Prueba de Coombs - NC

Universidad Industrial de Santander
Facultad de Salud
Escuela de Microbiologia
Programa de Microbiología y Bioanálisis
Hematología II
Guía de Laboratorio
Cecilia Salamanca Ojeda
Docentes Martha Lucia Sànchez Jaimes
Ruth Stella Sánchez Florez
PRUEBA DE COOMBS
La Prueba de Coombs permite demostrar la presencia de anticuerpos irregulares mediante el uso de un

segundo anticuerpo, que es una antiglobulina. La Prueba de Coombs directa se utiliza como método
diagnóstico de enfermedades como las anemias hemolíticas, la enfermedad hemolítica del recién nacido
y en las reacciones transfusionales. La Prueba de Coombs indirecta se usa para realizar tipificación de
grupos sanguíneos, pruebas sanguíneas cruzadas y como método de rastreo para evitar reacciones
transfusionales.
La prueba de Coombs directo se utiliza para detectar autoanticuerpos contra los propios glóbulos rojos
(GR) de un individuo. La prueba se realiza agregando directamente el reactivo de Coombs a los
eritrocitos, previamente lavados para eliminar otras proteínas no fijadas a él; una prueba directa positiva
significa que la relación antígeno-anticuerpo ocurrió in vivo, es decir que la fijación del anticuerpo sobre
el antígeno se realizo en el organismo del individuo en estudio. Las indicaciones principales de esta
prueba son: diagnóstico de enfermedades hemolíticas, ictericia o anomalías en la apariencia de los
glóbulos rojos bajo el microscopio, ya que estos anticuerpos algunas veces destruyen los
glóbulosrojos y causan anemia; para investigar reacciones en transfusiones. Parainvestigar la inducción
de drogas en células rojas sensibilizadas, medicamentos (por ejemplo, quinidina, metildopa,
procainamida y otros) que pueden llevar a la producción de estos anticuerpos.
PRUEBA DE COOMBS DIRECTO
Fundamento
Cuando la antiglobulina humana, obtenida generalmente mediante inoculación de animales (conejo, casi
siempre) como suero humano, se pone en presencia de eritrocitos recubiertos por un tipo de anticuerpo
incompleto, se produce aglutinación. Por lo tanto, la prueba de Coombs pone de manifiesto la presencia
de anticuerpos incompletos fijados a la membrana eritrocitaria y que son la causa de la hemólisis in vivo.2
Es un procedimiento valioso en el diagnóstico de la anemia hemolítica del recién nacido y en la anemia
hemolítica auto inmune.
Se usa para demostrar anticuerpos que se han adherido a los glóbulos rojos in vitro sensibilizándolos.
Evento demostrado por Coombs 1946, si una persona tiene los dos, el antígeno y su correspondiente
anticuerpo los eritrocitos de esta persona pueden lavarse con solución salina y adicionarles el suero de
Coombs, para demostrar la sensibilización que está ocurriendo.
1. Procedimiento con suero polivalente
Para la realización de la prueba de Coombs directo se emplea un suero antiglobulina humano polivalente
(reactivo de Coombs), que contiene IgG, IgM y complemento C3D.
Facultad de Salud
Hematología II
Materiales:
 Gradillas  Muestra de sangre total con EDTA

 Tubos de ensayo largo 3 (Tubo tapa lila)
 Pipetas Pasteur  Centrifuga
 Solución salina  Lámpara halógena
 Reactivo de Coombs
 Células control de Coombs
Procedimiento
Lavar los glóbulos rojos del paciente.
Reactivos y Analitos Paciente

Muestra Sangre con EDTA Adicionar al tubo 3 a 5 gotas
Solución salina fisiológica 0.9% Adicionar solucionar hasta las ¾ partes del tubo
centrifugar 3.500 rpm durante 2 minutos.
descartar el sobrenadante
Agregar nuevamente solución salina al 0.9% hasta las ¾ partes del tubo – centrifugar – descartar y
repetir el proceso anterior tres veces
En el último lavado descartar el sobrenadante y adicionar nuevamente solución salina al 0.9%
hasta obtener un color salmón (concentración de 3-5%).
Marcar dos tubos de vidrio y agregar
Reactivos y analitos Tubo Test Tubo Control

