FAMILIA BUNYAVIRIDAE

INTRODUCCION

La familia Bunyaviridae toma su nombre del virus Bunyamwera (BUNV), que fue aislado
originalmente de los mosquitos Aedes en el Bosque Semliki, Uganda, durante un estudio de
fiebre amarilla en 1943. Tras el aislamiento del BUNV, se descubrieron varios arbovirus
adicionales que claramente no encajan en los grupos antigénicos clásicos del grupo
arbovirus A y B (que ahora están incluidos en la familia Flaviviridae o
el género Alphavirus de la familia Togaviridae ) y se asignaron a lo que se conoció como
arbovirus del grupo C. Durante la próxima década, nuevos descubrimientos de virus y
estudios serológicos detallados, junto con análisis bioquímicos y morfológicos,condujo al
concepto de un supergrupo Bunyamwera que consiste en grupos de virus que podrían
vincularse mediante reacciones serológicas cruzadas repetibles. Los serogrupos (virus
relacionados por su reactividad en cualquier prueba serológica) y los complejos (miembros
estrechamente relacionados de un serogrupo) se definieron adicionalmente para estos
virus.
La familia Bunyaviridae se constituyó en 1975 hasta abarcar un grupo grande de virus
transmitidos por artrópodos que comparten propiedades morfológicas, morfogénicas y
antigénicas. La familia incluye más de 300 miembros serológicamente distintos, divididos en
5 géneros: Bunyavirus, Phlebovirus (incluyendo el grupo Uukuniemi), Nairovirus, Hantavirus,
géneros que infectan animales y el género Tospovirus que infectan a más de 400 especies
en 50 familias de plantas. Esta familia es responsable de las fiebres hemorragicas y la
encefalitis de california. Los hantavirus se distribuyen en todo el mundo: pero los virus
Europeos y Asiaticos provocan fiebre hemorragica con sindrome renal y los virus
americanos causan sindrome pulmonar.
La mayoría de los miembros de la familia causan una infección durante toda la vida del
insecto vector. Varios tipos de insectos como mosquitos, garrapatas, moscas y otros
artrópodos pueden transmitir a los Bunyavirus, pero cada virus infecta a un número
limitado de especies de insectos y hospederos vertebrados. Muchos Bunyavirus dependen
de un animal hospedero para su persistencia en la naturaleza, pero la transmisión de
humano a humano generalmente no ocurre, ya que éste es un hospedero accidental.
Los sistemas de aislamiento mayormente usados son: ratones lactantes y cultivo celular.
Algunos virus se replican bien en ambos sistemas, pero otros sólo pueden ser aislados en
cultivo celular u hospederos vertebrados especiales. La gran mayoría de Bunyavirus replican
en cultivos celulares como BHK-21, vero E-6 o C6-36, que son frecuentemente usados para
aislamiento viral y la preparación de stocks de virus. Muchos de estos virus producen un
daño a la monocapa de células de vertabrados o insectos, conocida como efecto citopático.
Existen 4 generos de importancia medica: 1) los bunyavirus, que incluyen el grupo de la
encefalitis de California; 2) los nairovirus, que incluyen los virus de la friebre hemorrágica
del Congo-Crimea; 3) los flebovirus, que incluyen los virus de la fiebre del valle del Rift y el
virus de la fiebre por flebótomos y 4) los hantavirus, que incluyen los agentes de la fiebre
hemorrágica de Corea, la nefropatía epidémica y el sinfrome pulmonar por hantavirus.
La forma de transmisión de diferentes géneros de Bunyavirus es diversa, sin embargo son
semejantes dentro de cada uno de ellos. Miembros del género Bunyavirus, Phlebovirus y
Nairovirus son transmitidos por artrópodos y se mantienen en un ciclo vector-vertebrado;
el género Tospovirus también son transmitidos por artrópodos, pero mantienen un ciclo
vector-planta; pero el género Hantavirus es mantenido exclusivamente en un ciclo animal-
animal. En general, los factores que afectan a los artrópodos y por ende en la transmisión
de un agente patógeno son:
 La capacidad del virus para atravesar el intestino del artrópodo y replicarse en las
glándulas salivales, para después infectar al vertebrado.
 El tamaño de la población de artrópodos.
 Los hábitos de picadura (diurnos, nocturnos) y el alcance de vuelo del vector.
 La distribución geográfica y ecológica de cada especie de vector.
 Condiciones climáticas como: temperatura, humedad y lluvias.
Muchos Bunyavirus tienen una forma alternativa de perpetuación, manteniéndose
exclusivamente en el artrópodo por transmisión transovárica.

CARACTERISTICAS

 Propiedades bioquímicas y biofísicas

La composición y estructura de los viriones se ha deducido de estudios bioquímicos
y morfológicos. Se estimó un contenido químico total de 2% de ARN, 58% de
 proteína, 33% de lípidos y 7% de carbohidratos para UUKV. Los coeficientes de
sedimentación de los viriones varían de 400 a 500 S, y sus densidades boyantes en
sacarosa son 1.16 a 1.18 g / cm 3 , y en CsCl, 1.20 a 1.21 g / cm 3 . El tratamiento con
solventes lipídicos o detergentes no iónicos elimina la envoltura viral y da como
resultado la pérdida de infectividad para artrópodos y mamíferos. Para las plantas,
la envoltura no es necesaria para la infectividad, como se demostró en estudios con
TSWV, para lo cual el paso mecánico repetido entre las plantas dio como resultado
un virus defectuoso que no podía producir partículas envueltas pero que era capaz
de replicarse en las células vegetales.

 Estabilidad de virus a la acción de factores físicos y químicos

Los bunyavirus son sensibles a la acción del éter y los detergentes, se inactivan
calentando a una temperatura de 56 ° C durante 30 minutos y casi
instantáneamente durante la ebullición, pero conservan su actividad infecciosa
durante un largo tiempo durante la congelación. Los bunyavirus son estables en un
rango muy limitado de valores de pH de 6.0-9.0, son inactivados por los
desinfectantes de uso común.

 Antígenos
La proteína N es un transportador de propiedades específicas de grupo y se
identifica en el DSC. Las glicoproteínas (G1 y G2) son antígenos específicos de tipo
detectados en PH y RTGA. Estos son antígenos protectores, que determinan las
propiedades hemaglutinantes, que en bunyavirus no son tan pronunciadas como en
ortomixo y paramixovirus. Inducen la formación de anticuerpos neutralizantes de
virus. Las glicoproteínas son los principales determinantes de la patogenicidad, que
determinan la naturaleza organotrópica celular de los virus y la eficacia de su
transmisión por artrópodos.
Sobre la base del análisis de la reticulación en la RSK, los bunyavirus se combinan en
géneros dentro de los cuales, sobre la base de RN y RTGA cruzados, se distribuyen
entre los serogrupos.

 Reproducción de bunyavirus
 La reproducción de bunyavirus ocurre en el citoplasma de la célula, donde se forma
RNP por primera vez. Se forman tres tipos de ARNm, cada uno de los cuales
codifica el polipéptido correspondiente - L, N y los precursores de las proteínas G1 y
G2. Las proteínas virales en la célula infectada se
sintetizan rápidamente. Entonces, la proteína N
puede detectarse después de 2 horas, y G1 y G2 -
después de 4 y 6-8 horas, respectivamente. Virus
Maduración (adquisición de lípidos que contiene
cáscara externa) como resultado de la gemación
RNP, a diferencia de otros virus, no se produce
en las membranas plasmáticas de las células, y
cuando pasa a través de la pared de las vesículas
en el aparato de Golgi. Posteriormente, las
partículas virales se transportan al plasmolema
(membrana celular). El rendimiento de partículas
virales se produce por exocitosis y, a veces, por lisis celular. Bunyavirus, como otros
miembros de arbovirus, tiene la capacidad de replicarse en dos regímenes de
temperatura: 36-40 y 22-25 ° C, lo que les permite ser reproducidos, no sólo en los
vertebrados, sino también en los portadores del cuerpo - chupadores de sangre
artrópodos.

 Características del cultivo de bunyavirus y susceptibilidad a animales de laboratorio

Los bunyavirus son susceptibles a ratones blancos recién nacidos, ratas blancas y
hámsters cuando se infectan en el cerebro. Cultivos celulares de vectores, riñones
embrionarios humanos, BHK-21, fibroblastos de embriones de pollo se usan para
cultivar virus, donde no ejercen una CPD pronunciada. Los virus se pueden cultivar
en embriones de pollo. Un modelo universal para aislar los arbovirus es la infección
de los ratones blancos recién nacidos, en los que causan el desarrollo de encefalitis,
que termina en muerte.

MORFOLOGÍA
 Representación diagramática de un virión Las propiedades morfológicas varían entre los
bunyavirus en corte transversal. Familia virus en los diversos géneros, pero los viriones de
Bunyaviridae. (A) Gc, Gn, glicoproteínas
bunyavirus son esféricos, aproximadamente 80-
producidas por procesamiento de poliproteína
de ARN M; L, transcriptasa codificada por L
120 nm de diámetro, y se componen de una
RNA; ARN L, M y S, segmentos de ARN envoltura lipídica con picos de glicoproteínas,
grandes, medianos y pequeños; N, dentro de los cuales son tres circulares complejos
nucleoproteína codificada por S ARN.
de ribonucleoproteinas (RNP) compuestos de
segmentos de ARN del genoma individual asociados con el virus nucleoproteína.
Estos complejos RNP se estabilizan por una estructura de panhandle generada por
enlaces no covalentes entre secuencias palindrómicas invertidas en los extremos 3’ y
5’ de cada segmento del genoma de ARN. Las secuencias terminales son idénticas
para los tres segmentos de ARN dentro de cada especie de virus, y son críticos para
el reconocimiento por la polimerasa viral para la replicación e iniciación del genoma
vírico de la transcripción del ARNm del virus.

El genoma de bunyavirus es 11-19 kb y consiste en de tres segmentos de sentido negativo

(o ambisentido), de cadena simple ARN, designado como grande (L), medio (M) y pequeño
(S). Los segmentos de ARN difieren en tamaño entre géneros: el segmento de ARN L varía
en tamaño de 6.3 a 12 kb, el segmento de ARN M de 3.5 a 6 kb, y el Segmento de ARN S
de 1 a 2.2 kb.

El L RNA codifica una única proteína grande (L), la ARN polimerasa dependiente de ARN. El
ARN M codifica una poliproteína que se procesa para formar dos glicoproteínas (Gn y Gc)
y, en algunos casos, una proteína no estructural (NSm). El ARN S codifica la nucleoproteína
(N) y, para los miembros de la Géneros de Orthobunyavirus y Phlebovirus, una sustancia no
estructural (NS) proteína.

Estrategias de los segmentos del genoma de los miembros de la familia Bunyaviridae. Los ARN
genómicos están representados por líneas finas (el número de nucleótidos se da sobre la línea) y los
ARNm se muestran como flechas (indica la secuencia del cebador derivado del hospedador en el
extremo 59). Productos genéticos, con su tamaño (en kDa), están representados por rectángulos
sólidos. (Modificado de Elliott, 1996). BUNV, virus Bunyamwera; DUGV, virus Dugbe; HTNV, Hantaan
hantavirus; UUKV, virus Uukuniemi; Gc, Gn, glucoproteínas producidas por procesamiento de
poliproteína de ARN M; L, transcriptasa codificada por L ARN; ARN L, M y S, segmentos de ARN
grandes, medianos y pequeños; N, nucleoproteína codificada por S RNA; NSm, NS, proteínas no
estructurales codificadas por M y S RNA, respectivamente. De Fauquet, C.M., Mayo, M.A., Maniloff, J.,
Desselberger, U., Ball, L.A. (Eds.), Taxonomía de virus: octavo informe de la
Comité Internacional de Taxonomía de Virus, p. 697. Copyright r Elsevier (2005), con permiso.

Las proteínas N y NS de virus en el género Phlebovirus se traducen de un ARNm

subgenómico separado. La proteína N está codificada en la 3’-mitad del ARN S y su ARN
mensajero (ARNm) se transcribe usando ARN genómico como plantilla. Sin embargo, la
proteína NS, ocupando la 5’-mitad del misma molecula ARN S, está codificada en el sentido
complementario inverso, con el ARNm de NSs siendo transcrito solo después de la síntesis
de intermedios de ARN del genoma vírico de longitud completa; así el segmento S de ARN
exhibe una estrategia de codificación ambisentido.
Todos los bunyavirus tienen al menos cuatro proteínas de virión, incluidas dos
glucoproteínas externas (Gn, Gc), la proteína L (transcriptasa) y la proteína N
(nucleoproteína). Los viriones también contienen lípidos, con su composición que refleja la
composición de las membranas de las células huésped (principalmente derivado de la
membrana de Golgi, pero también membrana de la superficie celular) y carbohidratos
como lado cadenas en las glicoproteínas. La glicoproteína Gn (anteriormente conocido
como G2) es responsable de la unión al receptor de Serogrupos de bunyavirus de
California. El no-estructura de la proteína NS del virus de la fiebre del Valle del Rift interfiere
con la respuesta antiviral innata de las células del huésped en múltiples niveles, liderando a
la supresión global de la respuesta al interferón tipo I. Los virus son bastante sensibles al
calor y las condiciones ácidas. y son inactivados fácilmente por detergentes, solventes de
lípidos, y desinfectantes comunes.
El ARN no tiene una actividad infecciosa. A diferencia de otros virus con genoma de ARN
negativo (Orthomixoviridae, Paramixoviridae y Rhabdoviridae).
Bajo el microscopio electrónico, los bunyavirus teñidos negativamente aparecen esféricos o
pleomórficos, de 80 a 120 nm de diámetro, y muestran proyecciones de glucoproteína de
superficie (GP) de 5 a 10 nm, que están incrustadas en una envoltura lipídica bicapa de
aproximadamente 5 a 7 nm de grosor. ( Fig. 42.3 ). Con el uso de técnicas microscópicas
criomicroscopía electrónica, que conservan más precisión integridad de las partículas, se
informó de partículas LACV a ser de 75 a 115 nm de diámetro, mientras que las partículas
de RVFV y Uukuniemi(UUKV) los flebovirus tenían diámetros medios de 100 nm y 125 nm,
respectivamente, y los hantavirus de Han y Tula tenían diámetros medios de 130 a 135
nm. Se cree que los picos de consistir principalmente de heterodímeros de los dos GPs
virales, y el análisis bioquímico de partículas LACV purificados indicaron que las dos
especies GP eran equimolar y presente en aproximadamente 650 copias por virión. Los
médicos de cabecera interactúan para formar unidades morfológicas de superficie que
varían entre virus de diferentes géneros. Viriones en el virus Orthobunya el género tiene
superficies cubiertas con unidades morfológicas estrechamente empaquetadas y knoblike
sin un orden detectable. De manera similar, no se encontró un orden obvio para las
estructuras superficiales pequeñas con cavidades centrales observadas en virus
del género Nairovirus. Las apariciones de virus en el género Tospovirus se han comparado
con las de los nairovirus. Aparte de la presencia de proyecciones de GP, que se observan
como una franja de viriones teñidos negativamente, no se ha observado una estructura de
superficie distintiva para estos virus.
Los virus del género Phlebovirus tienen unidades morfológicas redondas y estrechamente
empaquetadas, de aproximadamente 10 a 11 nm de diámetro, con cavidades centrales de
aproximadamente 5 nm de diámetro. La tinción negativa de las partículas fijadas con
glutaraldehído, las técnicas de grabado por congelación y / o la tomografía crioelectrónica
demostraron que los picos de glucoproteína de UUKV y RVFV están organizados en una
red icosaédrica T-12, un arreglo hasta ahora único para los flebovirus. Para UUKV, se
observaron dos conformaciones dependientes del pH de las glicoproteínas: picos altos a
pH 7 y picos planos a pH 6. Se sugiere que a pH bajo el cambio conformacional expone
regiones hidrofóbicas en el GP, posiblemente en Gc, que facilitan la fusión entre la
membrana viral y endosomal durante la entrada del virus, un mecanismo observado para
otros virus envueltos que ingresan a las células a través de la vía endocítica.
La estructura de la superficie de los virus en el género Hantavirus también está claramente
ordenada pero tiene una apariencia cuadriculada cuadrada ( figura 42.3 ). La criotomografía
de electrones confirma que el complejo de espiga Gn-Gc tiene una simetría
cuádruple. Cada pico está compuesto probablemente por cuatro heterodímeros Gn-Gc que
forman retículos en la superficie del virión. Se cree que las interacciones laterales específicas
entre los complejos de espigas inducen la curvatura de la membrana durante el proceso de
gemación.

