ESPECTROSCOPIA ULTRAVIOLETA-

VISIBLE, ESPECTROSCOPIA
INFRARROJA Y ESPECTROMETRÍA
DE MASAS
INGENIERÍA QUÍMICA

Oscar Obregón Campos

8IQ-G1

Universidad Tecnológica de Tula-Tepeji

Análisis Instrumental I
 ESPECTROSCOPÍA UV-VIS
Es una espectroscopia de fotones y una
espectrofotometría. Utiliza radiación
electromagnética (luz) de las regiones visible,
ultravioleta cercana (UV) e infrarroja cercana
(NIR) del espectro electromagnético.
Se usa para determinar la concentración de
analito ya sea al mismo tiempo o a menudo
durante un período de tiempo deseado.

//////////////////////// Principios básicos

Longitud de onda y Transmitancia y

Espectro absorbancia
electromagnético frecuencia
Cuando la luz atraviesa
La radiación actúa como
La radiación ultravioleta o se refleja en la
una onda, puede
(UV) y visible comprende muestra, la cantidad de
clasificarse según la
sólo una pequeña parte luz absorbida es la
longitud de ésta o la
del espectro diferencia entre la
frecuencia, relacionadas
electromagnético, que radiación incidente (Io) y
por:
incluye otras formas de la transmitida (I).
ν=c⁄λ
radiación como radio, La cantidad de luz
λ = Longitud de onda.
infrarrojo (IR), cósmica y absorbida se expresa
c= Velocidad de la luz.
rayos X. como transmitancia o
v= Frecuencia.
absorbancia.

////////////////////////
Usos y fortalezas Limitaciones
• Sujeto a las fluctuaciones de la luz
• Cuantificación de analitos. difusa y los cambios de
• Determinación de longitud de onda temperatura.
máxima. • Sensibilidad relativamente baja.
• Análisis rápido de muestras. • Otros componentes de la muestra
• Adecuado para una amplia variedad pueden causar interferencias.
de analitos. • No es tan específico como la
• Más simple que las técnicas cromatografía.
cromatográficas. • Requiere un volumen de muestra
• Interfaz amigable. relativamente grande,> 0.2 mL.

////////////////////////

Componentes

• Fuente: Genera una banda ancha

de radiación electromagnética.
• Dispositivo de dispersión:
Selecciona una longitud de onda
particular.
• Área de muestra.
• Detector (es): Miden la intensidad de
la radiación.
• Monocromador: Prisma, dispositivo
de dispersión rejilla de entrada y
salida.

////////////////////////
Geometría de la muestra
A menudo las muestras sólidas pueden ser de vidrio
o de plástico moldeado. Estas muestras son
componentes ópticos activos del sistema y cambian
la longitud focal del haz de luz.
Esto provoca errores al detectar parte de la luz que
se mide (absorbancia aparente).
////////////////////////
Preparación de muestra
Para muestras líquidas se usan cubetas de
plástico trasparentes. El disolvente ideal para la
preparación de muestras es aquel que disuelve
todos los compuestos, por lo que el disolvente
depende del tipo de muestra que se tenga.
Para muestras sólidas orgánicas se puede
realizar una digestión y posteriormente aforar.
Varios factores pueden interferir con la medida
exacta y precisa de muestras sólidas, como
vidrios o cristales.

Desarrollo del método Validación del método

1. Linealidad: Capacidad del método para Es el proceso para determinar si las
producir resultados proporcionales a la características de rendimiento son adecuadas
concentración del analito en cierto rango. para el propósito que se pretende.
2. Exactitud y Precisión.
3. Sensibilidad: Respuesta obtenida para
determinada cantidad de analito (limite de
cuantificación y limite de detección.
4. Rango: Intervalo de los niveles del analito.
5. Selectividad: Capacidad de un método
para cuantificar con exactitud al analito.
6. Robustez: Grado de reproducibilidad de los
resultados del análisis.
7. Requisitos instrumentales: El software
instrumental debe ser capaz de procesar
todos los datos arrojados durante el
 ESPECTROSCOPÍA INFRARROJA (IR)
La espectroscopía infrarroja es el análisis de la luz
infrarroja que interactúa con una molécula. Esto se
puede analizar de tres maneras al medir la absorción,
la emisión y la reflexión. El uso principal de esta
técnica es en química orgánica e inorgánica. Es
utilizado por los químicos para determinar grupos
funcionales en moléculas. La espectroscopía IR mide
las vibraciones de los átomos y, en base a esto, es
posible determinar los grupos funcionales.

