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Espectrofotometria
Espectrofotometria
Jimenez-Salazar
Cada analito molecular tiene un mximo de absorcin en la zona del UV-visible.
Atendiendo a esta para cada sustancia y a la intensidad en que se absorbe la radiacin se
disea un mtodo para cuantificar la cantidad de sustancia .
Procedimiento experimental:
Una vez que se tiene la muestra, se obtiene una solucin perfectamente disuelta y
transparente que se coloca en la cubeta.
En general se ocupan cubetas cuadradas de un cm de paso. Si la disolucin es muy
diluida, se ocupa una cubeta ms ancha (mayor posibilidad de paso de luz y absorcin).
Se ocupan cubetas de cuarzo (no absorbe radiacin visible ni UV)
Los fenmenos pticos (reflexin, dispersin) causan atenuacin del haz que atraviesa
la solucin que se deben considerar en la medicin. Para compensar estos efectos, se
coloca una solucin blanco que da cuenta de las perdidas anteriores. Esta se conoce
como solucin o cubeta de referencia.
Absorcin de la Luz
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La figura ilustra la atenuacin (disminucin de energa por unid. de area) de un haz de
radiacin monocromatica, antes y despus de haber atravesado una capa de solucin con un
grosor de b cm y una concentracin c. A causa de la interaccin entre los fotones y las
partculas absorbentes, la potencia del haz disminuye de Po a P.
Se define la transmitancia T de una solucin como la fraccin de radiacin incidente
transmitida por la solucin:
Ley de Beer:
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a es una constante de proporcionalidad denominada absortividad. Si c esta en gr/L, a esta
en Lgr-1m-1 y se c esta en mol/L a se denomina absortividad molar y se designa por
(unidades de Lmol-1cm-1)
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Anlisis Cuantitativo:
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Componentes de un Espectrofotmetro
Fuentes radiantes:
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Selector de Longitud de Onda Dispositivo que selecciona la longitud de onda que ser
utilizada a una banda estrecha que es absorbida por el analito. Con esto se garantiza de que
al analito siga la ley de Beer, se asegura una mayor selectividad ya que no es probable que
interfieran sustancias con un mximo de absorcin en regiones de otras longitudes de onda
y adems se aumenta la sensibilidad ya que una banda estrecha origina una mxima
variacin en la absorbancia al variar la concentracin.
Prisma: La difraccin en las dos caras del prisma da lugar a una dispersin angular de la
radiacin. Algunas longitudes de onda son ms dispersadas que otras. La dispersin
producida por un monocromador de prisma es mayor a longitudes de onda cortas que a
longitudes de onda largas.
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Portamuestras, cubetas:
La cubeta debe estar perfectamente limpia (no tocar con las manos)
No debe tener burbujas
En general, el largo es de 1 cm. Cuando las soluciones son muy diluidas se debe utilizar
una cubeta ms ancha para aumentar la sensibilidad (5-10 cm)
Detectores:
Del tipo que se ha visto anteriormente, el problema es la sensibilidad del detector, ya que el
detector puede ser ms sensible para una longitud de onda y menos para otras. Este tipo de
espectrofotmetro esta bien adecuado para mediciones de absorcin de una sola longitud de
onda.
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Espectrofotmetro de doble haz:
Para compensar lo anterior, se invent un sistema de doble haz. Un haz pasa por un divisor
de haz (espejo en forma de V) formando dos haces en el espacio. Un haz pasa por una celda
de referencia y otra por una celda de muestra simultneamente (se requieren dos cubetas),
luego los haces pasan por dos fotodetectores idnticos. Lo que se mide al final es la
diferencia entre las dos mediciones (se utiliza un amplificador de diferencia). Es decir, cada
medicin implica una recalibracin automtica.
Con este tipo de instrumentos se puede obtener espectros de absorcin de una sustancia ya
que se hace un barrido de las longitudes de onda.
La luz separada (mltiples longitudes de onda) se hace incidir en un arreglo de diodos que
absorbe a las distintas longitudes de onda. El corazn del instrumento es la disposicin de
varios centenares de diodos detectores de silicio que se fabrican de lado a lado sobre un
solo chip de silicio. Estos perciben para cada una de las distintas longitudes de onda de
manera electrnica mediante un arreglo de circuito.
Experimentalmente se coloca primero un blanco y luego la muestra. Se percibe una menor
seal de la muestra , es decir, con menos seales en el espectro.
Con este instrumento se puede detectar el espectro completo en fraccin de segundos, es
mucho mas til. Incluso, la cubeta puede estar en un lugar accesible a la luz ambiente, no
se afectan las mediciones.
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