El interior de los viriones, como se observa por microscopía electrónica de sección delgada,
tiene una apariencia filamentosa o en espiral, presumiblemente debido a la presencia de las
ribonucleocapsidas ( figura 42.3 ). A partir de reconstrucciones de una sola partícula de
tomogramas, los viriones internos contenían cadenas paralelas o estructuras similares a
varillas que se suponía que eran complejos de ribonucleoproteína (RNP); algunos se
ubicaron muy cerca de la membrana sugiriendo interacción con las colas citoplásmicas de
una o ambas glicoproteínas.

CLASIFICACIÓN

La familia incluye más de 300 miembros serológicamente distintos, divididos en 5 géneros:

Grupo A: trasmitidos por artrópodos a vertebrados
 Ortho-Bunyavirus: Son los causantes de la encefalitis Bunyamera, la encefalitis de La
Crosse, la fiebre Bwamba, la fiebre por Guama, la fiebre por Orepuche o Sambu y la
enfermedad de Aino, entre otros.
 Phlebovirus (incluyendo el grupo Uukuniemi): Comprende 68 serotipos
antigénicamente distintos, y solo 8 se vinculan con enfermedades humanas:
Alenquer virus, Chandiru virus, Chagres virus, Naples virus, Punta Toro virus, Fiebre
del valle del Rift, Sicilian virus, Toscana virus.
 Nairovirus: Contiene los virus causantes de fiebre hemorrágica del Congo y Crimea,
y la enfermedad de la cabra de Nairobi.
Grupo B: trasmitidos por artrópodos a plantas
 Tospovirus: Contiene virus que infectan a más de 400 especies en 50 familias de
plantas.
Grupo C: trasmitidos por roedores a otros mamíferos
 Hantavirus: Son transmitidos por roedores infectados (zoonosis) y en humanos
generalmente producen dos tipos de afecciones: un tipo de fiebre hemorrágica
viral, la fiebre hemorrágica con síndrome renal (FHSR); o el síndrome pulmonar por
Hantavirus (SPHV), una afección pulmonar muy grave.

Los criterios esenciales para la inclusión en la familia son viriones envueltos de 80 a 120 nm
de diámetro ( figura 42.1 ), que contienen un genoma de ARN monocatenario tripartito de
polaridad negativa o ambisitiva, que se replican en el citoplasma y generalmente se
ensamblan en el complejo de Golgi.
La asignación a uno de los cinco géneros se basa en la falta de reactividad cruzada
serológica con miembros de otros géneros, los patrones de tamaños de las proteínas del
virión y los segmentos del genoma, la estrategia de expresión génica. y secuencias de
nucleótidos terminales conservadas de los ARN genómicos. El ICTV, a través de
los Bunyaviridae Grupo de estudio, describe los criterios para la designación de especies
individuales dentro de cada género. Estas designaciones, que se basan en datos
moleculares bastante limitados, deben tratarse con precaución y como fluidas. El campo
requiere proyectos de secuenciación organizados a gran escala para comprender con
mayor precisión las relaciones entre estos virus, y en particular para investigar la extensión
del reagrupamiento del segmento del genoma entre virus aislados. Recientemente se ha
descrito un prototipo potencial de un sexto género, el virus Gouleako. Este virus es muy
similar a los flebovirus, pero parece estar restringido a los mosquitos y no puede infectar las
células de los vertebrados en cultivo. La Tabla 42.4 enumera los miembros más notables en
los géneros definidos actualmente, y sigue una breve introducción a cada género.

Género Orthobunyavirus
El género más grande de bunyavirus es el género Orthobunyavirus, que contiene más de
170 virus con nombre que se encuentran en todo el mundo. Casi todos estos virus son
transmitidos por mosquitos y tienen ciclos de amplificación en una variedad de hospederos
de vertebrados. Entre los patógenos orthobunyavirus importantes en humanos están el
virus La Crosse (LACV) que causa encefalitis pediátrica, el virus Oropouche (OROV) que
causa una enfermedad febril debilitante y el virus Ngari que causa fiebre hemorrágica,
mientras que los virus Aino, Akabane y Cache Valley son ejemplos de virus que causan
enfermedades en animales domésticos ( Tabla 42.4 ).
La clasificación de ortobunyavirus ha demostrado ser un problema complejo. La mayoría de
los virus se colocaron en uno de los 18 serogrupos basados en la relación serológica de
anticuerpos que fijan el complemento (mediados por la proteína N) y anticuerpos
hemaglutinantes y neutralizantes (mediados por las glucoproteínas), aunque varios virus
clasificados en el género Orthobunyavirus son actualmente no está asignado a ninguno de
estos serogrupos. Los 18 serogrupos son Anopheles A, Anopheles B, Bakau, Bunyamwera,
Bwamba, Grupo C, Capim, California, Gamboa, Guama, Koongol, Minatitlán, Nyando,
Olifanstlei, Patois, Simbu, Tete y Turlock. La relación serológica varía dentro de un
serogrupo y se complica aún más por la aparición de virus reordenados naturales (e-Fig.
42.1), de modo que los virus pueden estar más relacionados con los miembros de un grupo
u otro dependiendo del ensayo utilizado.
El último informe del ICTV delinea los ortobunyavirus en 44 especies, aunque tal como se
describió anteriormente, dicha clasificación debe considerarse fluida debido a la escasez de
datos moleculares. Los estudios genéticos moleculares completos han involucrado virus en
solo 4 serogrupos, a saber, Bunyamwera, Grupo C, California y Simbu, pero las secuencias
de nucleótidos del segmento S se han obtenido para uno o dos representantes del
Anopheles A, Anopheles B , Los serogrupos Bakau, Bwamba, Nyando, Tete y Turlock. En la
mayoría de los casos, el segmento del genoma S codifica dos proteínas, N y, en un marco
de lectura superpuesto, una pequeña proteína no estructural denominada SN. Las proteínas
N y NS se traducen del mismoespecies de ARN mensajero viral (ARNm) como resultado de
la selección alternativa del codón de iniciación AUG. Sin embargo, los virus en los
Anopheles A, Anopheles B y los serogrupos Tete no muestran evidencia de tener un ORF
NS. Además, estos virus tienen proteínas N más largas que las de los otros serogrupos.

Phlebovirus Género
El género Phlebovirus contiene más de 80 virus, con aproximadamente la mitad clasificados
en nueve complejos antigénicos que se consideran como especies, mientras que 33 se
consideran especies provisionales en el género. Los virus del género Phlebovirus están
presentes en todo el mundo, con la excepción de Australia, y son más diversos en términos
de vectores artrópodos que los de los otros géneros transmitidos por artrópodos. La
mayoría de los miembros del virus están asociados con flebótomos, por lo tanto, el nombre
del género Phlebovirus (ver Tabla 42.4). Sin embargo, existen excepciones importantes,
como el virus de la fiebre del Valle del Rift (RVFV), un virus de importancia médica y
agrícola en África, que se asocia principalmente con Aedes.especies de mosquitos. Además,
el virus Uukuniemi (UUKV), que se ha utilizado en una serie de estudios de laboratorio, está
asociado con la garrapata Ixodes ricinus. Recientemente, se ha descrito un virus Flebovirus
recientemente descubierto en China (virus Huaiyangshan o fiebre severa con virus del
síndrome de trombocitopenia) que se asocia con una mortalidad humana importante y se
transmite por garrapatas Haemaphysalis.
El RVFV fue aislado por primera vez en 1930 por Daubney et al. de un cordero recién
nacido infectado como parte de una investigación de una gran epizootia de la enfermedad
que causa el aborto y una alta mortalidad en las ovejas. Desde entonces, se han observado
epizootias grandes de RVFV en diversas áreas del África subsahariana, y se han identificado
retrospectivamente brotes clínicamente compatibles ya en 1912. Pasaron varias décadas
antes de que se observaran similitudes serológicas y moleculares con los virus de la fiebre
flebotomínica. Fiebre Sandfly Virus sicilianos y de Nápoles (SFSV, SFNV) se aislaron por
primera vez de las tropas estadounidenses con enfermedad febril en la región de Palermo
de Sicilia, Italia en 1943 y Nápoles, Italia en 1944, respectivamente, mediante la inoculación
de sueros de fase aguda en voluntarios humanos y pasaje en ratones recién nacidos. Los
brotes de enfermedades humanas compatibles en la región mediterránea se remontan a la
época de las Guerras Napoleónicas, y la asociación de la enfermedad con los flebótomos ya
se sugirió en 1905.

Nairovirus Género
Los nairovirus son casi exclusivamente virus transmitidos por garrapatas, aunque se han
realizado algunos aislamientos de moscas y mosquitos de Culicoides ( cuadro 42.4). Existen
varios serogrupos, pero los más importantes son el grupo de fiebre hemorrágica de
Crimea-Congo (CCHF), que incluye el virus CCHF (CCHFV) y Hazara, y el grupo de
enfermedad ovina de Nairobi (NSD), que incluye el virus NSD (NSDV) y Virus Dugbe
(DUGV).
El género Nairovirus fue nombrado después de NSDV, que fue aislado originalmente en
Nairobi, Kenia en 1910 mediante la inoculación de ovejas con sangre de ovejas con
gastroenteritis aguda. Ahora se sabe que el virus está presente en varias partes de África y
posiblemente en la India. CCHF se reconoció por primera vez en la península de Crimea a
mediados de la década de 1940, cuando se identificó un gran brote de fiebre hemorrágica
severa entre los trabajadores agrícolas. El brote incluyó más de 200 casos y una letalidad de
alrededor del 10%. Casos similares de enfermedad se informaron posteriormente en las
repúblicas europeas y de Asia central de la antigua Unión Soviética, Rumanía y Bulgaria. Sin
embargo, el virus se aisló por primera vez de un paciente con fiebre de un día en Kisangani,
República Democrática del Congo, en 1956. Algunos años antes de que se estableciera la
conexión, pero posteriores estudios serológicos y aislamientos de virus de Asia y Europa
revelaron que los virus de los diferentes brotes y regiones geográficas eran esencialmente
el mismo virus, que luego pasó a llamarse CCHFV.

Hantavirus Género
El descubrimiento de los hantavirus se remonta a 1951 y 1953, cuando se desplegaron las
tropas de las Naciones Unidas durante el conflicto fronterizo entre Corea del Norte y Corea
del Sur. Se observaron más de 3.000 casos de enfermedad febril aguda entre las tropas,
aproximadamente un tercio de los cuales exhibieron manifestaciones hemorrágicas y se
observó una mortalidad general del 5% al 10%. La enfermedad inicialmente se denominó
fiebre hemorrágica coreana, pero ahora se conoce como fiebre hemorrágica con síndrome
renal (HFRS). A pesar de los considerables esfuerzos, se tardó unos 25 años hasta que el
ratón de campo, Apodemus agrarius, se identificó como el reservorio de roedores, y el virus
finalmente se aisló. A esos tiempos, se sabía que todos los virus identificados de la
familia Bunyaviridae eran virus transmitidos por artrópodos. Por lo tanto, fue una gran
sorpresa cuando se demostró que este virus transmitido por roedores comparte
características de virus de la familia Bunyaviridae. El virus fue llamado virus Hantaan (HTNV),
después del río Hantaan cerca de la ubicación de algunos de los casos coreanos iniciales, y
se convirtió en el prototipo del género Hantavirus.
Durante el curso de los primeros estudios en Corea, se hizo evidente que los casos de HFRS
también se estaban produciendo en las zonas urbanas. Años de investigación finalmente
demostraron que los casos urbanos en Corea, China y Japón estaban asociados con la
infección con el virus de Seúl, que es hospedado por las ratas Rattus norvegicus y R.
rattus. Durante más de 50 años, una enfermedad similar, pero generalmente más leve,
denominada nefropatía epidémica (NE) fuedescrito en varias partes de
Escandinavia. Después del aislamiento del HTNV, se demostró que el virus reacciona con el
suero de pacientes con NE de fase convaleciente. Esto condujo al descubrimiento del virus
Puumala (PUUV) como la causa de esta forma de HFRS y del ratón, Clethrionomys
glareolus, como el huésped del virus.
El evento principal más reciente en la historia de los hantavirus fue el descubrimiento del
síndrome pulmonar por hantavirus (SPH) en el suroeste de los Estados Unidos en 1993. Se
identificó un grupo de casos en la región Four Corners, que presentaba una enfermedad
similar a la gripe ( es decir, fiebre, dolor de cabeza, dolores musculares, escalofríos, etc.),
pero progresó rápidamente a una enfermedad respiratoria más grave con infiltrados
pulmonares bilaterales, insuficiencia respiratoria, shock y muerte, que ocurre
aproximadamente de 2 a 10 días después del inicio de la enfermedad en casi 50% de los
casos. En un par de semanas después del brote inicial, se descubrió que un virus
recientemente identificado, el virus Sin Nombre (SNV), era la causa de HPS, y se demostró
que el reservorio de roedores era el ratón común del venado, Peromyscus maniculatus. En
los siguientes años, se demostró que HPS se producía en todas las Américas, desde Canadá
hasta la Patagonia, y se descubrió que era causada por al menos 10 hantavirus, cada uno
asociado a una especie de roedor diferente. Durante el estudio de los hantavirus asociados
con HPS y HFRS, se descubrieron muchos hantavirus adicionales que no se sabe que estén
asociados con enfermedades humanas en una gran variedad de hospedadores de roedores
( cuadro 42.4 ).
Además de los roedores, se han aislado varios hantavirus de los insectívoros. De hecho, el
primer hantavirus aislado fue el virus Thottapalayam, de la casa-musaraña asiática, en el sur
de la India, aunque no fue reconocido como hantavirus hasta varios años después. Muy
recientemente se han identificado varios otros hantavirus asociados a
insectívoros; Curiosamente, la prevalencia en estos animales es mucho mayor que en los
roedores. Los virus transmitidos por insectívoros están ampliamente distribuidos en todo el
mundo y muestran una mayor diversidad genética que los hantavirus transmitidos por
roedores.

Género Tospovirus
Los tospovirus son virus de plantas que los trips transmiten de manera propagativa. Se
informa que al menos 13 especies de trips, en los géneros Frankliniella y Thrips , transmiten
estos virus. Varios de estos virus ahora se reconocen como de gran importancia agrícola.
La historia de los tospovirus se remonta a 1915, con el reconocimiento del marchitamiento
manchado de los tomates en Australia, y luego el posterior aislamiento en 1930 del virus de
la marchitez del tomate (TSWV), del cual el género ganó su nombre. A fines de la década
de 1940, las infecciones por TSWV se redujeron en gran medida en los Estados Unidos y
Europa occidental debido al uso de pesticidas que controlaba los trips de la cebolla, Thrips
tabaci , que probablemente era el vector principal en ese momento. La distribución
geográfica durante los años 1960 y 1970 de los trips de flores occidentales, Frankliniella
occidentalis , otro vector eficiente de TSWV, condujo a una rápida expansión de
TSWV. Ahora se sabe que el virus es de distribución mundial y se encuentra en todas las
zonas agrícolas en zonas de clima más cálido y prevalece en los cultivos de invernadero en
las zonas más templadas. En contraste con los otros miembros del género, TSWV tiene un
rango de huéspedes inusualmente amplio, con más de 925 especies de plantas, incluidas
82 familias botánicas, que se informa que son susceptibles a la infección. Estos incluyen
varios cultivos importantes como maníes, pimientos, tabaco, papas, guisantes, tomates,
apio, lechuga y flores ornamentales, con pérdidas de cosecha que ascienden a más de mil
millones de dólares. Hay 21 virus asignados al género Tospovirus, con actualmente ocho
especies reconocidas.

