13)

[760-13)

= 992,3 mm Hg

= re.gz

mg Oz

to

Fjgura 7.7' Representacin esquemtica del efecto de la concentracn de


oxgeno disuelto sobre la velocidad especlfica de demanda de oxfgeno, plOl,
(mmol de O, consumido)/(g de clulas secas. hora).

Welocdo.d
espectFtco.
de
consLrr,o cle
oxlgeno

Concentro.clon
crltlco.
Concentro.con

448

de

o><geno disLlelto

Tabla

7.4

Solubilidad del oxfgeno en una solucin de sal o de cido a 25oC,


(Todt, F,, 19581

Concentracin

SolubiIidad, mmol O"/litro


H2SO4
NaCl
HCl

0,0
0,s
1r0
2,0

7-,25

mo1/Iitro

Tabla

,27

l,2L

)-

,1-6

L,L2

7.5

L,26

7-

1,26
1- ,07
0,89

,12

I ,02

0 ,71-

Nivel crftico de oxgeno disuelto para la viabilidad de algunos


microorganismos, Riviere, J., 11977l .

Organismos

Temperatura
oc

Azotobacter sp.
Escherichia coli
Saccharomyces sp.

Penici l- I ium chrysogenum

30
37
30
24

Concent,racin crtica
de O, disuelto en
mmol Or/1iEro
0, 018
0, 008
0, 004
0 ,022

El valor de la solubilidad del oxfgeno disminuye con la presencia de cdos o


sales tal como se muestra en las Tablas 7.3 v 7.4. La Tabla 7.5 pregenta
algunos ejemplos de los niveles crfticos de oxlgeno para viabilidad de algunos
microorganismos.

La velocidad especfica aumenta al incrementar el nivel de oxfgeno disuelt(i


hasta un cierto punto, denominado concentracin crtica, por enima del cual no
hay un aumento apreciable de la velocidad de demanda de oxgeno. En trminos
de dimensionamiento la situacin ms frecuente es permitr a las clulas respirar
a su mxima velocidad, aspecto que significa mantener una concentracin de
oxfgeno disuelto en el medio por encima del valor crftico.

449

.4.2 Determinacin experimental

del coeficiente de transferencia

.de oxgeno

7.4.2.1 Mtodo

de oxidacin de una solucin de sulfito de sodio

El mtodo de oxidacin de una solucin de sulfito de sodio, descrito por Cooper


et al., (1944), se fundamenta en la oxidacin de una solucin 0,S M de sulfito
de sodio hasta sulfato de sodio en presencia de un catalzador, (Cu * * o Co + * ):

NarSO, + 0,5 02 -----> NarSOo


La velocidad de esta reaccin es tal que todo el oxgeno que entra en solucin

es inmediatamente consumido en la oxidacn del sulfito, de manera que la


velocidad de oxidacin del sulfito es equivalente a la velocidad de transferencia
de oxgeno, En la prctica, la concentracin de oxgeno disuelto, C., es igual a
cero, y la Ecuacin 7.441se convierte en:
oTR

dC"
=

dt

Kra.C'

17.471

Con el propsito de medir la velocidad de transferencia de oxgeno se alimenta


el reactor con una solucin 1 N de sulfito de sodio y iones Cq** en concentra-

cin de O,OOS N4. Se inicia la alimentacin de aire i se pulsa el cronmetro


cuando las primeras burbujas de aire emergen del dispersor.
Despus de un perfodo de oxidacin, entre 4 y 20 minutos, se realizan las
siguientes acciones simultneamente: se suspende la agitacin y la alimentacin
de aire, se toma una muestra y se anota el tiempo marcado por el cronmetro.
Cada muestra se mezcla con un exceso de reactivo estndar de yoQuro, recin
preparado. La titulacin se realiza con solucin de tiosulfato (NarSrO.) hasta el
punto final con un indicador de almidn.
El mtodo de oxidacin del sulfito d' sodio es sensible a la contaminacin por
agentes de superficie activa tales como aminocidos, protenas, cidos grasos,
steres y lpidos. Adems, la reologa de una solucin de sulfito de sodio es

450

completamente diferente a la de un caldo de fermentacin. El costo del sifito


de sodio y el tiempo requerido para cada determinacin, usualmente de varias
horas de acuerdo con las velocidades de aeracin y de agitacin, dificultan su
aplicacin a escala industrial. Sin embargo, el mtodo es til para confrontar

resultados obtenidos con diferentes fermentadores y estudiar los efectos del


cambio de escala y de las condiciones de operacin sobre la transferencia de
masa.

7.4.2.2 Mtodo

de! balance de oxgen

El mtodo del balance de oxgeno se fundamenta en la determinacin directa de


la cantidad de oxgeno transferida a la solucin en un determinado intervalo de

tiempo. El procedimiento incluye la medicin de tos siguientes

parmetios:
volumen del caldo en el fermentador, Vr, litros; caudal de aire afluente, O,
litros/s; caudal de gases efluentes, Or; presin absoluta de los gases efluentes,
PE; temperatura del afluente, To, K; temperatura de los gases efluentes, T.;
fraccin molar del oxfgeno en el aire afluente, Yo, mol Orlmol aire; fraccin
molar del oxgeno en los gases efluentes, Yr. La demanda de oxgeno se calcula
a partr de las siguientes ecuaciones:

n=-P.V
R.T

t7.481

Donde, n: gramos molde Or; R: constante de los gases, R : 0,08206 (atmsfera.litro)i(gmol.K); P: presin absoluta, atmsferas; V: volumen, litros; T:
temperatura absoluta, K.

n I Ie^.P^.Y^- eE.PE.YE]

1=l'la
Donde,

Or = V/U

Oe

orR. =

Ve/t;

dc"

dt

n/t

r,

17.49t

(gmol Or)/s.

t lQ^'p^'v^
RL TA -

QE'PE'YEI.

TE )V,

17.50]

451

Dondg, OTR: velscidad de transferencia de oxlgeno: (gmol de Or)/(litro de


caldo.s); C.: concentracin de oxgeno en el caldo, gmol/litro; Vr: volumen del
caldo en el fermentador, litros.
Estas determinaciones requieren la utiiizacin de medidores precisos de flujo,
temperatura y presin y un analizador de oxgeno gaseoso, El analizador
paramagntico de oxgeno es lo suficientemente exacto como para detectar
cambios de la concentracin de oxgeno entre 1 y 2 o/o. Una vez establecda la
demanda de oxgeno, OTR, se calcula el coeficiente Kra a partr de la Ecuacin
17 .441, donde C. es la concentracn de ogeno en el caldo y C- la concentra-

cin de oxlgeno en equilibrio con la corrente de gas. La concentracin de


oxgeno en el caldo se mide usualmente mediante un sensor en lnea. La
variacin de (C- - C,_) es pequea si el volumen del fermentador es menor que
50 litros. En el caso de fermentadores de mayor volumen se recomienda la
utilizacin de la diferencia media de logarftmica de las concentraciones C- y C.
entre la entrada y la salida de gas:

C'-C,

(c'-c"l^-(c. -cr),
t7.51I

7.4.2.3 Mtodo esttco

Los mtodos de evaluacin delcoeficiente de transferencia de oxlgeno mediante


tcnicas de desgasificacin requieren una reduccin previa de la concentracin
de oxgeno disuelto hasta un valor ligeramente superior al crtico con el propsito de medir el incremento de la concentracin de oxgeno disuelto en el caldo
durante un perodo adecuado de aeracin y agitacin. En el mtodo esttico
descrito por Wise, (1951), se reduce la concentracin de oxgeno mediante la
gasificacin del lquido con nitrgeno gaseoso, de manera que la solucin es
despojada de oxlgeno. Entonces el lquido desoxigenado es aerado y agitado
con el objeto de medir el incremento de la concentracin de oxgeno disuelto
durante un tiempo t.

452

La velocidad de transferencia de oxfgeno es igual a la pendiente de la tangente


a la curva de valores de concentracin de oxfgeno disuelto'n funcin deltiempo
de aeracin tal como se muestra en !a Figura 7.8, de acuerdo con la Ecuacin

t7.441:

AR

dC,
dt

R.(c'- c)

Ecu- 7-Utl

La integracin de la Ecuacin 17.441conduce a la siguiente expresin:

ln(c' - cr\ = - kra.t

f7.52t

Por consiguiente, la representacin grfica de ln (C' - C.) versus tiempo


corresponde a una lfnea recta cuya pendiente es (- K.a) como se muestra en la
Figura 7.9.
Figura 7.8 Representacin esquemtica de la concentracin de oxfgeno disuelto
en una solucin durante el perfodo de aeracin. La velocidad de transferencia de
oxfgeno, dCL/dt, lmmol de O, consumido)/(litro.hora), en eltempo t = t es igual

a la pendiente de la tangente a la curva en ese momento.

C
d
d

ton

t=t
Tiempo
----+

453

Figura 7.9 Representacin esquemtica de de la determinacin de K,_a por el


mtodo esttco de desgasificacin. La pendiente de, la curva es igual a (- Kra)

ln (cx

c)
pendien t e,
Kl.o

iernpo ---------+

La determinacin de Kra por el mtodo esttico tambin se reali4,a en el caldo

de fermentacin, agregandole clulas muertas o micelio para simular la


concentracin del medio real. El detector del cambio de la concentracin de
oxlgeno disuelto normalmente es del tipo recubierto por membrana, a causa de
la naturaleza compleja de los caldos de fermentacin. Adems el punto donde
se realiza la determinacin debe ser representativo de todo el volumen del caldo.
El tiempo de respuesta del detector, definido como el tempo necesario para
registrar un 63 7o de un cambio repentno, debe ser mucho menor que el tiempo

de respuesta a la transferencia de masa del sistema

(1

/K.a). Taguchi y

Humphrey, (1966), analizaron la utilizacin de factores de correccin deltiempo


de respuesta.
Segn Van't Riet, (1979), elempleo de electrodos comerciales con tiempos de
respuesta entre 2 y 3 segundos permite la determinacin precisa de valores de
K.a hasta 360 (horas)-r, mayores valores de Kra requieren un factor de correccin de la respuesta. La principal desventaja de este mtodo es su dependencia
de las mediciones realizadas en un slo punto del fermentador el cual puede no
ser representativo de todo el volumen del medio.

454

7.4.2.4 Mtodo

dinmico

En el mtodo dinmico descrito por Bandyopadhyay, Humphrey y Taguchi,


(1967), se utiliza la actividad respiratoria de un cultivo en crecimiento para
disminuir el contenido de oxgeno del caldo antes de reiniciar la aeracin. La
Figura 7.1O ilustra esquemtcamente este procedimiento.
La concentracin de oxgeno en el fermentador antes del punto A es estable. El
suministro de aire se suspende repentinamente en el punto A, entonces el valor
de K.a es igual a cero y la pendiente de la lnea AB es una medida de la
velocidad de respiracin del cultivo:

dc.

lt(Oz)x

t7.531

"
La aeracin se reinicia en el punto B (Figura 7.1O!. y la concentracin de oxgeno
disuelto aumenta hasta alcanzar el valor inicial, El incremento observado de la

concentracin de oxgeno disuelto en el perfodo BC es la diferenca entre Ia


transferencia de oxgeno hacia la solucin y la demanda de oxfgeno por la
respracin del cultivo:
t7.541

:-.

Donde, UlO2l: velocidad especfica de respiracn, (g O2ll{.g clulas.hora); x:


concentracin de clulas: gramos de clulas secas/litro; C,: concentracin de
oxgeno disuelto en el fermentador. Esta ecuacin tambin se puede expresar
como:

c,=ci-+(+

-no,).r)

t7.551

La representacin grfica de la Ecuacin [7.55], (Figura 7.'11l., con C,- en las


ordenadas v (dC./dt + p(Oz).x)en las abcisas, es una lnea recta cuya pendiente
es (- 1/K.a). La recta se construye con los valores de las tangentes a la curva
BC, Figura 7.10, corrrespondientes a diferentes valores de Cr.

