CONOCIMIENTO DE TÉCNICAS ANALÍTICAS

PARTE I: FUNDAMENTOS DE ESPECTROFOTOMETRÍA

I. OBJETIVO GENERAL
Conocer y aplicar los fundamentos de la espectrofotometría para la determinación de concentraciones en
soluciones.

II. OBJETIVOS PARTICULARES

a. Conocer los fundamentos de la espectrofotometría y las variables involucradas en la ley de Lambert-
Beer-Bourger.
b. Seleccionar la longitud de onda apropiada para las mediciones de absorbancia
c. Construir una curva patrón de soluciones de yodo (serie tipo)

III. PROBLEMA
Determinar el coeficiente de absortividad molar de soluciones acuosas de yoduro de potasio a partir de
una curva patrón

A1. INTRODUCCIÓN.
La espectroscopia de absorción es la medida de la cantidad de luz absorbida por un compuesto en
función de la longitud de onda de la luz. En general, e irradia una muestra con una fuente de luz y se
mide la cantidad de luz transmitida a varias longitudes de onda, utilizando un detector y registrando el
fenómeno en un gráfico.
La espectroscopia UV-Visible estudia el fenómeno de adsorción de la radiación UV Visible de moléculas
orgánicas e inorgánicas.
La región visible, a la que es sensible el ojo humano, se localiza entre los 380 y 780 nm. La absorción de
la radiación ultravioleta o visible por moléculas orgánicas e inorgánicas, generalmente se produce por la
excitación de los electrones de enlace, por lo tanto, la longitud de onda de los máximos de absorción se
puede relacionar con los enlaces de las especies absorbentes.
Para la determinación del espectro de absorción de una solución colorida existen dos métodos
fotométricos generales:

La fotometría directa: Es el método más general. Se mide la absorbancia de la especie a determinar, si es

coloreada, o bien el producto de su reacción de un reactivo si no presenta color. La absorbancia es
proporcional a la concentración de la sustancia.

La fotometría indirecta: la sustancia a determinar origina la desaparición del color que se aprovecha con
fines cuantitativos. La disminución de absorbancia es proporcional a la concentración de la sustancia a
determinar.

La radiación que incide sobre la muestra absorbente debe de ser lo más monocromática posible, es decir,
debe tener sólo un pequeño rango de longitudes de onda, porque:

Cuanto más monocromática sea la radiación, mejor se cumplirá la ley de Beer- Bourger.

Puede aumentarse la selectividad, puesto que las sustancias absorban a otra longitud de onda no
interferirán si el rango es estrecho.

La sensibilidad es mucho mayor si se selecciona la longitud de onda de máxima absorción.

De esta manera, podemos decir que la ley de Beer- Bourger, establece una relación lineal entre la
absorbancia y la concentración:

A = -log T
A = log ( I / I0 ) = (ε x b) x c
ABSORBANCIA = (ε x b) x c

Mediante el registro de la absorbancia adecuada se construye una curva patrón y a partir de aquí realizar
los análisis cuantitativos para determinar las concentraciones desconocidas en disoluciones de las
muestras. La curva de calibración se construye con las parejas de datos concentración y absorbancia.

A2. PROPUESTA DEL DISEÑO EXPERIMENTAL

Llevar a cabo una discusión grupal, identificar las variables involucradas y plantear la hipótesis para
proponer el diseño del experimento que pueda conducir a la resolución del problema planteado
(considerar que en el laboratorio se dispone del material indicado en el punto A3). Anotar la propuesta en
el Cuadro 1.

Cuadro 1. Variables, hipótesis y propuesta del diseño de experimento.

1.- Espectro de absorción
Lo que queremos hacer es saber a partir de que longitud de onda, una disolución, a una concentración
constante, tiene una absorbancia constante.
Lo vamos a hacer variando la longitud de onda, para así poder construir el espectro de absorción y elegir
la longitud de onda que más se adecue.

2.- Curva patrón

Lo que queremos hacer es conocer y aplicar los fundamentos de la espectrofotometría para la
determinación de concentraciones en soluciones, y lo haríamos variando las concentraciones, a una
longitud de onda constante, para después crear la curva patrón.
A3. REACTIVOS Y MATERIALES
I2 –KI (0.002M - 0.2M) 1 Espectrofotômetro
H2O destilada 2 celdas espectrofotométricas
4 vasos de precipitados de 50 ml
6 tubos de ensayo (15 mL)
1 pipeta graduada de 10 mL
1 pipeta graduada de 1 mL
Nota: Usar siempre las mismas celdas y el mismo espectrofotómetro

A4. METODOLOGÍA EMPLEADA.

Describir detalladamente la metodología empleada después de haber realizado el experimento.

Calibración del espectrofotómetro y barrido del espectro de absorción

1. Encender el espectrofotómetro

2. Esperar 15 minutos

3. Calibración: oprimir la tecla MODE, hasta que la luz roja se encuentre en A (absorbancia)

4. Seleccionar la longitud de onda girando la perilla

5. Introducir la celda con el blanco (con un volumen por arriba de la mitad; nunca llena) en la porta-
celda, oprime la tecla  (0A/100%T) y esperar a que se ponga en ceros la Absorbancia

6. Tomar la lectura de absorbancia de la solución propuesta a una longitud de onda baja ( nm). utilizar
como blanco agua destilada.

7. Repetir el procedimiento desde el punto 4 dando incrementos regulares a la longitud de onda.

Registrar los datos en la tabla 1

Curva Patrón
8. Preparar soluciones de distinta concentración a partir de la solución de referencia I2 –KI
 (0.0002M - 0.2M) (Serie tipo)

9. Seleccionar una longitud de onda adecuada para hacer las lecturas de Absorbancia para las
soluciones de la serie tipo.

