INSTRUMENTOS PARA MEDIR POTENCIAL

Instrumento de lectura, RM

electrodo electrodo
indicador referencia

Celda, Rs
Celda de dos electrodos: La corriente de la celda pasa a través de ambos
electrodos (referencia y trabajo).
• El potenciometro debe tener una alta resistencia con respecto a la
resistencia de la celda. Corriente a través de la celda < 10-10 A
EIND = Ecelda -Eref - iR 0

* Medidas potenciometricas: i = 0 1
 Ejemplo:
Es =0.8 V Rs=20 MW
ES = IRS + IRM

0.8
I  6.67x10 A
9

(20  100)x10
6

RM=100 MW ELectura= I.R = 0.667 V

0.667 - 0.8 si RM=102 x RS = 102 x 20 = 2000 MW

%error  x100  -17%
0.8

0.8 0.792  0.8

I  4.0x10 -10 A %error  x100  1.0%
(20  2000)x10 6
0.8

La resistencia interna de los instrumentos de lectura

debe ser muy grande respecto a la celda

2
 Medición de potenciales de celda

Celda de tres electrodos: La corriente de la celda pasa a través del

electrodo de trabajo (indicador) y el electrodo auxiliar (contra-
electrodo), mientras que el potencial del electrodo de trabajo se
mide con respecto al electrodo de referencia.
iR = 0 (a través del electrodo de referencia y del voltímetro)

3
2) Celdas electroanalíticas:

A) Celdas de tres electrodos para voltamperometría

4
5
B) Celda para voltametría (Polarografía) y titulaciones
amperometricas.

6
C) Celda para electrólisis y titulaciones columbimetricas

7
D) Celda de flujo y detector electroquímico

8
E) Celda para muestras gaseosas electroactivas

9
F) Celda de tres electrodos para espectroelectroquimica

10
Espectroelectroquimica de polímeros conductores

11
12
H) Celda para ESR-electroquimica

13
14
15
16
I) Balanza electroquimica de cuarzo (EQCM)
Ecuacion de
Sauerbrey

Df=-KDm
Medición de masas

17
18
Estudios con la EQCM: Movimiento de iones cuando el polímero se oxida y
reduce consecutivamente (reversibilidad y estabilidad).

19
20
21
 Medidas Potenciométricas Directas
• Comparación del potencial desarrollado por el electrodo indicador en la solución
problema con el potencial obtenido con una solución estándar.
* Medición rápida y simple (sin tratamiento previo de la muestra)
* ISE Selectividad

Ecelda = EIND - EREF + Ej

EIND = K - 0.0592log 1/aM+2 = K - 0.0592 pM

n n
pM = n(- Ecelda + EREF - Ej - K)/0.0592

pM = n(- Ecelda - K´)/0.0592 Cationes M+n

pX = n(Ecelda - K´)/0.0592 Aniones X-n

* K´ se obtiene con soluciones estándar del analito.

* Error inherente: suposición de que K´ permanece constante entre

el estándar y la solución problema. 22
 MEDIDA POTENCIOMÉTRICA DIRECTA (cont.)

• Previamente se debe de calcular K con una o

varias soluciones estándar
• Se supone que K no cambia con el analito de la
muestra problema

Ventajas y desventajas del calibrado directo

• Simplicidad
• Velocidad
• Control continuo de pX o PA
• Incertidumbre en Ej
• Resultados en términos de actividad
23
 MEDIDA POTENCIOMÉTRICA DIRECTA (cont.)

K no permanece constante entre el calibrado y la

determinación del analito

Electrolitos
muestra
 Electrolitos solución de
calibración

(DaX/aX)x100 = -3.9x103.n.DK = % error

Error relativo
en la actividad Imprecisión en K

•Para una imprecisión de 0.001 V en K  error del 4 %

24
 CURVAS DE CALIBRACIÓN

Condición : la composición iónica de los estándares debe ser

aproximadamente igual a la de la muestra

Solución: Saturar tanto las muestras como los estándares con un

exceso de electrolito inerte

Ecelda

Emuestra

pion (estándar)
pion (muestra) 25
 METODO DE ADICIÓN DE ESTÁNDAR

Con el método de adición de estándar se corrigen los

efectos de matriz

Solvente
Estándar
Muestra
C0 S1 S2 S3 S4

Ecelda

Concentración de la
muestra diluida

C0 S1 S2 S3 S4
pion (estándar) 26
 VALORACIONES POTENCIOMÉTRICAS
• Métodos para establecer puntos de equivalencia en una
valoración o titulación

