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FACULTAD DE ECOLOGÍA
FILIAL MOYOBAMBA
TEMA:
CURSO:
MICROBIOLOGÍA
DOCENTE:
ALUMNO:
CICLO ACADÉMICO:
SHAWN MCCRACKEN
DITTMAR HAHN *
Durante las últimas dos décadas se registraron importantes descensos y extinciones. de anfibios
se han observado en todo el mundo (Blaustein y Wake 1995; Houlahan et al. 2000; Stuart et al.
2004). Los Neotrópicos se encuentran entre las áreas más afectadas, con pérdidas repentinas de
especies de anuros observadas durante los años 80 en Costa Rica, Ecuador y Venezuela (Pounds
and Crump 1994; Pounds et al. 1997; Young et al. 2001; Ron et al. 2003). Las disminuciones y
pérdidas de la población han sido más significativas en elevaciones altas (por encima de 1000 m)
en un estudio que muestra todas las especies de Atelopus con datos suficientes (N =28)
disminución y desaparición del 75% (La Marca et al. 2005).
Los sitios de baja elevación en el Neotrópico han recibido comparativamente poca atención y, por
lo tanto, los informes sobre la detección de Bd en estos sitios son menos comunes (Puschendorf
et al. 2006; Oliveira de Queiroz Carnaval et al. 2006).
El objetivo de este estudio fue, por lo tanto, examinar la ocurrencia de Bd en especies de
anfibios de un bosque lluvioso neotropical de tierras bajas, es decir, en sitios en la Cuenca
del Alto Amazonas en el este de Ecuador a baja elevación (aproximadamente 200 m).
Este estudio incluyó análisis de anfibios que ocupan nichos ecológicos sobre el suelo del
bosque y las capas de arbustos, específicamente el dosel medio a superior, porque los
estratos superiores de las selvas tropicales del Amazonas desempeñan un papel integral
en la función de los ecosistemas y faltan datos para la interacción de Bd con anfibios en
este importante microhábitat.
Se utilizaron clips de pie y muestras de piel de muslo del muslo para analizar
Por la presencia de Bd (Tabla 1). Las muestras se agruparon en tres categorías (piso de fósforo /
bosque, arbusto / sub-dosel y dosel superior) a lo largo del eje vertical en función de los lugares
de recolección actuales e históricos para cada especie analizada. Las especies colocadas en la
categoría de suelo de fósforo / bosque son aquellas que utilizan hábitats subterráneos como las
rebabas
Flujos y hoyos o típicamente ocurren entre la hojarasca del suelo del bosque. Se evaluaron treinta
y seis individuos de 15 especies en el orden Anura de la categoría de suelo de fósforo / bosque.
La segunda categoría contiene especies que ocupan el sotobosque del bosque (arbustos / sub-
canopy). Mientras que algunos de estos anfibios se pueden encontrar ocasionalmente en el suelo
del bosque, se encuentran más comúnmente en la vegetación baja (<2 m); Se han encontrado
algunos animales que fueron probados y colocados en esta categoría hasta 4 m. Veintinueve
individuos de 12 especies en los órdenes Anura y Caudata fueron evaluados desde la categoría de
arbustos / sub-canopy. La categoría final contiene las especies que se encuentran en el hábitat de
las bromelias del tanque que ocupa el dosel superior a más de 4 m (4–38 m). Veintiún individuos
de 4 especies en el orden Anura fueron probados desde la capa superior del dosel.
