PRODUCCIÓN DE PIRUVATO DURANTE LA FERMENTACIÓN

Monsalve, Daianna Pabón

Tapia Perdomo, Valentina
Martínez, María Fernanda
Suarez Lizarazo, Frank Uriel

UNIVERSIDAD DE PAMPLONA NORTE DE SANTANDER, KILOMETRO 1 VIA

BUCARAMANGA, FACULTAD DE CIENCIAS BÁSICAS, PROGRAMA DE
MICROBIOLOGÍA

RESUMEN: El piruvato es un compuesto final producido en la vía glucolítica durante

el proceso de fermentación en condiciones de anaerobiosis, en la práctica de
laboratorio, se desarrolló una serie de procedimientos para determinar la presencia
de este por medio de levadura, la cual se disolvió en un tubo A con solución de
fosfato de sodio dibásico y en un tubo B en solución de fosfato de potasio
monobásico para luego centrifugar en un tiempo determinado. Obteniendo un
sobrenadante, tomando 1 ml de este y así realizarle una serie de disoluciones,
observando un cambio de color al adicionar el reactivo de Brady (2,4
dinitrofenilhidrazina) obtenido como resultado de la presencia efectiva del piruvato,
es decir, que la enzima piruvato descarboxilasa se encontraba inactiva debido a la
alcalinidad del medio, teniendo como producto el dinitrofenilhidrazona – piruvato.
Palabras claves: fermentación, piruvato, 2,4-dinitrofenilhidrazina, levadura

