ANÁLISIS CUANTITATIVO DE ANALITOS MEDIANTE EL USO DE CURVAS DE

CALIBRACIÓN
CURVA DE CALIBRACIÓN FOTOMÉTRICA
LABORATORIO DE QUÍMICA ANALÍTICA II

ANAYA TOLEDO SERGIO ANDRÉS

ARNEDO ESPITIA DAVID SAMUEL
DE LA OSSA COGOLLO JONATAN REY
FLÓREZ COTERA JAEL SOFÍA

MS. EDINELDO LANS CEBALLOS

DOCENTE

UNIVERSIDAD DE CÓRDOBA
FACULTAD DE CIENCIAS BÁSICAS
QUÍMICA
MONTERÍA
2015
 INTRODUCCIÓN

A la hora de llevar a cabo cualquier análisis cuantitativo de un determinado analito

es conveniente medir la respuesta del método analítico a utilizar. Ello se consigue,
midiendo dicha respuesta para soluciones de concentraciones conocidas, llamadas
patrones o estándares. A continuación se traza una curva con los valores de
concentraciones de los patrones y sus respectivas respuestas del método analítico.
La anterior curva es llamada curva de calibración y constituye un método frecuente
y acertado para la determinación de concentraciones desconocidas de soluciones.
En muchas determinaciones se cumple una relación proporcional entre la magnitud
o intensidad de color que da una reacción y la cantidad del reactivo que la provoca.
Por ejemplo: si la presencia de 10 ug de proteínas en una solución genera la
aparición de un color azul pálido cuando es agregada a una mezcla reactiva, la
presencia de 20 ug de proteína dará lugar a que la solución se torne azul más oscuro
y así sucesivamente.

En la presente práctica de laboratorio se busca construir una curva de calibrado

para dos analitos: permanganato de potasio y yodo. Para esto se preparará un set
de soluciones de concentraciones conocidas de cada analito y se medirá la
respuesta del método a cada estándar. Por último, se hallará la ecuación de la mejor
recta con todo el manejo estadístico que esto amerita.
1. OBJETIVOS

1.1. OBJETIVO GENERAL

1.1.1. Construir una curva de calibrado para el permanganato de potasio

y el yodo y hallar su respectiva ecuación.

1.2. OBJETIVOS ESPECÍFICOS

1.2.1. Preparar un set de soluciones de concentración conocida en el

intervalo de concentraciones que la guía indica para cada analito.

1.2.2. Medir la absorbancia de cada solución.

1.2.3. Trazar con los datos obtenidos de absorbancia y concentraciones

una curva de calibrado para cada analito.
2. MARCO TEÓRICO

2.1. CURVA DE CALIBRADO

Es un método de química analítica empleado para medir la

concentración de una sustancia en una muestra por comparación con
una serie de elementos de concentración conocida. Se basa en la
existencia de una relación en principio lineal entre un carácter medible
(por ejemplo la absorbancia en los enfoques de espectrofotometría) y
la variable a determinar (concentración). Para ello, se efectúan
diluciones de unas muestras de contenido conocido y se produce su
lectura y el consiguiente establecimiento de una función matemática
que relacione ambas; después, se lee el mismo carácter en la muestra
problema y, mediante la sustitución de la variable independiente de
esa función, se obtiene la concentración de esta. Se dice pues que la
respuesta de la muestra puede cuantificarse y, empleando la curva de
calibración, se puede interpolar el dato de la muestra problema hasta
encontrar la concentración del analito. Las curvas de calibración
suelen poseer al menos una fase de respuesta lineal sobre la que se
realiza un test estadístico de regresión para evaluar su fiabilidad (1).

2.2. DETERMINACIÓN DEL EXTREMO SUPERIOR DEL RANGO LINEAL

Esta etapa es fundamental, ya que la regresión lineal está basada en

la suposición de que los datos de respuesta analítica están
linealmente relacionados con la concentración del analito. En dicho
análisis, se incluyen patrones de concentración conocida del analito
desde cero hasta valores que se desvíen visiblemente de la linealidad.
Una prueba estadística apropiada permitirá luego decidir hasta qué
concentración se cumple la relación lineal respuesta-concentración
(2).

