ManualFarma1 24332 PDF

UNIVERSIDAD NACIONAL AUTÓNOMA DE MÉXICO
FACULTAD DE QUÍMICA
DEPARTAMENTO DE FARMACIA

Farmacología I
Clave de la materia 1408

Guión de Prácticas
2007

Andrés Navarrete Castro
Liana Medina Cruz
José Luis Balderas López

Farmacología I. Guión de Prácticas.

Este material se desarrollo con el apoyo del

Programa de Apoyo a Proyectos para la Innovación y Mejoramiento de la Enseñanza PAPIME
con la clave PE205306

Proyecto: Desarrollo de procedimientos para la enseñanza de la farmacología experimental
basada en el principio de las 3Rs: Reducción, Refinamiento y Reemplazo de animales de
laboratorio.

El contenido de este material fue revisado por los profesores de Laboratorio de Farmacología I
del semestre 2007‐1.

‐ 2 ‐
Tabla de contenido.

PRÁCTICAS.

1. Marco conceptual del laboratorio de farmacología 4
2. Determinación de la ventana de actividad biológica y la dosis efectiva 50
con un sistema simulado. 9
3. Determinación de la concentración letal 50 (CL50) de dicromato de potasio
en Artemia sp. 13
4. Determinación de parámetros farmacocinéticos en un modelo de vidrio. 21
5. Determinación experimental de la dosis efectiva 50 (DE50) sedante en
ratones. 29
6. Influencia de la vía de administración sobre la respuesta farmacológica. 36
7. Excreción renal de ácido acetilsalicílico en voluntarios. 40
8. Demostración del efecto sinergista y antagonista en un sistema simulado. 46
9. Demostración del efecto sinergista y antagonista en un sistema de órgano
aislado. 54

APÉNDICES.

Apéndice I. Tabla de conversión de proporción a unidades Probit. 63
Apéndice II. Técnicas de manejo e identificación de animales de laboratorio (rata
y ratón). 64
Apéndice III. Instructivo para el uso del polígrafo Biopac System MP‐100. 69

‐ 3 ‐
1. Marco conceptual del laboratorio de farmacología.

La farmacología es una ciencia experimental por excelencia. Los métodos utilizados para evaluar
la seguridad y la eficacia de los fármacos utiliza sistemas biológicos que van desde fragmentos
celulares o macromoléculas aisladas hasta poblaciones enteras. En una gran parte del proceso
de investigación farmacológica se utilizan animales de laboratorio íntegros. Sin embargo, la
creciente sensibilidad respecto a la práctica de la experimentación en animales en la
investigación y en la enseñanza de las ciencias biomédicas, y la búsqueda de enfoques nuevos
en los aspectos prácticos de la misma son parte de un debate actual (Jukes y Chiuia, 2003).

La utilización de animales de experimentación en la enseñanza de las prácticas de diferentes
asignaturas de las Ciencias Biomédicas y en especial de la farmacología, ha venido siendo la
metodología más empleada por todos los profesores de esta disciplina. Gracias a la utilización
de estos animales, los estudiantes han podido apreciar los diferentes efectos farmacológicos y
los principios de la acción farmacológica. Entre las prácticas clásicas que se han realizado en la
mayoría de los laboratorios de farmacología, algunas de ellas tienen un componente importante
de crueldad y son de poca aceptación por algunos de los estudiantes. Una de las prácticas que
no se puede aceptar es la determinación de la dosis letal 50 (DL50) en ratas o ratones, parámetro
que está en duda su utilidad como parámetro para estimar la seguridad de los fármacos y
sustancias nuevas. Es obvio que el uso de animales era el único método del que disponían los
profesores hace algunos años para enseñar farmacología. Pero en los últimos años las cosas han
cambiado y el avance de la informática, de las tecnologías de la imagen y la disposición de líneas
celulares ha permitido el desarrollo de numerosas alternativas que no requieren el uso de los
animales para lograr los objetivos docentes que se plantean en las prácticas de laboratorio de
farmacología (Van der Valk, et al., 1998; Vinardell, 2003; Eder et al., 2006).

Los métodos utilizados en la investigación, para la evaluación de la seguridad y/o toxicidad y en
la enseñanza están en continuo progreso ya que los científicos están en permanente búsqueda
‐ 4 ‐
de posibles alternativas que mejoren la calidad de su trabajo. Ello es debido, en parte, a la lógica
evolución de los conocimientos científicos y de sus aplicaciones tecnológicas, y en parte, a
consideraciones éticas, logísticas, económicas, sociopolíticas y legales (Sterling y Rispin, 2002).
El número de animales utilizados en Europa con fines educativos es relativamente pequeño
comparado con el número total de animales utilizados en investigación y se ha venido
reduciendo en los últimos años, pero a pesar de ello todavía se puede reducir más. En México el
uso de animales en docencia es alto aunque no se cuentan con datos precisos de cuantos
animales se sacrifican en cada ciclo escolar. Por otro lado la aplicación de la Norma Oficial
Mexicana (NOM‐062‐ZOO‐1999) ha sido lenta en los laboratorios de enseñanza de las ciencias
biomédicas. En cambio, en el artículo 25 de la Convención Europea para la Protección de los
Animales Vertebrados utilizados en Experimentación y otros Fines Científicos se especifica:
"aquellos procedimientos llevados a cabo con fines educativos o de entrenamiento … se deben
restringir a los absolutamente necesarios para los fines relativos a la enseñanza y el
entrenamiento y se permitirán únicamente si sus objetivos no pueden ser conseguidos por
métodos audiovisuales u otros que sean suficientemente efectivos". En las legislaciones
relacionadas con la protección de los animales de todos los países de la Comunidad Europea se
considera fundamental aplicar el principio de las 3Rs, promulgado por Russell y Burch en 1959
(Russell y Burch, 1959). Este principio nos indica la necesidad de Reemplazar los animales de
experimentación por otros métodos, siempre que sea posible y que el nuevo método nos aporte
el mismo grado de información, de Reducir el número de animales de experimentación cuando
su uso sea necesario y se presente como el único método válido y finalmente, de Refinar las
técnicas empleadas con los animales, con el fin de mejorar su eficacia o disminuir el dolor o el
grado de sufrimiento infligido (van der Valk, et al., 1998; Vinardell, 2003).

En el caso de la docencia se plantea el reemplazo de los animales de experimentación por otros
métodos. Entre los métodos propuestos se pueden citar:

a) Modelos, maniquíes y simuladores mecánicos.
b) Películas y vídeos.
‐ 5 ‐
c) Simulaciones de ordenador y sistemas de realidad virtual.
d) Autoexperimentación en el propio individuo.
e) Experimentos con vegetales incluyéndose hongos y algas.
f) Uso de material procedente de los rastros.
g) Estudios in vitro con líneas celulares, organismos inferiores como bacterias, nematodos,
insectos o peces en etapa temprana.
h) Aprovechamiento de animales muertos de forma natural o utilizados después de un
procedimiento científico (Van der Valk, et al., 1998; Vinardell, 2003).

En el Laboratorio de Farmacología I se plantea el desarrollo de procedimientos experimentales
y actividades en los que bajo el principio de las “tres erres” se reduzca, se reemplace y se refine
el uso de animales de laboratorio para cubrir los objetivos de la enseñanza experimental de la
farmacología.

Considerando lo anterior, en el laboratorio de farmacología se realizarán actividades de tres
tipos:

1) Simulaciones. Se realizarán simulaciones en la computadora que permita a los
estudiantes la comprensión de aspectos que sin la necesidad de repetir muchos
experimentos puedan comprender los conceptos y los procedimientos para definir
parámetros farmacológicos.

2) Prácticas. Desarrollo de prácticas sencillas, con lo que se pretende conozca técnicas y
hábitos del laboratorio de farmacología.

3) Demostraciones. En esta categoría se realizan experimentos los cuales debido a las
siguientes razones no es posible que la realicen los estudiantes en forma individual o en
grupos pequeños:
‐ 6 ‐
a. El experimento requiere de cierta destreza que en una o dos sesiones no es
posible que las aprenda el estudiante.
b. La existencia de equipo de laboratorio en un número reducido.
c. El tiempo limitado para la sesión de laboratorio.

4) Autoexperimentación. Sin poner en riesgo en ningún grado la integridad y la salud de los
estudiantes. Se realizará una práctica para observar algunos procesos farmacocinéticos
de un fármaco (Ácido acetilsalicílico).

Cualquiera que sea la modalidad del procedimiento que se realice cada uno de ellos debe
comprender las siguientes partes: familiarización con el procedimiento, ejecución del
procedimiento y discusión del procedimiento.

Con estos procedimientos se pretende:

• Facilitar el aprendizaje de los aspectos fundamentales de la farmacología.
• Familiarizar a los estudiantes con el método científico en experimentos de farmacología.
• Enseñar técnicas y hábitos del laboratorio de farmacología.
• Motivar a los futuros farmacéuticos hacia la investigación y estudio de la farmacología
como área de desarrollo profesional.

BIBLIOGRAFÍA.

• Eder C, Falkner E, Nehrer S, Losert U y Schoeffl H. (2006). Introducing the concept of the
3Rs into tissue engineering research. Altex‐Alternativen Zu Tierexperimenten. 23:17‐23.
• Jukes N, Chiuia M. (2003). From Guinea Pig to Computer Mouse. 2ª Edición. InterNICHE.
Lóndres.
‐ 7 ‐
• Meyer B, Ferrigni N, Putnam J, Jacobsen L, Nichols D, McLaughlin J. (1982). Brine Shrimp:
A convenient general bioassays for active plant constituents. Planta Medica. 45:31‐34.
• Russell W, Burch R. (1959). The Principles of Humane Experimental Technique. Methuen,
Lóndres.
• Tallarida R. (2000). Drug synergism and dose‐effect data analysis. Chapman & Hall/CRC.
EUA.
• Van der Valk J, Dewhurst D, Hughes I, Atkinson J, Balcombe J, Braun H, Gabrielson K,
Gruber F, Miles J, Nab J, Nardi J, Van Wilgenburg H, Zinko U y Zurlo J. (1998). Alternatives
to the use of animals in higher education. ATLA 27:39‐52
• Vinardell P. (2003). Alternativas al uso de animales de experimentación en las prácticas
de fisiología. Boletín de la Sociedad Española de Ciencias Fisiológicas. 6(1).
‐ 8 ‐
2. Determinación de la ventana de actividad biológica y la

dosis efectiva 50 con un sistema simulado.

Número de sesiones sugeridas: 1 sesión (ejecución y análisis).
Temas relacionado con el curso de teoría de Farmacología I: Farmacometría, curva dosis respuesta cuantal.

I. INTRODUCCIÓN

Dentro de las ciencias biológicas, entre ellas la Farmacología, los animales muchas veces tienen
un papel central en las clases prácticas en el laboratorio. Cientos de millones de animales son
usados para experimentos o sacrificados para su disección cada año en todo el mundo.