455

Figura 7.10 Representacin esquemtca de la determinacin de Ka por el


mtodo de desgasificacin dinmica. La aeracin se suspende en el punto A y
se reinicia en elpunto B; r(Or) : plOrl.x: velocidad de respiraci6, (g Or)/(litro.
hora).

ian

,d

pendienter

Tienpo

..-

fJgra 7.11 Representacin esquemtca de ta determinacin det coeficiente


volumtrico de transferencia de oxgeno, K.a, por el intodo dinmico de
desqasificacin; r(Oz) = plQrl.x: velocidad de r.espifacin, (g Or)/(litro.hora).

pendiEnte

dC/
456

dt, + rtr?

7.4.3 Coeficiente de transferencia de masa

El mtodo dinmico permite la determinacin de Kra en diferentes etapas del


proceso. La principal limitacin de este mtodo radica en la necesidad de
mantener la concentracin de oxlgeno disuelto por encima del valor crltico.
Adems, el mtodo se basa en mediciones realizadas en un punto del fermentador, las cuales slo son representativas si el contenido del reactor est
adecuadamente mezclado.
El coeficiente de transferencia de masa es afectado por la configuracin del
fermentador y por las propiedades ffsicas del sistema gas-lfquido. Usualmente
las ecuaciones de transferencia de masa son expresadas mediante grupos
adimensionales obtenidos por el mtodo de Buckingham Pi a partir de una lista
de las variables que influyen sobre el proceso. Los coeficientes y exponentes de
las ecuaciones obtenidas son deducidos mediante el ajuste de datos experimentales.
La evidencia experimental indica que estas ecuaciones son tiles para predecir
el valor del coeficiente de transferencia de masa, Kr, y del coeficiente volumtrico de transferencia de masa, K,_a, inclusive si los aspectos fundamentales
de la mecnica de fluidos no aparecen expllcitamente, La relacin entre la
potencia entregada alfluido y el volumen del caldo, Pfy', probablemente incluye
todos los efectos del nmero de Reynolds y de la viscosidad si se tiene en
cuenta que el consumo de potencia depende de cada fluido. La evaluacin del
coeficiente de transferencia de masa mediante ecuaciones emplricas depende
de las condiciones de operacin y de la configuracin del tanque elegido.
Desafortunadamente muchas de las ecuaciones empricas disponibles no
informan sobre la constante de proporcionalidad o sobre las condiciones de

operacin empleadas en los ensayos realizados para su deduccin, aspecto que


limita su empleo.
Calderbank y Moo-Young, 1961, presentan las siguientes ecuaciones, confirmadas por Calderbank y Jones, 1961, para evaluar el coeficiente de transferencia de masa en dippersiones gas-lquido con partculas slidas de baia densidad
en ractores agitados. Las partculas simulan la transferencia de masa entre

burbujas de dimetro menor que 2,5 mm

y los microorganismos en los

fermentadores:

457

t7.56I

shs = 2 + 0,31 .(Sch)1B.(era1o

Dorrde: Sherwood

Graslnf

*you,

Schni

DAB

Dil.p".s-t
=

[tc

P"'Dt

lc

Para burbujas de dimetro mayor que

2,5 mm:

Slrc = 0,42.(Sch)lP.

(eratts

17.571

Donde, K.-: coeficiente de transferencia de masa, m/s; Dsz: dimetro medio de


Sauter, m; Dor: difusividad del componente A en el componente B, rn2ls;-t.:
viscosidad de la fase continua, kg/(m.s); p": densidad de la fase continua,
kg/m3; g: aceleracin de la gravedad, 9,8 m/s2; Ap: diferencia de densidades
entre lquido y gas.

Van't Riet (19791, presenta la siguiente ecuacin para evaluar la transferencia


de oxgeno en agua en reactores agitados mecncamente cuyo volumen vara

entre2y2600

litros:

K,a

0,026(l)"'.,:,'

t7.58I

Donde, K.a: coeficiente de transferencia de masa por unidad'de volumen,'s-l,


calculado con una aproximacin entre 20 y 4Oo/o; P: potencia ntregada al
fluido, W; V: volumen del caldo delfermentador, m3; v": velocidd superficial del
aire, m/s; v" : O/A; O: caudalde gas, m3/s; A: rea transversal: A : lnl4l.D2;
Dr: dimetro del fermentador, m.

Van't iliet, (1979) recomiendala siguiente ecuaciri para evaluar K,-a, con una
aproximabin entre 20 y 40 o/o, n el caso de transferencia de'oxgeno en
soluiones de electrlitos fuertes, no coalescentes, en fermentadores agitados
mecnicamente cuyo volumen vara entre 2 y 4400 litros:

458

K,a = oo02.(l)"

.r:,

t7.591

Las ecuaciones [7.58] y t7.591 son aplicables en reactores provistos con diversos tipos de agitadores, diferentes valores de la relacin entre el dimetro del

impulsor

y gl dimetro del tanque, D./Dr, y una

relacin entre la potencia


500 < P_/V <

disipada por impulsor y el volumen del caldo en el intervalo,


10.0OO W/m3.

Humphrey fi977l, recomienda laS siguientes ecuaciones para evaluar K.a, en


tanques agitados mecnicamente segn el volumen del fermentador;

*," = * (+)''*',*'

.""=.-(+)

t7.601

: ptanra pitoto

t7.61I

.v!'5 : ptantas fu prodtpcin

Donde, K: constante dependiente de la configuracin del sstema

y de las

unidades empleadas.
La Ecuacin t7.601 se conoce como ecuacin de Cooper et al., (1944), quienes
evaluaron el coeficiente de transferencia de masa por el mtodo de oxidacn del

sulfito en reactores hasta de 67 ltros de capacidad, aerados y agitados por un


impulsor. Bartholomeu, (1960), despus de evaluar el coeficiente de transferencia de masa en reactores aerados y agitados provistos de dos o ms impulsores,
recomienda los siguientes exponentes para el trmino PnlV de la ecuacin de
Cooper: reactores a escala de laboratorio: 0,95; reactores a escala de planta
piloto: 0,67; reactores a escala de planta de produccin: 0,5.
Akita y Yoshida, (1 973), presentan la siguiente ecuacin para calcular el coeficiente de transferencia de oxgeno en diferentes soluciones acuosas en
columnas de burbujeo:

K,a = (0,6) . Dfil . v t"".

(*

oo'tt

.,

o'ett.

1'r

17.621

)''62

459

Donde, Dor: difusividad del componente A en el componente B, m'ls; vr:


viscosidad cinemtica del caldo, m'lsi o: tensin superficial, m2lst pci densidad
del caldo, kg/m3; Dr: dimetro deltanque, m; g: aceleracin de la gravedad, 9,8
mls2; tlt: fraccin volumtrica del gas en la fase dispersa, adimensional; Kra:
coeficiente volumtrico de transferencia de masa, s-t.
Botton et al., (1980), presentan la siguiente ecuacin aplicable a columnas de
burbujeo, donde la velocidad superficial del gas vara en el intervalo: 0 < v" <
0,15 m/s, y la relacin entre la potencia disipada porel gas dispersado, Pn, Y el
volumen del qaldo. V, vara entre: 100 < PslV < 1 I00 Wm3:

H=(#i" ,
7.4.4

(+)

='*(#)"

t7.63I

Evaluacin del oeficiente de transferencia de masa

El coeficiente volumtrico de transferencia de masa es la combinacin de dos


parmetros experimentales, coeficiente de transferencia de masa y el rea de la
superficie de separacin gas-llquido lrea interfaciall:

K,A

Kt=L

17.641

Donde, K,-: coeficiente de,transferencia de oxgeno, cm/s; K.a: coeficiente


volumtrico de transferencia de oxgeno en s-'; a: rea de la superficie de
separacin gas-llquido por unidad de volumen de dispersin cm'/cm3:

a= 6.
De

t7.651

Donde, rp: fraccin volumtrica del gas en la fase dispersa lholdupl; Drr:
dimetro medio de Sauter:

460

rl,

Dg=

n.dl
n.dl

t7.661

Donde, d,: dimetro de las burbujas; Ho: altura ocupada por el lquido aerado:

Ho:

attura del lquido sin aeraf; n: nmero de burbujas'


La Figura 7.12 es una representacin esquemtca de! sistema de medicin del

dimetro medio de las burbujas empleado por Ho et al.,(1987). Las burbujas


son retiradas de la dispersin a travs de un tubo capilar de vidrio calibrado de
acuerdo con el mtodo descrito por Topiwala y Hamer, {'1974!.' El volumen de
cada burbuja se mide directamente en eltubo capilar. Las burbujas de dimetro
inferior al del tubo son consideradas esfricas, en tanto que aquellas burbuias
de dimetro mayor son tratadas como cilindros con extremos hemisfricos. La
fraccin volumtrica del gas en la fase dispersa se obtene a partr del cambio
de nivel del llquido en el reactor ocasionado por la aeracin del lquido agitado.

Figura

7.12 Representacin esquemtca del sistema de medicin del dimetro


de las burbujas.

Sstemq de nedcon

del votuT en de los


burbuos
Re

Bolbo

de Ftu3o

/'
Lineo de succon

Detector

rogeno

det nivel
de tlquido

de hurbuos

Pontqtlq

deftectorq

CSTR

461

7.4.5

Fraccin volumtrica del gas en la fase dispersa

La fraccin volumtrica del gas en la fase dispersa, conocida tambin como


retencin de ga, lholdupl, depende principatmente de la velocidad superficial
del gas y del consumo de potencia. En algunos casos et gas provee pbr s
mismo suficiente agitacin del lquido, pero con mayor frecuencia se utiliza un
impulsor, preferencialmente tipo turbna, para dispersar el gas y hacer ciictrlar
ladispersin lquido-gas a travs del'reactor. La retericin de gas es uno de los
parmetros ms sehsbles a las propiedades fsicas del lquido.

7.4.5.1

Dispersin de aire en sstemas sin agitacin mecnica

Normalmente el aire se alimenta al reactor a travs de un orificio en una tubera


sumergida, de un dispersor tipo regadera, o a travs de una placa porosa o de

material cermico. Akita y Yoshida (1973), investigaron la distribucin de


tamao de las burbujas en columnas de burbujeo, mediaete tcnicas fotogrficas, y recomiendan la siguiente ecuacin:

. r-r o,"[4,=)'^[f)'^'[)
=

t7.671

Donde, r: retencin de gas; D": dimetro de la columna de burbujeo; g: 9,8


mls2; p": densidad de la fase continua, kg/m3; o: tensin superficial, kglm2; v.:
viscosidad cinemtica de la fase continua, m2ls; v": veiocidad superficial,.m/s;
vs : O/A; O: caudal de gas, m3/s; A: rea transversal.de la columna, m2. Akta
y Kawasaki (1983), analizaron la retencin de gas en reactores de circulacin
lquida impulsada por aire "airlift" y Sridhar y Potter, (1980), relacionaron la
retencin de gas, qt, con la velocidad de ascenso de las burbujas, vo, y la
velocidad superficial, vr:
v

u= vs+vl

462

t7.681

7.4.5.2

Dispersin de aire en sistemas con agitacin mecnica

Calderbank, (19671, presenta las siguientes ecuacones, vlidas para una


retencin de gas, W < Q,15. El tamao medio de las burbujas de aire en una
disolucin db electrlitos, generalmente es menor que en agua pura con el
consiguiente aumento del rea de la superficie de separacin gas-lfquido (rea
interfaciall y la retencin de gas, ry:

* = l"' )oo + 2,16.,0 . (+)".01,1,__..(


\ur

0,5

t7.69t

Donde, v.: velocidad superficial, m/s; v. : FolA; Fo: caudal de gas, m3/s; A:
rea transversat de la'columna, m2; u.: velocidad de flotacin de las burbujas,
mlsi o: tensin superficial, kg/s?; PrAy': potencia entregada por impulsor y por
unidad de volumen en la dispersin gas-lfquido, Wm3; p": densidad del lquido,
kg/m3.
El dimetro medio de Sauter, Drr, de las burbujas de aire en la ecuacin anterior

segn Caldrbank, (1967), es:

De. =

O,U,''(?)

