Está en la página 1de 63

“MANUAL DE PRÁCTICAS”

33
[Escribir texto]

Villahermosa, Tab, Febrero del 2013.

MANUAL DE PRÀCTICAS

SUBMODULO 2

Biometría Hemática

SEMESTRE: CUARTO

PERÍODO ESCOLAR: FEBRERO 2013


[Escribir texto]

INDICE

PAG.

I. INTRODUCCIÓN.........................................................

II. OBJETIVO GENERAL................................................

III. ÍNDICE DE PRÁCTICAS............................................

IV. CREDITOS DE ELABORACIÓN................................

V. VALIDACIÓN..............................................................
[Escribir texto]

I. INTRODUCCIÓN

En este manual se presenta la información necesaria para realizar adecuadamente las


prácticas de Biometría Hemática, además de formar parte del material de consulta para los
estudiantes y a los profesores que participen en este Submódulo. El manual fue elaborado por
los profesores que participan en este Submódulo. El manual consta de 5 prácticas, que están
organizadas en 10 puntos, que a continuación se resumen, para mejor comprensión del
manual.
1. Marco teórico. En el se da un panorama de la importancia del estudio e incluye una sección
denominada información complementaria, que comprende una serie de preguntas o temas que
el alumno debe responder previo a la realización de la práctica.
2. Objetivo u objetivos de la práctica.
3. Materiales. Este punto incluye un listado del material requerido por equipo de trabajo y por
grupo, los reactivos necesarios para la práctica, así como la muestra biológica requerida para la
misma.
4. Métodos. En este apartado se desglosan las determinaciones que se realizarán durante la
sesión experimental. Cada determinación incluye su fundamento, el significado clínico y el
procedimiento a seguir.
5. Disposición de residuos. Se índica la forma de desechar los residuos generados durante la
práctica.
6. Diagrama de flujo. Consiste de una hoja en blanco en la que el alumno plasmara en forma de
diagrama la secuencia a seguir en la sesión experimental.
7. Resultados. En algunas prácticas este punto viene desglosado por cálculos aritméticos y una
tabla de resultados, en la cual se deben incluir el valor de referencia y la interpretación de los
resultados.
8. Discusión. Este apartado se incluyo con el fin de que alumno plasme en el mismo manual su
análisis y discusión de resultados, evitando el manejo de otras libretas.
9. Conclusiones. Tiene la misma intención del punto 8.
10. Referencias consultadas. Es un punto en el cual el alumno deberá anotar las referencias
que empleo para realizar su discusión y elaborar sus conclusiones. Se ha incluido también en
el manual, el reglamento del laboratorio, que se ha ubicado al inicio del manual, con la finalidad
de que el alumno lo tenga siempre a la mano y recuerde cuales son los lineamientos que debe
seguir en el laboratorio, para un mejor desarrollo de las prácticas.
[Escribir texto]

II. INDICE DE PRACTICAS

Práctica
Nombre de la práctica
Número

Determinación de Hemoglobina 1

Determinación de Hematocrito. (Macro y Micrométodo) 2


Cuantificación del número de Eritrocitos
3

Cuantificación del número de Reticulocitos 4

Cuantificación del número de Leucocitos 5

Realizar la formula diferencial de leucocitos


6

Cuantificación del número de Plaquetas 7


[Escribir texto]

Práctica No. Titulo de la Práctica: Fecha de realización:


Formula Roja Febrero 2013
1
Hemoglobina

 Competencia profesional: Analiza e Identifica la


sangre y sus componentes, clasifica los tipos de
anticoagulantes, determina el hematocrito, la
Submódulo 2 concentración de la hemoglobina, recuento de
glóbulos rojos, índices eritrocitarios (VCM, HCM y
Aplicar Técnicas para Biometría CCMH), cuenta de reticulocitos, recuento de
leucocitos, de plaquetas y lee el diferencial,
Hemática
atendiendo al paciente con respeto rechazando toda
forma de discriminación, aplicando medidas de
higiene y seguridad durante el proceso.

RESULTADO DE APRENDIZAJE: Desarrollar las habilidades y destrezas en la recolección y


procesamiento de muestras biológicas e interpretación de los resultados para establecer un
diagnóstico hematológico, de acuerdo a la normatividad y actuando con ética.

INTRODUCCIÓN:
Los exámenes de laboratorio pueden realizarse por muchas razones, como investigación
rutinaria de salud o sospecha de enfermedad o de toxicidad. También pueden ser utilizados
para determinar si la efectividad de un medicamento mejora o empeora. Los exámenes pueden
medir el éxito o fracaso de un tratamiento.
La hemoglobina es una proteína pigmentada de color rojo transportadora de oxígeno que se
encuentra solo en los eritrocitos de los vertebrados. Es un tetrámero con dos pares de cadenas
polipeptídicas diferentes. Cada una de ellas posee un derivado de la porfirina llamado grupo
hemo, que a su vez contiene hierro.
Las dos principales funciones de la hemoglobina son el transporte de oxígeno y amortiguador
del pH.
Las concentraciones de hemoglobina están influidas por variaciones fisiológicas como la edad,
sexo, deshidratación, postura y altitud, y por procesos patológicos. Se encuentran valores
patológicos en anemias y en policitemias.
La determinación de la concentración de hemoglobina se ha convertido en una de las pruebas
más importantes en el diagnóstico y tratamiento de la anemia. Las tres causas principales de
anemia son: alteración en la síntesis de los eritrocitos en la médula ósea, pérdidas de sangre
excesivas y transporte alterado de eritrocitos hacia sangre periférica.
Se observan valores de hemoglobina elevados en policitemia vera, eritrocitosis.

ESTRATEGIA ENSEÑANZA- APRENDIZAJE:

Actividad 1: Obtiene muestra sanguínea de los individuos que cumplen con los requisitos
para realizarles una biometría hemática.

Actividad 3: El alumno adquirirá los conocimientos necesarios a para poder realizar la


determinación de hemoglobina en sangre.
[Escribir texto]

1.- OBJETIVO DE LA PRÁCTICA:

 El alumno desarrollara la habilidad práctica para determinar la cantidad de esta


proteína expresada en g./dl.
 El alumno conocerá la importancia e influencia de la buena toma de muestra sanguínea
a través de los conocimientos y practica adquiridos para poder llevar a cabo un correcto
diagnóstico.

2.- FUNDAMENTO

La reacción básica en la producción de Cianometahemoglobina es:

El ión ferroso de la hemoglobina se oxida a ión férrico por acción del ferricianuro potásico
formándose hemiglobina (metahemoglobina). La hemiglobina reacciona con el cianuro para
formar cianhemiglobina (cianmetahemoglobina) que se puede medir por espectrofotometría.

3.- MATERIALES A UTILIZAR: (Equipo de 6 integrantes)

CANTIDAD DESCRIPCIÒN

2 Gradilla

Pipeta de Sahli
6

Paquete Gasas

EquiTubo con tapón color lila


1

1 Adaptador para tubos al vacío

1 Aguja para tubo al vacío

1 Recipiente para desechos (RPBI)

1 Contenedor para punzocortantes

Paquete Torundas de algodón con alcohol al 70 %


[Escribir texto]

4.- EQUIPO A UTILIZAR:

CANTIDAD DESCRIPCIÒN
1 Espectrofotómetro

5.- MATERIAL BIOLÓGICO:

CANTIDAD DESCRIPCIÓN
5 ml Sangre

6.- REACTIVOS:

CANTIDAD DESCRIPCION

Fco. Patrón de Hemoglobina. Hemoglobina humana. La concentración viene


indicada en la etiqueta.
Fco. Solución de Drabkin
7.- RECOLECCION DE LA MUESTRA:

Toma de muestra de sangre venosa

8.- DESCRIPCIÓN DE LA PRÀCTICA:

B.- Hemoglobina (Hb):


1.- Coloca en un tubo de ensaye 5 ml. De reactivo de Drabkin.
2.- Con una pipeta de Sahlí mide 0.02 mm de sangre y adiciona ésta al tubo que contiene
el reactivo de Drabkin.
3.- Dejar en reposo durante 10 minutos.
4.- Leer en % de transmitancia a 540 nanómetros de longitud de onda.
5.- Calibra el aparato a 100% de transmitancia utilizando el blanco de reactivo.
6.- Lee la muestra problema.
[Escribir texto]

9.- REPORTE DE RESULTADOS:

 Reportar lo observado durante la práctica.


 Convierte la transmitancia en gramos sobre 100 ml de acuerdo a la grafica.

CÁLCULOS
La concentración de hemoglobina en la muestra se calcula a partir de la fórmula:
Con Patrón:
A Muestra
_________ X C Patrón = C Muestra
A Patrón

VALORES DE REFERENCIA
Hombres Mujeres
12-14 años 12,0-16,0 g/dL 11,5-15,0 g/dL
15-17 años 11,7-16,6 g/dL 11,7-15,3 g/dL
18-74 años 13,5-17,5 g/dL 12,0-16,0 g/dL

10.- RECOMENDACIONES:

Al trabajar en el Laboratorio:

 Debe tenerse cuidado en mantener toda el área de trabajo en condiciones limpias.


 Todos los materiales contaminados deben colocarse de inmediato en un
desinfectante.
 Deben utilizarse guantes desechables, cubreboca, bata de laboratorio blanca, larga y
manga larga, debidamente abotonada.
 No colocarse ni llevarse nada a la boca.
 La sangre humana utilizada en la preparación del patrón es negativa para el
antígeno HBs y para los anticuerpos anti-HCV y anti-HIV. Sin embargo, el patrón
debe tratarse con precaución como potencialmente infeccioso .

11.- NOTAS IMPORTANTES:

 Las muestras deben etiquetarse correctamente.


 Debe tratar al paciente con ética, amabilidad, cortesía y sin discriminación.

12.- ACTIVIDADES:
[Escribir texto]

 Anota tus resultados.


 Reporta los resultados del estudio.
 Comenta conclusiones con tus compañeros.
 Contesta el siguiente cuestionario.
 Completa el glosario.

13. GLOSARIO DE TERMINOS:

La hemoglobina es una proteína conjugada que sirve para el transporte de oxígeno y dióxido de
carbono.
La masa total de eritrocitos de un adulto contiene unos 600gr. De hemoglobina capaces de
transportar 800ml de oxígeno.

Una molécula de hemoglobina consta de 2 pares de cadenas polipepticas (unión de


aminoácidos) (globina) y 4 grupos proteicos HEM que contienen cada uno un átomo de fe en
estado ferroso. Cada punto HEM se localiza en una zona determinada de una de las cadenas
de polipepticos. Localizando cerca la superficie de la molécula, el HEM se combina de forma
reversible con una molécula de oxigeno y dióxido de carbono. Este grupo HEM es el
responsable del color rojo de la hemoglobina (hb).

La parte proteica o globina tiene 4 cadenas polipeptídicas que se denominan con las letras α, β,
γ, δ. Existe una cadena más la ε que está presente durante los 3 primeros meses de vida se
diferencian unas de las otras en el numero o posición (de los aminoácidos de los que están
compuestas). Por lo tanto existen varios tipos de hb. en el ser humano se pueden encontrar las
siguientes hemoglobinas normales:

Hemoglobina A: consta de 2 cadenas α y 2 cadenas β en un adulto normal corresponde a más


del 95% del total.

Hemoglobina A´: consta de 2 cadenas α y 2 cadenas δ en un adulto sano esta en porción


menor de 3%.

Hemoglobina F (fetal): consta de 2 cadenas α y 2 cadenas γ. Es la hemoglobina principal en el


feto desde el 4° mes del embarazo hasta aproximadamente los 6 meses de edad. La Hb F tiene
mayor afinidad por el oxigeno.

mL: mililitro

DISPOSICIÓN DE RESIDUOS
Eliminación de punzocortantes:
La eliminación de punzocortantes adecuada es parte importante de la toma demuestra. En este
caso la eliminación de aguja de toma múltiple, está de acuerdo a normas nacionales (NOM-
[Escribir texto]

087-ECOL-SSA1-2002) y las políticas de buenas prácticas establecidas en cada laboratorio.