2.3. PREPARACIÓN DE PATRONES Y MEDICIÓN DE LA RESPUESTA

RESPECTIVA

Una vez estimado el extremo superior del rango lineal de la técnica,

deben prepararse patrones de concentración conocida dentro de
dicho rango, e incluyendo el valor cero de concentración del analito
(blanco). Usualmente, se preparan varios patrones (como mínimo
cinco) con concentraciones igualmente espaciadas entre cero y el
extremo superior del rango lineal, y cada patrón se analiza por
 triplicado. Debe ponerse especial cuidado en la preparación de los
patrones del analito para la calibración, de manera que las
concentraciones de calibrado se conozcan con la máxima precisión
posible. Una vez preparados los patrones de concentración conocida,
se miden sus respuestas analíticas, incluyendo réplicas de cada
medición. Usualmente cada patrón se mide por triplicado

2.4. ESTIMACIÓN DE LOS PARÁMETROS DE LA REGRESIÓN

El análisis de los datos de calibrado mediante regresión lineal implica

el cálculo de la pendiente (A) y ordenada al origen (B) de la recta
ajustada a la ecuación y = A x + B. Los valores estimados de A y B se
calculan mediante las siguientes ecuaciones:

EC. 1

EC. 2
Donde xi es la concentración de cada uno de los m patrones de
calibrado, x es el promedio de las concentraciones de calibrado, yi es
la respuesta en cada punto e y es el promedio de las respuestas de
los patrones de calibrado (3). Además de los valores individuales de
A y B, es importante tener una idea de su incertidumbre asociada, ya
que los datos instrumentales llevan asociados un error que depende
del ruido instrumental, y el ajuste por cuadrados mínimos sólo provee
estimaciones de la pendiente y ordenada al origen. Los desvíos
estándar en los parámetros A y B se calculan con las siguientes
ecuaciones:

EC. 3

EC. 4

Ecuación de la mejor recta (1):

𝑌(±𝑆𝑦 ) = (𝐴 ± 𝑆𝑦 )𝑋 + (𝐵 ± 𝑆𝐵 ) EC. 5
 3. PROCEDIMIENTO

INICIO

Preparar disoluciones madres de 1E-3 M para el

permanganato y yodo a partir de las cuales permanganato y 1E-4
serán preparados los estándares. para yodo.

Prepara las disoluciones estándares de

Ver tabla 1 para las
permanganato y yodo a partir de sus
respectivas
respectivas soluciones madres tal que
concentraciones de cada
cubran el intervalo de concentraciones
analito.
indicado.

Medir las absorbancias de los estándares 545 nm para

preparados de cada analito a la longitud permanganato y 350nm
de onda indicada. Realizar el análisis de para yodo.
cada absorbancia por triplicado.

Registrar los datos de absorbancia y

concentraciones de toda la experiencia y
construir una curva de calibrado

FIN

3.1. SET DE SOLUCIONES PATRONES

KMnO4 YODO I
ESTÁNDAR CONCENTRACIÓN CONCENTRACIÓN
1 1,00E-04 1,00E-05
2 2,00E-04 2,00E-05
3 3,00E-04 4,00E-05
4 5,00E-04 6,00E-05
5 6,00E-04 8,00E-05
6 8,00E-04 1,00E-04
7 1,00E-03
Tabla 1 Set de soluciones patrones y sus respectivas concentraciones. Las soluciones madres están sombreadas.
 3.2. EQUIPO

Ilustración 1 Equipo de espectrometría UV/vis

NOMBRE: LAMBDA 11 UV/VIS SPECTOMETER

MARCA: PERKIN ELMER

4. DATOS Y RESULTADOS

4.1. PREPARACIÓN DE SOLUCIONES MADRE

KMnO4 YODO
Cantidad de analito 0.0160 g 0.002540 g
para preparar la
solución madre.
Pureza del reactivo 99.0% 99.9%
Volumen total al que 100 mL 100 mL
fue diluido.
Concentración de 1.0E-3 M 1.0E-4 M
solución madre.
Blanco usado Agua destilada
Tabla 2 Datos de la preparación de las soluciones madre
 4.2. DATOS DE ABSORBANCIA

PERMANGANATO DE POTASIO
Concentración Absorbancia 1 Absorbancia 2 Absorbancia 3 Absorbancia promedio
1,00E-04 0,08 0,081 0,08 0,080333333
2,00E-04 0,157 0,157 0,158 0,157333333
3,00E-04 0,243 0,243 0,243 0,243
5,00E-04 0,405 0,405 0,405 0,405
6,00E-04 0,484 0,484 0,484 0,484
8,00E-04 0,646 0,647 0,646 0,646333333
1,00E-03 0,794 0,794 0,793 0,793666667
Tabla 3 Datos para los estándares de permanganato