Estructura y organización del genoma

Genoma Viral
Los viriones contienen tres segmentos del genoma de ARN monocatenario designados
como grande (L), medio (M) y pequeño (S). Los tres segmentos de ARN de un virus tienen
los mismos nucleótidos complementarios en sus extremos 3 'y 5'. Las secuencias de
nucleótidos terminales están altamente conservadas entre los virus dentro de un género,
pero difieren de las de los virus en otros géneros ( Tabla 42.3 ).
Se predice que el emparejamiento de bases de los nucleótidos terminales forma estructuras
panhandle estables y ARN circulares no covalentemente cerrados. El soporte directo para el
emparejamiento de bases proviene de microscopía electrónica de ARN extraído de viriones,
en el que se evidenciaron tres tamaños de ARN circulares. Los segmentos de ARN se
complejan con N para formar nucleocápsides L, M y S individuales, que generalmente se
suponía que tenían simetría helicoidal, pero el análisis de nucleocápsides de RVFV aisladas
no mostró este patrón, sino más bien una apariencia similar a una cuerda. nucleocápsides
liberadas por tratamiento con detergente no iónico de los viriones a menudo aparecen
también como estructuras circulares en micrografías electrónicas, lo que sugiere que los
ARN complementarios pueden basar-par incluso cuando se compleja con la proteína en
una proporción estimada de 4% de ARN a la proteína de 96%. Esta hipótesis está
respaldada por datos que muestran la reticulación de los extremos de los ARNs encerrados
en la nucleocápside mediante el tratamiento con psoralenos, que son fotorreactivos, ácidos
nucleicos, agentes de reticulación.
Al menos una de las ribonucleocapsidas L, M y S debe estar contenida en un virión para la
infectividad; sin embargo, un número igual de nucleocápsidas no siempre se puede
empaquetar en viriones maduros, como lo sugieren varios informes de relaciones
equimolares o no equimolares de los ARN L, M y S. Los complementos desiguales de las
ribonucleocapsidas pueden contribuir a las diferencias de tamaño de los viriones
observadas mediante microscopía electrónica.
Además de las ribonucleocapsids que contienen RNA con sentido del virión (vRNA), ciertos
virus en los géneros Phlebovirus y Tospovirus encapsidan pequeñas cantidades de sentido
complementario (cRNA o antigenoma). Se encontró que el phlebovirus UUKV tenía S, pero
no el ARNc del segmento M, y el TSV de tospovirus tenía tanto ARNc M como S en
viriones. Para el ortobunyavirus, LACV, se detectó ARNc de segmento S en viriones
sintetizados en células de insecto, pero no en células de mamífero. Curiosamente, el
phlebovirus RVFV encapsuló los tres segmentos del gen cRNA, y, como se describirá más
adelante (ver "productos del segmento S"), al menos uno de los genes del cRNA puede
tener un papel en los procesos de replicación temprana.

Estrategias de codificación de genes virales

Se conocen tanto las similitudes como las notables diferencias en las estrategias de
codificación de los virus en la familia Bunyaviridae. Los virus en cada género codifican todas
las proteínas estructurales en su ARNc. Ciertos virus también codifican proteínas no
estructurales en su cRNA o en su vRNA. Por lo tanto, algunos virus en la
familia Bunyaviridae usan solo una estrategia de codificación de sentido negativo y otros
usan una combinación de estrategias de codificación de sentido negativo y ambisencia
( figura 42.2 ).
Estrategias de Segmento S
Los virus del género Orthobunyavirus tienen segmentos S más pequeños que los de otros
géneros. Algunos ortobunyavirus codifican dos polipéptidos, la proteína nucleocápside (N)
y una proteína no estructural (NS), en los ORF del cRNA (figura 42.2 ), mientras que otros
solo codifican la proteína N. Se demostró la presencia de NS en células infectadas por virus
para varios miembros del género. Solo se puede encontrar una especie de ARNm del
segmento S en células infectadas con ortobunyavirus; por lo tanto, N y NS se generan por
reconocimiento de codón de inicio alternativo por ribosomas.
Los virus Hanta y los nairovirus codifican proteínas N más grandes que los virus de otros
géneros ( tabla 42.2). Algunos hantavirus (p. Ej., Virus SNV, PUUV, Tula [TULV] y Prospect Hill
[PHV]) tienen ORF dentro del N ORF y se ha detectado una proteína NS en las células
infectadas con PUUV y TULV. No se ha detectado ninguna proteína NS en las células
infectadas con nairovirus. Solo un ARNm del segmento S, de tamaño similar a la región
codificante para N, se identificó en células infectadas con hantavirus o nairovirus, lo que
indica que la terminación de la transcripción ocurre poco después del codón de detención
de la traducción. Ciertos hantavirus (p. Ej., SNV) tienen regiones 3 'no codificantes largas
(de más de 700 nucleótidos) que contienen numerosas secuencias repetidas. Estas
repeticiones pueden ser el resultado del deslizamiento de la polimerasa en la plantilla de
ARNv.
La estrategia de codificación ambisensible de los segmentos S de los flebovirus y los
tospovirus produce N a partir de un ARNm subgenómico que es complementario del ARNv
y NS de un ARNm subgenómico de la misma polaridad que el ARNv ( figura 42.2 ).
La evidencia de que el ARNm de NS se copia de ARNc (después de la replicación del
genoma) proviene de estudios de tiempo. Para el phlebovirus UUKV, se detectó N a las 4 a
6 horas después de la infección, mientras que las NS no aparecieron hasta 8 horas después
de la infección. Del mismo modo, el ARNm para NS del TSVT de tospovirus se detectó en
células de plantas infectadas 15 horas más tarde que para N. Además, los estudios con el
virus phlebovirus Punta Toro (PTV) demostraron que los inhibidores de la síntesis proteica
detienen la producción de ARNm de NS, pero no de ARNm de N. Estos resultados sugieren
que la síntesis de proteínas debe ocurrir antes de que se pueda realizar el ARNm de NS. En
contraste, los estudios con phlebovirus RVFV demostraron la presencia de cRNAs en los
tres segmentos de RNA en viriones purificados. Además, el ARNm para la proteína NS se
detectó tan pronto como 20 minutos después de la infección, concomitante con la
aparición de ARNm para N, lo que sugiere que el ARNm de NSs codificado en ambisencia
se transcribe desde el ARN con sentido antiviral entrante.

Estrategias de segmento M
Los tamaños de los segmentos M varían desde ~ 3.600 nucleótidos a ~ 4.900
nucleótidos. Todos los segmentos M de bunyavirus codifican las dos GP de la envoltura en
una única ORF de cRNA ( figura 42.2 ). Las designaciones anteriores de G1 y G2, que se
basaban en la migración relativa de las proteínas en geles de poliacrilamida, se han
reemplazado por designaciones de Gn y Gc, que se refieren a la codificación amino
terminal o carboxi terminal de las proteínas. Como se describe a continuación, cada vez es
más claro que las funciones de las proteínas Gn y Gc se conservan entre los cinco géneros.
Algunos virus codifican proteínas NSm, y otros no. Excepto por los tospovirus, que usan
una estrategia de ambisencia para generar NSm a partir de un ARNm subgenómico, se ha
detectado un único ARNm, casi equivalente en tamaño al ARNF de ARNc, en células
infectadas por virus. Para tospovirus, se identificaron mensajes subgenómicos separados
para el precursor Gn-Gc y para NSm. NSm se detecta fácilmente en plantas infectadas y es
la única proteína no estructural del segmento M en los Bunyaviridaefamilia para tener un
papel claramente definido (es decir, es una proteína de movimiento [consulte "Productos
del segmento M" a continuación]). Otro posible papel de NSm para algunos virus puede ser
como un factor de virulencia. Por ejemplo, un RVFV genéticamente modificado que carezca
de NSm indujo una apoptosis más extensa que uno con NSm y la expresión de NSm inhibió
significativamente la escisión de caspasa 8 y 9 inducida por estaurosporina, lo que indica
que la proteína NSm suprime la apoptosis.

L Estrategias de segmento
Los segmentos L de hantavirus, ortobunyavirus y flebovirus son de tamaño similar (~ 6.500
nucleótidos), mientras que los de tospovirus y nairovirus son considerablemente más
grandes (~9.000 y 12.000 nucleótidos, respectivamente. Todos los segmentos L de virus en
la familia usan estrategias convencionales de codificación de sentido negativo. Para cada
segmento L descrito hasta ahora, hay menos de 200 nucleótidos de información no
codificante total, y no hay evidencia de regiones codificantes adicionales en el ARNc o
ARNv.

Etapas de replicación
Las etapas principales del proceso de replicación de virus en los Bunyaviridae se ilustran en
la Figura 42.4 y se resumen a continuación:
 Apego, mediado por una interacción de proteínas virales y receptores del huésped
 Entrada, por endocitosis mediada por receptor
 Desincrustación, por acidificación de vesículas endocíticas y fusión de membranas
virales con membranas endosomales
 Transcripción primaria de especies de ARNm complementarias de virus a partir de
plantillas de genoma utilizando cebadores derivados de células huésped y la
polimerasa asociada al virión
 Traducción de mRNAs L, M y S
 escisión co-traduccional de poliproteína del segmento M y escisión
postraduccional de precursores para algunos virus
 dimerización de Gn y Gc en el retículo endoplásmico (ER)
 Replicación de ARN asociada a la membrana
 síntesis y encapsidación de cRNA para servir como plantillas para vRNA o,
para genes ambisense, plantillas para mRNA subgenómico
 replicación del genoma
  Morfogénesis
 localización de N en compartimentos en ciernes
 transporte de Gn y Gc dimerizados al Golgi
 glicosilación
 adquisición de membranas hospedadoras modificadas, generalmente
mediante gemación en las cisternas de Golgi
 Fusión de vesículas citoplásmicas que contienen virus con la membrana plasmática y
liberación de viriones maduros
 más raramente, se ha observado que algunos virus en algunos tipos de
células brotan directamente de la membrana plasmática de la célula
huésped.

Adjunto y entrada

Proteínas de unión viral y receptores celulares

Los mecanismos por los cuales los miembros de la familia Bunyaviridae obtienen acceso al
citoplasma de la célula huésped parecen similares a los reportados para muchos otros virus
con envoltura. El primer paso implica una interacción entre los receptores de la superficie
celular y las proteínas de unión viral, Gn y / o Gc. La presencia de sitios neutralizantes e
inhibidores de la hemaglutinación en las proteínas Gn y Gc de los virus de flebovirus y los
hantavirus sugiere que ambas proteínas pueden estar implicadas en la unión. Aunque es
posible que ambos estén directamente involucrados, es más probable que ambos sean
necesarios debido a requisitos conformacionales que dependen de la dimerización de Gn y
Gc.
 Figura 42.4. Ciclo de replicación de virus en la familia Bunyaviridae. Los pasos en el ciclo
de replicación son los siguientes: 1. Attachment, mediado por una interacción de
proteínas virales y receptores del huésped; 2. endocitosis mediada por receptor; 3.
Desincrustación, por acidificación de vesículas endocíticas y fusión de membranas virales
con membranas endosomales; 4. Transcripción primaria de especies de RNA mensajero-
complementarias virales (mRNA) a partir de plantillas de genoma usando cebadores
derivados de células huésped y la polimerasa asociada al virión; 5. Traducción de los
ARNm L, M y S, escisión de la poliproteína del segmento M, dimerización de Gn y Gc en
el retículo endoplásmico (ER); 6. Replicación, síntesis y encapsidación de ARN asociado a
membrana para servir como plantillas para ARNv o, para genes ambisensivos, plantillas
para ARNm subgenómico, replicación del genoma; 7. Morfogénesis que incluye el
transporte de las proteínas estructurales al Golgi, glicosilación de Gn y Gc, gemación en
las cisternas de Golgi; 8. Migración de vesículas de Golgi que contienen virus a la
superficie celular, fusión de membranas vesiculares con la membrana plasmática y
liberación de viriones infecciosos. Algunos virus en algunos tipos de células pueden
crecer tanto en vesículas intracelulares como también desde la membrana plasmática.

En general, Gc parece ser la principal proteína de unión para ortobunyavirus en células de

mamíferos, mosquitos y mosquitos. Consistente con esta visión, la expresión de productos
del segmento M de tres ortobunyavirus demostró que Gc, pero no Gn, podía afectar la
unión y la entrada cuando se ensayaba en un ensayo de fusión de célula a célula y un
ensayo de transducción de pseudotipo. Sin embargo, la mitad amino terminal del
ectodominio BUNV Gc no es necesaria para la infección de células de mamífero
cultivadas, y esta región puede reemplazarse por proteína fluorescente verde (GFP) que
permite la creación de virus viables que expresan Gc-GFP quimérico en sus viriones.
Para los tospovirus, los GP de la envoltura son necesarios solo para la infección de sus
vectores artrópodos, como lo demuestra la capacidad de los mutantes deficientes en
envoltura para replicarse en las plantas después de transmisión mecánica, pero su
incapacidad para infectar a los trips. Además, el análisis de virus reordenados demostró que
las mutaciones que alteraban la ORF de Gn-Gc de TSWV suprimían la transmisibilidad por
trips. Estos estudios proporcionan evidencia indirecta de que la proteína L-polimerasa
permanece asociada con ribonucleocapsids y es activa a pesar de la ausencia de viriones
intactos.
Aunque no hay informes específicos de que Gc sea la proteína de unión de tospovirus, se
propuso la homología funcional con las proteínas Gc de otros bunyavirus en base a las
homologías de secuencia de aminoácidos detectadas para el virus de la mancha amarilla
del iris. En contraste, sin embargo, un estudio con una forma truncada soluble de TSWV Gn
expresada en baculovirus mostró la unión de esta proteína a las células epiteliales en los
midguts de trips, lo que sugiere que la Gn podría mediar en el apego en los trips. Se
informaron resultados similares con el LACV de ortobunyavirus, en el sentido de que los
viriones tratados con una proteasa que escindió Gc pero no Gn exhibieron un aumento de
la unión al intestino medio del vector de insectos, pero redujo la unión a células de
mamífero o mosquito cultivadas. Dado que ambos sistemas usan una proteína Gn en
ausencia de Gc, queda por determinar si Gn funciona para la unión cuando está en su
conformación nativa en viriones.
Los receptores de células hospedadoras no se han identificado para la mayoría de los virus
en la familia; sin embargo, se ha demostrado que los hantavirus patogénicos y no
patógenos usan integrinas β3 y β1, respectivamente, para entrar en las células endoteliales.
Se sugirió Este hallazgo para relacionarse con la patogénesis, en que la unión de hantavirus
a integrinas podrían perturbar su capacidad para regular la adhesión célula a célula y el
resultado en la característica de permeabilidad vascular de las enfermedades por
hantavirus. Además, se ha demostrado que el factor acelerador de la descomposición (DAF)
/ CD55, una proteína anclada a glicosilfosfatidilinositol (GPI), media la entrada de HTNV y
PUUV a través de la membrana apical de las células epiteliales polarizadas y gC1qR / p32,
una glicoproteína de 32 kD que interactúa con la proteína del complemento C1q, se une al
HTNV y media la infección de células pulmonares A549 cultivadas.
Entrada del genoma viral en el citoplasma del huésped
Poco después de la unión, se observaron virus en los géneros Phlebovirus y Nairovirus en
vacuolas fagocíticas. Esto sugirió un modo de entrada viral similar al descrito por primera
vez para alfavirus en los que el virus se endocitosa en vesículas recubiertas, y estudios de
inhibidores han confirmado que esto es así para los bunyavirus que infectan animales. Los
orthobunyavirus, hantavirus y nairovirus ingresan por endocitosis en fosas recubiertas de
clatrina, y las proteínas del HTNV se colocalizan con clatrina en los estudios de
inmunofluorescencia confocal. Además, el CCHFV requiere microtúbulos funcionales para la
infección. Por el contrario, la entrada de phlebovirus UUKV es predominantemente de
forma independiente de la clatrina, y los virus entran en los endosomas tempranos Rab5a +
y posteriormente en los endosomas tardíos Rab7 + y LAMP-1 +. Después de la endocitosis,
se piensa que la acidificación de las vesículas endocíticas promueve un cambio
conformacional en Gn y / o Gc que facilita la fusión de las membranas virales y celulares, lo
que permite el acceso del genoma vírico y la polimerasa al citoplasma. La infección se
bloquea si las células se trataron con cloruro de amonio, lo que impide la acidificación. El
apoyo indirecto adicional para la fusión de membrana como modo de entrada provino de
experimentos que demuestran la capacidad de los virus en la familia para mediar la
formación de sincitios a pH bajo.
Los estudios computacionales revelaron que las proteínas Gc tienen características similares
a las de las proteínas de fusión clase II identificadas para virus en
las familias Flaviviridae y Togaviridae. Dichas proteínas tienen dominios de fusión internos, a
diferencia de los dominios terminales encontrados para las proteínas de fusión de clase
I. Se obtuvo soporte experimental para este hallazgo demostrando la interacción del
péptido de fusión postulado para la proteína Gc del hantavirus, virus de los Andes (ANDV),
con membranas artificiales. Además, varias líneas de evidencia indican que el Gc de
ortobunyavirus está involucrado en la fusión de membranas. Los ensayos de sensibilidad a
proteasas, los experimentos de partición de detergentes y los estudios de unión a
anticuerpos sugieren que Gc sufre un cambio conformacional en condiciones de pH en las
que se observa fusión. Análisis mutacional de una región hidrófoba (restos 1,066-1,087) de
LACV Gc que está bien conservado entre los diferentes Orthobunyavirus apoyaron esta
noción, y los residuos que flanquean el péptido de fusión predicho en BUNV Gc (residuos
1,058-1,079) se muestran ser estructuralmente crítico para el cambio conformacional en Gc
que ocurre durante el proceso de fusión. LACV Gc solo, sin embargo, cuando se expresa a
partir de virus vaccinia recombinantes, no puede causar fusión celular, sugiriendo que una
asociación de los dos GP puede ser necesaria para la fusión de membrana, y mutaciones en
la cola citoplasmática de BUNV Gn fusión de membrana severamente indicando que Gn
también debe jugar un papel importante en el proceso de fusión. Del mismo modo para el
HTNV, se requirió que tanto Gn como Gc alcanzaran la expresión de superficie y la
actividad de fusión de célula a célula. Las mutaciones portadoras de LACV recombinante en
el péptido de fusión Gc se alteraron para el crecimiento tanto en células de mamífero como
de insecto, pero todavía eran neurotóxicas para las células neuronales, lo que implica que el
péptido de fusión es un determinante de neuroinvasión pero no necesariamente
neurovirulencia.

