Manual Laboratorio Fisiología Celular IPN

INSTITUTO POLITÉCNICO NACIONAL
ESCUELA NACIONAL DE CIENCIAS

BIOLÓGICAS
DEPARTAMENTO DE FISIOLOGÍA
“DR. MAURICIO RUSSEK BERMAN”
MANUAL DE LABORATORIO DE
FISIOLOGÍA CELULAR (QFI)
3ª EDICIÓN
Febrero de 2018
AUTORES
Responsable de la 3ª edición: M. en C. Ana Lilia Gutiérrez Lozano

Dra. Alva Sánchez Claudia
M. en C. Avila Velarde Gerardo
Dra. Barrera Segovia Julia
Dr. Chuc Meza Eliézer
Dr. De la Cruz López Fidel
M. en C. Escalona Cardoso Gerardo Norberto
Dra. Franco Colín Margarita
Dra. Garcés Ramírez Linda
Dra. García Ramírez Martha
Biól. Guarneros Bañuelos Elizabeth
Dra. Ortiz Butrón María del Rocío Elizabeth
Dr. Pacheco Rosado Jorge
Dra. Paniagua Castro Norma
Dr. Ramírez San Juan Eduardo
Dr. Villanueva Becerril Iván
Dr. Zamudio Hernández Sergio Roberto
2
ÍNDICE
Página
ÍNDICE …………………………………………………………………………..……………… 3
NORMAS DE LABORATORIO ………………………………………..………………..…... 4
Práctica 1. Aspectos generales del manejo de animales de laboratorio y vías
de administración ……………………………………….………………………. 5
Práctica 2. Conceptos básicos de homeostasis …………………………………………. 14
Consentimiento informado de la práctica 2 ……………………………………………… 21
Práctica 3. Estudio de la penetración de sustancias a las células normales …………. 26
Consentimiento informado de la práctica 3 ……………………………………...……… 31
Práctica 4. Potencial de difusión y potencial de lesión ………………………..……….… 36
Práctica 5. Simulación por computadora del potencial de acción ……….…………..…. 46
Práctica 6. Potencial de acción compuesto ……………………………………………..… 57
Práctica 7. Modulación de una función celular por señales químicas ……….……...… 67
Práctica 8. Transmisión sináptica y músculo esquelético ……………….…..………..… 75
Práctica 9. Propiedades del músculo cardiaco …………………….………….………..… 86
Práctica 10. Propiedades del músculo liso ……………………………………………..…. 95
Apéndice: Calibración del Biopac (MP36) ……………………………………….………. 105
3
NORMAS DE LABORATORIO
1. En la medida de lo posible, los equipos NO deberán exceder un máximo de 6
integrantes.
2. Cada equipo ocupará una mesa que será la misma durante todo el curso.
3. Los alumnos deberán usar bata, de preferencia blanca, en las sesiones prácticas.
4. Cada equipo deberá tener: a) dos franelas de 50 x 50 centímetros, b) equipo de

disección: pinzas de disección y presión, bisturí con hoja, tijeras de punta fina, aguja de
disección e hilo de algodón, c) marcador indeleble, d) cinta adhesiva (masking tape).
5. Cuando se utilice el equipo Biopac, los alumnos deberán guardar los archivos de sus
prácticas en un CD, no se permite el uso de memorias USB.
6. No se permite la ingesta de alimentos durante la estancia en el laboratorio.
7. El laboratorio deberá quedar limpio al terminar la sesión práctica: mesa limpia,

bancos sobre las mesas, cadáveres de animales en una bolsa de plástico y sin papeles
sucios en el piso.
8. El material roto, extraviado o descompuesto deberá reponerse a la mayor brevedad,

de lo contrario no tendrá derecho a presentar exámenes y prácticas.
9. Los resultados de las prácticas serán reportados por escrito. El reporte deberá
contener: a) Portada, b) Introducción (no más de 2 cuartillas), c) Objetivos, d)
Fundamento, e) Metodología (diagrama de flujo), f) Resultados (cuadros, gráficas y su
análisis estadístico y descripción correspondiente), g) Análisis de resultados (o
discusión), h) Conclusiones, i) Bibliografía. Los reportes deberán estar preparados, por
lo menos en calidad de borrador, para el día de la presentación del seminario.
10. Los alumnos que no cumplan con un mínimo de 80% de asistencias al curso, no
podrán acreditar la materia. Se tomará como retardo, la llegada dentro de los 10
minutos después de la hora de entrada establecida. Tres retardos constituyen una falta.
4
PRÁCTICA 1. ASPECTOS GENERALES DEL MANEJO DE ANIMALES
DE LABORATORIO Y VÍAS DE ADMINISTRACIÓN
INTRODUCCIÓN
Actualmente muchos de los experimentos de las ciencias biológicas se realizan
en animales modelo, los cuales se han denominado animales de laboratorio y la rata es
uno de los más usados.
La legislación en México (NOM-062-ZOO-1999), y a nivel mundial, exige que se
reduzca el uso de los animales destinados a la experimentación a lo absolutamente
necesario y también que se minimice su sufrimiento, ya que éste, además de
contravenir normas bioéticas, puede condicionar respuestas anómalas, por lo cual, se
debe evitar el manejo inadecuado y brusco de los animales para prevenir reacciones
agresivas de éstos hacia el experimentador.
Hay que considerar que las características de los animales se encuentran distribuidas al
azar (peso corporal, agresividad, etc.) y debido a ello es de gran importancia que se
realice una distribución aleatoria, la cual permite tener grupos homogéneos y resultados
representativos de toda una población.
Aunado a esto, el marcar a los animales facilita su identificación para los diferentes
ensayos de laboratorio. El marcado puede ser para experimentos agudos, que duran de
tres a ocho horas, o para experimentos crónicos, que duran semanas y/o meses.
En muchos de los experimentos que se realizan, se administran fármacos a los
animales, éstos pueden ser gases, soluciones, suspensiones o sólidos. La forma en la
que está un fármaco es un factor importante para la velocidad de absorción, también lo
son la vascularización del sitio de administración, y el área de la superficie absorbente,
de esta manera, los fármacos son absorbidos más rápido en áreas con riego sanguíneo
abundante (pulmones, peritoneo) que en sitios con menor flujo, como los subcutáneos.
Cabe mencionar que las vías de administración de sustancias deben seleccionarse con
base en la naturaleza fisicoquímica de la sustancia a aplicar y el animal de laboratorio
que se empleará y, que éstas se dividen en dos grupos principales:
a) Enterales, que usan el tracto gastrointestinal (oral, sublingual, intragástrica, rectal).
b) Parenterales, que no utilizan el tubo gastrointestinal (tópica, subcutánea,
intradérmica, intramuscular, intraperitoneal, intravenosa, inhalatoria, etcétera).
De acuerdo a lo anterior, en este experimento se practicarán los principales métodos
para el manejo, el marcado y la distribución aleatoria de animales de laboratorio, así
como las vías más usadas para la administración de sustancias o fármacos.
OBJETIVOS
- Manipular correctamente ratas de laboratorio.
- Distribuir aleatoriamente a las ratas utilizando un método adecuado.
- Determinar la importancia de la distribución aleatoria de los animales.
5
- Aprender el marcado adecuado de animales para la realización de experimentos
agudos.
- Aprender a administrar, a los animales más usados en el laboratorio, sustancias o
fármacos por vías enterales y parenterales.
- Calcular el volumen de las sustancias que se van a administrar en función de la dosis.
- Organizar los datos obtenidos para su reporte y análisis.
MATERIAL (por equipo)

- Biológico: 3 ratas (Rattus norvegicus Var. Wistar) de 250 a 300 gramos por equipo.
- Soluciones:
- Pentobarbital sódico (nembutal).
- Ácido pícrico.
- Instrumental y equipo:
- Caja de plástico con tapa.
- Balanza digital y canasta con tapa.
- 3 Termómetros digitales o industriales.
- 3 Jeringas de 1 mL con aguja.
- Cánula para administración intragástrica en rata.
- Vaso de precipitados de 50 mL.
- Vaselina.
- Material que debe traer el estudiante:
- Franela, cinta adhesiva (masking tape), marcador indeleble y periódico.
- Opcional: guantes (látex o nitrilo) y cubre bocas.
DESARROLLO
1. Practique, durante toda la sesión, las técnicas básicas para el manejo de la rata.
Evite manejar a la rata con violencia, pues rápidamente aprende a defenderse y se
torna difícil y peligrosa.
Figura 1. Sujeción recomendada de la rata.
6
Para manipular a la rata es conveniente tomarla suavemente y con seguridad por el
dorso, rodeando el tórax con la mano (Figura 1), pero teniendo cuidado de no presionar
con demasiada fuerza porque se puede asfixiar. En caso de que vaya a trasladar a la
rata por distancias cortas (por ejemplo, de la jaula a la mesa de laboratorio), se
recomienda tomarla por la base de la cola.
2. Distribuya aleatoriamente 18 ratas en 6 equipos. Para integrar los grupos de ratas se
generan números aleatorios con una calculadora científica. Como son 6 equipos, los
números mayores de 6 se ignoran y sólo se toman en cuenta del 1 al 6. Si el primer
número aleatorio es 0.412, la rata que se retira de la jaula (tomándola de la base de la
cola) se pasa a la caja del equipo 4; si el siguiente número es el 0.355, la rata
seleccionada es para el equipo 3, y así sucesivamente, hasta que cada equipo tenga 3
ratas.
3. Marque y pese a las ratas. En el caso del marcado para experimentos agudos se
utiliza el método de manchado que consiste en aplicar un colorante (ácido pícrico) por
medio de un hisopo, en diferentes regiones del cuerpo, lo que permite hacer diferentes
combinaciones: CA-cabeza; CO-cola; MI-pata delantera izquierda; MD-pata delantera
derecha; PI-pata trasera izquierda; PD-pata trasera derecha; LO-lomo; CACO-cabeza y
cola, etc. También puede utilizarse un marcador indeleble.
4. Calcule, para cada rata, el volumen de pentobarbital sódico que se requiere
administrar, si la concentración de la solución de pentobarbital es 63 mg/mL y la dosis
anestésica para estos animales es de 35 mg/kg.
5. Mida la temperatura colonal y determine la presencia o ausencia de los reflejos flexor
y de enderezamiento en las ratas. Éstos se considerarán los valores basales.
5a) Para medir la temperatura colonal de las ratas: introduzca por el recto el bulbo del
termómetro untado con vaselina (si el termómetro es industrial, debe introducirse
aproximadamente 5 centímetros y mantenerse así aproximadamente durante 1 minuto
para realizar la lectura).
5b) Observe y registre la presencia o ausencia de los reflejos flexor y de
enderezamiento. Para el reflejo flexor, aplique un estímulo doloroso en alguna de las
patas de la rata, se registra como presente si la rata retira la pata. Para el reflejo de
enderezamiento, coloque la rata “boca arriba” (posición supina dorsal) sobre la mesa de
trabajo, si la rata se endereza y se posa sobre sus 4 patas, se considera que el reflejo
está presente.
6. Determine qué vía de administración se utilizará con cada una de las 3 ratas
(intragástrica, intraperitoneal o subcutánea) y administre adecuadamente (ver adelante)
el volumen de pentobarbital calculado previamente.
6a) Vía intragástrica. La jeringa debe ser precargada con el volumen de pentobarbital
a administrar. Una vez se complete el volumen la cánula debe acoplarse a la jeringa y
se debe presionar levemente el embolo para garantizar que la sustancia quede al tope
de la boquilla de la cánula y con esto evitar la introducción de aire en el estómago. La
cánula debe iniciar su entrada a través de la comisura labial de la rata. Se debe ir
introduciendo lentamente la cánula, lateral a la lengua y, permitir que el animal exponga
7
la lengua por acción refleja. Una vez que la cánula llegue a la faringe, se deben hacer
leves movimientos giratorios de la jeringa con el fin de facilitar la introducción de la
cánula por el esófago. Una vez ubicada la cánula en el estómago, se debe iniciar la
administración del pentobarbital a una velocidad media observando si hay algún tipo de
reacción anormal en la rata.
6b) Vía Intraperitoneal. Con los dedos índice y anular se sujeta la piel del cuello de la
rata, con el resto de la mano y dedos se sujeta el abdomen de ésta. Una vez el animal
este inmovilizado, se hace una división imaginaria de su abdomen en 4 cuadrantes y se
toma la jeringa con la mano libre. Las punciones deben practicarse en la mitad inferior
del abdomen, con la aguja-jeringa dirigida en un ángulo de 45 grados con relación a la
parte ventral de la rata.
Cuando se trabaje con ratas de más de 250 gramos de peso, es recomendable realizar
el procedimiento entre dos personas: la persona que sujeta al animal debe inmovilizar
con una mano y con la otra estirar la cola o las patas posteriores. En este
procedimiento, la rata puede ponerse “de cabeza”, para garantizar que las vísceras
abdominales se desplacen hacia el tórax y disminuya el riesgo de perforar el intestino.
La otra persona, levanta con una mano la piel de la región abdominal inferior, para
separar la pared del contenido abdominal y evitar así su punción. Primero se introduce
la aguja subcutáneamente hasta la mitad de su longitud y luego se acaba de introducir
verticalmente a través de la pared abdominal (Figura 2).
Figura 2. Administración intraperitoneal.

6c) Vía subcutánea. La rata debe sujetarse jalando ligeramente la piel del dorso del
cuello, esto puede hacerse con los dedos pulgar e índice de la mano izquierda. El
animal debe permanecer en posición horizontal sobre una mesa y con el resto de la
mano se debe hacer una leve fuerza para garantizar su inmovilidad. La mano derecha
queda libre para hacer la inyección clavando la aguja en la piel que queda entre el
pulgar e índice y en sentido céfalo-caudal. Para asegurarse de que la inyección sea
subcutánea, una vez atravesada la piel, se sigue el trayecto de la aguja con los dedos.
La administración debe hacerse a una velocidad media observando si hay algún tipo de
reacción anormal en el animal.
8
7. Mida la temperatura colonal y determine la presencia o ausencia de los reflejos flexor
y de enderezamiento en las ratas después de haber realizado la administración de
pentobarbital por las diferentes vías, esto se hará cada 5 minutos durante 25 minutos.
DATOS
a) Temperatura colonal (°C)
* Vía intragástrica (IG)
Tiempo Equipo Equipo Equipo Equipo Equipo Equipo
(min)
1 2 3 4 5 6
0 (basal)
5
10
15
20
25
* Vía intraperitoneal (IP)

(min)
1 2 3 4 5 6
0 (basal)
5
10
15
20
25
* Vía subcutánea (SC)

(min)
1 2 3 4 5 6
0 (basal)
5
10
15
20
25
9
b) Reflejos de enderezamiento (E) y flexor (F). Marcar presencia (0) o ausencia (1).
* Vía intragástrica (IG)
Equipo Equipo Equipo Equipo Equipo Equipo
Tiempo
1 2 3 4 5 6
(min)
E F E F E F E F E F E F
0 (basal)
5
10
15
20
25
* Vía intraperitoneal (IP)

Tiempo
1 2 3 4 5 6
(min)
0 (basal)
5
10
15
20
25
* Vía subcutánea (SC)