La visión actual del uso de animales es una educación completamente humana, donde los
objetivos de la enseñanza son alcanzados usando métodos alternativos, y donde la compasión,
respecto a la vida, y el pensamiento crítico son valorados y desarrollados. Es una visión donde
los alumnos tienen libertad de conciencia y la relación negativa con los animales ha sido
transformada al pensamiento positivo en lugar del uso dañino de animales (Jukes y Chiuia
2006).

Un gran número de compuestos y fármacos cuentan con la determinación experimental de los
valores de dosis efectiva 50 (DE50), dosis tóxica 50 (DT50) y dosis letal 50 (DL50). El cálculo de este
parámetro se puede predecir mediante ecuaciones que explican el fenómeno farmacológico
(Tallarida, 2000). Por lo que utilizando los valores descritos en la literatura es posible simular la
adición de diferentes dosis o concentraciones de diferentes fármacos en un sistema en
computadora, donde el alumno podrá construir curvas dosis‐respuesta y por lo tanto
determinar la DE50, sin el uso de animales de laboratorio.

‐ 9 ‐
II. OBJETIVOS

Los objetivos de esta práctica son:

1. Comprender la importancia de la determinación la ventana de actividad biológica de los
fármacos.
2. Aprender el uso de un sistema simulado en computadora.
3. Calcular la DE50 de una serie de fármacos por medio de la ecuación de Hill, con los datos
obtenidos en el sistema simulado.

III. MATERIAL

a) Software

• Se utilizará el software SimCDR ver. 1.0 desarrollado ex profeso para la práctica por el M.
en C. José Luis Balderas de la Facultad de Química de la UNAM.
El software puede ser descargado del siguiente vínculo:

http://www.paginasprodigy.com/luisbald

El software deberá ser instalado en una PC o compatible con Microsoft Windows 98 ó
posterior.

IV. PROCEDIMIENTO

a) Manejo del software SimCDR ver. 1.0

Para el uso adecuado del software se dividirá su manejo por procedimiento con
referencia al esquema siguiente:
‐ 10 ‐
Información básica del
fármaco a utilizar
Selección del
fármaco a utilizar
Selección del
número de dosis que
se evaluarán
Selección de las
unidades de dosis
que se utilizarán
Casillas de captura
de datos donde se
colocarán las dosis a
evaluar
Botón para el cálculo Botón de borrado de Casillas de datos de

de los datos todos los datos la simulación

1) Inicio del programa y ejecución de un nuevo experimento simulado.

a) Para iniciar el programa se debe oprimir el siguiente icono:

b) En la casilla de Fármaco se selecciona el fármaco que se utilizará en la simulación. En
la ventana Información del fármaco, aparecerán una breve descripción del mismo así
como su actividad farmacológica más importante.
c) Se seleccionan el número de dosis a utilizar así como las unidades que se utilizarán,
en las casillas Núm. de dosis y Unidades, respectivamente.
d) Se llenan las casillas que aparecen en la ventana Dosis a probar y se oprime el botón
Calcular el % de efecto. Si alguna de las casillas anteriores están en blanco, aparecerá
un mensaje de error.
‐ 11 ‐
e) En la ventana Resultados aparecerán lasa dosis que se administraron simuladamente
y los porcentajes de respuesta que darían dichas administraciones.
f) Para iniciar un nuevo experimento simulado, se deberá oprimir el botón Borrar
datos, o si se prefiere, cambiar los datos en las casillas correspondientes.

V. ANÁLISIS DE RESULTADOS

1. Con los datos obtenidos en los experimentos simulados:

a) Construir las curvas dosis respuesta de los fármacos utilizados.
b) Calcular la DE50 para la actividad principal de los fármacos utilizados mediante la
Ecuación de Hill.

II. BIBLIOGRAFÍA

• Tallarida R. (2000). Drug Synergism and Dose‐effect Data Analysis. Chapman & Hall /CRC.
EUA.
• Jukes N, Chiuia M. (2003). From Guinea Pig to Computer Mouse. 2ª Edición. InterNICHE.
Lóndres.

‐ 12 ‐
3. Determinación de la Concentración Letal 50 (CL50) del

dicromato de potasio en Artemia salina.

Número de sesiones sugeridas: 2 sesiones (ejecución y análisis)
Tema relacionado con el curso de teoría de Farmacología I: Farmacometría, curva dosis‐respuesta cuantal.

I. INTRODUCCIÓN

Un bioensayo puede ser definido como cualquier prueba que involucra organismos vivos, a su
vez se puede señalar como cualquier método por medio del cual alguna propiedad de una
sustancia o material, es medida en términos de la respuesta biológica que produce. La relación
entre la respuesta biológica y la dosis o la concentración de una sustancia activa se relaciona en
la llamada curva dosis‐respuesta. Esta relación puede darse de forma graduada o la respuesta
puede ser de tipo todo o nada, también conocida como cuantal.

En esta práctica se realizará un experimento en el cual se analizará el segundo tipo de relación
curva dosis respuesta, es decir se analizará la curva dosis‐respuesta cuantal, que debido a la
forma en la que se realizará propiamente se debe referir como la curva concentración‐respuesta
cuantal. Se utilizará como sistema biológico el crustáceo Artemia salina en su forma adulta y
como larva o nauplio, y como sustancia de prueba al dicromato de potasio.

II. OBJETIVOS


1. Manejar un sistema biológico alterno a los mamíferos y roedores para la determinación
de una curva concentración‐respuesta cuantal.
2. Comprender el significado y la utilidad de la CL50.
3. Realizar el cálculo de la CL50 mediante el análisis Probit
‐ 13 ‐
III. MATERIAL

1. Utilizando Artemia salina Adulta.

a) Material biológico
• De 100 a 200 ejemplares adultos de Artemia salina.

b) Materiales, cristalería y equipo
• Un vaso de precipitado de 500 mL
• Una pipeta graduada de 2 mL
• Una pipeta volumétrica de 10 mL
• 24 frascos viales marcados para un volumen de 5 mL
• Una lámpara de escritorio.
• 1 Pipeta Pasteur con bulbo
• Aereador con manguera y filtro

c) Reactivos
• 100 mL de disolución de dicromato de potasio, K2Cr2O7 (50 mg/mL).
Disolver 5 g de dicromato de potasio en 50 mL de agua destilada, una vez disuelto
aforar a un volumen de 100 mL con agua destilada.

2. Utilizando nauplios de Artemia salina.

• Huevecillos liofilizados de Artemia salina.

a) Materiales, cristalería y equipo
• Pecera de vidrio capacidad 2 L
• Pecera de 500 mL
‐ 14 ‐
• 24 frascos viales marcados para un volumen de 2 mL
• Pipetas de vidrio
• Jeringas de 1 mL
• Foco sumergible de 5 W
• Termómetro para pecera
• Matraz Erlenmeyer de 1 L
• Vasos de precipitados de 100, 500 mL
• 5 Pipetas Pasteur con bulbo
• Aereador con manguera y filtro

b) Reactivos
Disolver 5 g de dicromato de potasio en 50 mL de agua destilada, una vez disuelto aforar
a un volumen de 100 mL con agua destilada.
Disolver 2 g de dicromato de potasio en 50 mL de agua destilada, una vez disuelto aforar
a un volumen de 100 mL con agua destilada.
• 500 mL de agua de mar artificial.
Disolver 16 g de sal marina (o en su defecto cloruro de sodio, NaCl) en 500 mL de agua y
colocar dos gotas de anticloro. Dejar reposar por 10 minutos y filtrar si es necesario.
• Anticloro (tiosulfato de sodio, Na2S2O3, al 1 %).

IV. PROCEDIMIENTO

1. Utilizando la Artemia salina Adulta.

a) Preparación de la Artemia Salina
1) Mantener a la Artemia salina en el vaso de precipitado con aeración constante.
‐ 15 ‐
2) Por triplicado rotular los frascos viales con las siguientes concentraciones: 0, 4, 6, 8, 12,
16 y 20 mg/mL y coloque una marca a un volumen de 5 mL.
3) Colocar 10 artemias en cada vial con ayuda de la pipeta Pasteur como se muestra en la
figura siguiente. Utilice la luz de una lámpara como fondo para facilitar el conteo. La
cantidad total de agua que resulta de la adición de las artemias debe ser de
aproximadamente 1 mL, si es necesario retire el excedente.

Pipeta
Pasteur
1 hora de exposición
bajo luz blanca
Artemia salina
1
Volumen final de
2 los viales: 5 mL
3
Control 4 6 8 10 12 16 20
CONCENTRACIONES (mg/mL)

‐ 16 ‐
b) Adición del dicromato de potasio
1) Adicionar las siguientes cantidades de dicromato de potasio indicadas en la siguiente
cuadro:

Concentración Volumen de la disolución de
(mg/mL) dicromato de potasio (mL)
0 (Control) 0
4 0.4
6 0.6
8 0.8
10 1.0
12 1.2
16 1.6
20 2.0

2) Inmediatamente después de la adición de la solución de dicromato de potasio se
adiciona la cantidad necesaria de la solución de agua de mar para llevar a un volumen
final de 5 mL.
3) Dejar durante una hora en exposición bajo luz blanca.

c) Lectura de resultados
1) Al término del periodo de exposición se contarán las artemias que sobrevivieron de la
siguiente manera:
a. Las artemias que presentan movimiento, aunque sea este mínimo, se
consideran vivas.
b. Las artemias que permanecen inmóviles, se consideran muertas.

‐ 17 ‐
Farmacologíaa I. Guión de P
Prácticas.
2. Utilizando naauplios de Arrtemia salin
na.

ncubación dee los hueveccillos de la A
a) In Artemia Salin
na
1. See arma el disspositivo de incubación como se mu
uestra en la ssiguiente figura.

Peccera con dispositivos de incubación (1), aerración (2) e ilum
minación (3).

2. See colocan 30
00 mL de agu
ua de mar arrtificial en la pecera de incubación.
3. Co
olocar una cantidad
c dee agua corrieente en la pecera
p mayor, aproxim
madamente a
a una
teemperatura de 26‐28°C y dejar quee alcance el equilibrio con
c el agua de la pecera de
in
ncubación.
4. Co
onectar los d
dispositivos de aeración y luz.
5. Ad
dicionar los huevecilloss en la peceera de incubación con una espátu
ula limpia y seca
mente 10 µgg de huevecillos), colocar en la zona obscura de la pecera de 500
(aaproximadam
m
mL. Dejar incu
ubar durantee 48 h.

b) Prreparación d
de los vialess y realizació
ón del experrimento.
A partir de este momento
o se seguirán
n los pasos a
a), b) y c) del experimento llevado a cabo
co
on artemias adultas, colo
ocando en lu
ugar de estaas a los naup
plios y utilizando la disolu
ución
dee 25 mg/mL de dicromatto de potasio.