INTRODUCCION así NAD+. Esto no es posible en

condiciones anaeróbicas y en este
La fermentación es la primera etapa
caso la reoxidación se efectúa cuando
del catabolismo de glucosa, en la que
el piruvato se convierte en
se da la producción de piruvato; este
acetaldehído, y luego en alcohol. Los
proceso que se efectúa mediante una
intermediarios metabólicos son
serie de reacciones que involucran un
metabolitos como el piruvato y
número considerable de
acetaldehídos que se encuentran
intermediarios, se conoce como
presentes normalmente en muy bajas
glucólisis. La reacción total de una
concentraciones, por lo tanto, para
molécula de glucosa produce dos
demostrar su existencia como
moléculas de piruvato, dos moléculas
intermediarios en el camino
de ATP y dos moléculas de NADH.
metabólico, es necesario impedir que
Este cofactor se encuentra en
sean transformados en otros
cantidades catalíticas (es necesario
compuestos. Este procedimiento se
reoxidarlo para que el proceso no se
usa mucho para estudiar caminos
suspenda), y es utilizado por la cadena
metabólicos y se puede realizar
respiratoria para obtener ATP dando
bloqueando la enzima que cataliza la
conversión del compuesto que se está
investigando mediante inhibidores,
cambiando las condiciones
fisiológicas para que la enzima
funcione a una velocidad muy por
debajo de su actividad máxima,
usando un agente que atrape el
intermediario y que forme un
compuesto que no pueda
metabolizarse. La piruvato
descarboxilasa no es activa en
soluciones ligeramente alcalinas, de
manera que el piruvato se acumula y
su presencia puede demostrarse por
la reacción con nitroprusiato de sodio
o 2,4dinitrofenilhidrazina. (1)
El reactivo de Brady o 2,4 DNPH
(2,4dinitrofenilhidrazina) es usado en
ensayos analíticos específicos de
aldehídos y cetonas. Los carbonilos
(reacción 1) reaccionan con este
formando fenilhidrazonas que
precipitan de color amarillo. La
aparición de precipitado es un
indicador de la presencia de
carbonilos en el medio. (2)
Así mismo el piruvato reacciona con
este reactivo para formar la
dinitrofenilhidrazona – piruvato
(reacción 2) y que al ser tratado con un
álcali fuerte resulta un color rojizo, el
cual es proporcional a la cantidad de
piruvato y a la actividad de enzima
presente en la muestra. (3)
El piruvato es el anión del ácido
pirúvico. Es una pequeña molécula, de
tan solo 3 carbonos, que resulta ser el
eje central del metabolismo celular de
todos los seres vivos. Químicamente
hablando el ácido pirúvico se
denomina ácido oxopropanoico o
ácido alfa- cetopropanoico. Consta de
4 hidrógenos, 3 oxígenos y 3
carbonos. Su fórmula química es H3C-
CO-COOH. Cuando se libera
un catión hidrógeno del ácido pirúvico
se produce el piruvato H3C-CO-COO.
(4)
Estructura del piruvato.
El piruvato es el producto final de
la degradación de la glucosa en la
glucolisis y es el sustrato del ciclo de
Krebs, principal ruta de la formación
de energía bioquímica de las células,
tanto en forma de ATP como de poder
reductor NADH. (5)
Las levaduras son un grupo de
hongos, microorganimos unicelulares
que realizan un proceso metabólico
que genera gases, transforman los 0,5 ml de esta mezcla, la cual
azúcares (tanto de la harina como el se pasó a otro tubo de ensayo
azúcar adicional, en etanol y dióxido seco y limpio agregando 1 ml
de carbono (C6H12O6 → 2 C2H5OH de NaOH al 10% y 0,5 ml de
+ 2 CO2 una molécula de glucosa agua.
produce dos moléculas de alcohol y  Se observó un poco de cambio
dos moléculas de dióxido de carbono). del color (binotinto claro), el
cual nos indicó que había
(5)
presencia de Piruvato, pero en
METODOLOGIA. poca cantidad.
Materiales
 Se tomaron dos tubos de
Balanza analítica
ensayo, rotulados como tubo A
Soporte universal
y tubo B. En el tubo A se añadió
Serológico
2.5 ml de solución de glucosa al
Mechero de bunsen
10%, con 2.5 ml de la
preparación de levadura en Reactivos
solución de fosfato de sodio
Solución de glucosa 10%
dibásico 0,5 M, tomando 1
Levadura
gramo de levadura para ser
Fosfato de sodio dibásico 0,5 M
disuelta en el reactivo. En el
Fosfato de potasio monobásico 0,5 M
tubo B se añadió 1.7 ml de
Ácido tricloroacético 10%
solución de glucosa al 10%,
2,4-dinitrofenilhidracina saturado en
con 1.7 ml de la preparación de
…HCl 2M
levadura en solución de fosfato
NaOH 10%
de potasio monobásico 0,5 M,
donde también se tomó 1 RESULTADOS
gramo de levadura para
disolverla en el reactivo.
 Posteriormente se llevaron los
dos tubos en baño María a una
temperatura de 37°C por una
hora. Pasado el tiempo
establecido, a los dos tubos se
les añadió 2 ml de A.T.A al 10%
P/V, se mezcló fuertemente y
en seguida se llevaron a
centrifugar por 10 minutos a
2500 rpm.
 Pasado este tiempo se obtuvo
un sobrenadante al cual se le
tomo un 1 ml, pasándolo a un
tubo de ensayo, añadiendo 0,5
ml de 2,4-dinitrofenilhidracina
en HCl 2M. Se mezcló
fuertemente, después se tomó
ANÁLISIS Y DISCUSIÓN
Al preparar la solución de glucosa y
levadura ligeramente alcalina o acida
en los tubos A y B respectivamente los
cuales presentaban turbidez como se
observa en la figura 1, y al ponerlos en