10. Introducir la celda con el blanco(agua destilada), con un volumen por arriba de la mitad; nunca llena,
en la porta-celda, oprimir la tecla  (0A/100%T) y esperar a que se ponga en ceros la Absorbancia

11. Tomar la lectura de absorbancia de las soluciones propuestas para la serie tipo, a la longitud de
onda seleccionada ( nm).
12. Registrar las lecturas de absorbancia y concentración de la serie tipo en la tabla 2

A5. DATOS, CÁLCULOS Y RESULTADOS

Temperatura: Registrar los datos experimentales del espectro de absorción de yodo (2*10-4M) en la
tabla 1.
Temperatura: 21°C
1. Registrar los datos experimentales del espectro de absorción de yodo (2x10 -4M) de la tabla 1.

Tabla 1. Absorbancia de la disolución de I2 a diferentes longitudes de onda.

Evento λ (nm) Absorbancia Evento λ(nm) Absorbancia

1 370 1.643 10 460 0.072
2 380 1.125 11 470 0.045
3 390 0.692 12 480 0.025
4 400 0.451 13 490 0.018
5 410 0.315 14 500 0.013
6 420 0.240
7 430 0.180
8 440 0.139
9 450 0.101
2.- Registrar los datos experimentales de la curva patrón en la tabla 2.

3. Algoritmo de cálculo
Determinar la concentración del I2 en las mezclas Tabla 2.
C1V1 = C2 V2
C2 = C1V1 / V2

(0.002𝑀)(0.01𝐿)
1. 𝐶₂ = 0.01𝐿
= 0.002 𝑀
(0.002𝑀)(0.008𝐿)
2. 𝐶₂ = 0.01𝐿
= 0.0016 𝑀
(0.002𝑀)(0.006𝐿)
3. 𝐶₂ = 0.01𝐿
= 0.0012 𝑀
(0.002𝑀)(0.004𝐿)
4. 𝐶₂ = = 0.0008𝑀
0.01𝐿
(0.002𝑀)(0.002𝐿)
5. 𝐶₂ = 0.01𝐿
= 0.0004 𝑀

TABLA 2. Absorbancia a diferentes concentraciones molares de I2

Mezcla I₂(0.002M)(mL) H₂O (mL) I₂ (mol/L) Absorbancia
1 10 0 0.002 1.589
2 8 2 0.0016 1.245
3 6 4 0.0012 0.917
4 4 6 0.0008 0.595
5 2 8 0.0004 0.292

A6. ELABORACIÓN DE GRÁFICOS

1) Trazar la gráfica Absorbancia vs. λ (Espectro)
 Absorbancia vs Longitud de onda
1.8
1.6
1.4
1.2
Absorbancia

1
0.8
Series1
0.6
0.4
0.2
0
0 100 200 300 400 500 600
λ (nm)
.

2) Trazar la gráfica Absorbancia vs. Concentración (Curva patrón)

Absorbancia vs Concentración
1.8
y = 811x - 0.0456
1.6 R² = 0.9995
1.4

1.2
Absorbancia

1
Absorbancia vs
0.8 Concentracion

0.6 Linear (Absorbancia vs

Concentracion)
0.4

0.2

0
0 0.0005 0.001 0.0015 0.002 0.0025
Concentración (mol/L)

A7. ANÁLISIS DE RESULTADOS.

 1) ¿A qué longitud de onda se localiza el máximo de Absorbancia de la disolución de yodo
2x104M?
En este caso se localizo en 370 nm

2) ¿Qué longitud de onda empleaste para construir la curva patrón y porque?

450 nm, ya que es donde la Absorbancia empieza a mantenerse constante

3) ¿Qué representa la pendiente de la grafica de la curva patrón?

𝑚 = 𝜀𝑏

4) ¿Qué relación presenta la Absorbancia con la concentración en la curva patrón?

La concentración es directamente proporcional a la Absorbancia, es decir, si aumenta la
concentración, también aumenta la Absorbancia.

A8. CONCLUSIONES.

(Merino González Arturo)

En esta práctica se pudo aprender que el análisis espectrofotométrico nos ayuda a saber o a
predecir cómo está constituida la materia y nos puede dar una interpretación de cómo es la
estructura interna de la misma. En esta práctica se construyo una curva patrón para una
disolución de yoduro de potasio, que será utilizada en el siguiente experimento. Mediante esta
curva se pudo determinar que a la longitud de onda de 450nm la absorbancia se mantuvo
constante, esto nos quiere decir que en esta longitud de onda es donde retuvo más la radiación
que se le hizo recibir a diferentes longitudes de onda.
También se aprendió que al obtener la absorbancia alta, la concentración de la sustancia a
estudiar también va a ser alta, en pocas palabras la absorbancia es directamente proporcional a
la concentración.

A9. MANEJO DE RESIDUOS

 Agua.- Se van a la tarja.
 Yodo.- Se van a la tarja, debido a que está demasiado diluido.

A10. BIBLIOGRAFÍA
 Conceptos de física, Hewitt P. G., Limusa, 1997
 Fisicoquímica, Castellan G. W., Addison Wesley Longman, 2ª Edición, 1987.
 Fisicoquímica, Keith J. Laidler, John H. Meiser, CECSA, 1a. Edición, 1997.
 Fisicoquímica, Ira N. Levine, Mc Graw Hill, 4ª edición, 1996.