Transcripción y Replicación
Después de la eliminación de los genomas virales, la transcripción primaria de ARNv de
sentido negativo a ARNm se inicia por la interacción de la proteína L asociada al virión, que
es una ARN polimerasa dependiente de ARN (RdRp) y las tres ribonucleocapsas virales.
Los estudios con proteína N de hantavirus sugieren que N participa en la iniciación de la
transcripción facilitando la disociación del panhandle de ARN y permaneciendo
posteriormente unido al extremo 5 'del ARN, liberando así el extremo 3' de las
interacciones RdRp. Además, se sugirió que N era importante para la replicación actuando
como un chaperón de ARN y desplegando transitoria y continuamente el ARN para
permitirle formar estructuras más estables. El papel del N en la transcripción y la replicación
también es evidente mediante el análisis del comportamiento de las proteínas BUNV N
portadoras de mutaciones específicas, ya sea en un ensayo de minigenoma o en el
contexto de la infección por virus. Cuatro mutantes sensibles a la temperatura BUNV,
llevando sustituciones de aminoácidos individuales en N, podrían dividirse en dos grupos,
los que eran defectuosas en antigenoma de síntesis, pero no la transcripción del ARNm, y
los que eran defectuosos en la replicación pero la transcripción competente, lo que sugiere
que diferentes dominios dentro de N están asociados con diferentes actividades de síntesis
de ARN. El mecanismo por el cual los residuos en N modulan la actividad de la plantilla
requiere elucidación; Una posibilidad es que la transcripción y la replicación requieran
diferentes cofactores celulares que se unan a distintas regiones de la proteína N.
Debido a que solo se necesitan L y N para la síntesis de ARN, la ubicación de estas
proteínas debe correlacionarse con el sitio del ARN.síntesis. Para nairovirus y hantavirus, se
encontró que las proteínas N (o L y N) se localizan en la región perinuclear y tienen una
asociación periférica con las membranas perinucleares. En células infectadas con un BUNV
recombinante que expresa una proteína L etiquetada con epítopo, la microscopía de
inmunofluorescencia mostró que L tiene un patrón de tinción reticular a punteada, con
concentración de tinción en la región perinuclear, mientras que los estudios de
fraccionamiento celular mostraron que L se distribuye tanto en citosólica como fracciones
microsomales. Juntos, estos datos sugieren que la replicación del ARN bunyavirus está
asociada a la membrana, similar a la descrita para los flavivirus.

La proteína L
Para mediar en la replicación, RdRp debe afectar numerosas funciones enzimáticas. Para la
síntesis cebada de ARNm a partir de plantillas genómicas y síntesis no cebada de ARNv a
partir de plantillas de ARNc (como se describirá), RdRp lleva a cabo actividades de
endonucleasa, transcriptasa, replicasa y probablemente ARN helicasa. Los motivos comunes
a las polimerasas en general se conservan en las RdRps bunyavirales, sobre todo un motivo
de núcleo catalítico. El dominio N-terminal de las proteínas L de ortobunyato contiene un
motivo de nucleasa de aminoácido PD- (D / E) xK conservado y el dominio aislado de LACV
L exhibió actividad de nucleasa in vitro; Además, los análisis bioinformáticos indicaron que
los virus en todos los otros Bunyaviridaelos géneros contienen un dominio similar. El
dominio nucleasa de LACV tiene similitudes estructurales con el de la subunidad PA de la
polimerasa del virus de la gripe A, lo que sugiere un origen común del proceso de cap-cap
de virus con sentido negativo segmentado. Ninguna de las otras funciones se ha localizado
definitivamente en una región del gen RdRp o producto génico; sin embargo, la
comparación de dos proteínas L de nairovirus con regiones funcionalmente definidas de
otras polimerasas reveló regiones codificantes de helicasa, topoisomerasa y girasa
potenciales, así como un motivo de cisteína-proteasa N-terminal típico de la superfamilia y
proteasa de proteínas de tumores ováricos (OTU). Los análisis bioquímicos y estructurales
demuestran que además de la actividad deubiquitinasa mostrada por las proteasas OTU
celulares, la OTU de nairovirus también se dirige a la modificación ISG15 y de este modo
mejora su papel en la superación de las defensas innatas del huésped. El dominio OTU no
es requerido para la actividad de la ARN polimerasa por CCHFV en un sistema
minigenómico.
Promotores del genoma
La plantilla para la transcripción y replicación de bunyavirus no es RNA desnudo sino RNA
en forma de ribonucleocapsid. Los nucleótidos complementarios no traducidos 3 'y 5'
contienen señales tanto para la síntesis de ARNm como para la síntesis de antigenoma, y
por lo tanto son los promotores del genoma. Para los flebovirus RVFV y UUKV, los primeros
13 o los primeros 10 nucleótidos, respectivamente, del extremo 3 'del genoma son
suficientes para la actividad de síntesis de ARN.
Para el orthobunyavirus BUNV, se usó un sistema reportero minigenómico para demostrar
que la transcripción óptima requería una complementariedad exacta en los extremos 3 'y
5'; sin embargo, se podrían tolerar deleciones de uno a tres nucleótidos en el extremo 3 ',
pero no en el extremo 5'. Aunque los cambios de secuencia en varias posiciones podrían
tolerarse siempre que se mantuviera la complementariedad, algunos cambios sí redujeron
la transcripción. De manera interesante, los experimentos de mutagénesis indicaron que la
única excepción a la complementariedad (un residuo U en la posición 3 '9) era crítica para
la transcripción del promotor genómico, mientras que la posición 5' correspondiente 9
podía cambiarse sin influenciar la transcripción. Por lo tanto, la falta de correspondencia en
sí misma no es importante, pero sí lo es el nucleótido. Sin embargo, este nucleótido no
tiene que mantenerse para la actividad de transcripción del promotor
antigenómico. En conjunto, estos datos sugieren que la estructura de los panhandles es
más importante que la secuencia, pero que la secuencia también juega un papel en la
fuerza y actividad del promotor.
Para investigar más las regiones promotoras en un sistema de replicación auténtico, se
introdujeron segmentos S con extremos complementarios acortados en un sistema
genético inverso BUNV, y los virus rescatados se rastrearon para determinar la región
complementaria terminal mínima necesaria para la producción de virus. El mutante de
deleción mínimo 3 'y 5' viable en este sistema mantenía 29 de los 85 nucleótidos no
traducidos en el extremo 3 'y 112 de los 174 nucleótidos no traducidos en el extremo 5',
mientras que aquellos con regiones no traducidas más cortas no eran viables. Por lo tanto,
aunque solo se necesitan las regiones complementarias para la actividad del promotor in
vitro, la producción real de virus también requiere algunas de las secuencias únicas en las
regiones no traducidas en los extremos 3 'y 5' de BUNV.
La importancia in vivo de los términos intactos también fue sugerida por un estudio en el
que se demostró que los ARNs terminalmente eliminados se acumulaban durante el
establecimiento de infecciones persistentes con el hantavirus, virus de Seúl (SEOV). Se
formuló la hipótesis de que a medida que se acumulaban las deleciones, había menos
genomas competentes en la replicación, lo que conducía a una regulación a la baja de los
procesos de replicación, y posiblemente a la persistencia. Se encontraron deleciones
similares en los términos de ANDV M y L, pero no de genes S, lo que lleva a especular que
las diferencias observadas en la abundancia relativa de Gn y Gc en comparación con N
podrían reflejar una regulación a la baja de la expresión del segmento M de genes intactos
termini.

Primed mRNA Synthesis (Cap Snatching)

Al igual que los virus de la influenza, los virus de la familia Bunyaviridae producen la síntesis
de ARNm con oligonucleótidos protegidos que se eliminan de los ARNm del huésped. La
escisión de los cebadores tapados se lleva a cabo mediante la actividad de endonucleasa
que se encuentra en los viriones y se asocia con la proteína L. A diferencia de los virus de la
influenza, que toman los cebadores de los ARNm recién sintetizados en el núcleo de la
célula hospedadora, los miembros de los Bunyaviridaecebadores de uso familiar escindidos
de mRNAs de células hospedadoras citoplásmicas. Se ha presentado evidencia de que la
proteína N del hantavirus se une al casquete 5 'de los ARNm celulares para protegerlos de
la degradación mediada por células, y que el N se acumula en los cuerpos de
procesamiento citoplásmico (cuerpos P) donde se secuestran los casquillos 5' protegidos, y
por lo tanto puede servir como un grupo de iniciadores para iniciar la síntesis de ARNm. Un
resultado de este modo de transcripción del ARNm es la presencia de extensiones 5
'terminales de aproximadamente 10 a 20 nucleótidos heterogéneos que no se encuentran
en el ARNv. Estudios que usan anticuerpos anticap para inmunoselectar ARNm han
proporcionado pruebas directas de la presencia de tapas en los cebadores
neutralizados. Se proporcionó evidencia adicional de extensiones protegidas de ARNm
mediante un estudio de tospovirus, en el que las plantas fueron coinfectadas con TSWV y
con un virus de ARN de cadena positiva (virus del mosaico de la alfalfa). El tospovirus
adquirió extensiones de ARNm 5 'con secuencias de nucleótidos que coincidían con las del
otro virus con una preferencia por escisión en un residuo A. Se sugirió que estola
preferencia se debe a la necesidad de emparejamiento de bases en el último residuo U de
los segmentos génicos. De acuerdo con esto, estudios posteriores indicaron que se prefería
la complementariedad de bases doble y triple a los nucleótidos en los extremos de los
segmentos del gen de tospovirus, incluso más que el único residuo
complementario. Curiosamente, también se encontró que los ARNm recién sintetizados
pueden servir como donantes de cap in vitro para tospovirus, lo que sugiere un mecanismo
de "reinserción".
Otros virus en la familia también tienen preferencias de motivo de nucleótidos o
nucleótidos para la escisión de endonucleasas de cebadores bloqueados. Estas preferencias
varían entre los géneros, y algunas veces entre los virus dentro de un género. Una
secuencia de cebador preferida, o un nucleótido favorecido en el sitio de escisión debido a
una necesidad de emparejamiento de bases limitado con el genoma viral, parece ser una
característica común de la transcripción cebada para bunyavirus. En un estudio, los
nucleótidos 3'-terminales de los cebadores hospedadores neutralizados a menudo eran
similares a los nucleótidos virales 5'-terminales. Se propuso que después de la transcripción
de dos o tres nucleótidos del ARNm naciente, la polimerasa viral podría deslizarse hacia
atrás sobre la plantilla antes de una elongación adicional, lo que da como resultado una
reiteración parcial de la secuencia 5'-terminal. Se propuso una extensión de este concepto,
denominada "cebado y realineamiento", para la transcripción de ARNm de hantavirus. De
acuerdo con este modelo (e-Fig. 42.2), cebado por oligonucleótidos huésped con un G
resto terminal sería iniciar la transcripción mediante la alineación en el tercer nucleótido del
molde de ARN viral (C residuo). Después de la síntesis de unos pocos oligonucleótidos, el
ARN naciente podría realinearse deslizando hacia atrás dos nucleótidos en las secuencias
terminales repetidas (AUCAUCAUC), de modo que G se convierte en el primer nucleótido
de las extensiones 5 'no tratadas (e-Fig. 42.2). La eliminación frecuente de una o dos de las
repeticiones triplete en ARNm hantaviral apoya este tipo de mecanismo de deslizamiento y
sugiere que a veces la preparación inicial podría comenzar en el residuo C del tercer
triplete en la secuencia conservada en lugar de en el C del segundo triplete.
La transcripción de bunyavirus es única entre los virus de ARN de sentido negativo porque
la síntesis de ARNm viral funcional requiere una síntesis de proteína en curso, un hallazgo
que a primera vista parece incompatible con la presencia de una transcriptasa de virión. En
ausencia de síntesis de proteínas, solo se producen transcritos cortos in vivo e in vitro. Si
el in vitrola reacción se complementa con lisado de reticulocitos de conejo, sin embargo, se
sintetizan ARN de longitud completa. El requisito de traducción no está en el nivel de
iniciación del ARNm, sino más bien durante el alargamiento o, más precisamente, para
evitar que la transcriptasa termine prematuramente. Un modelo para tener en cuenta estas
observaciones propuso que, en ausencia de unión a ribosomas y traducción de proteínas, la
cadena de ARNm naciente y su plantilla pueden formar pares de bases, lo que impide la
progresión de la enzima transcriptasa. Recientemente, este modelo (e-Fig. 42.3) ha sido
probado usando plantillas de modelos BUNV que contienen codones de terminación
traslacionales, y los resultados mostraron que la traducción de ARNm nacientes previno la
terminación de la transcripción. Por lo tanto, orthobunyavirus junta transcripción y
traducción, una característica que se encuentra comúnmente en procariotas, pero es rara
en células eucariotas.

Terminación de la transcripción
Para segmentos de genes con codificación de sentido negativo simple, la síntesis de ARNm
de segmento M y S termina aproximadamente de 40 a 100 nucleótidos antes del final del
molde de ARN del genoma. Aunque la mayoría de los otros virus de ARN de cadena
negativa usan un tramo de nucleótidos ricos en residuos U para señalizar la terminación de
la transcripción y poliadenilación, no se ha identificado consistentemente dicho tracto para
los miembros de la familia Bunyaviridae . Esto es respaldado por evidencia experimental
que muestra que los ARNm de bunyavirus no son 3 'poliadenilados, pero muchos tienen el
potencial de formar estructuras de tallo-lazo que probablemente están involucradas en
mejorar la traducción de ARNm virales.
Mediante el uso de un sistema indicador que implicaba segmentos S mutados, la señal de
terminación de la transcripción para el BUNV de ortobunyavirus se mapeó a una región de
33 nucleótidos dentro de la región 5 'no traducida del segmento S. Dentro de esta región,
un motivo de 6 nucleótidos, 3'-GUCGAC-5 'fue crítico para la terminación de la
transcripción. Además, el cambio de los nucleótidos en esta señal de terminación de la
transcripción reveló una segunda señal de terminación de la transcripción corriente abajo,
que tenía un motivo de 5 nucleótidos, 3'-UGUCG'-5 ', que también se encontró dentro de
la región de 33 nucleótidos del sitio aguas arriba , y que parcialmente superpuso el motivo
crítico de 6 nucleótidos. El hallazgo de que no hay regiones ricas en U en la señal de
terminación de la transcripción de BUNV es consistente con la ausencia de colas poli-A en
los ARNm.
La comparación de estas secuencias del segmento S con las de otros ortobunyavirus reveló
un alto grado de conservación, lo que sugiere que motivos similares también funcionan
para la terminación de la transcripción en todo el género, al menos para los segmentos
S. Se observó un motivo similar al del segmento BUNV S dentro del BUNV L, pero no en el
segmento M. El mapeo experimental de los sitios de terminación de ARNm BUNV L y M no
ha sido reportado.
El análisis de los L mRNAs de SNV hantavirus y RVFV y Toscana (TOSV)
phleboviruses mostró que eran co-terminales con el L vRNA plantilla, sugiriendo L mRNA
síntesis termina por la escorrentía de la plantilla de RNA.
Se propuso un motivo rico en U como el sitio de terminación para el ARNm M y un motivo
rico en C (CCCACCC) como sitio de terminación para el ARNm S de hantavirus SNV. Mapeo
finode sitios de terminación de ARNm M-segmentos para tres flebovirus (RVFV, TOSV, y
SFSV) mostró que la terminación se produjo inmediatamente después de un dominio C-rico
en la plantilla en un motivo conservado 3 'C 1- 3 GUCG / A-5'. Aunque anteriormente se
pensaba que la propia región rica en C estaba implicada en la terminación del transcrito.
La deleción de esta región en el molde de ARN no afectaba a la terminación específica en
el motivo identificado.
Se pensó inicialmente que el mecanismo de terminación de la transcripción de los genes
ambisensibles de flebovirus y tospovirus implicaba una estructura secundaria de ARN en la
región intergénica. Sin embargo, el reanálisis de las predicciones por computadora de la
formación de horquilla en estas regiones intergénicas sugiere que es poco probable que se
formen debido a su complejidad o baja energía. Cartografía detallada de sitios de
terminación de ARNm para el N y el ARNm NSs de RVFV, TOSV, y flebovirus SFSV mostró
que los extremos 3 'de los ARNm contenían la mayor parte de la secuencia intergénica y de
hecho se superponen entre sí. Además, se produjo la terminación para ambos mensajes
con el mismo motivo, 3'-C 1-3 GUCG / A-5 ', como en el segmento M. Por lo tanto, están
presentes dos copias de este motivo, una en el vRNA (genoma) y otra en el cRNA
(antigenoma). La conservación de este motivo en genomas virales que muestran una
considerable diversidad de secuencias sugiere un mecanismo similar para la terminación de
la transcripción en los segmentos M y S. La eliminación de cualquiera de las copias del
motivo en el segmento RVFV S no evitó la terminación correcta del ARNm de NS o NS no
afectado, pero los virus mutantes se atenuaron en crecimiento en comparación con el tipo
silvestre.