baño maría durante una hora a 37ºC
(figura 2) se observó que las
soluciones seguían siendo iguales sin
ningún otro cambio. Se llevaron los
tubos al serológico para proporcionar
un medio en el que se efectuaran las
reacciones referentes al proceso de la
glucolisis. Posteriormente se agitaron
las soluciones contenidas en los tubos
y se nivelo el volumen de sustancia
para que fuera igual en los dos y así
someterlos a centrifugación por 10
minutos (figura 3), que luego de
terminada se observó la formación de
un precipitado y una fase liquida
translucida como sobrenadante, se
tomó del sobrenadante por separado
para determinar la presencia de
piruvato mediante la adición del
reactivo de Brady y NaOH L 10% a
cada uno, realizando una prueba
adicional cambiando el sobrenadante
por solución de glucosa. Se observó
que al adicionar el 2,4-
dinitrofenilhidrazina se formó una
coloración anaranjada en los tres
tubos, siendo más intensa en el tubo
de que solo contenía glucosa y más
clara en los tubos de las soluciones A
y B, al adicionarle en NaOH se formó
una coloración oscura como se
observa en la figura 6. Los tubos B y el
de glucosa se tomaron como
negativos ya que no se observó
coloración roja a diferencia del tubo A
en el que se notó una coloración rojo
oscuro (figura 6) el cual se tomó como
presunto para ser positivo, debido a
que el fosfato de sodio dibasico es
más alcalino por sus dos sodios, en
comparación con el fosfato
monobásico, lo cual hace que la
enzima piruvato descarboxilasa sea
inhibida en más proporción por lo tanto
hubo más acumulación de piruvato.
El proceso que se lleva a cabo en esta
práctica se llama fermentación. Este
se efectúa partiendo de la glucolisis
que consiste en una serie
de reacciones en la que se
involucran varios intermediarios.
La reacción completa de una
molécula de glucosa produce dos
moléculas de piruvato, dos moléculas
de ATP y dos moléculas de NADH.
Este último es un cofactor que se
encuentra en cantidades
catalíticas (es necesario reoxidarlo
para que no se suspenda el proceso),
y es utilizado por la cadena
respiratoria para la obtención del ATP
produciendo de esta forma NAD+.
La glucolisis proporciona una cantida
d de piruvato que puede tomar dos
rutas metabólicas anaerobias, eso
depende del tipo de células que
intervengan (6). Para este caso de la
práctica de laboratorio, se utilizaron
soluciones alcalina y acida de
levadura respectivamente las cuales a
causa de su pH determinaron
la cantidad de productos que se
obtuvieron. Se presentó
un proceso de fermentación el cual se
caracteriza por ser una reacción de
obtención de energía en ausencia de
oxígeno en el que el reactivo inicial es
la glucosa y se obtienen como
productos una cantidad de piruvato y
otra cantidad de etanol que se deriva
de la reacción del ácido pirúvico
reducido a acetaldehido y que
finalmente produce este alcohol.
Para el caso de la solución del tubo A
(contenido con fosfato de sodio
dibásico), el cual fue positivo, se liberó
dióxido de carbono el cual oxida
el NADH reduciéndose a
acetaldehído. La 2,4
dinitrofenilhidrazina puede usarse
para detectar cualitativamente los
grupos carbonilo de cetonas y
aldehídos. En esta
práctica procedimiento se realizó el
bloqueo de la enzima que cataliza
la conversión del compuesto por
medio de inhibidores como el pH.
La enzima piruvato:descarboxilasa no
es activa en soluciones ligeramente
alcalinas como la de la levadura que
se agregó en el tubo A de esta
manera el piruvato se acumuló y su
presencia se demostró por la reacción
de la 2,4dinitrofenilhidrazina.(6)
CONCLUSIONES
En esta practica se pudo determinar la
presencia de piruvato mediante la
fermentacion de levadura con el
reactivo 2,4- dinitrofenilhidrazina.
La presencia de piruvato fue positiva
para la solución de levadura con
fosfato de sodio dibásico.
BIBLIOGRAFIA
1) GONZÁLEZ, Gabriela Guadalupe.
Práctica No. 6 “Producción de Piruvato
y Acetaldehído a partir de Glucosa y
Determinar su Presencia (Levaduras)”
[en línea]. <
https://es.scribd.com/doc/91606324/P
ractica-6-Preparacion-de-piruvato>
[citado en Octubre 27 del 2016].
2) QUIMICA ORGANICA. Ensayo de
la 2,4-Dinitrofenilhidrazina. [en línea].
<
http://www.quimicaorganica.org/aldehi
dos-y-cetonas/235-ensayo-de-la-24-
dinitrofenilhidrazina.html > [citado en
Octubre 27 del 2016]
3) FACULTAD DE CIENCIAS
UDELAR. Bioquímica II programa del
curso [ en línea] <
http://enzimologia.fcien.edu.uy/BQII20
12/Bioqu%C3%ADmica%20II%20cur
so%202012.pdf> [citado en Octubre
27 del 2016]
4) Reyes, M.Y. Determinación del
grado de pungencia de ajo fresco y
piruvato. Proyecto de Investigación.
Tesis de Licenciatura, ENCB. IPN.
2007. [en línea] <
http://www.informatica.sip.ipn.mx/col
mex/congresos/chiapas/cd/Alimentos
%5CExtensos%5C605304.pdf>
[citado en Octubre 27 del 2016].
5) La importancia del piruvato | La guía
de Biología [en línea]
http://biologia.laguia2000.com/bioqui
mica/la-importancia-del-
piruvato#ixzz4OOSqsjfO
6)H.J. Vázquez y O. Dacosta.Fer
mentación alcohólica.2006.[En li
nea]recuperado de
http://www.ejournal.unam.mx/ict/vol08
04/ICT000800404.pdf
ANEXOS