.p;02. 0,5 * g.1O-1

17.70t

Donde todos los trminos tienen el mismo significado y las mismas unidades que
en la Ecuacin t7.691.

El rea de la superficie de separacin gas-llquido por unidad de volumen de


dispersin lrea interfaciall, e la Ecuacin [7.69], es:

'

(t

=',*'(+)o'o

'02'"'"

"'(;n*

17.711

Donde todos los trminos tienen el mismo significado y las mismas unidades que
en la Ecuacin t7,691,

463

Sise aumenta progresivamente la alimentacin de aire a un reactor agitado por


un impulsor se observa que a bajas velocidades del impulsor el gas pasa por el
impulsor prcticamente sin dispersarse. Por consiguiente la potencia entregada
la fluido gasificado, Po, es igual a la entregada alfluido sin gasear, P. A medida
que se aumenta la velocidad del impulsor el gas es capturado por los vrtices
formados detrs de las paletas del impulsor y luego es dispersado. En este
momento la potencia entregada al fluido, Po, comienza a disminuir. Si la
velocidad del impulsor se incrementa, hasta un valor crtico, n"^, cambia la
configuracin de las cavidades, formndose las denominadas cavidades vrtice,
la relacin PolP,lcanza un valor mnimo, Nienow et al., 1978:
Dcn =

.'u.o9,"

17.721

D1

Donde, n".: velocidad de agitacin a la cual se alcanza la dispersin completa


del gas, s-1; Dr: dimetro del tanque; Do: dimetro del impulsor: B = 4:
dispersores de tubo; B = 3: dispersores de anillo. Finalmente, si la velocidad
del impulsor es mayor eu ns, el valor de la relacin Po/P aumenta.
Por otra parte, baio ciertas condiciones de agitacin, si se incrementa el flujo de
aire se alcanza eventualmente un punto donde el agitador queda rodeado de
aire, fenmeno conocido como inundacin, en este momento el impulsor no
puede dispersar el gas. Si se reduce entonces parcialmente el flujo de gas, el
impulsor comienza nuevamente a recircular el lfquido y a dispersar el gas; este
punto se conoce como punto de redispersin, Zlokarnik y Judat, 1967:

*-=+=o'194'Fl'75 i
Vlida para nmeros de

Fa=

n2.D^

Froude: 0,5 <

FR

f7.731

<

2,0

Donde, N^: nmero de redispersin; F^: caudal de gas, m3/s; n:velocidad del
impulsor, s-1; Do: dimetro del impulsor, m; g: aceleracin de la gravedad, 9,8
m/s2. Zlokarnik y Judat, 1967, encontraron tambin la siguiente relacin vlida
para nmeros de Froude entre 0,5 y 1:

Po'!"
,s.D1.p,
464

= 1,36.F,0'ffi

17.741

Donde, Po: potencia entregada alfluido gaseado en el punto de redispersin, W;

del lfquido en el punto de redispersin, kg.m't; g": factor de


conversin de unidades, 1 kg.m.s-2.N-1.

p,_: densidad

Ejemplo

7.3

Transferenca de masa en un reactor aerbico

Un tanque cilndrico de 0,99 m de dimetro, provisto de cuatro placas


J : 0,1.Dr, se agita cori qn
:
(D
planas
impulsor de turbina de seis hojas
Dr/3) que gira a 3 rps. El
tanque se llena con agua a 25 oC hasta un nivel de operacirl H : Dr. El
tanque se alimenta con aire estrl a 25 oC y 5,2 psig a razn de O,4 vvm
(volumen de aire por volumen de licor cada minuto) por un orificio situado
deflectoras, uniformemente espaciadas, de anchura

debaio del impulsor. La presin local es 10,8 psi.

Calcular: 1- La retencin de gas, g; 2- El dimetro medio de Sauter, D.r; 3- El


reade la superficie de separacin gas-llquido; 4-El coeficiente de transferencia,
K,-; 5- El coeficiente de volumtrico de transferenca de masa, Kra.
Propiedades ffsicas del agua a 25 oC: Tensin superficial en la superficie de
separacin aire-agua, o : O,O7197 kgls2; Viscosidad I = 8,9O4.10-a kg/(m.s);
Densidad: I = 997,O8 kg/m3; Difusividad del oxfgeno en agua, Dor: 2,5.10-e
m2ls, (Kaye y Laby, 1973; Pery y Chilton, 19731.
Datos del Ejemplo [7.1]: Volumen de licor, V = O,762 m3; Caudal de gas, Fo :
5,08.10-3 m3/s; Potencia disipada en llquido gaseado, Pc = 450,4 W. Nmero
de Froude, Fa = O,3O3.
1- Velocidad superficial del gas, v":

v, = 5'08'10-s

= G,6.io-o

].to,ssf

4
s

465

2- Retencin de gas, ry, (Ecuacin

7.69);

*)o'' * z.rs..,o . f(#)''',rrr,o.,n'1[e,o.ro-.1n,


,' = (e,e.ro..
\ 0,265 )
0,265

Il

lO,OzrSz0,6

a'

uz
Donde, u1

= 0,1578.0,5

* 8,47.10-3 i u2 =

- ojs78 .u - B,Ml.'lo.-s'. u = o,Z

U = o,o4

0,265 m/s: velocid" d" flot."in de burbujas de dimetro entre


2 y 5 mm, McCabe y Smith (1976).
3- Dimetro medio de Sauter, D32, (Ecuacin 7.7Ol:
Dgz=

4,1s

.|, .-J9,.oJr"')n'

l.(o,o)0,, * e.to-a = 4,zs.1o-s

t(#)o'n{so''oe)"1
4- Aea de la superficie de separaein gas-lquido, a, (Ecacin 7.65):

o = t=.v =
D

49'.r}
4,25.10'

= 56,48 m-1

Nmero de Schmidt, Sch, (Ecuacin 7.56);


c

='

;8,904.10-1

(997,08).(2,5.10-e)

=357.2

Densidad del aire:

=l,N+

466

Nmero de Grashof; Gra, (Ecuacin 7.56):

t1 -"r"

(n,zs.to-3)3.(997,0E).(9,8).(997,08

1,29)

= 941.48s,7

5- Coeficiente de transferencia, K., (Ecuacin 7.571:

x.L.(4'25.10-3)
2,5.10-e

= 0,42. (7,2)

0'5.

(941 .485,7)

1r3

Kt = 4'58'10-4 Y

- Coeficiente volumtrico de transferenci,

Ku

K,-a, (Ecuacin

7.64l:

= 4,58.10-4.56,18 = 0,0258 s-1

- Coeficiente volumtrico de transferencia, K.a, (Ecuacin 7.581:

.../

7.4.6 Evaluacin de los gases producdos durante la fermentacin


en reactores a escala de laboratorio

El propsito de esta Seccin es describir la aplicacin del mtodo de la burbuja


para la medicin de los pequeos caudales de gas producidos durante una
fermentacin a escala de laboratorio.

467

Ejemplo 7.4 Toma de muestras lquidas y gaseosas y evaluacin


del caudal de gases producdos durante la, fefmentacin acetobutlica

En la Tabla 7.6 se presenta un resumen de las condiciones de la fermentacin


y de los resultados obtenidos en cuatro ensayos de fermentacin aceto-butlica
por lotes, en un reactor de mezcla completa de l2litros de volumen de opera-

cin, diseado para cultivo contnuo y por lotes, y equipado con sistemas de
controt de pH, temperatura y velocidad de agitacin, Duarte, A., Alarcn, J.F,
Pieros, E.R. (19931. Los ensayos fueron realizados en la fase de produccin
de cidos (fase acidognica) y no en la fase de produccin de solventes (fase
solventognica), correspondiente a la fase estacionaria del crecimiento, con el
propsito de evaluar los gases producidos durante la fermentacin.
El lnsttuto de Biotecnologa de la Universidad Nacional de Colombia, inici en

1987 un programa de desarrollo de la fermentacin acetobutlica a partir de


melazas de caa. De acuerdo con el estudio de prefactibilidad econmica para
la produccin de butanol y acetona por fermentacin, realizado por Serrano y
Pinzn, (1987), los gases constituyen un 83 % de los ingresos totales recibidos
por ventas, rnientras tos solventes, etanol, butanol y acetona, slo un 16 o/o.

Tabla

7.6

Condiciones de la fermentacin, Alarcn, J.F, Pieros, E.R.,'(1989)'

Vo.fumen deI medi-o de fermentacin

1-2

Volumen preincuIo: volumen de medio


Temperatura
Velocidad de agitacin *, **
Flujo de N, (para anaerobiosis)
Tiempo de burbujeo de N,
Volumen de cada muegtsra Iquida

1:9

*:

0C.
37
2OO rpm.
2,1 litros/minuto
minutos
l-5
40
m1 .
I

Doremus, M., Linden, J., y Moreira,A. (1985)


"": Yerushalmi, L., Volesky, B. (19851

468

litros

r'

1. Descripcin de la fermentacin acetobutfica:

- 1.1 Preparacin del

medio:

Las fermentaciones se realizan con medio fermentativo (Tabla 7,71, preparado


mediante el siguiente procedimiento: La melaza se disuelve en agua destilada y
luego se centrafuga a 2000 rpm. durante 20 minutos para removerle los slidos
suspendidos. Simultneamente se disuelve K2HPO4 en agua destilada. Entonces

se adicionan al sobrenadante, extracto de levadura, cido p-aminobenzoico y


minerales. Los recipientes con el medio son sellados con papel de aluminio y
esterilizados en el autoclave a 103,388 kPa (15 psig) durante 20 minutos.
Finalmente se mezclan los fosfatos con la miel y los nutrientes en condiciones
estrles a paftr de un preinculo preparado con medio similar.

- Activacin de la cepa:

La activacin de la cepa se realiza mediante el siguiente procedimiento: Se


esterilizan en el autoclave diez tubos de ensayo, preferiblemente roscados, con
sus tapas a medio ajustar. Posteriormente, en un rea estril se adiciona a los
tubos medio vegetatvo hasta la mitad de su volumen. La composicfon de este
medio es similar a la delmedio fermentativo (Tabla 7.7!., pero con 80 g de miel
de caa, en lugar de 130 g. Entonces, se agrega a cada tubo medio de cultivo
perfectamente agitado con esporas de Clostridium acetobutylicum DSM 1732
silvestre, en una proporcin de una parte de esporas y nueve de medio puro.
Con el propsito de garantizar condiciones anaerbicas, antes de tapar los tubos
se vierte parafina fundida en cada uno. Al solidificar, la parafina forma un tapn
sobre la superficie, que mpide el paso del oxlgeno (airel. Finalmente los tubos
son sellados.
Los tubos perfectamente cerrados, despus de ser introducidos durante 2,5
minutos en un recipiente con agua en ebullicin y luego en otro recipiente con
agua frfa, son llevados a una incubadora a 37 oC. Veinticuatro horas ms tarde
aproximadamente, y como consecuencia de la produccin de gases, la parafina
se levanta de la superficie del medio, indicando la activacin de la cepa. En este
caso puede apreciarse un cambio de color del medio, desde caf hacia amarillo.
Por el contrario, si despus de 30 horas no se observa produccin de gases, la
cepa se somete a un nuevo choque trmlco.