YODO
Concentración Absorbancia 1 Absorbancia 2 Absorbancia 3 absorbancia promedio
1,00E-05 0,794 0,795 0,796 0,795
2,00E-05 1,312 1,311 1,314 1,312
4,00E-05 2,542 2,512 2,579 2,544333333
6,00E-05 3,795 3,796 3,794 3,784
8,00E-05 4,912 5,023 4,994 4,976333333
1,00E-04 6,129 6,127 6,301 6,185666667
Tabla 4 Datos para yodo
 5. TRATAMIENTO ESTADÍSTICO DE DATOS

Para esta parte se utilizó una hoja de cálculo de Excel (1). Esta herramienta
permitió desarrollar de manera precisa y simple todos los cálculos necesarios
para la determinación de la ecuación de la mejor recta.
5.1. CÁLCULOS PARA EL PERMANGANTO DE POTASIO

Absorbancia
Número de (promedio) [KMnO4] X
puntos (n) [KMnO4] (X) (Y) Abs (XY) [KMnO4]^2 d d^2
2,39512E-
7 1,00E-04 0,080333 8,03333E-06 0,00000001 -0,00154762 06
1,95596E-
2,00E-04 0,15733 3,14667E-05 0,00000004 -0,00442262 05
1,87429E-
3,00E-04 0,243 0,0000729 0,00000009 0,00136905 06
1,30975E-
5,00E-04 0,405 0,0002025 0,00000025 0,00361905 05
6,00E-04 0,484 0,0002904 0,00000036 0,00274405 7,5298E-06
8,00E-04 0,64633 0,000517067 0,00000064 0,00532738 2,8381E-05
1,00E-03 0,793666667 0,000793667 0,000001 -0,00708929 5,0258E-05
Sumatorias 3,50E-03 2,81E+00 1,92E-03 2,39E-06 4,73E-16 1,23E-04
desv. Est. ABS
D = =
0,00000448 0,004961759
m = desv. Est. (m)=
798,75 6,202198151
b= desv. Est. (b)=
0,002005952 3,62E-03

Donde:

Σ𝑑2
𝐷 = 𝑛 ∗ Σ𝑥 2 − (Σ𝑥)2 𝐷𝐸𝑆𝑉. 𝐸𝑆𝑇. 𝐴𝐵𝑆(𝑦) = √𝑛−2

𝑛∗𝑋𝑌− Σ𝑋∗ Σ𝑌 𝑛
𝑚= 𝐷𝐸𝑆𝑉. 𝐸𝑆𝑇. 𝑚 = 𝐷𝐸𝑆𝑉. 𝐸𝑆𝑇. 𝐴𝐵𝑆√𝐷
𝐷

Σ𝑋 2 ∗Σ𝑌− Σ𝑋𝑌∗Σ𝑋 Σ𝑋 2
𝑏= 𝐷𝐸𝑆𝑉. 𝐸𝑆𝑇. 𝑏 = 𝐷𝐸𝑆𝑉. 𝐸𝑆𝑇. 𝐴𝐵𝑆 √
𝐷 𝐷
 Curva de Calibrado para permanganato de potasio
0.9

0.8

0.7

0.6
Absorbancia

y = 798.75x + 0.002
0.5
R² = 0.9997
0.4

0.3

0.2

0.1

0
0.00E+00 2.00E-04 4.00E-04 6.00E-04 8.00E-04 1.00E-03 1.20E-03
Concentración

Figura 1 curva de calibrado de permanganato de potasio

5.1.1. Ecuación de la mejor recta para el permanganato

𝑌(±0.0049) = (798.75 ± 6.2021)𝑋 + (0.002 ± 0.00362)

5.2. CÁLCULOS PARA EL YODO

Número de Absorbancia
puntos (n) [I] (X) (promedio) (Y) [I] X Abs (XY) [I]^2 d d^2
6
1,00E-05 0,795 0,00000795 1E-10 0,04348 0,00189126
2,00E-05 1,312 0,00002624 4E-10 -0,04304 0,00185261
4,00E-05 2,544333333 0,00010177 1,6E-09 -0,01776 0,00031577
6,00E-05 3,784 0,00022704 3,6E-09 0,01483 0,0002201
8,00E-05 4,976333333 0,00039811 6,4E-09 0,00010 1,1613E-08
1,00E-04 6,185666667 0,00061857 0,00000001 0,00237 5,664E-06
sumatorias 3,10E-04 1,96E+01 1,38E-03 2,21E-08 -4,50E-15 4,29E-03
desv. Est. ABS
D = =
3,65E-08 0,032731524
desv. Est.
m = (m)=
60353,05936 419,6579162
b= desv. Est. (b)=
0,147980822 0,025469237
Los cálculos de la pendientes, el intercepto en el origen y sus respectivas
desviaciones se hicieron análogos a los del permanganato. Las ecuaciones del
apartado 5.1 son perfectamente utilizables para el caso del yodo.