1. ¿Cuál es la función del ácido tricloroacético?

Ácido tricloroacético (también conocido como Ácido tricloroetanóico) es un
análogo del ácido acético en el cual los tres átomos de hidrogeno del grupo
metilo fueron substituidos por átomos de cloro. Tiene fórmula química
CCl3COOH. Es preparado por la reacción del cloro con al ácido acético en la
presencia de un catalizador adecuado.

CH3COOH + 3 Cl2→ CCl3COOH + 3 HCl

ES anchamente usado en bioquímica para la precipitación de

macromoléculas tal como proteínas, ADN y RNA. Su sal de sódio es usado
como un herbicida. Soluciones conteniendo ácido tricloroacético como
ingrediente son usadas para el tratamiento de verrugas, incluyendo verrugas
genitales.
Sales de ácido tricloroacético son llamados tricloroacetatos Reducción de
ácidotricloroacético resulta en ácido dicloroacético, un compuesto
farmacológicamente activo que se muestra promisor en el tratamiento de
cáncer.
2. ¿Qué conclusiones se podrían sacar de los resultados de las muestras
A y B?
 Por medio de los procedimientos realizados a los tubos A y B se pudo
obtener piruvato en baja cantidad al observa una coloración binotinto
claro.
 Utilizando los reactivos adecuados y una cantidad de levadura
apropiada se puede llegar a una perfecta obtención de piruvato.

3. ¿Cuál es la reacción de la 2,4-dinitrofenilhidracina con el piruvato?

Los metabolitos de piruvato y acetaldehído se encuentran presentes
normalmente en muy bajas concentraciones, por tanto, para demostrar su
existencia como intermediario en el camino metabólico, es necesario impedir
que sean transformados en otros compuestos. Este proceso se usa mucho
cuando se investigan caminos metabólicos y se hace bloqueando la enzima
que catalizas la conversión del compuesto, que se está investigando
mediante inhibidores.
La pirúvico-descarboxilasa no es activa en soluciones ligeramente alcalinas,
de manera que el piruvato se acumula y su presencia puede demostrarse por
la reacción con nitroprusiato de sodio o 2,4 dinitrofenilhidrocina.
 Los cristales de las distintas hidrazonas tienen puntos de fusión
y ebullición característicos. Gracias a ello la 2,3-DNFH puede usarse para
distinguir entre diversos compuestos con grupos carbonilos. Este método es
particularmente importante porque las determinaciones de punto de fusión
requieren tan sólo instrumental de bajo costo.
Esta aplicación en química analítica fue desarrollada por Brady y Elsmie.
Además, no reacciona con otros grupos funcionales que contengan
carbonilos, como los ácidos carboxílicos, amidas y ésteres.

4. ¿Qué función cumple el NAD+ en la producción del piruvato?