//////////////////////// Principios básicos

Apariencia de las bandas

Bandas activas en infrarrojo
Modos normales de vibración
En los espectros de IR no se observan
No todos los modos normales de una
Las vibraciones en moléculas saltos vibracionales puros (a una única
molécula necesariamente aparecen en
poliatómicas son mucho más frecuencia ν), que darían lugar a
el espectro como picos de absorción,
complejas que en la simple molécula bandas discretas muy agudas.
siendo determinante para la selección
diatómica que sólo puede vibrar en un Los enlaces vibran al absorber la
de los mismos la simetría de la
modo. El número de modos energía adecuada dando lugar a un
molécula.
independientes de vibración en una espectro característico. Según la
• El requerimiento general para
molécula de N átomos se calcula fortaleza de los enlaces y la masa de
absorber radiación infrarroja es que
asumiendo que el movimiento de cada los átomos implicados será necesaria
la vibración debe producir un
átomo se puede describir en términos más o menos energía para que se
cambio neto en el momento dipolar
de desplazamientos a lo largo de tres produzca la absorción de la radiación.
de la molécula. (N≡N inactivo; C≡O
direcciones espaciales, de modo que Además la simetría de la molécula y la
activo).
tendremos 3N desplazamientos a de cada modo normal definen las
• En moléculas altamente simétricas
considerar (la molécula posee 3N absorciones activas, por lo que el
es frecuente que pares o triadas de
grados de libertad). espectro IR se convierte en una
modos sean idénticos.
propiedad molecular específica del
• Las vibraciones que tienen poca
compuesto en cuestión.
intensidad pueden no ser
observadas.

////////////////////////
Espectrometría de infrarrojos por
Usos transformada de Fourier (FTIV)
una técnica de análisis para obtener el
La IR es usada en la investigación y en espectro infrarrojo con mayor rapidez.
la industria como una simple y confiable En lugar de registrar los datos variando
práctica para realizar mediciones, la frecuencia de luz infrarroja
control de calidad y mediciones monocromática, se guía la luz IV (con
dinámicas. Al medir a una frecuencia todas las longitudes de onda de pista
específica a lo largo del tiempo, se utilizada) a través de un interferómetro.
pueden medir cambios en el carácter o Después de pasar por la muestra, la
la cantidad de un enlace particular. Esto señal medida da el interferograma. La
es especialmente útil para medir el realización de una transformada de
grado de polimerización en la Fourier de la señal produce un espectro
manufactura de polímeros. idéntico al de la espectrometría
infrarroja convencional (dispersiva).

//////////////////////// Componentes
• Celdas desmontables: Dos ventanas circulares de
25 mm de diámetro separadas por un espaciador
de aluminio con grosor de entre 10-500 µm.
• Celdas con camino óptico definido: Dos ventanas
con espaciador de grosor adecuado, presenta dos
orificios para el llenado de la celda.
• Celdas para gases: Cilindro de 45 mm de diámetro
con dos orificios que se pueden cerrar y son
resistentes al vacío, terminada en dos ventanas
paralelas de 50 mm de diámetro.
• Soportes para pastillas y films: Se pueden utilizar
dos pastillas de KBr de unos 13 mm de diámetro
colocadas en un soporte simple adecuado para
estudios rutinarios. Otra opción es fijar directamente
films o láminas de polietileno entre las que se
coloca una suspensión de la muestra en una pieza
de cartón perforada que además se ajuste a los
raíles dispuestos para la sujeción de los soportes
estándar.

//////////////////////// ////////////////////////
Preparación de muestras
• Las muestras gaseosas requieren poca preparación más
allá de su purificación, pero se usa una celda de muestra
con una larga longitud de celda (usualmente 5-10 cm)
pues los gases muestran absorbancias relativamente
débiles.
• Las muestras líquidas se pueden disponer entre dos
placas de una sal de alta pureza comúnmente cloruro de
sodio, o sal común, aunque también se utilizan otras
sales tales como bromuro de potasio o fluoruro de calcio.
Las placas son transparentes a la luz infrarroja y no
introducirán líneas en el espectro. Algunas placas de sal
son altamente solubles en agua, y así la muestra,
agentes de lavado y similares deben estar
completamente anhidros (sin agua).
• Las muestras sólidas se pueden preparar principalmente
de dos maneras. La primera es moler la muestra con un
agente aglomerante para formar una suspensión
(usualmente nujol) en un mortero de mármol o ágata. Una
fina película de suspensión se aplica sobre una placa de
sal y se realiza la medición.