Tiempo
1 2 3 4 5 6
(min)
0 (basal)
5
10
15
20
25
10
PRESENTACIÓN DE RESULTADOS
Reúna los resultados de todos los equipos para las variables de temperatura colonal y
presencia o ausencia de reflejos de enderezamiento y flexor.
a) Temperatura colonal.
Calcule la media y el error estándar de los datos de temperatura colonal de las ratas
administradas con cada vía en cada uno de los tiempos considerados.
Elabore la gráfica de temperatura colonal contra tiempo y realice el análisis estadístico
(ANOVA bifactorial de medidas repetidas).
b) Reflejos de enderezamiento y flexor.
Determine el porcentaje de ratas que perdieron el reflejo de enderezamiento para cada
uno de los tiempos y vías de administración. Haga lo mismo con el reflejo flexor.
Elabore los gráficas de porcentaje de ausencia de los reflejos, tanto flexor como de
enderezamiento, contra tiempo.
BIBLIOGRAFÍA
 Academia Nacional de Medicina, Academia Mexicana de Ciencias y Universidad
Nacional Autónoma de México. (1999). Guía para el cuidado y uso de los
animales de laboratorio. México.
 Aréchiga, H. (1999). El uso de animales en el laboratorio de experimentación.
Elementos, BUAP. (36):13-17.
 Baker, J. H.; Lindsey, J. R. and S. H. Weisbroth, Eds. (1980). The laboratory rat.
Vol II. Academic Press. London and N.Y. Pp: 3.28.
 Barastegui, A. C. (1976). Esquemas de prácticas de farmacología. Espaxs. Pp.
26-27.
 Daniel, W. W. (2010). Bioestadística. Base para el análisis de las ciencias de la
salud. 4ª edición. Limusa-Wiley. México.
 Fox, G. J.; Anderson; C. L.; Loew, M. F. and F. W. Quimby, Eds. (2002).
Laboratory animal medicine. 2nd edition. American College of Laboratory Animal
Medicine Series. Academic Press. U.S.A.
 Norma Oficial Mexicana sobre especificaciones técnicas para la producción,
cuidado y uso de los animales de laboratorio (NOM-062-ZOO-1999). Diario
Oficial de la Federación, 22 de agosto de 2001.
11
PRÁCTICA 1. ASPECTOS GENERALES DEL MANEJO DE ANIMALES
DE LABORATORIO Y VÍAS DE ADMINISTRACIÓN
Diagrama de Flujo
12
Notas:
13
PRÁCTICA 2. CONCEPTOS BÁSICOS DE HOMEOSTASIS
INTRODUCCIÓN
Todos los organismos vivos están continuamente sujetos a cambios ambientales que
los afectan en todos sus niveles: órganos, tejidos, células y vías metabólicas (sistemas).
Los organismos responden a los cambios energéticos del medio (estímulos)
manteniendo constante su medio interno (variables reguladas) mediante el control de su
entrada y salida de energía. Es esta, la cibernética aplicada a la fisiología, la base
esencial para una mejor comprensión del funcionamiento de los seres vivos.
Los sistemas reguladores tienen varios elementos que considerar: la variable regulada,
los receptores de esta variable, el centro integrador (con el valor de referencia de la
variable regulada), las asas de información (retroalimentación y anteroalimentación) que
llevan información tanto al subsistema de entrada como al de salida para modificar a las
variables controladas.
En particular, la temperatura es una variable que debe mantenerse en valores muy
cercanos a su valor de referencia aún a pesar de las perturbaciones del medio, esto
puede realizarse tanto en sistemas tecnológicos como en organismos vivos y se
estudiará en la presente práctica.
OBJETIVOS
- Identificar y analizar los distintos estados de un sistema.
- Manejar e integrar los conceptos de regulación y control.
- Demostrar algunos aspectos de la homeostasis.
MATERIAL
- Biológico: 4 ratas (Rattus norvegicus Var. Wistar) de 250 a 300 gramos por equipo.
- Soluciones:
- Pentobarbital sódico (nembutal).
- Equipo e instrumental:
- 2 Cajas de plástico para rata con tapa.
- 2 Termómetros industriales.
- 2 Termómetros digitales.
- Baño.
- Resistencia con termostato.
- Termómetro de carátula.
- Vaso de precipitado de 50 mL.
- 4 Jeringas de 1 mL.
- Vaselina.
- Cubos de hielo.
14
- Franela, periódico, cinta adhesiva (masking tape) y marcador indeleble.
- Termómetro clínico o digital para uso personal.
- Opcional: guantes (látex o nitrilo) y cubrebocas.
DESARROLLO
I. Sistema tecnológico
Nota: Los alumnos que no entren al cuarto frío o al cuarto caliente permanecerán en el
laboratorio para realizar este experimento.
1. Coloque en un baño 2 litros de agua a temperatura ambiente (mida esta temperatura
con un termómetro de pared).
2. Ponga en el baño una resistencia con termostato y ajústelo 10°C por arriba de la
temperatura ambiente para que la resistencia caliente el agua.
3. Mida la temperatura cada 5 minutos hasta que ésta se mantenga constante durante
15 minutos.
4. Adicione 6 cubos de hielo (o el suficiente para bajar la temperatura del agua) y
registre la temperatura en este momento y cada 10 segundos durante 3 minutos,
después, cada minuto, hasta que la temperatura vuelva a tener el valor basal.
II. Temperatura colonal de rata y temperatura oral de humano
a) Temperatura ambiente
1. Registre la temperatura ambiente del laboratorio tomando la lectura en un
termómetro de pared.
2. Distribuya de manera aleatoria a 24 ratas en 6 equipos. Marque y pese a las ratas de
su equipo.
3. Elija 2 o más voluntarios de su equipo, uno o 2 de ellos entrarán a un cuarto frío, los
otros a un cuarto caliente. Con base en el Código de Nüremberg, en la Declaración de
Helsinki de la Asociación Médica Mundial y en el artículo 17 del Reglamento de la Ley
General de Salud en Materia de Investigación para la Salud, los alumnos voluntarios
deben firmar la Carta de Consentimiento Informado que se encuentra al final de esta
práctica (página 26).
4. Tome la temperatura colonal basal de las 4 ratas asignadas a su equipo. Éstas se
considerarán las temperaturas basales.
5. Los alumnos voluntarios deben medirse la temperatura oral (sublingual) a
temperatura ambiente, la cual será considerada la temperatura basal.
6. Etiquete 4 cajas de plástico para rata con las siguientes leyendas: SSI-cuarto
caliente, SSI-cuarto frío, PBS-cuarto caliente y PBS-cuarto frío. SSI: solución salina
isotónica, PBS: pentobarbital sódico.
7. Administre por vía intraperitoneal a dos ratas con solución salina isotónica (volumen
en mL = peso de la rata en gramos/1000), éstas serán sus ratas control. Cada equipo
colocará una de estas ratas en la caja con la leyenda SSI-cuarto caliente y la otra será
colocada en la caja con la leyenda SSI-cuarto frío.
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8. Antes de administrar a las ratas con pentobarbital sódico, verifique que tenga listo el
siguiente material:
- Manual de laboratorio con el cuadro de datos en el que estén anotados los valores
basales de temperatura colonal de rata y temperatura oral de humano.
- Franela, periódico, vaselina y termómetros para humano y rata (lo más conveniente es
llevar los termómetros industriales para el cuarto frío y los termómetros digitales al
cuarto caliente).
9. Administre a las otras dos ratas de su equipo con pentobarbital sódico (35 mg/kg de
peso), vía intraperitoneal. Cada equipo colocará una de estas ratas en la caja con la
leyenda PBS-cuarto caliente y la otra será colocada en la caja con la leyenda PBS-
cuarto frío. Tanto la administración como la clasificación de las ratas deben hacerse lo
más rápido posible.
10. Los voluntarios que van al cuarto frío deben tomar las cajas con las ratas
etiquetadas con SSI-cuarto frío y PBS-cuarto frío y su material. Los que van al cuarto
caliente, las cajas con las ratas etiquetadas con SSI-cuarto caliente y PBS-cuarto
caliente y su material.
b) Perturbaciones: cuarto frío y cuarto caliente
1. Entre al cuarto frío o al cuarto caliente con las cajas de ratas respectivas. Inicie la
cuenta de 30 minutos en su cronómetro. Registre la temperatura inicial del cuarto (8°C
para el cuarto frío o 40°C para el cuarto caliente o la temperatura que marque el
termómetro de pared que está en el cuarto). Tome la temperatura colonal a las ratas
cada 10 minutos y su temperatura oral cada 10 minutos.
2. Anote las respuestas conductuales o autónomas que presentan tanto ratas control
como anestesiadas y humanos para compensar las perturbaciones por disminución o
aumento de la temperatura ambiental.
3. Después de su última medición de temperatura (a los 30 minutos), regrese al
laboratorio con sus cajas de ratas y su material. Tenga especial cuidado en dejar los
cuartos limpios. Si alguno de los termómetros clínicos para humano se rompió,
infórmelo al profesor.
c) Regreso a temperatura ambiente
1. Realice dos mediciones más de temperatura colonal de rata y temperatura oral
(sublingual) de humano en los tiempos 40 y 50 minutos.
DATOS
I. Sistema tecnológico
Tiempo
Temperatura
del agua (°C)
Tiempo
Temperatura
del agua (°C)
16
II. Temperatura colonal de rata y temperatura oral de humano
a) Cuarto frío
Temperatura colonal (°C)

Rata control (SSI)
Temperatura Tiempo
del ambiente (min) Equipo 1 Equipo 2 Equipo 3 Equipo 4 Equipo 5 Equipo 6
(°C)
0 (basal)
10
20
30
40
50

Rata anestesiada (PBS)
Temperatura Tiempo
(°C)
0 (basal)
10
20
30
40
50
Temperatura oral (°C)

Humano
Temperatura Tiempo
(°C)
0 (basal)
10
20
30
40
50
17
a) Cuarto caliente

Rata control (SSI)
Temperatura Tiempo
(°C)
0 (basal)
10
20
30
40
50

Rata anestesiada (PBS)
Temperatura Tiempo
(°C)
0 (basal)
10
20
30
40
50
Temperatura oral (°C)

Humano
Temperatura Tiempo
(°C)
0 (basal)
10
20
30
40
50
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a) Sistema tecnológico.
Realice un gráfico de temperatura del agua en el eje de las Y contra tiempo en el eje de
las X. Marque claramente (con una flecha u otro símbolo) el tiempo en el que se
agregaron los cubos de hielo (perturbación).
b) Temperatura colonal de rata.
Calcule la media y el error estándar de cada grupo de datos a un determinado tiempo y
construya los siguientes gráficos:
a) Temperatura colonal (eje Y) contra tiempo (eje X) para las ratas administradas con
solución salina isotónica en cuarto frío y cuarto caliente.
b) Temperatura colonal contra tiempo para las ratas administradas con pentobarbital
sódico en cuarto frío y cuarto caliente.
c) Temperatura colonal contra tiempo para las ratas administradas con solución salina
isotónica y pentobarbital sódico en cuarto frío.
d) Temperatura colonal contra tiempo para las ratas administradas con solución salina
isotónica y pentobarbital sódico en cuarto caliente.
c) Temperatura oral de humano.
Calcule la media y el error estándar de cada grupo de datos a un determinado tiempo y
construya el gráfico de temperatura oral (eje Y) contra tiempo (eje X) para humanos en
cuarto frío y cuarto caliente.
Nota: Todos los gráficos anteriores deben indicar el tiempo que duró la perturbación
(con una línea, con una llave o con flechas), además deben incluir las diferencias
significativas con respecto al basal de acuerdo a los resultados de la prueba estadística
(ANOVA bifactorial de medidas repetidas).
d) Comparación de temperaturas de rata y humano.
Convierta todos sus datos a porcentaje del basal, para ello la temperatura basal será
considerada como 100%. Si lo prefiere, puede utilizar “deltas”, es decir, restar el valor
basal a todos los datos de un determinado tratamiento. Con estos datos, elabore los
gráficos siguientes:
Temperatura corporal (eje Y) contra tiempo (eje X) para las ratas administradas con
solución salina isotónica y humanos en cuarto frío.
Temperatura corporal contra tiempo para las ratas administradas con solución salina
isotónica y humanos en cuarto caliente.
Señale en ambos gráficos la duración de la perturbación e incluya las diferencias
significativas de acuerdo a los resultados del ANOVA bifactorial de medidas repetidas.
APÉNDICE: Solución fisiológica utilizada en esta práctica:

- Solución salina isotónica (0.9%) NaCl ...................... 9 g
Agua destilada ........1 L
19
BIBLIOGRAFÍA
 Daniel, W.W. Bioestadística. Base para el análisis de las ciencias de la salud.
1995. Noriega Eds. 5a Edición.
 Declaración de Helsinki de la Asociación Médica Mundial. Pautas Éticas
Internacionales para la Investigación y Experimentación Biomédica en Seres
Humanos. Consejo de Organizaciones Internacionales de las Ciencias Médicas
(CIOMS), 1993, Ginebra, pp. 53-56.
 Mainetti, J. A., Código de Nüremberg, Tribunal Internacional de Nüremberg,
1947. Traducción adaptada de Mainetti J. A. (1989), Ética Médica, Quirón, La
Plata, Argentina.
 Norma Oficial Mexicana sobre especificaciones técnicas para la producción,
cuidado y uso de los animales de laboratorio (NOM-062-ZOO-1999). Diario
Oficial de la Federación, 22 de agosto de 2001.
 Russek M. y M. Cabanac, 1983. Regulación y Control en Biología Instituto
Politécnico Nacional. México.
 Reglamento de la Ley General de Salud en Materia de Investigación para la
Salud. Diario Oficial de la Federación, 6 de enero de 1987.
 Steel, R.G.D. y Torrie, J.H. Bioestadística. Principios y Procedimientos. 1988.
McGraw-Hill.
20
BIOLÓGICAS
QUÍMICO FARMACÉUTICO INDUSTRIAL
FISIOLOGÍA CELULAR
CARTA DE CONSENTIMIENTO INFORMADO
Me han sido explicados claramente la justificación, los objetivos, los beneficios y

los posibles riesgos del estudio titulado: “Práctica 2. Conceptos básicos de
homeostasis”, dirigido por _______________________________________________,
profesor titular del grupo, los cuales no representan NINGÚN RIESGO PARA MI VIDA,
MI SALUD O MI BIENESTAR, por lo cual ACEPTO participar en este estudio.
Nombre del participante: __________________________________________________
Firma del participante: ____________________________________________________

Domicilio: ______________________________________________________________
Teléfono: ______________________________________________________________
e-mail: ________________________________________________________________
Nombre del profesor responsable: __________________________________________
Firma del profesor responsable: ____________________________________________

Adscripción: Departamento de Fisiología.
Teléfono: ______________________________________________________________
e-mail: ________________________________________________________________
Nombre y firma Testigo 1:

______________________________________________________________________
______________________________________________________________________
Fecha: ________________________________________________________________
21
EL PARTICIPANTE DEBE LEER EL SIGUIENTE ANEXO Y SI CONSIDERA QUE NO
EXISTEN DUDAS NI PREGUNTAS ACERCA DE SU PARTICIPACIÓN, PUEDE, SI
ASI LO DESEA, FIRMAR LA CARTA DE CONSENTIMIENTO INFORMADO.
A usted se le está invitando a participar en esta práctica de laboratorio. Antes de

decidir si participa o no, debe conocer y comprender cada uno de los siguientes
apartados. Este proceso se conoce como CONSENTIMIENTO INFORMADO.
Siéntase con absoluta libertad para preguntar sobre cualquier aspecto que le ayude a
aclarar sus dudas al respecto.
Una vez que haya comprendido el estudio y si usted desea participar como sujeto
voluntario, entonces se le pedirá que firme la CARTA DE CONSENTIMIENTO
INFORMADO, de la cual se le hará entrega de una copia firmada y fechada.
Justificación. En esta práctica de laboratorio se someterá a prueba la variable

temperatura corporal para determinar si es una variable regulada o una variable
controlada. Además, se determinará que especie es más sensible a los cambios de
temperatura ambiente, la rata o el humano.
Objetivo. Comparar las respuestas al frío y al calor en dos especies de mamíferos
endotermos (humano y rata) con diferente relación superficie-volumen.
Beneficios. Se determinará si la temperatura corporal (central) es una variable
regulada o controlada.
Criterios de inclusión. Personas voluntarias sanas, preferentemente no fumadoras,
que no consuman bebidas alcohólicas y/o drogas ilícitas.
Criterios de exclusión. Personas que se encuentren enfermas de gripa o tos,
asmáticos, hipertensos, mujeres embarazadas.
Criterios de eliminación. Personas que, por sus características individuales, sean
especialmente sensibles al frío o al calor.
Antecedentes médicos y hábitos. No fumadores, no hipertensos, no hemofílicos, no
consumidores de drogas ilícitas, no bebedores de etanol.
Riesgos. Las personas que se mantengan durante media hora en el cuarto frío podrían
presentar una ligera hipotermia.
Las personas que se mantengan durante media hora en el cuarto caliente podrían
presentar deshidratación o golpe de calor.
Asimismo, las personas participantes podrían enfermar de las vías respiratorias
después de participar en el estudio, esto debido a los cambios de temperatura que
experimentarán.
Procedimientos a utilizar. Las personas que acepten participar en el estudio se
mantendrán durante 30 minutos en un cuarto frío (4-10°C) o durante 30 minutos en un
cuarto caliente (32-40°C). Antes de entrar a cualquiera de los dos cuartos, se tomarán
22
la temperatura oral (sublingual) y también lo harán cada 10 minutos durante su estancia
en cualquiera de los dos cuartos. Cuando se retiren del cuarto, se tomarán dos
mediciones más de temperatura oral, con intervalos de 10 minutos entre cada una.
Cabe aclarar que las personas entrarán a los cuartos frío y caliente en compañía de
ratas administradas con solución salina isotónica (no anestesiadas) y con pentobarbital
sódico (anestesiadas), a las cuales también se les medirá la temperatura (en este caso
colonal) cada 10 minutos, durante 50 minutos.
NOTAS ACLARATORIAS: Es importante que al voluntario le queden claros los

siguientes puntos:
 En caso de que el participante desarrolle algún efecto adverso o requiera otro tipo
de atención, ésta le será brindada por el servicio médico de la ENCB.
 Su decisión de participar en el estudio es completamente voluntaria.
 No habrá ninguna consecuencia desfavorable para el participante, en caso de no
aceptar la invitación.
 Si decide participar en el estudio puede retirarse en el momento que lo desee.
 No recibirá puntos en su calificación del curso por su participación.
23
PRÁCTICA 2. CONCEPTOS BÁSICOS DE HOMEOSTASIS
Diagrama de Flujo
24
Notas:
25
PRÁCTICA 3. ESTUDIO DE LA PENETRACIÓN DE SUSTANCIAS A
CÉLULAS NORMALES
INTRODUCCIÓN
Para que una sustancia se mueva a través de una membrana plasmática se
requieren dos condiciones: que haya una fuerza impulsora (como un gradiente de
concentración o un gradiente osmótico) y que la membrana plasmática sea permeable a
tal sustancia. Los glóbulos rojos son células muy permeables al agua y por ello se
utilizan para estudiar fenómenos osmóticos. La ósmosis es un proceso de transporte
pasivo en el que el agua se mueve en función de la osmolaridad que existe entre 2
compartimientos separados por una membrana (en una célula estos compartimientos
podrían ser el líquido extracelular y el líquido intracelular). El agua puede difundir por la
bicapa lipídica de la membrana plasmática o por “canales de agua” denominados
acuaporinas.
La ósmosis depende del número de partículas de soluto que se encuentran dentro y
fuera de la célula y de acuerdo a esto se hace una clasificación de soluciones (que
equivaldrían al líquido extracelular) en iso-osmolares, hipo-osmolares e hiper-
osmolares. También existen las soluciones isotónicas, hipotónicas e hipertónicas,
dependiendo de cómo modifican la forma de la célula.
En esta práctica se estudiará cómo diferentes soluciones pueden producir el
movimiento de agua a través de la membrana de los eritrocitos, para producir su
hemólisis.
OBJETIVO
- Determinar los factores más importantes para la penetración de algunas sustancias a
través de la membrana celular por difusión simple.
MATERIAL Y SOLUCIONES
- Biológico: Sangre humana.
Soluciones:
- NaCl 0.9%.
- NaCl 0.2 M.
- KCl 0.2 M.
- BaCl2 0.2 M.
- Sacarosa 0.2 M.
- Alcohol metílico 0.3 M (coeficiente de partición=0.0097, PM: 32.04).
- Alcohol etílico 0.3 M (coeficiente de partición=0.0357, PM: 46.07).
- Alcohol propílico 0.3 M (coeficiente de partición=0.156, PM: 60.10).
- Alcohol butílico 0.3 M (coeficiente de partición=0.588, PM: 74.12).
- Alcohol etílico 96%.
26
- Centrífuga clínica.
- Lanceta o jeringa estéril, manguera de látex y tubo con heparina.
- 2 Pipetas Pasteur con bulbo de goma.
- 3 Pipetas graduadas de 1 mL.
- 3 Pipetas graduadas de 5 mL.
- Gradilla.
- 30 Tubos de ensayo de 8 o 10 mL.
- 4 Vasos de precipitados de 50 mL.
- Torundas de algodón.
Material que deben traer los estudiantes:
- Franela, cinta adhesiva (masking tape) y marcador indeleble.
- Guantes desechables (látex o nitrilo) y cubre bocas (opcional).
DESARROLLO
Para realizar el siguiente experimento y con base en el Código de Nüremberg, la
Declaración de Helsinki de la Asociación Médica Mundial y el artículo 17 de la Ley
General de Salud en Materia de Investigación para la Salud, los alumnos a los que se
les extraiga sangre deben firmar el consentimiento informado que se encuentra al final
de esta práctica (página 36).
I. Preparación de la suspensión de glóbulos rojos.
1. Obtenga sangre de la yema de un dedo con una lanceta estéril (limpie previamente
con alcohol etílico al 96%).
Si la muestra de sangre se toma por punción venosa (lo cual debe ser realizado por
personal capacitado), coloque la sangre obtenida en un tubo de ensayo heparinizado y
homogenice.
2. En un tubo de ensayo que contenga 5 mL de solución salina isotónica (NaCl 0.9%),
agregue 5 gotas de sangre heparinizada (o la obtenida de la yema del dedo). Esta es la
suspensión de glóbulos rojos.
II. Preparación de los patrones negativo y positivo de hemólisis.
1. Añada 5 gotas de la suspensión de glóbulos rojos a un tubo de ensayo con 5 mL de
NaCl 0.9%. Este es el patrón negativo de hemólisis (suspensión).
2. Adicione 5 gotas de la suspensión de glóbulos rojos a un tubo de ensayo con 5 mL
de agua destilada. Este es el patrón positivo de hemólisis (solución).
Para verificar si hubo o no hemólisis, observe sus patrones de comparación frente a
una hoja blanca con letras impresas: Si hay hemólisis, las letras se pueden leer
claramente; si no hay hemólisis, el tubo está “turbio” y las letras no se ven con facilidad.
III. Determinación de la concentración y osmolaridad hemolizantes para
soluciones de electrolitos y no electrolitos.
1. NaCl. A partir de una solución 0.2 M de NaCl, realice las diluciones 1:2 necesarias
para obtener 4 o 5 mL de soluciones con las siguientes concentraciones de NaCl: 0.1
M, 0.05 M, 0.025 M, 0.0125 y 0.00625 M. De esta manera, tendrá 6 tubos de prueba
27
para el NaCl, cada uno con 4 mL (o 5 mL) de las soluciones con las concentraciones de
NaCl mencionadas.
2. Con una pipeta Pasteur, agregue a cada uno de estos tubos, 5 gotas de la
suspensión de glóbulos rojos de la sección I (no debe adiconar sangre heparinizada),
homogenice y determine si hubo o no hemólisis comparando con los patrones negativo
y positivo de la sección II.
Nota importante: espere de 30 segundos a 1 minuto para determinar si hubo o no
hemólisis.
3. En caso de que tenga una centrífuga clínica disponible, utilícela para verificar sus
resultados (centrifugue a 3,000 rpm durante 3 minutos). Si después de centrifugar
observa una pastilla roja y sobrenadante, no hubo hemólisis y, si no hay pastilla, hubo
hemólisis.
4. KCl. Disponga una serie de tubos de prueba con 4 o 5 mL de soluciones con las
siguientes concentraciones de KCl: 0.2 M, 0.1 M, 0.05 M, 0.025 M, 0.0125 y 0.00625 M,
agregue 5 gotas de suspensión de glóbulos rojos a cada uno y determine la
concentración hemolizante.
5. BaCl2. Disponga una serie de tubos de prueba con 4 o 5 mL de soluciones con las
siguientes concentraciones de BaCl2: 0.2 M, 0.1 M, 0.05 M, 0.025 M, 0.0125 y 0.00625
M, agregue 5 gotas de suspensión de glóbulos rojos a cada uno y determine la
6. Sacarosa. Disponga una serie de tubos de prueba con 4 o 5 mL de soluciones con
las siguientes concentraciones de sacarosa: 0.2 M, 0.1 M, 0.05 M, 0.025 M, 0.0125 y
0.00625 M, agregue 5 gotas de suspensión de glóbulos rojos a cada uno y determine la
Concentración hemolizante (mM)