La enzima Glicerol-3-fosfato deshidrogenasa (NAD+) cataliza la reacción de
oxidación del glicerol-3-fosfato a dihidroxiacetona fosfato utilizando NAD+
como aceptor de electrones.

Esta enzima también cataliza las reacciones de oxidación y reducción del

propano-1,2-diol y del sulfato de glicerona respectivamente, pero con mucha
menos afinidad. Durante la glicólisis se genera NADH en el citosol en la
oxidación del gliceraldehído-3-fosfato y se debe regenerar más NAD+ para
que la glicólisis continúe. El NADH no puede pasar a la mitocondria para ser
oxidado por la cadena respiratoria ya que la membrana interior mitocondrial
es impermeable al NADH y NAD+. La solución es que los electrones del
NADH, en vez del propio NADH, sean transportados a través de esta
membrana.

Una de las maneras de introducir electrones del NADH en la cadena

respiratoria es la lanzadera del glicerol-3-fosfato. El primer paso es transferir
un par de electrones desde el NADH a la dihidroxiacetona fosfato, un
intermedio glicolítico, para formar glicerol-3-fosfato. Esta reacción es
catalizada por la glicerol-3-fosfato deshidrogenasa en el citosol. El glicerol-3-
fosfato es reoxidizado a dihidroxiacetona fosfato en la superficie exterior de
la membrana interior mitocondrial por una isoenzima de la glicerol-3-
fosfatodehidrogenasa unida a la membrana. Un par de electrones se
 transfiere desde el glicerol-3-fosfato al grupo prostético FAD de la enzima
para producir FADH2. Esta reacción regenera la dihidroxiacetona fosfato.
5. Consulte la vía de la glucólisis y determine los pasos irreversibles de esta vía.
La glucólisis es la vía metabólica encargada de oxidar o fermentar la glucosa
y así obtener energía para la célula. Consiste esta ruta en 10 reacciones
enzimáticas que convierten a la glucosa en dos moléculas de piruvato, el cual
es capaz de seguir otras vías metabólicas y así continuar entregando energía
al organismo. Es la vía inicial del catabolismo (degradación) de
carbohidratos.

Etapas de la glucólisis.
La glucólisis se divide en dos partes principales y diez reacciones
enzimáticas, que se describen a continuación.

Fase de gasto de energía (ATP). Esta primera fase de la glucólisis consiste

en transformar una molécula de glucosa en dos moléculas de gliceraldehído.
Hasta el momento solo se ha consumido energía(ATP), sin embargo, en la
segunda etapa, el gliceraldehído es convertido a una molécula de mucha
energía, donde finalmente se obtendrá el beneficio final de 4 moléculas de
ATP.

1er paso: Hexoquinasa.

La primera reacción de la glucólisis es la fosforilación de la glucosa, para
activarla (aumentar su energía) y así poder utilizarla en otros procesos
cuando sea necesario. Esta activación ocurre por la transferencia de un
grupo fosfato del ATP, una reacción catalizada por la enzima
hexoquinasa, la cual puede fosforilar (añadir un grupo fosfato) a moléculas
similares a la glucosa, como la fructosa y manosa. Las ventajas de fosforilar
la glucosa son 2: La primera es hacer de la glucosa un metabolito más
reactivo, mencionado anteriormente, y la segunda ventaja es que laglucosa-
6-fosfato no puede cruzar la membrana celular -a diferencia de la glucosa-ya
que en la célula no existe un transportador de G6P. De esta forma se evita la
pérdida de sustrato energético para la célula.

Técnicamente hablando, la hexoquinasa sólo fosforila las D-hexosas, y

utiliza de sustrato MgATP2+, ya que este catión permite que el último fosfato
del ATP (fosfato gamma, -P o P) sea un blanco más fácil para el ataque
nucleofílico que realiza el grupo hidroxilo (OH) del sexto carbono de la
glucosa, lo que es posible debido al Mg2+que apantalla las cargas de los
otros dos fosfatos.