Los punzocortantes como agujas y lancetas así como tubos rotos contaminados deben
depositarse en el contenedor rojo rígido. En los contenedores existen diferentes capacidades,
lo cual permite que el laboratorio seleccione el más adecuado a su flujo de trabajo y material
utilizado. Se debe tomaren consideración las instrucciones de utilización recomendadas por los
fabricantes y cuidar no sobrellenar el contenedor, pues esto puede ser un factor de riesgo para
el personal técnico y de intendencia. Con una adecuada eliminación se disminuyen los eventos
de punción accidental tanto para el paciente y trabajador de salud, como para el personal de
intendencia.

Eliminación de muestras biológicas


Los tubos para extracción de sangre contaminados o llenos tienen que recogerse en
recipientes apropiados para residuos de material potencialmente infeccioso que en este caso
son bolsas rojas. Los tubos de vidrio que contengan las muestras serán colocados en agua con
cloro durante 24 h. La eliminación de residuos se hace usualmente en instalaciones incineradoras
apropiadas.

14.- EVALUACIÓN:

GUÍA DE OBSERVACIÓN
Instrucciones:
a) Lee y analiza el fundamento de la práctica
b) Selecciona adecuadamente los materiales y reactivos
c) Desarrolla el procedimiento de la práctica
d) Lee e interpreta los resultados
e) Observaciones con base a la norma NOM-003-SSA2-1993

Aspecto a observar Cumple


SI NO N/A Observacione Puntos
s
a) Leyó y analizó el
fundamento de la práctica. 1p
b) Seleccionó y preparó
adecuadamente el material y
reactivo. 1p
c) Desarrollo correctamente el
procedimiento. 2p
d) Interacción grupal e
individual. 1p
e) Manipuló con destreza el
equipo. 2p
f) Leyó, interpretó y contrastó
eficazmente sus resultados
con los valores
referenciales.1p
g) Cumplió con los aspectos
de las NOM 005 y 087. 2p
[Escribir texto]

15.- BIBLIOGRAFÍA ESPECÌFICA:

AUTOR TÌTULO EDITORIAL


Lynch, Raphael, Mellor, Métodos de Laboratorio Interamericana

Spare, Inwood.
Todo-Sanford Diagnostico y Tratamiento Salvat.

Clínico por el Laboratorio.


Marcus A. Krupp, Norman J.Sweet Diagnostico clínico Integral El Manual Moderno.
Klusek Hamilton. Manual de Diagnostico Interamericana.

Browen Rose Clínico

Práctica No. Titulo de la Práctica: Fecha de realización:


Formula Roja Agosto 2012
[Escribir texto]

2 Hematocrito

Competencia profesional: Competencia


profesional: Analiza e Identifica la sangre y sus
componentes, clasifica los tipos de anticoagulantes,
determina el hematocrito, la concentración de la
hemoglobina, recuento de glóbulos rojos, índices
eritrocitarios (VCM, HCM y CCMH), cuenta de
Submódulo 2 reticulocitos, recuento de leucocitos, de plaquetas y lee
el diferencial, atendiendo al paciente con respeto
Aplicar Técnicas para Biometría rechazando toda forma de discriminación, aplicando
Hemática medidas de higiene y seguridad durante el proceso

RESULTADO DE APRENDIZAJE: Desarrollar las habilidades y destrezas en la recolección y


procesamiento de muestras biológicas e interpretación de los resultados para establecer un diagnóstico
hematológico, de acuerdo a la normatividad y actuando con ética.

INTRODUCCIÓN: Este método es uno de los más sencillos y exactos. El tubo de Wintrobe (el
mismo empleado para la VSE) Tiene 11.5 cm. De largo y 3mm de luz, esta graduado de 0 a
100 en mm con marcas también en cm. Tanto en sentido ascendente como descendente. La
concentración final debe ser inferior a 2mg, de EDTA por ml de sangre de otra manera se
encontraran anomalías en el hematocrito. Esto resulta especialmente importante cuando se
utilizan uno al vacío que contiene gran cantidad de EDTA. l volumen total de sangre en un
adulto es 7 a 8% de su peso corporal; siendo el 55%la porción líquida llamada plasma cuya
composición corresponde fundamentalmente 90 % agua y el 10 % diferentes metabolitos. El
45% restante de la sangre se compone de elementos celulares eritroides, plaquetarios y
leucocitarios.
Para que una muestra tenga significado biológico, debe ser representativa y homogénea, por lo
que se debe tener conocimiento sobre:

 La distribución y concentración de cada metabolito en los diferentes tipos de líquidos


orgánicos.
 Estado biológico del metabolito a estudiar (si está libre o conjugado).
 La producción, utilización y regulación homeostática.
 Debe recordarse que una muestra de sangre nos va a reflejar el perfil biológico del
paciente del momento en que se ha efectuado la extracción.

Se ha demostrado que la utilización del torniquete durante un tiempo mayor a 1 minuto,


provoca aumento de un 15% de desviación en valores de coagulación y de un 10% en el
hematocrito.

ESTRATEGIA ENSEÑANZA- APRENDIZAJE:


[Escribir texto]

Actividad 1: Conocer el porcentaje del volumen de los eritrocitos presentes en la sangre por el
macrométodo usando tubo de Wintrobe.

Actividad 1: Conocer el porcentaje del volumen de los eritrocitos presentes en la sangre por el
micrométodo usando tubo capilar.

1.- OBJETIVO DE LA PRÁCTICA:

Aprender a realizar la prueba del hematocrito utilizando el macro y micrométodo, conocer su


importancia en el diagnóstico de enfermedades y la forma adecuada de su procedimiento.

2.- FUNDAMENTO

El hematocrito es un examen de sangre que mide el porcentaje del volumen de toda la sangre
que está compuesta de glóbulos rojos. Esta medición depende del número de glóbulos rojos y
de su tamaño. El resultado se expresa en porcentaje.
El hematocrito casi siempre se ordena como parte de un conteo sanguíneo completo
(hemograma).
Para la realización de esta prueba, con el macrométodo, la sangre se extrae típicamente de
una vena, por lo general de la parte interior del codo o del dorso de la mano.
Cuando se inserta la aguja para extraer la sangre, algunas personas sienten un dolor
moderado, mientras que otras sólo sienten un pinchazo o sensación de picadura.
Posteriormente, puede haber algo de sensación pulsátil.
Un volumen de sangre se deposita en un tubo de Wintrobe, por medio de una pipeta, hasta la
marca del 10 y se debe de centrifugar. Al terminar la prueba, deben de quedar separados el
plasma de la sangre y las células, depositándose en el fondo y presentando un color rojo
intenso.
Para la realización del micrométodo, se utilizan unos tubos de un calibre muy delgado,
llamados capilares, y pueden ser llenados con la misma sangre venosa o de capilar. Este último
es el más usado, por ser más rápido y menos riesgoso al usar sangre capilar. Para su lectura
se usa una escala estandarizada
[Escribir texto]

3.- MATERIALES A UTILIZAR: (Equipo de 6 integrantes)

CANTIDAD DESCRIPCIÒN

2 Gradilla

6 Tubo de wintrobe graduado de 0 a 100 mm

6 Pipetas Pasteur

6 Tubos capilares azules o rojos

1 Plastilina

1 Encendedor o cerillos

Paquete Gasas

1 EquiTubo con tapón color lila

1 Adaptador para tubos al vacío

1 Aguja para tubo al vacío

1 Recipiente para desechos (RPBI)

1 Contenedor para punzocortantes

Paquete Torundas de algodón con alcohol al 70 %

4.- EQUIPO A UTILIZAR:

CANTIDAD DESCRIPCIÒN
1 Centrifuga
Mi
1 Microcentrifuga

5.- MATERIAL BIOLÓGICO:

CANTIDAD DESCRIPCIÓN
5 ml Sangre
[Escribir texto]

6.- REACTIVOS:

CANTIDAD DESCRIPCION
Fco.
EDTA al 5%
Fco. Alcohol al 70%
Fco. Agua destilada
7.- RECOLECCION DE LA MUESTRA:

Toma de muestra de sangre venosa

8.- DESCRIPCIÓN DE LA PRÀCTICA:

Para Macrohematocrito:

1. Una vez seleccionada, se desinfecta la zona con alcohol al 70%, y se practica punción
venosa.
2. La sangre es recogida en un tubo lila con EDTA.

3. Llenar el tubo de Wintrobe con la sangre extraída con anticoagulante ayudándose de una
pipeta Pasteur, comenzando desde el fondo hasta la marca superior de 100 mm, teniendo
cuidado de no provocar espuma ni dejar burbujas en el tubo.
4. Se recomienda como medida de precaución tapar el tubo con un tapón de goma para evitar
la evaporación.

5. Centrifugar a 3000 rpm durante 30 minutos.


[Escribir texto]

6. Leer directamente de la graduación la columna de glóbulos rojos y anotar resultados.

Para Microhematocrito:

1. Tomar la muestra en capilares rojos heparinizados directamente del dedo, o utilizar


capilares azules sin heparina para sangre venosa con anticoagulante EDTA. Debe llenarse
aproximadamente 70-80% del capilar, sin dejar burbujas de aire.

2. Ocluir (tapar) el extremo del capilar que no estuvo en contacto con la sangre, con plastilina
o sellando con fuego.

3. Colocar el capilar sobre la plataforma del cabezal de la microcentrifuga, con el extremo


ocluido adherido al reborde externo de la plataforma.

4. Centrifugar por 5 minutos entre 10 000 y 12 000 rpm.


5. Para leer el resultado, se lleva a cabo una regla de tres, midiendo el volumen total de
plasma y eritrocitos o por medio de la regleta.
[Escribir texto]

6. Para la regleta, se sostiene el tubo frente a la escala de manera que el fondo de la columna
de eritrocitos, quede exactamente al mismo nivel de la línea horizontal correspondiente al
cero. Desplazar el tubo a través de la escala hasta que la línea marcada con el 1.0 quede al
nivel del tope del plasma. El tubo debe de encontrarse completamente en posición vertical.

La línea que pase al nivel del tope de la columna de eritrocitos indicara la fracción del volumen
de estos.

Tras una centrifugación de la sangre total se pueden apreciar dos niveles, uno con el depósito
de los glóbulos rojos, principalmente y en color rojo oscuro, otra capa blanca, de leucocitos y
una delgada de color gris, que son plaquetas y finalmente otro nivel del plasma total, de un leve
color amarillento.

9.- REPORTE DE RESULTADOS:

Reportar lo observado durante la práctica


En el tubo de Wintrobe se mide directamente el nivel de la columna de glóbulos rojos,
comparando el número de la lectura con los siguientes porcentajes:
Hombres: 47.0 ±5.0%
Mujeres: 42.0 ±5.0%
Niños (5 años) 38%-44%
Lactantes (3 meses): 37-42%
Recién nacidos: 50-58%

Se considera a la medida total de eritrocitos, leucocitos y plasma en mm como un 100% y con


la medida de solo los eritrocitos también en mm se obtiene su porcentaje con respecto a este
por medio de una regla de tres:
Medida total= 58 mm (eritrocitos, leucocitos y plasma)
Medida de eritrocitos= 29 mm
58 mm -------------------------- 100%
29 mm ------------- x (hematocrito)

HEMATOCRITO: 50 %
[Escribir texto]

10.- RECOMENDACIONES:

Al trabajar en el Laboratorio:

 Debe tenerse cuidado en mantener toda el área de trabajo en condiciones limpias.


 Todos los materiales contaminados deben colocarse en de inmediato en un
desinfectante.
 Deben utilizarse guantes desechables, cubreboca, bata de laboratorio blanca, larga y
manga larga, debidamente abotonada.
 No colocarse ni llevarse nada a la boca.