Replicación del genoma

El cambio de la transcripción primaria a la replicación requiere que RdRp, actuando solo o
en conjunto con factores virales o celulares indefinidos, en algún punto, cambie de la
síntesis de ARNm cebado a la transcripción que inicia independientemente en el extremo 3
'preciso de la plantilla para producir una transcripción de larga duración. Los procesos
involucrados en hacer ese cambio de la transcripción primaria a la replicación del genoma
no han sido completamente definidos para ningún miembro de la
familia. Presumiblemente, se requiere algún factor viral o de huésped para señalizar una
supresión de la señal de terminación de la transcripción responsable de la generación de
ARNm truncado y también para evitar la adición de las estructuras rematadas y metiladas al
extremo 5 'de los ARNc. No hay duda de que la replicación del genoma y la subsiguiente
transcripción secundaria se previenen mediante inhibidores de la traducción como la
cicloheximida. Estos resultados indican que se requiere una síntesis proteica continua para
la replicación del genoma. Aunque no se ha demostrado, es probable que se requiera la
síntesis de N para la replicación del genoma, como se describió para otros virus de ARN de
cadena negativa, como el rhabdovirus, el virus de la estomatitis vesicular y el virus Sendai
paramixovirus. Para estos virus, la encapsidación por N parece servir como una señal de
antiterminación, permitiendo así la síntesis del genoma completo. como se describió para
otros virus de ARN de cadena negativa tales como el rhabdovirus, el virus de la estomatitis
vesicular y el virus Senji paramixovirus. Para estos virus, la encapsidación por N parece
servir como una señal de antiterminación, permitiendo así la síntesis del genoma
completo. como se describió para otros virus de ARN de cadena negativa tales como el
rhabdovirus, el virus de la estomatitis vesicular y el virus Senji paramixovirus. Para estos
virus, la encapsidación por N parece servir como una señal de antiterminación, permitiendo
así la síntesis del genoma completo.
También se postuló un modelo de cebado y realineamiento para la transcripción no
imprimible de ARNv y ARNc de hantavirus, excepto que la transcripción se iniciaría con la
alineación de pppG en el tercer nucleótido (residuo C) del ARN molde. Después de la
síntesis de varios nucleótidos, el deslizamiento de la polimerasa realinearía el ARN naciente
de modo que el residuo inicial G cebador sobresaldría de la plantilla. Se teorizó
adicionalmente que la actividad nucleolítica de la proteína L podría eliminar el G
sobresaliente, dejando un residuo de U monofosforilado en el extremo 5 'naciente. La
presencia de la U monofosforilada en el ARN de HTNV se demostró experimentalmente (e-
Fig. 42.2).
La evidencia indirecta que sugiere que se usa un método de iniciación de cebado y
realineamiento por los flebovirus se obtuvo mediante el uso de un sistema de transcripción
reconstituido para estudiar la secuencia de reconocimiento de la polimerasa en los
extremos 3 'del ARN del segmento S ambisensivo del RVFV. En esos estudios, el análisis
mutacional de los nucleótidos terminales reveló que los primeros 13 nucleótidos son
necesarios para el reconocimiento de la polimerasa, pero que uno de los dos dinucleótidos
terminales (UGUG) podría eliminarse sin efectos perjudiciales sobre la transcripción. Estos
datos también sugieren que la realineación no es un requisito previo para el inicio de la
transcripción. Por el contrario, un estudio reciente que utilizó el sistema BUNV minigenome
mostró que la polimerasa viral podía reparar tanto inserciones como deleciones en
modelos de ARN modelo, aunque esto no parecía implicar el mecanismo de cebado y
realineamiento.
Los esquemas de transcripción y replicación basados en la información anterior se
presentan en las Figuras 42.5 y 42.6 .

Señales de encapsidación
Las señales para la encapsidación de los vRNA y cRNA de ortobunyavirus, flebovirus,
nairovirus y hantavirus se encontraron completamente dentro de las regiones 3 'y 5' no
codificadoras de los informadores de minireplicones. Mutacional el análisis de estas
regiones terminales para BUNV reveló una secuencia conservada dentro de los nucleótidos
20-33 del extremo 5 'del vRNA que era crítico para el empaquetamiento. Se observaron
eficiencias de empaquetamiento variables para las minirreplicones derivadas del segmento
L, M y S, y el empaque pareció ser independiente para cada una.

Factores del huésped

Más allá de la necesidad de cebadores derivados del huésped para iniciar la síntesis de
ARNm, se sabe poco sobre el papel que los factores del hospedador podrían desempeñar
en la replicación viral. Un factor de transcripción del huésped putativo es una proteína de
~40 kD aislada del vector de insecto principal de TSWV, y se demostró que se une al RdRp
viral en su extremo C y al ARN viral en su extremo N-terminal. Tanto esta proteína como los
lisados de reticulocitos fueron necesarios para la síntesis de ARN in vitro, lo que indica que
también se requieren otros factores celulares. La expresión de esta proteína en células de
mamíferos los hizo permisivos a la replicación de TSWV. Como es el caso para varios otros
virus de ARN de cadena negativa, la proteína de choque térmico 90 (Hsp90) pareció
esencial para la replicación del virus La Crosse en que los rendimientos de virus
disminuyeron en células tratadas con inhibidores de Hsp90 como geldanamicina debido a
la desestabilización de la viralidad. Proteína L.

Traducción y procesamiento de proteínas virales

Los polipéptidos virales se sintetizan poco después de la infección, con los mRNAs S y L
traducidos en ribosomas libres y los mRNAs M traducidos en ribosomas unidos a la
membrana. Los productos de expresión varían entre los géneros, e incluso dentro de un
género.

Productos de segmento S: N y NS
La proteína N es el producto viral más abundante en viriones y células infectadas. N juega
varios papeles importantes en la replicación viral. Además de proteger el ARN de la
degradación, N también interactúa con L y Gn y Gc, aunque las interacciones exactas no se
han definido. Un paso crítico en la interacción de N con ARN parece ser la capacidad de
oligomerización de las proteínas. Las características de oligomerización de las proteínas N
son probablemente diferentes entre los géneros, lo que probablemente no sea
sorprendente, dadas las diferencias de tamaño de las proteínas N, que oscilan entre
aproximadamente 19 kD para ortobunyavirus a 54 kD para hantavirus y nairovirus ( cuadro
42.2 ).
Los estudios de entrecruzamiento químico indicaron que las ribonucleocapsidias del virus
de la Flebotomia RVFV, ya sea de viriones auténticos o reconstituidas a partir de proteína
expresada bacterialmente, contienen dímeros de N como el oligómero básico. La estructura
cristalina del RVFV N se ha determinado a una resolución de 1.93Å, que reveló que tiene un
nuevo plegamiento completamente helicoidal sin una hebra de unión a ARN de superficie
cargada positivamente como se ve para otras proteínas de nucleocápside del virus ARN de
sentido negativo. La digestión extensiva con ribonucleasas de ARN auténticos o
reconstituidos liberaba multímeros de ARN-N heterogéneos, consistente con la falta de
simetría helicoidal observada. Por el contrario, las proteínas N del hantavirus forman
trímeros estables, que se postulan para ensamblarse en el ARN viral, seguidas por
interacciones proteína-proteína adicionales que encapsidan el ARN completo. Es probable
que las interacciones N-N sean electrostáticas, con la participación de residuos amino y
carboxilo terminales. Se predice que los residuos N-terminales de las proteínas N
hantavirales forman un dominio en espiral enrollado, que proporciona un disparador para
la trimerización y que contiene residuos cargados importantes para las interacciones
intermoleculares. Para TULV, se demostró que los aminoácidos carboxi-terminales 393 a
398 eran cruciales para la trimerización, y los aminoácidos 1 a 43 proporcionaban una
región de interacción secundaria. Estos datos concuerdan con los obtenidos con otros
hantavirus (p. Ej., SNV y HTNV, para los que se demostró que las regiones carboxi-
terminales y amino-terminales están implicadas en las interacciones homotípicas de N).
Orthobunyavirus y tospovirus, a diferencia de los hantavirus, no parecen ensamblar
trímeros preformados, sino que se multimerizan mediante la adición de una proteína N a la
vez. Esta hipótesis proviene de experimentos de entrecruzamiento químico, que mostraron
que la proteína N del orthobunyavirus BUNV fue capaz de formar un rango de multímeros
desde dímeros hasta estructuras de alto peso molecular, con una preponderancia de
tetrámeros. La eliminación de porciones N- o C-terminales de N previno la multimerización
y también dio como resultado la pérdida de funcionalidad en un sistema de
minireplicones. Los datos se interpretaron para indicar un modelo de multimerización de
cabeza a cabeza y de cola a cola de proteínas N individuales. Del mismo modo, para el
tospovirus TSWV, el análisis de mutantes de deleción identificó regiones de unión tanto en
los extremos amino y carboxi del N, y aunque el tipo de multímeros formado no se
examinó de cerca, parece ser un proceso de adición continuo, como el propuesto para los
ortobunyavirus.
Además de la interacción proteína-proteína, las regiones amino y carboxi-terminal del
tospovirus N también estuvieron implicadas en la unión del ARN. Por el contrario, el sitio de
unión a ARN del hantavirus N se localizó en una región central conservada de la
proteína. Para los hantavirus y los bunyavirus, los estudios de unión al ARN con proteínas N
marcadas con hexahistidina y expresadas en bacterias indicaron que el N interacciona
preferentemente con el extremo 5 'del ARNv. En otro estudio, se demostró la unión de alta
afinidad del ARN hantaviral al ARN panhandle, y se sugirió que tal unión se relaciona
específicamente con los trímeros, que podían discriminar el ARN viral del no viral, mientras
que las subunidades monoméricas o dímeras se unían inespecíficamente al ARN. Estos
datos sugieren un requisito para la multimerización de N para una unión y encapsidación
de ARN eficaz, e implican a la estructura de panhandle como desencadenante de la
encapsidación. Hantavirus N también es capaz de unirse a mRNAs de 5 '(para generar una
fuente de cebadores para el inicio de la transcripción, ver más arriba), y los sitios de unión
de cap y vRNA se han mapeado para separar dominios dentro de la proteína. Además, la
unión a la tapa de ARNm induce un cambio conformacional en N, y el N estructuralmente
modificado cargado con el cebador protegido se une específicamente al extremo 3
'conservado de ARNv.
Los segmentos S de virus en los géneros Phlebovirus y Tospovirus y algunos virus en
los géneros Orthobunyavirus y Hantavirus producen proteínas NS así como proteínas
N. Los tamaños de NS varían desde 10 kD para ortobunyavirus y hantavirus hasta más de
50 kD para tospovirus ( figura 42.2 ). La proteína NS del virus de FVRV phlebovirus se
fosforila y se acumula en los núcleos de células infectadas, donde forma estructuras
fibrilares (e-Fig. 42.4). Los principales sitios de fosforilación de las NS RVFV se asignaron a
residuos de serina situados cerca del extremo carboxi de la proteína. Los estudios de
expresión revelaron que las fibrillas podrían formarse en ausencia de otras proteínas
virales; sin embargo, si se eliminaba la región carboxi-terminal de las NS, las NS todavía se
transportaban a los núcleos, pero no se fusionaban en fibrillas. Se observaron estructuras
fibrilares similares de las NS para algunas cepas de TSWV, pero las estructuras aparecieron
solo en el citoplasma.
Al comparar las secuencias de aminoácidos deducidas de las NS para cinco flebovirus
diferentes, se revelaron homologías de solo 17% a 30%. Sin embargo, la comparación de las
secuencias del gen NSs para un número de cepas de un RVFV de phlebovirus único mostró
que ciertas áreas estaban altamente conservadas. Estos datos sugieren que puede haber
una fuerte presión evolutiva para mantener distintas porciones de las NS para virus
individuales, pero que el resto de la proteína puede divergir sin afectar la función de las NS.
Un trabajo anterior sugirió que las NS de los flebovirus y los tospovirus solo se sintetizaron
después de la replicación viral; es decir, después de que el vRNA ambisentido se haya
copiado a cRNA y el mRNA se haya transcrito a partir de cRNA. Sin embargo, trabajos
recientes con RVFV indican que, al menos para este phlebovirus, los viriones pueden
encapsidar el cRNA y que las ribonucleocapsids de cRNA entrantes pueden servir como
plantillas para el ARNm de NS. El resultado de esto es que las NS están presentes al
principio de la infección y pueden tener un papel en la replicación temprana. Las NS de tres
ortobunyavirus inhibieron la síntesis de ARN BUNV de una manera dependiente de la dosis
en un sistema de minireplicones. Los resultados se sugirieron para indicar una función para
las NS en la regulación de la actividad de RdRp. Además de un posible papel de las NS en
los procesos de replicación temprana, las proteínas NS tienen otras funciones importantes
en la infección viral, como el antagonismo del interferón, la determinación del rango del
huésped y el silenciamiento génico. Estos efectos se describirán en el contexto de los
efectos en las células anfitrionas.

