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33
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MANUAL DE PRÀCTICAS
SUBMODULO 2
Biometría Hemática
SEMESTRE: CUARTO
INDICE
PAG.
I. INTRODUCCIÓN.........................................................
V. VALIDACIÓN..............................................................
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I. INTRODUCCIÓN
Práctica
Nombre de la práctica
Número
Determinación de Hemoglobina 1
INTRODUCCIÓN:
Los exámenes de laboratorio pueden realizarse por muchas razones, como investigación
rutinaria de salud o sospecha de enfermedad o de toxicidad. También pueden ser utilizados
para determinar si la efectividad de un medicamento mejora o empeora. Los exámenes pueden
medir el éxito o fracaso de un tratamiento.
La hemoglobina es una proteína pigmentada de color rojo transportadora de oxígeno que se
encuentra solo en los eritrocitos de los vertebrados. Es un tetrámero con dos pares de cadenas
polipeptídicas diferentes. Cada una de ellas posee un derivado de la porfirina llamado grupo
hemo, que a su vez contiene hierro.
Las dos principales funciones de la hemoglobina son el transporte de oxígeno y amortiguador
del pH.
Las concentraciones de hemoglobina están influidas por variaciones fisiológicas como la edad,
sexo, deshidratación, postura y altitud, y por procesos patológicos. Se encuentran valores
patológicos en anemias y en policitemias.
La determinación de la concentración de hemoglobina se ha convertido en una de las pruebas
más importantes en el diagnóstico y tratamiento de la anemia. Las tres causas principales de
anemia son: alteración en la síntesis de los eritrocitos en la médula ósea, pérdidas de sangre
excesivas y transporte alterado de eritrocitos hacia sangre periférica.
Se observan valores de hemoglobina elevados en policitemia vera, eritrocitosis.
Actividad 1: Obtiene muestra sanguínea de los individuos que cumplen con los requisitos
para realizarles una biometría hemática.
2.- FUNDAMENTO
El ión ferroso de la hemoglobina se oxida a ión férrico por acción del ferricianuro potásico
formándose hemiglobina (metahemoglobina). La hemiglobina reacciona con el cianuro para
formar cianhemiglobina (cianmetahemoglobina) que se puede medir por espectrofotometría.
CANTIDAD DESCRIPCIÒN
2 Gradilla
Pipeta de Sahli
6
Paquete Gasas
CANTIDAD DESCRIPCIÒN
1 Espectrofotómetro
CANTIDAD DESCRIPCIÓN
5 ml Sangre
6.- REACTIVOS:
CANTIDAD DESCRIPCION
CÁLCULOS
La concentración de hemoglobina en la muestra se calcula a partir de la fórmula:
Con Patrón:
A Muestra
_________ X C Patrón = C Muestra
A Patrón
VALORES DE REFERENCIA
Hombres Mujeres
12-14 años 12,0-16,0 g/dL 11,5-15,0 g/dL
15-17 años 11,7-16,6 g/dL 11,7-15,3 g/dL
18-74 años 13,5-17,5 g/dL 12,0-16,0 g/dL
10.- RECOMENDACIONES:
Al trabajar en el Laboratorio:
12.- ACTIVIDADES:
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La hemoglobina es una proteína conjugada que sirve para el transporte de oxígeno y dióxido de
carbono.
La masa total de eritrocitos de un adulto contiene unos 600gr. De hemoglobina capaces de
transportar 800ml de oxígeno.
La parte proteica o globina tiene 4 cadenas polipeptídicas que se denominan con las letras α, β,
γ, δ. Existe una cadena más la ε que está presente durante los 3 primeros meses de vida se
diferencian unas de las otras en el numero o posición (de los aminoácidos de los que están
compuestas). Por lo tanto existen varios tipos de hb. en el ser humano se pueden encontrar las
siguientes hemoglobinas normales:
mL: mililitro
DISPOSICIÓN DE RESIDUOS
Eliminación de punzocortantes:
La eliminación de punzocortantes adecuada es parte importante de la toma demuestra. En este
caso la eliminación de aguja de toma múltiple, está de acuerdo a normas nacionales (NOM-
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14.- EVALUACIÓN:
GUÍA DE OBSERVACIÓN
Instrucciones:
a) Lee y analiza el fundamento de la práctica
b) Selecciona adecuadamente los materiales y reactivos
c) Desarrolla el procedimiento de la práctica
d) Lee e interpreta los resultados
e) Observaciones con base a la norma NOM-003-SSA2-1993
Spare, Inwood.