469

Tabla7.7 Composicin del medio empleado en la fermentacin, Silva

E.,

(1989).

litiel de

130

caa

K2HPO4

(cido p-aminobenzoico)
Extracto dd levadura'
Fuente de minerales
Agua, en cantidad suficiente para. -.
FueEte de ninerales:
PABA

NaMo4 -2H2O

CuSOn.5HrO
CoCl-, .6H2O
MgSOr.HrO

CaCI, .2H2O
HrSO, concentrado
FeC13.5HzO

Agiua, cantidad suficie4t,e Para.

1,8 g
3mg
5g
4mI
90q m1

2,4
a,7
0,24
1g
1,5
28 .,.
2'7
l-000

s
g
g
S

mI

g
mI

Una vez actvada la cepa, Se mantene en estas condcOnes m'ediante repiques


cada 24 horas. Los repiques conssten en un cambio de medio con esporas a
los tubos, en la proporcin de 1 part de esporas y 9 de medo puro. Antes de
cambar el medio, los tubos son agtados hasta lograr la homogeneidad de su
contenido. Entonces, despus de retirarles una buena cantdad de medio fresco

y adcionarles parafina fundida, son tapados y transportados a la incubadora.


LoS repiques Se hacen cada 24 horas, tiempo requerido para alcahzr la fase
exponencia! de crecimiento det microorganismo, caracterzada pr un gran
produccin de gases.

- 1.2 Prcparacn del preinculo:

El

volumen disponible del fermentador es 12 litros, distiibuidos en 10,8 Iitros de

medo puro y 1,2 litros de medio con clulas activas (preinculo). Ests
cantdades corresponden a una relacin vomenes de 9:1'

470

lnicialmente se preparan en un matraz 120 ml de medio vegetatvo; la composicon de este medio es siniilar a la del medio fermentativo (Tabla 7.7), pero con
80 g de miel de caa en lugar de 130 g. Posteriormente el matraz con medio
vegetatvo es inoculado con la cepa activa contenida en uno de los tubos.
Entonces, en un matraz de 2litros se preparan 1 ,1 litros de medio fermentativo
(Tabla 7 .71 y se procede a inocularlo con 1 20 ml del matfaz con clulas en su
fase exponencial de crecimiento. Dumar y Granados, (1987), establecieron un
tiempo de 20 horas para lograr la densidad adecuada para inocular el medio de
fermentacin. El medio se calienta en el fermentador hasta la temperatura
ptima de crecimiento celular (37oC), antes nocularlo'

Las condiciones anaerbicas son alcanzadas mediante la alimentacin de


nitrgeno gaseoso a travs de un filtro empacado con lana de vidrio; un filtro
simitar se utiliza para evacuar los gases producidos por la fermentacin,
La agitacin es producida por un impulsor de paletas planas y cuatro pantallas
deflectoras. El control de la temperatura se realiza mediante la adicin de agua
fria o caliente, segn el caso. El agua entra por una de las pantallas (huecas) y
sale por la pantalla opuesta, Los gases producidos en la fermentacin pasan por

un condensador ubicado en la tapa del fermentador.

- 2. Toma de muestras.

- 2.1 Muestras lquidas,

Para la toma de la muestra llquida se usa un tubo de vidrio (Figura 7.1 3) de 1 50


ml de capacidad, provisto de tres entradas. Despus de conectar la lnea B del

tubo con el fermentador, se hace vaco con una jeringa de 50 ml a travs de la


lnea de gas. La tapa del tubo es un filtro empacado con lana de vidrio.
Una vez tomada la muestra, se sella con una pinza la lfnea B conectada con el

fermentador. El tubo descrito tambin se utliza para inocular el fermentador a


travs de l lnea A. Las muestras lquidas fueron analizadas por Alarcn y
Pieros (1989) para determinarles concentracin de clulas, concentracin de
glucosa, pH y solventes, Mclaughlin, 1., Meyer, C', y Papoutsakis, E' (1985)'

471

Figura

7.13

Botella para la toma de muestras lquidas, Alarcn, J,F, Pieros,


E.R., (1989).
Jnocutoc on

Tomq de

ruestros

de gos

Line o

de

liquido

2.2 Muestras

gaseosas.

Las muestras gaseosas se usan para analizar la composicin de los gases


producidos durante la fermentacin. Antes de tomar la muestra se determna
el caudal de gas. Para tomar la muestra se cierra la salida de gas hacia los
medidores de caudal mediante la vlvula de dos vas (Figura 7.14l-. Entonces,
mediante la vlvula de dos canales, se conecta la botella tomamuestra con la
atmsfera y se abren las dos vlvulas de la botella.
Despus de llenar la botella a travs del embudo con agua acidulada (2O o/o ptv
de NaCl V O,5 % p/v de cido ctrico) con el propsito de minimizar la cantidad

de gas carbnico disuelto en el lquido, segn el procedimieto sugerido por


Castillo, Contreras y Magario (1980).
Se .eambia la posicin de la vlvula de dos

la lfnea de gas. Entonces, se desplaza

s,e

conecta la botella con

el ".nal""
embudo hacia abajo para llenar la

botella medante desplazamiento de lquido (esta operacin se realiza a la misma


velocidad de produccin de gases en el fermentadorl.

472

Figura

7.14

Sistema de medicin de flujo ytoma de muestras gaseosas


Alarcn, J.F, Pieros, E.R., (1989)'

Vqtvut

Medidon

de

dos vlqs

VolvuIo
de dos
conqtes

dsco

Bureto
Botet(o

tomo -

nluestnos

Topon

inyectobte
(

Enbudo

de vidrlo

Penlt(q

etostico

So(ucion

de jobon
Monguero
f texbte

Tan pronto como el gas desaloia el lquido de la botella, deben equilibrarse los
niveles del improvisado manmetro formado por la manguera flexible que
conecta la botella con el embudo mediante una adecuada manipulacin del
embudo, Cuando se logra e! equilibrio se cerran la vlvulas de la botella, se
cambia la posicin de la vlvula de dos niveles, se desaloja el lquido presente
en el embudo y se reemplaza la botella tomamuestra. El anlisis de las muestras
se realiza mediante cromatogratla de gases, Stambuk, J., (1970),

473

5-

3.

Determinacin del caudal de gas

De acuerdo con Beloshitskii, Lanina y simulik, {1983), el mtodo de la burbuja


es uno de los ms precisos para la determinacin de pequeos caudales de gas

entre 2 y 2OO ml/minuto. Es un sistema sencillo (Figura 7"14), si se considera


que slo requiere una bureta calibrada, un cronmetro, solucin jabonosa y una
conexin en T para alimentar el gas a medir. Como el volumen y la concentracin de los gases dependen de la temperatura y la presin, estas dos cantidades
se mantienen constantes durante la fermentacin. Adems, en el anlisis de una
mezcla de gases se tiene en cuenta que cada uno de los componentes de la
mezcla ocupa el volumen total y que la suma de las presiones ejercidas por los
componentes es igual a la presin total de la mezcla gaseosa.
Para medir el caudal se humedece la bureta y se presiona la perlla hasta el
punto en el cual la solucin jabonosa alcanza la entrada de gas. En este
momento una de las burbujas formadas inicia su ascenso y es necesario
accionar el cronmetro cuando la burbuja cruza la marca inferior de la bureta y
detenerlo cuando la burbuja alcanza la marca superior. Et caudal de gas es igual
al volumen entre las marcas de la bureta dividido por el tiempo requerido para
recorrerlas. Adems, de acuerdo con la magnitud del caudal a medir, la
capacidad de la bureta se puede escoger entre 10 ml y 100 ml.
El medidor de disco utilizado en la determinacin de caudales superiores a 100
ml/minuto, totalza el volumen de gas producido durante Ia fermentacin y
mantiene constante el nivel de presin en el fermentador, dado que permanentemente evaca el gas producido. La lnea de salida de gas solo se cierra
cuando se evala el flujo con el medidor de burbuja o cuando se recogen

muestras gaseosas (Figura 7.141.

4.

Resultados

7.15 se representa la curva de crecimiento celular obtenida en un


ensayo tpico; Alarcn, J.F, Pieros, E.R. (1989).
En la Figura

En la Figura 7.16 se representa el consumo'de sustrato durante un ensayo


tlpico. Este consumo representa entre el75 y el 80 % de la glucosa inicalmente
presente en el medio. Por consiguiente, en este caso el sustrato no fue un

474

factor limitativo de la fermentacin. si se considera que tos ensayos


fueron
realizados en la fase de produccin de cidos (fase acidognica) y
no en ra fase
de produccin de solventes (fase solventognical, correspondiente a la fase
estacionaria del crecimiento, los rendimientos de sustrato en solventes (Tabla
7.8 y Figuras 7.1 7, l.1B V 7,l g) son relativamente bajos.

Tabla

7.8 Rendimiento

del sustrato en solventes y gases. Datos obtenidos en


cuatro ensayos, Alarcn, J.F, pieros, E.R. (1gggt.

Pementac6n y"l"

CO,

E2

yn/,

EnaayoABCDE
1
2
3
4

0,094
0,095
0, 064
0, 100

0,77
,2o
0, 14
0,18
0

0,59
0, 54
0 ,72

o,42
,46
0,29
0,30
0

o,7o

0,1808
0

, L772

0,2653
0 ,2960

Observaciones:

A; Y.,": Rendimiento de sustrato en solventes, expresado como gramos/litro de


solventes por cada gilitro de glucosa consumida.
B: P: Productividad, expresada como la concentracin de solventes producidos
en gramo/litro por cada hora de fermentacin,
r

,.

C: Fraccin molar de COr,


D: Fraccin molar de Hr,

E: Yn,r: Rendimiento de sustrato en gases, expresado como gramos de gas


producido por gramo de glucosa consumida,
- En la Figura 7.20 se representa la variacin del caudal de la mezcla
de gases
H, y CO, con el tiempo de fermentacin.

475

- En la Figura 7 .21 se representa la variacin de la composicin de la mezcla de


gases con el tiempo.

En la composicin de los gases (Figura 7.21l. se alcanzan valores de la


relacin (moles COrli(moles Hr) menores que 1. Estos valores coinciden con los
resultados de Yerushalmi y Volesky, (19851. Adems, se observa que esta
relacin es siempre mayor que 1 en la etapa final de la fase exponencial de
crecimiento.

- La fraccin molar de CO, (Tabla 7.8) varla enteO,72 y O,54 y Ia correspon-

0,28.
(1982).
y
Walton Martin,
diente a H, entre O,46 y

Estos valores concuerdan con los informados por

7.81vara entre 18 y 29,6 gramos


g
glucosa
producido
por
gas
consumida. Estos resultados
cada 100 de
de
confirman la importancia de los gases en el estudio de factibilidad tcnicoeconmica de la fermentacin acetobutlica,
Ef rendimiento de glucosa en gases (Tabla

Figura

7.15

Cintica de la fermentacin acetobutflica. Crecimiento de biomasa


Alarcn, J.F, Pieros, E.R, (1989).

Concentracion de celulas, g/litro

81216
Tiempo de fermehtacion, horas

476

| ,t

.1

Figura

7.16

Cintica de la fermentaci acetobutflica. Consumo de sustrato,


Alarcn, J.F, Pieros, E.R.(1 9891.

Concentraclon de glucosa, g,4ltro

70

60

50
40
30

20

to
o

o4aP162024
Tiempo de fermentaclon, horas

Figura

3,5

7.17

Cintica de la fermentacin acetobutflioa. Produccin d6 butffiol,


Alarcn, J.F, Pieros, E.R. 11989).

Concentraclon de butanol, g/lltro

3
2,5

2
1,5

o,5

o4812

162024
Tiempo de fermentaclon, horas

47V

;,

Figura

1,2

7.18

Cintica @ la fprrnpntacin acetqhutflica. Produccin


Alarcn, J.F, Pieros, E.R. (1989).