Productos de segmento M: Gn, Gc y NSm

La envoltura viral GPs Gn y Gc se traducen a partir de un único ARNm complementario a
vRNA. El precursor de poliproteína de Gn y Gc no se ve en las células infectadas, y se ha
observado solo por traducción in vitro de transcritos de ARN en ausencia de membranas
microsómicas. Para la mayoría de los virus, tanto Gn como Gc están precedidos por
secuencias de señales; por lo tanto, la escisión del precursor de poliproteína probablemente
esté mediada por la signalasa del huésped. Se ha demostrado que un motivo
pentapéptido, WAASA, que está altamente conservado entre los hantavirus, es el sitio de
escisión de poliproteína para HTNV, mediante análisis mutacional de la secuencia señal que
precede a Gc.
Los productos del gen del segmento M tienen un contenido de cisteína de
aproximadamente 4% a 7%. Las posiciones de estos residuos están altamente conservadas
en los productos del segmento M de virus relacionados, lo que sugiere que puede
producirse una formación amplia de puentes disulfuro y que las posiciones pueden ser
cruciales para determinar el plegamiento correcto de los polipéptidos. La estructura
secundaria de las proteínas también está implicada en la inmunogenicidad, como lo indica
el descubrimiento de que los epítopos neutralizantes o protectores a menudo son no
lineales.
Todas las poliproteínas del segmento M exhiben números variables de regiones
transmembrana predichas, y una secuencia hidrófoba en el extremo carboxi, indicativa de
una región de anclaje a la membrana. Por lo tanto, los productos de traducción del
segmento M de virus en la familia Bunyaviridae son proteínas típicas de membrana de clase
1, con el extremo amino expuesto en la superficie del virión y el extremo carboxi anclado en
la membrana.
Las proteínas Gn y Gc de todos los virus de la familia poseen oligosacáridos unidos a
asparagina. El examen de los oligosacáridos unidos a las proteínas Gn y Gc de
ortobunyavirus reveló que Gc tiene principalmente glicanos de alto contenido de manosa,
mientras que Gn contiene oligosacáridos tanto complejos como novedosos de tipo
intermedio. Por el contrario, los médicos generales de los hantavirus eran en su mayoría de
tipo manosa alta. Estos hallazgos indican que las proteínas se procesan de forma
incompleta a través del Golgi. Esto probablemente esté relacionado con la retención de Gn
y Gc en el Golgi, donde se produce el ensamblaje, y que se discutirá más a fondo.
Los nairovirus son únicos entre los virus de la familia, ya que tienen tanto enlaces en N
como una región de carbohidratos fuertemente enlazados a O (un dominio similar a la
mucina, como se describirá). Los eventos de procesamiento del producto genético del
segmento M difieren entre los géneros. Los virus Hanta producen solo Gn y Gc, mientras
que algunos virus en los géneros Phlebovirus y Orthobunyavirus producen NSm del mismo
mRNA del segmento M que Gn y Gc. La proteína NSm de ortobunyavirus está codificada
entre las proteínas Gn y Gc. Su perfil de hidropatía sugiere que es una proteína unida a la
membrana, y los estudios de expresión demostraron que se localiza en el aparato de Golgi
junto con Gn y Gc. Aunque no se ha identificado una función para esta proteína, se sugirió
que podría estar involucrada en la facilitación del ensamblaje del virión en el aparato de
Golgi.
Para el RVFV de phlebovirus, una NSm de aproximadamente 14 kD se escinde del extremo
amino del producto de traducción de poliproteína (e-Fig. 42.5). Los estudios de secuencia
revelaron cinco codones de iniciación de traducción en marco (AUG) corriente arriba del
extremo amino de Gn. El análisis mutacional de esos codones indicó el cuarto y quinto AUG
para traducir Gn y Gc. Mientras que NSm se originó a partir del segundo AUG y se tradujo
un polipéptido de 78 kD, que representa NSm y Gn sin escindir, del primer AUG. Los
experimentos de pulso-persecución no revelaron una relación precursor-producto entre las
proteínas de 78 y 14 kD; por lo tanto, parece que el uso del primer y segundo AUGs,
respectivamente, es lo que dicta la generación de estas proteínas. Tanto el NSm de 14 kD
como el polipéptido de 78 kD se encuentran en abundancia en células infectadas con
RVFV, lo que sugiere que podrían desempeñar un papel en la replicación o la
morfogénesis.
Una NSm aún mayor (~30 kD) se escinde del extremo amino de la poliproteína del
segmento M del phlebovirus, PTV (e-Fig. 42.5). Los estudios de expresión in vitroindicaron
que ambas GP de la cubierta podrían producirse en ausencia de la región codificante de
NSm, pero no se han informado otros estudios para evaluar el uso de los 13 posibles
codones de iniciación de la traducción presentes en la información de codificación de
NSm. No fue evidente ninguna homología entre las proteínas NSm de PTV y RVFV.
En contraste con los phlebovirus PTV y RVFV transmitidos por mosquitos, el flebotivirus
UUKV transmitido por garrapatas no produce una NSm (e-Fig. 42.5). El primer (y único)
codón de iniciación que precede a las secuencias de las GP de envuelta está localizado a 17
aminoácidos corriente arriba del extremo amino de Gn; por lo tanto, la proteína Gn de
UUKV parece ser análoga al producto de fusión NSm-Gn de 78 kDa producido por RVFV
(aunque no existe una homología de secuencia obvia de estos productos predichos). Hasta
que se pueda asignar una función a NSm, es imposible determinar si UUKV se replica en
ausencia de dicha función o si se realiza cualquier función que se requiera sin eliminar una
porción del extremo amino de Gn.
Los eventos de procesamiento de poliproteínas de segmento M para nairovirus son más
complicados y parecen diferir de los de otros virus en la familia (e-Fig. 42.6). Las secuencias
de nucleótidos de DUGV, CCHFV y NSDV revelaron una estrategia de codificación similar a
otros virus en la familia, es decir, una única ORF. Los estudios sobre CCHFV demostraron
que la poliproteína es co-traduccionalescindido en precursores PreGn de 140 kD y PreGc de
85 kD y una proteína NSm de 15 kD. PreGn se procesa al Gn maduro de 37 kD por escisión
con una proteasa de la vía secretora celular, SKI-1, siguiendo un motivo consenso, RRLL, al
principio de la ruta secretora. La escisión de SKI-1 genera un subprecursor de los otros dos
polipéptidos que se escinde mediante una proteasa similar a furina a fines de la ruta
secretora. Este sitio de escisión está completamente conservado entre varias cepas de
CCHFV, lo que sugiere que tiene importancia para la replicación viral o la patogenicidad. La
porción aminoterminal de este subprecursor es un polipéptido altamente variable (entre las
cepas de CCHFV) con características de tipo mucina, que incluyen numerosas serinas,
treoninas y prolinas y una glicosilación extensa predicha ligada a O. La porción carboxi-
terminal del subprecursor es un polipéptido no estructural de 38 kD. Después de la escisión
de Furin, se producen las proteínas secretadas GP38, GP85, GP160 y la proteína de tipo
mucina; presumiblemente estos productos reflejan amplias diferencias de glicosilación
ligada a O. Aunque el precursor PreGc también posee un motivo de escisión similar al SKI-1,
la escisión de SKI-1 no pudo demostrarse para esta proteína, por lo que es probable que
una enzima relacionada sea responsable del procesamiento para producir Gc madura.

ENFERMEDADES CAUSADAS POR BUNYAVIRIDAE

MIEMBROS DEL GENORO HANTAVIRUS

Los más de 20 virus miembros del género Hantavirus son los únicos virus en la familia
Bunyaviridae que no son transmitidos por artrópodos. Son transmitida entre los roedores
por el desprendimiento a largo plazo en saliva, orina y heces. Varios de los virus son
zoonóticos y la causa de una enfermedad humana grave. A pesar de que hay superposición
en los síndromes de enfermedad respectivos, cuatro del Viejo Mundo (Asia y Europa) Los
hantavirus causan una enfermedad multisistema centrada en los riñones (fiebre
hemorrágica con síndrome renal), mientras que varios del Nuevo Mundo (las Américas) los
hantavirus causan enfermedades multisistémicas centrado en los pulmones (síndrome
pulmonar por hantavirus).
La patogenicidad de algunos de los recién descubiertos virus aún no ha sido determinados.
Algunos virus también infectan otras especies de mamíferos, como los caballos, pero esto
es poco común y no contribuye al ciclo de vida de los virus o al riesgo de enfermedades
humanas. Un aspecto importante de los hantavirus ha sido el nivel de dificultad que rodea
su descubrimiento. Por ejemplo, durante la guerra de Corea de 1950-1952, miles de las
tropas de las Naciones Unidas desarrollaron una enfermedad caracterizada por fiebre,
dolor de cabeza, manifestaciones hemorrágicas y insuficiencia renal, con shock y
mortalidad sustancial de 5-10%. A pesar de la intensa investigación, el agente etiológico de
esta enfermedad sigue siendo un misterio durante 28 años hasta que el prototipo
hantavirus, virus Hantaan (el nombre se deriva del río Hantaan en Corea), se aisló de las
rayas ratón de campo, Apodemus agrarius. Hantaviruses descubierto desde entonces
también han sido tan difíciles de aislar en cultivo celular o animales experimentales que los
ensayos de RT-PCR, y ahora la próxima generación de estrategias de secuenciación
(metagenómica) se convierte en herramientas clave para la detección y caracterización de
estos virus en muestras clínicas y tejidos de roedores.
Más de 200,000 casos de fiebre hemorrágica con insuficiencia renal el síndrome se informa
cada año en todo el mundo, con más de la mitad en China. Rusia y Corea informan cientos
a miles de casos; se informan menos de Japón, Finlandia, Suecia, Bulgaria, Grecia, Hungría,
Francia y los países balcánicos.
En 1993, un hantavirus zoonótico no reconocido previamente enfermedad, fue reconocida
en la región suroeste de los Estados Unidos. La enfermedad fue manifiesta, no tan fiebre
hemorrágica con síndrome renal, pero más bien como una aguda síndrome de dificultad
respiratoria. El virus causante es ahora llamado virus Sin Nombre, y al menos otros ocho
hantavirus desde entonces se han identificado como causas de la enfermedad pulmonar
síndrome, incluido Bayou, Black Creek Canal, los Andes y los virus de Laguna Negra. Casos
de hantavirus síndrome pulmonar se ha informado en todo Estados Unidos, y de Canadá a
Argentina. Otro Nuevo Mundo hantavirus han sido descubiertos recientemente, pero su
patogenicidad en humanos aún no se ha determinado.

FIEBRE HEMORRÁGICA CON SINDROME RENAL

(VIEJO MUNDO)
HANTAVIRUSES
El sello distintivo de la infección por hantavirus en el reservorio de roedores hosts es una
infección persistente, generalmente de por vida, inaparente
con la diseminación del virus en la saliva, la orina y las heces. Humano
enfermedad implica contacto con roedores contaminados
excremento, generalmente en invierno cuando hay un máximo de
contacto humano con roedores En un estudio de patogénesis emblemático,
H.W. Lee inoculó el roedor reservorio, A. agrarius,
con el virus Hantaan y siguió el curso de la infección
por titulación de órganos, serología e inmunofluorescencia de virus.
La viremia fue transitoria y desapareció como neutralizante
aparecieron anticuerpos. Sin embargo, el virus persistió en
varios órganos, incluidos los pulmones y los riñones. Títulos de virus
en hisopos de orina y garganta fueron alrededor de 100 1000 veces
mayor durante las primeras semanas después de la inoculación que posteriormente
y los animales eran mucho más infecciosos para la jaula
compañeros o ratones cercanos durante este período.
Cuatro características esenciales definen el contexto global de la
fiebre hemorrágica con síndrome renal
(Tabla 22.1): (1) los virus, per se; (2) su depósito
roedores anfitriones; (3) el lugar de los casos humanos; (4) la gravedad
de casos humanos Al menos cuatro virus están involucrados:
Virus Hantaan, Dobrava-Belgrado, Seúl y Puumala.
Por lo general, los virus Hantaan y Dobrava-Belgrado
causa enfermedad grave, con tasas de mortalidad de 5 15%.
El virus de Seúl causa una enfermedad menos grave y el virus Puumala
causa la forma menos grave de la enfermedad (tasa de mortalidad)
menos del 1%), que se conoce en Escandinavia como "nefropatía
epidemia. "Hay tres patrones de localización de enfermedad:
rural, urbano y de laboratorio adquirido. La enfermedad rural es
causado por el virus Hantaan, que está muy extendido en China,
Asia Rusia y Corea, y el virus Dobrava-Belgrado en
los Balcanes y Grecia. La enfermedad rural también es causada por
Virus Puumala en el norte de Europa, especialmente en
Escandinavia y Rusia. La enfermedad urbana es causada por Seúl
virus; ocurre en Japón, Corea, China y el sur y
Norteamérica. Cada virus tiene un roedor reservorio específico
anfitrión. Para el virus Hantaan este es el ratón de campo rayado,
Apodemus agrarius; para el virus Dobrava-Belgrado es el
ratón de cuello amarillo, Apodemus flavicollis; para el virus de Seúl
es la rata de Noruega, Rattus norvegicus; y para Puumala
virus es el ratón de campo, Clethrionomys glareolus.
No hay evidencia de que exista ninguna enfermedad clínica
en animales que no sean humanos El curso clínico de
fiebre hemorrágica severa con síndrome renal en humanos
implica cinco etapas superpuestas: febril, hipotensor,
oligúrico, diurético y convaleciente, no todos son visto en todos los casos. El inicio de la
enfermedad es repentino,
con intenso dolor de cabeza, dolor de espalda, fiebre y escalofríos.
La hemorragia, si ocurre, se manifiesta durante la fiebre
etapa como enrojecimiento de la cara e inyección de la conjuntiva
y membranas mucosas. Una erupción petequial puede
también aparece. Hipotensión repentina y extrema de vascular
la fuga puede precipitar un choque hipovolémico mortal, y
pacientes que sobreviven y progresan a la etapa diurética
muestran una función renal mejorada, pero aún pueden morir de shock
o complicaciones pulmonares. La etapa convaleciente puede
dura de semanas a meses antes de que se complete la recuperación. los
enfermedad en las personas afectadas se cree que tiene una
base inmunopatológica, ya que los anticuerpos específicos de virus son
presente, generalmente desde el primer día que el paciente presenta
para atención médica.
El diagnóstico se realiza mediante la detección del antígeno en los tejidos
(generalmente por inmunofluorescencia) o serológicamente por
ELISA de captura de IgG e IgM. El ELISA de captura de IgM es
utilizado como herramienta de diagnóstico primaria, pero los ensayos de RT-PCR son
ahora disponible para la detección de virus. El aislamiento del virus es difícil:
los virus deben pasarse a ciegas en cultivo celular
(más comúnmente células Vero E6) y se detectan mediante inmunología
o medios moleculares. Envío de muestras de diagnóstico
de los sitios de la enfermedad a menudo es menos que satisfactorio,
y todo el trabajo de laboratorio en Hantaan y otros altamente patógenos
los hantavirus deben realizarse bajo estricta biocontención
condiciones
Varias vacunas de virus Hantaan inactivadas han sido
desarrollado y utilizado en Asia. La clave para prevenir el hantavirus
infecciones es control de roedores, incluyendo hacer casas
y tiendas de alimentos a prueba de roedores y eliminación de roedores muertos
y excrementos de roedores de las habitaciones humanas. Sin embargo,
control de los reservorios de roedores de gran alcance de Hantaan,
Los virus de Seúl y Puumala no son posibles en la mayoría de los entornos
en que ocurre la enfermedad; sin embargo, en algunas situaciones
su entrada en las viviendas puede ser minimizada.
Ha habido varios casos en los que
roedores llevados a laboratorios, colonias establecidas de
ratas de laboratorio e incluso cultivos celulares derivados de ratas
han portado o han sido contaminados con hantavirus, y
han llevado a la transmisión del virus a los cuidadores de animales y
personal de investigación. Prevención de la introducción de virus en
colonias de ratas de laboratorio requieren la entrada en cuarentena de nuevos
stock (o entrada solo de acciones conocidas sin virus), prevención
de acceso por roedores silvestres, y pruebas serológicas regulares.
SÍNDROME PULMONAR HANTAVIRUS
(NUEVO MUNDO) HANTAVIRUSES
Virus de Sin Nombre y otros hantavirus del Nuevo Mundo
Probablemente han estado presentes por eones en porciones extensas
de las Américas habitada por Peromyscus maniculatus
y otras especies de roedores reservorios; estos virus fueron
reconocido en 1993 solo por el número y la agrupación de casos humanos de un síndrome
de enfermedad muy distintivo en el oeste de los Estados Unidos. Un gran aumento en
números de roedores después de dos inviernos especialmente húmedos y una aumento
consecuente de semillas de piñón y otros roedores la comida contribuyó al número de
casos humanos. El temporal distribución de la enfermedad humana refleja una primavera-
estacionalidad del verano (aunque han ocurrido casos durante todo el año), una vez más
coincidiendo con los patrones de comportamiento de hospedadores de reservorios de
roedores. Al igual que con el Viejo Mundo hantavirus, cada virus del Nuevo Mundo tiene
un reservorio específico roedor host: virus Sin Nombre, el ratón del ciervo, Peromyscus
maniculatus; Virus de Nueva York, el blanco ratón, Peromyscus leucopus; Canal de Black
Creek virus: la rata de algodón, Sigmodon hispidus; Virus Bayou- la rata de arroz, Oryzomys
palustris; y el virus de los Andes, el rata de arroz pigmeo de cola larga, Oligoryzomys
longicaudatus. Al igual que los hantavirus que causan la fiebre hemorrágica con síndrome
renal, aquellos que inducen hantavirus pulmonar el síndrome no causa enfermedad en su
depósito de roedores anfitriones, pero pueden inducir una enfermedad grave en infectados
humanos. El virus se desprende de la saliva, la orina y las heces de roedores durante al
menos varias semanas, y probablemente la vida del animal La transmisión de roedores a
roedores ocurre por contacto cercano y por mordeduras o arañazos. La transmisión y la
infección humana probablemente también se producen por la inhalación de aerosoles o
polvo que contiene secas infectadas saliva o excreta de roedores. Síndrome pulmonar por
Hantavirus en humanos típicamente comienza con fiebre, mialgia, dolor de cabeza,
náuseas, vómitos, tos no productiva y dificultad para respirar. Como enfermedad progresa,
hay edema pulmonar, derrame pleural, y progresión rápida de la enfermedad, con la
muerte seguido a menudo en horas o días. La recuperación puede ser tan rápida como el
desarrollo de signos clínicos que amenazan la vida. Las lesiones son esas del síndrome de
dificultad respiratoria aguda, con enfermedad pulmonar congestión y edema y neumonía
intersticial. La transmisión de persona a persona parece ser rara, pero tiene sido confirmado
en casos de infección por virus Andes, y ahora se recomiendan técnicas estrictas de
enfermería de barrera para el manejo de casos sospechosos. Deterioro funcional de la
integridad del endotelio vascular con una mayor permeabilidad capilar, especialmente de la
vasculatura pulmonar, y la posterior hipovolemia, es fundamental para la patogenia de la
neumonía inducida por hantavirus síndrome. Sin embargo, aunque existe una amplia
infección por hantavirus de células endoteliales en individuos afectados, los hantavirus no
lisan las células infectadas. Es incierto qué causa este aumento severo, a menudo fatal en
permeabilidad capilar que finalmente resulta en hipovolemia shock, pero los mediadores de
citoquinas inducidos por virus probablemente contribuir (llamada tormenta de citocinas).
Los hallazgos clínicos y hematológicos de hantavirus síndrome pulmonar son
característicos, pero el síndrome
el diagnóstico generalmente se realiza mediante la demostración de anticuerpos para el
virus infeccioso o uno de sus parientes cercanos (típicamente usando ELISA de captura de
IgM). Aislamiento del virus de pacientes es muy difícil, pero el ácido nucleico viral es
fácilmente detectado por RT-PCR. Las pruebas serológicas generalmente se realizan para
evaluar la infección en hospedadores de roedores reservorios, debido al riesgo biológico
asociado con el aislamiento del virus. Extensos programas de educación pública han sido
desarrollados aconsejar a las personas sobre la reducción del riesgo de infección,
principalmente mediante la reducción de hábitats de roedores y suministros de alimentos
en y cerca de las casas, y tomando precauciones al limpiar áreas contaminadas por
roedores. El último implica rodentproofing contenedores de alimentos y alimentos para
mascotas, trampas y envenenamiento roedores en y alrededor de las viviendas, eliminando
hábitats de roedores cerca de las viviendas, uso de respiradores y mojado superficies abajo
con detergente, desinfectante o hipoclorito solución antes de limpiar las áreas que pueden
contener excremento de roedores También se han desarrollado recomendaciones para
equipos y prácticas específicos para reducir riesgos cuando se trabaja con roedores
capturados en el medio silvestre, especialmente cuando esto implica obtener muestras de
tejido o sangre: estas incluir el uso de trampas de captura en vivo, ropa de protección y
guantes, desinfectantes adecuados y transporte seguro embalaje. MIEMBROS DEL GENO
NAIROVIRUS VIRUS DE LA ENFERMEDAD DE LAS OVEJAS NAIROBI Virus de la enfermedad
ovina de Nairobi, un miembro del género Nairovirus, es altamente patógeno para ovejas y
cabras. los el virus es enzoótico en el este de África y está estrechamente relacionado los
virus ocurren en Nigeria (virus Dugbe en el ganado), y en India y Sri Lanka (virus Ganjam en
ovejas y cabras). El virus no es contagioso entre los mamíferos; más bien, es transmitido por
todas las etapas de la señal marrón de la oreja, Rhipicephalus appendiculatus, en el cual
hay transovárica y la infección trans-stadial y el transporte a muy largo plazo en garrapatas
adultas (hasta 2 años). El vertebrado reservorio host del virus sigue siendo desconocido; el
virus tiene no se ha encontrado en rumiantes silvestres u otros animales en áreas
enzoóticas. En Kenia, las ovejas y las cabras adquieren la infección cuando son
transportados desde los distritos del norte a Nairobi zona. Después de un corto período de
incubación, hay fiebre alta, enteritis hemorrágica y postración. Animales afectados puede
morir dentro de unos días, y las ovejas embarazadas abortan. La mortalidad en ovejas es de
hasta 90%. Infecciones subclínicas también ocurren, y los animales recuperados son
inmunes. Diagnóstico se realiza clínicamente y mediante examen patológico macroscópico;
eso puede ser confirmado por el aislamiento del virus y la identificación de aisla
inmunológicamente o por simple inmunodifusión pruebas en extractos de tejidos utilizando
virulencia hiperinmune
antisuero El control depende principalmente de acaricidas
tratamientos para controlar el tic del vector, que es también el
vector de la enfermedad protozoaria de importancia económica,
Fiebre de la costa este Ambos vivos atenuados e inactivados
las vacunas son efectivas para prevenir la enfermedad en las ovejas.
El virus no se considera un humano significativo
patógeno, aunque se aisló de una persona con un
enfermedad febril leve.
CRIMEA-CONGO HEMORRÁGICO
VIRUS DE LA FIEBRE
Virus de la fiebre hemorrágica de Crimea-Congo, miembro de la
género Nairovirus, es la causa de una zoonosis importante
enfermedad (fiebre hemorrágica de Crimea-Congo) que ha sido
reconocido durante muchos años en Asia central y oriental
Europa. No hay evidencia de enfermedad clínica en animales
aparte de los humanos, pero la infección en animales domésticos
es la base de la importancia general de este
enfermedad. Ahora se sabe que este virus es enzoótico de
China occidental, a través de Asia Central a India, Pakistán,
Afganistán, Irán, Iraq, Turquía, Grecia y otros países
de Medio Oriente, Europa del Este, y la mayoría de
África sahariana y subsahariana. En los últimos años, hay
se han repetido los brotes de la enfermedad en Turquía
y los países del Golfo Pérsico, especialmente en conexión
con matanza y matanza de ovejas tradicionales
prácticas. La fiebre hemorrágica de Crimea-Congo es emergente
problema, con cada vez más casos reportados
cada año desde muchas partes del mundo, y aumentando
detección de anticuerpos en poblaciones animales. Por ejemplo,
en encuestas serológicas, más del 8% del ganado en varias regiones
de África han demostrado ser seropositivos.
El virus es mantenido por un ciclo que involucra transovárica
y transmisión trans-estacional en Hyalomma spp.
y muchas marcas relacionadas. Las garrapatas larval y ninfal se vuelven
infectado cuando se alimenta de pequeños mamíferos y tierra
pájaros y garrapatas adultas cuando se alimentan de
rumiantes domésticos (ovejas, cabras y ganado). Infección en
Los rumiantes salvajes y domésticos producen viremia de alto título
eso es suficiente para infectar las garrapatas de alimentación.
La enfermedad en humanos es una fiebre hemorrágica severa.
El período de incubación es de 3 7 días; el inicio es abrupto, con
fiebre, dolor de cabeza severo, mialgia, espalda y abdominal
dolor, náuseas y vómitos, y marcada postración. Es
una de las hemorragias humanas más dramáticas
fiebre, caracterizada por una hemorragia sustancial dentro del
subcutis y en las superficies de la mucosa que recubren el tracto gastrointestinal
y tractos genitourinarios. También hay hígado marcado
necrosis y lesión tanto del miocardio como del centro
sistema nervioso; la tasa de letalidad es comúnmente