Todo-Sanford Diagnostico y Tratamiento Salvat.
2 Hematocrito
INTRODUCCIÓN: Este método es uno de los más sencillos y exactos. El tubo de Wintrobe (el
mismo empleado para la VSE) Tiene 11.5 cm. De largo y 3mm de luz, esta graduado de 0 a
100 en mm con marcas también en cm. Tanto en sentido ascendente como descendente. La
concentración final debe ser inferior a 2mg, de EDTA por ml de sangre de otra manera se
encontraran anomalías en el hematocrito. Esto resulta especialmente importante cuando se
utilizan uno al vacío que contiene gran cantidad de EDTA. l volumen total de sangre en un
adulto es 7 a 8% de su peso corporal; siendo el 55%la porción líquida llamada plasma cuya
composición corresponde fundamentalmente 90 % agua y el 10 % diferentes metabolitos. El
45% restante de la sangre se compone de elementos celulares eritroides, plaquetarios y
leucocitarios.
Para que una muestra tenga significado biológico, debe ser representativa y homogénea, por lo
que se debe tener conocimiento sobre:
Actividad 1: Conocer el porcentaje del volumen de los eritrocitos presentes en la sangre por el
macrométodo usando tubo de Wintrobe.
Actividad 1: Conocer el porcentaje del volumen de los eritrocitos presentes en la sangre por el
micrométodo usando tubo capilar.
2.- FUNDAMENTO
El hematocrito es un examen de sangre que mide el porcentaje del volumen de toda la sangre
que está compuesta de glóbulos rojos. Esta medición depende del número de glóbulos rojos y
de su tamaño. El resultado se expresa en porcentaje.
El hematocrito casi siempre se ordena como parte de un conteo sanguíneo completo
(hemograma).
Para la realización de esta prueba, con el macrométodo, la sangre se extrae típicamente de
una vena, por lo general de la parte interior del codo o del dorso de la mano.
Cuando se inserta la aguja para extraer la sangre, algunas personas sienten un dolor
moderado, mientras que otras sólo sienten un pinchazo o sensación de picadura.
Posteriormente, puede haber algo de sensación pulsátil.
Un volumen de sangre se deposita en un tubo de Wintrobe, por medio de una pipeta, hasta la
marca del 10 y se debe de centrifugar. Al terminar la prueba, deben de quedar separados el
plasma de la sangre y las células, depositándose en el fondo y presentando un color rojo
intenso.
Para la realización del micrométodo, se utilizan unos tubos de un calibre muy delgado,
llamados capilares, y pueden ser llenados con la misma sangre venosa o de capilar. Este último
es el más usado, por ser más rápido y menos riesgoso al usar sangre capilar. Para su lectura
se usa una escala estandarizada
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CANTIDAD DESCRIPCIÒN
2 Gradilla
6 Pipetas Pasteur
1 Plastilina
1 Encendedor o cerillos
Paquete Gasas
CANTIDAD DESCRIPCIÒN
1 Centrifuga
Mi
1 Microcentrifuga
CANTIDAD DESCRIPCIÓN
5 ml Sangre
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6.- REACTIVOS:
CANTIDAD DESCRIPCION
Fco.
EDTA al 5%
Fco. Alcohol al 70%
Fco. Agua destilada
7.- RECOLECCION DE LA MUESTRA:
Para Macrohematocrito:
1. Una vez seleccionada, se desinfecta la zona con alcohol al 70%, y se practica punción
venosa.
2. La sangre es recogida en un tubo lila con EDTA.
3. Llenar el tubo de Wintrobe con la sangre extraída con anticoagulante ayudándose de una
pipeta Pasteur, comenzando desde el fondo hasta la marca superior de 100 mm, teniendo
cuidado de no provocar espuma ni dejar burbujas en el tubo.
4. Se recomienda como medida de precaución tapar el tubo con un tapón de goma para evitar
la evaporación.
Para Microhematocrito:
2. Ocluir (tapar) el extremo del capilar que no estuvo en contacto con la sangre, con plastilina
o sellando con fuego.
6. Para la regleta, se sostiene el tubo frente a la escala de manera que el fondo de la columna
de eritrocitos, quede exactamente al mismo nivel de la línea horizontal correspondiente al
cero. Desplazar el tubo a través de la escala hasta que la línea marcada con el 1.0 quede al
nivel del tope del plasma. El tubo debe de encontrarse completamente en posición vertical.
La línea que pase al nivel del tope de la columna de eritrocitos indicara la fracción del volumen
de estos.