(e

acetona,

Concentracion de acetona, g/lltro

F-1

o,g
o,6
o,4

tr

o,2

o4a262024
Tiernpo de fermentAcion, horas

Fi$gq 7.X9 cintica'de -ta"fermnt@n efetobutfica. produccin de etanol,.,


,Alarcn, J.F, piens, E.R. fl9B9). ,:

_ Concentraclon de etanol, g,/lltro

o,4

.------.---.+----.-.-.

o,O

o,2

-""'.'-.'^i------:---------

o,7

.-.-i-.---l------..---

O---

o4a2162024
Tiempo da fermentecion, horas

f,78

Figura

7.2O Ctntica de la fermentacin acetobutllica. Produccin H. y

COr,

Alarcn, J.F, Pieros, E.R. (1989).

250

Caudal, (ml de gas)/mlnuto

200
150

too
50
o

8t216
Tlemp de,farmentaoion, horas

7.21

Figuta

20
t8

Composicin de los gases producidos en la fermentacin acetobutllica. Alarcn, J.F, Pieros, E.R. (19891.

Composlclon de loe gases, mol Coz/mol H2

16

t4

- . ' {-

12

.-..t......-..'..-.... ----...+...--

---

.---.....

.....-..} ..
'

10
..i..-...-.......-............i......-............-......i..-............-,.....

a
6
4

2
o

....t

-.....-l

ll-/::
t--::

----...".--.-.-.i..----.--...--.-.---.--....--.-...--...,...i..-.-.-........-..--i-

44P62024
Tiempo de fermentacion, horas

479

:'

7.4.7 Transporte de oxgeno

en biorreactores para el cultivo

de

tedos animates

-r
7.4.7.1 Condiciones ambientales tpicas
Una de las principales tendencas de la lngenierfa .Bioqumica es la creciente
utilizacin de tejidos vegetales y de tejidos animales de humanos, monos,
bovinos, ratones e insectos. El motivo fundamental es la investigacin de las
respuestas de un cultivo puro, sometido a condiciones cuidadosamente controladas, a la accin de hormonas, factores de crecimiento y drogas.

Tabla

7.9 Condiciones

ambientales tpcas requeridas por las clulas de


mamfferos, Cherry, R.S, (1989).

Condiciones de1 bi-orreactor

i3";",l.3.e:z

pH
Elsfuerzos cortantes por agitacj-n
Osmolalidad deI medio de creeimiento

oc.)

7 - 7,s
< 20 dinas/cm'
21O - 350 mosm.

Nutrientes:
Concentracin de oxlgeno disuelto

30 - 80 t saturacin
de ai-re
O,l - 4 g/l-tro
0,5 - 2 mM

Coneentracin de glucosa
Gfutamina
Residuos:
Concentracin de ion amonio
Relacin cido lctico/J-actato

< 4 mM
no es crtica
control-a pH

Crecimiento:
vel-ocidad especfica

de crecmiento,

si se

o,001 - o,07 (hora) I

Los intervalos de valores anotados corresporiden a clulas de mamfferos en


general. Una clula particular slo crecer dentro de un intervalo ms estrecho
tal como temperatura 37 t 0,5 oC o pH: 7,1 + 0,1 unidad.

480

En otros casos las clulas se cultivan para obtener algn producto como clulas

de eBidermis para atender victimas de quemaduras, o clulas de tejido del


pncreas para la produccin de insulina. Tambin se cultivan clulas para la pro-

duccin de vacunas (polio, aftosal, y para obtener protenas complejas como


enzimas, factores de crecimiento, hormonas y antcuerpos.
Las clulas animales slo crecen en un ambiente fisicoqumico prcticamente
similar al del organismo vivo, Miller et al., 1991. Los nutrientes deben estar
disponibles en niveles estables y los subproductos deben retirarse continuamente. En la Tabla 7.9 se presenta un resumen de las condiciones ambientales
tfpicas requeridas por las clulas de mamferos, Cherry, R.S, (1989),
Desde el punto de vista del diseo del biorreactor las clulas se pueden clasificar

como clulas en suspensin y clulas dependientes de anclaje, Las clulas en


suspensin crecen y funcionan normalmente cuando estn suspendidas en el
medio de crecimiento. Las clulas adherentes requieren una superficie para
adherirse y crecer hasta un tamao de aproximadamente 40 - 50 micrmetros
y un espesor de slo varios micrmetros. Estas clulas se multiplican hasta
cubrir completamente la superficie con una monocapa, estado conocido como
confluencia, en el cual la mayorfa de las clulas adherentes normales detienen
su crecimiento. Las clulas normales slo se multplcan entre 20 y 100 veces
antes de alcanzar la senescencia. Por otra parte las llneas de clulas transformadas genticamente y las clulas de tumores cancerosos generalmente no
alcanzan el estado de confluencia ni tampoco la senescencia.

7.4.7.2 Sistemas de cultivo

Generalmente se utilizan diferentes sistemas para el cultivo de tejdos animales,


algunos son simples modificaciones de los reactores convencionales, otros estn

fundamentados en las caracterfsticas de las clulas animales, anotadas en la


seccin anterior.
A escala de laboratorio se utilizan cajas cilndricas (dimetro = 4 veces la altura;
volumen de medo: 0,5 - 10 ml) de material plstico tratado con poliestireno
para facilitar la adherencia de las clulas. Las cajas estn provistas de una
481

cubierta transparente para prevenir la contaminacin del cultivo, Otros sistemas


comerciales de cultivo de tejidos son los frascos T, los reactores de cartuchos
de fibras huecas, los reactores con clulas microencapsuladas, los reaetores de
lecho empacado y los reactores de cultivo en suspensin.

#
7.4.7.2.1 Reactores agtados

El cultivo.de clulas suspendidas se realiza en reactores agitados, columnas de


burbujeo y reactores de circulacin lquida impulsada por aire. tipo "airlift". Los
reactores agitados mcnicamente tienen algunas modificaciones con respecto
a los sistemas empleados en las fermentaciones microbianas, papoutsakis,
1991; Cherry y Papoutsakis, 1990; Gardner et al., 1990, por ejemplo, tas
turbinas "Rushton" son reemplazadas por impulsores de hlice, y de paletas, con
el objeto de prevenir los esfuezos cortantes excesivos. La aeracin se realiza con
sistemas que minimizan la formacin de espuma y el contacto perjudicial entre
clulas y burbujas. Entre estos sistemas se destacan los aeradores superficiales,
la tubera semipermeable, y la aeracin a travs de mallas de acero inoxidable
(Prokop y Rosemberg, 1989; Su et al., 1gg2).

una desventaja de estos reactores eg la baja concentracin del caldo (5.105 6.106 clulas/ml; 10 - 500 mg de anticuerpos monoclonates/litro). En el cultivo
por perfusin estas concentracones pueden aumentarse en un orden de magnitud mediante la retencin de las clulas en el reactor por mtodos mecnicos
tales como mallas cillndricas de acero inoxidable acopladas al impulsor y en
algunos casos medante sedimentadores y equipos externos de ultrafiltracin.

7.4.7.2.2 Difusin de oxsbno en frascos T

El frasco T representado esquemticamente en la Figura 7 .22 es un recipiente

de vidrib o de plstico transparente provisto de un cuello inclinado ligeramente


hacia arriba y de un tapon poroso por donde se difunden el CO, y el Or.

482

Figura

7.22

Representacn esquemtica de un frasco T

topon

Fro.sco

Normalmente se encuentran frascos T de 25, 50, 75 v 150 cm2 de rea para el


crecimiento de las clulas. El volumen de medio se calcula con el propsito de
obtener una capa cuyo espesor varfa generalmente entre 1,5 y 3,5 mm, Esta
delgada capa de medio garantiza una adecuada difusin del oxgeno.
El control de las condiciones ambientales en el frasco T es indirecto, generalmente el frasco se coloca en una incubadora para controlar la temperatura. El
oxgeno se suministra por difusin desde la atmosfera y el pH del medio se

controla mediante "buffers" en el medio y con una concentracin de 5 7o de


CO, en la atmosfera de la incubadora.
El CO, gaseoso en el ambiente, el CO, en el medio, el cido carbnico, los iones

carbonato y bicarbonato, forman un sistema "buffer" que equilibra el pH en un


valor de aproximadamente 7,3. Los nutrientes y los residuos son controlados
peridicamente mediante el reemplazo de medio fresco, usualmente una vez
cada2 a 5 dfas.
Balance de oxlgeno en un elemento de rea unitaria delfrasco T, en condiciones
estables:
Oz eue entra =

^(:*),=

O, que salc + 02 cottswtido

17.751

- o.n.(#),.,, + rOr.A.6y

17.76t

Donde, D: coeficiente de difusn deloxlgeno en agua, cm2/s; A: rea superficial


del frasco T, cm2.

483

ffi

: .i

El valor de la derivada en y + 6y, en la ecuacin anterior, se expresa con los


dos primeros trminos de la expansin de la serie de Taylor:

(+)
=(+\ . 914).u,
d! )r*q \dv ), dv \v
\

if

17.77t

Por consiguiente:

40)=, (#)
t-a

17.781

sqluci general de esta ecuacin, es:

17'791

c=.a.12*b.!+e
Donde, d, b ai constantes.
Por consiguiente:

.' -,i

'

&" =2'.o
=2.a-v+b
,
-''',
"
=
dy
Or, -''
d'c

De acuerdo con las condiciones de frontera:

(dc/yl

': 0. Por tanto:

,:

r-.7.8dl

c : 0, en y : h, (Figura 7.22l.;
.:

a_(g) : b=_2.a.y"=
2.D'D
rlozl

,2.DD .z _

r(oz)

.h2

,*!
t7.ell

* e=O

Despus de reemplazar a, b y e, en la Ecuacin 7.791, se obtiene:

'i 1

, = '!o:)
-ft - v)2
2'D

t7 '82t

Las otras condiciones de frontera son: c : c- en y : 0. Donde: c-: concentracin de ofgeno en la sqperficie de separacin entre medio y aire, mmol Orlml.

484

Por consiguiente la profundidad, h, correspondiente

una concentracin de

oxlgeno igual a cero es:

Ejemplo

7.5

=(+*+)'.

t7.83t

Difusin de oxlgeno en frascos T

Se desea estudiar el crecimiento de clulas adherentes (velocidad especffica de


crecimiento, ! = O,O4 hora-r) en un frasco T - 150 alimentado con 45 ml de
medio {concentracin inicial, x" = 80.000 clulas/ml). Las clulas crecen hasta
alcanzar el punto de confluencia de 460.00o clulas/cm2. Suponer que todas las
clulas son viables, y todas sedimentan y empiezan a crecer inmediatamente.
Suponer que el medio saturado de aire contiene una concentracin de oxgeno
de 0,23 mM, pero su contenido de sales reduce el nivel de oxlgeno hasta 0,2
mM. Adems la concentracin de oxlgeno disuelto se mantiene en un 9E % del
valorde saturacin con elobjeto de mantenerS o/ode Coren la atmosfera para
control de pH, El coeficiente de difusin de oxfgeno en el medio es D : 2, b.,l O-s
cm2/s. La velocidad especffica de consumo de O, es /(O2) = 2,4.1O-13 mol
Orl(clula.hora).

1- Comparar las velocidades de difusin de oxfgeno y de crecimiento de clulas;


2- Suponer crecimiento exponencial y calcular eltiempo requerido para alcanzar

el punto de confluencia; 3- Determinar si en el punto de confluencia hay


lmitacin de oxlgeno en el fondo delfrasco; 4- Suponer que una vez alcanzado
el punto de confluencia se cierra hermticamente el frasco y calcular el tempo
en el cual se agota completamente el oxlgeno disponible en el medio.

Solucin: 1- Velocidad de difusin de oxfgeno:


D

(ar)2

3600

hora

485

(y')

)-

y del medio en et frasco: 150 crn2.y = 45 cm3.

Donde la prfundidad

Por

consiguientei Y = 0,3 cm.

o = mr.Bo.ooo
No

# #^,

= 24.w

Nmero inicial de clulas.

