CULTIVOS CONTINUOS

Cultivos Continuos

SR
Reservorio

FI = F S
FI
FS X

X
S
V constante S
P
P

Quimiostato
 Cultivos Continuos
Ventajas

* incremento en la productividad por reducción de los tiempos

de preparado del bioreactor.

•permite determinar distintos parámetros cinéticos (µ max,

KS, Yx/s, etc).

* al poder controlar µ es posible trabajar a una µ óptima

para la síntesis del producto de interés.
 Cultivos Continuos
Ventajas

*ideal para realizar estudios fisiológicos y optimización de

medios de cultivo

*Condiciones constantes Genómica, transcriptomica,

proteomica, metabolómica

* posibilidad de adaptar el proceso a las capacidades del

bioreactor.

* ideal para aislamiento de un determinado tipo de

microorganismo por enriquecimiento y selección.
 Cultivos Continuos
Desventajas

* mayor posibilidad de contaminación

* los instrumentos de control deben permanecer

estables durante largos períodos de tiempo

* mutaciones, pérdida de la cepa original

 Velocidad de Dilución
En un sistema continuo el volumen del bioreactor se
mantiene constante, mientras que ingresa medio fresco a un
determinado flujo (F) existe otro flujo igual de salida que
saca medio +células. La relación entre flujo y volumen en un
sistema continuo se llama tasa de diulción o velocidad de
dilución D

D= F
V
D tiene unidades de h-1 igual que la velocidad específica
de crecimiento µ.

La inversa de D se llama tiempo de residencia y es el

tiempo que se requiere para renovar completamente el
volumen del bioreactor
 Balance de Biomasa
Balance de Biomasa = cel. entran - cel salen + cel. crecen - cel. mueren

dx F Xo - F X + µ X - KD X
=
dt V V
Suponiendo que Xo = 0, µ  kd, F/V = D

dx = µ X - D X
dt

Reordenando queda:
dx
= (µ - D)X
dt

En el estado estacionario dx / dt = 0   = D
 Balance de sustrato limitante
SR = concentración de sustrato limitante en el reservorio
s = concentración de sustrato limitante en el bioreactor

acumulación sust. = Sust. entran - sust. sale - sust. Cons. biomasa - sust. mant. - sust. producto

ds = D SR - D s - µ X - mS X - qP X
dt Yxs YPS

mS X  µ X Y formación de producto despreciable

Yxs

ds = D SR - D s - µ X
dt Yxs

ds = D (SR – s) - µ X
Reordenando queda,
dt Yxs
En estado estacionario ds/dt = 0

0 = D (SR – s) - µ X
Yxs

Como en el estado estacionario  = D

X = Yxs (SR – s)
 Biomasa y sustrato limitante en el estado
equilibrio o estacionario (steady state)
µmax s
µ=
KS + s
Si  = D
µmax s
D=
KS + s

Despejando y reordenando queda que la concentración

de sustrato limitante en el estado estacionario es,
D KS D (KS + s) = max * S
s= D KS + D s = max * s
(µmax – D) D KS = max s - D s
D KS = s (max - D)
Reagrupando la ecuación D KS
s= queda
(µmax – D)

D KS = s (max - D)
1
D KS = s max - s D
D
D KS + s D = s max
D (Ks + s) = s max
1 KS
µmax µMAX
KS + s
1
=
D µmax s 1
- 1 s
Ks
1 KS 1 1
= +
D µmax s µmax
Sabemos que X = YXS (SR - s). Si se sustituye,

D KS
s=
(µmax – D)

Queda,
D KS
X = Yxs SR -
(µmax – D)

La ecuación permite demostrar que la biomasa en el

estado estacionario depende de la velocidad de
dilución y de la concentración del sustrato limitante.
Valores del Estado estacionario de concentración de biomasa
y sustrato limitante en un quimiostato de acuerdo a las
ecuaciones.
 Cálculo del rendimiento verdadero (YG) )y del
coeficiente de mantenimiento (mS).
ds = ds + ds
dt dt M dt G

reescribiendo la ecuación, considerando las velocidades de

consumo de sustrato para crecimiento y mantenimiento
queda:
ds = qS X = qSG X + qSM X
dt
donde qcrec.= mS/ YG y donde YG es el rendimiento
verdadero y qmant es mS= coeficiente de mantenimiento

1 mS 1
= +
YXS µ YG
 1 mS 1
= +
YXS µ YG

Si graficamos 1/µ vs. 1/Y podemos hallar gráficamente

los valores de mS (pendiente) y YG ( verdadero)
intersección en el eje y.

1
YXS

1 Pendiente = mS
YG

1
D
 Balance de Producto

dp = qP X - D p
dt
producción remoción

y si en estado estacionario dp/dt = 0

qP X
p= p = concentración de producto
D en estado estacionario
 Productividad

QP = D X QP = D p
Sabemos que
D KS
X = Yxs SR -
(µmax – D)

Reemplazando queda

D KS
QP ó P = D Yxs SR -
(µmax – D)
Representación gráfica para hallar Efecto de la velocidad de dilución en
la dilución óptima con máxima la producción de la proteína de
productividad. fusión aprotinina:b--galactosidasa
 Dilución critica y µmax

Si D > µmax  dx/dt es negativo por lo tanto hay

lavado de biomasa y s tiende a SR entonces;
µmax SR
Dcrit = C11
KS + SR
Y tenemos que

dx
= (µ - D)X C12
dt

A una D >> µmax la solución de la ecuación es :

Xt = Xo e [(µmax – D) t] C13
 y

ln Xt = ln Xo + (µMAX – D) t

despejando µmax queda:

lnXt- lnXo
µMAX = + D
t

Esto se puede calcular gráficamente realizando una curva

de t vs. ln biomasa, la diferencia entre la pendiente de
lavado de biomasa y la D es igual a µmax. .
 Cálculo de µmax por método de lavado

ln X

µmax - D

t
 Cultivos Continuos
Ventajas

* incremento en la productividad por reducción de los tiempos

de preparado del bioreactor.

•permite determinar distintos parámetros cinéticos (µ max,

KS, Yx/s, etc).

* al poder controlar µ es posible trabajar a una µ óptima

para la síntesis del producto de interés.
 Cultivos Continuos
Ventajas

*ideal para realizar estudios fisiológicos y optimización de

medios de cultivo

*Condiciones constantes Genómica, transcriptomica,

proteomica, metabolómica

* posibilidad de adaptar el proceso a las capacidades del

bioreactor.

* ideal para aislamiento de un determinado tipo de

microorganismo por enriquecimiento y selección.
 Cultivos Continuos
Desventajas

* mayor posibilidad de contaminación

* los instrumentos de control deben permanecer

estables durante largos períodos de tiempo

* mutaciones, pérdida de la cepa original

Balance de biomasa Balance de substrato

dx ds µ X
= (µ - D)X = D (SR – s) -
dt dt Yxs

D KS
X = Yxs (SR – s) s=
(µmax – D)

D KS
X = Yxs SR -
(µmax – D)
 Balance de Producto

dp = qP X - D p
dt

QP = D p
 Permite estimar parámetros cinéticos

1 KS 1 1 µmax
= +
D µmax s µmax KS

mS 1 mS
1 +
=
YXS µ YG YG

Técnica de lavado

ln Xt = ln Xo + (µMAX – D) t µmax