Solución Equipo Equipo Equipo Equipo Equipo Equipo
de: 1 2 3 4 5 6
NaCl
KCl
BaCl2
Sacarosa
Osmolaridad hemolizante (mOsm/L)

Solución Equipo Equipo Equipo Equipo Equipo Equipo
de: 1 2 3 4 5 6
NaCl
KCl
BaCl2
Sacarosa
28
IV. Determinación de los tiempos de hemólisis para sustancias lipofílicas (serie
homóloga de alcoholes).
1. Prepare 4 tubos de ensayo y añada 5 mL de una solución 0.3 M de cada uno de los
siguientes alcoholes: metílico, etílico, propílico y butílico.
2. Agregue 5 gotas de la suspensión de glóbulos rojos al tubo con metanol y determine
el tiempo en el que ocurre la hemólisis comparando con los patrones positivo y negativo
(sección II). De igual modo, establezca el tiempo de hemólisis para los otros alcoholes
(etanol, propanol y butanol).
Nota importante: La hemólisis ocurre en segundos, por lo cual, antes de agregar las
gotas de la suspensión de glóbulos rojos debe estar preparado (a) con su cronómetro.
Tiempo de hemólisis (s)

Solución 0.3 Equipo Equipo Equipo Equipo Equipo Equipo
M de: 1 2 3 4 5 6
Metanol
Etanol
Propanol
Butanol
Las jeringas para la extracción de sangre, así como las lancetas (si no se obtuvo sangre
por punción venosa) serán manejadas como “residuos peligrosos punzocortantes
biológico-infecciosos” y se colocarán en un recipiente de polietileno rígido con la
leyenda respectiva. Se dispondrá de la sangre sobrante (en caso de que la haya), de
acuerdo a la NOM-087-ECOL-SSA1-2002. Protección ambiental- Salud ambiental-
Residuos peligrosos biológico-infecciosos. Clasificación y especificaciones de manejo.
a) Concentración y osmolaridad hemolizantes para soluciones de electrolitos y no
electrolitos.
Realice una gráfica de cajas y bigotes (medianas y percentiles) que relacione la
concentración hemolizante con los electrolitos y no electrolitos utilizados.
Haga también un gráfico en el que se muestre la osmolaridad hemolizante para cada
sustancia.
Determine si hay diferencias estadísticamente significativas aplicando la prueba de
ANOVA de rangos.
b) Determinación de los tiempos de hemólisis para sustancias lipofílicas.
Realice una gráfica que relacione el tiempo de hemólisis con el coeficiente de partición
de cada alcohol.
Elabore un gráfico que relacione el tiempo de hemólisis con el peso molecular de la
serie homóloga de alcoholes.
29
Construya un gráfico final que relacione el tiempo de hemólisis con la relación que
existe entre el peso molecular y el coeficiente de partición.
BIBLIOGRAFÍA
 Berne R. y M. Levy. Fisiología. 3ª. Edición. 2002. Editorial. Harcourt. Mosby.
España. P: 4 -17.
 Declaración de Helsinki de la Asociación Médica Mundial. Pautas Éticas
Internacionales para la Investigación y Experimentación Biomédica en Seres
Humanos. ISBN 92 9036 0569. Consejo de Organizaciones Internacionales de
las Ciencias Médicas (CIOMS), 1993, Ginebra, pp. 53-56.
 Eckert R., D. Randall y G. Augustine. Fisiología Animal. Mecanismos y
Adaptaciones. 4ª edición.1998. Editorial Interamericana-McGraw-Hill. España. P:
101 -135.
 Ganong F.W. Fisiología Médica. 17ª Edición. 2000. Editorial Manual Moderno.
México, D.F. p. 6 – 9; 32 – 40.
 Mainetti, J. A., Código de Nüremberg, Tribunal Internacional de Nüremberg,
1947. Traducción adaptada de Mainetti J. A. (1989), Ética Médica, Quirón, La
Plata, Argentina.
 Norma Oficial Mexicana NOM-087-ECOL-SSA1-2002. Protección ambiental-
Salud ambiental- Residuos peligrosos biológico-infecciosos. Clasificación y
especificaciones de manejo. Diario Oficial de la Federación, 17 de febrero de
2003.
 Reglamento de la Ley General de Salud en materia de investigación para la
salud. Diario Oficial de la Federación, 6 de enero de 1987.
30
BIOLÓGICAS
QUÍMICO FARMACÉUTICO INDUSTRIAL
FISIOLOGÍA CELULAR
CARTA DE CONSENTIMIENTO INFORMADO
Me han sido explicados claramente la justificación, los objetivos, los beneficios y

los posibles riesgos del estudio titulado: “Práctica 3. Estudio de la penetración de
sustancias a células normales”, dirigido por ________________________________,
profesor titular del grupo, los cuales no representan NINGÚN RIESGO PARA MI VIDA,
MI SALUD O MI BIENESTAR, por lo cual ACEPTO participar en este estudio.
Nombre del participante: __________________________________________________
Firma del participante: ____________________________________________________

Domicilio: ______________________________________________________________
Teléfono: ______________________________________________________________
e-mail: ________________________________________________________________
Nombre del profesor responsable: __________________________________________
Firma del profesor responsable: ____________________________________________

Adscripción: Departamento de Fisiología.
Teléfono: ______________________________________________________________
e-mail: ________________________________________________________________

______________________________________________________________________
______________________________________________________________________
Fecha: ________________________________________________________________
31
EL PARTICIPANTE DEBE LEER EL SIGUIENTE ANEXO Y SI CONSIDERA QUE NO
EXISTEN DUDAS NI PREGUNTAS ACERCA DE SU PARTICIPACIÓN, PUEDE, SI
ASI LO DESEA, FIRMAR LA CARTA DE CONSENTIMIENTO INFORMADO.
A usted se le está invitando a participar en esta práctica de laboratorio. Antes de

decidir si participa o no, debe conocer y comprender cada uno de los siguientes
apartados. Este proceso se conoce como CONSENTIMIENTO INFORMADO.
Siéntase con absoluta libertad para preguntar sobre cualquier aspecto que le ayude a
aclarar sus dudas al respecto.
Una vez que haya comprendido el estudio y si usted desea participar como sujeto
voluntario, entonces se le pedirá que firme la CARTA DE CONSENTIMIENTO
INFORMADO, de la cual se le hará entrega de una copia firmada y fechada.
Justificación. En esta práctica de laboratorio se comprenderá cómo la osmolaridad de

diferentes soluciones (electrolitos, no electrolitos y alcoholes) puede causar daño a las
células normales (eritrocitos).
Objetivo. Determinar la concentración y osmolaridad hemolizantes de diferentes
soluciones de electrolitos y no electrolitos en sangre humana, así como el tiempo de
hemólisis al colocar eritrocitos en soluciones de alcoholes.
Beneficios. Se entenderá la necesidad de que las soluciones que se utilizan en la
práctica médica o veterinaria sean isotónicas.
Criterios de inclusión. Personas voluntarias sanas, preferentemente no fumadoras,
que no consuman bebidas alcohólicas y/o drogas ilícitas.
Criterios de exclusión. Personas que se encuentren en tratamiento con
anticoagulantes y/o antinflamatorios no esteroideos, enfermos de hemofilia o anemia,
mujeres embarazadas, personas que hayan sido vacunadas o hayan donado sangre
recientemente.
Criterios de eliminación. Personas en las que, por sus características individuales,
resulte difícil extraer la muestra de sangre, por lo que pudiera necesitarse puncionarles
repetidas veces.
Antecedentes médicos y hábitos. No hemofílicos, no fumadores, no consumidores de
drogas ilícitas, no bebedores de etanol.
Riesgos. Dolor en la zona del pinchazo, también puede producirse un mínimo
hematoma en esta región, por lo que será conveniente que después se realice presión
sobre la zona puncionada.
En personas impresionables, podría ocurrir desmayo al ver su sangre.
Procedimientos a utilizar. Extracción de sangre por punción venosa o piquete con

lanceta en la yema de un dedo de la mano.
32
NOTAS ACLARATORIAS: Es importante que al voluntario le queden claros los
siguientes puntos:
 En caso de que el participante desarrolle algún efecto adverso o requiera otro tipo
de atención, ésta le será brindada por el servicio médico de la ENCB.
 Su decisión de participar en el estudio es completamente voluntaria.
 No habrá ninguna consecuencia desfavorable para el participante, en caso de no
aceptar la invitación.
 Si decide participar en el estudio puede retirarse en el momento que lo desee.
 No recibirá puntos en su calificación del curso por su participación.
33
PRÁCTICA 3. ESTUDIO DE LA PENETRACIÓN DE SUSTANCIAS A
CÉLULAS NORMALES
Diagrama de Flujo
34
Notas:
35
PRÁCTICA 4. POTENCIAL DE DIFUSIÓN Y POTENCIAL DE LESIÓN
INTRODUCCIÓN
La diferencia en la concentración de iones a ambos lados de una membrana con
permeabilidad selectiva, a través de la cual sólo puede moverse una especie iónica (el
catión o el anión), genera un flujo de iones desde el lado en que la concentración es
mayor hacia el lado en que la concentración es menor. Este movimiento de partículas
con carga eléctrica, al no acompañarse de partículas con carga de signo opuesto,
genera una diferencia de potencial eléctrico a través de la membrana (potencial de
difusión), el cual se opone al paso de nuevos iones hacia el lado de menor
concentración.
Al cabo de cierto tiempo, el flujo dado por la diferencia de concentraciones (gradiente
químico) llega a ser compensado por el flujo de repulsión, dado por la diferencia de
potencial eléctrico (gradiente eléctrico).
En estas condiciones, se dice que el ion está en equilibrio electroquímico a través de la
membrana. La diferencia de potencial de la membrana tiene un valor que se denomina
potencial de equilibrio (Eion). Este potencial está definido por la ecuación de Nernst:
𝑅𝑇 𝐶2
𝐸𝑖𝑜𝑛 = 𝑙𝑛
𝑧𝐹 𝐶1
Eion= Potencial de equilibrio electroquímico (Voltios)

R= Constante de los gases
T= Temperatura absoluta
F= Constante de Faraday
z= Valencia del ion
C= Concentración del ion difusible
Julius Berstein fue el primero en proponer, en 1902, una hipótesis satisfactoria para
explicar el origen del potencial de reposo en el nervio y en las fibras musculares. Por
medio de métodos químicos averiguó que el interior de ambas células era rico en
potasio, con poca cantidad de sodio y cloruro. Además, determinó que en el interior de
la célula había aniones a los cuales la célula no era permeable, por lo que postuló que
el potencial de reposo era consecuencia de una distribución desigual de iones de
potasio, como predecía la ecuación de Nernst. Como en aquella época no podía
medirse con precisión el potencial de reposo de una célula, Berstein cortó varias fibras
musculares e insertó un electrodo en el área cortada, haciendo contacto eficaz con el
líquido interno de las fibras musculares, a este registro se le llamó potencial de lesión.
Los datos que encontró mostraron que el potencial de membrana seguía de manera
muy cercana el potencial de equilibrio predicho por la ecuación de Nernst para el ion
potasio.
36
La diferencia de potencial que existe a través de las membranas biológicas depende de
los gradientes de concentración y de la permeabilidad relativa para cada especie iónica.
La ecuación de Goldman, Hodgkin y Katz (GHK) define el potencial de membrana en
función de estos dos importantes factores:
𝑅𝑇 𝑃𝑁𝑎 [𝑁𝑎]𝑒 + 𝑃𝐾 [𝐾]𝑒 + 𝑃𝐶𝑙 [𝐶𝑙]𝑖

𝐸𝑚 = 𝑙𝑛
𝐹 𝑃𝑁𝑎 [𝑁𝑎]𝑖 + 𝑃𝐾 [𝐾]𝑖 + 𝑃𝐶𝑙 [𝐶𝑙]𝑒
Em= Potencial de membrana (Voltios)

P= Permeabilidad relativa de cada ion
i= Compartimiento intracelular
e = Compartimiento extracelular
Otro factor importante para el mantenimiento del potencial de membrana es el

transporte activo, ya que la membrana celular es permeable a diversos iones y éstos no
están en un equilibrio electroquímico, es decir, el potencial de membrana no es igual a
su potencial de equilibrio, por lo que los iones difunden a favor del gradiente
predominante (electroquímico) y las células deben compensar estos flujos de difusión
para que no se alteren las concentraciones iónicas. Esto se hace mediante el transporte
activo de los iones, con un gasto continuo de energía metabólica por parte de la célula.
El resultado de la interacción de los factores mencionados es un estado estable, en el
cual se mantienen constantes las concentraciones intracelulares y extracelulares de
iones, así como el potencial de membrana.
OBJETIVOS
- Demostrar que la difusión de un electrolito a través de una membrana natural con
permeabilidad selectiva genera una diferencia de potencial (potencial de difusión).
- Determinar el potencial de lesión de un músculo esquelético de rana.
- Establecer si existe una relación entre la diferencia de potencial obtenida con
diferentes concentraciones de potasio y las predichas por la ecuación de Nernst y/o por
la ecuación de Goldman Hodking Katz.
MATERIAL
- Biológico: 4 huevos de gallina (por equipo).
1 Rana toro (Lithobates catesbeianus) previamente anestesiada, decapitada y
desmedulada por personal capacitado (para 2 equipos).
Soluciones:
* Para el potencial de difusión en la membrana testácea interna de huevo:
- KCl: 1, 2.5, 5, 10, 20, 50, 100 y 400 mM.
* Para el potencial de lesión en músculo gastrocnemio de rana toro:
- Ringer.
37
- LIC (líquido intracelular).
- K2SO4: 0.005, 0.01, 0.025, 0.05 y 0.1 M.
Equipo e instrumental.
- Multímetro digital.
- Electrodos de plata clorurados.
- 2 Celdas de calomel con puente salino.
- 2 Alambres de plata.
- Soporte de media luna. Si no hay electrodo de plata
- 2 Pinzas de tres dedos.
- 8 Vasos de precipitados de 50 mL.
- Tubo de vidrio y bulbo de goma con orificio.
- Disectores de vidrio.
- Hilo.
Material que debe traer el estudiante:
- Estuche de disección (o tijeras, pinzas y aguja de disección).
- 4 huevos de gallina por equipo.
- Guantes desechables (látex o nitrilo) y cubrebocas (opcional).
DESARROLLO
I. Potencial de difusión usando la membrana testácea interna de huevo
1. Disponga una serie de 8 vasos de precipitados, etiquételos y llénelos con cada una
de las soluciones de KCl (1, 2.5, 5, 10, 20, 50, 100 y 400 mM).
2. Localice la cámara de aire del huevo de gallina y en el extremo opuesto rompa el
cascarón para obtener una ventana de 3 cm de diámetro, deseche el contenido del
huevo y enjuague con agua destilada el cascarón.
3. Con las pinzas de disección o con una aguja de disección, golpeé levemente el
cascarón de huevo en el extremo de la cámara de aire y despréndalo cuidadosamente,
evitando romper la membrana testácea interna, que podría estar muy adherida a él (es
muy importante que no rompa esta membrana pues a través de ella se establecerá la
difusión del ion potasio y si existen fugas no se podrá establecer ésta). Al desprender el
cascarón se formará una ventana de aproximadamente 0.5 cm de diámetro.
4. Llene el cascarón de huevo con solución 400 mM de KCl y coloque un electrodo de
plata clorurado en el interior, éste es el electrodo de medición y debe estar insertado en
el orificio V del multímetro digital. Tenga cuidado de que el electrodo no rompa la
membrana testácea interna.
5. Coloque el cascarón de huevo en la boca del vaso con la solución 1 mM de KCl, de
tal forma que la ventana de 0.5 cm quede en contacto con la solución, e introduzca por
un extremo del vaso otro electrodo de plata clorurado, éste es el electrodo de referencia
y debe estar insertado en el orificio COM del multímetro digital (Figura 3).
6. Mueva la perilla del multímetro a la parte de Volts (200m) y mida la diferencia de
potencial que se establece.
38
Figura 3. Potencial de difusión medido en el cascarón de huevo.
7. Sin vaciar la solución del interior del cascarón de huevo, cámbielo ahora a al vaso de
precipitados con solución 2.5 mM de KCl y mida el potencial desarrollado.
8. Continué probando las siguientes concentraciones: 5, 10, 20, 50, 100 y 400 mM (note
que está midiendo de una menor a una mayor concentración externa de KCl).
9. Al terminar de probar todas concentraciones y sin mover los electrodos de su sitio
pruebe que pasa con la lectura del multímetro si levanta el cascarón de huevo a fin de
que no tenga contacto con la solución de KCl.
[K+]e [K+]i log [K+]e / [K+]i Vm teórico (mV) Vm práctico

(mM) (mM) (Nernst) (mV)
1 400
2.5 400
5 400
10 400
20 400
50 400
100 400
400 400
II. Potencial de lesión (músculo gastrocnemio de rana)

1. La rana debe tomarse con una franela húmeda para evitar la pérdida de agua por la
piel (respiración cutánea) y facilitar su manipulación.
2. Personal capacitado se encargará de anestesiar (por inmersión en MS-222:
metilsulfonato de tricaína, 1g/L amortiguado con NaHCO 3 o por inmersión en
benzocaína al 0.03%) decapitar y desmedular a la rana con ayuda de unas tijeras
grandes y un estilete, de acuerdo a la NOM-033-SAG/ZOO-2014: Métodos para dar
muerte a los animales domésticos y silvestres. Con ello se persigue eliminar los reflejos
39
y tener solamente un animal vegetativo, el cual se le entregará para la realización de la
práctica.
Para la decapitación se hace un corte a nivel de las comisuras bucales de la rana (que
pase por el borde anterior de las membranas timpánicas); posteriormente, se destruye
la médula espinal introduciendo un estilete y haciendo movimientos circulares (Figura
4).
Figura 4. Decapitación y desmedulación de rana toro.