15 40%. La enfermedad afecta principalmente a agricultores, veterinarios,

mataderos, carniceros y otros que vienen
en contacto con ganado, trabajadores forestales y otros que vienen
en contacto con garrapatas infectadas. El virus también se transmite
por contacto directo con infectados subclínicamente
animales víricos, por ejemplo, durante el atraque de ovejas,
cizallamiento, administración antihelmíntica y veterinaria
procedimientos. El virus también es contagioso y puede transmitirse
de humano a humano, especialmente en hospitales.
El diagnóstico se realiza mediante la detección del antígeno en los tejidos
(generalmente por inmunofluorescencia) o anticuerpos IgM
(mediante ELISA de captura). Los ensayos de RT-PCR en tiempo real son ahora
estándar para el virus de la fiebre hemorrágica de Crimea-Congo
detección. El aislamiento del virus ha demostrado ser difícil: el virus es
muy lábil, envío de muestras de diagnóstico de lo habitual
sitios de la enfermedad a menudo es menos que satisfactorio, y todos los laboratorios
el trabajo debe realizarse bajo contención máxima
condiciones
Las vacunas inactivadas se han desarrollado y utilizado en
ensayos a pequeña escala, pero generalmente no están disponibles.
La prevención basada en el control de vectores es difícil debido a
las grandes áreas de hábitat de garrapatas boscosas y arbustivas
involucrado. Un enfoque de prevención importante sería
la aplicación, en áreas endémicas de Asia, el Medio
Oriente y África, de las normas de seguridad
granjas y mercados de ganado, mataderos y otros lugares de trabajo
donde hay un contacto de rutina con ovejas, cabras,
y ganado. El riesgo individual se puede minimizar en las personas que viven
en zonas endémicas evitando las picaduras de garrapatas a través de
inspección de la ropa y aplicación de repelentes.
MIEMBROS DEL GENO
ORTHOBUNYAVIRUS
VIRUS DE AKABANE
El virus de Akabane es mejor conocido por sus efectos teratogénicos en
rumiantes, con epizootias estacionales de pérdida reproductiva
(mortalidad embrionaria / fetal, aborto) y congénita
artrogriposis e hidranencefalia están bien descritas
en el ganado en Australia, Japón e Israel. El virus puede
causar pérdidas reproductivas similares y desarrollo
defectos en ovejas y cabras. Virus de Akabane y / o de cerca
los virus relacionados se producen en gran parte de África y Asia,
además de Australia.
Características clínicas y epidemiología
Infección del virus de Akabane de rumiantes no preñados típicamente
es subclínico, pero algunas cepas del virus Akabane en
Japón y Corea pueden causar encefalitis aguda en el ganado de
cualquier edad. La infección de bovinos o ovejas preñadas puede llevar a

uno de los dos resultados: muerte del feto y aborto, o nacimiento, a veces prematuro, de
progenie congénita defectos Los fetos afectados característicamente tienen una gran
defectos cavitarios del sistema nervioso central (hidranencefalia) y anormalidades
musculoesqueléticas severas (artrogriposis), por lo tanto el aborto o el nacimiento a
menudo se acompaña por distocia. Fetos nacidos con hidranencefalia generalmente no
pueden pararse después del nacimiento; aquellos menos severamente afectado puede
manifestar incoordinación marcada y una variedad de otros déficits neurológicos ("terneros
simulados"). Aunque los vectores del virus Akabane siguen siendo concluyentemente
probado, se cree que el virus se transmite en Japón por Aedes spp. y Culex spp. mosquitos,
y en Australia por el mosquito hematófago, Culicoides brevitarsis. Como el virus Akabane
es un virus transmitido por artrópodos infección, su transmisión es estacional. El tipo y
severidad de los signos clínicos reflejan la etapa de gestación en la cual infección fetal tuvo
lugar, y en rebaños practicando todo el año partos, todo el espectro de lesiones y
resultados se puede observar. Patogénesis y patología Después de la picadura de un
insecto infectado, el virus infecta el Rumiante preñado (vaca, cabra u oveja) generalmente
sin produciendo signos clínicos, y llega al feto desde el circulación materna La infección
fetal da como resultado ambos encefalomielitis y polimiositis y replicación del virus dentro
del sistema nervioso central en desarrollo conduce a destrucción del cerebro en desarrollo
y posterior hidranencefalia. En general, cuanto antes el virus llegue al desarrollando el
cerebro, peor es el defecto teratogénico; en casos severos hay una ausencia total de la
cerebral hemisferios, que son reemplazados por sacos llenos de líquido. los las lesiones
fetales más graves en el ganado resultan de una infección en 3 4 meses de gestación.
Artrogriposis, el otro altamente manifestación característica de la infección fetal con El virus
Akabane se caracteriza por atrofia muscular y la fijación anormal de varias extremidades,
generalmente en flexión. En el ganado, la artrogriposis es el resultado de la infección entre
4 y 6 meses de gestación. Gravemente afectado los fetos generalmente mueren y son
abortados, mientras que los que están vivos en el nacimiento a menudo debe ser
sacrificado. En ovejas y cabras, debido a el período más corto de gestación, la ocurrencia
secuencial de hydranencephaly y artrogriposis como se observa en el ganado no se
produce. Los corderos o niños afectados son frecuentemente nacido con múltiples lesiones
severas en el cerebro y la musculatura, y puede tener hipoplasia de los pulmones u otra
órganos. Las lesiones histológicas observadas también varían con el tiempo de gestación en
que ocurre la infección Terneros infectados al final de la gestación tienen una
polioencefalomielitis no supurativa, a menudo asociado con una parálisis flácida
al nacer. Animales afectados con artrogriposis congénita tiene pocas anormalidades graves,
que no sean limitadas o no movimiento de sus articulaciones. Microscópicamente, hay
cambios degenerativos severos en los cuernos del motor de la espina dorsal cordón y
puede haber cambios degenerativos en el músculo esquelético. Las lesiones asociadas con
hidranencefalia pueden variar desde pequeñas lesiones quísticas a la virtual ausencia de la
hemisferios cerebrales y reemplazo con líquido llenado sacos meníngeos. Evaluación
histológica de los tejidos de animales con hidranencefalia-artrogriposis severa a menudo
ingrato como las lesiones cavitarias en el cerebro afectado están típicamente rodeados por
parénquima con relativa arquitectura normal. En el ganado, el cerebelo rara vez, si alguna
vez, afectada, una característica diferencial útil para distinguir de otras infecciones
congénitas como virus bovino viral virus de la diarrea, sin embargo, hipoplasia / atrofia del
cerebelo ocurre en algunos terneros congénitamente infectados con otros ortobunyavirus
como Aino y Schmallenberg virus. Diagnóstico En áreas enzoóticas, diagnóstico de
infección por virus Akabane puede ser sugerido por clínico, patológico y epidemiológico
observaciones (ocurrencia estacional), pero con mayor frecuencia por examen patológico
bruto. Diagnóstico confirmado por la detección de anticuerpos específicos en suero o
líquidos (pleural, pericárdico) recogido de fetos abortados o de terneros recién nacidos,
niños o corderos antes de la ingestión de calostro. Alternativamente, la RT-PCR específica
del virus puede ser utilizado para detectar ARN viral en muestras de formato incorrecto
fetos, especialmente del sistema nervioso central o en el suero de animales con infección
aguda, aunque la viremia solo dura unos días. El virus es difícil o imposible para aislar
después de terneros, crías o corderos infectados congénitamente nacen. Sin embargo, el
virus puede ser recuperado de la placenta, cerebro o músculo de fetos abortados, o de
tejido muestras tomadas de fetos extraídos por cesárea antes del parto normal o después
de la matanza de la presa. El aislamiento del virus se lleva a cabo en cultivos celulares o por
vía intracerebral inoculación de ratones lactantes. ARN viral residual puede detectarse a
partir de una variedad de órganos mediante RT-PCR. Inmunidad, Prevención y Control La
infección con el virus Akabane induce inmunidad duradera, y los brotes generalmente se
ven en los márgenes de endémica regiones como la distribución de insectos vectores
tiende a fluctuar bajo la influencia de la variación climática. Naï¨ve animales importados a
regiones endémicas también están en riesgo. Ambos vacunas inactivadas y atenuadas en
vivo están disponibles para inmunización protectora del ganado contra Akabane
Infección vírica. Vacunas de virus inactivadas producidas en la célula la cultura ha
demostrado ser segura y eficaz, y también son utilizado como vacunas combinadas contra
otras infecciones virales (por ejemplo, virus Aino). VIRUS DE SCHMALLENBERG Virus de
Schmallenberg, el primer miembro europeo de la Simbu serogrupo de ortobunyavirus, fue
descubierto en finales de 2011 cerca de la frontera alemana / holandesa. Rápidamente
después de eso, el virus se extendió por gran parte del continente y las Islas Británicas (ver
https://flutrackers.com/forum/forum/ animal-diseases-of-concern-excludes-h5n1 /
schmallenbergvirus / 124383-schmallenberg-virus-in-europe-map-information- por país-
enero-2013). El virus infecta domésticamente y rumiantes salvajes, pero no hay evidencia de
que los humanos son susceptibles Al igual que el virus Akabane, el virus Schmallenberg es
transmitido por vectores, siendo transmitido principalmente por Culicoides mosquitos
mordedores (C. obsoletus sensu stricto, C. scoticus, C. chiopterus, C. dewulfi, C.
nubeculosus). Adulto infectado los rumiantes no muestran signos (infección subclínica) o
solo signos clínicos leves e inespecíficos, como fiebre, diarrea, o reducción de la producción
de leche durante unos días. De considerablemente mayor importancia es la capacidad del
virus para cruzar la placenta para causar un nacimiento prematuro, nacimiento de un bebé
muerto o nacimiento de crías severamente malformadas después de que las presas naïve
son infectado durante un período vulnerable de gestación. El resultado de la infección
congénita de rumiantes con Espejos del virus Schmallenberg que se describen para
Akabane virus. Los corderos o terneros infectados congénitamente pueden mostrar
diversos grados de artrogriposis, hidranencefalia, tortícolis, cifosis, lordosis, escoliosis,
anquilosis y brachygnia, la gravedad de lo que refleja la gestación edad del feto en la
infección (Fig. 22.3). El adverso impacto de la infección por el virus de Schmallenberg es
mayor en ovejas que en ganado. El diagnóstico del aborto inducido por el virus de
Schmallenberg y / o anomalías congénitas se confirma por el detección de ácido nucleico
viral en tejidos fetales (cerebro, placenta, meconio, o hisopos para el cabello), o mediante la
detección de anticuerpos específicos de virus en sangre de corazón fetal (fetos abortados)
o en suero recogido antes de la ingestión de calostro (recién nacidos). La viremia es
transitoria (1 6 días) en adultos rumiantes, pero el ácido nucleico viral puede ser detectado
por RTPCR durante un período prolongado en los tejidos linfoides, particularmente en los
ganglios linfáticos mesentéricos. Schmallenberg los anticuerpos específicos del virus son
detectables en el suero por al menos 2 años después de la infección. Anticuerpos
neutralizantes adquiridos después de la infección o la vacunación previene la reinfección
con Schmallenberg virus. Las vacunas inactivadas están disponibles en Europa. los El uso de
repelentes o insecticidas puede considerarse reducir el riesgo de exposición de animales
susceptibles a vectores potencialmente infectados por virus, aunque esto es raramente
práctico con el ganado que se mueve libremente. además, el
FIGURA 22.3 (A) Infección por virus de Schmallenberg (SBV), cordero muerto. Tortícolis, escoliosis,
artrogriposis y tinción leve con meconio. (B) SBV
infección, cordero muerto. La sección sagital media del cráneo muestra una calota engrosada, una pequeña
cavidad cerebral, una microencefalia y una braquignia inferior.
(C) infección por SBV, ternero muerto. Tortícolis, artrogriposis, tinción leve con meconio y membranas
placentarias. (D) infección por SBV, mortinato
becerro. La sección media sagital del cráneo muestra hidrocefalia y un mesencéfalo y tronco encefálico
pequeños. De Peperkamp, N.H., Luttikholt, S.J., Dijkman, R.,
Vos, J.H., Junker, K., Greijdanus, S., et al., 2015. Anomalías congénitas ovinas y bovinas asociadas con
infección intrauterina con Schmallenberg
virus. Veterinario. Pathol. 52, 1057 1066, con permiso.