Ce4+ + Fe2+  Ce3+ + Fe3+

Ecel

Punto equivalencia

Volumen solución valorante

(Ce4+)
27
 Valoraciones Potenciométricas
A) Acido-Base

28
B) Precipitación

29
C) Oxido-reducción

30
 Curvas Diferenciales
* Mayor precisión en la detección del punto de equivalencia

31
 Voltamperometria
La concentración del analito se obtiene a partir de medidas de
intensidad de corriente en función del potencial aplicado en
condiciones que favorecen la polarización por concentración de electrodo
de trabajo C=KI

32
 Voltamperometría
• Se desarrollo a partir de la Polarografía de Heyrovsky
(electrodo de gotas de mercurio, DME).
Aplicaciones:
1) Estudios fundamentales de los procesos de oxidación y
reducción en diversos medios (inorgánicos, orgánicos y
bioquímicos).
2) Procesos de absorción sobre superficies electródicas.
3) Mecanismos de transferencia de electrones en
superficies de electrodos modificados
4) Determinación de iones inorgánicos y especies
orgánicas.
5) Métodos voltamperometricos modernos (mayor
sensibilidad y selectividad:
– Voltametría de impulsos
– Voltametría de onda cuadrada
– Voltametría cíclica
– Voltametría de alta velocidad (microelectrodos)
33
Celda de tres electrodos para voltametria

34
 VOLTAMPEROMETRÍA

Señal excitación Respuesta

(E aplicado) (Intensidad de
corriente)
(-)
• Voltamperometría
 Barrido hidrodinámica
E
lineal
• Polarografía

tiempo
(-)
• Polarografía
 Impulso diferencial de
E diferencial impulsos
50 ms

35
tiempo
 Señal excitación Respuesta
(E aplicado) (Intensidad de
corriente)

(-)

E  Onda • Voltamperometría
50 ms
cuadrada de onda cuadrada

tiempo

(-)
 Onda • Voltamperometría
triangular cíclica
E

tiempo 36
 Tipos de voltamperogramas
1) Polarograma de barrido lineal

2) Voltamperograma de pulsos

37
 VOLTAMPEROMETRÍA DE BARRIDO LINEAL

• Se aplica un cambio de potencial de 2-5 mV/seg

• Se obtiene el voltamperograma (gráfica de I vs t)
• Se utiliza una celda con tres electrodos:

Electrodo auxiliar

Electrodo de
referencia

Microelectrodo de trabajo
• Se varia el potencial con el tiempo
• Pequeños
Tendencia a ser
polarizado
38
 MICROELECTRODOS
Microelectrodos Microelectrodo de gota Microelectrodo de gota
planos: colgante de Hg (HMDE) de Hg (DME)

Teflon

Gota nueva cada 2-6 s

Disco Au, Pt, C
conductor
39
 MICROELECTRODOS

Los electrodos de mercurio se prefieren porque:

• Se puede utilizar un amplio intervalo de potenciales negativos

ya que presenta un alto sobrepotencial (H2)

• Se puede tener una superficie limpia (electrodo de gota de

mercurio), la superficie se renueva continuamente

• Reducción reversible de muchos iones metálicos a amalgamas

40
 VOLTAMPEROGRAMA DE BARRIDO LINEAL

Proceso: A + ne  P, en microelectrodo de película de Hg

+80
Z

I, A +60

+40 Y IL Intensidad
limite
Corrientes
catódicas (+) +20 IL/2
X
0

-20
Corrientes 0 -0.2 -0.4 -0.6 -0.8
anódicas (-) Eapl, V
E1/2 (potencial de media onda) 41
VOLTAMPEROGRAMA DE BARRIDO LINEAL

Corriente Limite, IL:

Se presenta cuando se limita la velocidad de llegada del reactivo
a la superficie por fenómenos de transporte de masa

IL= KCA

CA  Concentración del analito

Potencial de media onda, E1/2:

Potencial correspondiente a IL/2. Está relacionado con el potencial
estándar, se puede utilizar para fines de identificación

42
 VOLTAMPEROMETRÍA HIDRODINÁMICA

La solución o el electrodo se mantiene en movimiento

• Agitación de la solución con el microelectrodo fijo
• Microelectrodo gira a gran velocidad
• Flujo de la solución por un tubo que contiene el
microelectrodo (e.g. HPLC)

Transporte del analito al electrodo:

• Migración (campo eléctrico), se evita con electrolíto soporte.
La masa transportada es independiente del Eapl
• Convección, agitación o vibración
• Difusión, diferencia de concentración
43
 A + ne  P

CA  Concentración inicial del analito

CP  Concentración inicial del producto = 0

Es una reacción reversible  Ecuación de Nernst

Concentración en la
superficie del electrodo


o
0.0592 C
Eapl  EoA  log oP   Eref
n CA
entre microelectrodo y en la capa delgada de
referencia solución en el electrodo
•CA no cambia en el seno de la solución
44
• CP sigue siendo cero
Análisis voltamperométrico sin agitación de la solución
• Transporte sólo por difusión

(-) CoA  0
Empieza difusión de
A desde el seno de la
Eapl solución al electrodo

 

dC A
Iα
dx

Eapl=0 *I disminuye con el tiempo

*no es conveniente

45
Análisis voltamperométrico con agitación de la disolución

Electrodo Capa de difusión de

 Nernst
Flujo
laminar

Flujo Seno de la
turbulento solución

• Flujo turbulento: Movimiento sin modelo regular

• Flujo laminar: Deslizamiento paralelo del líquido respecto al
electrodo
• Capa de difusión de Nernst: La velocidad de flujo tiende a
cero (por fricción liq-electrodo)
46
Perfiles de concentración electrodo/disolución en una electrolisis
(A + ne  P) en disolución agitada

La corriente en cualquier momento está determinada por:

• Velocidad de transporte de A por convección hasta la
capa de difusión
• Velocidad de transporte desde el límite de la capa
hasta la superficie del electrodo 47
 Para un electrodo plano:
 C 
I  nFAD  
A

 x 
A

nFAD
I  A
C kC
L
 A A A

N= moles de e-
F= número de Faraday
A= área del electrodo, cm2
DA= coeficiente de difusión de A, cm2/s
CA= concentración de A, mol/cm3
= capa de difusión de Nernst 48
Cuando I=IL/2  Eapl=E1/2

0.0592 I
E E  log
I I
apl 1/ 2
n L

E1/2 E

Si los coeficientes de difusión de A y de P son similares:

E1/ 2  E Ao  Eref

49
 Sistemas Fe(II), Fe(III) Reducción del oxígeno

2e

2e

Sin oxígeno

(a) Solo Fe3+, Fe3+ + 1e  Fe2+

Proceso global:
(b) [Fe3+]=[Fe2+]
O2 + 4H+ + 4e  2H2O
(c) Solo Fe2+, Fe2+  Fe3+ + 1e
50
 Aplicaciones de la voltametría hidrodinámica
• Análisis y detección de especies en columnas cromatográficas
• Análisis de oxígeno, O2, glucosa, lactosa, sucrosa.
• Puntos finales en valoraciones culombimétricas y volumétricas
• Estudio de procesos electroquímicos
Sensor para oxígeno (Clark)

Ag + Cl-  AgCl (s) + e (anódo)

O2 + 4H+ + 4e  2H2O (cátodo)

51
Análisis de glucosa con enzimas inmovilizadas

Glucosa + O2 Enzima H2O2 + ácido glucónico

Mediador redox: H2O2 + 2OH-  O2 + H2O + 2e

I  [glucosa]

electrodos Capa permeable a H2O2

Enzima inmovilizada

Capa permeable a glucosa

Medio (muestra) 52
Vitamina C hidrosoluble

Sufre procesos de oxidación fácilmente por factores:

•Luz
•Aire
•Temperatura
•Enzimas
•pH .
•[ ] azucares reductores
•Fuerza iónica
•Metales como el hierro y cobre

Vitamina C es una molécula nutricional

indispensable y determina la calidad alimento
• Volumetría: Uno de los métodos mas utilizados, por
costos y facilidad de transformación de datos.