2- Punto de confluenca

-,

",

;,;: ; JV - 460.(X)0 = Jv;:exp (p.4

= 24,O00.erg(0@4.t)
horas.
t = .73,83
'r

Por consiguiente:

:.,,

3- Concentracin final de clulas:


Abol&

cry:r

-Y2 = 1.530. ,roclqt/rt

,6 nl

cm2
'

t'

4- Velocidad de conqgmo de oxfgqno:


;i

r(or)

g,U.fi'#

ml

.,

1,0D,.1O-'^!n,?

5- Concentracirt de O, la,superfieie do contacto entre medio,y.aire:


'=

c'

O,95.0

,Z)u=

0,19

o"'"
^!lilo
r,!.Pr' .'
1000 m,
i'

c*=r,9.10o4-o"

486

-.

6- Profundidad, h, correspondiente a una concentracn de oxgeno iguala cero,


(Ecuacin 7.831:

Por consiguibnte no hay limitacin por oxlgeno'

7- Tiempo requerido para consumir el oxgeno disponible si el frasco se cierra


hermticamente:

'

c' -- .9. 10 -1 1 minuto


r(ozl 1.022.10-7 60s
1

7.4.7.2.3 Difusin de oxgeno

31

miutos

a travs de capilares

La similitud entre los cartuchos de fibras huecas empleadas en microfiltracin

y los capilares del sistema circulatorio de los animales indujo a Knazek et al',

1972, a cultivar clulas animales en reactores de fibras huecas. Estas fibras (de
tracetato de celulosa, poliamidas aromticas, copolmero acrlico, polisulfona o
por
de carbonato de silicn) son estructuras cilfndricas anisotrpicas compuestas
una pequea capa activa interna lO,1 '2 pmde espesor) y una capa esponjosa
gruesa (50 - 85 pm de espesor) que acta como soporte' Las fibras (dimetro
que
interno: 40 - 2oo l/ml tienen poros con dimetros del orden de nanmetros
permiten la retencin de especies con pesos moleculares entre 300 y 300'O00'

Los reactores convencionales de fibras huecas (longitud entre 5 y 30 cm;


volumen entre 2 y 30 cm3) estn constituidos por haces paralelos de fibras,
y
dispuestas en una configuracin similar a la de un intercambiador de coraza
las
pared
de
externa
la
tubos. Las clulas generalmente Son inmovilizadas sobre
fibras. El flujo del medio por los canales entre las fibras y sobre las fibras
sumnistra los nutrientes y retira los desechos txcos del metabolismo' La
velocidad de flujo del medio est limitada por los esfuerzos cortantes impuestos
487

ajas,clulas. Los valores,de esfuerzo cortante superiores a 3 dinasicm2 afectan


la morfologa de las clulas. En los reactores de fibras huecas se logran
concentracones de celulares hasta de 108 clulasicmt, comparables con las del
sistema vivo (10e clulasicm3). Sin embargo, a estas elevadas concentraciones
celulares los gradientes de concentracin, especialmente de oxgeno disuelto,
en las direcciones axial y radial, pueden conducir a la formacin de zonas
necrticas. Una de las principales desventajas de estos reactores es su costo,
($ 150 - 500 dlares/cartuchol. Adems, estos reactores no son reutilizables ni
permiten la toma de muestras.

Figura

7.23

Representacin esquemtica de la seccin transversal de una fibra


hueca

Eh-la Figura 7.23 se representa esquemtcamente el rea transversal de una


tia'nueca. Elbalance de oxlgeno en un elemeirto de rea unitaria, en condicio-

ris estables, es:

'

Oz quc enfia = 02 4ue sab + O" conmmido

'(#)-'=

- o'(#L.o* * r(o)'A'6R

Dotde:A=2..r-L

488

f7.841

t7.851

:,

i-

Por consiguiente:

| *\
^( \
D.lr.
- =*)'= o'V';)'

*
'

"

''' (c.2)'6r

17'861

Donde, D: coeficiente de difusin del oxgeno en agua, cm2/s; A: rea lateraldel


capilar, cm2; L: longitud de! capilar; c: toncentracin de oxfgeno, mmol Orlml;
r(O)r: velocidad de consumo de oxlgeno, (OURI, (mmol Or)/(cm3.s).

,_

P+
dosprmero""^'&*;",.:ffi;.;t:il:
El valor de la derivada en

6R, en la ecuacin anterior, se expresa con los

r7B't
Por consiguiente:

!q)
(o)
\s = r-(-q"-. 1RdR)
[n'

t7.881

Esta ecuacin tambin se puede expresar como:

r(o)'R
!h.L\
dr[ dR) D

t7.891

y despus de integrar se obtiene:

dc -(Or).R *c,

dr

2.D

t7.90I

tas ccjrtdciones de frontera (Fgura 7.231, son:

c=o

en

R=xo

y. (#t=*o=o

t7.ett

Por consiguiente, el valor de la constante de integracin c,,, es:

t7.921

489

Despus de integrar la ecuacin [7.90], se obtiene:

r tO^\.R2

t7.931

'=il-'+ct'lnR+c2

Las otras condiciones de frontera son: c : e* en Fl : R", Donde: c*: concentracin de oxlgeno en la superficie interior de la fibra, mmol Orlml. Por consiguien-

te el valor de l constante de integracin c, es:


cq =

'

c*

(oz).R?

- 4.D - '(oz)'Rl
2.D

,o

[7 41

Despus de reemplazar lqp cnstantes c1 y c2 en la Ecuacin t7.g3l se obtiene


la variacin de la concentracin de oxgeno dentro de la fibra:

c,

*'(o") .(n, - n1' -z.n?.t


)
"
4.D I
R,)

t7.951

.4.7 .2.4 Microencapsulacn

Las clulas pueden ser atrapadas en esferas de alginato (dimetro entr'O,,S y


2 mm) recubiertas con una membrana polimrica semipermeable con el propsito de protegerlas de los excesivos esfuerzos de corte y facilitar su posterior
recuperacin. La difusin del medio a travs de la membrana abastece los
nutrientes y simultneamente remueve los desechos txic9s, Chen, Dale y Okos,
(1990); Tyler, (19901; Pu y Yang, (1988); Gossmann y Rehn, (1986).

El procedimiento de encapsulacin somete las clutas a osmolaridades muy


altas, adems, despus de varios dlas de operacin las capsulas pueden
erosionarse, aspecto que impide Su aBlicacin-en los cultivss prolongados,
Casson et al., (1987). Las concentraciones celulares alcanzadas por este sistema son similares a las logradas con fibras huecas. Un segundo sistema de
microencapsulacin emplea microesferas porosas (dimetro entre 500 y 600lm)
de colgeno y de otros materiales como vidrio, cermica y acero inoxidable con
el propsito de alcanzar elevadas concentraciones celulares y simultneamente

490

sumnistrar grandes cantidades de oxlgeno. Estas microesferas porosas tambin

son utilizadas en los lechos fluidizados densos, en este caso, provistas de


diminutas esferas metlacas en su centro para aumentar su densidad relativa y
mantenerlas en el lecho.

7.5

CAMBIO DE ESCALA

El cambio de escala de una fermentacin exitosa a nivel de laboratorio origina


cambios imprevisibles en las variables no controladas a medida que aumenta el
volumen del sistema. La metodologfa del cambio de escala se fundamenta en la
seleccin de una estratga con el propsito de predecir el comportamiento de

las variables no controladas y su consecuencia sobre el diseo global del

proceso.

Algunas condiciones requeridas para e! crecimiento de los microorganismos y


la formacin de productos en un proceso bioqufmico son: temperatura, presin,
velocidad de corte, concentracin de nutrientes, pH, Damkhler, (1988); King
y Hossain, (19821. Generalmente elpropsito delcambio de escala es mantner
constantes estas condiciones independientemente del volumen del reactor y
obtener resultados similares-en trminos de rendimientos y productividades.
Usualmente las condiciones crfticas en el cambio de escala son la temperatura
y la concentracin de oxgeno. El pH puede controlarse separadamente, y todos
los nutrientes, excepto el oxfgeno en las fermentaciones aerobias, pueden ser
aadidos en exceso. El control de la temperatura se dificulta por la necesidad
de suministrar o retirar calor a travs de una superficie de contacto.
Generalmente el diseo de un reactor est lmtado por la capacidad del sistema

para transferir masa

calor. La transferencia de calor se realiza en las

superficies que limitan el sistema y por consiguiente es proporcional al cuadrado


del dimetro del reactor. La transferencia de masa ocurre en todo el volumen del
caldo y es proporcional al cubo del dimetro. De acuerdo con estas considera-

ciones, Cooney, 1983, recomienda una estrategia de cambio de escala


fundamentada en la transferencia de masa mientras la capacidad de transferencia de calor es provista separadamente.

491

Algunos autores como Finn, 1967; Aiba et al., 1 973; Oldshue, 1 983 y Charles,
1985; consideran que los mtodos de transferencia de calor generalmente son
diferentes a nivel de laboratorio y a nivel de planta de produccin y analizan una

estrategia de cambio de escala fundamentada en el mantenimiento de una


C,_, de oxgeno disuelto, por encima de un valor crtico.

concentracn constante,

Entre los criterios de cambio de escala utilizados con mayor xito estn potencia
por unidad de volumen, tiempo de mezcla, coeficiente volumtrico de transferencia de masa y velocidad de la punta del impulsor. La aplicacin de estos criterios
requiere un profundo conocimiento del proceso y partcularmente del paso

limitante en la obtencin del producto.

7.5,1 Agitacin

Generalrnente las ecuaciones disponibles en la literatura para la agitacin y


mezcla de lquidos y la dispersin de gases en llquidos han sido deducidas para
'reactores relativamente pequeos dentro de un estrecho intervalo de factores
geomtricos.
Einsele, 1976, establec que la potencia disipada por unidad de volumen es
proporcional al volumen del fermentador:
P
V
?

g,

V-o,sl

t7.961

r.

Esta ecuacin significa que a nvel de laboratorio,Y = 0,1 m3, las potencias
tfpcas son de 10 - 15 W/litro. A nivel de planta piloto, Y = 1- 5 m3, las
potencias son de 6 - 8 W/litro, y nivel industrial se aplican potencias de 1 - 2,5
Wlitro. Einsele tambin estableci los siguientes criterios:

- El nmero de Reynolds aumenta con la escala.


- Los tiempos de mezcla y homogenizacin tpicos a nivel industral varan entre

80 y 100 segundos.

492

- La velocidad de la punta del impulsor (n.Drl eS prcticamente independiente


del volumen del reactor y vara entre 5 y 6 m.s-1.
- El coeficiente de transferencia de masa Kra vara normalmente entre 0,O02 y
O,28 s'1, donde los valores ms pequeos son tfpicos de los fermentadores ms
grandes.
Charles M., (19851, presenta dos ejemplos sobre los problemas y posibilidades
del cambio de escala en fermentacin. En el primer ejemplo analiza el consumo

de potencia en un reactor de 100 m3 de volumen til (Dr: 4 m; Do: 1 ,6 m; rt: 2


revoluciones/s; Caudal de aire: F = 20 m3/minuto, en condiciones estndar;
viscosidad delcaldo: ! = 1kg m-'s-11, Elconsumo de potencia en elcaldo sin
aerar, calculado segn la Ecuacin 17 .121, es 527 ,2 kW. El consumo de potencia en elcaldo aerado, calculado por el mtodo de Oyama y Endoh, (1955), es
408,7 kW. El consumo de potencia en el caldo aerado, calculado segn el
mtodo de Michel-Miller, Ecuacin 17.1 81, es 667,4 kW. Hay una discrepancia
de 63o/o en los dos rfltimos resultados, pero debe tenerse en cuenta que Michel
y Millerutilizaron reactores con una capacidad entre 3,5 y 10,5 litros.
En ei segundo ejemplo, Charles M., (1985), analiza el mismo reactor con la

misma capacidad e idnticos factores geomtricos, pero el caldo es pseudoplstico con un ndice de comportamiento de flujo, m = O,5, y un ndice de
consistencia, K : 2 N.m-2.s-o'5. El consumo de potencia en la agitacin del
caldo aerado (O : 20 m3/minuto), calculado segn las Ecuaciones 7.21 v 7.22
es 83,5 kW. Este ltimo valor es inferior al observado bajo condiciones similares. En la prctica hay necesidad de realizar ensayos con caldos reales de
fermentacin a escala de laboratorio, de banco y de planta piloto, con el
propsito de obtener los criterios de cambio de escala en cada caso especffico
y aplicar racionalmente las ecuaciones disponibles.