Curva de calibrado para Yodo

7

5
absorbancia

3 y = 60353x + 0.148
R² = 0.9998
2

0
0.00E+00 2.00E-05 4.00E-05 6.00E-05 8.00E-05 1.00E-04 1.20E-04
concentración

5.2.1. Ecuación de la mejor recta para el yodo

𝑌(±0.0327) = (60353 ± 419.6579)𝑋 + (0.148 ± 0.0254)

6. CUESTIONARIO

6.1. Cálculos efectuados para preparar solución madre de permanganato de

potasio 1.0E-3 M
Volumen del aforado: 100 mL; Pureza: 99.0%

1𝐸 − 3 𝑚𝑜𝑙 𝑔 100
𝑔 𝐾𝑀𝑛𝑂4 = 100𝑚𝐿 ∗ ∗ 158.04 ∗ = 0.0159 𝑔
1000 𝑚𝐿 𝑚𝑜𝑙 99

6.2. Cálculos efectuados para preparar solución madre de yodo 1.0E-4 M

Volumen del aforado: 100 mL; Pureza: 99.9%

1𝐸 − 4 𝑚𝑜𝑙 𝑔 100
𝑔 𝐼 = 100𝑚𝐿 ∗ ∗ 258.38 ∗ = 0.00256 𝑔
1000 𝑚𝐿 𝑚𝑜𝑙 99.9

6.3. Cálculos efectuados para preparar las disoluciones de la curva de

calibración de permanganato.
 Volumen del aforado de los estándares: 25 mL. Si X es el volumen en
mL de solución madre a utilizar y M es la concentración deseada de
cada estándar, la fórmula general es la siguiente:

𝑀 ∗ 25𝑚𝐿
𝑋=
1.0𝐸 − 3

Ejemplo: Estándar 2. 2.0E-4 M:

2.0𝐸 − 4𝑀 ∗ 25𝑚𝐿
𝑋= = 5 𝑚𝐿
1.0𝐸 − 3
Para los demás estándares el volumen de solución madre agregado
es:
X (mL) 2.5 5 7.5 12.5 15 20 25
[estándar] 1E-4 2E-4 3E-4 5E-4 6E-4 8E-4 1E-3

6.4. Cálculos efectuados para preparar las disoluciones de la curva de

calibración del yodo.
Volumen del aforado de los estándares: 25 mL. Si X es el volumen en
mL de solución madre a utilizar y M es la concentración deseada de
cada estándar, la fórmula general es la siguiente:

𝑀 ∗ 25𝑚𝐿
𝑋=
1.0𝐸 − 4

Ejemplo: Estándar 2. 2.0E-4 M:

2.0𝐸 − 5𝑀 ∗ 25𝑚𝐿
𝑋= = 5 𝑚𝐿
1.0𝐸 − 4

Para los demás estándares el volumen de solución madre agregado

es:
X (mL) 2.5 5 10 15 20 25
[estándar] 1E-5 2E-5 4E-5 6E-5 8E-5 1E-4

6.5. A partir de cada una de las gráficas A Vs C de permanganato y de yodo

indica para cada caso: (previo ajuste por mínimos cuadrados)
6.5.1. Intervalo de linealidad

Intervalo de linealidad de la curva para el

permanganato
1

0.8

0.6

0.4

0.2

0
0.00E+00 2.00E-04 4.00E-04 6.00E-04 8.00E-04 1.00E-03 1.20E-03

El intervalo de linealidad para el permanganato es desde 1E-4 M

hasta 1E-3M.

Intervalo de linealidad de la curva para el yodo

7
6
5
4
3
2
1
0
0.00E+00 2.00E-05 4.00E-05 6.00E-05 8.00E-05 1.00E-04 1.20E-04

El intervalo de linealidad para el permanganato es desde 1E-5 M

hasta 1E-4 M.