Tras una centrifugación de la sangre total se pueden apreciar dos niveles, uno con el depósito
de los glóbulos rojos, principalmente y en color rojo oscuro, otra capa blanca, de leucocitos y
una delgada de color gris, que son plaquetas y finalmente otro nivel del plasma total, de un leve
color amarillento.
HEMATOCRITO: 50 %
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10.- RECOMENDACIONES:
Al trabajar en el Laboratorio:
12.- ACTIVIDADES:
CUESTIONARIO
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mL; mililitro
DISPOSICIÓN DE RESIDUOS
Eliminación de punzocortantes:
14.- EVALUACIÓN:
GUÍA DE OBSERVACIÓN
Instrucciones:
a) Lee y analiza el fundamento de la práctica
b) Selecciona adecuadamente los materiales y reactivos
c) Desarrolla el procedimiento de la práctica
d) Lee e interpreta los resultados
e) Observaciones con base a la norma NOM-003-SSA2-1993
Spare, Inwood.
Todo-Sanford Diagnostico y Tratamiento Salvat.
INTRODUCCIÓN: Los glóbulos rojos son células anucleadas que se forman en la médula ósea
a partir de «stem cells». Una vez en la circulación tienen como principal función transportar
oxígeno a los tejidos, tarea que desarrollan por aproximadamente 120 días, hasta que el
sistema fagocítico mononuclear los retira de la circulación.
Para realizar este conteo se debe utilizar la cámara de Neubauer esta es una cámara adaptada
al microscopio de capo claro se trata de un portaobjetos con una depresión el centro, es un
cuadro de 3x3mm con una separación de dos líneas consecutivas de 0.25mm así pues el área
sombreada y marcada con L corresponde a un milímetro cuadrado. La depresión central del
cubreobjetos está hundida 0.1mm respecto a la superficie de forma que cuando se cubre con le
portaobjetos el o volumen es de 0.1 m cúbicos.
OBJETIVO DE LA PRÁCTICA:
Aprender a realizar un recuento de Eritrocitos por milímetro cúbico de sangre, interpretar
el resultado, así como adiestrarse en el manejo de la cámara de Neubauer y la pipeta de
Thoma
2.- FUNDAMENTO
CANTIDAD DESCRIPCIÒN
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1
Tubo de tapón color lila
CANTIDAD DESCRIPCIÒN
1 Microscopio
6 Cámara de Neubauer
6 Cubrehematimetro
6 Contadores celulares
CANTIDAD DESCRIPCIÓN
5 ML Sangre con anticoagulante
6.- REACTIVOS:
CANTIDAD DESCRIPCION
20 ml Solución de Hayem
0.2 ml Anticoagulante (sol. EDTA)
7.- RECOLECCION DE LA MUESTRA:
Formula Roja:
C.- Recuento eritrocítico (Eri): Es la cantidad total de eritrocitos circulantes por microlitro
de sangre.
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1.- Aspira sangre hasta la marca 0.5 en la pipeta de toma para glóbulos
rojos, para realizar una dilución de 1/200, y si se carga hasta 1, la disolución será de 1/100,
limpiar la punta con gasa o papel absorbente.
2.- Continúa aspirando con el líquido de Hayem hasta la marca de
101. Limpiar con gasa o papel absorbente
8.- En el rencuentro se incluyen las células que cubren o tocan por dentro o por fuera de las
líneas limitantes superior izquierda en el cuadrado pequeño de rencuentro y no se
consideran los correspondientes a los limites inferior y derecho. Se hace el rencuentro y
no se consideran los correspondientes a los limites inferior y superior derecho. Se hace el
rencuentro en la cuadricula central, las cuatro esquinas y el centro.
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PROCESO DE ENCENDIDO
PROCESO DE ANALISIS:
Cuenta los eritrocitos en los 5 cuadros pequeños (80 cuadritos pequeños) asignados para su
conteo de la cámara cuanta glóbulos
N x 200 x 10 x 400
= N x 10,000
80
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Por lo tanto la cantidad de glóbulos rojos leídos en los 5 cuadros y adicionada de 4 ceros da la
cifra correspondiente al total de eritrocitos en 1 mm 3 de sangre.
10.- RECOMENDACIONES:
Al trabajar en el Laboratorio:
VALORES DE REFERENCIA
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12.- ACTIVIDADES:
CUESTIONARIO
10. Células en diana: Son células con forma de tiro al blanco que se presentan en anemias de
tipo regenerativo junto con policromasia, aunque cuando se presentan y no existe policromasia
se pueden relacionar con enfermedad renal, hepática o esplénica.