3. Corte la piel alrededor de la parte superior de la pierna, como se muestra en la Figura
4. Para desprender la piel, jálela hacia abajo de la pierna hasta que quede expuesta
toda la musculatura (cuide de mantener húmedos con solución Ringer los tejidos
expuestos).
4. Separe el músculo gastrocnemio de los otros músculos y del hueso con disectores de
vidrio, coloque un disector de vidrio entre el tendón de Aquiles y el hueso, pase un hilo
por debajo del tendón y amárrelo fuertemente, finalmente, corte el tendón de Aquiles lo
más lejos posible del músculo (Figura 5).
Figura 5. Disección del músculo gastrocnemio de rana.

5. Ya disecado el músculo gastrocnemio, páselo a través del orificio de un bulbo de
goma con ayuda del hilo que se amarró al tendón de Aquiles. Una vez que haya pasado
la mitad del músculo, corte la mitad restante (lesión) y jálelo un poco para que la parte
seccionada quede dentro del bulbo de goma.
6. Introduzca un tubo de vidrio en el anillo de goma, llénelo con solución LIC e
introduzca el músculo en un vaso de precipitados que contenga solución Ringer. Así, la
40
solución LIC está en continuidad con la parte lesionada y la solución Ringer está en
continuidad con la parte sana del músculo (Figura 6).
Figura 6. Montaje del músculo gastrocnemio de rana lesionado y colocación de electrodos.
7. Conecte los electrodos de plata al multímetro digital (electrodo de medición al orificio

V y electrodo de referencia al orificio COM) y mida el potencial de lesión del músculo
gastrocnemio colocando el electrodo de medición en la solución LIC y el electrodo de
referencia en la solución Ringer.
Si no obtiene una lectura adecuada (consulte al profesor), utilice los electrodos de
calomel como se muestra en la Figura 7.
Figura 7. Disposición de los electrodos de calomel.

41
8. Sustituya la solución Ringer por solución de K2SO4 0.025 M y lea la diferencia de
potencial en el multímetro.
9. Repita con cada una de las soluciones de K2SO4, en orden creciente de
concentración.
Nota: antes de llenar esta tabla, debe calcular cuáles son las concentraciones de K+,
Na+ y Cl- tanto de la solución LIC como de la solución Ringer (para ello debe tomar en
consideración la composición de estas soluciones que se muestra en el apéndice).
[K+]e [K+]i log [K+]e / [K+]i Vm teórico (mV) Vm teórico (mV) Vm práctico
(mM) (mM) (Nernst) (Goldman) (mV)
Ringer
PRESENTACION DE RESULTADOS
a) Potencial de difusión usando la membrana testácea interna de huevo.
Elabore una gráfica que relacione la diferencia de potencial (mV) en el eje de las
ordenadas y el logaritmo en base 10 del cociente de las concentraciones extracelulares
(fuera del cascarón de huevo) e intracelular (en el interior del cascarón de huevo) en el
eje de las abscisas. Este gráfico debe mostrar la tendencia de los datos teóricos (según
Nernst) y los datos prácticos obtenidos durante su experimento.
Realice el ajuste de las líneas obtenidas, incluya tanto la ecuación obtenida como la
bondad del ajuste (R2) en su gráfico.
b) Potencial de lesión (músculo gastrocnemio de rana).
Elabore una gráfica que relacione la diferencia de potencial (mV) en el eje de las
ordenadas y el logaritmo en base 10 del cociente de las concentraciones extracelulares
(Ringer y sulfato de potasio) e intracelular (LIC) en el eje de las abscisas. Este gráfico
debe mostrar la tendencia de los datos teóricos (según Nernst y según Goldman) y los
datos prácticos obtenidos durante su experimento.
Realice el ajuste de las líneas obtenidas, incluya tanto la ecuación obtenida como la
bondad del ajuste (R2) en su gráfico.
Este experimento es semejante al realizado por Berstein en 1902 para demostrar que el
potencial de membrana muscular en reposo está dado por una diferencia de
42
concentraciones del ion potasio entre el interior y el exterior de la membrana muscular.
Con los datos obtenidos en este experimento ¿cómo demostraría lo propuesto por
Berstein?
APÉNDICE. Soluciones fisiológicas utilizadas en esta práctica:
Componentes (g/L) Ringer LIC

NaCl 6.5
KCl 0.14 0.11
CaCl2 0.12
NaH2PO4 H2O 0.01
NaHCO3 0.2
K2HPO4 3H2O 0.01 10
KH2PO4 3
KHCO3 1.24
Glucosa 2
Citrato trisódico 1
BIBLIOGRAFÍA
 Aidley D. J., 1989. The Physiology of Excitable Cells. Ed. Cambridge University
Press, Cambridge, Inglaterra.
 Eckert R., Randall D. y Augustine G., 1990. Fisiología Animal. Mecanismos y
Adaptaciones. 3a ed. Ed. Interamericana-McGraw-Hill, Madrid, España.
 Kuffler S. y Nicholls J., 1982. De la Neurona al cerebro. 1° Edición, Ed. Reverté,
Barcelona, España, pp. 89-131.
 Norma Oficial Mexicana NOM-033-SAG/ZOO-2014: Métodos para dar muerte a
los animales domésticos y silvestres. Diario Oficial de la Federación, 22 de junio
de 2015.
43
PRÁCTICA 4. POTENCIAL DE DIFUSIÓN Y POTENCIAL DE LESIÓN
Diagrama de Flujo
44
Notas:
45
PRÁCTICA 5. SIMULACIÓN POR COMPUTADORA DEL POTENCIAL
DE ACCIÓN
INTRODUCCIÓN
Una de las vías de transmisión de la información en los organismos utiliza
señales eléctricas generadas en el sistema nervioso. Estos impulsos nerviosos son
respuestas rápidas de las células excitables a los estímulos del medio. Al aplicarles el
estímulo adecuado, las células excitables muestran un cambio de potencial: el potencial
de acción (llamado también espiga o impulso nervioso), el cual es conducido a lo largo
de la región axónica de una neurona o a lo largo de la membrana plasmática de una
célula muscular. De manera inicial el estímulo produce una despolarización de la
membrana del axón, la cual a su vez hace que aumente la conductancia de Na+ al
interior. A cierto nivel de despolarización de la membrana (cerca del 15% del potencial
de reposo), la membrana se vuelve muy permeable al Na+ (por la apertura de canales
de Na+ dependientes de voltaje). El influjo de Na + hace que el potencial transmembrana
caiga rápidamente hacia cero y tienda a llegar al potencial de equilibrio de este ion. En
el pico de la espiga se inicia otro cambio en la permeabilidad, lo que da como resultado
una mayor conductancia del K+. A medida que aumenta la conductancia del K +, se
inactiva la conductancia del Na+. El eflujo de este ion en sentido de su gradiente
electroquímico, tiende a llevar al potencial transmembrana al valor del potencial de
equilibrio del K+.
Las membranas de las células excitables no pueden producir potenciales de acción
todo el tiempo, existe un periodo en el cual la membrana es refractaria a los estímulos y
otro periodo en el cual se necesitan estímulos de mayor magnitud para que se genere
un potencial de acción, éstos se denominan: periodo refractario absoluto y periodo
refractario relativo, respectivamente.
El potencial de acción puede ser generado por estímulos llamados umbrales o por la
suma temporal de los cambios del potencial de membrana generados por estímulos
subumbrales. Asimismo, puede modificar sus características en función de las
concentraciones intracelulares y extracelulares de los iones y por la acción de toxinas o
enzimas, todo ello se estudiará en esta práctica.
OBJETIVO GENERAL
- Establecer el papel que tienen los canales iónicos de Na + y K+ en la generación del
potencial de acción.
OBJETIVOS PARTICULARES
- Determinar el efecto que tienen los estímulos eléctricos de diferentes magnitudes y
duraciones sobre el potencial de acción y la excitabilidad de una neurona.
- Determinar el efecto que tiene la aplicación de estímulos repetidos a diferentes
intervalos sobre el potencial de acción y la excitabilidad de una neurona.
46
- Analizar el efecto que provoca el cambio de la concentración de los iones involucrados
en el potencial de acción sobre el potencial de membrana y sobre el potencial de
acción.
- Analizar el efecto de algunas sustancias bloqueadoras de los canales dependientes de
voltaje sobre la naturaleza y características del potencial de acción.
MATERIAL
- Programa de simulación por computadora: “HHsim”, basado en el modelo propuesto
por Hodgkin y Huxley para la generación del potencial de acción, creado por Dave
Touretzky y colaboradores.
- Computadora PC.
DESARROLLO
I. Estimulación y registro virtual
1. El dispositivo empleado para este simulador es similar al que muestra la Figura 8.
Figura 8. Disposición de electrodos de estimulación y registro en un fragmento sellado de axón

gigante de calamar (Loligo pealeii o L. forbesi).
2. Inicie el programa HHsim y localice en la pantalla principal los controles que se

muestran en la Figura 9, a los que se hace referencia en las actividades posteriores.
Figura 9. Pantalla principal del programa HHsim. Los números 1 al 4 indican los controles que
se emplean durante esta práctica.
47
3. Establezca los parámetros iniciales de la forma siguiente: Asegúrese que el control 1
marca “Voltage Recording”, en el control 2 seleccione g Na + (pS), g K+ (pS) y blank,
respectivamente. Active “Membrane” en el control 3, esto despliega una ventana donde
debe establecer la temperatura en 20°C. Oculte la ventana con el botón “Hide” que
aparece en la misma.
II. Estímulos umbrales y curva intensidad-duración
1. Active “Stimuli” en el control 3, esto despliega una ventana donde se pueden cambiar
los parámetros de dos estimuladores capaces de aplicar dos estímulos cada uno. Para
este caso solo se usará el primer estímulo del estimulador 1.
2. Cada estímulo tiene tres parámetros: (Ti) Tiempo de inicio (ms), (Corr) Corriente (nA)
y (Dur) Duración (ms). Establezca Ti= 0.0 ms, Corr= 10 nA y Dur=0.1 ms. El segundo
estímulo debe marcar cero en todos los parámetros.
3. Active el estimulador usando el botón “Stim1” del control 4 y observe la respuesta en
el potencial de membrana.
4. Aplique estímulos similares, incrementando gradualmente la duración hasta provocar
un potencial de acción.
5. Encuentre la duración mínima para que estímulos con corrientes de 5, 10, 15, 20, 35,
40, y 66 nA, respectivamente, puedan provocar un potencial de acción.
Nota: Antes de aplicar cada estímulo debe borrar la respuesta anterior usando el botón
“Clear” del control 4.
Corriente (nA) Duración (ms) Valor de reobase (mV):

5
10 _________________________
15
Valor de cronaxia (ms):
20
35 ________________________
40
66
III. Suma temporal (estímulos subumbrales)

1. Establezca el primer estímulo con Ti= 0 ms, Corr= 15 nA y Dur= 0.4 ms. El segundo
estímulo debe ser similar pero con Ti= 15 ms. Active el estimulador y observe la
respuesta.
2. Repita la experiencia disminuyendo gradualmente el tiempo de inicio del segundo
estímulo (Ti= 8, 4, 2, 1 ms).
Tiempo de retardo entre los Respuesta: Potenciales electrotónicos
2 estímulos (ms) (PE) o potencial de acción (PA)
15
8
4
2
1
48
IV. Periodo refractario
1. Establezca el primer estímulo con Ti= 0 ms, Corr= 50 nA y Dur= 0.11 ms. El segundo
estímulo con Ti= 20 ms, Corr= 40 nA y Dur= 0.11 ms. Active el estimulador y observe la
respuesta.
2. Repita la experiencia reduciendo el tiempo de inicio del segundo estímulo a 10 ms.
Observe la respuesta.
3. Repita la experiencia con Ti= 5 ms para el segundo estímulo. Observe la respuesta.
4. Repita la experiencia con Ti= 2 ms. Observe la respuesta.
5. Encuentre el tiempo de inicio para el segundo estímulo al cual desaparece el
segundo potencial de acción.
6. Aumente la intensidad del segundo estímulo a Corr= 60nA, observe. Encuentre el
tiempo de inicio para el segundo estímulo al cual desaparece el segundo potencial de
acción.
7. Aumente la intensidad del segundo estímulo a Corr= 70 nA, observe. Encuentre el
tiempo de inicio para el segundo estímulo al cual desaparece el segundo potencial de
acción.
8. Aumente la intensidad del segundo estímulo hasta Corr= 80 nA, observe y encuentre
el tiempo de inicio para el segundo estímulo al cual desaparece el segundo potencial de
acción. Repita aumentando a Corr= 100 nA.
40 nA de intensidad en el segundo
estímulo:
Tiempo de Respuesta Intensidad del Tiempo de retardo exacto
retardo entre Potenciales segundo (ms) entre los 2 estímulos
los 2 estímulos electrotónicos estímulo (nA) para que el segundo no
(ms) (PE) o potencial produzca PA a la intensidad
de acción (PA) de la izquierda
20 40
10 60
5 70
2 80
100
V. Aumento o disminución de concentraciones iónicas extracelulares

a) Aumento de la concentración extracelular de Na +
1. Establezca los parámetros del segundo estímulo en cero, para el primer estímulo Ti=
0 ms, Corr= 20 nA y Dur= 0.5 ms. Aplique el estímulo y observe la respuesta, este es su
potencial de acción control, generado con una concentración de Na + extracelular = 440
mM (que es la normal).
2. Sin borrar la respuesta anterior active “Membrane” con el control 3. Aumente 50 mM
en la concentración extracelular de Na+ (490 mM). Aplique el estímulo.
49
3. Sin borrar las respuestas anteriores, continúe aumentando la concentración
extracelular de Na+ de 50 en 50 mM, aplicando un estímulo cada vez. Observe qué
sucede con los potenciales de acción generados.
Nota: Puede utilizar el botón “Zoom out” del control 4 y la barra de desplazamiento de
tiempo para visualizar toda la serie y comparar las respuestas.
[Na+]e [Na+]i Vr ENa+ FEMNa+ Amplitud del

(mM) (mM) (mV) (mV) (mV) PA (mV)
440 50
490 50
540 50
590 50
640 50
690 50
740 50
790 50
800 50
b) Disminución de la concentración extracelular de Na+

1. Borre las respuestas anteriores.
2. Active “Membrane” con el control 3 y restablezca la concentración extracelular
original de Na+ (440 mM). Aplique un estímulo. Repita el experimento, pero ahora
reduciendo de 50 en 50 mM la concentración extracelular de Na+ (recuerde que no
debe borrar las respuestas).
[Na+]e [Na+]i Vr ENa+ FEMNa+ Amplitud del

440 50
390 50
340 50
290 50
240 50
190 50
140 50
90 50
40 50
c) Aumento de la concentración extracelular de K+

original de Na+ (440 mM), aplique un estímulo.
3. Aumente la concentración extracelular de K+ de 1 en 1 mM, aplicando estímulos cada
vez. Si fuera necesario detener el registro, use el botón “Stop”.
50
[K+]e [K+]i Vr EK+ FEMK+ Amplitud del
20 400
21 400
22 400
23 400
24 400
25 400
26 400
27 400
28 400
29 400
30 400
d) Disminución de la concentración extracelular de K+

original de K+ (20 mM), aplique un estímulo.
3. Disminuya la concentración extracelular de K + de 1 en 1 mM, aplicando estímulos
cada vez. Continúe reduciendo la concentración aún si no se produce un potencial de
acción.
[K+]e [K+]i Vr EK+ FEMK+ Amplitud del

20 400
19 400
18 400
17 400
16 400
15 400
13 400
12 400
11 400
10 400
VI. Bloqueo o modificación de canales iónicos dependientes de voltaje

a) Bloqueo con TTX
1. Borre las respuestas anteriores, active “Membrane” con el control 3 y restablezca las
concentraciones extracelulares originales de iones. Aplique un estímulo con Ti= 0 ms,
Corr= 20 nA y Dur= 0.5 ms.
2. Sin borrar la respuesta anterior, active “Drugs” del control 3. Cambie el porcentaje de
inhibición con Tetrodotoxina (TTX) aumentando de 5 en 5%, estimulando cada vez y sin
borrar.
51
Nota: Puede utilizar el botón “Zoom out” del control 4 y la barra de desplazamiento de
tiempo para visualizar toda la serie y comparar las respuestas.
TTX. Acción sobre canales: _______________________________________________

Nivel de concentración a la que actúa: _______________________________________
Porcentaje de Amplitud del PA

inhibición con TTX (mV)
0
5
10
15
20
25
30
35
40
45
50
b) Bloqueo con TEA

1. Regrese a cero el porcentaje de inhibición por TTX, borre las respuestas anteriores y
repita la experiencia, ahora aumentando el porcentaje de inhibición por tetraetilamonio
(TEA) de 5 en 5%. Recuerde que primero debe tener un potencial de acción control,
con 0% de inhibición. Si fuera necesario detener el registro, use el botón “Stop”.
TEA. Acción sobre canales: _______________________________________________