Ventajas del IR Desventajas del IR

• Alta velocidad de escaneo : la espectroscopía infrarroja
puede obtener información para todo el rango de
frecuencia simultáneamente, en un segundo.
• Alta resolución : la resolución del espectrómetro de
prisma general es de solo 3 cm-1 , pero la resolución
del espectrómetro infrarrojo es mucho mayor. Por
ejemplo, la resolución del espectrómetro infrarrojo
Grating podría ser de 0.2 cm -1 , la resolución del
espectrómetro infrarrojo FT podría ser 0.1-0.005 cm -1 .
• Alta sensibilidad : con la transformada de Fourier, el
espectrómetro infrarrojo no necesita usar la ranura y el
monocromador. De esta forma, se aumentará la
especularidad de la reflexión y se reducirá la pérdida de
energía en el proceso de análisis.
• Amplio rango de aplicación : la espectroscopía infrarroja
podría usarse para analizar casi todos los compuestos
orgánicos y algunos compuestos inorgánicos. Tiene una
amplia gama de aplicaciones tanto en análisis
cualitativo como en análisis cuantitativo.
• Restricción de la muestra: la espectroscopía infrarroja
no es aplicable a la muestra que contiene agua ya que
este solvente absorbe fuertemente la luz IR.
• Complicación del espectro : el espectro IR es muy
complicado y la interpretación depende de mucha
experiencia. A veces, definitivamente no podemos
aclarar la estructura del compuesto solo en base a un
solo espectro IR. Otros métodos de espectroscopía,
como la espectrometría de masas y la resonancia
magnética nuclear (resonancia magnética nuclear),
todavía se necesitan para interpretar mejor la estructura
específica.
• Cuantificación : la espectroscopia infrarroja funciona
bien para el análisis cualitativo de una gran variedad de
muestras, pero el análisis cuantitativo puede estar
limitado en ciertas condiciones, como concentraciones
muy altas y bajas.
 ESPECTROMETRÍA DE MASAS
La espectrometría de masas es una poderosa técnica analítica utilizada
para cuantificar materiales conocidos, identificar compuestos
desconocidos dentro de una muestra y para dilucidar la estructura y las
propiedades químicas de diferentes moléculas. El proceso completo
implica la conversión de la muestra en iones gaseosos, con o sin
fragmentación, que se caracterizan por su relación masa / carga (m / z)
y su abundancia relativa.

Esta técnica básicamente estudia el efecto de la energía ionizante en

las moléculas. Depende de las reacciones químicas en la fase gaseosa
en las que las moléculas de muestra se consumen durante la formación
de especies iónicas y neutras.

//////////////////////// Principios básicos

Un espectrómetro de masas es un
equipo que produce partículas
cargadas eléctricamente,
constituidas por iones complejos e
iones fragmentarios procedentes de
una molécula original, capaz de
separarlos de acuerdo a su relación
de masa a carga. En muchos casos,
junto con las informaciones de las
espectrometrías de infrarrojo,
ultravioleta-visible y resonancia
magnética nuclear, se puede arribar
a la identificación definitiva o a la
elucidación estructural de
compuestos químicos
El diagrama de bloques muestra los componentes
principales de los espectrómetros de masas. El objetivo
del sistema de entrada es de introducir una pequeña
cantidad de muestra (un micromol o menos) en el
espectrómetro de masas, donde sus componentes se
convierten en iones gaseosos. A menudo, el sistema de
entrada contiene un medio para la volatilización de
muestras sólidas o líquidas.

////////////////////////
Usos Detectores
• Implica la determinación de componentes adicionales como El elemento final del espectrómetro de
consecuencia de la naturaleza isomérica de los
monosacáridos y su capacidad para formar oligosacáridos masas es el detector. El detector
lineales o ramificados. registra la carga inducida o la corriente
• Análisis de lípidos: Es posible determinar el peso molecular, producida cuando un ion pasa o golpea
la composición elemental, la posición de ramificación y la
una superficie. En un instrumento de
naturaleza de los sustituyentes en la estructura lipídica.
• Análisis de proteínas y péptidos: Permite la determinación exploración, la señal producida en el
precisa de la masa molecular de los péptidos, así como sus detector durante el curso de la
secuencias. Esta información puede usarse muy bien para exploración frente a donde el
identificación de proteínas.
• Análisis de Oligonucleótidos: Permite la determinación del
instrumento está en la exploración (a
peso molecular de los oligonucleótidos, también de forma qué m / Q ) producirá un espectro de
directa o indirecta, la determinación de sus secuencias. masas , un registro de iones en función
de m / Q .

