PRÁCTICA DE LABORATORIO: ESTUDIO DE LA MITOSIS

OBJETIVOS.
 Realizar preparaciones microscópicas de células en mitosis, mediante la técnica de “Squash”.
 Identificar y diferenciar, en preparaciones microscópicas, las distintas fases de la mitosis.
MATERIALES.
Bulbos de Allium cepa (cebolla) germinados, microscopio óptico, cápsulas de Petri, porta objetos, cubre
objetos, agujas de disección, bisturí, tijera, pinzas, papel absorbente o toalla, ácido acético, colorante aceto-
orceína, ácido clorhídrico (HCL) al 50% y agua destilada.
PROCEDIMIENTO. Fig.1. Partes de
un bulbo de
1. Montaje de bulbos de cebolla germinados.
cebolla.
Para poder observar células mitóticas es indispensable tener una fuente de
material en división. El ápice de las raíces es un tejido (meristemo) que se está
dividiendo activamente in vivo, por lo que es un material ideal para observar
cambios celulares durante la mitosis.
En este caso, se trabajará con las raíces de cebolla, las cuales se obtienen
poniendo a germinar 3 bulbos de dicha planta entre 4-6 días antes de la práctica. Para ello, se
colocan los bulbos en un recipiente con agua, tal como se indica en la figura 1, de manera
que sólo el disco radicular quede en contacto con el líquido. Si la el bulbo es muy grande,
procure dejar entradas de aire hacia el frasco.
2. Fijación del tejido.
Los tejidos que van hacer tratados con colorantes para su observación deben ser fijados Fig.2. Germinación
previamente, ya que los procesos de maceración y coloración pueden distorsionar las de bulbo de cebolla.

estructuras celulares a observar por no haber sido fijadas. Para el caso de la mitosis, se requiere la observación
de la cromatina no condesada y condensada (cromosomas) en sus diferentes fases, en este sentido, los
cromosomas fijados deben en lo posible mantener las mismas características de los tejidos vivos.
Para fijar el tejido meristemático de los ápices radicales del bulbo de la cebolla, se selecciona tres raíces cuya
longitud sea de 2 a 3 cm, con una tijera o pinza se cortan y sumergen en el fijador (ácido acético) por 5 minutos.
3. Maceración.
Una vez fijado el tejido debe ser ablandado y separadas sus células. Para ello, es necesario romper la pared
celular que mantiene unidas las células; si esta se destruye las uniones desaparecen quedando las células
aisladas. El ácido clorhídrico al 50% produce ese efecto, y a esta concentración permite el grado adecuado de
ablandamiento e hidrólisis del tejido.
Para macerar se sumergen las raíces fijadas en agua destilada durante 5 minutos para retirar el exceso de fijado.
En una cápsula de Petri, se coloca una gota de ácido clorhídrico al 50%, y con ayuda de una pinza, se sumerge
en ella una raicilla por un período de 10 minutos. Transcurrido los minutos, se lavan las raíces con agua
destilada dos o tres veces, para dejarlas en agua reposar.
4. Coloración.
Para observar las fases de la mitosis, es necesario observar los cromosomas en sus diversos desplazamientos. El
colorante aceto-orceína es una substancia que se ocupa para teñir los cromosomas y verlos en sus distintas fases
en división. Con esta técnica de tinción se ven los cromosomas impregnados por la orceína en color morado y el
resto de las estructuras celulares de otro color.
Primero se debe limpiar tres porta objetos y cubre objetos con alcohol para desengrasarlos. Se secciona el ápice
de una raicilla, ya macerada. Se coloca sobre una gota pequeña de colorante aceto-orceína, en un porta objetos,
dejando teñir por 5 minutos. Si la preparación tiende a secarse se le añade otra gota pequeña del colorante.
5. Squash.
El squash es una técnica de aplastamiento y dispersión del tejido. Con este último procedimiento se da por
hecha la preparación una lámina microscópica permanente o semipermante.
La técnica consiste en cubrir la preparación con un cubre
objetos. Se deja caer sobre la muestra tapada la borra de un
lápiz o el mango de una pinza de disección, de modo que la
preparación se extienda debajo del cubre objetos (ver figura 3).
Se debe sostener el cubre objeto por el borde, para evitar el
desplazamiento de lámina al momento de dejar caer el lápiz o
el aguja de disección.
Fig.3. Colocación del cubre objetos y dispersión de la muestra.
Se coloca la lámina dentro de una toalla doblada de papel
absorbente. Se elimina el exceso de colorante, tocando con cuidado el área alrededor del cubre objetos (ver
figura 4a), y se procede a realizar el squash, presionando suavemente con el pulgar, por encima del papel, el
cubre objetos (ver figura 4b), evitando el desplazamiento y ruptura del mismo.

Fig.4. Técnica de squash. Se indica el modo de efectuar el aplastamiento