DISPOSICIÓN DE RESIDUOS
Eliminación de punzocortantes:
Los tubos para extracción de sangre contaminados o llenos tienen que recogerse en
recipientes apropiados para residuos de material potencialmente infeccioso que en este caso
son bolsas rojas. Los tubos de vidrio que contengan las muestras serán colocados en agua con
cloro durante 24 h. La eliminación de residuos se hace usualmente en instalaciones incineradoras
apropiadas.
14.- EVALUACIÓN:
GUÍA DE OBSERVACIÓN
Instrucciones:
a) Lee y analiza el fundamento de la práctica
b) Selecciona adecuadamente los materiales y reactivos
c) Desarrolla el procedimiento de la práctica
d) Lee e interpreta los resultados
e) Observaciones con base a la norma 166 y 087
d) Interacción grupal e
individual. 1p
e) Manipuló con destreza el
equipo. 2p
f) Leyó, interpretó y contrastó
eficazmente sus resultados
con los valores
referenciales.1p
g) Cumplió con los aspectos
de las NOM 005 y 087. 2p
15.- BIBLIOGRAFÍA ESPECÌFICA:
Spare, Inwood.
Todo-Sanford Diagnostico y Tratamiento Salvat.
2.- FUNDAMENTO
Los reticulocitos contienen una fina red de ARN y protoporfirina que se puede teñir con el
azul de cresil brillante.
Los reticulocitos se evidencian sobre unos frotis gracias a ciertos colorantes supravitales como
el azul de metileno o azul de cresil brillante, que permite observar los organoides
citoplasmáticos que aún llevan y que han desaparecido en los glóbulos rojos adultos: es la
<<sustancia reticulofilamentosa>>. La técnica ha de realizarse a ser posible antes de que
transcurra 2 horas de la extracción, con un máximo de 24 horas.
Puede apreciarse sobre un portaobjetos, el porcentaje de glóbulos rojos que son reticulocitos,
pero es deseable expresar los resultados en valores absolutos, así pues como el ciclo vital de
un hematíes es de 120 días, la médula ósea reemplaza todos los días aproximadamente 1% de
hematíes.
CANTIDAD DESCRIPCIÒN
6 Portaobjetos
Frasco Torundas
CANTIDAD DESCRIPCIÒN
1 Centrifuga clínica
1 Contador manual
1 Microscopio
DESCRIPCIÓN
5 ML Sangre con anticoagulante
6.- REACTIVOS:
CANTIDAD DESCRIPCION
1
Azul cresil brillante al 1% o azul de metileno.
1 Solución salina fisiológica
1 Alcohol etílico al 70%
7.- RECOLECCION DE LA MUESTRA:
CALCULOS:
Interpretación
La cuenta de reticulocitos es un índice de eritropoyesis.
10.- RECOMENDACIONES:
Al trabajar en el Laboratorio:
Los reticulocitos se pueden observan como hematíes con granulaciones o filamentos, de color azul
oscuro.
También podemos observar con esta tinción cuerpos de Heinz, que son alteraciones en las
cadenas de hemoglobina o déficit de alguna enzima eritrocitaria, dan lugar a la hemoglobina
inestable que se desnaturaliza con facilidad dando lugar a precipitado dentro del hematíe.
Cuando existe anemia, con disminución del número de hematíes. Su valor deber ser corregido de
acuerdo a la intensidad de la anemia, aplicándose la siguiente fórmula:
FACTORES DE ERROR:
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CAUSAS DE AUMENTO:
Anemia hemolítica y hemólisis.
Pérdida aguda de sangre.
En respuesta a un anemia después de una terapia específica.
Ejemplo: Hierro, Vitamina B12, Ácido fólico.
Desórdenes de médula ósea infiltrada.
CAUSAS DE DISMINUCIÓN:
Aplasia medular.
Reemplazo de precursores eritrocíticos por células leucémicas.
Infecciones
Toxinas
Drogas
Enfermedad Renal
DESÓRDENES DE MADURACIÓN
Anemia Ferropénica.
Anemia Megaloblástica
Anemia Sideroblástica
Anemia por enfermedad crónica.
VALORES DE REFERENCIA
En adultos de 0.5 a 2%.
En recién nacidos de 2,5 a 6,5%, alcanzando al valor del adulto a las dos semanas de
vida.
12.- ACTIVIDADES:
CUESTIONARIO
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Los reticulocitos son llamados así porque estas células contienen redes de polirribosomas.
La anemia se define como una concentración baja de hemoglobina en la sangre.