11.- NOTAS IMPORTANTES:

Algunos factores que afectan hematocrito, hemoglobina y conteo eritrocítico son:


1. Cambios que inciden directamente en la circulación de eritrocitos:
Valor disminuido: Se denomina anemia . Los tres parámetros disminuyen aunque este
decremento puede ser desproporcionado cuando existen cambios en el tamaño
eritrocítico y/o la cantidad de hemoglobina contenida en ellos, por lo que el cálculo e
interpretación de los índices de la formula roja son de ayuda en estos casos.
Valor aumentado: Denominado policitemia . Aumento del número de eritrocitos circulantes.
2. Cambios en el volumen plasmático:
Valor aumentado: Se presenta en estados de deshidratación
Valor disminuido: Se presentan en sobrehidratación con fluidos administrados
parenteralmente dando una lectura que simula anemia

3.-Las muestras deben etiquetarse correctamente.


4.- Debe tratar al paciente o donador con ética, amabilidad, cortesía y sin discriminación.

12.- ACTIVIDADES:

 Anota tus resultados.


 Reporta los resultados del estudio.
 Comenta conclusiones con tus compañeros.
 Contesta el siguiente cuestionario.
 Completa el glosario.

CUESTIONARIO
[Escribir texto]

1.- Porque puedo necesitar este exámen:


Los exámenes de laboratorio pueden realizarse por muchas razones, como investigación
rutinaria de salud o sospecha de enfermedad o de toxicidad. También pueden ser utilizados
para determinar si la efectividad de un medicamento mejora o empeora. Los exámenes pueden
medir el éxito o fracaso de un tratamiento. Pueden ser solicitados por razones médicas o
legales. Las siguientes son posibles razones por las que este examen puede realizarse:

 Anemia por deficiencia de hierro


 Enfermedad renal en estado terminal
 Glomerulonefritis postestreptocócica aguda
 Hemorragia gastrointestinal aguda
 Incremento de los eritrocitos sanguíneos
 Insuficiencia cardíaca
 Sangrado excesivo agudo
 Síndrome pulmonar por Hantavirus

2.-¿Cuáles son los riesgos?


Sangre: En el sitio donde se toma la muestra puede ocurrir la extravasación de sangre, un
hematoma (sangre extravasada debajo de la piel), así como una infección. Las personas que
realizan estos exámenes pueden necesitar hacerlos más de una vez. Consulte con su médico
en caso de duda acerca de los riesgos de este examen.
Sangre del cordón umbilical: Antes del nacimiento, la sangre del cordón umbilical puede ser
obtenida por un procedimiento llamado toma de muestra percutánea de sangre del cordón
umbilical. Este procedimiento se realiza mediante la inserción de una aguja a través del
abdomen de la embarazada y del cordón umbilical. Los riesgos de este procedimiento incluyen
sangrado en el lugar de la inserción de la aguja, bradicardia fetal (el corazón del bebé late
anormalmente lento), infección y trombosis (coágulo de sangre) de la vena del cordón. Otro
riesgo es el hematoma del cordón umbilical (acumulación de sangre extravasada que presiona
el cordón umbilical y puede restringir el flujo sanguíneo hacia el bebé). Si usted está utilizando
medicamentos que causen sangrado excesivo, tiene un alto riesgo de sangrar en el sitio de
punción. Existe riesgo de que su bebé no sobreviva a este procedimiento. La persona que
realiza este procedimiento puede necesitar hacer varios intentos. Consulte con su médico en
caso de duda acerca de los riesgos de que le practiquen una toma de muestra percutánea de
sangre del cordón umbilical.

3.- ¿Qué puede afectar los resultados de mi examen?


 Resultados aumentados en:
o Estado venoso prolongado durante venipuntura
o Ejercicio vigoroso
o Altitud alta
 Resultados disminuidos en:
o Hematócrito es levemente más bajo entre las 5 de la tarde y 7 de la mañana
o Hematócrito es hasta 5.7% más bajo en pacientes recostados
o Hombres con edad entre 65 a 74 años

13. GLOSARIO DE TERMINOS:


[Escribir texto]

El valor de hematocrito; indica el porcentaje volumétrico de eritrocitos en sangre.

Volumen sanguíneo: Porción del cuerpo humano contenida en el espacio


intravascular, constituida por los elementos celulares hemáticos y el plasma.

mL; mililitro

DISPOSICIÓN DE RESIDUOS
Eliminación de punzocortantes:

La eliminación de punzocortantes adecuada es parte importante de la toma demuestra. En este


caso la eliminación de aguja de toma múltiple, está de acuerdo a normas nacionales (NOM-
087-ECOL-SSA1-2002) y las políticas de buenas prácticas establecidas en cada laboratorio.
Los punzocortantes como agujas y lancetas así como tubos rotos contaminados deben
depositarse en el contenedor rojo rígido. En los contenedores existen diferentes capacidades,
lo cual permite que el laboratorio seleccione el más adecuado a su flujo de trabajo y material
utilizado. Se debe tomaren consideración las instrucciones de utilización recomendadas por los
fabricantes y cuidar no sobrellenar el contenedor, pues esto puede ser un factor de riesgo para
el personal técnico y de intendencia. Con una adecuada eliminación se disminuyen los eventos
de punción accidental tanto para el paciente y trabajador de salud, como para el personal de
intendencia.

Eliminación de muestras biológicas


Los tubos para extracción de sangre contaminados o llenos tienen que recogerse en
recipientes apropiados para residuos de material potencialmente infeccioso que en este caso
son bolsas rojas. Los tubos de vidrio que contengan las muestras serán colocados en agua con
cloro durante 24 h. La eliminación de residuos se hace usualmente en instalaciones incineradoras
apropiadas.

14.- EVALUACIÓN:

GUÍA DE OBSERVACIÓN
Instrucciones:
a) Lee y analiza el fundamento de la práctica
b) Selecciona adecuadamente los materiales y reactivos
c) Desarrolla el procedimiento de la práctica
d) Lee e interpreta los resultados
e) Observaciones con base a la norma NOM-003-SSA2-1993

Aspecto a observar Cumple


[Escribir texto]

SI NO N/A Observacione Puntos


s
a) Leyó y analizó el
fundamento de la práctica. 1p
b) Seleccionó y preparó
adecuadamente el material y
reactivo. 1p
c) Desarrollo correctamente el
procedimiento. 2p
d) Interacción grupal e
individual. 1p
e) Manipuló con destreza el
equipo. 2p
f) Leyó, interpretó y contrastó
eficazmente sus resultados
con los valores
referenciales.1p
g) Cumplió con los aspectos
de las NOM 005 y 087. 2p
15.- BIBLIOGRAFÍA ESPECÌFICA:

AUTOR TÌTULO EDITORIAL


Lynch, Raphael, Mellor, Métodos de Laboratorio Interamericana

Spare, Inwood.
Todo-Sanford Diagnostico y Tratamiento Salvat.

Clínico por el Laboratorio.


Marcus A. Krupp, Norman J.Sweet Diagnostico clínico Integral El Manual Moderno.
Klusek Hamilton. Manual de Diagnostico Interamericana.

Browen Rose Clínico

Práctica No. Titulo de la Práctica: Fecha de realización:


Formula Roja Febrero 2013
3
Cuantificación de Eritrocitos

 Competencia profesional: Analiza e Identifica la


sangre y sus componentes, clasifica los tipos de
anticoagulantes, determina el hematocrito, la
Submódulo 2 concentración de la hemoglobina, recuento de
glóbulos rojos, índices eritrocitarios (VCM, HCM y
Aplicar Técnicas para Biometría CCMH), cuenta de reticulocitos, recuento de
leucocitos, de plaquetas y lee el diferencial,
Hemática
atendiendo al paciente con respeto rechazando toda
forma de discriminación, aplicando medidas de
higiene y seguridad durante el proceso.
[Escribir texto]

RESULTADO DE APRENDIZAJE: Procesar una muestra de sangre, con la finalidad de


interpretar alteraciones hematológicas con fines de coadyuvar en el diagnostico hematológico,
aplicando la bioseguridad y ética.

INTRODUCCIÓN: Los glóbulos rojos son células anucleadas que se forman en la médula ósea
a partir de «stem cells». Una vez en la circulación tienen como principal función transportar
oxígeno a los tejidos, tarea que desarrollan por aproximadamente 120 días, hasta que el
sistema fagocítico mononuclear los retira de la circulación.

Para realizar este conteo se debe utilizar la cámara de Neubauer esta es una cámara adaptada
al microscopio de capo claro se trata de un portaobjetos con una depresión el centro, es un
cuadro de 3x3mm con una separación de dos líneas consecutivas de 0.25mm así pues el área
sombreada y marcada con L corresponde a un milímetro cuadrado. La depresión central del
cubreobjetos está hundida 0.1mm respecto a la superficie de forma que cuando se cubre con le
portaobjetos el o volumen es de 0.1 m cúbicos.

En la Cámara de Neubauer tradicional, está dividido en 16 cuadrados medianos y cada uno de


ellos se halla dividido a su vez en 25 cuadrados pequeños (400 cuadrados pequeños en total).
Además la última fila y la última columna de cuadrados pequeños está dividida al medio. En
cambio, en la cámara de Neubauer modificada el cuadrado grande central está dividido en 25
cuadrados medianos y cada uno de ellos está dividido en 16 cuadrados pequeños (400
cuadrados pequeños en total). Cualquiera sea la cámara empleada, este cuadrado grande
central es el empleado en el recuento eritrocitario y plaquetario.

ESTRATEGIA ENSEÑANZA- APRENDIZAJE:

Actividad 1: Determinar el número de eritrocitos presentes en la sangre del paciente.

Actividad 2: Adiestrarse en el llenado de la pipeta de Thoma.

OBJETIVO DE LA PRÁCTICA:
Aprender a realizar un recuento de Eritrocitos por milímetro cúbico de sangre, interpretar
el resultado, así como adiestrarse en el manejo de la cámara de Neubauer y la pipeta de
Thoma

2.- FUNDAMENTO

Para determinar la densidad de las células se emplean diferentes técnicas, desde la


relativamente simple cámara de contaje celular de la que existen numerosas variantes, entre
ellas la que utiliza la cámara de Neubauer
Para el conteo de eritrocitos, es necesario diluir la sangre con el líquido de Hayem, en una
proporción exacta. Luego se examina en el microscopio con una cantidad pequeña colocada en
la cámara de Neubauer, contando el número de elementos que se encuentran en el retículo de
la cámara y mediante una operación se obtiene el número tota

3.- MATERIALES A UTILIZAR: (Equipo de 6 integrantes)

CANTIDAD DESCRIPCIÒN
[Escribir texto]

1
Tubo de tapón color lila

Rollo Papel parafilm


1 Equipo para venopunción
6 Pipeta de Thoma para cuenta de glóbulos rojos (perla roja)
1
Gradilla
1 Boquilla para la pipeta de Thoma.
Paquete Gasas
4.- EQUIPO A UTILIZAR:

CANTIDAD DESCRIPCIÒN
1 Microscopio
6 Cámara de Neubauer

6 Cubrehematimetro
6 Contadores celulares

5.- MATERIAL BIOLÓGICO:

CANTIDAD DESCRIPCIÓN
5 ML Sangre con anticoagulante

6.- REACTIVOS:

CANTIDAD DESCRIPCION
20 ml Solución de Hayem
0.2 ml Anticoagulante (sol. EDTA)
7.- RECOLECCION DE LA MUESTRA:

Extraer sangre venosa recolectada en tubo con anticoagulante


8.- DESCRIPCIÓN DE LA PRÀCTICA:

Formula Roja:

C.- Recuento eritrocítico (Eri): Es la cantidad total de eritrocitos circulantes por microlitro
de sangre.
[Escribir texto]

1.- Aspira sangre hasta la marca 0.5 en la pipeta de toma para glóbulos
rojos, para realizar una dilución de 1/200, y si se carga hasta 1, la disolución será de 1/100,
limpiar la punta con gasa o papel absorbente.
2.- Continúa aspirando con el líquido de Hayem hasta la marca de
101. Limpiar con gasa o papel absorbente

3.- Se coloca en un roturador automático o se hace rotar


manualmente de 2 a 3 minutos.

4.-Agitar bien la pipeta y descartar de 3 a 4 gotas del tallo, luego colocar


una gota pequeña cerca de un extremo de la cámara para que por
capilaridad se llene exactamente.