Nivel de concentración a la que actúa: _______________________________________
Porcentaje de Amplitud del PA

inhibición con TEA (mV)
0
5
10
15
20
25
30
35
40
45
50
52
c) Aplicación de pronasa
1. Regrese a cero el porcentaje de inhibición por TEA, borre las respuestas anteriores,
aplique un estímulo y obtenga un potencial de acción. Active la casilla de pronasa y
aplique un estímulo. Observe la respuesta.
c) Pronasa. Acción sobre canales: __________________________________________
Amplitud P-P del PA control (sin Efecto de la pronasa sobre el PA:

pronasa) (mV)
a) Estímulos umbrales y curva intensidad duración.
Presente dos imágenes en la misma diapositiva, una en la que el estímulo aplicado es
subumbral y no se presenta un potencial de acción, sino un potencial electrotónico, y
otra imagen en la que el estímulo es umbral y se produce potencial de acción.
Elabore el gráfico intensidad-duración con los diferentes estímulos umbrales obtenidos
y determine los valores de reobase y cronaxia.
b) Suma temporal.
Incluya 3 imágenes de manera que puedan verse juntas para comparlas: una en la que
los dos estímulos subumbrales están separados en tiempo y cada uno produce un
potencial electrotónico, otra en la que los potenciales electrotónicos están sumándose
pero todavía no hay potencial de acción y, finalmente, una imagen en la que ha habido
suma temporal y se presenta potencial de acción.
c) Periodo refractario.
Presente una secuencia representativa de imágenes que incluya la respuesta de la
membrana a los estímulos aplicados, cuando no está en periodo refractario, cuando
está en periodo refractario relativo y cuando está en periodo refractario absoluto.
Indique la duración de tales periodos refractarios.
d) Aumento o disminución de concentraciones iónicas extracelulares.
Muestre imágenes correspondientes al aumento y disminución gradual de
concentración extracelular de sodio en las que se aprecie cómo se va modificando el
potencial de acción. Lo mismo para el potasio. En este caso es muy importante medir el
potencial de acción: amplitud y duración o picos de despolarización e hiperpolarización,
así como potencial de membrana en reposo y presentarlo en sus resultados.
e) Bloqueo o modificación de canales iónicos dependientes de voltaje.
Presente imágenes correspondientes al aumento gradual de porcentaje de inhibición
con TTX y con TEA. Presente lo que sucede con el potencial de acción al aplicar
pronasa. Es muy importante medir el potencial de acción: amplitud y duración o picos
53
de despolarización e hiperpolarización, así como potencial de membrana en reposo y
presentarlo en sus resultados.
Nota importante: En todos los casos deben indicarse claramente las características de
los estímulos aplicados; las imágenes deben incluir el estímulo, la respuesta obtenida y
las conductancias para sodio y potasio.
BIBLIOGRAFÍA
 Aidley, D. J. The Physiology of Excitable Cells. 1989. Edit. Cambridge University
Press, Cambridge, Inglaterra.
 Berne R. y M. Levy, Fisiología. 2ª Ed. 1992. Edit. Mosby Year Book. España,
Madrid. p. 34-39.
 Carpenter S.H.R., Neurofisiología. 1986. Edit. Manuel Moderno, México, D.F.
 Darnell J., H. Lodish y D. Baltimore, Biología Celular y Molecular. 2ª Ed. 1993.
Edit. Omega S.A. España, Barcelona p. 844-858.
 Eckert, Randall D., Burgreen W., y K. French, Fisiología Animal, Mecanismos y
Adaptaciones. 4ª Ed. 1998. Edit. Interamericana-McGraw-Hill. Madrid, España.
 Ganong F.W., Fisiología Médica. 17a Ed. 2000. Edit. Manual Moderno México.
 Schmidt F.R. y G. Thews, Fisiología Humana. 1993. Edit. Mc Graw Hill-
Interamericana. España Madrid p. 23-34.
 Touretzky, D.; Albert, M.; Daw, N.; Ladsariya, A. and M. Bonakdarpour. HHsim:
Graphical Hodgkin-Huxley Simulator. Disponible en:
http://www.cs.cmu.edu/~dst/HHsim/
54
PRÁCTICA 5. SIMULACIÓN POR COMPUTADORA DEL POTENCIAL
DE ACCIÓN
Diagrama de flujo
55
Notas:
56
PRÁCTICA 6. POTENCIAL DE ACCIÓN COMPUESTO
INTRODUCCIÓN
La función primaria del sistema nervioso es la transmisión de información entre
los órganos sensoriales y los tejidos de respuesta (músculos y glándulas), pasando por
un centro de integración. Para ello, el tejido nervioso está dispuesto en forma de un
cableado que corre de los órganos sensoriales a alguna estructura del sistema nervioso
central y de ahí a las células musculares. Este cableado está formado esencialmente
por los axones de las neuronas periféricas, que pueden ser muy largos. Los axones que
se proyectan hacia regiones contiguas del cuerpo (por ejemplo, los que van a diferentes
células musculares en la pierna) viajan en forma de grupos compactos junto con los que
vienen en sentido aferente desde estructuras receptoras (por ejemplo, de la piel) de la
misma región. Este conjunto de axones forma un nervio periférico. Una fibra individual
(un axón) tiene un diámetro de alrededor de 20 μm (0.002 cm) y no se distingue a
simple vista; un nervio es mucho más grueso y se observa con facilidad.
Medir la respuesta eléctrica de una fibra individual requiere de equipo muy sofisticado y
adiestramiento especial, en comparación, medir la respuesta eléctrica de un nervio
completo (potencial de acción compuesto) es sencillo, pero requiere hacer algunas
consideraciones: los cambios de voltaje que se registran son extracelulares (tanto el
electrodo de medición como el de referencia están fuera de la célula), por lo que el
trazo del potencial de acción tiene una forma diferente al del potencial clásico, y recibe
el nombre de potencial bifásico. En segundo lugar, puesto que las neuronas pueden
tener umbrales distintos, el potencial de acción compuesto no cumple estrictamente la
ley de todo o nada del potencial de acción. Por lo demás, la preparación de nervio
completo reproduce las principales características de la actividad eléctrica de las células
nerviosas.
OBJETIVOS
- Medir la respuesta eléctrica de un nervio completo.
- Determinar las propiedades de conducción de las fibras que componen a un nervio.
MATERIAL
- Biológico: 1 Rana toro (Lithobates catesbeianus) previamente anestesiada,
decapitada y desmedulada por personal capacitado (1 por cada 2 equipos).
- Soluciones:
- Ringer.
- Unidad de adquisición Biopac Systems, Inc. (MP36) con cables de alimentación
eléctrica y USB.
- Electrodo SS2L.
- Cable DB9H.
57
- Cámara para nervio aislado.
- Disectores de vidrio.
- Gotero.
- Hilos grueso y delgado.
- Estuche de disección (o tijeras y pinzas de disección).
- CD para grabar datos que incluya las plantillas del Biopac para esta práctica (PAC-
Ciatico-01, PAC-Ciatico-02 y PAC-Ciatico-03).
DESARROLLO
En esta práctica se utiliza el nervio ciático de rana, que por su grosor es el más fácil de
obtener y manejar. El nervio se coloca en una cámara de nervio aislado que está
provista de bandas metálicas que funcionan como electrodos de estimulación o de
registro cuando se conectan al equipo apropiado.
I. Montaje del equipo de estimulación y de registro
Para registrar el potencial de acción compuesto (PAC) del nervio ciático, se requieren
electrodos bipolares de estimulación y electrodos bipolares de registro.
El electrodo de estimulación sirve para aplicar estímulos eléctricos al nervio y debe
colocarse en un extremo de la cámara de nervio aislado, el electrodo de estimulación
mide los cambios de voltaje que se dan en el nervio en respuesta a la aplicación de
estímulos, éste debe colocarse en el otro extremo de la cámara de nervio aislado.
1. Coloque el módulo MP36 (Biopac) en la parte superior de su mesa de laboratorio,
conéctelo a la corriente y a la computadora con el cable USB.
2. Realice una inspección rápida al módulo MP36, ubique el canal 2 (CH2) en la parte
delantera y “Analog out” en la parte trasera del equipo. Es muy importante anticipar que
no debe haber conexión alguna en el canal 1 (CH1).
3. Encienda la computadora pero no encienda el Biopac.
4. Guíese con la Figura 10 para hacer las siguientes conexiones:
a) Electrodos bipolares de registro.
1. Conecte el cable SS2L al canal 2 (CH2) del Biopac (MP36).
2. Conecte el terminal rojo Vin(+) del SS2L a la última banda metálica de la cámara de
nervio aislado y conecte el terminal blanco Vin(-) del SS2L a la penúltima banda
metálica de la cámara. Esto puede moverse después, de acuerdo a la longitud del
nervio disecado.
b) Electrodos bipolares de estimulación.
1. Identifique el cable DB9H y conéctelo a “Analog out” del Biopac.
2. Conecte el terminal rojo St(+) del DB9H a la banda metálica más externa de la
cámara de nervio aislado (al extremo opuesto de donde conectó los terminales del
SS2L).
58
3. Conecte el terminal negro St(-) del DB9H al cable negro (GND) del SS2L y conecte
éste último a la banda metálica siguiente de la cámara de nervio aislado.
4. Encienda el Biopac.
c) Prueba de montaje correcto.
1. Humedezca un trozo de hilo grueso en solución Ringer.
Figura 10. Montaje del equipo de estimulación y de registro para potencial de acción compuesto
en nervio ciático de rana.
2. Abra el archivo PAC-Ciatico-01.gtl, el cual tiene los parámetros de calibración para el

Biopac. Observe que en la parte superior de la pantalla aparece un rectángulo rojo con
varios parámetros de estimulación: encendido y apagado, frecuencia, voltaje, duración y
número de pulsos o estímulos y canal de referencia. La señal del estimulador se verá
en el canal 1 (CH1) y la señal de registro en el canal 2 (CH2).
3. Coloque el hilo húmedo en la cámara de nervio aislado y aplique un estímulo de
0.050 V (50 mV) dando clic en la pestaña inicio (en la esquina inferior derecha). Debe
observar el estímulo en el canal 1 y el artefacto del estímulo en el canal 2.
4. Si no observa el artefacto, aumente la intensidad del estímulo en intervalos de 0.050
V, hasta que pueda observarlo.
59
5. Retire el hilo de la cámara y proceda a hacer la disección del nervio ciático.
II. Montaje de la preparación de nervio ciático aislado de rana toro.

práctica.
11).
Figura 11. Decapitación y desmedulación de la rana.
3. Corte la piel de una de las patas posteriores y remuévala hasta descubrir

completamente la extremidad. Separe cuidadosamente los músculos en la cara
posterior del muslo y localice el nervio ciático (Figura 12).
Figura 12. Separación de la piel de la pata de rana y ubicación del nervio ciático.
60
4. Sin tocar el nervio con objetos metálicos, descúbralo en ambos sentidos hasta la
médula espinal por un lado y hasta el extremo distal del fémur por el otro. Corte los
músculos que sea necesario.
5. Amarre un trozo de hilo alrededor del nervio tan cerca de la médula espinal como sea
posible. Con unas tijeras finas separe el nervio de la médula, de manera que quede
sujeto con el hilo.
6. Con ayuda de los disectores de vidrio, separe cuidadosamente el nervio, hasta liberar
una porción de 8 a 10 cm.
7. Coloque el nervio extendido sobre las bandas metálicas de la cámara de nervio
aislado y mueva los electrodos de acuerdo a la longitud del nervio.
III. Determinaciones prácticas

a) Estímulos umbral y máximo
El potencial de acción compuesto requiere una cantidad mínima de carga para ser
generado pero, a diferencia del potencial de acción simple, su amplitud aumenta al
incrementar la magnitud de la estimulación. Esta tendencia tiene un límite, y se conoce
como estímulo máximo al valor de estimulación que induce la máxima amplitud de
respuesta de un nervio.
1. Abra el archivo PAC-Ciatico-01.gtl, note que la duración del estímulo está fija (0.2
mseg) y considere que para grabar sus registros debe cambiar el nombre del archivo
cada vez que haga un cambio.
2. Aplique un estímulo inicial de 0.050 V (50 mV) y observe. Si no hay PAC, aumente
gradualmente la magnitud del estímulo (a intervalos de 0.050 V) hasta que se aprecie la
más leve respuesta del nervio. Este es el estímulo umbral.
3. Siga aumentando el voltaje del estímulo, observe cómo aumenta gradualmente la
amplitud del PAC.
4. Encuentre las características del estímulo (voltaje y duración) en las que el PAC deja
de aumentar su amplitud, aunque se siga incrementando el voltaje del estímulo. Éste es
el estímulo máximo.
Estímulos Umbral Máximo
Voltaje (mV)
Duración (ms)
Respuesta (PAC) Umbral Máximo
Amplitud P-P (mV)
Duración (ms)
b) Velocidad de conducción
Puesto que los electrodos de registro están situados a cierta distancia de los de
estimulación, la señal eléctrica toma cierto tiempo en llegar desde su punto de origen
hasta donde es registrada, y la duración de este periodo (llamado latencia) depende de
la velocidad con la que el nervio conduce los impulsos. La pantalla de la computadora
registra los eventos de estimulación (canal 1) y de respuesta (canal 2), de modo que la
61
duración de la latencia y la velocidad de conducción del nervio se pueden determinar
fácilmente.
1. Aplique un estímulo de intensidad intermedia entre el umbral y el máximo. Mida el
intervalo que separa el inicio del estímulo del inicio del PAC (latencia).
2. Mida la separación entre el electrodo de estimulación y el electrodo de registro que
estén más próximos entre sí en la cámara de nervio aislado. Con estos valores calcule
la velocidad de conducción del nervio (m/s).
3. Repita la operación después de poner unas gotas de Ringer frío sobre el nervio
ciático.
Ringer ambiente Ringer frío
Temperatura (°C): Temperatura (°C):
_______________ _______________
Distancia (mm → m)
Latencia (ms → s)
Velocidad de
conducción (m/s)
c) Suma temporal
1. Abra el archivo PAC-Ciatico-02.gtl. En este caso se aplican dos estímulos
subumbrales con un tiempo de retardo determinado entre uno y otro.
2. Aplique estímulos con voltaje ligeramente menor al del estímulo umbral y con un
tiempo de retardo de 25 ms. Observe.
3. Repita la experiencia reduciendo el tiempo interestímulo paulatinamente hasta que
observe un PAC. Este tiempo es el necesario para que se sumen los potenciales
locales producidos por los estímulos subumbrales.
Tiempo interestímulo para producir un PAC perceptible: _________________ ms.
4. Ahora reduzca el tiempo interestímulo un poco más y observe lo que sucede.
d) Período refractario
1. Abra nuevamente PAC-Ciatico-02.gtl y aplique estímulos con un voltaje ligeramente
superior al umbral y un tiempo interestímulo de 30 ms. Deben observarse 2 PACs
similares en amplitud y duración.
2. Reduzca gradualmente el tiempo de retardo del segundo estímulo, observando
atentamente la respuesta al segundo estímulo, hasta que se aprecie una leve reducción
en este PAC. Este valor corresponde a uno de los límites del periodo refractario relativo.
3. Siga reduciendo el tiempo interestímulo, hasta que la respuesta al segundo estímulo
desaparezca por completo.
Tiempo interestímulo en el que se produce reducción apreciable en la amplitud del segundo
PAC: _________________ ms.
Tiempo interestímulo en el que el segundo PAC desaparece: _________________ ms.
62
e) Curva intensidad-duración
1. Abra la plantilla PAC-Ciatico-03.gtl y ajuste el voltaje del estímulo ligeramente por
arriba del valor umbral, de modo que el PAC tenga una forma bien definida. Registre las
características del estímulo y mida la amplitud y duración del PAC.
2. Reduzca el voltaje del estímulo en una décima parte y aumente su duración hasta
que la respuesta del nervio (PAC) tenga características parecidas a las que midió
inicialmente. Registre nuevamente la duración y la magnitud del estímulo.
3. Reduzca nuevamente el voltaje del estímulo y ajuste la duración para tener la misma
forma (amplitud y duración) del PAC. Registre el nuevo par de valores.
4. Repita el proceso hasta que el estímulo se haya reducido a un punto en el que no
logre generar un PAC aun aumentando la duración (o hasta valor máximo permitido por
el equipo).
5. Repita el proceso, pero ahora aumente el voltaje y reduzca la duración del estímulo.
Estímulo inicial PAC inicial

Voltaje (mV) Amplitud (mV)
Duración (ms) Duración (ms)
Estímulo 1 PAC 1
Estímulo 2 PAC 2
Estímulo 3 PAC 3
Estímulo 4 PAC 4
Estímulo 5 PAC 5
Estímulo 6 PAC 6
a) Estímulos umbral y máximo.
Presente una impresión de pantalla en la que se observen tanto el estímulo umbral
como el PAC umbral y escriba las características de cada uno en la imagen.
Muestre una impresión de pantalla en la que se observen tanto el estímulo máximo
como el PAC máximo y escriba las características de cada uno en la imagen.
63
De ser posible, incluya una impresión de pantalla en la que se observe como va
aumentando la amplitud del PAC con respecto al aumento en la intensidad del estímulo.
b) Velocidad de conducción.
Presente una impresión de pantalla en la que se observe la morfología del PAC con
Ringer a temperatura ambiente y escriba los valores de distancia, latencia y velocidad
de conducción en la imagen que será considerada como control. Para poder comparar,
en la misma diapositiva, muestre una imagen en la que se observe cómo cambió la
morfología del PAC al adicionarle Ringer frío al nervio ciático. No olvide poner los
valores que puso en la imagen control.
c) Suma temporal.
Presente 3 a 4 imágenes en una sola diapositiva, en éstas debe observarse la
disminución gradual del tiempo interestímulo, desde que no hay PAC hasta que ocurre
la suma temporal y si hay respuesta. En cada una de ellas escriba el tiempo
interestímulo.
d) Período refractario.
Incluya 3 imágenes en una sola diapositva: una impresión de pantalla en la que haya 2
PACs, otra en la que el segundo PAC haya disminuido su amplitud de manera ligera y
finalmente, una en la que el segundo PAC haya desaparecido. En cada una de ellas
escriba el tiempo interestímulo.
e) Curva intensidad-duración.
Elabore la curva de excitabilidad o curva intensidad (eje de las Y)- duración (eje de las
X) considerando los estímulos aplicados para provocar PACs. Determine gráficamente
la reobase y la cronaxia.
Nota importante: En todos los casos de impresiones de pantalla, debe indicar los
nombres de los ejes y las unidades, así como el valor de mV y milisegundos por
división.
BIBLIOGRAFÍA
 Carpenter S.H. Neurofisiología. 1986. El Manual Moderno, México, D.F.
 Eckert, R.D., Burgreen W., y French K. Fisiología Animal, Mecanismos y
Adaptaciones. 4ª ed., 1998. Interamericana-McGraw-Hill, Madrid.
 Guyton C.A. Tratado de Fisiología Médica, 8a. ed., 1991. Interamericana-
McGraw-Hill, Madrid.
 Kandel E.R., Schwartz J.H., Jessell T.M. Neurociencia y Conducta. 1997.
Prentice Hall, Madrid.
de 2015.
64
PRÁCTICA 6. POTENCIAL DE ACCIÓN COMPUESTO
Diagrama de Flujo
65
Notas:
66
PRÁCTICA 7. MODULACIÓN DE UNA FUNCIÓN CELULAR POR
SEÑALES QUÍMICAS
INTRODUCCIÓN
Las células se encuentran en un ambiente repleto de señales químicas. Para que
una célula pueda responder a una señal química determinada debe tener receptores
específicos para esa señal. Los receptores son moléculas especializadas en reconocer
señales químicas y capaces de inducir, mediante un proceso de complejidad variable, la
respuesta específica a la señal química, que puede implicar cambios funcionales o
estructurales.
La cantidad de complejos moleculares formados entre el receptor y la señal determinan
la intensidad de la respuesta producida. Sin embargo, esta respuesta puede modularse
cambiando la concentración de la señal en el entorno celular o variando el número de
receptores que las células expresan para responder a la señal.
En el caso de esta práctica, se utilizarán 2 señales químicas: un estrógeno (estradiol o
estrona) que interactúa con receptores nucleares de tipo homodímero y, oxitocina, que
se asocia a receptores acoplados a proteínas Gq. Ambas señales pueden modificar de
manera indirecta o directa, la contractilidad del músculo liso de cuerno uterino de rata.
OBJETIVO
- Evaluar el efecto de señales químicas (estrógenos y oxitocina) sobre la contractilidad
uterina en rata.
MATERIAL
Primera parte. Tratamiento con estrógenos.
- Por equipo:
- Biológico: 1 rata hembra (Rattus norvegicus Var. Wistar) de alrededor de 100 g de
peso.
- Por grupo: 2 Cajas para 3 ratas c/u.
- Benzoato de estradiol 0.5 mg/mL (vehículo: aceite de maíz).
- Aceite de maíz.
- 2 jeringas de 1 mL con aguja.
- Ácido pícrico
2ª Parte. Registro de actividad contráctil de músculo liso de útero.
- Soluciones:
- Soluciones de oxitocina: 50, 100, 200, 500 y 1000 nM.
- Solución fisiológica de García de Jalón.
- Equipo e instrumental.
eléctrica y USB.
67
- Transductor de fuerza.
- Gancho en S.
- Soporte universal o de media luna.
- 2 Pinzas dobles.
- Baño de recirculación con termostato.
- Termómetro.
- Cámara para órgano aislado con manguera larga de desagüe y pinza Mohr.
- Tubería para el aireamiento de la preparación y bomba de aire.
- Aguja e hilo.
- Caja Petri.
- Pizeta de 500 mL.
- CD para grabar datos (segunda parte).
DESARROLLO
Primera parte: Tratamiento previo con estrógenos (estradiol o estrona).
1. Distribuya aleatoriamente 6 ratas en 6 equipos.
2. Marque a la rata de su equipo con ácido pícrico de acuerdo al cuadro siguiente (para
determinar cuál es el lado derecho y cuál el lado izquierdo de la rata, imagine que la
rata camina delante de usted):
Equipos nones Equipos pares
(parte delantera) (parte trasera)
1. Cabeza 2. Cola
3. Mano derecha 4. Pata derecha
5. Mano izquierda 6. Pata izquierda
3. Pese a la rata y administre, por vía subcutánea, el volumen correspondiente a la