El ARN mensajero (ARN, o RNA de su nombre en ingles) es el ácido ribonucleico que contiene
la información genética procedente del ADN para utilizarse en la síntesis de proteínas, es decir,
determina el orden en que se unirán los aminoácidos. El ARN mensajero es un ácido nucleico
monocatenario, al contrario que el ADN que es bicatenario de doble hebra helicoidal.
14- EVALUACIÓN:
GUÍA DE OBSERVACIÓN
Instrucciones:
a) Lee y analiza el fundamento de la práctica
b) Selecciona adecuadamente los materiales y reactivos
c) Desarrolla el procedimiento de la práctica
d) Lee e interpreta los resultados
e) Observaciones con base a la norma 166 y 087
reactivo. 1p
c) Desarrollo correctamente el
procedimiento. 2p
d) Interacción grupal e
individual. 1p
e) Manipuló con destreza el
equipo. 2p
f) Leyó, interpretó y contrastó
eficazmente sus resultados
con los valores
referenciales.1p
g) Cumplió con los aspectos
de las NOM 005 y 087. 2p
Spare, Inwood.
Todo-Sanford Diagnostico y Tratamiento Salvat.
DISPOSICIÓN DE RESIDUOS
Eliminación de punzocortantes:
lo cual permite que el laboratorio seleccione el más adecuado a su flujo de trabajo y material
utilizado. Se debe tomaren consideración las instrucciones de utilización recomendadas por los
fabricantes y cuidar no sobrellenar el contenedor, pues esto puede ser un factor de riesgo para
el personal técnico y de intendencia. Con una adecuada eliminación se disminuyen los eventos
de punción accidental tanto para el paciente y trabajador de salud, como para el personal de
intendencia.
2.- INTRODUCCIÓN:
Los leucocitos, al igual que las demás células sanguíneas, se forman en la médula. La función
de cada tipo de glóbulo blanco (neutrófilos, eosinófilos, basófilos, linfocitos y monocitos) es
diferente. Las alteraciones que pueden presentar los leucocitos son del tipo oncohematológicas
y no neoplásicas; estas últimas se pueden clasificar en cuantitativas y cualitativas. La
leucopoyesis es un proceso que se lleva a cabo con gran actividad, ya que si el número de
granulocitos circulantes de ninguna manera es comparable al de los eritrocitos, en cambio se
estima que la sobrevida de los neutrófilos no excede de 5 días, de las cuales solo pasan 10 hrs.
en la sangre circulante.
La cuantificación o recuento de leucocitos es importante para el diagnóstico de algunas
enfermedades, como por ejemplo: Las leucemias.
El diluyente que más se utiliza en el laboratorio de hematología es el de Turk, el cual contiene
ácido acético en una concentración hipertónica, lo cual provoca la lisis de los eritrocitos, pero,
no de los leucocitos, el diluyente contiene además unas gotas de violeta de genciana o azul de
metileno, el cual permite reconocer fácilmente a los leucocitos, ya que tiñen ligeramente su
núcleo, permitiendo observarlos más fácilmente
La sangre anticoagulada se deposita en un líquido que permite evidenciar los leucocitos,
manteniéndolos visibles, mientras que los eritrocitos son hemolizados. El recuento del número
de leucocitos o glóbulos blancos se expresa por mm3 (milímetro cúbico).
3.- FUNDAMENTO
La sangre se diluye 1:2 con una solución hipotónica de ácido acético que destruye a los
eritrocitos. El azul de metileno permite reconocer fácilmente el líquido y observar mejor los
glóbulos blancos, a los que tiñe ligeramente. Los normoblastos no se destruyen, por lo que se
deben tomar en cuenta para corregir los resultados.
El recuento leucocitario representa el número de leucocitos en un litro de sangre completa.
CANTIDAD DESCRIPCIÒN
CANTIDAD DESCRIPCIÒN
1 Microscopio
1 Centrifuga
CANTIDAD DESCRIPCIÓN
5 ml. Sangre
7.- REACTIVOS:
CANTIDAD DESCRIPCIÓN
Fco. Liquido de Turk
Fco. Agua destilada
Fco. Ácido acético glacial 3.0 ml
Fco. Azul de metileno
1.- Obtener sangre por punción venosa con anticoagulante EDTA (tubo lila).
2.-Una vez obtenida la sangre con anticoagulante, se procede a aspirar la sangre con la pipeta
de glóbulos blancos hasta la marca de 0,5 y limpiar la punta con papel absorbente.
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3.-Introducir la pipeta en el tubo que contenga solución de Turk y absorber hasta la marca de 11
(no debe haber burbujas).