5.- Llena la cámara de Neubauer


6.- Dejar reposar durante 1 minuto.
7.- Lleva la cámara cuenta glóbulos al microscopio, colocarla en la platina del microscopio y
enfocar la cuadricula a 10, luego con el objetivo de 40X contar sobre el cuadrado grande
central de la cámara en solo 5 cuadrados pequeños; uno central y cuatro angulares (80
cuadritos en total).

8.- En el rencuentro se incluyen las células que cubren o tocan por dentro o por fuera de las
líneas limitantes superior izquierda en el cuadrado pequeño de rencuentro y no se
consideran los correspondientes a los limites inferior y derecho. Se hace el rencuentro y
no se consideran los correspondientes a los limites inferior y superior derecho. Se hace el
rencuentro en la cuadricula central, las cuatro esquinas y el centro.
[Escribir texto]

8.- Realiza los cálculos correspondientes

PROCESO DE ENCENDIDO

1.- CONECTAR EL EQUIPO A LA TOMA DE CORRIENTE


2.- VERIFICAR QUE LOS REACTIVOS SE ENCUENTREN DISPONIBLES Y DEBIDAMENTE
CONECTADOS AL EQUIPO.
3.- CONECTAR EL TECLADO EXTERNO.
4.- OPRIMIR EL BOTON DE ENCENDIDO DE LA PARTE TRASERA.
5.- ESPERAR 10 MINUTOS PARA LLENAR LAS MANGUERAS DE REACTIVO.
6.- VERIFICAR QUE NO SUENE NINGUNA ALARMA.
7.- VERIFICAR QUE NOS ENCONTREMOS EN LA PANTALLA PRINCIPAL.
8.-ANALIZAR LA PRUEBA.

PROCESO DE ANALISIS:

1. TOMAR LA MUESTRA EN UN TUBO DE TAPON COLOR LILA.


2. HOMOGENIZAR LA MUESTRA
3. POSICIONAR LA MUESTRA BAJO LA CANULA DE LECTURA
4. OPRIMIR EL BOTON DE LECTURA
5. ESPERAR QUE LA CANULA ABSORVA LA MUESTRA Y RETIRAR EL TUBO
6. EL EQUIPO ARROJARA EL RESULTADO EN LA PANTALLA Y LO IMPRIMIRA EN UN
PAPEL TERMICO.

9.- REPORTE DE RESULTADOS:

Cálculos para eritrocitos:

Cuenta los eritrocitos en los 5 cuadros pequeños (80 cuadritos pequeños) asignados para su
conteo de la cámara cuanta glóbulos

N x 200 x 10 x 400
= N x 10,000
80
[Escribir texto]

N: número de eritrocitos contados.


200: titulo de dilución
10: corrección de profundidad de la cámara para llevar a 1 mm 3
400: total de cuadritos de la cámara.
80: total de cuadritos contados.

Por lo tanto la cantidad de glóbulos rojos leídos en los 5 cuadros y adicionada de 4 ceros da la
cifra correspondiente al total de eritrocitos en 1 mm 3 de sangre.

10.- RECOMENDACIONES:

Al trabajar en el Laboratorio:

 Debe tenerse cuidado en mantener toda el área de trabajo en condiciones limpias.


 Todos los materiales contaminados deben colocarse en de inmediato en un
desinfectante.
 Deben utilizarse guantes desechables, cubreboca, bata de laboratorio blanca, larga y
manga larga, debidamente abotonada.
 No colocarse ni llevarse nada a la boca.

11.- NOTAS IMPORTANTES:

Algunos factores que afectan hematocrito, hemoglobina y conteo eritrocítico son:


1. Cambios que inciden directamente en la circulación de eritrocitos:
Valor disminuido: Se denomina anemia . Los tres parámetros disminuyen aunque este
decremento puede ser desproporcionado cuando existen cambios en el tamaño
eritrocítico y/o la cantidad de hemoglobina contenida en ellos, por lo que el cálculo e
interpretación de los índices de la formula roja son de ayuda en estos casos.
Valor aumentado: Denominado policitemia . Aumento del número de eritrocitos circulantes.
2. Cambios en el volumen plasmático:
Valor aumentado: Se presenta en estados de deshidratación
Valor disminuido: Se presentan en sobrehidratación con fluidos administrados
parenteralmente dando una lectura que simula anemia

VALORES DE REFERENCIA
[Escribir texto]

Parámetros Valores de Referencia


Recuento de eritrocitos H 4.2-5.9 millones/micras cúbicas
M 4.2-5.4

12.- ACTIVIDADES:

 Anota tus resultados.


 Reporta los resultados del estudio.
 Comenta conclusiones con tus compañeros.
 Contesta el siguiente cuestionario.
 Completa el glosario.

CUESTIONARIO

1.- ¿Cómo se prepara el diluyente para glóbulos rojos?

2.- ¿Que menciona la NOM- 166 , la NOM 005 y la NOM-087?


3.- ¿Cuáles son los valores de referencia de eritrocitos?
4,-Menciona los diferentes tipos de anemia:

13. GLOSARIO DE TERMINOS:

1. Rouleaux: Es el agrupamiento de eritrocitos a manera de monedas amontonadas,


es debido a una tendencia de sedimentación en forma paralela, trastorno que se
relaciona con el incremento en la concentración de fibrinógeno y/o el cambio en las
concentraciones de globulinas..
2. Anisocitosis: Es la variación en el tamaño de los eritrocitos donde aparecen
macrocitos y/o microcitos a lado de células de tamaño normales, se presenta como
respuesta en anemias de tipo regenerativo.
Macrocitos: Son eritrocitos de gran tamaño que provocan incremento en el VGM,
(reticulocitos) aparecen generalmente en anemias regenerativas.
Microcitos: Son pequeños eritrocitos con un VGM disminuido que son observados en
casos de anemias dadas por deficiencia de hierro.
3.- Esferocitos: Son considerados microcitos que cuentan con una membrana celular
reducida, lo que incrementa la permeabilidad hacia el sodio, se presentan
generalmente en anemias de tipo autoinmune y en anemias hemolíticas
isoinmunes así como después de una transfusión.
5. Policromasia: Es una variación en la afinidad eritrocítica hacia el colorante, donde
existe un tono azuloso en las células que contienen residuos de ARN, eritrocitos que
[Escribir texto]

generalmente son grandes y se consideran reticulocitos. La presencia de policromasia


está asociada con el incremento de la actividad eritropoyetica como respuesta a una
anemia catalogada como regenerativa cuando esta presente.
6. Hipocromia: Se refiere a la presencia de palidez marcada en la región central del
eritrocito dado por la disminución en la concentración de hemoglobina dentro de la
célula, la causa más común en la que se presenta es la deficiencia de hierro.
7. Poiquilocitosis: Son células anormales en su forma comúnmente encontradas en
anemias debidas a la pérdida crónica de sangre o a enfermedades caracterizadas por
fragmentación eritrocítica, células que son retiradas prematuramente de la circulación
agudizando el estado anémico. Los acantocitos, son un tipo de poiquilocitosis.
8. Leptocitos: Son células delgadas que cuentan con una membrana celular grande
observadas en enfermedades crónicas debilitantes que producen anemia
9. Estomatocitos: Son eritrocitos con una forma oval hacia el centro que se observa
en enfermedades hepáticas.

10. Células en diana: Son células con forma de tiro al blanco que se presentan en anemias de
tipo regenerativo junto con policromasia, aunque cuando se presentan y no existe policromasia
se pueden relacionar con enfermedad renal, hepática o esplénica.

11. Cuerpos de Howell-Jolly: Son remanentes nucleares observados frecuentemente


como consecuencia de un estado anémico en procesos regenerativos, no obstante si
son numerosos pueden indicar hipoesplenismo.
12. Cuerpos de Heinz: Son estructuras localizadas en la membrana eritrocítica
producto de la desnaturalización de la hemoglobina causada por la acción oxidante de
ciertas drogas o químicos, estos cuerpos desorganizan la membrana eritrocítica y se
asocian con hemólisis intravascular.

14. Eritrocitos nucleados (Rubrocitos y Metarrubrocitos): Se deben a la liberación


de células eritroides inmaduras hacia la circulación sanguínea en los casos de anemia
aunque pueden ser observadas en casos de enfermedad de la médula ósea donde
existe daño en el parénquima que afecta la barrera capilar, así como en casos de
leucemia.

DISPOSICIÓN DE RESIDUOS
Eliminación de punzocortantes:

La eliminación de punzocortantes adecuada es parte importante de la toma demuestra. En este


caso la eliminación de aguja de toma múltiple, está de acuerdo a normas nacionales (NOM-
087-ECOL-SSA1-2002) y las políticas de buenas prácticas establecidas en cada laboratorio.
Los punzocortantes como agujas y lancetas así como tubos rotos contaminados deben
depositarse en el contenedor rojo rígido. En los contenedores existen diferentes capacidades,
lo cual permite que el laboratorio seleccione el más adecuado a su flujo de trabajo y material
utilizado. Se debe tomaren consideración las instrucciones de utilización recomendadas por los
fabricantes y cuidar no sobrellenar el contenedor, pues esto puede ser un factor de riesgo para
el personal técnico y de intendencia. Con una adecuada eliminación se disminuyen los eventos
de punción accidental tanto para el paciente y trabajador de salud, como para el personal de
intendencia.

Eliminación de muestras biológicas


[Escribir texto]

Los tubos para extracción de sangre contaminados o llenos tienen que recogerse en
recipientes apropiados para residuos de material potencialmente infeccioso que en este caso
son bolsas rojas. Los tubos de vidrio que contengan las muestras serán colocados en agua con
cloro durante 24 h. La eliminación de residuos se hace usualmente en instalaciones incineradoras
apropiadas.

14.- EVALUACIÓN:

GUÍA DE OBSERVACIÓN
Instrucciones:
a) Lee y analiza el fundamento de la práctica
b) Selecciona adecuadamente los materiales y reactivos
c) Desarrolla el procedimiento de la práctica
d) Lee e interpreta los resultados
e) Observaciones con base a la norma 166 y 087

Aspecto a observar Cumple


SI NO N/A Observacione Puntos
s
a) Leyó y analizó el
fundamento de la práctica. 1p
b) Seleccionó y preparó
adecuadamente el material y
reactivo. 1p
c) Desarrollo correctamente el
procedimiento. 2p
[Escribir texto]

d) Interacción grupal e
individual. 1p
e) Manipuló con destreza el
equipo. 2p
f) Leyó, interpretó y contrastó
eficazmente sus resultados
con los valores
referenciales.1p
g) Cumplió con los aspectos
de las NOM 005 y 087. 2p
15.- BIBLIOGRAFÍA ESPECÌFICA:

AUTOR TÌTULO EDITORIAL


Lynch, Raphael, Mellor, Métodos de Laboratorio Interamericana

Spare, Inwood.
Todo-Sanford Diagnostico y Tratamiento Salvat.

Clínico por el Laboratorio.


Marcus A. Krupp, Norman J.Sweet Diagnostico clínico Integral El Manual Moderno.
Klusek Hamilton. Manual de Diagnostico Interamericana.

Browen Rose Clínico

Práctica No. Titulo de la Práctica: Fecha de realización:


Febrero 2013
4
Cuantificación del número de Reticulocitos
 Competencia profesional: Analiza e Identifica la
sangre y sus componentes, clasifica los tipos de
anticoagulantes, determina el hematocrito, la
Submódulo 2 concentración de la hemoglobina, recuento de
glóbulos rojos, índices eritrocitarios (VCM, HCM y
Aplicar Técnicas para Biometría CCMH), cuenta de reticulocitos, recuento de
leucocitos, de plaquetas y lee el diferencial,
Hemática
atendiendo al paciente con respeto rechazando toda
forma de discriminación, aplicando medidas de
higiene y seguridad durante el proceso.

RESULTADO DE APRENDIZAJE: Procesar una muestra de sangre, con la finalidad de


interpretar alteraciones hematológicas con fines de coadyuvar en el diagnostico hematológico,
aplicando la bioseguridad y ética.

INTRODUCCIÓN: Los eritrocitos atraviesan seis etapas hasta conseguir su maduración.