‐ 18 ‐

1. Se tabulan los datos obtenidos en el siguiente cuadro:

REPETICIONES DEL EXPERIMENTO
CONCENTRACIÓN DATOS FINALES
1 2 3
(mg/mL)
ni ri ni ri ni ri Σ ni Σ ri pi yi
CONTROL
10
12
16
20
ni = número de artemias utilizadas por concentración por cada repetición Σ ni = número de artemias totales utilizadas por concentración
ri = número de artemias muertas por concentración por cada repetición Σ ri = número de artemias totales muertas por concentración
pi = probabilidad por concentración (pi = Σ ri / Σ ni) yi = unidad probit calculada por tablas a partir de pi

2. Con los resultados obtenidos:
• Realice la curva concentración‐respuesta cuantal para el dicromato de potasio.
• Calcule la CL50 y sus límites de confianza del dicromato de potasio por medio del análisis
Probit. Utilice la tabla de conversión de probabilidad a unidades Probit del Apéndice I.

3. Con la gráfica realizada y los valores calculados analice:
• Los datos encontrados con respecto a los datos informados en la literatura.
• Las ventajas y desventajas de los bioensayos con respecto a los ensayos con organismos
superiores.

‐ 19 ‐
VI. BIBLIOGRAFÍA

• Infante S y Calderón L. (1994). Manual de análisis probit. Colegio de Posgraduados.
México.
• McLaughlin J. (1991). Crow gall tumors on potato disc and Brine Shrimp lethality; two
simple bioassay for higher plant screening and fractionation. Methods in Plant
Biochemistry. Volume 6. Assay for bioactivity. Academic Press Limited, EUA: 1‐30.
New York.

‐ 20 ‐
4. Determinación de parámetros farmacocinéticos en un

modelo de vidrio.

Temas relacionados con el curso de teoría de Farmacología I: Farmacocinética, cálculo de parámetros
farmacocinéticos

I. INTRODUCCIÓN

La farmacocinética es la rama de la farmacología que estudia el curso temporal de los fármacos
a través del organismo. Comprende los procesos de absorción, distribución y eliminación de los
fármacos. La eliminación a la vez comprende los procesos de excreción y biotransformación.

La curva de concentración en función del tiempo se utiliza para determinar los parámetros
farmacocinéticos. La forma de la curva concentración‐tiempo y los parámetros que se calculan a
partir de ella, depende de la vía de administración y del fluido biológico en el que se lleve a cabo
el muestreo y análisis del fármaco. Después de una administración intravenosa es posible
determinar los parámetros farmacocinéticos: constante de eliminación (k), volumen aparente
de distribución (Vd), concentración plasmática al tiempo cero (Cp°), depuración total (ClT), área
bajo la curva (ABC) y el tiempo de vida media (t½). Para cuando el fármaco se administra por una
vía que requiere de un proceso de absorción, es decir, el paso del sitio de aplicación a la
circulación general, se pueden calcular los parámetros farmacocinéticos: constante de absorción
(Ka), concentración plasmática máxima (Cpmax), (tiempo al que se alcanza la concentración
plasmática máxima (tmax), además de k, t½ y ABC.

En esta práctica, mediante el uso de un modelo de vidrio es posible hacer una simulación de la
administración de fármaco por vía intravenosa o por una vía que requiere de un proceso de
absorción. También es posible simular la toma de muestras en sangre y en orina y con ello
realizar los cálculos de los parámetros farmacocinéticos correspondientes a dichas simulaciones.
‐ 21 ‐

II. OBJETIVOS


1. Utilizar un modelo de vidrio para simular la administración intravascular y una vía
extravascular.
2. Calcular los parámetros farmacocinéticos para la administración intravascular y
extravascular.
3. Que el alumno comprenda la influencia de la vía de administración sobre el
comportamiento cinético del fármaco

III. MATERIAL

a) Materiales, cristalería y equipo
• Dos vasos de precipitado de 500 mL con brazo recto
• Pipeta graduada de 5 mL
• Perilla
• Dos vasos de precipitado de 500 mL
• 6 matraz volumétrico de 10 mL
• Un matraz volumétrico de 25 mL
• Una pipeta volumétrica de 1 mL
• Dos placas de agitación
• Dos soportes universal
• Dos pinzas con nuez
• Un embudo de separación de 1 L
• Un anillo para soporte universal
• Dos matraces Erlenmeyer de 250 mL
‐ 22 ‐
• Un cronometro
• 24 Tubos de ensayo
• 4 litros de agua corriente
• Dos barras magnéticas de agitación
• 2 agitadores magnéticos
• Balanza analítica
• Espectrofotómetro

b) Reactivos

• Disolución de Rojo Congo (4 mg/mL)
Disolver 100 mg del colorante Rojo Congo en 15 mL de agua y aforar a un volumen de 25
mL con agua destilada.

IV. PROCEDIMIENTO

1. Vía intravascular

a) Colocar el material de acuerdo al siguiente esquema:
A
C

‐ 23 ‐

b) Colocar agua corriente en el embudo de separación, mantener el mismo volumen
durante todo el experimento.
c) Mantener la agitación constante en el vaso de precipitado A.
d) Medir la velocidad de flujo del goteo y llevarla a un flujo constante de 20 mL/min.
e) Adicionar agua corriente al vaso de precipitado A, llevándolo a un volumen muy cercano
para que se inicie el goteo.
f) Adicionar 5 mL de la disolución del colorante al vaso de precipitado A. El momento en
que inicia el goteo del vaso se toma como referencia para la toma de muestras.
g) Cuando inicia el goteo, inmediatamente se toma una muestra de 2 mL del vaso A.
h) Se deja correr el experimento y se toman muestras de 2 mL del vaso A de acuerdo a los
tiempos indicados en el siguiente cuadro.

VÍA INTRAVASCULAR
VASO A
TIEMPO
CONCENTRACIÓN
(min) ABSORBANCIA
(mg/mL)
CONTROL
0
5
10
15
20
25
30
35
40
45
60
75
90
120

‐ 24 ‐
2. Vía extravascular

a) Colocar el material de acuerdo al siguiente esquema:
A
B
C

b) Colocar agua corriente en el embudo de separación, mantener el mismo volumen
durante el experimento.
c) Mantener la agitación constante en los vasos de precipitado.
d) Medir la velocidad de flujo del goteo y llevarla a un flujo constante de 20 mL/min.
e) Adicionar agua corriente a los vasos de precipitado, llevándolos a un volumen muy
cercano para que inicie el goteo.
f) Adicionar 5 mL de la solución del colorante al vaso de precipitado A. La hora en que inicia
el goteo del vaso A al B se toma como referencia para la toma de muestras.
g) Cuando inicia el goteo se toma una muestra de 2 mL del vaso A y del B.
h) Se deja correr el experimento y se toman muestras de 2 mL del vaso A y B de acuerdo al
cuadro siguiente.

‐ 25 ‐
VÍA EXTRAVASCULAR
VASO A VASO B
TIEMPO
CONCENTRACIÓN CONCENTRACIÓN
(min) ABSORBANCIA ABSORBANCIA
(mg/mL) (mg/mL)
CONTROL
0
5
10
15
20
25
30
35
40
45
60
75
90
120

3. Determinación de las concentraciones del colorante
a) Realizar una curva estándar del pesando 1 mg del colorante, disolverlo en agua
destilada, aforar a 10 mL y continuar con se indica en el esquema siguiente:

5 mL 5 mL 5 mL 5 mL
5 mL
50 µg/mL 25 µg/mL 12.5 µg/mL 6.25 µg/mL 3.125 µg/mL
Disol. Stock Cada matraz debe aforarse a 10 mL

100 µg/mL

‐ 26 ‐
b) Leer las absorbancias de la curva estándar y de las muestras obtenidas en los
experimentos en el espectrofotómetro a una longitud de onda de 490 nm.

CURVA ESTÁNDAR DE ROJO CONGO
CONCENTRACIÓN
TUBO ABSORBANCIA
(µg/mL)
BLANCO 0
1 3.125
2 6.25
3 12.5
4 25
5 50
6 100

c) Determinar la concentración de las muestras interpolando el valor de las lecturas en la
curva estándar.


1. Elaborar una gráfica por cada vía de administración, considerando el logaritmo natural
de la concentración [µg/mL] contra tiempo [min].
2. Calcular los parámetros farmacocinéticos t½, Vd, k, ka, ClT, Cmax, tmax, ABC y F; según la vía
de administración simulada.
3. Analizar la importancia de los modelos farmacocinéticos in vitro y de los parámetros
farmacocinéticos calculados

‐ 27 ‐
VI. BIBLIOGRAFÍA

• Gumtow R, Proudfoot J y Talada A (1989). An in vitro pharmacokinetic system for use in
the undergraduate pharmaceutics laboratory: a one‐ and two‐compartment
pharmacokinetic Bench Model; the glassman patient. Revista Mexicana de Ciencias
Farmacéuticas, 20(3):25‐30.
• Rowland M y Tozer T (1995). Clinical pharmacokinetics 3rd. Ed. Lea and Febiger. EUA.
• Shargel L, Wu‐Pong S y Yu A (2004). Applied biopharmaceutics and Pharmacokinetics. 5th
Edition. McGraw‐Hill Medical, EUA.
‐ 28 ‐
5. Determinación experimental de la dosis efectiva 50 (DE50)

sedante en ratones.

Tema relacionado con el curso de teoría de Farmacología I: Farmacometría y Farmacodinamia, tipo de acción
farmacológica

I. INTRODUCCIÓN

La farmacodinamia es la rama de la farmacología que estudia el mecanismo de acción de los
fármacos. Los fármacos pueden ejercer su acción por la acción sobre un receptor, alterando el
efecto de un agonista endógeno, mediante la inhibición de procesos de transporte, modificando
la actividad enzimática o por otros mecanismos. Entre los receptores que tiene una
participación muy importante en la depresión del SNC se encuentra el receptor GABA, los
receptores a serotonina, los receptores a dopamina, los receptores colinérgicos, los receptores
a histamina, entre otros.

En esta práctica se utilizará un modelo sencillo basado en el comportamiento de los roedores de
explorar un ambiente extraño. El número de levantamientos sobre sus extremidades traseras
está relacionado con un estado de alerta. La disminución del número de levantamientos por el
efecto de un fármaco está relacionado con un efecto tranquilizante y en varios trabajos de
investigación se ha utilizado para medir el efecto sedante de fármacos depresores del SNC
(Oliva et al., 2004; Ugalde et al., 2005; González‐Trujano et al., 2006).

En esta práctica se contempla determinar la DE50 sedante de pentobarbital sódico y del etanol
utilizando el modelo de Cilindro de Exploración en ratones.

‐ 29 ‐
II. OBJETIVO


1. Determinar la DE50 para el efecto sedante del pentobarbital y etanol en ratón utilizando
el modelo del Cilindro de Exploración.
2. Aplicar la metodología para el cálculo de dosis, administración de fármacos, observación
y manejo de datos de un experimento farmacológico en roedores.