5.-Monte la laminilla de vidrio en la cámara para recuento que debe estar limpia y seca.
6.-Agitar la pipeta y descartar las cuatro primeras gotas para luego colocar una gota pequeña
de esta solución en la cámara.
7.-Dejar reposar por espacio de 3 minutos para que las células se sedimenten.
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9.-Para hacer el recuento se deben tomar solo en cuenta las células que toquen las líneas del
cuadro., este solo se aplica para los cuadros superior e izquierda
Para hacer el recuento de leucocitos hay que tomar en cuenta cual e su morfología vistos en la
cámara de Neubauer en el recuento la morfología de estos pueden ser unos como puntos
negros definidos.
Nº de leucocitos x mm³ = altura x dilución x área
Leucocitos contados en 4 campos Reemplazando = 1/10 x 1/20 x 4
Leucocitos contados en 4 campos = 4/200 = 1/50
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VALORES DE REFERENCIA
Adultos: de 5 000 a 10 000 por mm3
11.- RECOMENDACIONES:
Al trabajar en el Laboratorio:
13.- ACTIVIDADES
CUESTIONARIO
15.- EVALUACIÓN:
GUÍA DE OBSERVACIÓN
Instrucciones:
a) Lee y analiza el fundamento de la práctica
b) Selecciona adecuadamente los materiales y reactivos
c) Desarrolla el procedimiento de la práctica
d) Lee e interpreta los resultados
e) Observaciones con base a la norma 166 y 087
Spare, Inwood.
Todo-Sanford Diagnostico y Tratamiento Salvat.
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DISPOSICIÓN DE RESIDUOS
Eliminación de punzocortantes
La eliminación de punzocortantes adecuada es parte importante de la toma demuestra. En este
caso la eliminación de aguja de toma múltiple, está de acuerdo a normas nacionales (NOM-
087-ECOL-SSA1-2002) y las políticas de buenas prácticas establecidas en cada laboratorio.
Los punzocortantes como agujas y lancetas así como tubos rotos contaminados deben
depositarse en el contenedor rojo rígido. En los contenedores existen diferentes capacidades,
lo cual permite que el laboratorio seleccione el más adecuado a su flujo de trabajo y material
utilizado. Se debe tomaren consideración las instrucciones de utilización recomendadas por los
fabricantes y cuidar no sobrellenar el contenedor, pues esto puede ser un factor de riesgo para
el personal técnico y de intendencia. Con una adecuada eliminación se disminuyen los eventos
de punción accidental tanto para el paciente y trabajador de salud, como para el personal de
intendencia.
El análisis de la serie blanca incluye dos etapas: el recuento de leucocitos y el análisis del frotis
o extendido, que proporciona la fórmula leucocitaria diferencial, la cual se expresa normalmente
como porcentaje con respecto al total de glóbulos blancos presentes en el recuento. Por este
motivo, frente a alteraciones importantes en el número de leucocitos, es necesario conocer no
sólo la fórmula porcentual, sino también los valores absolutos de cada uno, para evitar así
falsas interpretaciones. El número absoluto se calcula multiplicando su porcentaje en la fórmula
leucocitaria por el número de leucocitos/mm³. Por ejemplo: eosinófilos 4%, leucocitos
7.000/mm³. El número absoluto de eosinófilos es 280/mm³, valor que se considera normal.
En reposo, en un adulto normal, el recuento de leucocitos fluctúa entre 5.000 y 7.000 células
por mm³. La fórmula leucocitaria normal para un adulto se encuentra en la tabla 1.
Se emplean muchos términos para describir las alteraciones del recuento leucocitario. Se habla
de leucocitosis o de leucopenia, cuando se observa un aumento o una disminución,
respectivamente, en el número total de leucocitos. Generalmente se considera leucocitosis a
cifras superiores a 10.000 células/mm³ y leucopenia, a cifras inferiores a 5.000 células/mm³.
La ausencia de granulocitos en la sangre se denomina agranulocitosis. Términos como
neutrofilia y neutropenia, linfocitosis y linfopenia, monocitosis y monocitopenia, eosinófilia y
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3.- FUNDAMENTO
Los leucocitos son teñidos con un colorante especial (Wright) este por ser un colorante
Policromático actúa sobre los leucocitos tiñéndolos de acuerdo a la afinidad de las células,
dependiendo de que estas sean acidofilicas o basofilicas, este colorante permitirá que estas
células puedan ser diferenciadas en cuanto a su morfología, ya que permite teñir tanto el
núcleo, los granos que contengan y su citoplasma entre otras cosas.