Los reticulocitos son los glóbulos rojos jóvenes que circulan en la sangre desde hace menos de
un día (duración de vida de los glóbulos rojos:120 días ). Estos se encuentran ya en médula
[Escribir texto]

ósea y en sangre periférica, en médula ósea permanecerán 2 días madurando, y en sangre


periférica 1 día más. Convirtiéndose finalmente en hematíes maduros.

ESTRATEGIA ENSEÑANZA- APRENDIZAJE:

Actividad 1: Identificar morfológicamente por el método de tinción los eritrocitos.

Actividad 2: Determinar el número de reticulocitos presentes en la sangre del paciente.

1.- OBJETIVO DE LA PRÁCTICA:


Valorar de manera sencilla la producción eritrocitaria, cuantificando la producción de los reticulocitos.
Evaluar tempranamente en anemias carenciales la eficacia del tratamiento.

2.- FUNDAMENTO
Los reticulocitos contienen una fina red de ARN y protoporfirina que se puede teñir con el
azul de cresil brillante.
Los reticulocitos se evidencian sobre unos frotis gracias a ciertos colorantes supravitales como
el azul de metileno o azul de cresil brillante, que permite observar los organoides
citoplasmáticos que aún llevan y que han desaparecido en los glóbulos rojos adultos: es la
<<sustancia reticulofilamentosa>>. La técnica ha de realizarse a ser posible antes de que
transcurra 2 horas de la extracción, con un máximo de 24 horas.
Puede apreciarse sobre un portaobjetos, el porcentaje de glóbulos rojos que son reticulocitos,
pero es deseable expresar los resultados en valores absolutos, así pues como el ciclo vital de
un hematíes es de 120 días, la médula ósea reemplaza todos los días aproximadamente 1% de
hematíes.

3.- MATERIALES A UTILIZAR: (Equipo de 6 integrantes)

CANTIDAD DESCRIPCIÒN

1 Adaptador para sistema la vacío

1 Tubos al vacio con EDTA tapón color lila


1 Gradilla

1 Agujas para tubos al vacio


6 tubos 13 x 100
4 pipetas Pasteur con bulbo
1 Pipeta graduada 1/100 de 1 ml

1 Pipeta graduada 1/10 de 5 ml

1 Contenedor para punzocortantes

1 Contenedores para biológicos infecciosos


[Escribir texto]

6 Portaobjetos
Frasco Torundas

4.- EQUIPO A UTILIZAR:

CANTIDAD DESCRIPCIÒN
1 Centrifuga clínica
1 Contador manual
1 Microscopio

5.- MATERIAL BIOLÓGICO:

DESCRIPCIÓN
5 ML Sangre con anticoagulante

6.- REACTIVOS:

CANTIDAD DESCRIPCION
1
Azul cresil brillante al 1% o azul de metileno.
1 Solución salina fisiológica
1 Alcohol etílico al 70%
7.- RECOLECCION DE LA MUESTRA:

Extraer sangre venosa recolectada en tubo con anticoagulante

8.- DESCRIPCIÓN DE LA PRÀCTICA:


1.- Colocar en un tubo dos gotas de sangre (aproximadamente 50µl por cada gota) y dos gotas
de colorante.
2.- Agitar la mezcla sangre-colorante e incubar 15 minutos a temperatura ambiente o 10 minutos
a baño María.
3.- Hacer una extensión en un portaobjetos con una gota de la mezcla.
4.- Dejar secar y observar en objetivo de inmersión 100x.
5.- Contar 500 eritrocitos, anotando el número de reticulocitos observados dentro de ese conteo.

9.- REPORTE DE RESULTADOS:


[Escribir texto]

CALCULOS:

Se realiza el recuento de reticulocitos en 10 campos, en los cuales, haya aproximadamente 100


hematíes/campo.
Seguidamente calculamos la proporción de reticulocitos en dichos campos.

% Reticulocitos = nº de reticulocitos observados X 100


nº de hematíes contados

Interpretación
La cuenta de reticulocitos es un índice de eritropoyesis.

10.- RECOMENDACIONES:

Al trabajar en el Laboratorio:

 Debe tenerse cuidado en mantener toda el área de trabajo en condiciones limpias.


 Todos los materiales contaminados deben colocarse de inmediato en un
desinfectante.
 Deben utilizarse guantes desechables, cubreboca, bata de laboratorio blanca, larga y
manga larga, debidamente abotonada.
 No colocarse ni llevarse nada a la boca.

11.- NOTAS IMPORTANTES:

Los reticulocitos se pueden observan como hematíes con granulaciones o filamentos, de color azul
oscuro.
También podemos observar con esta tinción cuerpos de Heinz, que son alteraciones en las
cadenas de hemoglobina o déficit de alguna enzima eritrocitaria, dan lugar a la hemoglobina
inestable que se desnaturaliza con facilidad dando lugar a precipitado dentro del hematíe.
Cuando existe anemia, con disminución del número de hematíes. Su valor deber ser corregido de
acuerdo a la intensidad de la anemia, aplicándose la siguiente fórmula:

% Reticulocitos corregidos = % reticulocitos observados x hematocrito del paciente


hematocrito normal (45)

FACTORES DE ERROR:
[Escribir texto]

 Cuerpos de Heinz que causan confusión, siderocitos y partículas de tinción precipitadas


con reticulocitos (azul de metileno se utiliza para demostrar la presencia de cuerpos de
Heinz).
 Conteo en áreas del frotis donde los eritrocitos no están distribuidos con uniformidad. No
debe de haber superposiciones ni aglomeraciones en las áreas donde se efectúan los
conteos.
 En el caso de muestras de pacientes anémicos, empleo de una cantidad insuficiente de
sangre en relación con el tinte. En tal caso agregar 6 gotas de sangre con 3 colorante.
 Esplenectomía como resultado la presencia de otras inclusiones en los glóbulos rojos, los
cuales se pueden confundir con los reticulocitos.

CAUSAS DE AUMENTO:
 Anemia hemolítica y hemólisis.
 Pérdida aguda de sangre.
 En respuesta a un anemia después de una terapia específica.
 Ejemplo: Hierro, Vitamina B12, Ácido fólico.
 Desórdenes de médula ósea infiltrada.

CAUSAS DE DISMINUCIÓN:
 Aplasia medular.
 Reemplazo de precursores eritrocíticos por células leucémicas.
 Infecciones
 Toxinas
 Drogas
 Enfermedad Renal

DESÓRDENES DE MADURACIÓN

 Anemia Ferropénica.
 Anemia Megaloblástica
 Anemia Sideroblástica
 Anemia por enfermedad crónica.

VALORES DE REFERENCIA
 En adultos de 0.5 a 2%.
 En recién nacidos de 2,5 a 6,5%, alcanzando al valor del adulto a las dos semanas de
vida.

12.- ACTIVIDADES:

 Anota tus resultados.


 Reporta los resultados del estudio.
 Comenta conclusiones con tus compañeros.
 Contesta el siguiente cuestionario.
 Completa el glosario.

CUESTIONARIO
[Escribir texto]

1.- ¿Cual anticoagulante se utiliza?


2.- Menciona dos factores que lleven a un resultado erróneo:
3.- ¿Cuál es el colorante que se utiliza en esta metodología?
13. GLOSARIO DE TERMINOS:

La eritropoyesis es el desarrollo de las células rojas de la sangre (eritrocitos).

Los reticulocitos son llamados así porque estas células contienen redes de polirribosomas.
La anemia se define como una concentración baja de hemoglobina en la sangre.

La anemia Ferropénica, corresponde a la más común de las anemias, y se produce por


deficiencia de hierro, representado por el símbolo químico "Fe", el cual es necesario para la
formación de los hematíes.

Un frotis de sangre es un mecanismo científico que consiste en el extendido de una gota de


sangre en la superficie de un portaobjetos o de un cubreobjetos, con el fin de analizarla
posteriormente.

Ribosomas son pelos macromoleculares de proteínas y ácido ribonucleico (ARN), Son un


complejo molecular encargado de sintetizar proteínas.

El ARN mensajero (ARN, o RNA de su nombre en ingles) es el ácido ribonucleico que contiene
la información genética procedente del ADN para utilizarse en la síntesis de proteínas, es decir,
determina el orden en que se unirán los aminoácidos. El ARN mensajero es un ácido nucleico
monocatenario, al contrario que el ADN que es bicatenario de doble hebra helicoidal.

ADN; El ácido desoxirribonucleico, es un ácido nucleico que contiene instrucciones


genéticas usadas en el desarrollo y funcionamiento de todos los organismos vivos conocidos y
algunos virus, y es responsable de su transmisión hereditaria.

14- EVALUACIÓN:

GUÍA DE OBSERVACIÓN
Instrucciones:
a) Lee y analiza el fundamento de la práctica
b) Selecciona adecuadamente los materiales y reactivos
c) Desarrolla el procedimiento de la práctica
d) Lee e interpreta los resultados
e) Observaciones con base a la norma 166 y 087

Aspecto a observar Cumple


SI NO N/A Observacione Puntos
s
a) Leyó y analizó el
fundamento de la práctica. 1p
b) Seleccionó y preparó
adecuadamente el material y
[Escribir texto]

reactivo. 1p

c) Desarrollo correctamente el
procedimiento. 2p
d) Interacción grupal e
individual. 1p
e) Manipuló con destreza el
equipo. 2p
f) Leyó, interpretó y contrastó
eficazmente sus resultados
con los valores
referenciales.1p
g) Cumplió con los aspectos
de las NOM 005 y 087. 2p

15.- BIBLIOGRAFÍA ESPECÌFICA:

AUTOR TÌTULO EDITORIAL


Lynch, Raphael, Mellor, Métodos de Laboratorio Interamericana

Spare, Inwood.
Todo-Sanford Diagnostico y Tratamiento Salvat.

Clínico por el Laboratorio.


Marcus A. Krupp, Norman J.Sweet Diagnostico clínico Integral El Manual Moderno.
Klusek Hamilton. Manual de Diagnostico Interamericana.

Browen Rose Clínico


Williams WJ y otros Hematología; Maduración del Salvat
reticulocito
p. 120-24

DISPOSICIÓN DE RESIDUOS
Eliminación de punzocortantes:

La eliminación de punzocortantes adecuada es parte importante de la toma demuestra. En este


caso la eliminación de aguja de toma múltiple, está de acuerdo a normas nacionales (NOM-
087-ECOL-SSA1-2002) y las políticas de buenas prácticas establecidas en cada laboratorio.
Los punzocortantes como agujas y lancetas así como tubos rotos contaminados deben
depositarse en el contenedor rojo rígido. En los contenedores existen diferentes capacidades,
[Escribir texto]

lo cual permite que el laboratorio seleccione el más adecuado a su flujo de trabajo y material
utilizado. Se debe tomaren consideración las instrucciones de utilización recomendadas por los
fabricantes y cuidar no sobrellenar el contenedor, pues esto puede ser un factor de riesgo para
el personal técnico y de intendencia. Con una adecuada eliminación se disminuyen los eventos
de punción accidental tanto para el paciente y trabajador de salud, como para el personal de
intendencia.

Eliminación de muestras biológicas


Los tubos para extracción de sangre contaminados o llenos tienen que recogerse en
recipientes apropiados para residuos de material potencialmente infeccioso que en este caso
son bolsas rojas. Los tubos de vidrio que contengan las muestras serán colocados en agua con
cloro durante 24 h. La eliminación de residuos se hace usualmente en instalaciones incineradoras
apropiadas.

Práctica No. Titulo de la Práctica: Fecha de realización:


Febrero 2013
5
Cuantificación del número de Leucocitos
 Competencia profesional: Analiza e Identifica la
sangre y sus componentes, clasifica los tipos de
anticoagulantes, determina el hematocrito, la
Submódulo 2 concentración de la hemoglobina, recuento de
glóbulos rojos, índices eritrocitarios (VCM, HCM y
Aplicar Técnicas para Biometría CCMH), cuenta de reticulocitos, recuento de
leucocitos, de plaquetas y lee el diferencial,
Hemática
atendiendo al paciente con respeto rechazando toda
forma de discriminación, aplicando medidas de
higiene y seguridad durante el proceso.