III. MATERIAL

• Ratones ICR ó CD1 machos de 25‐30 g de peso

• Cilindro de exploración (cilindro de vidrio de 11 cm de diámetro interno por 30 cm de
altura).
• Jeringas de 1 mL con aguja del número 27
• Balanza para pesar animales
• Marcador de tinta indeleble
• Papel
• Cronómetro
• Contador manual
• Matraz volumétrico de 10 mL
• 6 frascos viales de 10 mL

c) Fármacos y reactivos
• Anestesal® (pentobarbital sódico 6.3 g/100 mL, uso veterinario). Pfizer.
‐ 30 ‐
• Disolución de Pentobarbital sódico 3 mg/mL.
Transfiera 0.47 mL de Anestesal® a un matraz volumétrico de 10 mL y llévelo al aforo con
disolución salina.
• Etanol absoluto.
• Disolución salina fisiológica (0.9%).

IV. PROCEDIMIENTO

A. EFECTO SEDANTE DE PENTOBARBITAL

a) Pesado y marcaje de animales
Cada grupo de trabajo recibirá 6 ratones. Marque a sus animales con el marcador de
tinta indeleble en la base de la cola, péselos y registre el peso de cada animal.

b) Preparación de las disoluciones de pentobarbital sódico
Rotule 6 frascos viales con las siguientes leyendas 0, 2.5, 5, 10, 15 y 30 mg/kg. Agregue la
cantidad indicada en el cuadro siguiente de la disolución de pentobarbital de 3 mg/mL y
de disolución salina al 0.9%(p/v):

VOLUMENES A AGREGAR (mL)
DOSIS CONCENTRACIÓN
FRASCO VIAL PENTOBARBITAL DISOLUCION
(mg/kg) (mg/mL)
( mg/kg) SALINA
1 CONTROL 0 3 0
2 2.5 0.25 2.75 0.25
3 5 0.5 0.5 0.5
4 10 1 1 1
5 15 1.5 1.5 1.5
6 30 3 0 3

c) Administración del fármaco
Asigne aleatoriamente las dosis que recibirá cada ratón. Administre por vía
intraperitoneal 0.1 mL de la disolución correspondiente del fármaco o de la disolución
salina por cada 10 g de peso del animal y registre el tiempo al que lo administró.
‐ 31 ‐
d) Desarrollo del experimento

11 cm d.i.
30 cm

Cilindro utilizado en la prueba de exploración.

1) Cerciórese de que el cilindro de vidrio está seco y limpio.
2) Coloque el cilindro sobre un trozo de papel mayor al diámetro del cilindro (pueden ser
hojas recicladas).
3) 30 minutos después de haber administrado el fármaco o la solución salina introduzca
al animal en el cilindro de exploración.
4) Ponga a funcionar el cronómetro y registre el número de levantamientos que realiza
el animal en un período de 5 minutos. Sólo una persona deberá cuantificar esta
conducta para que sean analizados bajo el mismo criterio.
5) Limpie húmedo con solución hidroalcohólica el interior del cilindro y cambie el papel.
6) Continúe con el mismo procedimiento para los 5 animales restantes. No olvide limpiar
el cilindro entre cada prueba.
7) El animal que recibió la solución salina se toma como control.
Tiempo (h:min)
Núm. de
Ratón Peso (g) Dosis (mg/kg)
Admón. Inicio Final levantamientos
1 0 30 35
2 6 36 41
3 12 42 47
4 18 48 53
5 24 54 59
6 30 01:00 01:05

‐ 32 ‐
B. EFECTO SEDANTE DE ETANOL

a) Preparación de las soluciones de etanol absoluto
Rotule 6 matraces aforados de 10 mL con las siguientes leyendas 0, 500, 1000, 2000,
2500 y 3000 mg/kg. Agregue la cantidad indicada en el cuadro siguiente de etanol
absoluto y afore con solución salina al 0.9% (p/v):

VOLUMENES A AGREGAR (mL)
DOSIS CONCENTRACIÓN
FRASCO VIAL DISOLUCION
(mg/kg) ETANOL ABSOLUTO (mg/mL)
SALINA
1 CONTROL 0 10 0
2 500 0.63 9.37 50

3 1000 1.26 8.74 100
4 2000 2.52 7.48 200
5 2500 3.16 6.84 250

6 3000 3.8 6.2 300

b) Administración del fármaco
Asigne aleatoriamente las dosis que recibirá cada animal. Administre por vía
intraperitoneal 0.1mL de la solución correspondiente del fármaco o de la solución salina
por cada 10 g de peso y registre el tiempo al que lo administró.

c) Desarrollo del experimento
1) Cerciórese de que el cilindro de vidrio está seco y limpio.
2) Coloque el cilindro sobre un trozo de papel mayor al diámetro del cilindro (pueden ser
hojas recicladas).
3) 5 minutos después de haber administrado el fármaco o la solución salina introduzca al
ratón en el cilindro de exploración.
4) Registre el número de levantamientos que realiza el animal en un período de 5
minutos. Sólo una persona deberá cuantificar esta conducta para que sean analizados
bajo el mismo criterio.
5) Limpie húmedo con solución hidroalcohólica el interior del cilindro y cambie el papel.
‐ 33 ‐
6) Continúe con el mismo procedimiento para los 5 ratones restantes. No olvide limpiar
el cilindro entre cada prueba.
7) El animal que recibió la disolución salina se toma como control.

Tiempo (h:min)
Núm. de
Ratón Peso (g) Dosis (mg/kg)
Admón. Inicio Final levantamientos
1 0 5 10
2 6 11 16
3 12 17 22
4 18 23 28
5 24 29 34
6 30 35 40


a) Cálculo de la DE50
1) Calcule el porcentaje de efecto por cada dosis, considerando que el número de
levantamientos promedio de los ratones control es igual al 0% de efecto.
2) Determine el modelo que siguen los datos obtenidos.
3) Calcule la DE50 para el efecto sedante de acuerdo al modelo determinado.

b) Cálculo de la potencia relativa
1) Calcule la potencia relativa del efecto sedante entre etanol y pentobarbital. Con la
relación:

‐ 34 ‐
VII. BIBLIOGRAFÍA

• González‐Trujano M, Martínez A, Reyes A, Reyes B y Navarrete A. (2006). Palmitote
isolated from Annona diversifolia induces an anxiolytic‐like effect in mice. Planta Medica.
72(8):703‐707
• Oliva I, González‐Trujano M, Arrieta J, Enciso‐Rodríguez R y Navarrete A. (2004).
Neuropharmacological profile of hydroalcoholic extract of Valerina edulis ssp. procera
roots in mice. Phytotherapy Research. 18(4):290‐296.
New York.
• Ugalde M, Reza V, González‐Trujano M, Avula B, Khan I y Navarrete A. (2005).
Isobolographic analysis of the sedative interaction between six central nervous system
depressant drugs and Valeriana edulis hydroalcoholic extract in mice. Journal of
Pharmacy and Pharmacology. 57:631‐639.

‐ 35 ‐
6. Influencia de la vía de administración sobre la respuesta
farmacológica.

Temas relacionados con el curso de teoría de Farmacología I: Farmacocinética, vías de administración de
fármacos.

I. INTRODUCCIÓN

La respuesta farmacológica se puede ver modificada en función de la vía por la cual se
administra el fármaco. La modificación puede consistir en un simple retraso en la acción y en
otros casos puede cambiar o anular totalmente el efecto del fármaco. Algunos fármacos pueden
sufrir transformaciones en el sitio de aplicación, dando origen a nuevas moléculas que no
necesariamente van a presentar el mismo efecto farmacológico o van a seguir la misma
farmacocinética. En otros casos, debido a las propiedades fisicoquímicas del fármaco, no es
posible administrarlo por una vía determinada, por ejemplo un fármaco no soluble en
soluciones acuosas no es posible administrarlo por vía intravenosa. Los fármacos irritantes
también limitan su aplicación por alguna vía determinada, así que la elección de la vía de
administración más adecuada para un fármaco es importante para lograr que se consiga el
efecto deseado a una velocidad y a una intensidad adecuada.

En esta práctica se evaluará la forma en la cual la vía de administración modifica la respuesta de
un fármaco bien caracterizado como es el pentobarbital, para el cual se medirán el período de
latencia y la duración del efecto cuando se administra por distintas vías.

‐ 36 ‐
II. OBJETIVOS


1. Determinar la influencia de la vía de administración en la acción farmacológica del
pentobarbital.
2. Comprender el significado del período de latencia de la acción farmacológica del
pentobarbital.

III. MATERIAL

• 4 ratas Wistar machos de 200‐250 g de peso

• Jeringas de 1 y 3 mL
• Cánula para administración esofágica
• Balanza para pesar animales
• Cronómetro

c) Fármacos y reactivos
• Anestesal® (pentobarbital sódico 6.3 g/100 mL, uso veterinario). Pfizer.
• Disolución de Pentobarbital sódico 40 mg/mL.
Transfiera 6.35 mL de Anestesal® a un matraz volumétrico de 10 mL y llévelo al aforo con
disolución salina.
• Disolución salina fisiológica (0.9%).

‐ 37 ‐
IV. PROCEDIMIENTO

1) Pesado y marcaje de animales
Cada grupo de trabajo recibirá 4 ratas. Marque a sus animales con el marcador de tinta
indeleble, péselos y registre el peso de cada animal.

2) Desarrollo del experimento
a) Asigne aleatoriamente el tratamiento que recibirá cada animal: vía oral, intraperitoneal,
subcutánea o intramuscular y anótelo en el cuadro de abajo. Administre 0.1 mL por cada
100 g de peso de la solución del fármaco por la vía de administración que le corresponde
a cada animal y registre el tiempo al que lo administró en el cuadro de abajo.
b) Registre el tiempo en el cual el animal pierde el reflejo de enderezamiento, que se
caracteriza por el hecho que al ponerlo sobre su dorso no presenta resistencia para
intentar volver a su posición natural.
c) La duración del efecto corresponde al lapso de tiempo entre la pérdida del reflejo de
enderezamiento y el tiempo en el cual el animal vuelve a su posición natural.
d) Cubra al animal con un lienzo de franela para reducir la hipotermia producida por el
fármaco.
e) Registre sus datos en el cuadro siguiente.

VOLUMEN A TIEMPO DE EFECTO
RATA VÍA DE
PESO (g) ADMINISTRAR ADMINISTRACIÓN
NÚM. ADMINISTRACIÓN TÉRMINO DURACIÓN
(mL) (min) INICIO (min)
(min) (min)
4

‐ 38 ‐

a) Construya una gráfica para el período de latencia y otro para la duración del efecto en
función de la vía de administración.
b) Realice el análisis estadístico correspondiente para indicar si hay o no influencia de la vía
de administración en el efecto del pentobarbital.

VI. BIBLIOGRAFÍA

• Rowland M y Tozer T. (1995). Clinical pharmacokinetics. 3rd Edition. Lea and Febiger,
EUA.
• Shargel L, Wu‐Pong S y Yu A. (2004). Applied biopharmaceutics and Pharmacokinetics. 5th
Edition. McGraw‐Hill Medical, EUA.