CANTIDAD DESCRIPCIÒN
6 Portaobjetos
Fco. Torundas
CANTIDAD DESCRIPCIÒN
1 Microscopio
1 Centrífuga
2 Cámara de Neubauer
4 Cubrehematimetro
6.- MATERIAL BIOLÓGICO
CANTIDAD DESCRIPCIÓN
5 ml Sangre
7.- REACTIVOS:
CANTIDAD DESCRIPCIÓN
100 ml.
Diluyente de plaquetas
100 ml.
Alcohol al 70%
100 ml.
Aceite de inmersión
DESARROLLO DE LA PRACTICA
1. Colocar el frotis secado al aire sobre una rejilla o cubeta de tinción con la sangre hacia
arriba (ver figura 4).
2. Cubrir completamente el portaobjetos o cubreobjetos con el colorante de Wright gota a
gota. Dejarlo que permanezca en el frotis aproximadamente de 5-8 minutos, para fijar los
glóbulos sanguíneos. El colorante deberá cubrir completamente el portaobjetos, pero no
debe derramarse por los bordes. Deberá agregarse una cantidad adicional si éste se
comienza a evaporar.
3. Agregar directamente al colorante un volumen igual de amortiguador de Wright, para
evitar la coloración débil. Esperar la formación de brillo metálico. Puede usarse de igual
manera agua desionizada. Dejar actuar de 10-15 minutos.
4. Lavar con agua en el chorro cuidadosamente hasta que la extensión presente un aspecto
rosado al examinarlo a simple vista.
5. Limpiar el dorso del portaobjetos con una gasa o algodón humedecido en alcohol para
eliminar cualquier resto de colorante.
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De acuerdo a como se haya realizado nuestra tinción y en base a los conocimientos previos
que tengamos de la identificación de estructuras leucocitarias, podremos identificar con
facilidad estos cuerpos, cuantificándolos y diferenciándolos para conocer el estado de salud del
paciente y así contribuir al diagnóstico de posibles leucemias u otras enfermedades.
Valores de referencia
Neutrófilos: 40 a 60%
Linfocitos: 20 a 40%
Monocitos: 2 a 8%
Eosinófilos: 1 a 4%
Basófilos: 0.5 a 1%
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11.- RECOMENDACIONES
Al trabajar en el Laboratorio:
Interpretación de resultados
1. En el tubo control no debe encontrarse aglutinación.
2. Si el tubo problema se observa con aglutinación se habla de la presencia del factor Du.
3. Si hubiese aglutinación en los dos tubos significa que se trata de glóbulos rojos cubiertos o
bloqueados, por lo tanto si se trata de donador la sangre será desechada.
13.- ACTIVIDADES
CUESTIONARIO
1.- Indique cuáles son los componentes del colorante de Wright y como se prepara.
2. ¿Qué soluciones pueden utilizarse como amortiguador para la tinción de Wright y cuál es el
pH que debe tener?
15.- EVALUACIÓN:
GUÍA DE OBSERVACIÓN
Instrucciones:
a) Lee y analiza el fundamento de la práctica
b) Selecciona adecuadamente los materiales y reactivos
c) Desarrolla el procedimiento de la práctica
d) Lee e interpreta los resultados
e) Observaciones con base a la norma 166 y 087
Spare, Inwood.
Todo-Sanford Diagnostico y Tratamiento Salvat.
DISPOSICIÓN DE RESIDUOS
Eliminación de punzocortantes:
Los tubos para extracción de sangre contaminados o llenos tienen que recogerse en
recipientes apropiados para residuos de material potencialmente infeccioso que en este caso
son bolsas rojas. Los tubos de vidrio que contengan las muestras serán colocados en agua con
cloro durante 24 h. La eliminación de residuos se hace usualmente en instalaciones incineradoras
apropiadas.
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2.- INTRODUCCIÓN:
Los trombocitos o plaquetas constituyen una parte esencial del organismo hemostático del
cuerpo. Son cuerpecillos hialinos incoloros que miden de 2-4 μ, de bordes irregulares, pero
pueden tener forma esférica u ovalada, carecen de núcleo y son muy frágiles. Provienen de una
célula gigante que mide de entre 50-100 μ de diámetro llamada megacariocito.La hemostasia
normal requiere que las plaquetas estén presentes en un número adecuado y que sean
capaces de llevar a cabo todas sus funciones. Por otra parte las anormalidades en el número y
la función pueden dar origen a fenómenos hemorrágicos, trombóticos o ambos.