milésima parte del peso del animal. Los equipos nones administran aceite de maíz y sus
ratas se consideran el grupo control y los equipos pares administran estrógenos (grupo
de ratas tratadas).
4. Coloque cada grupo de ratas en una caja debidamente rotulada con los siguientes
datos: Profesor responsable, grupo, práctica, tratamiento, peso de las ratas, dosis
administrada y fechas de administración.
5. Administre a los grupos de ratas durante una semana o semana y media. Considere
que si va a administrar a las ratas todos los días, debe dar una dosis simple (el volumen
correspondiente a la milésima parte del peso de la rata) pero, si las administra cada
tercer día, debe dar una dosis doble. Tome en cuenta también el fin de semana para
determinar el volumen que administrará.
68
Los equipos se responsabilizarán del grupo de ratas que les corresponda en cuanto a
su tratamiento y cuidado, manteniéndolas en condiciones óptimas de alimento, agua y
limpieza.
Segunda parte: Efecto de oxitocina sobre la contractilidad uterina de rata control
y tratada con estrógenos.
I. Montaje del equipo y del sistema de registro.
1. Calibre el baño con recirculador a 31 ± 1°C y mantenga constante esta temperatura
durante todo el experimento.
Nota importante: No encienda el baño de recirculación hasta que la resistencia se
encuentre rodeada con agua, asimismo, no retire la resistencia del baño de
recirculación mientras esté conectada a la corriente eléctrica.
2. Coloque la cámara de órgano aislado en el interior del baño y llénela con solución de
García de Jalón. La solución debe mantenerse con aireación continua mediante una
bomba de aire (1 burbuja/segundo) y contar con un sifón para poder realizar los lavados
de la preparación (una manguera de látex que llegue a la tarja, con una pinza Mohr
cerrada que impida la salida de la solución de García de Jalón de la cámara pero que la
permita cuando se abra la pinza).
3. Coloque también una pizeta llena con solución de García de Jalón dentro del baño de
recirculación.
5. Conecte el transductor de fuerza montado en el soporte universal al canal 1 (CH1)
del módulo MP36 e inserte el ganchito con forma de “S” en el orificio de 50 g del
transductor de fuerza.
6. Encienda la computadora y el MP36. Calibre el equipo (vea apéndice: calibración del
Biopac en la página 110).
II. Montaje de la preparación de cuerno uterino aislado de rata.

1. Personal capacitado sacrificará a las ratas por dislocación cervical (NOM-033-
SAG/ZOO-2014: Métodos para dar muerte a los animales domésticos y silvestres) y le
entregará a cada equipo su respectiva rata.
2. Abra el abdomen de la rata, desplazando los intestinos a un lado para localizar los
cuernos uterinos (Figura 13). Observe la cantidad de grasa presente, la vascularización,
el tamaño, grosor y color de los cuernos uterinos. Una vez localizados diséquelos y
transfiéralos a una caja de Petri con solución de García de Jalón aireada con una
burbuja por segundo.
3. Limpie el tejido graso de los cuernos y sepárelos. Utilice uno de ellos en la
preparación y proporcione el otro al equipo que corresponda, de tal manera que cada
equipo pueda trabajar con un cuerno uterino control y un cuerno uterino tratado con
estrógenos.
69
Figura 13. A la izquierda se muestra el sitio de la incisión y a la derecha la ubicación de los
cuernos uterinos: 1) intestino, 2) vejiga urinaria, 3) cuernos uterinos.
4. Ate un hilo a cada extremo del cuerno uterino, al hacer esto, evite ocluir la luz.
5. Amarre uno de los hilos al soporte inferior del alambre en “L” e introdúzcalo en la
cámara de órgano aislado. Ate el otro hilo en el ganchillo en “S” que se insertó en el
orificio de 50 gramos del transductor de fuerza (Figura 14).
Figura 14. Muestra la disposición final de la cámara de órgano aislado (C), el recirculador (R) y
la pizeta (P). El hilo del extremo libre del útero puede fijarse al transductor de fuerza (Tr*).
6. Deje estabilizar la preparación de 15 a 20 minutos (podrían observarse contracciones

espontáneas en el registro).
III. Determinaciones prácticas.

1. Realice un registro basal de 5 minutos si se presenta actividad contráctil espontánea,
si no existe tal actividad, haga un registro basal de 1 minuto.
2. Sin parar el registro, adicione 0.2 mL de la solución 50 nM de oxitocina a la cámara
de órgano aislado y continúe registrando durante 5 o 10 minutos. Detenga el registro.
70
3. Lave la preparación abriendo el desagüe de la cámara de órgano aislado y llenando
la cámara con solución de García de Jalón simultáneamente. La solución debe tomarse
de la pizeta que se ha mantenido en el baño a 31 ± 1°C.
4. Repita el mismo procedimiento con todas las soluciones de oxitocina en orden
creciente de concentración.
DATOS
a) Fuerza de contracción
[Oxitocina] Cuerno uterino Porcentaje Cuerno uterino Porcentaje
(nM) de rata control de rata tratado
50
100
200
500
1000
b) Duración de contracción
[Oxitocina] Cuerno uterino Porcentaje Cuerno uterino Porcentaje
(nM) de rata control de rata tratado
50
100
200
500
1000
Realice una impresión de pantalla en la que se observe un segmento del registro basal
y las contracciones que siguieron a la administración de oxitocina 50 nM para el cuerno
uterino de rata control. Haga lo mismo para el cuerno uterino de la rata tratada con
estrógenos. Ambas impresiones de pantalla deben estar en la misma diapositiva y tener
la misma escala.
Repita para las concentraciones de 100, 200, 500 y 1000 nM.
Incluya en estas imágenes la concentración de oxitocina administrada y los valores de
fuerza y duración de las contracciones observadas.
Exprese todos sus valores de fuerza y duración de contracción como porcentaje de la
contracción con mayor fuerza y duración (en teoría, la obtenida en los cuernos uterinos
de rata tratada con estrógenos al administrar la concentración de 1000 nM de
oxitocina).
Elabore el gráfico de porcentaje de fuerza vs logaritmo en base 10 de la concentración
de oxitocina, será una línea para el cuerno uterino de rata control y una para el cuerno
71
uterino de rata tratada con estrógenos. Determine el mejor ajuste para sus líneas y
obtenga la ecuación de ajuste y el valor de R2.
Elabore el gráfico de porcentaje de duración vs logaritmo en base 10 de la
concentración de oxitocina, será una línea para el cuerno uterino de rata control y una
para el cuerno uterino de rata tratada con estrógenos. Determine el mejor ajuste para
sus líneas y obtenga la ecuación de ajuste y el valor de R2.
BIBLIOGRAFÍA
 Chambert, G., Lanzagorta, A., Ortiz, R., Paniagua, N., Quevedo, L. y Zamudio,
S., Manual de fisiología humana (QFI), 2ª ed., 2003, Departamento de Fisiología
de la ENCB-IPN, pp. 27-33.
 Departamento de Farmacología de la Universidad de Edimburgo,
Pharmacological experiments on isolated preparations, 1968, E. & S. Livingstone
LTD., Edinburgh and London, pp.92-95.
 Ganong, W., Fisiología médica, 17a Ed., 2000, Edit. Manual Moderno, México, pp
271-272, 488 y 499.
 Katzung, B., Farmacología básica y clínica, 7ª Ed., 1999, Edit. Manual Moderno,
México, pp 14-18.
 Larcher, A., Neculcea, J., Breton, C., Aíslan, A., Rozen, F., Russo, C. y Zingg, H.,
Oxytocin receptor gene expression in the rat uterus during pregnacy and the
estrous cycle and in response to gonadal steroid treatment, 1998, Endocrinology,
Vol. 136 (12), pp 5350-5356.
de 2015.
72
PRÁCTICA 7. MODULACIÓN DE UNA FUNCIÓN CELULAR POR
SEÑALES QUÍMICAS
Diagrama de Flujo
73
Notas:
74
PRÁCTICA 8. TRANSMISIÓN SINÁPTICA Y MÚSCULO ESQUELÉTICO
INTRODUCCIÓN (Transmisión sináptica)

La comunicación entre las células nerviosas se lleva a cabo en regiones
especializadas denominadas sinapsis. Éstas pueden clasificarse con base en sus
diferencias funcionales o morfológicas. Una de las formas de comunicación neuronal se
denomina sinapsis química y se realiza a través de sustancias liberadas por una
neurona, denominadas neurotransmisores.
En las sinapsis químicas los mensajeros que se liberan de las terminales presinápticas
se unen a los receptores específicos ubicados en las membranas de las neuronas que
reciben el mensaje (postsinápticas).
En los mamíferos, las fibras musculares son inervadas por el axón de una sola
motoneurona. El axón se une con la fibra muscular en la llamada placa neuromuscular,
una región especializada cuya función es similar a las sinapsis neuronales: cuando un
potencial de acción es generado en las neuronas motoras, provoca la liberación de
acetilcolina en las terminales presinápticas, que se une con receptores colinérgicos
localizados en la fibra muscular (membrana postsináptica). La interacción de la
acetilcolina (ACh) con su receptor provoca la despolarización de la fibra muscular en la
región de la placa motora. Esta despolarización es suficientemente grande para
provocar la activación de canales dependientes de voltaje y provocar un potencial de
acción que viaja a lo largo de la fibra muscular. El efecto de la ACh termina cuando ésta
es degradada por la enzima acetilcolinesterasa (AChE), presente en la hendidura
sináptica. Normalmente, la cantidad de acetilcolina liberada es suficiente para asegurar
que cada potencial de acción de la neurona motora provoque un potencial de acción en
la fibra muscular.
INTRODUCCIÓN (Músculo esquelético)

En los vertebrados y otros organismos, el movimiento de las extremidades y el
desplazamiento del cuerpo dependen de un tipo particular de tejido contráctil, el
músculo esquelético. Al igual que el tejido nervioso, el tejido muscular es excitable (es
decir, que su membrana es capaz de invertir momentáneamente su potencial para
luego recuperar su estado inicial), y este cambio de potencial de la membrana
(potencial de acción) es la señal que desencadena la contracción del músculo. La
actividad del músculo esquelético es voluntaria, es decir que se origina en el sistema
nervioso central y es transmitida al músculo a través de fibras nerviosas. Es por esto
que la actividad del músculo esquelético es considerada neurogénica, en contraste con
la actividad espontánea (miogénica) presente en otros tipos de músculo.
Para realizar cualquier clase de trabajo mecánico los músculos del organismo tienen
que contraerse para generar fuerza. En la mayor parte de los casos, la longitud del
músculo se acorta considerablemente, cuando esta fuerza se aplica a través de las
articulaciones los miembros se mueven. Este tipo de trabajo muscular se denomina
75
contracción isotónica. En otros casos el acortamiento muscular no es visible, y se
denomina contracción isométrica. En ambas situaciones, las células musculares
generan fuerza y para este proceso se necesita de la energía obtenida del
metabolismo. Los cambios metabólicos provocados por una actividad muscular intensa,
como un aumento en la concentración de lactato en sangre y el descenso de pH,
pueden contribuir al fenómeno denominado fatiga muscular.
Los músculos esqueléticos deben generar fuerzas diferentes, a veces durante tiempos
prolongados. Dos mecanismos controlan la fuerza generada por un músculo. En primer
lugar debido a que el músculo contiene un gran número de unidades motoras (conjunto
de fibras musculares inervadas por la misma motoneurona), la fuerza puede variar a lo
largo de un amplio espectro mediante el reclutamiento de más y más unidades motoras.
La segunda forma de aumentar la fuerza y prolongar una contracción es elevar la
frecuencia de disparo de los nervios motores. La descarga de los nervios motores a
frecuencias altas desencadena corrientes adicionales momentáneas de calcio que
logran sumar las respuestas mecánicas y producir una contracción sostenida. La
presencia de un gran número de unidades motoras en un músculo y la sumación de la
respuesta contráctil permiten una graduación continua de la generación de fuerza.
OBJETIVOS
Transmisión sináptica:
- Determinar el efecto de diferentes sustancias (fisostigmina y d-tubocurarina) sobre la
transmisión sináptica en rana.
Músculo esquelético:
- Describir la respuesta contráctil del músculo esquelético ante estímulos eléctricos de
diferentes características.
- Determinar la importancia del aporte sanguíneo en la contracción muscular.
MATERIAL
decapitada y desmedulada por personal capacitado (por equipo).
Soluciones:
- Solución Ringer.
- Fisostigmina (o neostigmina) 1.5 mg/mL.
- Acetilcolina 1:10 000.
- d-tubocurarina: 2, 10, 20 y 50 µg/mL.
eléctrica y USB.
- Transductor de fuerza de rango variable (SS12LA)
- Cable DB9H
- Electrodos con funda (camisa).
- Tabla para disección
76
- Disectores de vidrio
- Vaso de precipitados de 50 mL.
- Soporte universal.
- Pinzas dobles.
- Manguera de látex para ligadura.
- Perilla de hule.
- Algodón.
- Hilo.
- CD para grabar datos.
DESARROLLO
2. Conecte el transductor de fuerza montado en el soporte universal al canal 2 del
módulo MP36 e inserte el ganchito con forma de “S” en el orificio de 100 g del
transductor de fuerza.
3. Conecte el cable DB9H a la salida (Analog out) del módulo MP36 y conecte los
alambres del electrodo de camisa al cable DB9H.
5. Active el estimulador de bajo voltaje dando clic en el menú MP36 → control salidas →
estimulador de bajo voltaje. En la parte superior de la pantalla aparece un rectángulo
rojo con varios parámetros de estimulación (encendido y apagado, frecuencia, voltaje,
duración y número de pulsos o estímulos y canal de referencia), para modificar éstos,
dé clic con botón derecho dentro del rectángulo rojo y luego de clic en Preferencias.
Se abre un cuadro de diálogo con varias pestañas:
En la pestaña General puede seleccionar el número de pulsos o estímulos (aislado,
múltiple o continuo).
En la pestaña Avanzado puede seleccionar el ancho (o duración) del pulso (estímulo).
Puede seleccionar permitir cualquier entrada si se desea modificar la duración de los
estímulos o límite entre y escribir una duración específica. También se puede modificar
la repetición del estímulo (pulso), puede seleccionar frecuencia de repetición o período
en milisegundos entre un estímulo y otro.
En la pestaña Nivel se puede seleccionar el nivel de voltaje para los estímulos,
seleccione cualquier entrada para que el estimulador pueda dar cualquier estímulo
entre -10 y 10 V. Seleccione ajustar en incrementos de 0.005 V.
77
En la pestaña Canal de referencia, seleccione Salida de la señal de referencia en:
Canal 1 (CH1).
II. Montaje de la preparación ciático-gastrocnemio de rata toro in situ.

práctica.
15).
3. Sujete la rana fuertemente en posición de decúbito dorsal a una tabla de disección y

proceda a realizar una preparación ciático-gastrocnemio (Figura 16). Fije la pata de la
rana de modo que sólo se registre el movimiento del gastrocnemio.
Figura 16. Preparación ciático-gastrocnemio para su estimulación y registro.
4. Coloque el electrodo de camisa en el nervio ciático (Figura 17). Evite tocar el nervio
con objetos metálicos o con las manos, utilice los disectores de vidrio.
78
5. Ate el extremo de un hilo al tendón de Aquiles (que une el músculo gastrocnemio al
hueso) y corte el tendón después de su atadura. Amarre el otro extremo del hilo al
gancho en “S” que se insertó en el orificio de 100 g del transductor de fuerza.
Figura 17. Colocación de los electrodos de estimulación.
III. Determinaciones prácticas.