La temperatura del agua se recolectó en bromelias de tres tanques de la especie Aechmea zebrina
ubicadas en el dosel superior de un árbol emergente, Parkia multijuga, a 32, 34 y 35,5 m de altura
vertical y a 2 m de distancia horizontal del tronco del árbol. Se colocó un registrador de
temperatura Thermochon iButton (modelo DS1922L) en una bráctea externa de cada bromelia a
un mínimo de 8 cm por debajo del nivel del agua. Los registradores de datos se configuraron para
recoger la temperatura del agua cada 30 minutos (35,5 m) y cada 60 minutos (32 m, 34 m) a una
resolución de 0,5 ° C con una precisión de ± 1 ° C desde
142 días desde el 31 de marzo de 2008 hasta el 24 de agosto de 2008. Se tomó el pH del agua
durante el muestreo de parches de bromelia según McCracken y Forstner (2008) para cinco A.
zebrina en cada uno de 18 árboles para un total de 90 bromelias durante las temporadas de campo
en 2006 y 2008 Se utilizó un Oakton pHTestr 30 para recoger el pH del agua a una resolución de
0.01 pH con una precisión de ± 0.01 pH; se realizó una calibración de tres puntos antes de cada árbol
muestreado.
Un enfoque de PCR anidado que ha mostrado una mayor sensibilidad de detección en muestras
con números de plantilla bajos y se describe en detalle en Gaertner et al. (en prensa) se utilizó
para la detección de Bd. Este enfoque utilizó los cebadores ITS1f (5'CTT GGT CAT TTA GAGC
GAA GTA-3 ') y ITS4 (5'TCC TCC GCT TAT TGA TAT GC-3') dirigidos a las regiones
conservadas del rRNA 28S y 18S para amplificar el rRNA 5.8S gen y el espaciador transcrito
interno (ITS) de todos los hongos (White et al. 1990). Los productos de PCR de esta reacción se
purificaron y luego se utilizaron como plantilla para la posterior reacción de PCR utilizando el
conjunto de cebadores específicos de Bd Bd1a (5'CAG TGT GCC ATA TGT CAC G-3 ') y Bd2a
(5'CAT GGT TCA TAT CTG TCC AG-3 '(Annis et al. 2004). El producto de esta reacción se
examinó mediante electroforesis en gel (agarosa al 2% en tampón TAE) (Sambrook et al. 1989)
en busca de un fragmento de aproximadamente 300 pb (Annis et al. 2004). El ADN de una
muestra positiva para Bd de un estudio anterior (Gaertner et al., En prensa) y el agua destilada
esterilizada se utilizaron como controles positivo y negativo, respectivamente. Los productos de
PCR de muestras que muestran los amplicones de 300 pb se secuenciaron luego utilizando el kit
de inicio rápido CEQ 8800 con la adición de un 5% de DMSO a la mezcla de reacción en un
secuenciador CEQ 8800 (Beckman Coulter, Fullerton, California). Las secuencias fueron
validado contra las bases de datos GenBank / EMBL usando BLASTn (Pearson y Lipman 1988).
Detección de Batrachochytrium dendrobatidis (% ± 95% de con- intervalos de
confianza, calculados en Microsoft Office Excel) en muestras de anfibios recolectados
dentro del Parque Nacional Yasuní, Ecuador, en tres grupos de estratos verticales
diferentes (fósforo / piso; arbusto / sub-dosel, 0–4 m; y dosel,> 4 m).