6.5.2. Coeficiente de correlación lineal.

𝑐𝑜𝑣𝑎𝑟𝑖𝑎𝑛𝑧𝑎
𝑟=
𝜎𝑥 𝜎𝑦
Para el permanganato = 0.99984
Para el yodo = 0.999899

6.5.3. Ecuación de la curva en el intervalo lineal

Para el permanganato:
𝑌(±0.0049) = (798.75 ± 6.2021)𝑋 + (0.002 ± 0.00362)
 Para el yodo:
𝑌(±0.0327) = (60353 ± 419.6579)𝑋 + (0.148 ± 0.0254)

6.5.4. Sensibilidad del método

La sensibilidad de calibración es igual a la pendiente de la recta de

calibrado: SEN = m

Para el permanganato: S= 798.75

Para el yodo: S= 60353

6.5.5. Valor promedio y desviación estándar del blanco utilizado.

0.0013 + 0.0012 + 0.0012

𝑋(𝑝𝑟𝑜𝑚𝑒𝑑𝑖𝑜) = = 0.0012
3
𝑆𝑋 = 4.71𝐸 − 5

6.5.6. Límite de detección. Indica el valor y la forma de calcularlo.

Criterio IUPAC. Experimentalmente, el límite de detección se determina

involucrando todos los factores que afectan la medida y se define, en
general, para obtenerlo en unidades de concentración como:
LD = 3sb / mcal
Donde, sb = desviación estándar de los blancos, mcal es la
pendiente de una curva de calibración del sistema, preparada a
muy bajas concentraciones.
Para permanganato:

3(4.71𝐸 − 5)
𝐿𝐷 = = 1.76901𝐸 − 7
798.75

Para yodo:

3(4.71𝐸 − 5)
𝐿𝐷 = = 2.341225𝐸 − 8
60353

6.5.7. Límite de cuantificación. Indica el valor y la forma de calcularlo

Corresponde a la cantidad o concentración del analito a partir de

la cual es confiable realizar determinaciones cuantitativas y se
define como:

Límite de cuantificación = LQ = 10s b / mcal bajas concentraciones

 Para el permanganato:
10(4.71𝐸 − 5)
𝐿𝑄 = = 5.9𝐸 − 7
798.75

Para el yodo:

10(4.71𝐸 − 5)
𝐿𝑄 = = 7.89𝐸 − 8
60353

6.6. Calcular, m, b y sus desviaciones.

Estos valores fueron calculados en el apartado 5, tratamiento

estadístico de los datos.

7. ANÁLISIS DE RESULTADOS

La experiencia de laboratorio que se llevó a cabo se trató de una práctica de

relativa simpleza; no obstante, ameritaba gran rigor científico en diferentes
aspectos: preparación de soluciones, elección de los valores de
concentración de los patrones, entendimiento del método a utilizar,
procesamiento de datos entre otros.

En primer lugar, es de analizar el comportamiento proporcional existente

entre la concentración y la absorbancia. Ellos es garantía científica de que
métodos como la curva de calibrado pueden ser utilizados para la
determinación de concentraciones desconocidas. Además, es de anotar que
la intensidad en la coloración de la solución era proporcional a su
absorbancia; esto es, un estándar pálido absorbía menos que un estándar
más oscuro.

En suma, al analizar los datos obtenidos a través de un tratamiento

estadístico se puede notar, gracias al valor de R^2, que la curva obtenida
puede ser utilizada con total confianza si se deseara analizar una muestra
desconocida. Es decir, el comportamiento lineal presentado en las curvas
obtenidas arrojaría con gran certeza un buen resultado si una muestra
desconocida e los analitos en cuestión se analizara.
8. CONCLUSIONES

 Una curva de calibrado constituye un método fiable para la

determinación de concentraciones desconocidas a través de un
determinado método analítico.

 La sensibilidad viene limitada por la pendiente de la curva de

calibración y la reproducibilidad o precisión del sistema de medida

 El método de los mínimos cuadrados es el más acertado para el

manejo de los datos obtenido, ya que logra ajustar perfectamente una
recta y proporcionar un comportamiento fiable de la relación entre las
variables concentración y respuesta del método.

 Con el adecuado tratamiento estadístico a un conjunto de datos se

puede obtener gran precisión en una curva y por ende en la
determinación de la concentración de una muestra problema.

 Para curvas de gran sensibilidad y precisión es correcto tomar valores

muy cercanos y de un gran amplio rango de concentraciones. También
es necesario estudiar el instrumental para saber el valor de las
concentraciones de los patrones a usar para la curva.
 9. BIBLIOGRAFÍA

1. Harris, Daniel C. Quantitative chemical analysis. Quantitative chemical analysis. San Francisco :
Reverte, 2006, pp. 80-86.

2. J.R, Harold Frederick Walton. Análisis químico e instrumental moderno. Análisis químico e
instrumental moderno. Madrid : Reverte, 1983, pp. 194-196.

3. Miller, J.C and Miller, J.N. Estadística y quimiometría para química analítica. Estadística y
quimiometría para química analítica. Madrid : Prentice Hall, 2002, pp. 203-206.