Documentos de Académico
Documentos de Profesional
Documentos de Cultura
Cómo fabricar un biorreactor artesanal para la macropropagación de brotes organogénicos de tejidos vegetales...
con componentes de catálogo.
Tecnología en Marcha. Vol. 17 N˚ 1.
92 Vol. 17 Nº 1
biorreactor debe proveer este estímulo,
de forma que, acertadamente, se estará
diseñando un fotobiorreactor.
Finalmente, el objeto de utilizar
componentes de catálogo es primor-
dialmente que esta práctica resulta
mucho más económica que fabricar los
componentes requeridos; además, aun
cuando no muchos comparten esta
opinión, ensamblar, aunque no es una
práctica válida de diseño, sí es una muy
buena práctica correcta de ingeniería,
en su más estricto sentido etimológico:
ingeniar. Figura 1
Fotografía descriptiva etapas del cultivo de
tejidos: a la izquierda, en el frasco Erlemeyer,
El explante una suspensión vegetal; a la derecha, en el
Petri mediano, clusters vegetales en etapa de
Cualquier tejido vegetal que se utilice diferenciación celular; al centro, en el petri
Cualquier tejido
como explante debe ser organogénico pequeño, callo organogénico con brotes de
vegetal que se utilice
en fase germinal. La organogénesis plántulas.
como explante debe
somática se logra vía embriogénesis
ser organogénico en
somática, permitiendo al embrión
fase germinal.
maduro desarrollarse hasta formar descendente que arrastra y revuelca el
tejidos y estructuras especializadas. Lo tejido vegetal, facilitando el despren-
anterior, bajo estímulo lumínico y con dimiento de brotes nuevos.
una correcta y adecuada selección de
reguladores de crecimiento, acorde a las
necesidades metabólicas y fisiológicas El biorreactor
del explante seleccionado.
Consiste en un reactor de levantamiento
por aire híbrido (air lift). La presión de
La macropropagación aire por lo general es proveída por un
Air Lift compresor de aire; pero he encontrado
que es operacionalmente más adecuado
La proliferación de plántulas, carentes un “motor” de pecera, ya que está
de raíces, se dará por el desprendiendo diseñado para operar continuamente.
de brotes en crecimiento, como
consecuencia directa de la turbulencia El difusor de aire es la otra variación de
ejercida sobre los tejidos (brotes), por este híbrido.
efecto de la formación de Edies (Edie Normalmente, el difusor es un plato
bodies), en la superficie de contacto cilíndrico hueco, de acero inoxidable,
entre la columna de burbujeo de aire y con la tapa superior finamente perforada
la base del brote en crecimiento. Con lo y un acceso lateral para la entrada de
anterior, indico que, técnicamente, el aire. Funcionalmente, también resulta
biorreactor utilizado es del tipo air lift; más conveniente un difusor de “pecera”
es decir, de levantamiento por aire, con de piedra pómez. Este difusor suministra
algunas modificaciones, un híbrido. una abundante columna de burbujeo;
Como se observa en la figura 2, la con burbujas de diámetro muy pequeño
columna de burbujeo de aire ocasiona (< 1 mm); lo que genera una gran
un movimiento fluido ascendente- superficie de transferencia de oxígeno
Vol. 17 Nº 1 93
hacia las células (>> kla) con bajos “acuarios”, también se consiguen válvulas
esfuerzos cortantes (T). La formación de adecuadas para la regulación del flujo de
Edies también se favorece en estas aire y el costo es muy económico. Las
condiciones. Adicionalmente, en los mangueras, aunque del mismo diámetro
que el utilizado en “peceras”, deben ser de
plástico autoclavable. Similarmente, el
contenedor, los filtros y otros materiales
requeridos, deben ser autoclavables y
conseguidos a través de catálogo.
