y REACCIONES FEBRILES.

y OBJETIVO.

y INTRODUCCION

y FUNDAMENTO.

y PROCEDIMIE NTO.

y MATE RIAL

y CUESTIO NARIO.

Práctica N° 3

REACCIONES FEBRILES.

OBJETIVO.

El alumno realizará en el laboratorio las reacciones, con el fín de

identificar la presencia de anticuerpos y dar el diagnóstico
serológico de algunas enfermedades bacterianas.

INTRODUCCION.
Los antígenos febriles se usan para detectar anticuerpos en el suero del paciente
contra la Salmonella, Brucella y Rickettisia (reaccion cruzada con Proteus OX-19.

Salmonella. La reacción de Widal en un método serológico usado

comúnmente en el diagnóstico de las fiebres tifoideas, entérica y
ondulante, la reacción mide el título del suero contra una
suspensión de microorganismo conocidos. La Salmonella son
bacilos no esporurlados aerobios gramnegativos. Hay tres
especies clínicamente importantes de Salmonella: enteritidis,
choleraeauis y thyphi. Tres síndromes principales, resultan de la
infección por salmonella.

1. gastroenteritis ( la forma más común ).

2. fiebre tifoidea.

3. septicemia.
Brucella. En esta prueba se detectan anticuerpos contra Brucella, casi todas las
infecciones humanas por Brucella, se deben a B abortus, B suis o B melitensis. La
brucelosis es una enfermedad aguda o crónica que se manifiesta principalmente por
escalofríos, fiebre y debilidad, ocasionalmente episodios febriles ondulatorios que han
dado lugar al nombre de ³fiebre ondulante´ de la enfermedad.

Rickettsias. Las especies de Rickettisias que causan tifo tienen componentes

antigénos idiotípicos con Proteus ( OX-19, OX-2 OX-K), esta relación se usó en el
diagnóstico de tifo. Las especies de Rickettsia son cocobaciolos pequeños plemórfos
que funcionan como parásitos intracelulares. La inmunidad por lo general es de larga
duración, con algunas excepciones. El tifus endémico puede causar recaíadas 10 o 20
años después de la aparente recuperación (enfermedad de Grill Zinseer). La fiebre de
las trincheras se caracteriza por las recaídas.

FUNDAMENTO.

Estas reacciones se basan en el hecho de que cuando el

organismo humano es invadido por agentes infecciosos,
responde produciento anticuerpos aglutinantes contra ellos los
cuales se ponen de manifiesto al entrar en contacto el anticuerpo
con el anticuerpo específico. El título del anticuerpo depende del
tipo y curso de la enfermedad. Para que los resultados tengan un
valor diagnóstico el título de ellos debe aumentar.

MATERIAL.

1. placas de vidrio con divisiones

2. gradilla.
3. tubo de hemólisis sin anticoagulante

4. pipeta pasteur con bulbo.

5. pipeta serológica de 0.1ml

6. aplicadores de madera

7. fuente luminosa

8. jeringa desechable

9. torundas con alcohol.

EQUIPO.

1. agitador.

2. centrífuga eléctrica.

3. baño maría.

REACTIVOS.

1. antígeno ³O´ Salmonella typhi

2. antígeno Paratyphi ³A´

3. antígeno ³H´ Salmonella typhi

4. antígeno Paratyphi ³ B´

5. antígeno Brucella aborturs

6. antígeno Proteus ³OX-19´

PROCEDIMIENTO.
Puede efectuarse por medio de dos maneras.

Método de aglutinación rápida en placa.

1. Anotar el antígeno correspondiente en la placa de vidrio.

2. Depositar en cada cuadro 0.04ml de suero del paciente para

cada uno de los antígenos que se vayan a utiliza.

3. A cada gota de suero añadir una gota de cada antígeno.

4. Mezclar con un aplicador limpio ( utilizar un aplicador para

cada antígeno.

5. Agitar suavemente la placa por rotación (120 r.p.m) durante 2

ó 3 minutos.

6. Observar la aglutinación con ayuda de una lámpara.

Cuando hay reacción positiva se repite la técnica con diluciones

las cuales se obtienen con el uso de las siguientes cantidades
del suero en la siguiente forma.

Mililitros de suero Dilución

0.08 1:20
0.04 1:40

0.02 1:80
0.01 1:160
0.005 1:329

INTERPRETACIÓN.

El informe del resultado de la prueba se hace tomando en

consideración la dilución más alta que se observe en la reacción
positiva. En tifoideas los anticuerpos llegan a tener títulos
diagnósticos hasta los 8 días después de la fiebre.

Método de aglutinación en tubo.

1. Numerar siete tubos ( 13x75mm) del uno al seis y un testigo

(T) para cada antígeno.

2. Adicionar 0.9 ml de solución salina al primero y 0.5 ml a los
restantates.

3. Agregar 0.1ml del suero problema al tubo uno. Mezclar y pasar

0.5ml al tubo dos y así sucesivamente hasta el seis eliminando
0.5ml de esta última dilución. Obteniéndose diluciones 1/10, 1/20,
1/40, 1/80, 1/160 y 1/320.

4. Adicionar 0.3ml de antígeno diluido previamente 1:20 con

solución salina en cada uno de los tubos.
5. Agitar enérgicamente e incubar en baño maría en las
siguientes condiciones.

Antígeno/tiempo Temperatura.
Salmonella ³B´ 18 a 24hrs. 48 a 50°C
Salmonella ³H´ 2hrs. 37°C
Paratificos ³A´ y ³B´ 2hor. 48 a 50°C
Brucella 48 hrs. 37°C
Proteux 0X-19 18hrs. 37°C
6.Tomar dos o tres tubos a la vez, agitarlos ligeramente frente una fuente de luz que
ilumine las partículas claramente.

Interpretación.

Reportar el resultado, empleando la recíproca de la dilución más

alta que presenta aglutinación.
Grado de aglutinación.

100% ++++ Sedimentación de los grumos y el sobrenadante

claro.

75%
claro.+++ grumos sedimentados casi totalmente y sobrenadante

50% ++ sedimentación marcada y sobrenadante ligeramente

claro.

Negativo. Ninguna evidencia de aglutinación, sobrenadante

idéntico al control.

Recomendaciones.

1. No congelar ninguno de los reactivos.

2. Evitar utilizar los reactivos frios.

3. La presencia de títulos bajos puede ser debido a vacunaciones

o infecciones pasadas o subclínicas.

4. Es conveniente estudiar varias muestras de sangre del

enfermo con diferencia de cinco a siete días en los casos
dudosos.

5. Es recomendable el uso de controles tanto positivos como

negativos para asegurar la validez de los resultados.

CUESTIONARIO.

1. Menciones algunas características del género Salmonella.

2. ¿Dónde se localiza en antígeno ³O´?

3. ¿Dónde se localiza el antígeno ³H´?

4. Menciona otros métodos de laboratorio para el diagnóstico de salmonelosis.

5. Menciona algunas propiedades generales del género Brucella.

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