‐ 39 ‐
7. Excreción renal de ácido acetilsalicílico en voluntarios.

Tema relacionado con el curso de teoría de Farmacología I: Farmacocinética, excreción de fármacos

I. INTRODUCCIÓN

La eliminación de fármacos comprende dos procesos la excreción y la biotransformación. La
excreción renal es la principal vía de eliminación para una gran cantidad de fármacos. Cuando
existe una disminución en la eliminación de fármacos por esta vía puede tener complicaciones
importantes, ya que se debe modificar el esquema de dosificación y la dosis del fármaco.

En esta práctica se determinará la eliminación de un fármaco muy común el ácido
acetilsalicílico, cuantificando en la orina la cantidad de salicilatos totales excretados después de
la administración de dos tabletas de 500 mg de este fármaco en voluntarios sanos.

II. OBJETIVOS


1. Comprender la importancia de la excreción renal como uno de los procesos principales
de la eliminación de fármacos.
2. Determinar la eliminación por excreción del ácido acetilsalicílico en voluntarios sanos, así
como los factores que influyen en la misma.

‐ 40 ‐
III. MATERIAL

a) Sujetos de estudio
Criterios de inclusión: Voluntarios adultos jóvenes sanos, de 18 a 20 años de edad, de 55‐65
kg de peso, preferentemente del género masculino.
Criterios de exclusión: No entrarán en el grupo personas con problemas gastrointestinales
(úlcera gastroduodenal, gastritis), historia de alergias, problemas en su función renal o
intolerancia a salicilatos, mujeres con problemas de hemorragias menstruales, ni sujetos
que hayan tomado salicilatos en las últimas 24 horas. Cualquiera de estas contingencias
debe ser informada al profesor.

• Un matraz Erlenmeyer de 100 mL
• 5 matraces Erlenmeyer de 50 mL
• Una gradilla
• 10 tubos de ensayo de 10 mL
• Una probeta de 500 mL
• Un matraz volumétrico de 25 mL
• Seis matraces volumétricos de 10 mL
• Placa de calentamiento
• Cronómetro
• Espectrofotómetro
• Potenciómetro
‐ 41 ‐

d) Fármacos y reactivos
• Agua potable
• Tabletas de ácido acetilsalicílico de 500 mg
• Salicilato de sodio
• Reactivo de Trinder para salicilatos
Se disuelven 10 g de cloruro mercúrico en 200 mL de agua destilada caliente. Cuando la
disolución es completa, se enfría y se añaden 30 mL de ácido clorhídrico 1 N.
Posteriormente se disuelven 10 g de nitrato férrico en la disolución y se afora a 250 mL
con agua destilada.
• Amoniaco acuoso (hidróxido de amonio)
• Disolución de ácido clorhídrico 0.1 N

IV. PROCEDIMIENTO

a) Preparación y toma de muestras
Rotular 5 matraces Erlenmeyer (donde se colocarán la muestras de orina) y 5 tubos de
ensayo con los tiempos 0, 40, 60, 80 y 100 minutos. Anotar en el cuadro adjunto la hora en
la cual se realizarán cada una de las tareas.

Obtención de la muestras se realizará de acuerdo con el cuadro siguiente.

‐ 42 ‐

Tiempo
Hora Actividad a realizar
(min)
Desechar la primera orina.

Tomar 750 mL de agua potable.
Colectar la orina (mínimo 100 mL). Esta será la orina basal.
Medir su volumen y anotarlo.
Tomar dos tabletas de ácido acetilsalicílico de 500 mg en un
volumen de agua igual al orinado.
0
a) Poner 30 mL de esta muestra en un vaso de precipitados.
Ajustar el pH a 7 ± 0.5 con Amoniaco acuoso y/o HCl al 0.1 N.
b) De esta muestra pasar 0.5 mL al tubo de ensayo
correspondiente a los cero minutos.
Colectar la orina, medir su volumen y anotarlo.

40
Repetir procedimiento anterior (incisos a y b) utilizando el tubo
etiquetado con 40 minutos.

60
rotulado con 60 minutos.

80
rotulado con 80 minutos.

100
rotulado 100 minutos.

‐ 43 ‐
b) Análisis de salicilato en orina
Para cada muestra de orina se cuantifica la cantidad de salicilatos excretados de acuerdo al
siguiente procedimiento.

1) Calentar a ebullición los tubos de ensayo con las muestras durante 10 minutos.
2) Enfriar los tubos con agua fría
3) Añadir al tubo 2.5 mL de reactivo para salicilatos. La reacción da un color cuantificable
por espectrofotometría a 525 nm.
4) Realizar una curva estándar pesando 10 mg de salicilato de sodio, disolverlo en agua
destilada, aforar a 10 mL y continuar con se indica en el cuadro siguiente siguiente,
utilizando matraces volumétricos de 10 mL:

VOLUMEN (mL) DE DISOLUCIÓN
CONCENTRACIÓN
TUBO NÚM. STOCK DE SALICILATO DE SODIO ABSORBANCIA
(µg/mL)
(1 mg/mL)
1 0 0

2 0.25 25

3 0.5 50

4 1 100

5 2 200

6 3 300

5) La muestra a tiempo cero será utilizada como blanco.
6) Interpolar los valores de absorbancia de las muestras en la curva estándar para obtener
la concentración de salicilatos en la muestra.
7) Los resultados obtenidos se anotarán en el siguiente cuadro.

‐ 44 ‐
CANTIDAD EXCRETADA
CONCENTRACIÓN CANTIDAD EXCRETADA
MUESTRA TIEMPO (min) pH VOLUMEN (mL) ABSORBANCIA ACUMULADA DE
(µg/mL) DE SALICILATOS (µg)
SALICILATOS (µg)
BLANCO 0
2 40
3 60
4 80
5 100


1) Construya una gráfica de cantidad excretada acumulada de salicilatos contra el tiempo y
calcule la constante de excreción.
2) Calcule el porcentaje de fármaco excretado por orina en 100 minutos y compárela con la
de otros voluntarios.

VI. BIBLIOGRAFÍA

• Rowland M y Tozer T. (1995). Clinical pharmacokinetics. 3rd Edition. Lea and Febiger.
EUA.
• Shargel L, Wu‐Pong S, y Yu A. (2004). Applied biopharmaceutics and pharmacokinetics.
5th Edition. McGraw‐Hill Medical, EUA.

‐ 45 ‐
8. Demostración del efecto sinergista y antagonista en un

sistema simulado.

Número de sesiones sugeridas: 1 sesión (ejecución y análisis)
Temas relacionados con el curso de teoría de Farmacología I: Farmacodinamia, agonistas y antagonistas;
Farmacometría, relación dosis respuesta gradual.

I. INTRODUCCIÓN

Las lecciones prácticas son una parte importante de la enseñanza de la farmacología en diversas
áreas como la medicina, enfermería y farmacia. Los experimentos in vivo e in vitro han sido
ampliamente utilizados en las lecciones prácticas para ayudar a los estudiantes a adquirir
habilidades en los experimentos farmacológicos, reforzando su conocimiento aprendido con las
clases teóricas y libros.

Aunque los experimentos tradicionales en animales vivos son invaluables, tienen desventajas:
alto consumo de tiempo, dinero y sacrificio de animales; sólo pueden probarse un número
limitado de fármacos en un periodo de tiempo y requieren frecuentemente de un trabajo
constante e intenso.

Una variedad de software ha sido desarrollado para la enseñanza de la farmacología en
pregrado y posgrado. Evidencia previa ha mostrado que esta técnica innovadora de enseñanza
junto con los métodos de enseñanza tradicionales, facilita al estudiante el aprendizaje y mejora
su desempeño en farmacología

En esta sesión se utilizará un sistema de simulación para construir curvas concentración‐
respuesta de agonistas, tal y como se realizarían en un modelo de órgano o tejido aislado.

‐ 46 ‐
II. OBJETIVO


1. Demostrar el efecto concentración dependiente de la Histamina y Carbacol en un
sistema simulado.
2. Determinar el tipo de interacción farmacológica de la Atropina, Mepiramina y
Tubocurarina sobre la actividad de la Histamina y Carbacol en un sistema simulado.

III. MATERIAL

a) Software
• Se utilizará el software Organ Bath Simulation 2006 ver. 1.2 desarrollado por la
Universidad de Strathclyde, Escocia.
El software puede ser descargado del siguiente vínculo:

http://spider.science.strath.ac.uk/sipbs/media/2/OBSim%20V1.2%20Setup.exe

El software deberá ser instalado en una PC o compatible con Microsoft Windows 98 ó
posterior.

IV. PROCEDIMIENTO

A) Manejo del software Organ Bath Simulation 2006 ver. 1.2

Para el uso adecuado del software se dividirá su manejo por procedimiento con
referencia al esquema siguiente:

‐ 47 ‐
Botón para empezar un Área de registro de los Cursor de medición de la

nuevo experimento datos fuerza de contracción
Selección del
tejido a utilizar
Selección del
agonista a utilizar
Selección de la concentración
del agonista
Selección del volumen a
administrar de agonista
Selección del
antagonista a utilizar
Selección de la concentración
del antagonista
Selección del volumen a
administrar de antagonista
Selección del sitio donde se
administrará el antagonista
Botón de lavado del Botón para iniciar el Botón para finalizar el

tejido / cámara experimento experimento

1. Inicio del programa y comienzo de un nuevo experimento.
Para iniciar el programa se debe oprimir el siguiente icono:

Para comenzar un nuevo experimento:
a) Seleccione en Tissue type, el tejido Guinea Pig Ileum. Este tejido es el que será
colocado dentro de la cámara de órgano aislado.
b) Oprima el botón New Experiment.
c) Oprime el botón Record, para comenzar la lectura dentro del área de registro.
d) Seleccione y aplique fármacos de la lista de agonistas o antagonistas como se indica a
continuación

‐ 48 ‐
2. Adición de agonistas a la cámara de órgano aislado.
a) En el apartado Agonist, seleccione el agonista que se utilizará.
b) Seleccione la concentración molar que se utilizará.
c) Introduzca en el volumen a utilizar: 0.10 mL
d) Oprima el botón Add to Organ Bath, para agregar el agonista a la cámara. Registre
por 12 segundos (un cuadro en la línea de tiempo) que equivale a 3 minutos en la
simulación.
e) Para curvas acumulativas, agregue la siguiente concentración de agonista. Para
curvas por lotes o no acumulativas, oprima el botón, Flush Reservoir to Bath, para
lavar el tejido con disolución Krebs.

3. Adición de antagonistas a la cámara de órgano aislado.
a) En el apartado Antagonist, seleccione el antagonista que se utilizará.
b) Seleccione la concentración molar que se utilizará.
c) Introduzca en el volumen a utilizar: 0.10 mL
d) En la lista desplegable que se encuentra a la derecha del botón Add to, seleccione
Organ Bath, y oprima el botón Add to para agregar el antagonista a la cámara.

