UNIVERSIDAD DE CIENCIAS APLICADAS Y AMBIENTALES U.D.C.

LABORATORIO ANÁLISIS INSTRUMENTAL

PRÁCTICA No. 3

PARÁMETROS BÁSICOS EN LA ESTANDARIZACIÓN DE UN MÉTODO COLORIMÉTRICO

Objetivos.

1. Controlar las variables químicas que influyen sobre la estabilidad y el grado de formación del complejo;
estabilidad de la luz, concentración del ligante, pH.
2. Construir la curva de calibración para el sistema en estudio.
3. Determinar los parámetros de validación del método: la linealidad, el error fotométrico o instrumental, la
sensibilidad, el límite de detección, el límite de cuantificación, la repetibilidad.
4. Construir una carta de dispersión para el método.

Aspecto teórico.

Teoría del color, colorimetría, Ley de Bourguer-Lambert-Beer, promedio, desviación estándar, desviación
estándar relativa o coeficiente de variación, compuestos de coordinación o complejos (definición y
características básicas), validación analítica (definición y fundamento).

Procedimiento

Sistema en estudio Fe+3 + SCN-1 + H+ Fe+3[SCN-]x Complejo coloreado con =7000 cm-1M-1 en agua a
480nm.

1. Preparación de reactivos

• Prepare una solución patrón de hierro de 500mg/L o ppm en hierro, a partir de sulfato férrico amónico
reactivo analítico, de 99,9% de pureza, complete a volumen con agua desmineralizada.
• Prepare por dilución de la solución anterior una solución patrón de 50,00 ppm en hierro.
• Preparar una solución de 20% P/V de tiocianato de potasio o amonio en agua desmineralizada, a partir
del reactivo analítico. Revise periódicamente el color de esta solución y guárdela en frasco oscuro.

2. Reacción de formación del complejo o desarrollo de color. Procedimiento base.

• Calcule el volumen de la solución patrón de hierro de 50,00 ppm que permite obtener una solución de
hierro de 2,00 ppm en un volumen final de 50,00mL.
• Mida con pipeta aforada o desde bureta (de 10,00mL) la alícuota, según el cálculo anterior, y colóquela
en un balón aforado de 50mL.
• Adicione 1,0mL de HCl concentrado, medido desde bureta y adicione varios mL de agua
desmineralizada, agite para mezclar los reactivos.
• Adicione desde bureta 10,00mL de la solución de tiocianato de potasio o amonio al 20% P/V. Agite la
solución. Complete a volumen con agua desmineralizada. Mantenga la solución en la oscuridad 10
minutos. Tome las lecturas de %T usando como referencia agua desmineralizada.

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 • A partir de este procedimiento se realizaran las variaciones que permitan establecer la estabilidad del
complejo, el pH óptimo y la concentración del ligante óptima, buscando obtener la mayor lectura de
absorbancia para la solución de 2,0 ppm en cada caso.

3. Curva espectral del complejo. Establecimiento de la longitud de onda analítica.

• Determine de acuerdo al procedimiento ya realizado (práctica anterior) la determinación de la celda de

referencia y de muestra.
• Determine de acuerdo al procedimiento ya realizado (práctica anterior) la curva espectral del sistema
hierro – tiocianato, en el rango de 400 a 600 nm (No olvide ajustar 100,0 % de transmitancia, con el
blanco, que varíe la longitud de onda)

a. Establezca la max.
b. Calcule el coeficiente de absortividad molar del complejo M -1 cm-1.

4. Determinación de la estabilidad del color del complejo Fe +3 – SCN- frente a la luz

• Coloque en el espectrofotómetro max que será la longitud de onda analítica para el sistema en estudio.
• Prepare dos soluciones patrón del complejo de 2,00 ppm en hierro de acuerdo con el procedimiento
base. Coloque una de las soluciones en la oscuridad y la otra expóngala a la luz de una bombilla.
• Tome medidas de %T o absorbancia, contra el blanco de reactivos, cada cinco minutos para las dos
soluciones durante ½ hora y luego cada 15 minutos durante una hora.

c. Haga gráfica de A vs tiempo para cada solución en la misma hoja. Discuta y concluya sobre la
estabilidad del complejo.
d. Defina el tiempo de reposo de la solución en la oscuridad o expuesta a la luz en el que se obtiene la
mayor lectura de absorbancia.