7.5.2

Transferenca de calor

Generalmente la ecuaciones de transferencia de calor disponibles en la literatura


han sido deducidas para reactores relativamente pequeos. Muy pocos estudios
han utilizado caldos reales de fermentacin y sus propiedades reolgicas no han

493

sido incorporadas explcitamente en las ecuaciones. Por onsiguiente,


ecuaciones deducidas emplricamente usualmente no son aplicables

las
en

situaciones apreciablemente dferentes de las condiciones para las cuales fueron


deducidEs.
Una inspeccin de las Ecuaciones [7.23] y 17.241indica algunos problemas de
diseo asociados con la transferencia de calor en biorreactores. En el cambio de
escala desde el reactor de laboratorio o de planta piloto hacia el reactor
industrial, o viceversa, puede suponerse que las velocidades 'de reaccin
microbial y la potencia suministrada por unidad de volumen permanecen
constantes.

La generacin de calor

y las necesidades de refrigeracin

varan con (Dr)3

mientras el rea de transferencia de calor vara de acuerdo ctin (Dr)2. Por consiguiente un sistema de camisa, suficiente para mantener un reactor de laboratorio
en condiciones isotrmicas, debe, reemplazarse, por ejemplo, por un sistema de
serpentn interno o externo, para calentar un digestor de lodos de,aguas residuales, o refrigerar un reactor industral para la produccin de protena unicelular.

La presencia de un serpentn interno altera los patrones de mezcla, las


velocidades de flujo, y quizs las velocidades de coalescencia de burbujas,
(Bailey y Ollis, 1986). El valor del coeficiente de transferencia de calor ,
(kW.m-2.oC-'), tambin depende de la configuracin del sistema.

Generalmente

el

serpentln interno proporcona un. mayor coeficiente de

transferencia de calor que la camisa, pero ocupa un considerable volumen, interfiere los patrones de flujo y origina problemas de limpieza y esterilizacin.
Adems los escapes por pequeos agujeros frecuentemente constituyen un serio
problema de contaminacin. Tambin, en muchos casos se ha observado la
disminucin del coeficiente de transferencia de calor por la formacin de zonas
donde se acumulan los microorganismos.

y un serpentn

depende de la fermentacin
especfica, del comportamiento reolgico del caldo y de los detalles de diseo
del tanque y del sistema de agitacin, A escala industrial la liberacin de
grandes cargas calorfficas, como en el proceso de produccin de protena
unicelular (SCP) desarrollado por la compaa lCl(El reactor es una columnade
7 m de dimetro y 60 m de altura con un volumen efectivo de 1560 m3, Bailey
y Ollis, 1986) los serpentines internos no alcanzan a remover el calor producido
y deben ser reemplazados por un intercambiador externo,

La decisin entre una camisa

494

Los circuitos externos de refrigeracin evitan las restricciones impuestas por el


diseo del reactor e independizan la transferencia de masa de la transferencia
de calor. Usualmente en un intercambiador externo se logran mayOrs coeficentes de transferencia de calor que en los sistemas de camsa o de serpentn.

Las principales desventajas de un intercambiador externo son el costo de


bombeo y la dificultad para encontrar bombas que puedan manejar, de una
manera eficiente y econmica, caldos saturados de aire a los flujoS y presiones
requeridas por el circuito externo. Un sistema de bombeo bien diseado evita,
en algunos casos, la necesidad de utilizar un sistema de agitacin con
impulsores. Ocasionalmente los fermentadores son enfriados con aire o
refrigerados mediante la evaporacin de una pelcula lfquida externa. Otra
posibilidad de minimizar el problema transferencia de calor, sin disminuir apreciablemente las velocidades de produccin, es la utilizacin de un sistema de
refrigeracin mecnica.

Aunque el refrigerante reduce el rea de transferencia requerida, su costo es


elevado. Por ejemplo, la carga calorffica de un fermentador de 200 m3 puede
alcnzar un valor de 1758 kW, con un costo de refrigeracin de S 60 dlares
por hora, (Charles M., 1985).

La utilizacin de organismos termoflicos disminuye los requerimientos

de
las
termoflicas
cepas
la
mayorfa
de
Desafortunadamente
calor.
de
transferencia
son menos productivaS que sus correspondientes mesoflicas, pero este no es

el nico factor que se debe considerar.


En la medida que aumenta la tendencia hacia el empleo de organismos ms
eficientes y mayores concentraciones celulares en los caldos de fermentacin,
aumenta la importancia de la transferencia de calor como factor limitativo del
tamao y de la productividad de un biorreactor.

Otros aspectos que deben recordarse al evaluar la transferencia de calor en el


diseo de un reactor agitado son:

El agitador nicamente afecta el coeficiente de transferencia de calor por el

lado del mezclador.

Generalmente los tanques equipados con pantallas deflectoras, usualmente


cuatro pantaltas uniformemente espaciadas de anchura igual a la dcima parte
del dimetro del tanque, conducen al diseo ms econmico.

495

- La seleccin de un agitador para asegurar la operacin del sistema en una zona


de conveccin forzada, normalmente resulta en el diseo rns econmico y, por
consiguiente, o es una buena prctic disear un agitador para obtener un

coeficiente especffico de transferencia de calor,

7.5.3

Transferenca de masa

Generalmente las ecuaciones disponibles en la literatura para la determinacin


del coeficiente vblumtrico de transferencia de oxgeno, K.a, son ecuaciones
empfricas, vlidas para fluidos Newtonianos (fundamentalmente agua con o sin
iores) y no-Newtonianos, usualmente soluciones de carboximetilcelulosa , CMC.
Belmar, 1 984, ealiz un estudio donde se comparan diferentes ecuaciones para
evaluar Kra en el caso de agua. La forma general de este tipo de ecuaciones
corresponde a la expresin:

K,a u,

(+)" v!

f7.97'l

tjonde, Kra: coeficiente volumtrico de transferencia de oxgeno, s-l


m/s; vs :

vr:

velocidad superficial,
O/A; O: caudal de gas, m3/s; A: rea transversal
de fa columna, m2: PnlV: potencia entregada por impulsor y por unidad de
volumen en la dispersin gas-lquido, W/m3. Estas ecuaciones deducidas
emprcamente usualmente no son aplicables en situaciones apreciablemente
diferentes de las condiciones para las cuafes fueron deducidas
Herbst et al., 1992, y Solomon, 1980, recopitaron ecuaciones y datos de la
literatura relacionados con la evaluacin delcoeficiente KLa en el caso de fluidos

'viscosos no-Newtonianos. En trminos generales puede observarse un


incremento en el valor de K,-a conforme aumenta la velocidad de agitacin, de
acuerdo con la siguiente expresin general:

KIn u

lL-^

t7.98I

Donde. K,-a: coeficiente volumtrico de transferencia de oxgeno, s't'; lt:


viscosidad del fluido, kg.m-t,s-1; El valor del exponente m vara entre 0,4 y 0,6.
496

En el Ejemplo 7.6 adaptado de Oldshue, 1983, se muestra una estrategia de


cambo de escala donde se mantiene constante un parmetro especfico en un

reactor de 100 litros y en otro de 10.000 litros. En este caso los dems
parmetros no pueden controlarse y toman valores diferentes de los originales
(Tabla 7.10) a medida que cambia el volumen del sistema.

Eiemplo

7.6

Estudio del comportamento de algunas varables en


el procedimento de cambio de escala

Suponer que las propiedades de un caldo de fermentacin tales como composi-

cin del medio, temperatura, pH y concentracin de oxgeno disuelto, son


similares en un reactor de 100 litros y en otro de 10.000 litros. Suponer que
los fermentadores, geomtricamente similares, estn equipados con un impulsor

de turbina y cuatro pantallas deflectoras, y que el patrn de flujo en ambos


reactores es de flujo turbulento plenamente desarrollado.
Determnar el comportamiento de los siguientes parmetros con el cambio de
escala: P, potencia en W; P/V, potencia por unidad de volumen de licor, Wi(m3);

n velocidad del impulsor; revoluciones/s; Do, dimetro del impulsor, m;

Oo:

caudal de aire alimentado al reactor, m3/s; Oo/V: relacin entre el caudal de aire
alimentado y el volumen de licor, s-t, o en v.v.m, (volumen de aire por volumen
de licor por minuto); n.Do: velocidad de la punta del impulsor, m/s; Rr, nmero

de Reynolds.
Utilizar los siguientes criterios de cambio de escala: 1- Potencia por unidad de
volumen constante en ambos reactores; 2- Velocidad del impulsor igual en
ambos reactores; 3- Velocidad de la punta del impulsor igual en ambos
reactores; 4- Nmero de Reynolds igual en ambos reactores; y evaluar el efecto
de cada criterio sobre los dems parmetros del sistema.
Solucin.

En la Tabla 7.10 se presenta un resumen de los valores relativos de los


diferentes parmetros del sistema de acuerdo con las diferentes estrategias de
cambio de escala.

498

ambos reactores, columnas A y B (Tabla 7.1O):


La relacin de los volmenes de caldo en ambos reactores esl

+=4$=1oo;
100
,vP

ad,,ts:

v a ol a ),

Donde los subndices G y P se refieren al reactor de 10.000 litros y al de 1O0


litros respectivamente.

- Dimetro del impulsor del reactor de 10.000 litros:

Drn=(1))1F=4,A4
El dimetro del impulsor del reactor de 10 m3 es 4,64 veces mayor que el
dimetro correspondiente del reactor de 0,1 m3,

- Velocidad del impulsor del reactor de 10.000 litros:

+ d nl .oln=nf,. ol,n
(1) . (1) = o3.

G,ilF

ns = 0,36
La velocidad de giro del impulsor del reactor

de 10 m3 es O,36 veces menor que


la velocidad correspondiente en el reactor de 0,1 m3.

- Caudal de aire en el reactor de 10.000 litros:

Qrc nn.Dlo= 0,36.(4,O4)o

= 36

El reactor de 10 m3 requiere un caudal de aire 36 veces mayor que el correspondiente al reactor de 0,1 m3.

- Volumen de aire por volumen de licor por minuto (v.v.ml en e! reactor

de

10.000 litros:
499

El caudal de aire, por unidad de volumen de

licor, suministrado al reactor de 10

m3 es O,36 veces menor que el correspondiente n el reactor de

0,1

m3.

- Velocidad de la punta del impulsor en el reactor de 10.000 litros:

ne-Dte= 0,36. (4,il) = 1,57


La velocidad de la punta del impulsor del reactor de 10 m3 es 1,67 veces mayor
que la correspondiente en el reactor de 0,1 m3.

- Nmero de Reynolds en el reactor de 10.O00 litros:

R,

o.

nn.Dl,6= 0,36. (4,6412 = 7,75

El nmero de Reynolds en el reactor

de 10 m3 es 7,75 veces mayor que e

el

reactor de 0,1 m3.

Tabla

7.10 Comportamiento

de algunas variables en el procedimiento de cambio

de escala.

Reactor de
100 litroa

R6acEor de
10.000 litroe

ED

A
1

P/v

100

2t5t

2t,5

0,27-5

2L,5

0,21

0,0021

n1

0,36

0,2L

0,0464

DA1

4,64

4,64

4,64

4,64

36

Qo1

100

Q"/Y

n.Do

)-,67

RE1
500

,36

7,15

2t,s

4,54

0; 215

4,64

0,215

2L,5

4,63

.1

,0464

ne = O'215

- Los dems

parmetros se calculan mediante un procedmiento similar al


desarrollado en los puntos anteriores.