Glóbulos rojos del paciente lavados 1 gota 1 gota
Lavar nuevamente 3 veces los glóbulos rojos y descartar muy bien el sobrenadante y agregar:
Reactivos y analitos Tubo Test Tubo Control

Suero de Coombs 2 gotas
Solución salina 2 gotas
Centrifugar por 30 segundos a 3500 rpm
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Hematología II
Observar si hay presencia de aglutinación sobre la lámpara halogena, si no se observa aglutinación

agregar células control de Coombs para validar la prueba.
Interpretación:
TEST CONTROL INTERPRETACIÓN

0 0 Negativo
+ 0 Positivo
+ + Mala técnica o mal reactivo
0 repetir.
NOTA: Las células control de Coombs permiten observar si el reactivo de Coombs se encuentra en buen
estado, si al agregarlas no aglutina, la prueba debe repetirse porque el reactivo no se encuentra en
buenas condiciones, por tanto el procedimiento no es válido.
2. Procedimiento Fraccionado
Se emplea suero antiglobulina específico, de los cuales uno de ellos debe contener solamente la IgG y el
otro fragmento C3D del complemento.
Materiales
 Gradillas
 Tubos de ensayo largos 4
 Pipetas Pasteur
 Solución Salina
 Muestra de sangre total EDTA (Tubo tapa lila)
 Centrifuga
 Lámpara halogena
 Suero anti-IgG
 Suero anti-C3D
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Hematología II
Procedimiento
Lavar los glóbulos rojos del paciente.
Reactivos y Analitos Paciente

Muestra Sangre con EDTA Adicionar al tubo 3 a 5 gotas
Solución salina fisiológica 0.9% Adicionar solucionar hasta las ¾ partes del tubo
centrifugar 3.500 rpm durante 2 minutos.
descartar el sobrenadante
Agregar nuevamente solución salina al 0.9% hasta las ¾ partes del tubo – centrifugar – descartar y
repetir el proceso anterior tres veces
En el último lavado descartar el sobrenadante y adicionar nuevamente solución salina al 0.9%
hasta obtener un color salmón (concentración de 3-5%).
Marcar tres tubos de vidrio y agregar
Reactivos y analitos Tubo IgG Tubo C3D Tubo Control

Glóbulos rojos del paciente lavados 1 gotas 1 gotas 1 gotas
Lavar nuevamente 3 veces los glóbulos rojos y descartar muy bien el sobrenadante y agregar:
Reactivos y analitos Tubo IgG Tubo C3D Tubo Control

Suero anti-IgG 2 gotas
Suero anti-C3D 2 gotas
Solución salina 2 gotas
Centrifugar por 30 segundos a 3500 rpm
Observar si hay presencia de aglutinación sobre la lámpara halogena.

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Hematología II
Interpretación
IgG C3D CONTROL INTERPRETACIÓN