2do paso: Glucosa-6-P isomerasa. Éste es un paso importante, puesto que

aquí se define la geometría molecular que afectará los dos pasos críticos en
la glucólisis: El próximo paso, que agregará un grupo fosfato al producto de
esta reacción, y el paso 4, cuando se creen dos moléculas de gliceraldehído
que finalmente serán las precursoras del piruvato.
En esta reacción, la glucosa-6-fosfato se isomeriza a fructosa-6-fosfato,
mediante la enzima glucosa-6-fosfato isomerasa. La isomerización ocurre en
una reacción de 4pasos, que implica la apertura del anillo y un traspaso de
protones a través de un intermediario cis-enedio.
Puesto que la energía libre de esta reacción es igual a +1,7 kJ/mol la reacción
es no espontánea y se debe acoplar.

3er paso: Fosfofructoquinasa. Fosforilación de la fructosa 6-fosfato en el

carbono 1, con gasto de un ATP, a través dela enzima fosfofructoquinasa-1
(PFK1). También este fosfato tendrá una baja energía de hidrólisis. Por el
mismo motivo que en la primera reacción, el proceso es irreversible. El nuevo
producto se denominará fructosa-1,6-bifosfato.
La irreversibilidad es importante, ya que la hace ser el punto de control de la
glucólisis. Como hay otros sustratos aparte de la glucosa que entran en la
glucólisis, el punto de control no está colocado en la primera reacción, sino
en ésta. La Fosfofructoquinasa tiene centros alostéricos, sensibles a las
concentraciones de intermediarios como citrato y ácidos grasos. Liberando
una enzima llamada fosfructocinasa-2 que fosforila en el carbono 2 y
regula la reacción.

4o paso: Aldolasa. La enzima aldolasa (fructosa-1,6-bifosfato aldolasa),

mediante una condensación aldólica reversible, rompe la fructosa-1,6-
bifosfato en dos moléculas de tres carbonos(triosas): dihidroxiacetona
fosfato y gliceraldehído-3-fosfato. Existen dos tipos de aldolasa, que
difieren tanto en el tipo de organismos donde se expresan, como en los
intermediarios de reacción. Esta reacción tiene una energía libre (ΔG) entre
20 a 25 kJ/mol, por lo tanto, en condiciones estándar no ocurre de manera
espontánea. Sin embargo, en condiciones intracelulares la energía libre es
pequeña debido a la baja concentración de los sustratos, lo que permite
que esta reacción sea reversible.

5to paso: Triosa fosfato isomerasa. Puesto que sólo el gliceraldehído-3-

fosfato puede seguir los pasos restantes de la glucólisis, la otra molécula
generada por la reacción anterior (dihidroxiacetona-fosfato) es isomerizada
(convertida) en gliceraldehído-3-fosfato. Esta reacción posee una energía
libre en condiciones estándar positiva, lo cual implicaría un proceso no
favorecido, sin embargo, al igual que para la reacción 4, considerando las
concentraciones intracelulares reales del reactivo y el producto, se encuentra
que la energía libre total es negativa, por lo que la dirección favorecida
es hacia la formación de G3P.Éste es el último paso de la "fase de
gasto de energía". Sólo hemos gastado ATP en el primer paso (hexoquinasa)
y el tercer paso (fosfofructoquinasa-1). Cabe recordar que el4to paso
(aldolasa) genera una molécula de gliceraldehído-3-fosfato, mientras que el
5topaso genera una segunda molécula de éste. De aquí en adelante, las
reacciones a seguir ocurrirán dos veces, debido a las 2 moléculas de
gliceraldehído generadas de esta fase. Hasta esta reacción hay intervención
de energía (ATP).
Fase de beneficio Energético.

6o paso: Gliceraldehído-3-fosfato deshidrogenasa. Esta reacción

consiste en oxidar el gliceraldehído-3-fosfato utilizando NAD+ para añadir un
ion fosfato a la molécula, la cual es realizada por la enzima gliceraldehído-3-
fosfatodeshidrogenasa o bien, GAP deshidrogenasa en 5 pasos, y de ésta
manera aumentar la energía del compuesto. Técnicamente, el grupo
aldehído se oxida a un grupo acil-fosfato, que es un derivado de un carboxilo
fosfatado. Este compuesto posee una energía de hidrólisis sumamente alta
(cercana a los 50 kJ/mol) por lo que se da inicio al proceso de reacciones
que permitirán recuperar el ATP más adelante. Mientras el grupo aldehído se
oxida, el NAD+ se reduce, lo que hace de esta reacción una reacción redox.
El NAD+ se reduce por la incorporación de algún [H+] dando como resultado
una molécula de NADH de carga neutra.