diseño de programas de mejoramiento que minimicen el número

de vacas y ovejas inmunológicamente inocentes en el
etapa de gestación durante la temporada de mayor
la actividad vectorial puede ayudar a reducir la ocurrencia de
infecciones fetales.
CACHE VALLEY Y OTROS
TERATOGENIC ORTHOBUNYAVIRUSES
Virus Cache Valley, que es miembro de otro serogrupo
(Bunyamwera) dentro del género Orthobunyaviridae,
es la causa de brotes esporádicos de artrogrifosis
síndrome (idéntico al causado por
Virus Akabane y Schmallenberg) en ovejas, pero no en ganado
en los Estados Unidos. El virus Cache Valley se transmite
por los mosquitos (Anopheles quadrimaculatus) y es ampliamente
distribuido en Norte y Centro América. Los ciervos son
considerado como un importante reservorio natural del
virus. El virus Cache Valley es zoonótico; infecciones humanas
esporádicamente resulta en encefalitis. Del mismo modo, varios virus
relacionados con el virus de Akabane o el virus de Schmallenberg pueden causar
anomalías congénitas similares en los rumiantes, aunque
solo los virus Aino y Shamonda han sido asociados con
enfermedad que ocurre naturalmente en el ganado.
LA CROSSE Y OTRAS CALIFORNIA
ENCEFALITIS SEROGROUP VIRUS
El serogrupo de California en el género Orthobunyavirus
incluye al menos 14 virus individuales, cada uno de los cuales es
transmitido por mosquitos y tiene un estrecho rango de vertebrados
hosts y una distribución geográfica limitada. Ahi esta
no hay evidencia de que se asocie ninguna enfermedad clínica con
estos virus en animales que no sean humanos sin embargo, el
infección en reservorios animales hospedadores y mosquitos es la
clave para la comprensión y prevención de los asociados
enfermedades humanas El patógeno zoonótico más importante en
el serogrupo de California es el virus La Crosse, que se mantiene
por transmisión transovárica en Aedes triseriatus, un
mosquito arbolado de crianza de los árboles, y es amplificado por
un ciclo de mosquitos vertebrado de mosquitos que implica silencio
infección de roedores del bosque, como ardillas y ardillas listadas.
El virus ocurre en todo el este y medio oeste
Estados Unidos; un virus estrechamente relacionado, raqueta de nieve
virus liebre, ocupa un nicho similar en Canadá. Mayoria de los casos
ocurrir durante los meses de verano en niños y jóvenes
adultos que están expuestos a mosquitos vectores en bosques
áreas Los humanos son huéspedes sin salida, y no hay humanos
transmisión humana. La encefalitis causada por La
El virus Crosse es relativamente benigno en comparación con el causado
por otros virus encefalíticos, pero claramente puede ser devastador
a pacientes individuales: alrededor del 10% de los niños desarrollan
convulsiones durante la enfermedad aguda y algunas desarrollan
paresis persistente y discapacidades de aprendizaje. La mortalidad
la tasa es menos del 1%. Ahora se estima que, anualmente,
hay más de 100,000 infecciones humanas y al menos
100 casos de encefalitis en los Estados Unidos. Esta enfermedad
había estado ocurriendo regularmente durante muchas décadas,
antes de que se identificara el virus causal.
OTROS ORTHOBUNYAVIRUSES
Infecciones de animales con otros ortobunyavirus claramente
ocurrir, aunque la importancia patogénica de muchos de
estas infecciones siguen siendo conjeturales. El virus Main Drain tiene
sido implicado como una causa esporádica y poco común de
encefalomielitis en caballos, al igual que el virus Shuni. Similar,
los caballos y otros animales en regiones enzoóticas están infectados
con virus serogrupos de California relacionados con Jamestown
Virus Canyon y virus serogrupos Bunyamwera
relacionado con el virus de Northway.
MIEMBROS DEL GENO
PHLEBOVIRUS
VIRUS DE LA FIEBRE DEL VALLE DE RIFT
Características clínicas y epidemiología
Epizootias de la fiebre del Valle del Rift en ovejas, cabras y ganado
han ocurrido a intervalos regulares en el sur y el este
Los países africanos desde el momento en que el ganado intensivo
la cría se introdujo a principios del 20
siglo. Una epizootia excepcionalmente devastadora ocurrió
en Egipto en 1977 y 1979, se asemeja a la bíblica
descripción de una de las plagas del antiguo Egipto. En
Además de cientos de miles de casos en ovejas y
ganado, se estima que hubo 200,000 casos humanos, con
600 muertes reportadas. A finales de 1997 y 1998, una importante epizootia
se extendió desde Somalia a través de Kenia hasta Tanzania,
causando la muerte de muchos miles de ovejas, cabras y
camellos, y más de 90,000 casos humanos, con algunos
500 muertes. Esta epizootia, considerada la más grande de la historia
visto en el este de África, se asoció con lo excepcional
lluvia como resultado de un patrón climático de El Niño.
Una extensa epizootia en Yemen y Arabia Saudita en
2000 fue el primer reconocimiento de la enfermedad fuera
África. Además, se produjeron epidemias en Mauritania en
ambos 2010 y 2012.
El virus de la fiebre del Valle del Rift sobrevive en regiones enzoóticas de
África en un ciclo de infección silenciosa y emerge después
períodos de lluvias excepcionalmente fuertes, para iniciar la enfermedad
epizootias (Fig. 22.4). Fue descubierto a fines de la década de 1980
que el virus se transmite de forma transovárica entre aguas de inundación
Aedes spp. mosquitos; el virus sobrevive por muy
largos períodos en huevos de mosquitos colocados en los bordes de generalmente
depresiones secas, llamadas "dambos", que son comunes
Ciclos de transmisión epizoótica enzoótica y epidémica del virus de la fiebre del Valle del Rift (RVF). En el
ciclo de transmisión enzoótica (arriba a la izquierda)
panel), la vida silvestre (p. ej., especies de búfalo africano) son huéspedes potenciales de mantenimiento. En
el ciclo de transmisión epizoótica epidémica (resto de la figura), el ganado
los anfitriones de amplificación y los vectores de puente secundarios están involucrados. De Bird, B.H.,
Ksiazek, T.G., Nichol, S.T., MacLachlan, N.J., 2009. Rift Valley
virus de la fiebre Mermelada. Veterinario. Medicina. Assoc. 234, 883 893, con permiso.

a lo largo de las regiones meseta cubiertas de hierba. Cuando llegan las lluvias y los
dambos inundan, los huevos eclosionan y los mosquitos infectados emerger e infectar
cerca de salvaje y doméstico animales. En una epizootia, el virus se amplifica en el medio
silvestre y doméstico animales de muchas especies de Culex y otros Aedes mosquitos.
Gran cantidad de mosquitos emergen después lluvias fuertes o cuando las técnicas de
riego son inadecuadas usado; se alimentan indiscriminadamente de ovejas y ganado
virémico (y humanos) Se mantiene un nivel muy alto de viremia durante 3 5 días en
ovinos y bovinos infectados, permitiendo muchos más mosquitos para infectarse. Esta
amplificación, junto con la transmisión mecánica al morder vuela, provoca infección y
enfermedad en una gran proporción de animales y humanos en riesgo. En sus ciclos
epizoóticos, Rift El virus de la fiebre del valle también se propaga mecánicamente por
fomites y por sangre y tejidos de animales infectados. Infectado las ovejas tienen un nivel
especialmente alto de viremia, y transmisión en el momento del aborto a través de
contaminado las placentas y la sangre fetal y materna es un particular problema.
Trabajadores de mataderos y veterinarios (especialmente los que realizan necropsias) a
menudo se infectan directamente. La capacidad de transmisión del virus de la fiebre del
Valle del Rift sin la participación de un vector de artrópodos plantea preocupaciones sobre
la posibilidad de su importación en no enzoótico áreas a través de materiales
contaminados, productos de origen animal, humanos vírmicos, o especies animales no
ganaderas. Una vez establecido en regiones previamente libres, es difícil
o imposible de erradicar el virus debido a la gran cantidad de especie de mosquito capaz
de transmisión de virus eficiente y el fenómeno de la transmisión transovárica. por ejemplo,
estudios experimentales de transmisión de mosquitos han demostrado que más de 30
mosquitos comunes en el Estados Unidos podría servir como vectores eficientes. El período
de incubación es corto en animales infectados con Virus de la fiebre del Valle del Rift,
generalmente menos de 3 días. Las ovejas infectadas desarrollan fiebre, inapetencia,
mucopurulentas descarga nasal y diarrea sanguinolenta. En condiciones de campo, 90 El
100% de las ovejas embarazadas puede abortar ("aborto" tormenta ") y hay una tasa de
mortalidad del 90% en corderos y 20 60% en ovejas adultas, dependiendo de la cepa del
virus y las ovejas se reproducen La enfermedad clínica y el resultado son similar en cabras.
En el ganado, la enfermedad es algo menos severo, con tasas de mortalidad en terneros y
vacas de hasta 10 30%, pero 90 100% de las vacas preñadas pueden abortar. UN variedad
de otros animales pueden ser infectados (camellos, perros, gatos) pero, a menos que sean
muy jóvenes, rara vez desarrollan serias enfermedad clínica. Sin embargo, los camellos
también podrían jugar un papel en la amplificación de virus. El virus de la fiebre del Valle
del Rift es zoonótico y causa enfermedad humana importante que ocurre casualmente con
brotes en ovejas, ganado y camellos. La enfermedad humana comienza después de un
período de incubación muy corto (2 6 días) con fiebre, dolor de cabeza severo, escalofríos,
"retroceso" mialgia, diarrea, vómitos y hemorragias. Generalmente la enfermedad clínica
dura 4 6 días, seguida de una prolongada convalecencia y recuperación completa. Un
pequeño porcentaje de humanos infectados desarrollan una enfermedad más grave, que
puede incluir necrosis hepática, hemorrágica neumonía, insuficiencia renal,
meningoencefalitis o retinitis con pérdida de visión. La tasa de letalidad es de alrededor del
1 2%, pero en pacientes con enfermedad hemorrágica puede llegar al 10%. La vacunación
puede usarse para prevenir enfermedades humanas, especialmente aquellos en mayor
riesgo, como veterinarios y ganado y trabajadores de mataderos. Todos los procedimientos
de investigación y diagnóstico con Rift El virus de la fiebre del valle está restringido a ciertos
laboratorios nacionales. El virus es un patógeno BioSafety de nivel 3, y debe ser manejado
en el laboratorio bajo estricta biocontención condiciones, para prevenir la exposición
humana. Patogénesis y patología El virus de la fiebre del Valle del Rift se replica
rápidamente y muy alto título en los tejidos diana. Después de la entrada por picadura de
mosquito, percutánea lesión, oa través de la orofaringe a través de aerosoles, hay un
período de incubación de 30 72 horas, durante el cual virus invade el parénquima hepático
y linforreticular órganos. La necrosis hepatocelular extensa es común en ovejas afectadas
terminalmente El bazo se agranda y hay hemorragias gastrointestinales y subserosas.
Encefalitis, evidenciada por necrosis neuronal y

infiltración inflamatoria perivascular, es un evento tardío que ocurre en una pequeña

proporción de animales que sobreviven al infección hepática. Necrosis hepática,
insuficiencia renal y shock, a veces con complicaciones hemorrágicas, son las principales
causas de la muerte En los sobrevivientes, la recuperación es rápida y la inmunidad es de
larga duración. Experimentalmente, el virus infecta a un gran variedad de animales de
laboratorio y domésticos y es a menudo letal. En animales infectados experimentalmente,
los dos más frecuentes los síndromes son la hepatitis y la encefalitis. Diagnóstico Debido a
su amplia distribución geográfica y su explosivo potencial para invadir nuevas áreas donde
la ganadería es extensa, la confirmación de laboratorio del la presencia del virus de la fiebre
del Valle del Rift se trata como un diagnóstico emergencia. El diagnóstico rápido se logra
utilizando RTPCR ensayos (en particular RT-PCR cuantitativa), y puede confirmado por el
aislamiento del virus mediante inoculación intracerebral de ratones o en cultivo celular. El
virus se replica en una variedad de cultivos celulares tales como células Vero E6 y BHK-21, y
el virus es rápidamente citopático y causa placas. La secuenciación del ácido nucleico y los
métodos inmunológicos son utilizado para establecer la identidad de los aislados.
Diagnóstico serológico es por enzima de captura de inmunoglobulina (IgM) inmunoensayo
en sueros agudos individuales, o mediante inmunoensayos enzimáticos, neutralización o
inhibición de la hemaglutinación ensayos en sueros emparejados de animales
supervivientes (figura 22.5). Los veterinarios y los trabajadores de laboratorio están en
sustancial riesgo durante el examen post mortem de los animales o el procesamiento
materiales de diagnóstico en el laboratorio. Inmunidad, Prevención y Control El control se
basa principalmente en la vacunación del ganado, pero control de vectores (a través del
uso de larvicidas e insecticidas para mosquitos) también se usa durante los brotes. Además,
ambiental la administración puede ser una estrategia de control útil, incluida la evaluación
del riesgo de crear nuevas larvas hábitats (embalses de agua, dambos artificiales) en
enzoótica áreas Virus atenuados de la fiebre del Valle del Rift, vacunas producidas en el
cerebro del ratón y en los huevos embrionados son efectivos y de bajo costo para su uso
en ovejas, pero causan abortos en ovejas hembras Vacunas de virus inactivado producidas
en las culturas celulares evitan el problema del aborto, pero son más costoso de producir
Ambos tipos de vacunas han sido producido en África en grandes cantidades, pero para ser
completamente eficaces, las vacunas deben ser entregadas de manera sistemática a
poblaciones animales enteras, preferiblemente de forma regular calendario antes del
comienzo de la temporada de mosquitos, o en menos a las primeras indicaciones de la
actividad del virus (según lo determinado) por vigilancia centinela). Sin embargo, la
propagación del virus es tan rápido en las epizootias que es difícil de administrar

FIGURA 22.5 Curso temporal generalizado de viremia y respuesta de anticuerpos contra el

virus de la fiebre del Valle del Rift (RVF) en el ganado (A) y el desarrollo de la enfermedad
de la RVF entre el ganado (B) y los humanos (C). En el panel A, los intervalos durante los
cuales las pruebas de diagnóstico con base en ácido nucleico (RT-PCR ensayos) y los
ensayos serológicos (IgM o IgG específicos del virus RVF) son apropiados en relación con
el período de viremia. De Bird, B.H., Ksiazek, T.G., Nichol, S.T., MacLachlan, N.J., 2009. Virus
de la fiebre del Valle del Rift. Mermelada. Veterinario. Medicina. Assoc. 234, 883 893, con
permiso.

suficiente vacuna lo suficientemente rápido. Incluso cuando la vacuna es entregado

rápidamente, a menudo no hay tiempo suficiente para protección inmunidad para
desarrollar Así, el control de la enfermedad es costoso, bastante ineficaz y muy exigente
términos de recursos fiscales y humanos; estas realidades han llevado a la resistencia a la
vacunación entre los agricultores y ganaderos en la mayoría de las áreas del sur de África.
Varias vacunas nuevas, incluidas vacunas de subunidades que permitir la diferenciación de
animales vacunados de infectados (Estrategia DIVA) o nuevos virus atenuados de vacunas
(p. Ej., NSs / NSm mutantes de deleción doble u otros atenuados preparaciones de virus)
están en desarrollo para su uso en ambos animales y humanos, utilizando principalmente
ADN recombinante tecnología.