1.- OBJETIVO DE LA PRÁCTICA:

Realizar el recuento de leucocitos mediante la cámara de Neubauer para determinar el número


de leucocitos por mm3, haciendo el conteo por los cuadrantes más grandes de la cámara
conociendo teóricamente cuales son.

ESTRATEGIA ENSEÑANZA- APRENDIZAJE:

Actividad 1: Aprender a llenar la pipeta de Thoma para Leucocitos.

Actividad 2: Aprender a utilizar la cámara de Neubauer.

Actividad 3: Determinar el número de leucocitos presentes en la sangre del paciente.


[Escribir texto]

2.- INTRODUCCIÓN:
Los leucocitos, al igual que las demás células sanguíneas, se forman en la médula. La función
de cada tipo de glóbulo blanco (neutrófilos, eosinófilos, basófilos, linfocitos y monocitos) es
diferente. Las alteraciones que pueden presentar los leucocitos son del tipo oncohematológicas
y no neoplásicas; estas últimas se pueden clasificar en cuantitativas y cualitativas. La
leucopoyesis es un proceso que se lleva a cabo con gran actividad, ya que si el número de
granulocitos circulantes de ninguna manera es comparable al de los eritrocitos, en cambio se
estima que la sobrevida de los neutrófilos no excede de 5 días, de las cuales solo pasan 10 hrs.
en la sangre circulante.
La cuantificación o recuento de leucocitos es importante para el diagnóstico de algunas
enfermedades, como por ejemplo: Las leucemias.
El diluyente que más se utiliza en el laboratorio de hematología es el de Turk, el cual contiene
ácido acético en una concentración hipertónica, lo cual provoca la lisis de los eritrocitos, pero,
no de los leucocitos, el diluyente contiene además unas gotas de violeta de genciana o azul de
metileno, el cual permite reconocer fácilmente a los leucocitos, ya que tiñen ligeramente su
núcleo, permitiendo observarlos más fácilmente
La sangre anticoagulada se deposita en un líquido que permite evidenciar los leucocitos,
manteniéndolos visibles, mientras que los eritrocitos son hemolizados. El recuento del número
de leucocitos o glóbulos blancos se expresa por mm3 (milímetro cúbico).

3.- FUNDAMENTO

La sangre se diluye 1:2 con una solución hipotónica de ácido acético que destruye a los
eritrocitos. El azul de metileno permite reconocer fácilmente el líquido y observar mejor los
glóbulos blancos, a los que tiñe ligeramente. Los normoblastos no se destruyen, por lo que se
deben tomar en cuenta para corregir los resultados.
El recuento leucocitario representa el número de leucocitos en un litro de sangre completa.

4.- MATERIALES A UTILIZAR: (Equipo de 6 integrantes)

CANTIDAD DESCRIPCIÒN

1 Adaptador para sistema la vacío

1 Tubos con tapón color lila al Vacio con EDTA


1 Gradilla

2 Cámaras de Neubauer con Cubrehematimetro.


6 Boquillas para la pipeta de Thoma (perla color blanco)
2 Tubos 13 x 100
6 pipetas Pasteur con bulbo
1 Agujas para tubos al vacio.
1 Pipeta graduada 1/100 de 1 ml

1 Contenedor para punzocortantes


[Escribir texto]

1 Contenedores para biológicos infecciosos

Frasco Torundas con alcohol al 70%

5.- EQUIPO A UTILIZAR:

CANTIDAD DESCRIPCIÒN
1 Microscopio
1 Centrifuga

6.- MATERIAL BIOLÓGICO

CANTIDAD DESCRIPCIÓN
5 ml. Sangre

7.- REACTIVOS:

CANTIDAD DESCRIPCIÓN
Fco. Liquido de Turk
Fco. Agua destilada
Fco. Ácido acético glacial 3.0 ml
Fco. Azul de metileno

8.- RECOLECCIÓN DE LA MUESTRA:

Extraer sangre venosa recolectada en tubo con anticoagulante

9.- DESCRIPCIÓN DE LA PRÀCTICA

1.- Obtener sangre por punción venosa con anticoagulante EDTA (tubo lila).

2.-Una vez obtenida la sangre con anticoagulante, se procede a aspirar la sangre con la pipeta
de glóbulos blancos hasta la marca de 0,5 y limpiar la punta con papel absorbente.
[Escribir texto]

3.-Introducir la pipeta en el tubo que contenga solución de Turk y absorber hasta la marca de 11
(no debe haber burbujas).

4.-Tapar ambos extremos y proceder a mezclar manualmente o en un rotador automático


por 2 ó 3 minutos.

5.-Monte la laminilla de vidrio en la cámara para recuento que debe estar limpia y seca.

6.-Agitar la pipeta y descartar las cuatro primeras gotas para luego colocar una gota pequeña
de esta solución en la cámara.

7.-Dejar reposar por espacio de 3 minutos para que las células se sedimenten.
[Escribir texto]

8.-Enfocar con objetivo de 10x y contar en 4 cuadrados grandes angulares.

9.-Para hacer el recuento se deben tomar solo en cuenta las células que toquen las líneas del
cuadro., este solo se aplica para los cuadros superior e izquierda

CONTEO DE LEUCOCITOS EN LAS PARTES LATERALES DE LA CAMARA DE NEUAUER


Vista de 40X

Superior izquierdo Superior derecho Inferior derecho Inferior Izquierdo

10.- REPORTE DE RESULTADOS

Para hacer el recuento de leucocitos hay que tomar en cuenta cual e su morfología vistos en la
cámara de Neubauer en el recuento la morfología de estos pueden ser unos como puntos
negros definidos.
Nº de leucocitos x mm³ = altura x dilución x área
Leucocitos contados en 4 campos Reemplazando = 1/10 x 1/20 x 4
Leucocitos contados en 4 campos = 4/200 = 1/50
[Escribir texto]

Nº de leucocitos x mm³ = Nº leucocitos contados x 50= 4/200

VALOR TOTAL DE LEUCOCITOS EN mm3: 129*50= 6450/mm3

VALORES DE REFERENCIA
Adultos: de 5 000 a 10 000 por mm3

Niños al nacer: de 10 000 a 25 000 por mm3

Un año: de 8 000 a 15 000 por mm3

11.- RECOMENDACIONES:

Al trabajar en el Laboratorio:

 Debe tenerse cuidado en mantener toda el área de trabajo en condiciones limpias.


 Todos los materiales contaminados deben colocarse de inmediato en un
desinfectante.
 Deben utilizarse guantes desechables, cubreboca, bata de laboratorio blanca, larga y
manga larga, debidamente abotonada.
 No colocarse ni llevarse nada a la boca.

12.- NOTAS IMPORTANTES

 El recuento leucocitario representa el número de leucocitos en un litro de sangre


completa. La cuantificación o recuento de leucocitos es muy importante para el
diagnóstico de enfermedades.
 La cámara de Neubauer o hemocitómetro es una lámina portaobjeto gruesa, en cuyo
centro se hayan dos superficies cuadriculadas iguales, separadas del resto de la lámina
por surcos y dos barras transversales algo más elevada. Una laminilla cubreobjetos
ópticamente plan, que al colocarse sobre las barras elevadas de la lámina forma una
cámara entre el cubreobjetos y la superficie cuadriculada, teniendo una altura de
0.1mm
[Escribir texto]

13.- ACTIVIDADES

 Anota tus resultados.


 Informa tus resultados
 Comenta conclusiones con tus compañeros.
 Contesta el siguiente cuestionario.
 Completa el glosario de términos.

CUESTIONARIO

1. Explica el fundamento de la técnica practicada.

2. Menciona en que dilución se realiza la cuantificación


3. Explica la fórmula para cuantificar los leucocitos.
4.- Porqué se multiplica el total de los leucocitos por 50?
5.- Define los siguientes conceptos: Leucocitosis, y leucopenia.
6.- Como interpretas un resultado de 20,000cel/mm3?

14- GLOSARIO DE TERMINOS

LA CÁMARA DE NEUBAUER, O HEMATOCITOMETRO.


Se trata de una gruesa placa de cristal con forma de portaobjetos, de unos 30 x 70 mm y unos
4 mm de grosor.
En una cámara simple, la porción central, que es donde se realiza el conteo, está dividida en 3
partes.
CUBREOBJETOS.
El cubreobjetos es un cuadrado de cristal de aproximadamente 22 mm x 22 mm. Debe
colocarse sobre la cámara de recuento de forma que cubra la parte central de la cámara,
delimitando un espacio entre la cámara y el cubreobjetos de 0,1 mm.
[Escribir texto]

15.- EVALUACIÓN:

GUÍA DE OBSERVACIÓN
Instrucciones:
a) Lee y analiza el fundamento de la práctica
b) Selecciona adecuadamente los materiales y reactivos
c) Desarrolla el procedimiento de la práctica
d) Lee e interpreta los resultados
e) Observaciones con base a la norma 166 y 087

Aspecto a observar Cumple


SI NO N/A Observacione Puntos
s
a) Leyó y analizó el
fundamento de la práctica. 1p
b) Seleccionó y preparó
adecuadamente el material y
reactivo. 1p
c) Desarrollo correctamente el
procedimiento. 2p
d) Interacción grupal e
individual. 1p
e) Manipuló con destreza el
equipo. 2p
f) Leyó, interpretó y contrastó
eficazmente sus resultados
con los valores
referenciales.1p
g) Cumplió con los aspectos
de las NOM 005 y 087. 2p
16.- BIBLIOGRAFÍA ESPECÌFICA

AUTOR TÌTULO EDITORIAL


Lynch, Raphael, Mellor, Métodos de Laboratorio Interamericana

Spare, Inwood.
Todo-Sanford Diagnostico y Tratamiento Salvat.
[Escribir texto]

Clínico por el Laboratorio.


Marcus A. Krupp, Norman J.Sweet Diagnostico clínico Integral El Manual Moderno.
Klusek Hamilton. Manual de Diagnostico Interamericana.

Browen Rose Clínico

DISPOSICIÓN DE RESIDUOS
Eliminación de punzocortantes
La eliminación de punzocortantes adecuada es parte importante de la toma demuestra. En este
caso la eliminación de aguja de toma múltiple, está de acuerdo a normas nacionales (NOM-
087-ECOL-SSA1-2002) y las políticas de buenas prácticas establecidas en cada laboratorio.
Los punzocortantes como agujas y lancetas así como tubos rotos contaminados deben
depositarse en el contenedor rojo rígido. En los contenedores existen diferentes capacidades,
lo cual permite que el laboratorio seleccione el más adecuado a su flujo de trabajo y material
utilizado. Se debe tomaren consideración las instrucciones de utilización recomendadas por los
fabricantes y cuidar no sobrellenar el contenedor, pues esto puede ser un factor de riesgo para
el personal técnico y de intendencia. Con una adecuada eliminación se disminuyen los eventos
de punción accidental tanto para el paciente y trabajador de salud, como para el personal de
intendencia.

Eliminación de muestras biológicas


Los tubos para extracción de sangre contaminados o llenos tienen que recogerse en
recipientes apropiados para residuos de material potencialmente infeccioso que en este caso
son bolsas rojas. Los tubos de vidrio que contengan las muestras serán colocados en agua con
cloro durante 24 h. La eliminación de residuos se hace usualmente en instalaciones incineradoras
apropiadas.
[Escribir texto]

Práctica No. Titulo de la Práctica: Fecha de realización:


Febrero 2013
6
Realizar la formula diferencial de leucocitos
 Competencia profesional: Analiza e Identifica la
sangre y sus componentes, clasifica los tipos de
anticoagulantes, determina el hematocrito, la
Submódulo 2 concentración de la hemoglobina, recuento de
glóbulos rojos, índices eritrocitarios (VCM, HCM y
Aplicar Técnicas para Biometría CCMH), cuenta de reticulocitos, recuento de
leucocitos, de plaquetas y lee el diferencial,
Hemática
atendiendo al paciente con respeto rechazando toda
forma de discriminación, aplicando medidas de
higiene y seguridad durante el proceso.
1.- OBJETIVO DE LA PRÁCTICA:

Efectuar la cuenta diferencial de leucocitos utilizando la tinción de Wright, identificando los


diferentes tipos de glóbulos blancos (Neutrófilos, Linfocitos, (Células B y T), Monocitos,
Eosinófilos. Basófilos) en sangre periférica o muestra de sangre problema.
2.- INTRODUCCIÓN:

El análisis de la serie blanca incluye dos etapas: el recuento de leucocitos y el análisis del frotis
o extendido, que proporciona la fórmula leucocitaria diferencial, la cual se expresa normalmente
como porcentaje con respecto al total de glóbulos blancos presentes en el recuento. Por este
motivo, frente a alteraciones importantes en el número de leucocitos, es necesario conocer no
sólo la fórmula porcentual, sino también los valores absolutos de cada uno, para evitar así
falsas interpretaciones. El número absoluto se calcula multiplicando su porcentaje en la fórmula
leucocitaria por el número de leucocitos/mm³. Por ejemplo: eosinófilos 4%, leucocitos
7.000/mm³. El número absoluto de eosinófilos es 280/mm³, valor que se considera normal.