4. criterio de cambio de escala:.Nmelo de Reynolds igual en ambos reactores,


columnas A y E (Tabla7.1Ol:
- Velocidad del,impulsor del reactor de 10.000 litros:
R, u n.Dl, ='l

no.Dl, = nc.(4,64)2

nn =

Q'Q$!

La velocidad de giro del impulsor del reactor de 10 m3 es 0,0464 veces menor


que la velocidad correspondiente en el reactor de O, 1 m3.

- Los dems

parmetros se calculan mediante un procedimiento similar al


desarrollado en los puntos anteriores.

PROBLEMAS

7.1

Con el propsito de evaluar el coeficiente de transferencia de oxgeno se


alimenta un fermentador con 1,2litros de una solucin 0,5 M de sulfito de sodio
y 0,003 M de iones cut*. se inicia la alimentacin de aire y se pulsa elcronmetro cuando las primeras burbujas de aire emergen del dispersor, (tiempo
cerl. Despus de un perfodo de oxdacn de 624 segundos, se susBende la
agitacin y la alimentacin de aire, se.toma una muestra de 10 ml y se anota la
temperatura del caldo, (3O oC a 1 atmsfera).

La muestra se mezcla con un exceso de reactivo estndar de yoduro recin


preparado. La concentracin de sulfito de sodio en la muestra, obtenida a partir
de la titulacin con solucin de tiosulfato (Narsror) hasta el punto final con un
indicador de almidn, es de 0,16 mol/litro.

502

Calcular: 1- La cantidad de sulfito de sodio, mol/litro, que reacciona en 624 s;


2- Eloxgeno que reacciona con el sulfto de sodio, mol/litro; 3- La demanda de
oxgeno, en (g Or)/(litro.s); 4- La solubilidad del oxfgeno en equilibrio con el aire,
c-r, g/litro. 5- El valor de K,_a, {coeficiente volumtrico de transferencia de masa,
s-1).

7.2Un reactr de mezcla completa (D, : 1,2 m) se llena con agua hasta una
altura H = 0,8 m. El tanque est equipado con 4 pantallas deflectoras de

anchura J : 0,12 m y un impulsor de turbina de 6 hojas planas que gira a 260


rpm (dimetro del impulsor: D : 0,4 m). Aire a 25 oC (Presin local : '10,8
psi; Presin manomtricd = 5 psi) entra al reactor por un orificio situado debajo
del impulsor a raz6n de 2S litros/s.
Calcular: 1- La potencia entregada al fluido sin aerar; 2- La potencia entregada
al liquido gaseado; 3- La fraccin volumtrica de gas; 4- El dimetro medio de
las burbujas; 5- El rea de la superficie de separacin entre burbujas y lquido;
6- El coeficiente volumtrico de transferencia de oxgeno, Kra; 7- El coeficiente
de transferencia de oxgeno, K..

7.3

Una industria bioqumica utiliza un reactor de mezcla completa equipado


con camisa y serpentn interno para el control de la temperatura, tres impulsores
tipo turbina Rushton acoplados al mismo eje y cuatro pantallas deflectoras

uniformemente espaciadas (dimetro del tangue, Dr = 5 m; dimetro del


impulsor, D : 1,33 m; altura del tanque, Hr : 1 5 m; anchura de las pantallas
deflectoras, J : 0,5 m; potencia delmotor:745 kW; velocidad de rotacin:48
rpm. Los requerimientos de oxfgeno del proceso son satsfechos con alre estril
(Presin local: 10,8 psi; temperatura: 28 oC) suministrado a razn de 0,6
volmenes de aire por volumen de licor por minuto. Volumen de caldo en el
reactor: Y = 22O m3; rendimiento de oxfgeno en clulas: 0,86 (g clulas)/(g Oz);
velocidad mxima de crecimiento de clulas: 0,78 (g clulasl/(litro.horal;
densidad del caldo: 1280 kg/m3; viscosidad del caldo: 0,36 kg/(m.s); Temperatura: 2B oC). Calor especlfico: 2836 kJ/(kg.'C).
Calcular: 1- La presin manomtrica del aire a la salida del dispersor localizado
entre el fondo del tanque y el primer impulsor si la presin en la cima del reactor
es 6 psig; 2- El oxgeno suministrado al cultivo en (g Or)i(litro de medio.hora);
3- La velocidad de demanda de oxfgeno del cultivo en (g Or)/(litro de medio.horal; 4- El coeficiente volumtrico de transferencia de oxfgeno, K.a, s-1; 5- La
potencia por unidad de volumen entregada al fluido sin aeracin, Wlitro; 6- La
potencia por unidad de volumen entregada al fluido gaseado, W/litro; 7- La

s03

velocidad superficial del aire, m/s; B- La velocidad superficial del aire correspondiente al punto de redispersin, m/s; 9- La velocidad en la punta del impulsor;

10- El calor generado por metabolismo, por la agitacin mecnica y por la


dispersin del aire, W/(litro); 1 1- El coeficiente de transferencia de calor entre
la camisa y el licor; 12- El coeficiente de transferencia de calor entre el serpentn
interno y el licor; 13- El rea de transferencia de calor requerida para mantener

el caldo a 28 oC. Suponer que el fluido de enfriamiento es agua

cuya

temperatura varla desde 12 hasta 16 oC.

7.4 Difusin de oxgeno en capilares: Calcular la mxima concentracin de


clulas sobre la superficie exterior de una fibra cilfndrica (radio interior: 50 pm;
radio exterior: 25O pml. Coeficiente de difusin de oxgeno a travs de la masa
celular: D = 2,2.10-5 cm2ls; velocidad especfica de consumo de Oz, p(O2l :
3,6.10-13 mol Orl(clula.horal; concentracin de oxgeno en la superficie de
separacin gas-llquido, c- : 2,4,10-a mmol O./ml
7.5

Difusin de oxgeno en soportes esfricos: Realizar un balance de oxgeno


para clulas retenidas dentro de un soporte esfrico poroso (Area superficial:
4.n.R2l sometdo a las siguientes condicrones:

c=c'

en

n=& , #=O

en R=O

Dbnde, Rr: radio de la superfcie de la esfera; c: concentracin de oxfgeno,


(mmol Oz)/ml; c*: concentracin de oxfgeno en la superficie de separacin gasllquido. .Demostran

'(o")

o.(1"- . ? L\
[n' R dR)

Tambin:

c=c* -'=(':).(^:-*')
6.D

Donde, c: concentracin de oxgeno, (mmol Or)/ml; r(O)r: velocidad de consumo


de oxgeno, lOURl, (mmol Or)/(cm3.s); D: coeficiente de difusin del oxgeno en
agua, cm2/s.

504

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'l

514

INDICE DE MATERIAS

Aceites vegetales

101

Acetil colina, hidrlisis


en presenqa y en ausencla
de un inhibidor

258

Agitacin de fluidos
Newtonianos no gaseados
Newtonianos gaseados . . . .
no Newtonianos no gaseados
gaseados no Newtonanos

Agua

tonicidad
.........
actividad
actividad y

277
275

influencia sobre la

velocidad relativa de

410

diversos bioprocesos

279

422
419
422

diseo de

medios

97

423

Agitacin, aeracin
cambio de escala

410
492

evaluacin de la potencia
entregada al fluido

421

y dispersin

Almidn, hidrlisis

conq-amilasa...r .
con maltosa
con c-dextrina

2O7

228
229

Aminocidos en el licor
de maceracin de

mafz

103

Anlisis en la evaluacin
de parmetros cinticos

Aire
calentamiento directo
calentamiento indirecto
compresin politrpica

388
388
386

condiciones del aire


requerido por la industria

385

dispersin en sistemas

sin agitacin mecnica . . . .

462

con agitacin mecnica . . . .

463
384
386
388

esterilizacn

por calor
por filtracin

diferencial

integral

.....

3O2

termodinmico del
metabolismo microbial

126

Antibiticos producidos
por bacterias y hongos . . . . .

25

Aplicaciones
de la lngenierfa Bioqufmica . .

22

de los lenguajes de
simulacin en ingeniera
Azcar de caa, simulacn

Aire, prdida de presin


filtros de fibra

3O5

delahidrlisis

....

43

.:

235

de vidrio
Bacterias

lecho empacado
con lana mineral
en una vela de "Celloton" . .

390
.

productos ndustrales
produccin de antibioticos, .

23
25

392
perodo de reproduccin
de varias especies
tipos de nutricin

273
91

515

Biomasa

valores de pH para
el desarrollo
Balance de

281

energa

decrecimiento...

288

164

del proceso aerobio de


produccin de levadura . . .

Calor
rea de

.. .

transferencia

425

171
Calor. coeficiente

del proceso anaerobio de


produccin de etanol .......
Balance de

influencia de la concentracin
sobre la velocidad especfica

114

materiales

52

de la biomasa,
determinacin

consideraciones sobre

cintica y simulacin

reactores
de'elementos qulmicos
de

detransferencia...
Calor de combustin
de las clulas

429
142

152
1

50,1 52

322

145

Calor de reaccin
54

Calor especfico en fermentacin 170

en una fermentacin

anaerobia

56
Calor generado

de carbono durante el
crecimiento de S. cereu

iae

de oxgeno durante el
crecimiento de S. cerevisiae . .

83
. 84

.......
disponibles

decarbono yoxgeno
de electrones

en catlisis enzimtica
en fase heterognea

57
245
q0

cinticas

captulo 1 . ... .
captu|o2....

46
116

capftulo 3

181

captu|o5....
capftulo6....
captu|o1....

351
4O2
505
30

Biocatalizador

Biomasa
modelos cinticos no
estructurados para crecimiento

516

por metabolsmo aerobic en


un reactor por lotes

169
150
166
167

55

formulacin de ecuaciones
Bibliografa

por metabolsmo
por mol de 02 .
por actividad metablicr .

:
282

Calor, produccin
bajo represin por

glucosa . .

53

55

durante el crecimiento

microbial

C br transferido

enfermentacin...
en un reactor aerbico
en cambio de escala

encondcionesinestables...

agitacin
comportamientodevarlables.
transferenciadecalor
transferencia de masa

424
437
493
436
491

492
498
493
496

Capacidad calorfica

enfermentacin...

17O

Caracterstcas de la lana mineral 390

Carbono
balance

55
balance durante el crecimiento
83
de S. cerevisiae
89
fuentes
9
Catabolismo y anabolismo
Catlisis enzimtica
en fase heterognea
balance de

materia
sustrato

consumo de

239
245
246,249

qumicos
fsicos
Clulas
cultivo

24O
242
2

representacin esquemtca . . . .

31

de mamfferos
condiciones ambientales . . .

'

. 480
filtracin a travs de membranas 41
informacin gentica
3
productos intracelulares
39
productos e)Gracelulares . . . . . 40
representacin esquemtica . . . . 3
ruptura
......
40
separacin
39
tipos bsicos
2
Ciclos
del cido tricarboxflico
15
de esterilizacin, dseo
37O
energtco de las clulas . . . 134
Cintica
de las reacciones
catalizadas por enzimas . . . . . 185
modelos cinticos
2OO
de la destruccin de
microorganismos mediante
calor htlmedo
357

Cintica
evaluacin de parmetros
a partir de datos
experimentales . , ' .
modelos cinticos

noestructurados ....

y
productos

consumo de sustrato

formacin de

263

282

para. la inhibicin del

crecimiento
modelos cinticos para
la formacin de producto

292
297

Clasificacin de microorganismos
del reino protista

de mantenimiento,
determinacin grfica

86

Arrhenius
Cofactores y coenzimas
Columnas de burbujeo

359

de

186

343

Compo