• titulación con 2,6 diclorofenol indofenol.

• Determinación subjetiva y largo tiempos de

análisis por muestra (30 min)

Técnicas Instrumentales

• Cromatografía (HPLC)

• Poco tiempo de análisis, altos costos de implementos

• Receptor:
Ascorbato oxidasa
Peroxidasa de rábano

• Matriz de inmovilización
Gelatina (Bloom 200-250)
Polymaleimidostyrene
Poly(3,4-ethylenedioxy-
thiophene)-lauroyl-
sarcosinate (PEDOT-SLS).

•Electrodeposición,
atrapamiento
entrecruzamiento, etc.
 Variable que afectan la Actividad enzimática:

•pH, temperatura, concentración de enzima, fuerza iónica, disponibilidad

de cofactores

•Matriz y tipo de inmovilización

 Concentración de la enzima.
8.85 mg AO 5.9 mg AO

-Mejor respuesta
-Afecta las características físicas de
detección, firmeza y viscosidad
2.95 mg AO

Rango: 5.0 x10-5 y 1.2 x10-3 M

Los efectos en la estabilidad del biosensor dependen

de la pureza de la enzima, sistema de inmovilización
tiempo de uso y cantidad de uso.

200 usos en 2 meses reducen la actividad enzimática en 85%

Variables que afectan la actividad enzimatica: espesor de la matriz, pH,
temperatura y concentración del buffer PBS
 Determinación amperométrica Detección voltamétrica

a- electrodo sin Vit. C

b- electrodo con Vit.C
c- electrodo modificado sin Vit.C
d- electrodo modificado con Vit.C
Limite de detección 0.464 μM Limite de detección 56.1 μM

TIEMPO DE RESPUESTA: 15 SEGUNDOS

Las pocas interferencias ocurres en presencia de moléculas
similares al analito.
 Biosensor a base de peroxidasa Biosensor a base de ascorbato oxidasa en gelatina
Akyilmaz & Dinc¸kaya, 1999. Talanta 50, 87–93
Volotovsky & Kim, 1998. Analytica Chimica Acta 359, 143-148

Biosensor a base de ascorbato oxidasa en PEDOT-SL Wen, et al. 2012. Journal of Electroanal. Chem.
Chauhan et al. 2010. Journal of Molecular Catalysis B: Enzymatic 67, 66–71
Wen, et al. 2012
Volotovsky & Kim, 1998

Wang, et al. 2008. Talanta 74 1681–1685

Los valores de vitamina C para repollo, tomate, pepino y nabo son bajos.

Existe diferencias en los valores obtenidos por diferente metodología

Wen, et al. 2012
 Chauhan et al. 2010

Se ha reportado un gran contenido de acido

ascórbico en frutas tropicales exóticas como
Guayaba, marañon, copoazu
Volotovsky, V. & Kim, N. (1998). Ascorbic acid determination with an ion-sensitive field effect
transistor-based peroxidase biosensor. Analytica Chimica Acta 359, 143-148

Akyilmaz, E. & Dinckaya, E. (1999). A new enzyme electrode based on ascorbate oxidase
immobilized in gelatin for specific determination of L-ascorbic acid. Talanta 50, 87–93

Mello, L.& Kubota, L. (2007). Biosensors as a tool for the antioxidant status evaluation. Talanta
72, 335–348

Wang, X., Watanabe, H. & Uchiyama, S. (2008) Amperometric l-ascorbic acid biosensors
equipped with enzyme micelle membrane. Talanta 74 1681–1685

Chauhan, N., Dahiya, T. & Pundir, P., (2010). Fabrication of an amperometric ascorbate
biosensor using egg shell membrane bound Lagenaria siceraria fruit ascorbate oxidase. Journal
of Molecular Catalysis B: Enzymatic 67, 66–71

Wen, Y., Xu, J., Liu, M., Li, D., Lu, L., Yue, R. & He, H. (2012) A vitamin C electrochemical
biosensor based on one-step immobilization of ascorbate oxidase in the biocompatible
conducting poly(3,4-ethylenedioxythiophene)- lauroylsarcosinate film for agricultural
application in crops. Journal of Electroanalytical Chemistry (April 2012)
TECNOLOGÍA DE IMPRESIÓN MOLECULAR SOBRE POLÍMEROS
CONDUCTORES, MIPS