En reposo, en un adulto normal, el recuento de leucocitos fluctúa entre 5.000 y 7.000 células
por mm³. La fórmula leucocitaria normal para un adulto se encuentra en la tabla 1.

Se emplean muchos términos para describir las alteraciones del recuento leucocitario. Se habla
de leucocitosis o de leucopenia, cuando se observa un aumento o una disminución,
respectivamente, en el número total de leucocitos. Generalmente se considera leucocitosis a
cifras superiores a 10.000 células/mm³ y leucopenia, a cifras inferiores a 5.000 células/mm³.
La ausencia de granulocitos en la sangre se denomina agranulocitosis. Términos como
neutrofilia y neutropenia, linfocitosis y linfopenia, monocitosis y monocitopenia, eosinófilia y
[Escribir texto]

eosinopenia, se emplean para indicar aumento o disminución en el recuento absoluto de las


células respectivas.

La determinación de los parámetros hematológicos básicos mediante contadores


hematológicos especializados, junto al examen morfológico de los elementos sanguíneos en
sangre periférica, son de gran utilidad para la detección de alteraciones cuantitativas y
cualitativas de dichas células sanguíneas, lo que contribuye al diagnóstico de enfermedades
hematológicas y no hematológicas.

RESULTADO DE APRENDIZAJE: Cuantifica plaquetas a partir una muestra sanguínea


humana, por medio de métodos manuales y automatizados.

ESTRATEGIA ENSEÑANZA- APRENDIZAJE:

Actividad 1: Realizar un extendido o frotis de sangre en un portaobjetos y teñirlo con el


colorante de Wright.
Actividad 2: Observar en el microscopio el frotis sanguíneo teñido identificando los diferentes
tipos de glóbulos blancos (Neutrófilos, Linfocitos, Monocitos, Eosinófilos. Basófilos). El docente
proyectará una preparación con el microscopio para enseñanza para que el alumno identifique
las plaquetas en esta técnica.
Actividad 3: Medir los porcentajes de cada tipo de leucocitos.

3.- FUNDAMENTO

Los leucocitos son teñidos con un colorante especial (Wright) este por ser un colorante
Policromático actúa sobre los leucocitos tiñéndolos de acuerdo a la afinidad de las células,
dependiendo de que estas sean acidofilicas o basofilicas, este colorante permitirá que estas
células puedan ser diferenciadas en cuanto a su morfología, ya que permite teñir tanto el
núcleo, los granos que contengan y su citoplasma entre otras cosas.

4.- MATERIALES A UTILIZAR: (Equipo de 6 integrantes)

CANTIDAD DESCRIPCIÒN

1 Adaptador para sistema la vacío

1 Tubos al Vacio con EDTA c/tapa color lila


1 Gradilla

6 Portaobjetos

1 Contenedor para punzocortantes


[Escribir texto]

1 Contenedores para biológicos infecciosos

Fco. Torundas

5.- EQUIPO A UTILIZAR:

CANTIDAD DESCRIPCIÒN
1 Microscopio
1 Centrífuga
2 Cámara de Neubauer
4 Cubrehematimetro
6.- MATERIAL BIOLÓGICO

CANTIDAD DESCRIPCIÓN
5 ml Sangre

7.- REACTIVOS:

CANTIDAD DESCRIPCIÓN
100 ml.
Diluyente de plaquetas
100 ml.
Alcohol al 70%
100 ml.
Aceite de inmersión

8.- RECOLECCIÓN DE LA MUESTRA:

Extraer sangre venosa recolectada en tubo con anticoagulante


[Escribir texto]

9.- DESCRIPCIÓN DE LA PRÀCTICA

PREPARACIÓN DEL COLORANTE DE WRIGTH:


Colorante de Wright: para 100 Ml;
 Se requiere de colorante de Wright (0.3g),
 Metanol (97.0 mL)
 Glicerol (3.0 mL).
 Disolver en un mortero el colorante con el glicerol.
 Una vez disuelto se adiciona el metanol trasvasándolo a un frasco oscuro.
 Agitar.
 Filtrar antes de usar.

Solución amortiguadora tamponada: en un litro de agua destilada se agregan 3.76 g de


hidrofosfato disódico (Na2HPO4* 2H20) y 2.10g de fosfato de potasio dihidrogenado (KH2PO4).
Mezclar todos los reactivos y guardar en frasco de vidrio en lugar fresco. Ajustar el pH a 7.2.

DESARROLLO DE LA PRACTICA

1. Se coloca una gota de sangre a dos cm del extremo de un porta objetos


2. Con otro portaobjetos donde se encuentra la gota de sangre formando un ángulo de 45°
3. Deslizamos suavemente el portaobjetos para hacer el frotis dejamos secar.

1. Colocar el frotis secado al aire sobre una rejilla o cubeta de tinción con la sangre hacia
arriba (ver figura 4).
2. Cubrir completamente el portaobjetos o cubreobjetos con el colorante de Wright gota a
gota. Dejarlo que permanezca en el frotis aproximadamente de 5-8 minutos, para fijar los
glóbulos sanguíneos. El colorante deberá cubrir completamente el portaobjetos, pero no
debe derramarse por los bordes. Deberá agregarse una cantidad adicional si éste se
comienza a evaporar.
3. Agregar directamente al colorante un volumen igual de amortiguador de Wright, para
evitar la coloración débil. Esperar la formación de brillo metálico. Puede usarse de igual
manera agua desionizada. Dejar actuar de 10-15 minutos.
4. Lavar con agua en el chorro cuidadosamente hasta que la extensión presente un aspecto
rosado al examinarlo a simple vista.
5. Limpiar el dorso del portaobjetos con una gasa o algodón humedecido en alcohol para
eliminar cualquier resto de colorante.
[Escribir texto]

6. Secar al aire y observar con el microscopio con el objetivo de inmersión.

OBSERVAR AL MICROSCOPIO LOS DIFERENTES TIPOS DE LEUCOCITOS

MONOCITOS LINFOCITO BASOFILO

NEUTROFILO SEGMENTADO EOSINOFILO PLAQUETAS

10.- REPORTE DE RESULTADOS

De acuerdo a como se haya realizado nuestra tinción y en base a los conocimientos previos
que tengamos de la identificación de estructuras leucocitarias, podremos identificar con
facilidad estos cuerpos, cuantificándolos y diferenciándolos para conocer el estado de salud del
paciente y así contribuir al diagnóstico de posibles leucemias u otras enfermedades.

Valores de referencia
 Neutrófilos: 40 a 60%
 Linfocitos: 20 a 40%
 Monocitos: 2 a 8%
 Eosinófilos: 1 a 4%
 Basófilos: 0.5 a 1%
[Escribir texto]

 En banda (neutrófilos jóvenes): 0 a 3%

11.- RECOMENDACIONES

Al trabajar en el Laboratorio:

 Debe tenerse cuidado en mantener toda el área de trabajo en condiciones limpias.


 Todos los materiales contaminados deben colocarse de inmediato en un
desinfectante.
 Deben utilizarse guantes desechables, cubreboca, bata de laboratorio blanca, larga y
manga larga, debidamente abotonada.
 No colocarse ni llevarse nada a la boca.
 Tanto la eosina como el azul de metileno son muy sensibles a las variaciones de pH
de las diferentes estructuras celulares, de forma que las que tienen carácter básico
fijan la eosina mientras que las que poseen propiedades ácidas fijan principalmente
el azul de metileno.
Tinción de Wright
 Esta coloración es conocida como policromática debido a que produce varios
colores. Es una solución de alcohol metílico de un colorante ácido (eosina) y otro
básico (azul de metileno). El alcohol sirve como un fijador del frotis sanguíneo al
portaobjetos. El amortiguador, que consiste en una solución tamponada, mantiene el
pH del colorante y favorece la mejor absorción por los diferentes componentes
celulares.

12.- NOTAS IMPORTANTES

Interpretación de resultados
1. En el tubo control no debe encontrarse aglutinación.
2. Si el tubo problema se observa con aglutinación se habla de la presencia del factor Du.
3. Si hubiese aglutinación en los dos tubos significa que se trata de glóbulos rojos cubiertos o
bloqueados, por lo tanto si se trata de donador la sangre será desechada.

SIGNIFICADO DE LOS RESULTADOS ANORMALES:


Un conteo bajo de Leucocitos significa: leucopenia, puede indicar insuficiencia de la médula
ósea ( por ejemplo, debido a un granuloma, tumor, fibrosis), presencia de sustancias citotóxica,
enfermedades vasculares del colágeno (como lupus eritematoso), enfermedad del hígado o
bazo con radiación.

Un conteo alto de Leucocitos significa: leucocitosis, puede indicar: enfermedades


infecciosas, enfermedad inflamatoria (como artritis reumatoide o alergia) leucemia, estrés
emocional o físico, severo daño tisular ( por causas como quemaduras.

El paciente con un trastorno hemorrágico, clínicamente significativo, acude al médico con


algunos tipos de síntomas hemorrágicos, con lo que se puede indicar la parte defectuosa del
mecanismo de coagulación, y dentro de estas causas pueden estar la cantidad inadecuada de
plaquetas.
[Escribir texto]

13.- ACTIVIDADES

 Anota tus resultados.


 Informa tus resultados
 Comenta conclusiones con tus compañeros.
 Contesta el siguiente cuestionario.
 Completa el glosario de términos.

CUESTIONARIO

1.- Indique cuáles son los componentes del colorante de Wright y como se prepara.

2. ¿Qué soluciones pueden utilizarse como amortiguador para la tinción de Wright y cuál es el
pH que debe tener?

3. ¿Qué sucede cuando se evapora el colorante?

14- GLOSARIO DE TERMINOS

1.- La La fórmula leucocitaria se define como el recuento porcentual de las


diferentes subpoblaciones leucocitarias.
2.- Una tinción o coloración es una técnica auxiliar utilizada en microscopía para mejorar el
contraste en la imagen vista al microscopio.
3.- Los colorantes y tinturas son sustancias que usualmente se utilizan en biología y
medicina para resaltar estructuras en tejidos biológicos que van a ser observados con la ayuda
de diferentes tipos de microscopios.

4.- Una célula es la unidad morfológica y funcional de todo ser vivo.


[Escribir texto]

15.- EVALUACIÓN:

GUÍA DE OBSERVACIÓN
Instrucciones:
a) Lee y analiza el fundamento de la práctica
b) Selecciona adecuadamente los materiales y reactivos
c) Desarrolla el procedimiento de la práctica
d) Lee e interpreta los resultados
e) Observaciones con base a la norma 166 y 087

Aspecto a observar Cumple


SI NO N/A Observacione Puntos
s
a) Leyó y analizó el
fundamento de la práctica. 1p
b) Seleccionó y preparó
adecuadamente el material y
reactivo. 1p
c) Desarrollo correctamente el
procedimiento. 2p
d) Interacción grupal e
individual. 1p
e) Manipuló con destreza el
equipo. 2p
f) Leyó, interpretó y contrastó
eficazmente sus resultados
con los valores
referenciales.1p
g) Cumplió con los aspectos
de las NOM 005 y 087. 2p
16.- BIBLIOGRAFÍA ESPECÌFICA

AUTOR TÌTULO EDITORIAL


Lynch, Raphael, Mellor, Métodos de Laboratorio Interamericana

Spare, Inwood.
Todo-Sanford Diagnostico y Tratamiento Salvat.