Se debe tener en cuenta que el recuento manual realizado en un número relativamente
pequeño de plaquetas tiene un coeficiente de variación mayor al obtenido en un analizador
automático, y a menos que estos recuentos sean realizados por una persona experta, hay una
probabilidad significativa de introducir un error.
Actividad 2: Compara los resultados obtenidos en las determinaciones manuales, contra los
datos arrojados, para la misma muestra en el equipo automatizado.
[Escribir texto]
3.- FUNDAMENTO
CANTIDAD DESCRIPCIÒN
4 tubos 13 x 100
6 Boquilla roja
1 Papel parafilm
Papel filtro
2 Caja de Petri
1 Contenedor para punzocortantes
Fco. Torundas
5.- EQUIPO A UTILIZAR:
CANTIDAD DESCRIPCIÒN
1 Microscopio
1 Centrífuga
2 Cámara de Neubauer
4 Cubrehematimetro
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CANTIDAD DESCRIPCIÓN
Sangre
7.- REACTIVOS:
CANTIDAD DESCRIPCIÓN
100 ml.
Diluyente de plaquetas
100 ml.
Alcohol al 70%
5.-Aforar con liquido diluyente de plaquetas hasta la marca 101 de la pipeta (Dilución 1:100)
6.-Tapar los extremos con papel parafilm y mezclar durante 1 minuto
7.- Colocar la Cámara de Neubauer sobre una superficie horizontal y poner el Cubrehematimetro
sobre las mesas
8.-Descartar las primeras 4 gotas de la pipeta. Con la quinta gota cargar la cámara, depositándola entre la
meseta y el Cubrehematimetro y dejarla difundir por capilaridad, teniendo cuidado de que no se formen
burbujas o se derrame el líquido hacia los surcos.
[Escribir texto]
10.-Observar al microscopio contando en la cuadricula central (para glóbulos rojos) las plaquetas que
aparecen mucho más pequeñas que los hematíes, redondas, alargadas u ovales, altamente refringentes.
11.- El cuadro central de la cuadricula mide 1.0 mm por lado y está dividido en 16 cuadritos más pequeños,
de tal manera que el número total de estos últimos es de 400, mismos en los que se lleva a cabo el
recuento de plaquetas
Observaciones.
Enfocando la cuadricula central se aprecian los 25 cuadros centrales, con una gran cantidad de
plaquetas en ellos. Se pueden distinguir solo algunos eritrocitos, mucho mayores que las plaquetas,
que desprenden gran brillo.
Uno de los cuadros centrales, lleno de plaquetas, de forma redonda la mayoría u ovalada.
Los recuentos de plaquetas, al igual que los eritrocitos y leucocitos, se expresan como
concentraciones, que en este caso serían número de células por unidad de volumen de sangre,
que es 1mm3
Después de contar las plaquetas presentes en los 400 cuadritos centrales, el número obtenido se
multiplica por el factor de dilución de la siguiente manera:
Este factor corresponde, para obtener los resultados por mm 3 ya que el volumen de la cámara es
de 0.1 mm3
Ejemplo;
El número de plaquetas fue de 535, por lo que al realizar los cálculos quedaron así:
No. de plaquetas = 535 X 100 X 10= 535 000 plaquetas por mm3, lo que indica un índice elevado
de plaquetas
VALORES DE REFERENCIA
11.- RECOMENDACIONES
Al trabajar en el Laboratorio:
Interpretación de resultados
4. En el tubo control no debe encontrarse aglutinación.
5. Si el tubo problema se observa con aglutinación se habla de la presencia del factor Du.
6. Si hubiese aglutinación en los dos tubos significa que se trata de glóbulos rojos cubiertos o
bloqueados, por lo tanto si se trata de donador la sangre será desechada.
4.-El paciente con un trastorno hemorrágico, clínicamente significativo, acude al médico con
algunos tipos de síntomas hemorrágicos, con lo que se puede indicar la parte defectuosa del
mecanismo de coagulación, y dentro de estas causas pueden estar la cantidad inadecuada de
plaquetas
13.- ACTIVIDADES
CUESTIONARIO
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5.- Hemostasia o hemostasis es el conjunto de mecanismos aptos para detener los procesos
hemorrágicos; en otras palabras, es la capacidad que tiene un organismo de hacer que la
sangre en estado líquido permanezca en los vasos sanguíneos.
6.-Se denomina coagulación al proceso por el cual la sangre pierde su liquidez, tornándose
similar a un gel en primera instancia y luego sólida, sin experimentar un verdadero cambio de
estado.