Tiwari, M.P. et al. Molecularly imprinted polymer based enantioselective

sensing devices: A review., 2015, 853(1),1-18

69
 APLICACIONES ANALÍTICAS DE LOS MIPS

• Fases estacionarias en cromatografía

• Purificación de muestras

Ejemplo: Extracción de fase sólida

• Sensores y Multisensores Químicos

Chip de multisensores

70
Ventajas de construir sensores basados en MIPS con
polipirrol para la determinación de dopamina

• Fácil de preparar
• Biocompatible

• Estabilidad química y mecánica

Estructura de la cadena polimérica de polipirrol

71
 DETERMINACION DE MOLÉCULAS DE INTERÉS
BIOQUÍMICO
LA IMPORTANCIA BIOLÓGICA DE LA DOPAMINA
La dopamina (DA) juego un papel crucial en el funcionamiento del sistema neuronal
humano, afecta la capacidad de aprendizaje, la memoria y el comportamiento.

Dopamina, DA

Muratova, I. et. al. Voltammetric vs. Potentiometric Sensing of Dopamine:

Advantages and Disadvantages, Novel Cell Designs, Fundamental Limitations and
Promising Options, 2015, 207(PB),900-906. 72
VENTAJAS DE LOS MIPS, FRENTE A OTROS MÉTODOS ANALÍTICOS

Técnicas Técnicas electroquímicas combinadas

Cromatogràficas con sensores MIPs

Alta sensibilidad , Buena sensibilidad,

Exactitud y exactitud y
precisión precisión

Necesidad de Fácil
personal calificado Operación

Costosos Económicos

Largos tiempo Tiempo de medición

de análisis cortos
73
 INSTRUMENTACION PARA UTILIZAR LA TECNOLOGIA MIPS

• CAJA AMPLIFICADOR DE SEÑAL, • CELDA CONVENCIONAL DE 3

CHI200B
• BIPOTENCIOSTATO, CH 760E
ELECTRODOS:
a) Microelectrodo de oro (Ø=25 μM)
b) Electrodo de Ag/AgCl Sat. 0.3 M KCl
c) Alambre de platino
74
METODOLOGIA EXPERIMENTAL PARA PREPARAR MIPs
Eliminación Autoensamblaje Entrecruzamiento y
de partículas extracción de la
plantilla

MECÁNICA SOLUCIÓN DE SOLUCIÓN DE

• Pulimento POLIMERIZACIÓN SOBREOXIDACIÓN
• Proceso de • 0.05 mM DA • 0.1 M NaOH
sonicación • PBS (0.1 M, pH=7.0)
• 0.1 M KNO3
• 0.1 M PY
CONDICIONES CONDICIONES
ELECTROQUÍMICAS ELECTROQUÍMICAS
• 0.8 V Vs. Ag/Ag/AgCl • 1.0 V Vs Ag/Ag/AgCl
durante 120 segundos durante 80 segundos
Nota: Los electrodos N-MIPs se prepararon siguiendo el procedimiento anterior sin
utilizar la plantilla molecular, DA. 75
METODOLOGIA EXPERIMENTAL PARA PREPARAR MIPs

SOLUCIÓN EVALUADA SOLUCIÓNES EVALUADAS

• 60 μM DA a pH:7.0 • 5-100 μM DA a pH 7.0
controlado. controlado.

CONDICIONES CONDICIONES
ELECTROQUÍMICAS ELECTROQUÍMICAS

Técnica: CV Técnica: DPV

Rango Potencial: 0.0-4.0 V Rango Potencial: 0.0-4.0 V
No. Ciclos: 4 Amplitud de pulso (V): 0.05
Velocidad de barrido (mV/S): 80 Sensibilidad (V): 1xE-9

76
 OPTIMIZACIÓN DE LAS CONDICIONES DE SÍNTESIS

OBJETIVO: Estudiar la influencia de la concentración de monómero en la respuesta del sensor.