0 0 0 Negativo
+ 0 0 Positivo para IgG
0 + 0 Positivo para C3D
+ + 0 Positivo para IgG y C3D
+ + + Mala técnica, repetir.
0 0
 El suero anti-IgG deberá dar resultados positivos con los eritrocitos sensibilizados por el anti-D y
negativos con los eritrocitos que lleven fijadas las fracciones C 3D del complemento.
 Un resultado positivo con el suero anti- C3D significa que los eritrocitos llevan fijadas las
fracciones C3D del complemento y un resultado negativo significa que la prueba de Coombs
directa positiva es de tipo IgG.
Las IgG son generalmente activas 37 C y por eso se conocen también con el nombre de anticuerpos
calientes. La hemolisis que producen es predominantemente extravascular.
Cuando el resultado es positivo frente al suero anti- C3D y negativo frente al suero anti- IgG, obedece a la
presencia en la membrana eritrocitaria del complemento fijado sobre los eritrocitos principalmente IgM o
las IgG capaces de fijar el complemento, pero que, dada su poca afinidad por la membrana, son
eliminadas con el lavado. Suelen ser anticuerpos que trabajan a bajas temperaturas, por eso también se
conocen como anticuerpos fríos. Cuando la amplitud térmica es grande, pueden ser causa de hemolisis
importante de carácter esencialmente intravascular y suele ir acompañada de fenómeno de Raynaud y
otros trastornos de la circulación periférica.
A veces se observa positividad con ambos sueros específicos, lo que indica la naturaleza mixta de la
AHAI.
NOTA:
 Es recomendable emplear una ayuda visual como el microscopio para detectar aglutinación no visible
a simple vista.
 Que puede afectar la prueba:
- Temperaturas mayores a 37 grados centígrados pueden dañar las células o el anticuerpo.
- Proporción de células y suero aumentado la proporción de suero es posible detectar anticuerpos
débiles que no aparecen en los procedimientos de rutina.
- Tiempo de lavado: terminada la fase de incubación, el lavado de las células debe iniciarse
inmediatamente y debe ser continuo, para evitar la elusión del anticuerpo fijado a los glóbulos
rojos.
- Decantación de la salina: para eliminar las globulinas no fijadas al glóbulo rojo, es importante que
después de cada lavado sea decantada totalmente.
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Hematología II
- Contaminación. Si se tapa la boca del tubo con el dedo para resuspender las células, se expone
a la contaminación con proteínas provenientes de la piel, las cuales podían inactivar el reactivo
de antiglobulina.
- Esta prueba es positiva en enfermedades como: anemia hemolítica, eritroblastosis fetal,
mononucleosis infecciosa, infección por micoplasma, sífilis, leucemia linfocítica crónica, reacción
a la transfusión.
3. Prueba de Coombs en Gel
Se denomina también prueba de la antiglobulina directa. Detecta la sensibilización del hematíe por Ig G o
complemento. Se llama directa porque los hematíes del paciente han sido sensibilizados en su propio
organismo (sensibilización in vivo).5
Preparar una suspensión de hematíes del paciente
Agregar glóbulos rojos lavados de la suspensión realizada anteriormente (cantidad según casa comercial)
Incubar y Centrifugar el tiempo que indique la casa comercial y leer.

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Hematología II
BIBLIOGRAFIA
1. Aurora Martínez Romero. José Luis Ortega Sánchez. Manual de Laboratorio de Inmunología
Básica y Clínica. Secretaria de Salud Pública. REDVET. México. 2011
2. Joan l. Vives Corrons, Josep L. Aguilar Bascompte. MANUAL DE TECNICAS DE LABORATORIO
EN HEMATOLOGIA. Tercera Edición. Editorial ELSEVIER MASSON. Barcelona - España. 2006
3. Instructivo Hospital Universitario de Santander-Banco Metropolitano de sangre. 2010.
4. Miguel Ángel Ortiz Gil. MANUAL DE INMUNOHEMATOLOGIA. Universidad de Veracruz. En línea
http://es.scribd.com/doc/1028985/MANUAL-COMPLETO-DE-INMUNOHEMATOLOGIA
5. Govern de les illes Balears. Hospital son Llatzer. Instrucción técnica para Prueba de Coombs
directo. 2007

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1. Procedimiento con suero polivalente

 Gradillas  Muestra de sangre total con EDTA

Lavar los glóbulos rojos del paciente.

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Marcar dos tubos de vidrio y agregar

Reactivos y analitos Tubo Test Tubo Control

Reactivos y analitos Tubo Test Tubo Control

Observar si hay presencia de aglutinación sobre la lámpara halogena, si no se observa aglutinación

TEST CONTROL INTERPRETACIÓN

 Tubos de ensayo largos 4

 Muestra de sangre total EDTA (Tubo tapa lila)

Lavar los glóbulos rojos del paciente.

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Marcar tres tubos de vidrio y agregar

Reactivos y analitos Tubo IgG Tubo C3D Tubo Control

Reactivos y analitos Tubo IgG Tubo C3D Tubo Control

Observar si hay presencia de aglutinación sobre la lámpara halogena.

IgG C3D CONTROL INTERPRETACIÓN

3. Prueba de Coombs en Gel

Preparar una suspensión de hematíes del paciente

Incubar y Centrifugar el tiempo que indique la casa comercial y leer.

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