Materiales y equipos
El contenedor más adecuado deberá ser
de plástico claro, translúcido y
autoclavable, preferiblemente de boca
ancha. En este sentido se recomienda de
catálogo: la marca Nalgene que posee
botellas de “Carboy” de boca ancha
(83B), en policarbonato (PC), auto-
clavable, de 10 L y 20 L (litros) de
volumen, con un costo aproximado de
$110 y $150, respectivamente. Estas
botellas tienen como aditivo aparte tapas
Figura 2 ventiladas para relleno (fillling-venting
Esquema de un reactor “Air-Lift” o caps), con mangueras de 6” y 30” de
Reactor de Levantamiento por Aire: longitud, de tubo platinum-curado de
este reactor utiliza una columna de silicón (platinum-cured silicone tubing),
finas burbujas de aire para movilizar las ambos autoclavables; utilizaremos la 83B
partículas o células suspendidas en el con dos (2) tubos de silicón de 1/4” de
medio de cultivo.
diámetro y 30” de longitud, con un costo
aproximado de $30.
Las mangueras recomendadas son de la
marca “Tygon” de silicón autoclavable
(Tygon Silicone Tubing), de 1/4” de
diámetro (L/S 25), con un precio
aproximado de $75 por 25 ft (7,6 m).
Los “sostenedores” de los filtros de aire
en línea (in-line filter holders), deben ser
autoclavables y con “pitón” de entrada y
salida de 1/4” de diámetro; en este sentido,
recomiendo un “sostenedor” marca Delrin
para membranas de 25 mm de diámetro
que cuestan aproximadamente $120 el
paquete de 6 unidades. Las membranas de
25 mm de diámetro de teflón (PTFE), son
las más adecuadas para filtrar aire/gas
Figura 3
hasta condición de esterilidad y cuestan
Esquema del Biorreactor Hibrido – Air Lift + Foto-Biorreactor:
corresponde al diseño propuesto para el biorreactor a utilizar para la aproximadamente $65, el paquete de 100
macropropagacion de especies vegetales. unidades de 0,2 µ de poro.
94 Vol. 17 Nº 1
El compresor de aire requerido es una Aplicaciones
“bomba de aire” (air pump), de pecera
En mi experiencia, el biorreactor
de alta capacidad de flujo; digamos, para
funciona adecuadamente y de manera
una pecera de 10 galones o más, este
comprobable en la propagación de
tiene un costo aproximado de $60. El bromeliáceas de ornamentación y
difusor de aire y las válvulas reguladoras plántulas de piña para exportación. En
(2), también son aditivos de pecera y ambas, se puede utilizar el medio básico
cuestan aproximadamente $10 en De Wall con ácido indol acético (IAA,
conjunto. El estímulo lumínico lo por sus siglas en inglés) como regulador
brindarán tres (3) luces fluorescentes del de crecimiento. Este explante genera
tipo “luz de día” (day light), de 25 w a abundantes brotes, que se desprenden
30 w, cuyo costo aproximado es de $60, fácilmente de las plántulas madre, por
incluidos conectores, bases y alambrado. acción de la turbulencia.
El montaje de las luces se debe hacer de
Una aplicación interesante, que aun
forma que queden equidistantes
cuando no ha sido ensayada, y tiene
alrededor del perímetro del biorreactor buenas posibilidades, es la maduración y
(120 °) y una distancia de 2 m a 3 m de desarrollo de esporas de orquídeas, hasta
En mi experiencia,
cuerpo del air lift; con un costo pequeñas plántulas. Estas (las plántulas)
el biorreactor funciona
adecuadamente
aproximado de $30. podrían ser transferidas directamente del
y de manera Como se observa, el costo total es biorreactor al área de enraizamiento y
comprobable considerablemente inferior (20 veces crecimiento.
en la propagación para ser exacto), al de un desarrollo
de bromeliáceas similar con BIT (véase más adelante).
de ornamentación Desarrollos similares
Para instrucciones y consultas sobre el
y plántulas de piña El Centro de Bioplantas en Cuba
montaje, favor contactarme a:
para exportación. desarrolla y vende a través de su página
reinhardt360@msn.com.
web, tecnologías de biorreactores de
inmersión temporal (BIT).
Total 700
Vol. 17 Nº 1 95
Valor del BIT Valor del BIT
(destinado a la producción) (destinado a la investigación)
96 Vol. 17 Nº 1