5. Determinación del efecto de la concentración de SCN- en la intensidad del color del complejo Fe 3+ -
SCN-.

• Prepare varias soluciones patrón de acuerdo con el procedimiento base pero variando el volumen de
SCN- así: 0,0-5,0-10,0-15,0 y 20,0 mL y mida el %T contra agua a max y según la mejor condición
luz-oscuridad-tiempo determinada en (d).

e. Grafique Absorbancia corregida del complejo vs concentración de tiocianato en la solución.

f. Escoja el valor óptimo del tiocianato.
g. Considera que se encuentra en exceso el ligando?

6. Determinación del efecto del pH en la intensidad del color del complejo Fe 3+ - SCN-

Prepare varias soluciones patrón del complejo, siguiendo el procedimiento base pero variando pH entre 0 y 6

• En un vaso de 50mL agregue 2,00mL de Fe3+ de 50,00 ppm y H2O hasta un volumen aproximado de
20mL. Sumerja los electrodos del pH-metro y ajuste el pH a 0 adicionando gotas de HCl a la solución.
Anote el valor de pH obtenido con las cifras que da el instrumento.
• Adiciones el volumen óptimo de SCN- 20% P/V determinado en el numeral (5) y lleve a volumen de
50mL con agua desmineralizada. Lea el %T contra agua a max.

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 • Repita el procedimiento para valores de pH cercanos a 1,3,5 y 6. adicionando gotas de HCl o NH3
concentrados o diluidos según el caso.

h. Construya la gráfica de Absorbancia corregida del complejo vs pH.

i. Escoja el valor de pH óptimo para la formación del complejo.

7. Datos para la construcción de la curva de Ringbom y la curva de calibración del complejo Fe 3+ - SCN-
.

• Prepare soluciones patrones de 0.0, 0.10, 0.20, 0.30, 0.50, 0.70, 1.00, 1.40, 1.80, 2.50, 3.00, 4.50, 6.00,
8.00 ppm en Fe3+ + X mL HCl concentrado + Y mL de SCN- 20% P/V en un volumen del mL según los
parámetros óptimos establecidos.
• Lea el %T del complejo en las condiciones apropiadas. Referencia = agua.

j. Curva de Ringbom: Grafique Absortancia = [100,0 - %T] Vs Log concentración especie absorbente.
k. Linealidad o Curva de Calibración: Grafique la absorbancia corregida vs concentración de la especie
absorbente. Presentar la ecuación de la recta y el valor del coeficiente de correlación lineal, r.
l. ¿Qué efecto tendría sobre la curva de calibración un blanco de reactivos coloreado y de intensidad de
color variable con el tiempo? ¿Qué haría con la lectura de los patrones y los blancos?.

8. Determinación de la repetibilidad y construcción de la carta de dispersión para el sistema del complejo

Fe3+ - SCN-.

• Prepare 7 veces una solución patrón del complejo concentración de 2,0 ppm en Fe 3+, según el
procedimiento de 7 (todos los parámetros establecidos). Prepare de una de estas soluciones en un
volumen de por lo menos 200mL, para usarse en el numeral (9).

9. Determinación del Error Fotométrico.

• Mida 10 veces el %T de una de las soluciones patrón preparadas en el numeral anterior.

m. Calcule error fotométrico.

10. Determinación del límite de detección para soluciones del complejo Fe 3+ - SCN-

• Mida el %T soluciones diferentes preparadas en el procedimiento de 7 (todos los parámetros

establecidos) con concentración de 0,1 ppm en Fe 3+.

n. Calcule el límite de detección en mg/mL.

o. Calcule el límite de cuantificación.

• Prepare y mida el %T de 10 soluciones blanco.

p. Calcule el límite de detección y compárelo con el obtenido antes.

q. Cuál criterio considera mejor para la determinación del límite de detección experimental.
r. Calcule el límite de cuantificación.