4. Medición de la respuesta del tejido.
Para medir la amplitud de los picos de las contracciones del tejido:
a) Oprima el botón Stop, para terminar el experimento.
b) Usando la barra de desplazamiento horizontal del área de registro, seleccione la
sección que contiene las contracciones del tejido que serán medidas.
c) Arrastre el cursor de medición al punto de la gráfica de registro que será medido. La
fuerza de contracción (en gramos) será mostrada debajo del cursor.
d) Se sugiere tomar al menos 5 lecturas cercanas dentro de la meseta o área de medida
y obtener el promedio de las lecturas para un mejor resultado.

‐ 49 ‐
B) Experimentos a realizar en el software de simulación.

Experimento 1. Curvas concentración respuesta de agonistas.

a) Seleccione como tejido al íleon de cobayo e inicie un nuevo experimento.
b) Seleccione a Histamina (Histamine) como el agonista a utilizar a una concentración de
1x10‐8 M y un volumen de 0.10 mL.
c) Oprima el botón Record para iniciar el experimento.
d) Se deja estabilizar la muestra por 3 minutos (12 segundos reales o un cuadro del área de
registro) y se oprime el botón Add to Organ Bath.
e) Cuando la contracción del músculo se estabilice (se registre una meseta) o hayan
transcurrido 3 minutos de la simulación (si es que no hay contracción), se agrega la
concentración de 1x10‐7 M y así sucesivamente hasta agregar la concentración de 1x100
M.
f) Al terminar la curva, se oprime el botón Stop, se guarda el registro. Y se calcula la fuerza
de contracción por cada concentración agregada.
g) Se realiza el mismo experimento, ahora con Carbacol (Carbachol).

Experimento 2. Efecto de un antagonista en la curva concentración respuesta de
agonistas.

b) Seleccione a Histamina como el agonista a utilizar a una concentración de 1x10‐8 M y un
volumen de 0.10 mL.
c) Seleccione a Mepiramina (Mepyramine) como el antagonista a utilizar a una
concentración de 1x10‐6 M y un volumen de 0.10 mL.
d) Oprima el botón Record para iniciar el experimento.
‐ 50 ‐
e) Se deja estabilizar la muestra por 3 minutos (12 segundos reales o un cuadro del área de
registro) y se agrega el antagonista a Organ Bath oprimiendo el botón Add to del
apartado Antagonist. Se deja incubar por 3 minutos de simulación.
f) Después de terminada la incubación. Se construye la curva concentración respuesta de
la Histamina como se describe en el experimento 1.
g) Se realiza el mismo experimento, ahora con Carbacol como agonista y Atropina
(Atropine) como antagonista.
h) Adicionalmente realice el mismo experimento utilizando dos concentraciones más del
antagonista con el objeto de tener el efecto del antagonista a tres diferentes
concentraciones, en la acción del agonista.

Nota: Se puede experimentar con combinaciones de agonistas y antagonistas con los que
cuenta el software para demostrar la selectividad de estos últimos.

Experimento 3. Efecto relajante de antagonistas.

b) Seleccione a Histamina como el agonista a utilizar a una concentración de 1x10‐1 M y un
volumen de 0.10 mL.
c) Oprima el botón Record para iniciar el experimento.
d) Se deja estabilizar la muestra por 3 minutos (12 segundos reales o un cuadro del área de
registro) y se oprime el botón Add to Organ Bath.
e) Cuando la contracción del músculo se estabilice (se registre una meseta) o hayan
transcurrido 3 minutos de la simulación (si es que no hay contracción), se construye una
curva concentración respuesta con concentraciones crecientes de Mepiramina (de
1x10‐8 M a 1x100 M). Tome en cuenta que ahora la fuerza de contracción disminuirá en
lugar de aumentar.
‐ 51 ‐
f) Al terminar la curva, se oprime el botón Stop, se guarda el registro. Y se calcula la fuerza
de contracción por cada concentración agregada.
g) Se realiza el mismo experimento, ahora con Carbacol a una concentración de 1x10‐3 M y
como antagonista Atropina.

Nota importante: Al igual que en los experimentos in vitro, la concentración real en la
cámara de órgano aislado es 100 menor debido a la dilución 1:100 que se realiza al agregar
0.01 mL de muestra en 10 mL de disolución que contiene la cámara.


1. Con los datos obtenidos del experimento 1:
a) Construir las curvas concentración respuesta de Histamina y de Carbacol.
b) Determinar el modelo al que se ajustan los datos.
c) Calcular la CE50 para la Histamina y el Carbacol de acuerdo con modelo determinado en
el inciso anterior.

2. Con los datos del experimento 2.
a) Construir las curvas concentración respuesta de Histamina y de Carbacol con cada uno
de los antagonistas utilizados.
b) Calcular la CE50 para las combinaciones de Histamina y de Carbacol con los antagonistas
utilizados de acuerdo con modelo determinado en experimento anterior.
c) Calcular cuántas veces se disminuyó el efecto del Carbacol y de la Histamina por la
presencia de sus antagonistas.
d) Con las tres curvas concentración‐respuesta de los antagonistas a diferente
concentración, calcule la potencia o pA2 del antagonista.

‐ 52 ‐
3. Con los datos del experimento 3.
a) Construir las curvas concentración respuesta de Histamina y de Carbacol con cada uno
de los antagonistas utilizados.
c) Calcular la CI50 (Concentración Inhibitoria media) para las combinaciones de Histamina y
de Carbacol con los antagonistas utilizados de acuerdo con modelo determinado en el
inciso anterior.

VI. BIBLIOGRAFÍA

• Samuelsson G. (1991). Assays for pharmacological activity: Non‐specific assays. Methods
in Plant Biochemistry. Volume 6. Assay for bioactivity. Academic Press Limited, EUA, 261‐
280.
• Schwinghammer T y Kroboth P. (1988). Basic concepts in pharmacodynamic modeling.
Journal of Clinical Pharmacology. 28:388‐394.
• Tallarida R. (2000). Drug sinergism and dose‐effect data analysis. Chapman & Hall/CRC,
EUA.

‐ 53 ‐
9. Demostración del efecto sinergista y antagonista en un

sistema de órgano aislado.

Temas relacionados con el curso de teoría de Farmacología I: Farmacodinamia, agonistas y antagonistas;
Farmacometría, relación dosis respuesta gradual.

I. INTRODUCCIÓN

Las preparaciones de tejidos u órganos aislados son comúnmente usadas para estudiar los
efectos de un fármaco sobre un tipo específico de receptores. Estas preparaciones son también
utilizadas para bioensayos de fármacos, caracterización de receptores específicos o sus
subtipos, para determinar la curva concentración respuesta de un agonista y, para estudiar
antagonismo entre un fármaco y un nuevo fármaco descubierto.

El íleon de cobayo ha sido una preparación in vitro muy utilizada para estudiar cambios
mediados por receptores, para identificar nuevos receptores, y para determinar la variación en
especies producidas por fármacos anticolinérgicos. Varios receptores, incluyendo los de
histamina, los GABAérgicos y adrenorreceptores se pueden estudiar en este tipo de
preparaciones.

La preparación de íleon de rata puede ser usada para enseñar los conceptos básicos del
bioensayo y para demostrar la actividad espasmolítica de fármacos colinérgicos y
anticolinérgicos. Las ventajas de esta preparación son su bajo costo, fácil implementación y su
facilidad de manejo.

En esta práctica se utilizará la preparación de íleon de rata para determinar el efecto del
Carbacol y Atropina sobre los receptores colinérgicos presentes en la preparación.

‐ 54 ‐
II. OBJETIVOS


1. Demostrar el efecto concentración dependiente del carbacol en íleon de rata.
2. Determinar el tipo de interacción farmacológica de la atropina sobre la actividad del
carbacol en íleon de rata.

III. MATERIAL

c) Material biológico
• Una rata Wistar hembra de 200‐250 g de peso, con ayuno de 12 h y libre acceso al agua

d) Materiales, cristalería y equipo
• Vaso de precipitado de 1 L
• Pipetas graduadas de 1 mL
• 6 matraces aforados de 10 mL
• Estuche de disección
• Placa de agitación
• Balanza analítica
• Polígrafo Biopac System acoplado a una computadora con el software AcqKnowledge
versión 3.7

e) Reactivos
• Disolución Krebs‐Henseleit (KHS).
Composición en mM: NaCl 118, KCl 4.7, MgSO4.7H2O 1.2, CaCl2 2.5, KH2PO4 1.2, NaHCO3
25, glucosa (C6H12O6) 11.

‐ 55 ‐
Cantidades de las sales para preparar 1000 mL de disolución Krebs‐Henseleit (KHS)
D‐glucosa C6H12O6 1.998 g

Sulfato de magnesio heptahidratado MgSO4y7H2O 0.2956 g
Dihidrogenofosfato de potasio KH2PO4 0.1632 g
Cloruro de potasio KCl 0.351 g

Cloruro de sodio NaCl 6.903 g
Hidrógenocarbonato de sodio NaHCO3 2.1 g
EDTA disódico dihidratado C10H14O8N2Na2y2H2O 0.0117 g
Cloruro de calcio dihidratado CaCl2y2H2O 0.3677 g

Se disuelven todas las sales, una por una, en aproximadamente 500 mL de agua
destilada. Disolviendo al último el cloruro de calcio. Una vez disueltas las sales y sin
signos de precipitación se lleva a un volumen de 1000 mL con agua destilada.

La disolución KHS deberá tener un pH de 7.4 a 37ºC y se mantendrá con burbujeo
constante de gas carbógeno (95% O2 y 5% CO2). Si presenta precipitación deberá
prepararse nuevamente.

• Disoluciones de Carbacol (1x10‐4, 3x10‐5, 1x10‐5, 3x10‐6 y 1x10‐6 M).
Preparación de la disolución Stock (1x10‐3 M).
Disolver 1.825 mg de carbacol en agua destilada y aforar a 10 mL .

Preparación de las disoluciones.
Una vez preparada la disolución stock deberá seguirse la serie de diluciones como se
muestra en el siguiente esquema, utilizando matraces aforados de 10 mL:

‐ 56 ‐
1 mL 1 mL
1 mL
1x10‐4 M 1x10‐5 M 1x10‐6 M
0.3 mL 1 mL
Cada matraz
debe aforarse a
Disol. Stock
10 mL
1x10‐3 M
3x10‐5 M 3x10‐6 M

• Disolución de Sulfato de Atropina (1x10‐6 M).
Se pesan 1.692 mg de sulfato de atropina, se disuelven agua destilada y se afora aun
volumen de 10 mL (disolución Stock). A continuación se sigue el esquema de diluciones
como se indica:

2 mL 1 mL
2 mL
5x10‐5 M 1x10‐5 M 1x10‐6 M
Cada matraz debe aforarse a 10 mL
Disol. Stock
2.5x10‐4 M

IV. PROCEDIMIENTO

a) Manejo del Polígrafo Biopac System
Para el manejo adecuado del Polígrafo Biopac System por medio del software
AcqKnowledge, véase el Apéndice III de esta guía.