SOLUCIÓN DE SÍNTESIS
• 2.0 mM DA
• PBS (0.1 M pH=7.0)
• 0.1 M KNO3
• Concentración de monómero
variable entre 0.02-0.2M

SOLUCIÓN DE ANALISIS
• 60 µM DA a pH : 7.0 controlado

Efecto de la concentración de monómero

sobre la respuesta del sensor

77
 CONDICIONES DE SÍNTESIS OPTIMIZADAS

Condición de Rango Condiciones

síntesis a mejorar optimas
encontradas
Tiempo de 40-140 120
polimerización(S)
Tiempo de 40-140 80
sobreoxidación(S)
Concentración de 0.05-2.5 0.05
molécula
plantilla(mM)
Concentración de 0.02-0.2 0.1
monómero(M) Comparación de la sensibilidad del
sensor MIP a medida que se optimizan
las condiciones de síntesis

78
 SÍNTESIS Y CARACTERIZACIÓN DEL SENSOR MIP

OBJETIVO: Corroborar como las modificaciones por electrodeposición mejoran notablemente

la respuesta amperometrica del sensor.

“Utilizando las condiciones optimas de síntesis”

SOLUCIÓN DE
SÍNTESIS
• 0.05 mM DA
• PBS (0.1 M pH=7.0)
• 0.1 M KNO3
• 0.1 M PY

SOLUCIÓN DE
ANÀLISIS
• 60 µM DA a pH: 7.0
Controlado
Voltamogramas cíclicos para diferentes etapas de síntesis
del MIP (80 mV/S)

“Se evidencia la importancia de la sobreoxidación del polipirrol en la síntesis del sensor”

79
COMPARACIÓN DE LA RESPUESTA ELECTROQUIMICA DE LOSSENSORES
MIP Vs. N-MIP

OBJETIVO: Evidenciar del reconocimiento molecular

Reacción de oxidación de la dopamina.

Dopamina Dopamina Quinona

El polímero impreso
molecularmente sobre la superficie
del microelectrodo de oro,
incrementa la capacidad de
Voltamogramas de pulso diferencial usando el reconocimiento molecular del
electrodo MIP, N-MIP y Au (60 μM Da a pH=7.0)
sensor”

Lv, X. et. Al. Two-Electron Oxidation of Dopamine Controlled by

Surface Modification of Few-Layer Graphene, 2015, 180, 43–52. 80
“Se observación un aumento de la sensibilidad del sensor debido a la
formación de cavidades moleculares en la película de polipirrol
sobreoxidado ”

Electropolimerización Sobreoxidación

Representación esquemática de la impresión molecular de

Dopamina en el sensor MIP

Waltman, R. Electrically Conducting Polymers: A Review of the

Electropolymerization Reaction, of the Effects of Chemical Structure on Polymer
Film Properties, and of Applications towards Technology, 1986, 64, 76–95. 81
 COMPORTAMIENTO DE LA INTERFACE MICROELECTRODO/DISOLUCIÓN
EN EL SENSOR MIP

OBJETIVO: Investigar el efecto de la velocidad de barrido sobre la respuesta electroquímica

Parámetros calculados:

ΔEp= Epa-Epc= 31 mV
Ipa/Ipc= 1.31

SUGIERE UNA REACCIÓN QUÍMICA

REVERSIBLE CON VELOCIDAD DE
TRANSFERENCIA ELECTRÓNICA
RÁPIDA

Voltamogramas cíclicos para el sensor MIP

a diferentes velocidades de barrido.
82
COMPORTAMIENTO DE LA INTERFACE MICROELECTRODO/DISOLUCIÓN
EN EL SENSOR MIP

OBJETIVO: Investigar el efecto de la velocidad de barrido sobre la respuesta electroquímica

Ec. de Randles-Sevcik.

“LA CORRIENTE LÍMITE DE

OXIDACIÓN ES CONTROLADA
POR DIFUSIÓN”

Curva de corriente (Ip) Vs. Raíz cuadrada de la

Velocidad de barrido.
83
 RESPUESTA AMPEROMÉTRICA DEL SENSOR MIP VARIANDO EL pH DEL
MEDIO
OBJETIVO: Evaluar el comportamiento electródico de la dopamina en función del pH del
medio

Mecanismo de desprotonación de la molécula de Dopamina

 A pH < 7.5 la molécula de Dopamina

presenta una estructura electropositiva.