Todos los estudios anteriores sobre Bd han utilizado anfibios capturados en o cerca del nivel del
suelo. Esto permite probar solo la porción de anfibios contenida en los estratos inferiores de un
sistema estructuralmente complejo. Detectamos Bd en anfibios que habitan en todos los estratos
del bosque, lo que demuestra que las búsquedas que no incluyen los estratos verticales pueden
carecer de datos importantes sobre el sistema. Además, encontramos evidencia de que la aparición
de la infección por Bd en anfibios a lo largo de un eje vertical no es aleatoria en este sistema. Se
encontró que la infección por Bd era significativamente mayor en los grupos fosforial / piso y
dosel, mostrando un 25% y un 33% de individuos infectados, respectivamente, que en el grupo
de arbustos / sub-dosel con solo un individuo (3%) infectado. Cada uno de los estratos de la selva
tropical tiene características únicas de microclima que potencialmente podrían afectar las
infecciones por Bd. En este caso, la disponibilidad de agua puede jugar un papel en la prevalencia
de la infección en cada uno de los grupos. Los anfibios del grupo de piso / fósforo tienen agua
disponible en forma de arroyos y charcas de pie, y el grupo del dosel tiene acceso al agua
capturada en fitotelmas, principalmente bromelias de tanques. Debido a que Bd se transmite a
través de zoosporas acuáticas (Longcore et al. 1999), la ausencia de abundancia de agua estancada
disponible para los anfibios del grupo de arbustos / sub-canopy puede estar reduciendo su
exposición al hongo. Los estudios anteriores han demostrado que las condiciones ambientales a
nivel del paisaje pueden tener fuertes efectos en la dinámica patógeno del huésped (Woodhams
et al. 2006), y los estudios futuros deben incluir la investigación de las interacciones de Bd con
las condiciones ambientales, incluida la disponibilidad de agua, tanto en Nivel de paisaje y
microhábitat. Se ha encontrado que los parámetros ambientales para Bd tienen una influencia
significativa en su patogenicidad (Andre et al. 2008; Piotrowski et al. 2004). Piotrowski et al.
(2004) encontraron que los aislamientos de Bd crecían y se reproducían (en cultivo) entre 4–25ºC
y pH 4–8. El crecimiento óptimo de zoosporas Bd ocurrió a temperaturas de 17–25ºC y pH 6-7
(Piotrowski et al. 2004). Tasas de mortalidad en estudios de ranas infectadas con Bd expuestas a
temperaturas ambiente de 17–25ºC han sido> 50%, aunque varios estudios muestran una mayor
supervivencia y menores tasas de infección con temperaturas> 22ºC (Andre et al. 2008; Berger et
al. 2004; Carey et al. 2006; Kriger y Hero 2007; Woodhams et al . 2003). Exposición a
temperaturas > Se ha demostrado que> 25ºC matan zoosporas Bd y curan ranas infectadas (Berger
et al. 2004; Kriger and Hero 2006; Piotrowski et al. 2004; Woodhams et al. 2003). Si bien Bd
prefiere un pH casi neutro, se encontraron zoosporas nadadoras en cultivos a pH 4 y a una
temperatura de 23ºC durante 14 días (Piotrowski et al. 2004). En nuestro estudio, recogemos los
parámetros ambientales básicos del agua.
Estamos en deuda con la National Science Foundation (Programa de becas de investigación para
graduados (SFM) y la subvención GK-12 No. 0742306) para apoyo financiero. La financiación
también fue proporcionada en parte por la Universidad del Estado de Texas, el Departamento de
Biología y la Organización TADPOLE. Las muestras se obtuvieron con los números de permiso
006-IC-FA-PNYRSO y 012-IC-FA-PNY-RSO, y se exportaron con los números de permiso 001-
EXP-IC-FA-RSO-MA y 005-EXP-IC-FA-RSO -MA expedido por el Ministerio del Ambiente,
Ecuador. La investigación se llevó a cabo de conformidad con las normas supervisadas por el
Comité Institucional de Cuidado y Uso de Animales del Estado de Texas (IACUC, permisos
0721-0530-7, 05-05C38ADFDB, y 06- 01C694AF). Agradecemos a todo el personal de la
Estación de Biodiversidad de Tiputini. - Universidad San Francisco de Quito, especialmente
Jaime Guerra, David Romo, Kelly Swing y Consuelo de Romo para coordinar el apoyo logístico,
David Romo, Gonzalo Banderas y Leo Zurita por ayuda para obtener visas y permisos de
investigación, recolección y exportación. Bejat McCracken, James Dixon, Josephine Duval, Paul
Herbertson, Tana Ryan y Robert Winters para asistencia en el trabajo de campo, y Diana McHenry
y Michele Gaston para asistencia de laboratorio y manejo de muestras.
LITERATURA CITADA