Se decidió realizar en conjunto las prácticas: Transmisión sináptica y Músculo
esquelético con la finalidad de reducir en la medida de lo posible el uso de animales de
experimentación. Así pues, en el protocolo que sigue la práctica de transmisión
sináptica tiene 2 partes (A y B) y la práctica de músculo esquelético tiene 3 (primera,
segunda y tercera). Las partes de una y otra práctica están intercaladas pero en su
seminario y reporte deben quedar ordenadas.
Músculo esquelético, primera parte.
1. Umbral. Busque el voltaje umbral con estímulos únicos de voltaje creciente y con una
duración de 0.2 ms, de tal forma que se logre una contracción mínima cuyo registro sea
observable.
Estímulo Umbral
Voltaje (mV)
Duración (ms)
Sacudida simple Umbral
Fuerza (g)
Duración (ms)
2. Relación voltaje del estímulo-fuerza de contracción. Aplique estímulos

supraumbrales cada vez más intensos, y observe el aumento gradual en la fuerza de
contracción. Encuentre y registre el voltaje del estímulo que produce la máxima
respuesta del músculo.
Estímulo 1 Sacudida simple 1
Voltaje (mV) Fuerza (g)
79
3. Suma temporal. Aplique estímulos cuyo valor de voltaje se encuentre por debajo del
valor del estímulo umbral (estímulos subumbrales); aplique estos estímulos a baja
frecuencia. Con la misma intensidad de estimulación, incremente gradualmente la
frecuencia. Registre la respuesta contráctil bajo estas condiciones de estimulación.
Frecuencia de estimulación para producir una sacudida simple perceptible: _____________ Hz.
Esta experiencia también puede hacerse modificando el tiempo interestímulo entre dos
estímulos subumbrales (para ello, debe seleccionar periodo en milisegundos en la
pestaña Avanzado de los controles del estimulador).
Tiempo interestímulo para producir una sacudida simple perceptible: _________________ ms.
4. Suma de contracciones y tétanos. Seleccione un voltaje de estimulación para

producir una respuesta submáxima (por encima del umbral, pero sin llegar a la
máxima). Con esta intensidad, aplique estimulación continua con frecuencia baja (1 Hz)
y registre. Sin detener el registro, aumente gradualmente la frecuencia de estimulación
hasta llegar a 100 Hz y, observe la respuesta.
Nota: Si antes de llegar a 100 Hz, la fuerza comienza a disminuir marcadamente en su
registro, detenga la estimulación.
Transmisión sináptica, parte A
A. Registro basal. Busque nuevamente el voltaje umbral con estímulos únicos de
voltaje creciente y con una duración de 0.2 ms. Realice un registro de 30 s de las
contracciones obtenidas con estímulos umbrales con una frecuencia de 2 Hz y detenga
la estimulación.
B. Efecto fisostigmina y acetilcolina. Inyecte en el gastrocnemio, lo más cerca de la
unión mioneural, 0.1 mL de fisostigmina (o neostigmina), de una solución de 1.5 mg/mL.
Realice un registro de 1 minuto sin estimulación eléctrica.
C. Inyecte en el mismo sitio, 0.1 mL de acetilcolina y registre nuevamente sin
estimulación eléctrica durante 1 minuto.
D. Estimule eléctricamente con los valores del punto A y registre durante 30 s (observe
si la amplitud de la contracción es la misma que la contracción basal).
Músculo esquelético, segunda parte.
5. Fatiga muscular en la rana. Aplique estimulación supraumbral continua a 1 Hz y
registre los cambios en fuerza de la contracción durante los siguientes 10 minutos o
80
hasta que la respuesta disminuya de manera considerable. Deje recuperar la
preparación por 10 minutos.
Transmisión sináptica, parte B
E. Efecto de la d-tubocurarina. Realice un registro basal de 30 s a 2 Hz. Detenga la
estimulación e inyecte (cerca de la unión mioneural) 0.1 mL de la solución de d-
tubocurarina de la más baja concentración, inmediatamente aplique estímulos eléctricos
en las mismas condiciones anteriores y registre durante 1 minuto.
F. Repita con las demás soluciones de d-tubocurarina, aplicadas en orden creciente de
concentración.
G. Después de la última concentración de d-tubocurarina empleada, detenga la
estimulación, inyecte 0.1 mL de acetilcolina y estimule eléctricamente el nervio durante
1 o 2 minutos.
Músculo esquelético, tercera parte.
6. Fatiga muscular en humano. Un miembro del equipo debe presionar, lo más rápido
posible y repetidas veces, una perilla de hule con una de las manos (ya sea derecha o
izquierda). Registre el número de presiones en un minuto.
7. Deje descansar el brazo y la mano del sujeto durante 15 min.
8. El brazo de la persona que presionó la perilla se liga con una manguera de látex y se
repite el experimento con la misma mano, presión y rapidez posible. Registre el número
de veces que presiona la perilla en un minuto.
9. Otro miembro del equipo debe hacer también la experiencia de fatiga muscular en
humano, sólo que con el orden invertido; es decir, primero hace la experiencia con el
brazo ligado y después, con el brazo sin ligar.
Orden inicial Orden inverso

(presiones/min) (presiones/min)
Equipo Brazo sin ligar Brazo ligado Brazo ligado Brazo sin ligar
1
2
3
4
5
6
Media
EEM
I. Transmisión sináptica.
a) Efecto de la fisostigmina y la acetilcolina.
Presente una imagen en la que se observe un fragmento del registro basal y
posteriormente, el registro con fisostigmina sin estímulo, el registro con acetilcolina sin
81
estímulo y finalmente, el registro con estimulación eléctrica. Cada uno de estos
segmentos debe estar perfectamente indicado con flechas, llaves o barras.
b) Efecto de la d-tubocurarina.
Presente una imagen en la que se observe un fragmento del registro basal y
posteriormente, los registros con las concentraciones de d-tubocurarina en orden
creciente.
Mida la fuerza de contracción para el basal y en cada una de las concentraciones de d-
tubocurarina. Considere la fuerza de contracción basal como 100% y convierta a
porcentaje la fuerza de las contracciones en presencia de d-tubocurarina.
Elabore un gráfico de porcentaje de fuerza de contracción (eje Y) contra logaritmo en
base 10 de las concentraciones de d-tubocurarina. Incluya en el gráfico la ecuación de
ajuste y la bondad del ajuste (R2).
II. Músculo esquelético.

a) Umbral y relación voltaje del estímulo-fuerza de contracción.
Presente una diapositiva en la que se observen tanto el estímulo umbral como la
sacudida simple correspondiente y posteriormente se aprecie como va aumentando la
fuerza de contracción con respecto al aumento en la magnitud del estímulo, hasta que
se observen tanto el estímulo máximo como la sacudida simple máxima y escriba las
características de cada uno en la imagen.
Construya una gráfica de la relación entre intensidad del estímulo y respuesta contráctil.
b) Suma temporal.
Presente de 3 a 4 imágenes en una sola diapositiva, en éstas debe observarse la
disminución gradual del tiempo interestímulo, desde que no hay sacudida simple hasta
que ocurre la suma temporal y si hay respuesta. En cada una de ellas escriba el tiempo
interestímulo.
También puede incluir 3 ó 4 imágenes en una sola diapositiva, en las que se observe el
aumento gradual de frecuencia, desde que no hay sacudida simple hasta que ocurre la
suma temporal y si hay respuesta. En cada una de ellas escriba la frecuencia de
estimulación.
c) Suma de contracciones y tétanos.
Incluya una impresión de pantalla en la que se observe cómo fue aumentando la fuerza
de contracción con respecto al aumento en la frecuencia de estimulación. En ésta,
deben observarse los ejes y las unidades, así como marcarse claramente las siguientes
fases: escalera o treppe, tetános incompleto, tétanos completo y, en su caso, fatiga.
Anote en cada parte los valores de fuerza de contracción expresada en gramos y los
valores de frecuencia en Hz.
d) Fatiga muscular en rana.
Incluya una impresión de pantalla en la que se observe el registro desde el inicio hasta
el final. Elabore un gráfico de la relación entre el tiempo de estimulación y la fuerza de
contracción (para ello, puede registrar los cambios ocurridos cada minuto).
82
e) Fatiga muscular en humano.
Reúna los resultados del grupo, calcule media y error estándar de cada condición y
elabore 2 gráficos de barras en los que muestre si hubo o no diferencias
estadísticamente significativas al aplicar la prueba de t de Student pareada.
Nota importante: En todas las imágenes o diapositivas que presente, deben apreciarse
los ejes y sus unidades (o los gramos y segundos por división).
APÉNDICE: Soluciones utilizadas en esta práctica:

- Acetilcolina 1: 10 000: Acetilcolina ........................ 1 mg
Solución salina 0.9 % ….. 10 mL
- Fisostigmina 1.5 mg/mL: Fisostigmina .................... 1.5 mg
Solución salina ................... 1 mL
BIBLIOGRAFÍA
 Aidley, D.J. The Physiology of Excitable Cells. 4ª ed., 1998. Ed. Cambridge
University Press, Cambridge.
 Brunton L.L., Lazo J.S. y Parker K.L. Goodman y Gilman: Las Bases
Farmacológicas de la Terapéutica. 11ª ed., 2006. Ed. Mc Graw Hill
Interamericana Editores, México D.F.
 Carpenter R.H.S. Neurofisiología. 2a ed., 1998. Ed. El Manual Moderno. México,
D.F.
 Kandel E.R., Schwartz J.H. y Jessell T.M. Principios de Neurociencia. 4ª ed.,
2001. Ed. Mc Graw Hill Interamericana Editores, México D.F.
 Karp G. Biología Celular y Molecular. 6a ed., 2011. Ed. Mc Graw Hill
Interamericana Editores, México D.F.
de 2015.
 Randall, D., Burgreen, W. y French, K. Eckert. Fisiología Animal: Mecanismos y
Adaptaciones. 4ª ed., 1998. Ed. Interamericana-McGraw-Hill, Madrid.
83
PRÁCTICA 8. TRASMISIÓN SINÁPTICA Y MÚSCULO ESQUELÉTICO
Diagrama de Flujo
84
Notas:
85
PRÁCTICA 9. PROPIEDADES DEL MÚSCULO CARDIACO
INTRODUCCIÓN
El corazón continúa latiendo después de que se le ha retirado la inervación
extrínseca, esto se debe a la presencia de un tejido marcapaso especializado. Este
tejido especializado se caracteriza por poseer un potencial de membrana inestable
(prepotencial), el cual disminuye continuamente hasta alcanzar el valor de descarga
desencadenando el disparo de su potencial de acción.
Algunos agentes humorales que modifican la frecuencia de descarga del marcapaso lo
hacen cambiando la pendiente del prepotencial (por ejemplo, noradrenalina), y otros
actúan además alterando el potencial de membrana (por ejemplo, acetilcolina),
cambiando así el tiempo requerido para alcanzar el valor de descarga (umbral).
Como en otros tejidos excitables, los cambios en la concentración extracelular de los
iones K+ afectan el potencial de membrana en reposo del músculo cardiaco, en tanto,
que los cambios en la concentración externa de Ca2+ afectan la magnitud de las
contracciones musculares.
Los impulsos de los nervios simpáticos noradrenérgicos en el corazón, aumentan la
frecuencia (efecto cronotrópico positivo) y la fuerza de contracción (efecto inotrópico
positivo). Las catecolaminas ejercen su efecto mediante su acción sobre receptores β1-
adrenérgicos.
Los impulsos de las fibras cardiacas vagales colinérgicas disminuyen la frecuencia
cardiaca (efecto cronotrópico negativo), acción mediada por receptores M2.
OBJETIVOS
- Determinar la influencia de sustancias químicas simpáticomiméticas,
parasimpaticomiméticas y parasimpaticolíticas sobre la actividad del corazón.
- Determinar la influencia de los iones Ca2+ y K+ sobre la actividad del corazón.
- Obtener un registro de extrasístole y pausa compensadora en corazón de rana.
MATERIAL
decapitada y desmedulada por personal capacitado (por equipo).
Soluciones:
- Acetilcolina 1:10,000.
- Adrenalina 1:10,000.
- Atropina 1:10,000.
- Ringer.
- Ringer con alto contenido de K+.
- Ringer con alto contenido de Ca2+.
86
eléctrica y USB.
- Transductor de fuerza de rango variable (SS12LA).
- Ajustador de tensión.
- Gancho en “S” y gancho tipo anzuelo para corazón.
- Cable DB9H.
- Electrodos de estimulación (de aguja).
- Pinzas dobles.
- Tabla de disección.
- Hilos grueso y delgado.
- Caja de Petri.
- 1 vaso de precipitados de 50 mL.
- 4 jeringas de 1 mL.
- Estuche de disección (o tijeras, pinzas y bisturí).
- Guantes desechables (látex o nitrilo), cubrebocas (opcional).
DESARROLLO
2. Monte el ajustador de tensión en el soporte universal y coloque el transductor de
fuerza en el ajustador de tensión. Conecte el transductor de fuerza al canal 1 (CH1) del
módulo MP36 y ponga el ganchito con forma de “S” en el orificio de 50 g del transductor
de fuerza.
3. Conecte el cable DB9H a la salida (Analog out) del módulo MP36 y conecte los
alambres del electrodo de aguja al cable DB9H.
4. Encienda la computadora y el MP36. Calibre el equipo (vea Apéndice: calibración del
II. Montaje de la preparación de corazón in situ de rana.

87
práctica.
18).
3. Fije a la rana sobre la tabla de disección y abra su cavidad torácica, tras separar
previamente la piel del abdomen. Corte a nivel de la cintura escapular y descubra la
región torácica. Con extremo cuidado incida el pericardio y libere el corazón (Figura 19).
Durante este procedimiento debe cuidar de no lesionar ningún vaso, principalmente los
grandes troncos que ocupan la porción precordial.
Figura 19. Localización del corazón. 1) Aurícula, 2) ventrículo y 3) ápice.
4. Fije el ápice del corazón (la punta) al ganchito con forma de anzuelo (evite perforar el
miocardio), éste deberá estar amarrado a un hilo, que a su vez se amarra al gancho en
“S” que se colocó en el transductor de fuerza (en el orificio de 50 g, Figura 20).
88
Figura 20. Dispositivo para registro de actividad cardiaca
III. Determinaciones prácticas

a) Efecto de sustancias simpáticomiméticas, parasimpaticomiméticas y
parasimpaticolíticas sobre actividad contráctil de corazón.
1. Realice un registro basal de la actividad contráctil del corazón de rana durante 1
minuto.
2. Sin detener el registro bañe el corazón con 0.2 mL de solución 1:10,000 de
adrenalina y continúe registrando durante 3 minutos.
* Adrenalina
Tiempo (minutos)
Basal 1 2 3
Frecuencia
(latidos/min)
Fuerza (g)
3. Lave con solución Ringer.

4. Realice un nuevo registro basal de 1 minuto y, sin detener el registro bañe el corazón
con 0.2 mL de solución 1:10,000 de acetilcolina. Continúe registrando durante 3
minutos.
* Acetilcolina
Tiempo (minutos)
Basal 1 2 3
Frecuencia
(latidos/min)
Fuerza (g)
89
5. Lave con solución Ringer.
6. Realice un registro basal de 1 minuto, sin detener el registro, bañe el corazón con 0.2
mL de solución 1:1,000 de atropina, registre durante 1 minuto y ahora bañe el corazón
con 0.2 mL de la solución 1:10,00 de acetilcolina. Registre durante 3 minutos más.
* Atropina + acetilcolina
Tiempo (minutos)
Atropina + acetilcolina
Basal Atropina 1 2 3
Frecuencia
(latidos/min)
Fuerza (g)
7. Realice dos lavados con solución Ringer.
b) Extrasístole y pausa compensadora.

1. Coloque los electrodos de aguja sobre el corazón, de manera que queden fijos.
2. En su archivo de registro, active el estimulador de bajo voltaje.de bajo voltaje dando
clic en el menú MP36 → control salidas → estimulador de bajo voltaje. En la parte
superior de la pantalla aparece un rectángulo rojo con varios parámetros de
estimulación (encendido y apagado, frecuencia, voltaje, duración y número de pulsos o
estímulos y canal de referencia), para modificar éstos, puede dar clic con botón derecho
dentro del rectángulo rojo y luego dar clic en Preferencias.
3. Seleccione una duración de 0.2 milisegundos y 1 V de magnitud del estímulo.
4. Realice un registro basal de 30 segundos y aplique un estímulo (dé clic en on),
teniendo cuidado de aplicarlo en el tiempo en el que en el registro se vea (o se acerque)
el punto más elevado de la contracción. Siga estimulando hasta lograr el registro de una
contracción superpuesta a la sístole normal (extrasístole) y la pausa compensadora que
la acompaña.
Nota: si no logra visualizar la extrasístole y la pausa compensadora, aumente la
magnitud y/o la duración del estímulo.
c) Efecto de la concentración extracelular de iones sobre actividad contráctil del

corazón.
1. Realice un registro basal de 1 minuto. Sin dejar de registrar, bañe el corazón con 0.5
mL de Ringer con alto contenido de Ca2+. Continúe registrando durante 3 minutos.
* Ringer alto en calcio
Tiempo (minutos)
Basal 1 2 3
Frecuencia
(latidos/min)
Fuerza (g)
90
2. Lave 2 veces con la solución Ringer.
3. Haga un registro basal de 1 minuto, sin detener el registro, bañe el corazón con 0.5
mL de Ringer con alto contenido de K+, siga registrando 3 minutos más.
* Ringer alto en potasio
Tiempo (minutos)
Basal 1 2 3
Frecuencia
(latidos/min)
Fuerza (g)
Determine, para cada experiencia, la frecuencia en latidos por minuto y fuerza de
contracción en gramos.
Presente una impresión de pantalla del registro experimental de cada experiencia (debe
apreciarse tanto la escala del eje de las X como del eje de las Y) en la que se pueda
observar:
a) Un fragmento del registro basal.
b) Los minutos de registro que siguieron al manejo experimental.
c) Las mediciones de las tablas de datos asociadas al basal o al minuto
correspondiente, bien sea en valores reales o en porcentaje del basal.
d) Asocie a las imágenes un gráfico en el que se observen los cambios en fuerza y
frecuencia con respecto al tiempo.
Realice un gráfico de barras en el que se considere la fuerza de contracción del basal
como el 100% y las modificaciones en este porcentaje (aumento o disminución)
ocurridos para cada una de las experiencias. Considere el efecto máximo registrado
para la realización de este gráfico. Haga lo mismo para la frecuencia.
Incluya una imagen en la que se observen tanto la extrasístole como la pausa
compensadora y las características del estímulo aplicado.
APÉNDICE. Soluciones utilizadas en esta práctica:
- Adrenalina 1:10,000 Adrenalina …………............ 1 mg

Solución salina 0.9 % ……. 10 mL
- Acetilcolina 1:10,000 Acetilcolina.......................... 1 mg

Solución salina 0.9 % ….... 10 mL
- Atropina 1:1,000: Sulfato de atropina ………... 1 mg