 Al disminuir el pH la concentración de
Dopamina electropositiva aumenta,
incrementando la señal analítica.

Sanchez, A. et. Al. Spectrophotometric Study on the

Efecto de la variación del pH de las soluciones
analíticas sobre la respuesta electroquímica del
sensor MIP
Stability of Dopamine and the Determination of Its
Acidity Constants., 2003, 59 (13), 3193–3203.
84
RESPUESTA AMPEROMÉTRICA DEL SENSOR MIP FRENTE A INTERFERENTES

Los interferentes como el acido ascórbico (AA)son uno de los principales

problemas para la detección amperometrica de Dopamina

Estructura molecular de
acido ascórbico, AA

Pueden ser oxidados a potenciales muy similares resultando en

1 solapamiento de la respuesta amperometrica.

2 Están presentes en las muestras biológicas en concentraciones

similares a la Dopamina.

Jaiswal, P. et. al. Effect of Surfactants on the Dissociation Constants of Ascorbic and Maleic Acids.
2005, 46, 45–51.
85
 Evaluacion de la selectividad del sensor
MIP
Corriente, Ipa ( A)

La respuesta
electroquímica del AA
en el sensor MIP es muy
poco sensible

E/V Vs. Ag/ AgCl

Respuesta electroquímica del sensor

manteniendo constante la concentración de
AA y variando la concentración de DA a
pH = 7.0 controlado.

86
 Evaluación de la selectividad del sensor MIP

No se evidencia incremento
lineal al aumentar su
concentración

Respuesta electroquímica del sensor manteniendo

constante la concentración de DA y variando la
concentración de AA a pH = 7.0 controlado.

87
RESPUESTA AMPEROMÉTRICA PARA DOPAMINA USANDO
EL SENSOR MIP

Características del sensor MIP

LDD(μM) 1.9
“Los resultados demuestran que
REPETIBILIDAD (%RSD) 4.7
es posible dar una aplicación
REPRODUCIBILIDAD (%RSD) 10.9 práctica al sensor MIP”
88
 Métodos electroquímicos desarrollados para la
determinación de Dopamina
Método Rango de calibración(mol/L) LDD (mol/L) Referencias

Electrodo basado en electroforésis M.J. Schöning, et. al.(2005)

2.0x10-5-10.0 x10-5 2.0 x10-6
capilar, PDMS/ Vidrio
MIPs/ITO 2.0x10-6- 8.0x10-4 2.0x 10-6 N. Gao, et. al. (2007)
M. Fabregat, et. al. (2010)
Polímeros impresos nano estructurados 1.0x10-2- 2.0 x10-2 1.5 x10-6
Polímeros impresos molecularmente W. Song, et. al. (2010)
5x10-7- 4.0 x10-5 1.3x 10-7
electro sintetizados
Polímero impreso electropolimerizado de J. Li, et. al. (2009)
2.0 x10-8- 2.5x10-7 1.98x10-9
o-aminofenol
X. Kan, et. al. (2012)
MIPs/MWNTs/GCE 6.25x10-7 -1.0 x10-4 6.0 x10-8
Electrodo de carbono vítreo modificado
5.0x10-5- 5.0x10-4 4.72x10-6 P. Chen, et. al. (2009)
con MWCNTs, quercetina, y Nafión

Electrodo compuesto Tirosinasa-SWNT-

5.0x10-6-5.0 x10-5 5.0x10-6 K. Min, et. al.(2009)
PPy

Polímero impreso molecularmente ,

5.0x10-6- 1.0 x10-4 1.9x10-6 Este Trabajo(2016)
OPPy-DA/Au

89
 Valoraciones amperométricas
• Se utiliza voltamperometría hidrodinámica para estimar el punto
de equivalencia en una valoración

I I I

volumen volumen volumen

• Analito reacciona en el • Analito no reacciona • Analito reacciona

electrodo en el electrodo en el electrodo
• Reactivo no reacciona • Reactivo reacciona • Reactivo reacciona
en el electrodo en el electrodo en el electrodo90
 Valoraciones amperométricas

Ejemplo:

Analitos Valorante
Fenoles
Aminas aromáticas Cuando se agota el analito, el
exceso de Br2 se reduce en el
Hidrazina + Br2 electrodo y hay aumento en la
As3+ corriente

Sb3+

• Generado culombimétricamente
Fuente de Br2
• BrO3- + 5Br- +6H+  2Br2 + 3H2O
91
Electrodos rotatorios

iL=0.620nFADoxg1/6w1/2[Ox]

g=viscosidad de la solución
w=velocidad angular

* Estudios cinéticos
* Mecanismos de reacción

92
 Electrodo de anillo-disco rotatorio
• La especie reactiva se genera en el disco es barrida hacia el
anillo donde se detecta amperometricamente.

93
 Polarografía Clásica
• Técnica voltamperométrica donde se utiliza un electrodo de gota
de mercurio, no se debe hacer con agitación.

IL  * Controladas sólo por difusión.

* Menor magnitud que en voltametría hidrodinámica.

• Gotas  I tiene fluctuaciones (velocidad de goteo).

• I aumenta con el área de la gota y I=0 cuando la gota se desprende.
• Iprom e Imax permanecen constantes si la velocidad de goteo es
reproducible.
t
Imax

I (A)
Iprom.=6/7 Imax

94
tiempo
 Id=corriente de difusión:
id= K[analito]

Ecuacion de Cottrell (electrodo plano): i = nFAD1/2C

p1/2t1/2

Área gota de Hg: V= 4/3pr3 = mt/d A= (4p)1/332/3m2/3t2/3d-2/3

Id = 706nD1/2m2/3t1/6C=KC Ecuacion de Ilkovic 95

 POLAROGRAFÍA

Id  [analito]

Id(max) =706nD1/2m2/3t1/6C Ecuación de Ilkovic

• t, tiempo de gota,s • D, coeficiente de difusión cm2/s

• m, masa de gota/seg • C, concentración analito, mol/cm3 96
 Ventajas del electrodo de gotas de mercurio
• Id es constante y reproducible instantáneamente después de la
aplicación del potencial (renovación de la superficie con cada gota).
• dC/dX durante la formación de la gota de mercurio
• Elevado sobrepotencial para la reducción de H+
2H+ + 2e H2 (no ocurre)
Es posible la determinación de metales en soluciones acidas.

97
Determinación de Kf de un complejo con polarografía
Metal no acomplejado
I Metal acomplejado
Mn+ + Hg +ne  M(Hg)
Desplazamiento a Mn+ + xA-  MAx(n-x)+
potenciales más (-)

(-) Eapl vs ESC

0.0592 0.0592
E  E   logK  xlogC
n n
1/2 C 1/2 f L

Y = b + m x

CL= concentración molar del ligando

98
Desventajas del electrodo de gotas de mercurio

Intensidad residual (corriente faradaica):

 Se genera por la reducción de trazas de impurezas en el blanco:

• O2 disuelto
• Cationes de metales pesados del agua
• Impurezas en la sal (electrolito soporte)

 También se puede generar por la intensidad de carga o de

condensador (corriente no faradaica):

• Por el flujo de electrones que carga las gotas

respecto a la disolución

99
 Limitaciones de DME
• Facilidad de oxidación del Hg: limitación en el uso del electrodo
para determinaciones anódicas (Emax = 0.4 V vs SCE).

• Corrientes no faradaicas limitan la sensibilidad (LD < 10-5)

• En presencia de iones precipitantes o acomplejantes del Hg+2 la

oxidación del Hg ocurre a potenciales menores:
2Hg + 2Cl- Hg2Cl2 + 2e (E 0 V vs SCE)

• Incomodo de usar (se atasca y Hg es contaminante)

• Se producen máximos de intensidad (se eliminan con agentes

surfactantes (gelatina, triton X-100, rojo de metilo)

100
 POLAROGRAFÍA POR MUESTREO DE CORRIENTE (TAST)

• Se mide la corriente sólo en un periodo antes del final de

vida de la gota ( 5 ms antes).
• Se utiliza un martillo mecánico para desprender la gota.

• Reduce las grandes fluctuaciones debido a la caída de las gotas.

• No mejora mucho la sensibilidad (LD < 10-6 M).
101