Clínico por el Laboratorio.


Marcus A. Krupp, Norman J.Sweet Diagnostico clínico Integral El Manual Moderno.
Klusek Hamilton. Manual de Diagnostico Interamericana.

Browen Rose Clínico


[Escribir texto]

DISPOSICIÓN DE RESIDUOS
Eliminación de punzocortantes:

La eliminación de punzocortantes adecuada es parte importante de la toma demuestra. En este


caso la eliminación de aguja de toma múltiple, está de acuerdo a normas nacionales (NOM-
087-ECOL-SSA1-2002) y las políticas de buenas prácticas establecidas en cada laboratorio.
Los punzocortantes como agujas y lancetas así como tubos rotos contaminados deben
depositarse en el contenedor rojo rígido. En los contenedores existen diferentes capacidades,
lo cual permite que el laboratorio seleccione el más adecuado a su flujo de trabajo y material
utilizado. Se debe tomaren consideración las instrucciones de utilización recomendadas por los
fabricantes y cuidar no sobrellenar el contenedor, pues esto puede ser un factor de riesgo para
el personal técnico y de intendencia. Con una adecuada eliminación se disminuyen los eventos
de punción accidental tanto para el paciente y trabajador de salud, como para el personal de
intendencia.

Eliminación de muestras biológicas

Los tubos para extracción de sangre contaminados o llenos tienen que recogerse en
recipientes apropiados para residuos de material potencialmente infeccioso que en este caso
son bolsas rojas. Los tubos de vidrio que contengan las muestras serán colocados en agua con
cloro durante 24 h. La eliminación de residuos se hace usualmente en instalaciones incineradoras
apropiadas.
[Escribir texto]

Práctica No. Titulo de la Práctica: Fecha de realización:


Febrero 2013
6
Cuantificación del número de Plaquetas
 Competencia profesional: Analiza e Identifica la
sangre y sus componentes, clasifica los tipos de
anticoagulantes, determina el hematocrito, la
Submódulo 2 concentración de la hemoglobina, recuento de
glóbulos rojos, índices eritrocitarios (VCM, HCM y
Aplicar Técnicas para Biometría CCMH), cuenta de reticulocitos, recuento de
leucocitos, de plaquetas y lee el diferencial,
Hemática
atendiendo al paciente con respeto rechazando toda
forma de discriminación, aplicando medidas de
higiene y seguridad durante el proceso.

1.- OBJETIVO DE LA PRÁCTICA:

Cuantifica plaquetas utilizando técnicas manuales y automatizadas, verificando la


calidad del proceso con herramientas estadísticas básicas.

2.- INTRODUCCIÓN:

Los trombocitos o plaquetas constituyen una parte esencial del organismo hemostático del
cuerpo. Son cuerpecillos hialinos incoloros que miden de 2-4 μ, de bordes irregulares, pero
pueden tener forma esférica u ovalada, carecen de núcleo y son muy frágiles. Provienen de una
célula gigante que mide de entre 50-100 μ de diámetro llamada megacariocito.La hemostasia
normal requiere que las plaquetas estén presentes en un número adecuado y que sean
capaces de llevar a cabo todas sus funciones. Por otra parte las anormalidades en el número y
la función pueden dar origen a fenómenos hemorrágicos, trombóticos o ambos.
Se debe tener en cuenta que el recuento manual realizado en un número relativamente
pequeño de plaquetas tiene un coeficiente de variación mayor al obtenido en un analizador
automático, y a menos que estos recuentos sean realizados por una persona experta, hay una
probabilidad significativa de introducir un error.

RESULTADO DE APRENDIZAJE: Cuantifica plaquetas a partir una muestra sanguínea


humana, por medio de métodos manuales y automatizados.

ESTRATEGIA ENSEÑANZA- APRENDIZAJE:


Actividad 1: Realiza la cuantificación de plaquetas mediante microscopía óptica, utilizando el
método directo en cámara de Neubauer. El docente proyectará una preparación con el
microscopio para enseñanza para que el alumno identifique las plaquetas en esta técnica.

Actividad 2: Compara los resultados obtenidos en las determinaciones manuales, contra los
datos arrojados, para la misma muestra en el equipo automatizado.
[Escribir texto]

Actividad 3: Obtiene los valores de coeficiente de variación, coeficiente de error y desviación


estándar, para verificar la precisión y exactitud de las determinaciones manuales, contra las
automatizadas.

3.- FUNDAMENTO

El fundamento del método consiste en la producción de hemólisis por la utilización de un líquido


hipotónico, y el mantenimiento de las plaquetas intactas y sin agrumar por la presencia de p-
aminobenzoato de dietilaminoetilo.

4.- MATERIALES A UTILIZAR: (Equipo de 6 integrantes)

CANTIDAD DESCRIPCIÒN

1 Adaptador para sistema la vacío

1 Tubos al Vacio con EDTA c/tapa color lila


1 Gradilla

6 Pipeta de Thoma para glóbulos rojos (perla roja)

4 tubos 13 x 100
6 Boquilla roja
1 Papel parafilm

Papel filtro
2 Caja de Petri
1 Contenedor para punzocortantes

1 Contenedores para biológicos infecciosos

Fco. Torundas
5.- EQUIPO A UTILIZAR:

CANTIDAD DESCRIPCIÒN
1 Microscopio
1 Centrífuga
2 Cámara de Neubauer
4 Cubrehematimetro
[Escribir texto]

6.- MATERIAL BIOLÓGICO

CANTIDAD DESCRIPCIÓN
Sangre

7.- REACTIVOS:

CANTIDAD DESCRIPCIÓN
100 ml.
Diluyente de plaquetas
100 ml.
Alcohol al 70%

8.- RECOLECCIÓN DE LA MUESTRA:

Extraer sangre venosa recolectada en tubo con anticoagulante

9.- DESCRIPCIÓN DE LA PRÀCTICA

1.- Obtener 10 ml de sangre venosa, en un tubo con anticoagulante EDTA.


2.Agitar la sangre de manera suave en el tubo para mezclarla con el anticoagulante
3.-Llevar la sangre hasta la marca 1.0 de la pipeta de Thoma.
4.-Limpiar la punta con una gasa.
[Escribir texto]
[Escribir texto]

5.-Aforar con liquido diluyente de plaquetas hasta la marca 101 de la pipeta (Dilución 1:100)
6.-Tapar los extremos con papel parafilm y mezclar durante 1 minuto

7.- Colocar la Cámara de Neubauer sobre una superficie horizontal y poner el Cubrehematimetro
sobre las mesas

8.-Descartar las primeras 4 gotas de la pipeta. Con la quinta gota cargar la cámara, depositándola entre la
meseta y el Cubrehematimetro y dejarla difundir por capilaridad, teniendo cuidado de que no se formen
burbujas o se derrame el líquido hacia los surcos.
[Escribir texto]

9.-Colocar la cámara de Neubauer ya cargada en el interior de una caja de Petri, con


papel filtro humedecido en agua para evitar la evaporación, dejar en reposo de 10 a 15
minutos.

10.-Observar al microscopio contando en la cuadricula central (para glóbulos rojos) las plaquetas que
aparecen mucho más pequeñas que los hematíes, redondas, alargadas u ovales, altamente refringentes.
11.- El cuadro central de la cuadricula mide 1.0 mm por lado y está dividido en 16 cuadritos más pequeños,
de tal manera que el número total de estos últimos es de 400, mismos en los que se lleva a cabo el
recuento de plaquetas
Observaciones.
Enfocando la cuadricula central se aprecian los 25 cuadros centrales, con una gran cantidad de
plaquetas en ellos. Se pueden distinguir solo algunos eritrocitos, mucho mayores que las plaquetas,
que desprenden gran brillo.

Uno de los cuadros centrales, lleno de plaquetas, de forma redonda la mayoría u ovalada.

10.- REPORTE DE RESULTADOS

Los recuentos de plaquetas, al igual que los eritrocitos y leucocitos, se expresan como
concentraciones, que en este caso serían número de células por unidad de volumen de sangre,
que es 1mm3
Después de contar las plaquetas presentes en los 400 cuadritos centrales, el número obtenido se
multiplica por el factor de dilución de la siguiente manera:

N° de plaquetas x mm3 = No. De plaquetas contadas X dilución X 10


Dilución: 1:100
[Escribir texto]

Este factor corresponde, para obtener los resultados por mm 3 ya que el volumen de la cámara es
de 0.1 mm3
Ejemplo;
El número de plaquetas fue de 535, por lo que al realizar los cálculos quedaron así:
No. de plaquetas = 535 X 100 X 10= 535 000 plaquetas por mm3, lo que indica un índice elevado
de plaquetas

VALORES DE REFERENCIA

Hombres y Mujeres:………………………………..150 000 - 450 000


(Millones de células/mm3)

11.- RECOMENDACIONES

Al trabajar en el Laboratorio:

 Debe tenerse cuidado en mantener toda el área de trabajo en condiciones limpias.


 Todos los materiales contaminados deben colocarse de inmediato en un
desinfectante.
 Deben utilizarse guantes desechables, cubreboca, bata de laboratorio blanca, larga y
manga larga, debidamente abotonada.
 No colocarse ni llevarse nada a la boca.

12.- NOTAS IMPORTANTES

Interpretación de resultados
4. En el tubo control no debe encontrarse aglutinación.
5. Si el tubo problema se observa con aglutinación se habla de la presencia del factor Du.
6. Si hubiese aglutinación en los dos tubos significa que se trata de glóbulos rojos cubiertos o
bloqueados, por lo tanto si se trata de donador la sangre será desechada.

4.-El paciente con un trastorno hemorrágico, clínicamente significativo, acude al médico con
algunos tipos de síntomas hemorrágicos, con lo que se puede indicar la parte defectuosa del
mecanismo de coagulación, y dentro de estas causas pueden estar la cantidad inadecuada de
plaquetas

13.- ACTIVIDADES

 Anota tus resultados.


 Informa tus resultados
 Comenta conclusiones con tus compañeros.
 Contesta el siguiente cuestionario.
 Completa el glosario de términos.

CUESTIONARIO
[Escribir texto]

1.- Menciona los diferentes métodos para la cuantificación de las plaquetas


2.- Menciona el diluyente que se usa para la dilución de las plaquetas.

3. Menciona los reactivos que se utilizan en esta prueba:


4.- ¿A qué dilución se diluyen las plaquetas en este método?

14- GLOSARIO DE TERMINOS

1.- La disminución de plaquetas se denomina Trombopenia o púrpura trombocitopénica.


2.- El aumento se denomina trombocitosis.

3.- Las plaquetas, o trombocitos; Son fragmentos citoplasmáticos pequeños, irregulares y


carentes de núcleo, de 2-3 µm de diámetro, 1 derivados de la fragmentación de sus células
precursoras, los megacariocitos; la vida media de una plaqueta oscila entre 8 y 12 días. Las
plaquetas juegan un papel fundamental en la hemostasia y son una fuente natural de factores
de crecimiento. Estas circulan en la sangre de todos los mamíferos y están involucradas en la
hemostasia, iniciando la formación de coágulos o trombos.

4.- ADHESION PLAQUETARIA: Las plaquetas se adhieren al colágeno, al subendotelio y a las


superficies artificiales. Después de adherirse se explayan en las superficies. En la mayoría de
los casos la secuencia es adhesión, disiminación y liberación del contenido de los gránulos. Las
plaquetas no se adhieren al endotelio ni a las células endoteliales normales.

5.- Hemostasia o hemostasis es el conjunto de mecanismos aptos para detener los procesos
hemorrágicos; en otras palabras, es la capacidad que tiene un organismo de hacer que la
sangre en estado líquido permanezca en los vasos sanguíneos.

6.-Se denomina coagulación al proceso por el cual la sangre pierde su liquidez, tornándose
similar a un gel en primera instancia y luego sólida, sin experimentar un verdadero cambio de
estado.

También podría gustarte