7mo paso: Fosfoglicerato quinasa. En este paso, la enzima fosfoglicerato

quinasa transfiere el grupo fosfato de 1,3-bisfosfoglicerato a una molécula
de ADP, generando así la primera molécula de ATP dela vía. Como la
glucosa se transformó en 2 moléculas de gliceraldehído, en total se
recuperan 2 ATP en esta etapa. Nótese que la enzima fue nombrada por la
reacción inversa a la mostrada, y que ésta ópera en ambas direcciones. Los
pasos 6 y 7 de la glucólisis nos muestran un caso de acoplamiento de
reacciones, donde una reacción energéticamente desfavorable (paso 6) es
seguida por una reacción muy favorable energéticamente (paso 7) que
induce la primera reacción. En otras palabras, como la célula se mantiene en
equilibrio, el descenso en las reservas de 1,3bifosfoglicerato empuja a la
enzima GAP deshidrogenasa a aumentar sus reservas. La cuantificación de
la energía libre para el acople de ambas reacciones es de alrededor de-12
kJ/mol. Ésta manera de obtener ATP sin la necesidad de O2 se denomina
fosforilación a nivel de sustrato.

8vo paso: Fosfoglicerato mutasa. Se isomeriza el 3-fosfoglicerato

procedente de la reacción anterior dando 2-fosfoglicerato, la enzima
que cataliza esta reacción es la fosfoglicerato mutasa. Lo único que ocurre
aquí es el cambio de posición del fosfato del C3 al C2. Son energías similares
y por tanto reversibles, con una variación de energía libre cercana a cero.

9no paso: Enolasa. La enzima enolasa propicia la formación de un doble

enlace en el 2-fosfoglicerato,eliminando una molécula de agua formada por
el hidrógeno del C2 y el OH del C3. Elresultado es el fosfoenolpiruvato.

10mo paso: Piruvato quinasa. Desfosforilación del fosfoenolpiruvato,

obteniéndose piruvato y ATP. Reacción irreversible mediada por la piruvato
quinasa. El enzima piruvato quinasa es dependiente de magnesio y potasio.
La energía libre es de-31,4 kJ/mol, por lo tanto, la reacción es favorable e
irreversible.
 El rendimiento total de la glucólisis de una sola glucosa (6C) es de 2 ATP y
no 4 (dos por cada gliceraldehído-3-fosfato (3C)), ya que se consumen 2 ATP
en la primera fase, y 2 NADH (que dejarán los electrones Nc en la cadena de
transporte de electrones para formar 3 ATP por cada electrón). Con la
molécula de piruvato, mediante un paso de oxidación intermedio llamado
descarboxilación oxidativa, mediante el cual el piruvato pasa al interior de la
mitocondria, perdiendo CO2 y un electrón que oxida el NAD+, que
pasa a ser NADH más H+ y ganando un CoA-SH (coenzima A), formándose
en acetil-CoA gracias a la enzima piruvato deshidrogenasa, se puede entrar
al ciclo de Krebs(que, junto con la cadena de transporte de electrones, se
denomina respiración.

WEBGRAFIA
http://colombiamedica.univalle.edu.co/Vol25No2/celulas.html
http://www.xuletas.es/ficha/protocolo-10/
http://eurlex.europa.eu/LexUriServ/LexUriServ.do?uri=CELEX:31990R267
6:ES:HTML http://www.bioquimica.dogsleep.net/Laboratorio/Plummer/Chp10a.pdf
http://es.wikilingue.com/pt/%C3%81cido_tricloroac%C3%A9tico