Solución salina 0.9 % ……... 1 mL
91
Componentes (g/L) Ringer Ringer alto Ringer alto
K+ Ca2+
NaCl 6.5 6.5 6.5
KCl 0.14 0.28 0.14
CaCl2 0.12 0.12 0.24
NaH2PO4 H2O 0.01 0.01 0.01
NaHCO3 0.2 0.2 0.2
Glucosa 2 2 2
BIBLIOGRAFÍA
 Aidley, D. J., 1998. The Physiology of Excitable Cells. 4ª Ed. Edit. Cambridge.
University Press. P. 381 – 393.
 Conti, F. E., 2010. Fisiología Médica. McGraw-Hill-Interamericana, México.
 Eckert, R., D. Randall y G. Augustine, 1998. Fisiología Animal. Mecanismos y
adaptaciones. 4ª. ed. Edit. McGraw Hill – Interamericana. Madrid, España. p 507
– 522.
 Ganong, F. W. 2000. Fisiología Médica. 17ª. ed. Edit. El Manual Moderno, D. F.,
México. p. 84 – 89, 605 – 622.
de 2015.
92
PRÁCTICA 9. PROPIEDADES DEL MÚSCULO CARDIACO
Diagrama de Flujo
93
Notas:
94
PRÁCTICA 10. PROPIEDADES DEL MÚSCULO LISO
INTRODUCCIÓN
El músculo liso unitario del tracto gastrointestinal es uno de los más estudiados.
Especialmente, el intestino delgado es un órgano con actividad contráctil pendular
regular que se compone de contracciones y relajaciones continuas desencadenadas
por la actividad de las células intersticiales de Cajal (ICC).
La actividad contráctil del intestino delgado es modulada por las dos divisiones del SNA
(Sistema Nervioso Autónomo) y por factores como la tensión, la presión parcial de
oxígeno, la temperatura, el pH y otros. Cabe resaltar que debido a la descarga
parasimpática, aumentan tanto el tono como la motilidad, mientras que con la activación
de la división simpática ocurre lo contrario.
La preparación de yeyuno aislado de conejo constituye un modelo experimental muy útil
para determinar la acción de sustancias con actividad simpaticomimética,
parasimpaticomimética y parasimpaticolítica, o la influencia de factores como la
temperatura, la tensión y la presión parcial de oxígeno.
Por lo anterior, se utilizarán segmentos de yeyuno de conejo para estudiar
características del movimiento intestinal tales como fuerza, tono y frecuencia en
condiciones basales y bajo el efecto de sustancias y factores físicos.
OBJETIVOS
- Estudiar las propiedades contráctiles del músculo liso.
- Analizar el efecto de sustancias simpáticomiméticas, parasimpaticomiméticas y
parasimpaticolíticas sobre la actividad contráctil del músculo liso intestinal.
- Determinar la influencia que ejercen algunos factores, como hipoxia, temperatura y
tensión sobre la actividad contráctil del músculo liso intestinal.
MATERIAL
- Biológico: 1 conejo (Oryctolagus cuniculus) con ayuno de 18-24 horas (por grupo)
previamente sedado y sacrificado por sobredosis de anestésico.
Soluciones:
- Acetilcolina 1:10,000.
- Adrenalina 1:10,000.
- Atropina 1: 1,000.
- Tyrode pH 7.2–7.4.
eléctrica y USB.
- Ajustador de tensión.
95
- Transductor de fuerza de rango variable (SS12LA).
- Gancho en S.
- 2 Pinzas de doble nuez.
- Baño de recirculación con termostato.
- Cámara para órgano aislado con manguera larga de desagüe y pinza Mohr.
- Tubería para el aireamiento de la preparación y bomba de aire.
- Termómetro industrial.
- Pizeta o matraz Erlenmeyer de 500 mL.
- Caja de Petri.
- Hilo y aguja.
- Estuche de disección (o tijeras, pinzas y bisturí).
- Guantes desechables (látex o nitrilo) y cubrebocas (opcional).
DESARROLLO
1. Ajuste la temperatura del baño de recirculación a 37 ± 1°C (verifique esta
temperatura con el termómetro industrial).
Nota importante: No encienda el baño de recirculación hasta que la resistencia se
encuentre rodeada con agua, asimismo, no retire la resistencia del baño de
recirculación mientras esté conectada a la corriente eléctrica.
2. Coloque dentro del baño de recirculación la cámara de órgano aislado y llénela con
solución Tyrode. La solución debe mantenerse con aireación continua mediante una
bomba de aire (dos a tres burbujas por segundo) y contar con un sifón eficiente (una
manguera de látex que llegue a la tarja, con una pinza Mohr cerrada que impida la
salida de la solución Tyrode de la cámara pero que la permita cuando se abra la pinza).
3. Coloque también una pizeta llena de solución Tyrode en el baño de recirculación.
4. Ponga el módulo MP36 (Biopac) en la parte superior de su mesa de laboratorio,
5. Monte el ajustador de tensión en el soporte universal y coloque el transductor de
fuerza en el ajustador de tensión. Conecte el transductor de fuerza al canal 1 (CH1) del
módulo MP36 y ponga el ganchito con forma de “S” en el orificio de 50 g del transductor
de fuerza.
II. Montaje de la preparación de yeyuno aislado de conejo.

1. Personal capacitado retirará al conejo de su jaula tomándolo por la piel del cuello con
la mano izquierda (no se debe tomar por las orejas), con la mano derecha sujetará las
96
extremidades posteriores, esto con la intención de inmovilizar al animal pero sin
lastimarlo (Figura 21).
Figura 21. Sujeción correcta del conejo.
2. El personal capacitado inyectará xilacina por vía intramuscular (1.5-2 mg/kg) para
inducir sedación al conejo. 10 minutos después, lo sacrificará por sobredosis de
pentobarbital sódico (90-120 mg/Kg), de acuerdo a la Norma Oficial Mexicana NOM-
033-SAG/ZOO-2014: Métodos para dar muerte a los animales domésticos y silvestres.
3. Abra el abdomen del conejo para localizar el estómago, siga el trayecto del intestino
y haga un corte aproximadamente 10 cm después de la unión del estómago con el
intestino delgado, haga otro corte 20 centímetros después del primer corte y coloque la
parte disecada en un vaso de precipitados que contenga Tyrode aireado y a 37°C.
4. Elimine las membranas mesentéricas para que el intestino quede libre y corte 6
porciones (asas) de 2 a 3 centímetros de longitud. Vacíe el contenido de las asas con
movimientos suaves y reparta un asa a cada equipo (Figura 22).
Figura 22. Disección del yeyuno de conejo.
5. Ate hilos a una porción de intestino de 2 a 3 centímetros en cada uno de sus

extremos, teniendo cuidado de que la luz intestinal no quede ocluida, como se observa
en la Figura 23.
97
Figura 23. Indica cómo se atan los hilos a los extremos de la porción de yeyuno de conejo.
6. Traslade esta preparación a la cámara de órgano aislado, amarrando uno de los

extremos del hilo al soporte inferior del alambre en “L” que se introduce en la cámara de
órgano aislado, y atando el otro hilo en el ganchillo en “S” que se inserta en el orificio de
50 gramos en el transductor de fuerza del Biopac (Figura 24).
Deje estabilizar la preparación durante 5 a 15 minutos.
Figura 24. Representación del montaje de la preparación de yeyuno aislado de conejo.
IV. Determinaciones prácticas

a) Efectos de estímulos físicos sobre actividad contráctil
1. Tensión. Realice un registro de la actividad basal del yeyuno aislado (1 minuto) en el
que se puedan apreciar claramente el tono, la fuerza y la frecuencia, sin dejar de
98
registrar, aumente la tensión del músculo girando el tornillo del ajustador de tensión en
el sentido de las manecillas del reloj. Observe la respuesta y siga registrando durante 5
minutos.
Aumento de tensión en gramos: ___________________________
Tiempo (min)
Basal 1 2 3 4 5
Frecuencia
(contracciones
por minuto)
Fuerza (g)
2. Temperatura. Regrese la preparación a la tensión inicial. Realice un registro basal

de 1 minuto, sin detener el registro, vaya retirando la solución Tyrode que está a 37°C y
agregue a la cámara solución Tyrode fría. Anote la temperatura del interior de la cámara
y siga registrando hasta que la temperatura de la cámara vuelva a 37°C.
Temperatura de la solución Tyrode fría: ____________________

Tiempo (min)
Basal 1 2 3 4 5 6 7 8 9
Frecuencia
(contracciones
por minuto)
Fuerza (g)
b) Efecto de sustancias simpaticomiméticas, parasimpaticomiméticas y

parasimpaticolíticas sobre la actividad contráctil
1. Adrenalina. Realice un registro basal de 1 minuto y sin detener el registro agregue

0.2 mL de una solución 1:10 000 de adrenalina a la cámara de órgano aislado. Continúe
registrando durante 3 minutos.
Efecto sobre el tono: ___________________________
Tiempo (min)
Basal 1 2 3
Frecuencia
(contracciones
por minuto)
Fuerza (g)
2. Realice 2 o 3 lavados con solución de Tyrode para que se “restablezca” la actividad

contráctil basal.
99
3. Acetilcolina. Haga un registro basal de 1 minuto y sin detener el registro, adicione
0.2 mL de la solución de acetilcolina 1:10 000 a la cámara de órgano aislado. Continúe
registrando durante 3 minutos o hasta observar efectos sobre la fuerza y la frecuencia
de las contracciones.
Efecto sobre el tono: ___________________________
Tiempo (min)
Basal 1 2 3
Frecuencia
(contracciones
por minuto)
Fuerza (g)

contráctil basal.
5. Atropina y acetilcolina. Realice un registro basal de 1 minuto y, sin detener el

registro, agregue 0.2 mL de una solución de atropina 1:1000 a la cámara de órgano
aislado. Registre durante 1 minuto y después adicione 0.2 mL de acetilcolina. Continúe
registrando durante 3 minutos o hasta observar los efectos sobre la fuerza y la
frecuencia de las contracciones.
Efecto sobre el tono después de atropina: ________________________________________
Efecto sobre el tono con acetilcolina en presencia de atropina: ________________________
Tiempo (min)
Basal 1 2 3 4
Frecuencia
(contracciones
por minuto)
Fuerza (g)

contráctil basal.
c) Efecto de la hipoxia sobre la actividad contráctil

1. Haga un registro basal de 1 minuto. Sin dejar de registrar, suspenda el burbujeo de
aire de la preparación y registre durante 5-10 minutos o hasta que observe un cambio.
Tiempo (min)
Basal 1 2 3 4 5 6 7 8 9
Frecuencia
(contracciones
por minuto)
Fuerza (g)
100
Determine, para cada experiencia, la frecuencia (contracciones por minuto) y la fuerza
(en gramos) de las contracciones, así como si hubo o no cambios en el tono con
respecto al registro basal.
Presente una impresión de pantalla del registro experimental de cada experiencia,
(debe apreciarse tanto la escala del eje de las X como del eje de las Y) en la que se
pueda observar:
a) Un fragmento del registro basal.
b) Los minutos de registro que siguieron al manejo experimental.
c) Las mediciones de las tablas de datos asociadas al basal o a su minuto
correspondiente, bien sea en valores reales o en porcentaje del basal.
d) Asocie a las imágenes gráficas en el que se observen los cambios en fuerza o
frecuencia con respecto al tiempo.
Realice un gráfico-resumen en el que se considere la fuerza de contracción del basal
como el 100% y las modificaciones en este porcentaje (aumento o disminución)
ocurridos para cada una de las experiencias. Considere el efecto máximo registrado
para la realización de este gráfico. Si hubo cambios importantes en frecuencia de
contracción y en el tono, elabore también los gráficos de porcentaje de respuesta con
respecto al basal.
APÉNDICE. Soluciones fisiológicas utilizadas en esta práctica:

- Adrenalina 1:10 000: Adrenalina …………............ 1 mg
Solución salina 0.9 % ……. 10 mL
- Acetilcolina 1:10 000: Acetilcolina.......................... 1 mg
Solución salina 0.9 % ….... 10 mL
- Atropina 1:1000: Sulfato de atropina ………... 1 mg
Solución salina 0.9 % ……... 1 mL
Componentes (g/L) Tyrode

NaCl 8
KCl 0.2
CaCl2 0.2 (0.24)
MgCl2 6H2O 0.1
(0.01-0.05
sin agua)
NaH2PO4 H2O 0.05
(sin agua)
NaHCO3 1
Glucosa 1
* El CaCl2 debe disolverse por separado

101
BIBLIOGRAFÍA
 Berne, R. y Levy, M.; 1992. Fisiología. Ed. Mosby Year Book. Madrid, España,
pp. 352 – 373.
 Eckert, R., Randall, D. y Augustine, G.; 1998. Fisiología Animal. Mecanismos y
adaptaciones. 4a ed. Ed. McGraw-Hill–Interamericana. Madrid, España, pp. 435–
438.
 Ganong, F.W.; 2000. Fisiología Médica.17a. ed. Ed. El Manual Moderno, México,
pp. 89–92; 533–570.
de 2015.
 Stuart, I.F.; 2003. Fisiología Humana. 7ª ed. Ed. McGraw-Hill-Interamericana.
Madrid, España, pp. 364–368.
102
PRÁCTICA 10. PROPIEDADES DEL MÚSCULO LISO
Diagrama de Flujo
103
Notas:
104
APÉNDICE. Calibración del Biopac (MP36)
1. Abra el programa BSL PRO 3.7. En el menú MP36, seleccione: Ajuste adquisición.
2. En la ventana que se abre, debe decir adquirir y añadir usando memoria PC. 100
muestras/segundo en frecuencia de muestreo y 120 minutos en tiempo de adquisición.
Seleccione reajustar.
105
3. En el menú MP36, seleccione ajuste canales. Si el transductor de fuerza se conectó
al canal 1 (CH1), éste aparecerá seleccionado.
4. Dé clic en el botón que tiene un triángulo negro invertido, seleccione fuerza de 0 a 50

gramos o de 0 a 100 gramos (dependiendo de la práctica que vaya a realizar).
106
5. Dé clic en el botón de la llave de tuercas, aparecerá una ventana llamada
“Parámetros del canal de entrada” que tiene un botón “calibrar”, dé clic en él.
6. Se abre la ventana: “Cambiar parámetros”. Con el ganchillo con forma de “S” en el

orificio de 50 o 100 g del transductor de fuerza (dependiendo de la práctica), escriba 0
en la casilla de valor de escala que está frente al botón Cal1. Dé clic en Cal 1.
107
7. Si el paso anterior se realizó de forma adecuada, habrá un cambio en el valor de la
casilla de valor de entrada que está frente al botón Cal 1:
8. Ahora se coloque una pesa de 10 gramos en el ganchillo en forma de “S” y escriba

10 en la casilla de valor de escala que está frente a Cal 2. Dé clic en Cal 2.
108
9. De igual forma, si el paso anterior se realizó de forma adecuada, habrá un cambio en
el valor de la casilla de valor de entrada que está frente al botón Cal 2:
10. Dé clic en OK de todas las ventanas que se han abierto. En el menú Ver, seleccione
Mostrar, y luego Cuadrícula. Dé clic en Inicio.
109
11. Si la calibración se realizó de forma adecuada, aparecerá una línea roja (o de otro
color) que se va “desplazando” sobre el valor de 10 gramos. Dé clic en stop.
12. Para comprobar que la calibración es adecuada, retire la pesa de 10 gramos del
gancho en “S” que está en el transductor de fuerza. Dé clic en Inicio, ahora la línea roja
aparece en el valor de 0. La calibración es adecuada.
110
13. Lo más recomendable ahora es guardar el archivo, si ocurre cualquier imprevisto no
se tendrá que volver a calibrar. Para ello en el menú Archivo, seleccione Guardar como:
14. Guarde el archivo de la siguiente forma: Grupo-equipo-número de práctica- mes y

año (Ejemplo: 4FM1Eq2P6Ago2013). Dé clic en guardar. En la parte superior izquierda
de la ventana aparecerá el nombre que le ha dado al archivo con la extensión .acq.
15. El equipo está calibrado y listo para llevar a cabo sus registros.
111

Manual Laboratorio Fisiología Celular IPN

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INSTITUTO POLITÉCNICO NACIONAL

ESCUELA NACIONAL DE CIENCIAS

Responsable de la 3ª edición: M. en C. Ana Lilia Gutiérrez Lozano

4. Cada equipo deberá tener: a) dos franelas de 50 x 50 centímetros, b) equipo de

6. No se permite la ingesta de alimentos durante la estancia en el laboratorio.

7. El laboratorio deberá quedar limpio al terminar la sesión práctica: mesa limpia,

8. El material roto, extraviado o descompuesto deberá reponerse a la mayor brevedad,

MATERIAL (por equipo)

Figura 1. Sujeción recomendada de la rata.

Figura 2. Administración intraperitoneal.

* Vía intraperitoneal (IP)

* Vía subcutánea (SC)

* Vía intraperitoneal (IP)

* Vía subcutánea (SC)

Temperatura colonal (°C)

Temperatura colonal (°C)

Temperatura oral (°C)

Temperatura colonal (°C)

Temperatura colonal (°C)

Temperatura oral (°C)

APÉNDICE: Solución fisiológica utilizada en esta práctica:

CARTA DE CONSENTIMIENTO INFORMADO

Me han sido explicados claramente la justificación, los objetivos, los beneficios y

Nombre del participante: __________________________________________________

Firma del participante: ____________________________________________________

Nombre del profesor responsable: __________________________________________

Firma del profesor responsable: ____________________________________________

Nombre y firma Testigo 1:

A usted se le está invitando a participar en esta práctica de laboratorio. Antes de

Justificación. En esta práctica de laboratorio se someterá a prueba la variable

NOTAS ACLARATORIAS: Es importante que al voluntario le queden claros los

Concentración hemolizante (mM)

Osmolaridad hemolizante (mOsm/L)

Tiempo de hemólisis (s)

CARTA DE CONSENTIMIENTO INFORMADO

Me han sido explicados claramente la justificación, los objetivos, los beneficios y

Nombre del participante: __________________________________________________

Firma del participante: ____________________________________________________

Nombre del profesor responsable: __________________________________________

Firma del profesor responsable: ____________________________________________

Nombre y firma Testigo 1:

A usted se le está invitando a participar en esta práctica de laboratorio. Antes de

Justificación. En esta práctica de laboratorio se comprenderá cómo la osmolaridad de

Procedimientos a utilizar. Extracción de sangre por punción venosa o piquete con

Eion= Potencial de equilibrio electroquímico (Voltios)

𝑅𝑇 𝑃𝑁𝑎 [𝑁𝑎]𝑒 + 𝑃𝐾 [𝐾]𝑒 + 𝑃𝐶𝑙 [𝐶𝑙]𝑖

Em= Potencial de membrana (Voltios)

Otro factor importante para el mantenimiento del potencial de membrana es el

[K+]e [K+]i log [K+]e / [K+]i Vm teórico (mV) Vm práctico

II. Potencial de lesión (músculo gastrocnemio de rana)

Figura 4. Decapitación y desmedulación de rana toro.

Figura 5. Disección del músculo gastrocnemio de rana.

Figura 6. Montaje del músculo gastrocnemio de rana lesionado y colocación de electrodos.

7. Conecte los electrodos de plata al multímetro digital (electrodo de medición al orificio

Figura 7. Disposición de los electrodos de calomel.

APÉNDICE. Soluciones fisiológicas utilizadas en esta práctica:

Componentes (g/L) Ringer LIC

Figura 8. Disposición de electrodos de estimulación y registro en un fragmento sellado de axón

2. Inicie el programa HHsim y localice en la pantalla principal los controles que se

Corriente (nA) Duración (ms) Valor de reobase (mV):

III. Suma temporal (estímulos subumbrales)

V. Aumento o disminución de concentraciones iónicas extracelulares