//////////////////////// Componentes
• Fuente de iones: para producir iones gaseosos a
partir de la sustancia que se estudia.
• Analizador: para resolver los iones en sus
componentes de masa de características de
acuerdo a su relación de masa a carga.
• Sistema detector: para detectar los iones y registrar
la abundancia relativa de cada una de las especies
iónicas resueltas.
• Sistema de introducción de muestras para admitir
las muestras a estudiar en la fuente de iones
mientras se mantienen los requisitos de alto vacío
(~ 10-6 a 10-8 mm de mercurio) de la técnica.
• Computadora para controlar el instrumento, adquirir
y manipular datos y comparar los espectros con las
bibliotecas de referencia.
• Imanes.
• Placa aceleradora.

////////////////////////
Introducción de muestras
1. Introducción directa. El compuesto se
vaporiza por efecto del alto vacío.
2. Introducción en técnicas acopladas. Para
análisis de muestras complejas es frecuente
separar previamente los constituyentes por
medio de una técnica cromatográfica en
interfaz con el espectrómetro de masas.
////////////////////////
Preparación de muestras
Suelen ser suficientes cantidades de 1 a 4 picomoles para
determinar su Masa Molecular mediante MALDI-TOF,
preferentemente, a una concentración mínima de 1 pmol/ul.
Las muestras puras siempre proporcionan datos más
satisfactorios, por lo que se debe procurar que las bandas,
“spots” o disoluciones contengan el menor número posible
de proteínas distintas. Hay que tener en cuenta que en la
identificación mediante PMF, debe existir una proteína
mayoritaria. Si las muestras tienen varios componentes,
estos competirán por los protones en el proceso de
ionización y encontraremos señales más altas de los
componentes que están a mayor concentración, mientras
que los de baja concentración darán señales débiles que
pueden ser eliminadas en el procesado del espectro de
masas.
Para la preparación de geles y disoluciones usar agua y
reactivos de alta pureza. Los contaminantes de los
diferentes reactivos pueden afectar a la identificación de la
proteína.

Analizadores Másicos Interpretación de resultados

1. Analizador de sector magnético. La espectrometría de masas produce varios tipos de datos.
2. Analizador de resonancia ciclotrónica (ICR). (Bo muy La representación de datos más común es el espectro de
intenso de 4 a 9 Tesla). masas .
3. Analizador de tiempo de vuelo (TOF). Ciertos tipos de datos de espectrometría de masas se
4. Analizador de cuadrupolo. representan mejor como un cromatograma de masas . Los
5. Analizador de trampa de iones (IT) tipos de cromatogramas incluyen la monitorización selectiva
de iones (SIM), la corriente iónica total (TIC) y la
monitorización de reacción seleccionada (SRM), entre
muchos otros.
Otros tipos de datos de espectrometría de masas están bien
representados como un mapa de contorno tridimensional .
En esta forma, la masa a la carga, m / z está en el eje x , la
intensidad el eje y , y un parámetro experimental adicional,
como el tiempo, se registra en el eje z
Bibliografía
Amézquita, F. (2006). Espectrometría de Masas. Obtenido de
http://www.dcne.ugto.mx/Contenido/MaterialDidactico/amezquita/Analitica4/Espec
trometria%20de%20Masas.pdf

Gómez, R., & Murillo, R. (2007). ESPECTROSCOPÍA INFRARROJA. Obtenido de

http://sistemas.fciencias.unam.mx/~fam/Infrarroja.pdf

INSTRUMENTACIÓN Y MÉTODOS DE ANÁLISIS QUÍMICO. (2009). Obtenido de

ESPECTROSCOPÍA INFRARROJA:
https://www.upct.es/~minaeees/espectroscopia_infrarroja.pdf

Owen, T. (2000). Fundamentos de la espectroscopía UV-visible moderna: Conceptos

básicos. Alemania: Agilent Techologies.