‐ 57 ‐
b) Disección del íleon de rata
1) Sacrificar la rata en la cámara de CO2 o por dislocación cervical.
2) Abrir el abdomen y realizar la disección del íleon. La localización del íleon se muestra en
el siguiente esquema.

2. Duodeno
1. Estómago
3. Yeyuno
5. Ciego
4. Íleon
6. Colon

3) Disecar una longitud aproximada de 10–12 cm de íleon, lavarlo con disolución KHS hasta
que la luz intestinal quede libre materia orgánica.
4) Cortar segmentos de aproximadamente 1 cm de largo y colocarlos en disolución KHS,
con burbujeo continuo de gas carbógeno.

c) Montaje de preparación.
1) Cada preparación se suspenderá en una cámara para órgano aislado con ganchos de
alambre de nicromel, que se incrustan en el tejido. Uno de los extremos se fija a la
cámara y el otro al transductor de fuerza conectado al Polígrafo Biopac System, de
acuerdo a las siguientes figuras:

‐ 58 ‐

2) Cada cámara deberá contener 10 mL de solución KHS con burbujeo constante de gas
carbógeno a una temperatura de 37±1ºC.
3) El tejido se somete a una tensión inicial de 1 g dejándolo estabilizar por 20 minutos, con
un lavado intermedio a los 10 minutos.
4) Realizar 2 estimulaciones con 100 µL de carbacol (1x10‐4 M) a intervalos de 20 minutos,
con un lavado intermedio a los 10 minutos Después de cada estimulación se lava el
tejido con solución KHS dos veces para eliminar al Carbacol.
Nota: La concentración real en la cámara de órgano aislado es 100 veces menor debido a
la dilución (1:100).
5) El cronograma de los pasos 2 a 4 es el siguiente:

Tiempo corrido (min) Actividad
Inicio
0
(Oprimir el botón Start)
10 Lavado con KHS
Estimulación 1 y
20
Lavado con KHS
30 Lavado con KHS
Estimulación 2 y
40
Lavado con KHS
50 Lavado con KHS
60 Lavado con KHS
70 Inicio de las evaluaciones

‐ 59 ‐

d) Curva acumulativa concentración respuesta del Carbacol.
1) Estando estable el tejido, se registra una línea basal durante 5 minutos y se adicionan 0.1
mL de Carbacol 1x10‐6 M (disolución 1). Las siguientes disoluciones se agregarán
sucesivamente en el momento en que la disolución anterior alcance una meseta de
contracción.

Disolución Concentración de Carbacol
1 1x10‐6 M
2 3x10‐6 M
3 1x10‐5 M
4 3x10‐5 M
5 1x10‐4 M

2) Después de evaluar se lava el tejido por dos veces con disolución KHS dejando reposar
por periodos de 10 minutos entre cada uno.

d) Efecto de la Atropina en la acción del Carbacol
1) Estando estable el tejido, se registra una línea basal durante 5 minutos y se adicionan 0.1
mL de Atropina 1x10‐6 M.
2) Se deja incubar el tejido con la Atropina durante 5 minutos y posteriormente se realiza la
curva acumulativa concentración respuesta como se indicó en el inciso e).


1. Para analizar los datos es necesario descargar el software AcqKnowledge 3.9 Demo en la
siguiente dirección electrónica:

http://www.biopac.com/Demos.asp?did=4&PCDemoResearch=Y

‐ 60 ‐
Es necesario registrase para descargarlo, y debe instalarse como indican las instrucciones
del sitio web.

Con ayuda del software y de su profesor deberá llenar el cuadro de datos anexa.

TABLA DE DATOS DEL EXPERIMENTO
EXPERIMENTO 1. CARBACOL
CONCENTRACIÓN MUESTRA / CANAL
NÚM. LOG [CONC (M)]
(M) CARBACOL 1 2 3 4
Basal
‐6
EXPERIMENTO 2. CARBACOL + ATROPINA (1X10 M)
CONCENTRACIÓN MUESTRA / CANAL
NÚM. LOG [CONC (M)]
(M) CARBACOL 1 2 3 4
Basal
6

2. Con los datos obtenidos:

a) Construir las curvas concentración respuesta de Carbacol y de Carbacol+Atropina.
‐ 61 ‐
c) Calcular las CE50 para el Carbacol y para Carbacol+Atropina, de acuerdo con modelo
determinado en el inciso anterior.
d) Calcular cuántas veces se disminuyó el efecto del carbacol por la presencia de la
Atropina.
e) Determinar el tipo de interacción de la Atropina sobre la acción del Carbacol.

VI. BIBLIOGRAFÍA

• Samuelsson G. (1991). Assays for pharmacological activity: Non‐specific assays. Methods
in Plant Biochemistry. Volume 6. Assay for bioactivity. Academic Press Limited, EUA, 261‐
280.
• Schwinghammer T y Kroboth P. (1988). Basic concepts in pharmacodynamic modeling.
Journal of Clinical Pharmacology. 28:388‐394.
• Tallarida R. (2000). Drug sinergism and dose‐effect data analysis. Chapman & Hall/CRC,
EUA.

‐ 62 ‐
APÉNDICE I. Tabla de conversión de proporción a unidades
Probit.

TABLA DE CONVERSIÓN DE PROPORCIÓN (pi) A UNIDADES PROBIT (yi)

pi 0.00 0.01 0.02 0.03 0.04 0.05 0.06 0.07 0.08 0.09
0.00 ‐‐‐ 2.673 2.945 3.119 3.249 3.355 3.445 3.524 3.595 3.659
0.10 3.718 3.773 3.825 3.874 3.920 3.964 4.006 4.046 4.085 4.122
0.20 4.156 4.194 4.228 4.261 4.294 4.326 4.357 4.388 4.417 4.447
0.30 4.476 4.505 4.532 4.561 4.588 4.615 4.642 4.669 4.695 4.721
0.40 4.747 4.773 4.798 4.824 4.849 4.874 4.900 4.925 4.950 4.975
0.50 5.000 5.025 5.050 5.075 5.100 5.125 5.151 5.176 5.202 5.227
0.60 5.253 5.279 5.305 5.331 5.358 5.385 5.412 5.439 5.467 5.495
0.70 5.524 5.553 5.582 5.612 5.643 5.674 5.706 5.739 5.771 5.806
0.80 5.841 5.878 5.915 5.954 5.994 6.036 6.080 6.126 6.175 6.227
0.90 6.282 6.341 6.405 6.476 6.555 6.645 6.751 6.881 7.054 7.327
pi 0.000 0.001 0.002 0.003 0.004 0.005 0.006 0.007 0.008 0.009
0.97 6.88 6.896 6.911 6.927 6.944 6.960 6.978 6.996 7.014 7.034
0.98 7.054 7.075 7.097 7.121 7.145 7.171 7.198 7.227 7.258 7.291
0.99 7.327 7.366 7.409 7.458 7.513 7.576 7.652 7.748 7.879 8.091

‐ 63 ‐
Prácticas.
APÉND
DICE II. TTécnicass de man nejo e id
dentificaación de animale
es
de labor
d ratorio ((rata y raatón).

I. MANEJJO DEL RATÓ ÓN.

Los raton
nes, así como la mayoríaa de los anim
males de lab
boratorio, pueden ser leevantados p
por su
cola, la base
b de la cola es sujeetada entre los dedos pulgar e índ
dice y el raatón entonces es
levantado
o en posició
ón vertical. Esta técnicca resulta muy
m útil parra manejar y
y trasladar a los
ratones d
distancias co
ortas. Se deb or la punta de la cola yaa que
be tener cuidado de no sujetarlo po
podría esscalar la mism
ma y morder la mano (fiigura 1 y 2).

Figura 1. Form
ma correcta de maanejar un ratón. Figuraa 2. Forma incorreecta de manejar un
n ratón.

Para la inmovilizació
ón del ratón
n con el objetivo de ad
dministrarlee un fármaco o sustanccia se
procederrá de la siguiente manera:

Se toma al ratón co
omo se expliicó anteriormente, y el peso del cuerpo del ratón es apo
oyado
sobre la rreja de la caja (figura 3), se toma ah
hora la cola d
del ratón po
or medio dell dedo meñique y
con los dedos índice y pulgar se ttoma de la p
piel de la nuca (figura 4 y 5). Se voltea y se levanta la
mano dee manera que
q el vien
ntre del rattón quede expuesto (figura
( 6 y 7). Una buena
b
inmovilización evita q
que el ratón se voltee o se mueva al momento d
de la adminiistración.

‐ 64 ‐
Prácticas.

Figura 3. Figura 4. Figura 5.

F
Figura 6. Figura 7.

Una vez inmovilizado
o el ratón see puede pro
oceder a la administración del fárm
maco o sustaancia,
o cuidado de sujetarlo firrmemente.
teniendo

II. MANEJO DE LA RA ATA.

La rata debe
d manejaarse por la base de la cola
c y evitarr levantarla de esta maanera por mucho
m
debido a los movimiento
tiempo d os que realizza (figura 8). El traslado
o se realizaráá de esta maanera
en distan
ncias muy co
ortas y no se deberá sujeetar por la pu
unta de la co
ola.

Figura 8. Forma co
orrecta de manejaar a una rata.

Para la inmovilizació
ón de la ratta de laboraatorio existeen muchas técnicas. A continuació
ón se
explicarán las más uttilizadas.

‐ 65 ‐
Prácticas.
Técnica 1
1.

Se sujeta a la rata po
or la base dee la cola con
n la mano deerecha y con
n la mano izq
quierda se coloca
el cuello de la rata entre los dedos medio e índice.. La rata en
ntonces es sujetada po
or las
extremidades anterio
ores y el abdomen sin hacer presió
ón sobre el cuello (figurra 9, 10 y 11
1). Se
levanta la mano y laa cola es su
ujetada con la mano izzquierda parra dejar exp
puesto el vientre
(figura 12 y 13). Se levanta la mano y la cola es sujeetada con la mano derecha para dejar
expuesto
o el vientre.

Figura 9. Figura 10. Figura 11.

Figura 12
2. Figura 13.

Técnica 2
2.

or la base dee la cola con
Se sujeta a la rata po n la mano deerecha y con
n la mano izq
quierda se coloca
el cuello de la rata entre
e 5) de manera que los dedos
los deedos pulgar e índice (figgura 14 y 15 d
queden a
a la altura de
d las extrem
midades antteriores. Con
n el movimiento naturaal de la man
no, se
cierra éstta de manerra que las exxtremidadess anteriores de la rata queden cruzaadas, se levaanta y
se sujeta la cola con la mano derrecha para dejar expuestto el vientree (figuras 16
6, 17 y 18).

‐ 66 ‐
Prácticas.

Figu
ura 14. Figura 15. Figura 16.

Figura 17
7. Figura 18.

III. MARC
CAJE DEL RAATÓN Y LA RA ATA.

La técnicaa recomendada para el marcaje de ratones y ratas en el Lab
boratorio dee Farmacologgía se
realiza en
n la cola de
el animal po
or medio dee un marcad
dor indeleble, siguiendo
o la clave que se
muestra en las figuraas 19 a 24. EEsta técnica se recomienda cuando se utilizan pocos animaales y
en experimentos muy cortos en duración.

Figura 1
19. Marcaje en la ccola con marcadorr. Figura 20. Ratón marcado con el número 1. Figuraa 21. Ratón marcad
do con el número 2.

‐ 67 ‐
Prácticas.

Figura 22. Ratón marcado con el número 3
3. Figura 23. Ratón marcado con el número 4. Figuraa 24. Ratón marcad
do con el número 5

n marcado con el número 6.
Figura 25. Ratón

OGRAFÍA
IV. BIBLIO

• Sh
hort D y Woodnott D (ed
ditores). (1963). The A.TT.A. manual o
of laboratorry animal pra
actice
an
nd techniquees. Charles C
C. Thomas‐Publisher, EU
UA: 47‐57.

‐ 68 ‐
APÉNDICE III. Instructivo para el uso del polígrafo Biopac
System MP‐100.

I. MATERIALES Y REACTIVOS.
• Polígrafo Biopac System MP‐100A‐CE
• Gas carbógeno (oxigeno 95%‐dióxido de carbono 5%).
• Disolución Krebs‐Henseleit (KHS)

Disolución Krebs‐Henseleit (KHS)
D‐glucosa C6H12O6 1.998 g
Sulfato de magnesio heptahidratado MgSO4y7H2O 0.2956 g
Dihidrogenofosfato de potasio KH2PO4 0.1632 g
Cloruro de potasio KCl 0.351 g
Cloruro de sodio NaCl 6.903 g
Hidrógenocarbonato de sodio NaHCO3 2.1 g
EDTA disódico dihidratado C10H14O8N2Na2y2H2O 0.0117 g
Cloruro de calcio dihidratado CaCl2y2H2O 0.3677 g

Preparación: Se disuelven todas las sales en aproximadamente 500 mL de agua
destilada. Disolviendo en último término al Cloruro de calcio. Una vez disueltas las sales
y sin signos de precipitación se lleva a un volumen de 1000 mL con agua destilada.

• Disolución de Acetilcolina 3x10‐5 M
• Disolución de Norepinefrina 1x10‐6 M
• Disolución de Carbacol 1x10‐4 M

‐ 69 ‐
Prácticas.
II. PROCEEDIMIENTO.

A. Calibración
n del polígraafo.
1.. Se verifica q
que todos lo
os canales esstén firmemente conecttados y ajusttados.

2.. Se enciende la computadora y el polígrafo opriimiendo el b
botón en la p
posición ON..

3.. Se verifica que el nivell de agua deel baño recirrculador cub
bra la resisteencia y la bo
omba.
See enciende yy deja estab
bilizar la tem
mperatura en
n 37±1°C. Esste baño pro
oporciona ell flujo
dee agua que m
mantiene la temperatura de la disolución KHS a dicha temperatura.

4.. En la pantalla de la com
mputadora se seleccionaa el icono
‐ 70 ‐

para iniciar el programa AcqKnowledge, el cual registra los datos provenientes del
Polígrafo.

5. Al comenzar el programa se abre la ventana que se ilustra enseguida.

6. Para comenzar la configuración del polígrafo se selecciona en el menú la opción
MP100, y posteriormente la opción Setup Channels que nos abrirá una ventana emergente.

‐ 71 ‐
7. En la ventana emergente Input Channels, se activan los canales que se utilizarán
seleccionando las casillas Acquire, Plot y Values con √ para cada canal An.

8. Para la calibración de cada canal se selecciona primero el canal y se oprime el
botón con el cual aparecerá la siguiente ventana emergente.

9. En las casillas Scale value se colocan 0 (cero) y 2 (dos) y en Units se coloca g (gramos)
como se muestra a continuación.

‐ 72 ‐
10. Con el valor Scale value = 0, se oprime el botón y el programa automáticamente
calculara el valor Input volts correspondiente a 0 g (cero). Con el valor Scale value = 2, se
coloca una pesa de 2 gramos sobre el transductor y se oprime el botón , el programa
entonces, automáticamente calculará el valor Input volts correspondiente a 2 g (dos
gramos). Al terminar se oprime el botón OK.
Este procedimiento se repite con cada canal que se utilizará.

11. Continuando con la calibración, se selecciona en el menú la opción MP100, y
posteriormente la opción Setup Acquisition.

12. Al seleccionar la opción Setup Acquisition se abrirá la siguiente pantalla emergente.
‐ 73 ‐

13. En la pantalla emergente Setup Acquisition, se seleccionará las opciones Record and
Save once to Disk acquisition. Posteriormente se seleccionará Acquisition Sample Rate
en 0.5 ó 1.0 samples /second, y en Total lengh se seleccionará el máximo en horas,
como se muestra a continuación.

14. El Polígrafo ya está calibrado y se puede seguir con el montaje del tejido.

B. Montaje del tejido.

1. Antes de montar el tejido se selecciona en el software AcqKnowledge se selecciona en
el menú la opción MP100, y posteriormente la opción Show Input Values.
‐ 74 ‐

2. Al seleccionar nos abrirá una ventana emergente que nos muestra los valores que se
registran en el Polígrafo.

En la ventana emergente se oprime el botón n y después el botón Options. En esta
última ventana se seleccionan Channel numbers, Units y Values, y el tamaño de letra
adecuado para su visualización (se recomienda de 14‐18 puntos). Al terminar se oprime
el botón OK.
‐ 75 ‐

3. Se realiza la disección del tejido a utilizar de acuerdo a lo reportado en la literatura. En
caso de íleon o tráquea de cobayo o aorta de rata el tejido se cortará en anillos para su
montaje.

4. Para aorta y traque el tejido es sujetado por medio de ganchos de alambre Nicromel
como se muestra en la figura.
Hilo
Anillos de
Nicromel
Tejido

Para íleon el tejido es montado de acuerdo a la siguiente figura, insertando el tejido en
los ganchos:
Hilo
Anillos de
Nicromel
Tejido

5. Los ganchos junto con el tejido son colocados dentro de la cámara de órgano aislado
previamente llena con KHS y con burbujeo constante de gas carbógeno, como se
muestra a continuación.

‐ 76 ‐
Transductor
Medio KHS
Gas carbógeno
Cámara

6. Se le da una tensión a cada tejido de cada cámara, por medio del tensor del
transductor de acuerdo con el siguiente cuadro.

Tejido Tensión
Aorta de rata 4.0 gramos
Traquea de cobayo 1.5 gramos
Íleon de rata 1.0 gramos

7. Se oprime el botón Start para comenzar el registro del experimento.

‐ 77 ‐
8. Al oprimir el botón Start, comenzará el registro como se muestra a continuación.

9. Para personalizar las opciones de visualización se recomienda consultar el siguiente
cuadro.

BOTÓN NOMBRE DEL BOTÓN EFECTO
Scope Mode

(muestra todos los
canales juntos)
Chart Mode

(muestra cada canal
por separado)
‐ 78 ‐
Show / Hide Journal

(Muestra / oculta la
ventana de
anotaciones en la parte
inferior)

Show / Hide Markers

barra de marcadores
de evento. Para
agregar un marcador se
oprime la tecla F9)

Show / Hide Grid

rejilla)
Set Screen Vertical Axis

Oprimir
(Cambia la visualización
sobre el eje
del eje Y. Se
Y
recomienda un Scale
Setting = 1 g)

Set Screen Horizontal
Axis
Oprimir
sobre el eje (Cambia la visualización
X del eje X. Se
recomienda un Scale =
15 minutes)

‐ 79 ‐
C. Estimulación del tejido para el experimento.

1. Una vez montados los tejidos se procederá a su estimulación de acuerdo con el
siguiente cuadro.

Sustancia para
Tejido Concentración
estimulación
Aorta de rata Norepinefrina 1x10‐6 M
Traque de cobayo Acetilcolina 3x10‐5 M
Íleon de rata Carbacol 1X10‐4 M

2. El cronograma de estimulación y lavado de los tejidos se realizará como sigue.

Tiempo corrido
Actividad
(min)
0 Inicio (Oprimir el botón Start)
15 Lavado con KHS
30 Estimulación 1 y Lavado con KHS
40 Lavado con KHS
50 Estimulación 2 y Lavado con KHS
60 Lavado con KHS
70 Lavado con KHS
80 Inicio de las evaluaciones

3. En el minuto 80, se puede iniciar la evaluación de las sustancias de acuerdo a lo
reportado en la literatura y a los objetivos establecidos.

‐ 80 ‐
III. BIBLIOGRAFÍA

• Estrada S, et al. (1999). Nitric oxide/cGMP mediates the spasmolytic action of 3,4'‐
dihydroxy‐5,5'‐ imethoxybibenzyl from Scaphyglottis livida. Planta Medica. 65(2):109‐
114.
• Hsieh G, et al. (2003). YC‐1 potentiates the nitric oxide/cyclic GMP pathway in corpus
cavernosum and facilitates penile erection in rats. European Journal of Pharmacology.
458:83‐189.
• Sánchez‐Mendoza M, et al. (2007). Mechanisms of relaxant action of a crude hexane
extract of Gnaphalium liebmannii in guinea pig tracheal smooth muscle. Journal of
Ethnopharmacology. 111:142–147.

‐ 81 ‐

ManualFarma1 24332 PDF

Cargado por

Información del documento

Título original

Derechos de autor

Formatos disponibles

Compartir este documento

Compartir o incrustar documentos

Opciones para compartir

¿Le pareció útil este documento?

¿Este contenido es inapropiado?

Copyright:

Formatos disponibles

ManualFarma1 24332 PDF

Cargado por

Copyright:

Formatos disponibles

UNIVERSIDAD NACIONAL AUTÓNOMA DE MÉXICO

2. Determinación de la ventana de actividad biológica y la

Botón para el cálculo Botón de borrado de Casillas de datos de

3. Determinación de la Concentración Letal 50 (CL50) del

4. Determinación de parámetros farmacocinéticos en un

50 µg/mL 25 µg/mL 12.5 µg/mL 6.25 µg/mL 3.125 µg/mL

Disol. Stock Cada matraz debe aforarse a 10 mL

5. Determinación experimental de la dosis efectiva 50 (DE50)

2 500 0.63 9.37 50

5 2500 3.16 6.84 250

8. Demostración del efecto sinergista y antagonista en un

Botón para empezar un Área de registro de los Cursor de medición de la

Botón de lavado del Botón para iniciar el Botón para finalizar el

9. Demostración del efecto sinergista y antagonista en un

D‐glucosa C6H12O6 1.998 g

Cloruro de potasio KCl 0.351 g

1x10‐4 M 1x10‐5 M 1x10‐6 M

5x10‐5 M 1x10‐5 M 1x10‐6 M

Íleon de rata Carbacol 1X10‐4 M

También podría gustarte